Orientador: Edgard Graner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T22:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_LucianaYamamotode_M.pdf: 2240916 bytes, checksum: ea05e547ca468707eb304c81344a3fbf (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A enzima ácido graxo sintase (FASN), responsável pela síntese endógena de ácidos graxos, está presente em grande quantidade em diversas neoplasias malignas e lesões pré-malignas. Sua inibição farmacológica parece estar relacionada com a morte celular seletiva de células tumorais. Orlistat (Xenical®), uma droga anti-obesidade, que possui também propriedades anti-neoplásicas por inibir irreversivelmente FASN, sendo estes efeitos claramente demonstrados em cânceres de mama, próstata, estômago e melanoma. Embora as propriedades antitumorais do Orlistat ocorram devido a um efeito direto sobre as células malignas, até o momento, possíveis mecanismos indiretos sobre o sistema imunológico não foram estudados. Células imunes, como linfócitos T CD8+ (LTCD8+), células natural killer (NK) e células dendríticas (CD), estão envolvidas no processo de defesa antitumoral, por promover a morte de células neoplásicas. Como não há informações na literatura sobre uma possível relação entre FASN e o sistema imunológico, nosso trabalho teve como objetivo principal estudar o efeito da inibição da enzima FASN com Orlistat sobre o fenótipo e porcentagem de LTCD8+, células NK e CDs presentes nos tumores primários e suas respectivas metástases para linfonodos mediastínicos, em modelo de melanoma murino (B16-F10 / C57/Bl6). Adicionalmente, avaliou-se o estado de ativação das CDs CD11c+ presentes nos linfonodos mediastínicos metastáticos, através da expressão de MHC I (complexo maior de histocompatibilidade de classe I) e das moléculas co-estimulatórias CD80 e CD86 na superfície destas células. Através de citometria de fluxo, foram analisadas as porcentagem de LTs CD3+CD8+, células NK CD3-CD49b+ e CDs CD11c+ nos tumores e metástases. A ativação dos LTCD8+ e células NK foi avaliada pela expressão de granzima b e perforina em RNA total obtido dos linfonodos mediastínicos metastáticos, através da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR). Além disso, as células NK presentes nas metástases linfonodais também foram avaliadas quanto à expressão do receptor inibitório Ly49A, através de citometria de fluxo. Após o tratamento com Orlistat, houve redução de cerca de 30 % na quantidade de metástases, em comparação com os grupos controle. Os tumores primários do grupo controle apresentaram um baixo percentual de LTs CD3+CD8+ (0,36%) e de células NK CD3-CD49b+ (0,27%). No grupo tratado, não foi possível detectar a presença destas células na massa tumoral, sugerindo uma supressão desta população pelo Orlistat. Além disso, CDs CD11c+ não puderam ser avaliadas nestes tumores. Nos linfonodos mediastínicos metastáticos, houve um discreto aumento de CDs CD11c+, acompanhado de menor expressão das proteínas de superfície MHC I, CD80 e CD86, além de uma redução percentual das células T CD3+CD8+ e NK CD3-CD49b+. A expressão de RNAs mensageiros para granzima b e perforina também foi menor no grupo de camundongos tratados. Finalmente, em relação a Ly49A, sua expressão foi maior nas NKs dos linfonodos metastáticos de animais tratados. Em conjunto, nossos resultados indicam que a inibição de FASN com Orlistat interfere no fenótipo, porcentagem e estado de ativação das células imunológicas intratumorais e dos linfonodos metastáticos, sugerindo possível atividade imunossupressora / Abstract: Fatty acid synthase (FASN), the enzyme responsible for the endogenous synthesis of fatty acids, is highly expressed in several malignant neoplasms and premalignant lesions. Its pharmacological inhibition promotes apoptosis in tumor cells. Orlistat (Xenical ®), an anti-obesity drug, has anti-neoplastic properties by irreversibly inhibiting FASN, which were demonstrated in malignant neoplasms from breast, prostate and stomach and melanoma. Although the known antitumor properties of Orlistat are consequence of a direct effect on malignant cells, indirect mechanisms on the immune system were not described. Immune cells, such as CD8+ T lymphocytes (CD8+ TL), natural killer (NK) and dendritic cells (DC) are involved in the defense against cancer cells. Since there is no information in literature about a relationship between FASN activity and the immune system, our work aimed to study the effect of Orlistat on the phenotype and percentage of CD8+TL, NK and DC present in the primary tumors and their metastases to mediastinal lymph nodes in a experimental model of spontaneous melanoma metastasis (B16-F10 / C57/Bl6). Additionally, we evaluated the activation of CD11c+ DCs present in the metastatic mediastinal lymph nodes, through the expression of MHC I (major histocompatibility complex class I) and costimulatory molecules CD80 and CD86 on cell surface. By using flow cytometry, we analysed the effects of Orlistat on the percentage of CD3+CD8+ TLs, CD3-CD49b+ NK cells, and CD11c+ DCs in primary tumors and lymph node metastases. Activation of CD8+ TLs and NK cells was evaluated through the expression of granzyme b and perforin in the metastatic mediastinal lymph nodes by quantitative RT-PCR. In addition, NK cells present in