Introdução Os recém-nascidos de muito baixo peso (<1.500g) necessitam de aporte adequado de nutrientes para desenvolver-se satisfatoriamente. O leite humano é fundamental na sua alimentação, já que possui uma composição nutricional balanceada que inclui nutrientes essenciais, tais como os ácidos graxos poli-insaturados, incluindo os ácidos ômega 3 e 6, de extrema importância para o desenvolvimento do sistema nervoso central e retina. No entanto, apenas o leite materno pode não ser suficiente para suprir essas necessidades, necessitando, portanto, de suplementação. Atualmente, surgiu a possibilidade de adequação do leite humano acrescido de um concentrado com liofilizado do próprio leite humano, que foi desenvolvido neste trabalho. Objetivos determinar a quantidade de lipídios totais e o perfil lipídico do Leite Humano Baseline (LHB) e dos Concentrados com o liofilizado de Leite Humano em diferentes momentos (Leite Humano concentrado no período imediato - LHCI, Leite Humano concentrado no período de 3 meses - LHC3m e Leite Humano concentrado no período de 6 meses - LHC6m). Métodos Foram obtidas 50 amostras de leite humano de mulheres doadoras do Banco de Leite Humano da FMRP-USP que aceitaram participar do estudo. A quantificação de lipídeos ocorreu pelo Analisador de Leite Humano MIRIS® e o perfil de ácidos graxos foi determinado por CG-FID, SHIMADZU®. Resultados Houve uma concentração de lipídios totais no LHCI em relação ao LHB; a concentração (% em relação ao total de ácidos graxos) dos ácidos foi de: palmítico (C16:0) 22,30% LHB, 21,46% LHCI, 21,54% LHC3m e 21,95% LHC6m (p<0,01); oleico (C18:1n-9) 30,41% LHB, 30,47% LHCI, 30,55% LHC3m e 29,79% LHC6m (p=0,46); linoléico (C18:2 n-6) 19,62% LHB, 19,88% LHCI, 19,49% LHC3m e 19,45% LHC6m (p=0,58); araquidônico (C20:4 n-6) 0,35% LHB, 0,16% LHCI, 0,13% LHC3m e 0,15% LHC6m (p<0,01); ?- linolênico (C18:3 n-3) 1,32% LHB, 1,37% LHCI, 1,34% LHC3m e 1,34% LHC6m (p=0,14); docosahexaenóico (C22:6 n- 3) 0,10% LHB, 0,06% LHCI, 0,05% LHC3m e 0,06% LHC6m (p<0,01). Há modificações específicas em alguns ácidos graxos, no entanto a somatória de ácidos graxos por suas classes estruturais não apresentam diferenças. Conclusão Apesar das pequenas diferenças encontradas no perfil lipídico, o concentrado com leite humano liofilizado é um alimento que pode vir a atender as necessidades do recém-nascido, já que houve aumento dos lipídios totaise preservação dos nutrientes essenciais presentes apenas no leite materno, mas estudos clínicos ainda precisam ser feitos para avaliar a segurança e eficácia do concentrado como alimentação dos recém-nascidos de muito baixo peso. / Introduction Very low birth weight infants (<1,500 g) require adequate nutrient intake to develop satisfactorily. Human milk is essential in its diet, since it has a balanced nutritional composition that includes essential nutrients, such as polyunsaturated fatty acids, including omega 3 and 6 acids, of extreme importance for the development of the central nervous system and retina. However, only breast milk may not be sufficient to meet these needs, thus requiring supplementation. Nowadays, the possibility of adapting the human milk plus a concentrate with lyophilized from the human milk itself, which was developed in this work, has arisen. Objectives To determine the amount of total lipids and the lipid profile of Human Baseline Milk (LHB) and Concentrates with human milk lyophilized at different times (Human Milk Concentrated in the immediate period - LHCI, Concentrated Human Milk in the 3-month period - LHC3m and Human Milk Concentrated in the 6-month period - LHC6m). Methods Fifty samples of human milk from women donors of the Human Milk Bank of FMRP-USP who were accepted to participate in the study were obtained. Lipid quantification was performed by the MIRIS® Human Milk Analyzer and the fatty acid profile was determined by CG-FID, SHIMADZU®. Results There was a total lipid concentration in LHCI relative to LHB; the concentration (% of total fatty acids) of the acids was: palmitic (C16: 0) 22.30% LHB, 21.46% LHCI, 21.54% LHC3m and 21.95% LHC6m (p <0) , 01); oleic acid (C18: 1n-9) 30.41% LHB, 30.47% LHCl, 30.55% LHC3m and 29.79% LHC6m (p = 0.46); linoleic acid (C18: 2 n-6) 19.62% LHB, 19.88% LHCI, 19.49% LHC3m and 19.45% LHC6m (p = 0.58); arachidonic (C20: 4 n-6) 0.35% LHB, 0.16% LHCl, 0.13% LHC3m and 0.15% LHC6m (p <0.01); ?-linolenic acid (C18: 3 n-3) 1.32% LHB, 1.37% LHCI, 1.34% LHC3m and 1.34% LHC6m (p = 0.14); (C22: 6 n-3) 0.10% LHB, 0.06% LHCl, 0.05% LHC3m and 0.06% LHC6m (p <0.01). There are specific modifications in some fatty acids, however the sum of fatty acids by their structural classes do not present differences. Conclusion Despite the small differences found in the lipid profile, the concentrate with freeze-dried human milk is a food that can meet the needs of the newborn, since there was an increase in total lipids and preservation of essential nutrients present only in breast milk, butclinical studies still need to be done to evaluate the safety and efficacy of concentrate as a feed for very low birth weight infants.

Introdução Os recém-nascidos de muito baixo peso (<1.500g) necessitam de aporte adequado de nutrientes para desenvolver-se satisfatoriamente. O leite humano é fundamental na sua alimentação, já que possui uma composição nutricional balanceada que inclui nutrientes essenciais, tais como os ácidos graxos poli-insaturados, incluindo os ácidos ômega 3 e 6, de extrema importância para o desenvolvimento do sistema nervoso central e retina. No entanto, apenas o leite materno pode não ser suficiente para suprir essas necessidades, necessitando, portanto, de suplementação. Atualmente, surgiu a possibilidade de adequação do leite humano acrescido de um concentrado com liofilizado do próprio leite humano, que