lymph node metastases were also evaluated regarding the expression of Ly49A by flow cytometry. Orlistat was able to reduce in aproximately 30% the number of metastatic lymph nodes. Control primary tumors had a low percentage of CD3+CD8+ TLs (0.36%) and CD3-CD49b+ (0.27%), which were not detected in the treated tumors, suggesting a supression of this population. In addition, CD11c+ DCs could not be assessed in both treated and control tumors. Regarding metastatic lymph nodes, there was a slight increase of CD11c+ DCs, associated with a lower expression of the surface proteins MHC I, CD80 and CD86. CD3+CD8+ TLs and CD3-CD49b+ NK cells were reduced in the metastases from the treated animals. Moreover, the expression of granzyme b and perforin was lower in the metastases of treated mice. Finally, the expression of of Ly49A on NK cells was higher in metastatic lymph nodes of treated animals. Taken together, our results indicate that inhibition of FASN with Orlistat changes the phenotype, percentage and activation state of intratumoral and lymph node immune cells, suggesting a immunosuppressive activity / Mestrado / Estomatologia / Mestre em Estomatopatologia

The objective of this work is to develop catalysts that are active in simultaneous conversion of triacylglycerides and fatty acids into fatty acid methyl esters. Three Sn(IV) complexes, named butyl stannoic acid (BTA), di-n-butyl-oxo-stannane (DBTO) and dibutyltin dilaurate (DBTDL), were initially tested as catalysts for esterification reaction of fatty acids in the presence of methanol as alcoholysis agent. Parameters like reaction time, temperature, and catalyst amount were systematically evaluated in this work. All complexes were active at relative high reaction temperatures, but BTA displayed the highest activity. Former studies have already demonstrated that these same complexes display good catalytic activity in methanolysis of triacylglycerides (TAGs). These results prompted us to test BTA catalyst also in simultaneous esterification/transesterification reactions from a mixture of free fatty acids (FFAs) and TAGs in the presence of methanol. The BTA was able to convert mixtures of fatty acid methyl esters (FAMEs) with excellent yields of up to 96% during 4 hours with simple isolation procedures. The BTA was also tested in the hydrolysis of TAG and conversions were quite satisfactory, reaching approximately 98% at 160 ° C. From the results obtained it was possible to determine that, in comparison to hydroesterification reactions, the simultaneous esterification/transesterification is the best route to obtain FAMEs using this type of catalyst. The complexes exhibiting general formula R4-xSn(C11H20O2)x, wherein R = C4H9 or CH3 and x= 1 ou 2, were tested in order to evaluate the influence of the nature of different ligands bearing the metal center, on the esterification conversion. The results obtained in this study may suggest the following catalytic activity order: dimetildiundecenoate tin > dibutildiundec-10-enoate tin > tributilundecenoate tin, supporting a significant influence of the stereo effect in esterification reaction. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi testar e desenvolver catalisadores que sejam ativos tanto em reações de esterificação quanto transesterificação. Compostos de Sn(IV), denominados n-butil hidroxioxi de estanho (BTA), óxido de dibutil estanho (DBTO) e dibutildilaurato de estanho (DBTDL), foram inicialmente testados como catalisadores para a reação de esterificação de ácidos graxos (AG) na presença de metanol como agente de alcoólise. Parâmetros como o tempo de reação, temperatura e quantidade de catalisador, foram sistematicamente avaliadas. Todos os complexos foram ativos a temperaturas de reação entre 80 e 160 ºC, sendo que o BTA apresentou maior atividade com conversões de aproximadamente 96 % em ésteres metílicos de ácidos graxos (% EMAGs). Estudos anteriores já demonstraram que estes mesmos complexos exibem boa atividade catalítica na metanólise de triacilglicerídeos (TAG). Esse conjunto de resultados nos levou a testar o catalisador BTA também em reações simultâneas de esterificação/transesterificação de uma mistura de AG e TAG, na presença de metanol. O BTA foi capaz de converter as misturas em ésteres metílicos de ácidos graxos (EMAGs) com excelentes rendimentos, de até 96% durante 4 horas, com processos de purificação simples. O BTA também foi testado na hidrólise de TAG e as conversões em AG foram bastante satisfatórias, chegando aproximadamente 100 % a 160 ºC durante 10 horas. A partir dos resultados obtidos pôde-se determinar que, comparativamente à hidroesterificação, a reação de esterificação/transesterificação simultânea é a melhor rota a ser empregada na obtenção de EMAGs em presença de matérias primas de baixo custo, utilizando este tipo de catalisador. Foram sintetizados e testados novos complexos, a fim de avaliar a influência da natureza de diferentes ligantes em torno do centro metálico sobre a conversão em reações de esterificação. Com os resultados obtidos neste estudo pode-se sugerir uma ordem de atividade catalítica: dimetil diundecenoato de estanho > dibutildiundecenoato de estanho > tributilundecenoato de estanho, evidenciando uma influência significativa de efeitos estéreos na reação de esterificação.

O presente estudo avaliou as alterações dos marcadores de estresse oxidativo em cães adultos alimentados com dietas com altos níveis de ácidos graxos (AG) saturados ou insaturado, suplementadas ou não com antioxidante natural à base de algas. Doze cães Beagle adultos sadios (6 machos e 6 fêmeas, 2 anos de idade, 11,2 ± 1,92 kg PV) foram distribuídos em dois blocos inteiramente casualizados e alimentados com 4 dietas experimentais revestidas com 2 fontes lipídicas: saturadas (13% de sebo bovino) ou insaturadas (13% de óleo de soja enriquecido com DHA), suplementadas ou não com 500 mg de antioxidantes naturais à base de algas (AOX) por 4 semanas, intercalados com um período de adaptação de 4 semanas. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, 15 e 30 de cada bloco. Glutationa peroxidase (GSH-Px), superóxido dismutase (SOD), grupo sulfidrila, carbonilação de proteínas (PC), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e potencial antioxidante reativo total (TRAP) foram avaliados no soro. Enquanto GSH-Px, SOD, glutationa S-transferase (GST), catalase (CAT), grupo sulfidrila e TBARS foram medidos nos eritrócitos. Não houve diferença significativa na maioria dos marcadores oxidativos avaliados. Em contraste, a atividade de GST nos eritrócitos foi maior nos animais que consumiram as dietas revestidas com sebo bovino em comparação com animais que consumiram dietas revestidas com óleo de soja enriquecida com DHA (P < 0,05). O soro dos animais alimentados com as dietas suplementadas com AOX apresentaram maiores valores de TRAP (P < 0,05). Os dados demonstraram que as concentrações de ácidos graxos insaturados utilizados nas dietas para cães adultos não foram suficientes para causar grandes alterações no estado oxidativo. Não foi possível avaliar a eficiência do antioxidante natural em manter o equilíbrio oxidativo dos animais, pois parece que o organismo não foi desafiado pelas dietas ricas em AG insaturados. Isso sugere que cães como descendentes de carnívoros podem ter alguma proteção natural contra a oxidação. / The present study evaluated the alterations of the oxidative stress markers in adult dogs fed with high levels of saturated or unsaturated fatty acids, supplemented or not with natural algae based antioxidant. Twelve healthy adult Beagle dogs (6 males and 6 females, 2 years old, 11.2 ± 1.92 kg BW), were distributed in 2 completely randomized blocks and fed with 4 experimental diets coated with 2 lipid sources: saturated (13% bovine tallow) or unsaturated (13% soybean oil enriched with DHA), supplemented or not with with 500 mg of algaebased natural antioxidant (AOX) for 4 weeks, intercalated with a 4 week adaptation period. Blood samples were collected on days 0, 15 and 30 of each block. Glutathione peroxidase (GSH-Px), superoxide dismutase (SOD), sulfhydryl group, protein carbonylation (PC), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and total reactive antioxidant potential (TRAP) were evaluated in serum. While GSH-Px, SOD, glutathione S-transferase (GST), catalase (CAT), sulfhydryl group and TBARS were measured in erythrocytes. There was no significant difference in most of the oxidative markers evaluated. In contrast, GST activity in erythrocytes was greater in the animals that consumed the diets coated with bovine tallow compared to animals that consumed diets coated with soybean oil enriched with DHA (P < 0.05). Serum from animals fed diets supplemented with AOX presented greater TRAP values (P < 0.05). The data demonstrate that the concentrations of unsaturated fatty acids used in the diets for adult dogs were not sufficient to cause large changes in the oxidative status. It was not possible to evaluate the efficiency of the natural antioxidant in maintaining the oxidative balance of the animals once seems like the body was not challenged by the unsaturated diets. It suggests that dogs descended from carrion carnivore dogs may have some natural protection against oxidation.

Issues de ressources renouvelables, les huiles végétales (mélanges de triacylglycérols) sont des matières premières aux multiples applications dans divers secteurs, tels que l’industrie alimentaire, les lubrifiants, les solvants, les cosmétiques, la pharmacie, parmi autres. Pour faciliter le développement de produits utilisant de telles matières premières, le travail de thèse s’intéresse à la modélisation de l'équilibre de phases pour mélanges de triacylglycérols et la conception d’un logiciel prédictif de leurs propriétés. Les modèles employés sont totalement prédictifs et tiennent compte des polymorphes. La phase liquide et le polymorphe a sont supposés idéaux à l’inverse des polymorphes b et b’ dont les coefficients d’activités sont calculés à l’aide du modèle de Margules où les coefficients d’interactions binaires sont prédits à partir de la similarité des chaines d’acide gras sur le squelette glycérol. L'optimisation directe de l'énergie libre de Gibbs permet de calculer la quantité de solide dans les graisses ; propriété fondamentale corrélée à de nombreuses fonctionnalités de produits basés sur des huiles végétales. Le calcul de l'équilibre solide - liquide à plusieurs températures permet de simuler des courbes de fusion et des courbes de calorimétrie différentielle à balayage. L’influence sur ces courbes de modifications dans la structure moléculaire et de la composition des mélanges est étudier pour plusieurs systèmes et comparés avec des données expérimentales: triacylglycérols purs, mélanges binaires et ternaires de triacylglycérols, huiles végétales naturelles et mélanges d'huiles végétales impliquant des centaines de triacylglycérols. Des réactions d'interestérification chimique, largement utilisées pour modifier la composition et propriétés d'huiles et graisses, sont simulées et comparés avec des données expérimentales. Le bon accord avec les données expérimentales permet de valider l'outil informatique et son caractère prédictif permet d’envisager son utilisation pour des mélanges, températures et compositions encore non évaluées de façon à orienter les efforts expérimentaux vers les mélanges les plus prometteurs. / The search for sustainable development is an incentive for renewable resources usage in chemical industry. Vegetable oils (triacylglycerol-based mixtures) are raw-materials that match this criterion and they are currently and potentially used in a wide range of sectors, such as: food industry, lubricants, solvents, cosmetics, pharmaceutical, among others. Aiming to aid product design using such raw-materials, this work deals with phase equilibrium modeling and the development of a computational tool for properties prediction. The models used are totally predictive and they deal with the existence of solid polymorphism. The liquid state and the crystals are treated as ideal phases. The activity coefficients of phases ’ and (notideal) are estimated using Margules model, for which the binary molecular interaction parameters are calculated in a predictive manner by means of correlations with the similarity degree between fatty acids chains in the glycerol. By direct optimization of Gibbs Free Energy, the Solid Fat Content is computed, a fundamental property for vegetable oils–based products functionality. The results of phase equilibrium in different temperatures allow simulating melting curves and Differential Scanning Calorimetry curves, allowing a computational evaluation of how molecular structure and composition changes affect desired properties. The calculated results were applied and compared with experimental data in a wide range of systems: pure systems, binary and ternary triacylglycerol mixtures, natural vegetable oils and mixture of vegetable oils (hundreds of components). Chemical interesterification reaction, widely applied to change fats and oils composition and properties, were also simulated and the results compared with experimental data in different compositions and temperatures. The good agreement between computational results and experimental data enables the computational tool validation and its predictive nature makes it suitable for the study of mixtures in temperatures and compositions not yet evaluated. Consequently, the experimental efforts (cost and time) can be concentrated on the most promised molecules/mixtures. / A busca pelo desenvolvimento sustentável é um incentivo para o uso de recursos renováveis na indústria química. Óleos vegetais (misturas de triacilgliceróis) são matérias-primas que atendem a este critério e apresentam aplicações atuais e potenciais em diversos setores, tais como indústria de alimentos, lubrificantes, solventes, cosméticos, farmacêutica, dentre outros. Com o objetivo de auxiliar no desenvolvimento de produtos utilizando tais matérias-primas, o presente trabalho trata da modelagem do equilíbrio de fases em misturas de triacilgliceróis e do desenvolvimento de uma ferramenta computacional preditiva de propriedades. Os modelos usados são totalmente preditivos e consideram a existência de polimorfismo na fase sólida. O estado líquido e o polimorfo são considerados ideais. Os coeficientes de atividade das fases e (não-ideais) são estimados através do modelo de Margules, no qual os coeficientes de interação molecular binária são calculados de forma preditiva através de correlações com o grau de similaridade entre as cadeias de ácidos graxos no glicerol. Através da otimização direta da Energia Livre de Gibbs, é calculado o Conteúdo de Gordura Sólida, uma propriedade fundamental para funcionalidade de produtos baseados em óleos vegetais. Através do cálculo do equilíbrio de fases em diversas temperaturas são simuladas curvas de fusão e curvas de Calorimetria Exploratória Diferencial, permitindo uma avaliação computacional do efeito que alterações na estrutura molecular e composição apresentam nas propriedades de interesse. Os resultados calculados foram aplicados e comparados com dados experimentais em diversos sistemas: triacilgliceróis puros, misturas binárias e ternárias de triacilgliceróis, óleos vegetais naturais e misturas de diversos óleos vegetais (centenas de triacilgliceróis). Reações de interesterificação química, amplamente utilizadas para alterar a composição e propriedades de óleos e gorduras, foram igualmente simuladas e os resultados comparados com dados experimentais em diversas composições e temperaturas. A boa concordância entre os dados simulados e experimentais permite validar a ferramenta computacional e seu caráter preditivo a torna útil no estudo de misturas em temperaturas e composições ainda não avaliadas, de forma que os esforços experimentais (custo e tempo) possam ser direcionados às misturas mais promissoras.

Camundongos Swiss, quando submetidos à dieta hiperlipídica (HL), apresentam considerável ganho ponderal e de depósitos adiposos, tornando-se obesos e resistentes à insulina. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da dieta HL por 8 semanas no perfil inflamatório, síntese de triacilglicerol (TAG) com ênfase na vias de geração de glicerol-3-fosfato (G3P) e lipólise nos tecidos adiposos brancos (TAB) retroperitoneal (RETRO) e epididimal (EPI) de camundongos. Camundongos Swiss foram alimentados com as dietas: controle (CT) - dieta purificada (AIN-93G); ou HL - dieta AIN-93G modificada contendo 35% de lipídeos (4% de óleo de soja e 31% de gordura suína). Os camundongos alimentados com a dieta HL apresentaram uma maior massa corporal, acompanhada pelo aumento nos tecidos RETRO e EPI, além de desenvolverem resistência à insulina constatada no teste de tolerância à glicose (TTG), hiperglicemia e hiperinsulinemia. O conteúdo protéico da pAKT, avaliado por western blot (WB), e a adiponectina, dosada em homogenados dos tecidos adiposos, estão reduzidos apenas no EPI. Houve aumento na expressão gênica de MCP-1 e PAI-1, e foi observada menor área dos adipócitos no EPI, sem alteração no RETRO dos animais HL. A síntese de novo de ácidos graxos (AG), avaliada pela incorporação de 3H de 3H2O em AG foi maior em ambos os TAB, porém a captação de AG das lipoproteínas circulantes avaliada pela atividade e expressão da lipase lipoproteica (LPL) aumentou no EPI e reduziu no RETRO. A dieta HL induziu aumento na fosforilação do glicerol, avaliada pela atividade e conteúdo da GK que aumentaram nos dois TAB, e maior incorporação de 1-14C-glicerol em TAG no EPI. A captação de glicose in vitro e conteúdo do GLUT- 4, que indicam atividade da via glicolítica foram reduzidos no EPI e RETRO, assim como a gliceroneogênese avaliada pela incorporação de 1-14C-piruvato em TAG, sem alterações na atividade e conteúdo da fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK). A atividade lipolítica basal foi avaliada in vitro pela liberação de glicerol por adipócitos isolados, e não foi alterada pela ingestão de dieta HL, porém quando estimulada por noradrenalina a liberação de glicerol foi menor nos animais HL, assim como as fosforilações da ATGL e HSL e conteúdo do receptor adrenérgico ?3. A dieta HL levou a uma redução no conteúdo de PPAR? e aumento de ATF3 em ambos os tecidos. No EPI houve aumento de pCREB, pSTAT3 e RGS2 em relação aos controles enquanto no RETRO a única diferença encontrada foi a menor pSTAT3. Nossos resultados demonstram que o aumento nos TAB é resultado de maior síntese e captação de AG, e que o G3P necessário para a esterificação a TAG é proveniente principalmente da fosforilação direta do glicerol pela GK; além disso, a reduzida lipólise também parece contribuir para esse quadro. Nos animais HL, o EPI parece ser mais propenso aos efeitos da dieta do que o RETRO / Swiss mice when subjected to high fat diet (HFD), shown considerable weight gain and adipose depots, becoming obese and insulin resistant. The aim of this study was to evaluate the effect of HFD diet for 8 weeks in the inflammatory profile, triacylglycerol (TAG) synthesis with emphasis in glycerol-3-phosphate (G3P) generation pathways and lipolysis in retroperitoneal (RETRO) and epididymal (EPI) white adipose tissue (WAT) of mice. Swiss mice were fed with diets: control (CT) - purified diet (AIN-93G); or HFD - purified diet (AIN-93G) plus 35% of fat (4% soybean oil and 31% of lard). Mice fed a HFD diet had a higher body mass, accompanied by an increase in RETRO and EPI tissues, in addition to developing insulin resistance, evidenced by glucose tolerance test (GTT), hyperglycemia and hyperinsulinemia. The protein content of pAKT, accessed by western blot, and adiponectin, measured in WAT homogenates, are reduced only in EPI. There was an increase in gene expression of MCP-1 and PAI-1, and was observed smaller area of adipocytes in EPI, with no change in RETRO of HFD fed animals. De novo synthesis of fatty acids (FA), evaluated by incorporation of 3H from 3H2O in FA was higher in both TAB, but the uptake of FA, from blood lipoproteins, evaluated by the activity and expression of lipoprotein lipase (LPL) was increased in EPI and reduced in RETRO. HFD induced increase in phosphorylation of glycerol, evaluated by the activity and content of glycerolkinase (GyK) which increased in both TAB and greater incorporation of 1-14C-glycerol in the TAG only in EPI. The in vitro glucose uptake and GLUT-4 content, which indicates the activity of the glycolytic pathway were reduced in EPI and RETRO, as well as glyceroneogenesis assessed by the incorporation of 1-14C- pyruvate into TAG without changes in the activity and contents of phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK). The basal lipolytic activity was evaluated in vitro by glycerol releasing from isolated adipocytes, and was not altered by HFD intake, but when stimulated by noradrenaline glycerol release was lower in HFD animals as well as the phosphorylation of ATGL and HSL and ?3 adrenergic receptor content. HFD led to a reduction in the content of PPAR gamma and an increase in ATF3 in both tissues. In EPI there was an increase in pCREB, pSTAT3 and RGS2 while in RETRO the only difference was reduced pSTAT3. Our results shown that TAB increase is result of increased FA synthesis and uptake, and G3P required for esterification TAG comes mainly from direct phosphorylation of glycerol by GyK; Furthermore, reduced lipolysis also seems to contribute to this scenario. HFD effects seem to be more prominent in EPI than in RETRO

A secreção de insulina é estimulada pela glicose, porém os ácidos graxos (AG) podem influenciar o processo secretório. A oxidação de AG é importante para a estimulação da secreção de insulina por aumentar o ATP, porém, existem vias dependentes e independentes de ATP. Os AG <font face=\"Symbol\">w-3 interferem em processos fisiológicos e na composição e função da membrana plasmática, promovendo potente ação anti-inflamatória. Considerando a importante relação da NAD(P)H oxidase com a secreção de insulina, o estudo das alterações induzidas pela suplementação com AG <font face=\"Symbol\">w-3 sobre o conteúdo de superóxido (O2<font face=\"Symbol\">&#183;) e a expressão da NAD(P)H oxidase, é importante para a compreensão da fisiologia das células <font face=\"Symbol\">b-pancreáticas. Neste estudo, o grupo suplementado apresentou redução do conteúdo de O2<font face=\"Symbol\">&#183;, redução da expressão das subunidades da NAD(P)H oxidase e aumento na expressão da superóxido dismutase (SOD1 e 2), quando comparado ao grupo controle. Embora desconhecido o mecanismo, este dado é relevante, pois pressupõe melhor regulação do estado redox durante a secreção de insulina. / Insulin secretion is stimulated by glucose (GSIS), but fatty acid (FA) may influence the secretory process. The oxidation of FA is important for the stimulation of insulin secretion by increasing the ATP, although there are dependent and independent ATP pathways. The <font face=\"Symbol\">w-3 FA change physiological processes, and affect the composition and function of the plasma membrane, promote potent anti-inflammatory action. Considering the important relationship of NAD(P)H oxidase with insulin secretion, the study of changes induced by supplementation with <font face=\"Symbol\">w-3 FA on the superoxide (O2<font face=\"Symbol\">&#183;) content, and expression of NAD(P)H oxidase, becomes of great importance for understanding the pancreatic <font face=\"Symbol\">b cells physiology. In this study, the group supplemented with <font face=\"Symbol\">w-3 FA showed a reduction of the O2<font face=\"Symbol\">&#183; content, reduced expression of NAD(P)H oxidase subunits, and increased the expression of the enzyme superoxide dismutase (SOD 1 and 2), compared to control. Although unknown the mechanism, this data is relevant, because it represents better regulation of the redox state during GSIS .

Os ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) são produzidos pela microbiota intestinal e possuem papéis anti-inflamatórios e ação inibitória sobre histona deacetilases. A lesão renal aguda (LRA) é caracterizada por uma inflamação renal que influencia a função do rim. Este projeto avaliou se o tratamento com os AGCC impactaria nos desfechos inflamatórios da LRA em camundongos. Foi observado que o tratamento com AGCC, protege da LRA. Esta melhora foi associada a uma menor inflamação e menor taxa de apoptose. Além disso, o tratamento com acetato diminuiu a atividade de histona deacetilase. Administrando bactérias produtoras de acetato, também foi possível observar uma proteção da LRA, junto de uma menor inflamação sistêmica. Esta proteção do AGCC na LRA foi também observada em modelo de LRA secundária à sepse In vitro, o tratamento com AGCC modularam tanto células imunes como células renais sob estímulos inflamatórios e de hipóxia. AGCC modulam processos inflamatórios no rim via ações epigenéticas ou não, podendo ser uma promissora ferramenta na proteção da LRA. / Short-Chain Fatty Acids (SCFA) are produced by the intestinal microbiota and have anti-inflammatory and histone deacetylases inhibitors properties. Acute kidney injury (AKI) is characterized by renal inflammation that may impair kidney function. This project evaluated whether treatment with SCFA inflammatory impacts the outcomes of AKI in mice. It was observed that treatment with SCFA protected the AKI. This improvement was associated with less inflammation and lower apoptosis rate. In addition, treatment with acetate decreased the activity of histone deacetylase. Giving bacteria producing acetate, was also observed protection from AKI, along with a lower systemic inflammation. This protection of the AGCC in AKI was also observed in sepsis model. In vitro, SCFA treatment modulated both immune cells and renal cells under hypoxia and inflammatory stimuli. SCFA modulate inflammatory processes in the kidney via epigenetic actions or not, may be a promising tool in the protection of the AKI.

Introdução: As doenças cardiovasculares são a principal causa de morbimortalidade mundial, tendo o Brasil um perfil semelhante. Embora diversos fatores de risco sejam associados com os eventos cardiovasculares, esses não conseguem justificar a manifestação de todos os eventos clínicos, indicando que outros componentes estão envolvidos. Diante desse cenário, a dieta ocupa papel de destaque na modulação dos fatores de risco modificáveis e por isso tem sido foco de inúmeros programas de políticas públicas. Objetivo: Avaliar o efeito da suplementação de ômega-3 sobre os fatores de risco cardiometabólicos clássicos e emergentes em indivíduos com diferentes níveis de risco cardiovascular. Métodos: Este estudo foi do tipo clínico baseado em intervenção nutricional, prospectivo, randomizado, duplo cego e placebo controlado. Foram selecionados indivíduos adultos e idosos (n=146), de ambos os sexos, dentre os quais 77 faziam parte do grupo intervenção w-3 e 69 eram do grupo placebo. O risco cardiovascular foi estimado por meio do escore de risco de Framingham (ERF), os grupos foram subdivididos em escore de risco baixo, intermediário e alto. Nos tempos basal e após 4 e 8 semanas de intervenção [3,0 g/dia w-3, contendo 60% de ácido eicosapentaenoico-docosahexaenoico (EPA-DHA) ou placebo] foram coletadas informações socioeconômicas e clínicas, antropométricas, consumo alimentar, nível de atividade física e coleta de sangue após jejum de 12-14h. A partir do plasma foram analisadas as concentrações dos marcadores lipídicos [Colesterol Total, lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e alta densidade (HDL), Triacilglicerol (TG), Apolipoproteínas AI e B, ácidos graxos não esterificados (NEFAs) e LDL eletronegativa (-)], ácidos graxos plasmático e aspectos fisicoquímicos de lipopartículas (tamanho e concentração). Os resultados foram analisados por meio do programa SPSS 16.0, sendo adotado o nível de significância de p < 0,05. Resultados: Houve incorporação de 4% do DHA plasmático e consequente redução de 34% do TG em indivíduos com ERF intermediário e de 0,2% da APO AI, 20% de NEFAs e de 0,6% de HDLINTERMEDIÁRIA em indivíduos com alto ERF. Ao longo da intervenção, houve diminuição do CT (p = 0,002), da LDL (p = 0,003), do TG (p < 0,001), do colesterol não HDL (p < 0,001), da HDLPEQUENA (p = 0,011) e da LDL (-) (p < 0,001). Houve aumento da HDL-c (p = 0,003), das partículas de HDLGRANDE (p < 0,001) e HDLINTERMEDIÁRIA (p < 0,001) Conclusão: A suplementação com w-3 promoveu redução dos biomarcadores de risco cardiovascular clássicos e emergentes. Esse conjunto de resultados amplia o papel cardioprotetor do w-3. / Introduction: Cardiovascular diseases are the leading cause of morbidity and mortality worldwide, with Brazil a similar profile. Although many risk factors are associated with cardiovascular events, these can not justify the manifestation of all clinical events, indicating that other components are involved. Given this scenario, the diet takes prominent role in the modulation of modifiable risk factors and so has been the focus of numerous programs of public policies Objective: To evaluate the effect of supplementation of omega3 (n-3) on cardiometabolic risk factors and emerging classics in individuals with different levels cardiovascular risk. Methods: This study was based on clinical type of nutrition intervention, prospective, randomized, double-blind and placebo controlled. We selected adult and elderly subjects (n=146), both sexes, among which 77 were in the intervention group n - 3 and 69 were in the placebo group. Cardiovascular risk was estimed using the Framingham risk score (FRS), the groups were divided into low-risk score, intermediate and high. At baseline and after 4 and 8 weeks of intervention [3.0 g/ day n-3 containing 60% eicosapentaenoic + docosahexaenoic acid (EPA + DHA) or placebo] socioeconomic and clinical, anthropometric data, dietary intake, physical activity level and blood samples were collected after fasting for 12 -14h. Were analyzed from the plasma concentrations [total cholesterol (TC), low-density lipoprotein (LDL), high-density lipoprotein (HDL), triglycerides (TG), apolipoprotein (Apo) AI and B, non-esterified fatty acids (NEFAs) and electronegative LDL (-)], plasma fatty acids and physicochemical aspects of lipoparticles (size and concentration). The results were analyzed using the SPSS 16.0 program, adopting the level significance p < 0.05. Results: There was incresed of 4 % of plasma DHA and consequent 34% reduction of TG in individuals with intermediate FRS and 0.2% of the APO AI, 20 % of NEFAs and 0.6 % HDLINTERMEDIATE in subjects with high FRS. During the intervention, CT decreased (p = 0.002), LDL (p = 0.003), TG (p < 0.001), non-HDL cholesterol (p < 0.001) of the HDLSMALL (p = 0.011) and LDL (-) (p < 0.001). There was an increase in HDL-c (p = 0.003), HDLLARGE particles (p < 0.001) and HDLINTERMEDIATE (p < 0.001). Conclusion: Supplementation with n-3 promoted reduction of c1assic and emerging biomarkers on cardiovascular risk. This set of results extends the cardioprotective role of n-3.

A somatotropina (ST) pode reduzir a deposição de gordura em suínos, em crescimento em até 90%. Este efeito parece ser função de diversas alterações no metabolismo do tecido adiposo, incluindo a redução na atividade da sintetase de ácidos graxos (FAS), considerada uma enzima limitante na via da síntese de lipídeos de novo. A atividade da FAS parece ser regulada principalmente através de alterações na abundância de seu mRNA, sendo fundamental conhecer os efeitos exercidos pela ST. Com este objetivo procurou-se validar o uso conjunto de duas técnicas: 1) o RT-PCR Quantitativo Competitivo (QC-RT-PCR), que permite monitorar a expressão gênica da FAS mesmo quando as concentrações de mRNA ou a quantidade de tecido são muito pequenas; e 2) uso de culturas de explantes de tecido adiposo, que permite submeter o tecido a um grande número de tratamentos. As culturas de longa duração possibilitam avaliar o efeito crônico da ST. Foram construídos "primers" para geração de um amplicon "nativo" de 307 bp e um "primer" anti-senso-deleção para amplificação de umfragmento de 243 bp denominado de "competidor". Em etapa subseqüente foram realizadas clonagens dos amplicons nativo e competidor que foram seqüenciados. Foi construída uma curva padrão, utilizando diluições seriais do DNA nativo e uma concentração constante do DNA competidor. Tecido adiposo de sete suínos, com peso médio de 78 kg, foram retirados assepticamente e os explantes incubados em meio 199 na presença de insulina, dexametasona e antibióticos, com e sem ST recombinante suína (pST; Reporcin, Southern Cross Biotech), por 48 horas. O RNA total dos explantes foi extraído e, a partir destes, sintetizados os DNAs complementares (cDNA) à população de mRNAs. Os cDNAs foram amplificados pela PCR com "primers" específicos para a FAS capazes de amplificar também o fragmento nativo. Os resultados da amplificação foram avaliados utilizando-se a curva padrão citada. Os resultados, consistentes com a literatura, demonstraram uma redução da atividade enzimática da FAS em tecidos incubados por 48 h com pST, (46,4 vs 35,8 nmoles/mg.min; P<0,05). Consistente com os dados de atividade e dados da literatura, utilizando-se outras técnicas, observou-se redução de 40% na abundância de mRNA da FAS, em culturas de tecido adiposo, tratadas com somatotropina (P<0,05). Os resultados demonstram que o uso conjunto das técnicas de cultura primária de explantes por longo período e do QC-RT-PCR pode ser uma ferramenta para o estudo dos mecanismos envolvidos na modulação do metabolismo pela somatotropina no tecido adiposo. / In growing swine somatotropin (ST) treatment can reduce lipid deposition up to 90%. This effect seems to be a function of a number of alterations in adipose tissue metabolism, and include reductions in fatty acid synthetase activity (FAS), a rate-limiting enzyme in the de novo pathway of lipid synthesis. Activity of FAS appears to be regulated primarily by alterations in mRNA abundance. Thus it is important to understand ST effects and this require an adequate test model. The present paper validated the combined use of two techniques: 1) RT-PCR quantitative competitive (QC-RT-PCR), which allows monitoring gene expression of FAS even when very small quantities of tissue are available; and 2) use of cultures of adipose tissue explants, which allow to subject tissue samples to a large number of treatments. Long-term cultures allow evaluation of the chronic effects of somatotropin. Primers were constructed to generate a 307 bp native amplicon and an anti-sense deletion primer allowed amplification of a 243 bp competitive sequence. Amplicons were subsequently cloned,fragments. Results from amplifications were evaluated using the standard curve developed earlier. Results, consistent with the literature, demonstrated a reduction in the enzymatic activity of FAS in adipose tissue incubated with pST for 48 hours (46,4 vs. 35,8 nmoles/mg.min; P<0,05). Consistent with the activity data, and literature data using other methodologies, we observed a 40% reduction in FAS mRNA abundance in adipose tissue cultures treated with pST (P<0,05). Results demonstrate that the combined use of long-term primary cultures of adipose tissue explants and QC-RT-PCR can be a useful tool to study the mechanisms involved in somatotropin modulation of adipose tissue metabolism.

Introdução: As doenças cardiovasculares são a principal causa de morbimortalidade mundial, tendo o Brasil um perfil semelhante. Embora diversos fatores de risco sejam associados com os eventos cardiovasculares, esses não conseguem justificar a manifestação de todos os eventos clínicos, indicando que outros componentes estão envolvidos. Diante desse cenário, a dieta ocupa papel de destaque na modulação dos fatores de risco modificáveis e por isso tem sido foco de inúmeros programas de políticas públicas. Objetivo: Avaliar o efeito da suplementação de ômega-3 sobre os fatores de risco cardiometabólicos clássicos e emergentes em indivíduos com diferentes níveis de risco cardiovascular. Métodos: Este estudo foi do tipo clínico baseado em intervenção nutricional, prospectivo, randomizado, duplo cego e placebo controlado. Foram selecionados indivíduos adultos e idosos (n=146), de ambos os sexos, dentre os quais 77 faziam parte do grupo intervenção w-3 e 69 eram do grupo placebo. O risco cardiovascular foi estimado por meio do escore de risco de Framingham (ERF), os grupos foram subdivididos em escore de risco baixo, intermediário e alto. Nos tempos basal e após 4 e 8 semanas de intervenção [3,0 g/dia w-3, contendo 60% de ácido eicosapentaenoico-docosahexaenoico (EPA-DHA) ou placebo] foram coletadas informações socioeconômicas e clínicas, antropométricas, consumo alimentar, nível de atividade física e coleta de sangue após jejum de 12-14h. A partir do plasma foram analisadas as concentrações dos marcadores lipídicos [Colesterol Total, lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e alta densidade (HDL), Triacilglicerol (TG), Apolipoproteínas AI e B, ácidos graxos não esterificados (NEFAs) e LDL eletronegativa (-)], ácidos graxos plasmático e aspectos fisicoquímicos de lipopartículas (tamanho e concentração). Os resultados foram analisados por meio do programa SPSS 16.0, sendo adotado o nível de significância de p < 0,05. Resultados: Houve incorporação de 4% do DHA plasmático e consequente redução de 34% do TG em indivíduos com ERF intermediário e de 0,2% da APO AI, 20% de NEFAs e de 0,6% de HDLINTERMEDIÁRIA em indivíduos com alto ERF. Ao longo da intervenção, houve diminuição do CT (p = 0,002), da LDL (p = 0,003), do TG (p < 0,001), do colesterol não HDL (p < 0,001), da HDLPEQUENA (p = 0,011) e da LDL (-) (p < 0,001). Houve aumento da HDL-c (p = 0,003), das partículas de HDLGRANDE (p < 0,001) e HDLINTERMEDIÁRIA (p < 0,001) Conclusão: A suplementação com w-3 promoveu redução dos biomarcadores de risco cardiovascular clássicos e emergentes. Esse conjunto de resultados amplia o papel cardioprotetor do w-3. / Introduction: Cardiovascular diseases are the leading cause of morbidity and mortality worldwide, with Brazil a similar profile. Although many risk factors are associated with cardiovascular events, these can not justify the manifestation of all clinical events, indicating that other components are involved. Given this scenario, the diet takes prominent role in the modulation of modifiable risk factors and so has been the focus of numerous programs of public policies Objective: To evaluate the effect of supplementation of omega3 (n-3) on cardiometabolic risk factors and emerging classics in individuals with different levels cardiovascular risk. Methods: This study was based on clinical type of nutrition intervention, prospective, randomized, double-blind and placebo controlled. We selected adult and elderly subjects (n=146), both sexes, among which 77 were in the intervention group n - 3 and 69 were in the placebo group. Cardiovascular risk was estimed using the Framingham risk score (FRS), the groups were divided into low-risk score, intermediate and high. At baseline and after 4 and 8 weeks of intervention [3.0 g/ day n-3 containing 60% eicosapentaenoic + docosahexaenoic acid (EPA + DHA) or placebo] socioeconomic and clinical, anthropometric data, dietary intake, physical activity level and blood samples were collected after fasting for 12 -14h. Were analyzed from the plasma concentrations [total cholesterol (TC), low-density lipoprotein (LDL), high-density lipoprotein (HDL), triglycerides (TG), apolipoprotein (Apo) AI and B, non-esterified fatty acids (NEFAs) and electronegative LDL (-)], plasma fatty acids and physicochemical aspects of lipoparticles (size and concentration). The results were analyzed using the SPSS 16.0 program, adopting the level significance p < 0.05. Results: There was incresed of 4 % of plasma DHA and consequent 34% reduction of TG in individuals with intermediate FRS and 0.2% of the APO AI, 20 % of NEFAs and 0.6 % HDLINTERMEDIATE in subjects with high FRS. During the intervention, CT decreased (p = 0.002), LDL (p = 0.003), TG (p < 0.001), non-HDL cholesterol (p < 0.001) of the HDLSMALL (p = 0.011) and LDL (-) (p < 0.001). There was an increase in HDL-c (p = 0.003), HDLLARGE particles (p < 0.001) and HDLINTERMEDIATE (p < 0.001). Conclusion: Supplementation with n-3 promoted reduction of c1assic and emerging biomarkers on cardiovascular risk. This set of results extends the cardioprotective role of n-3.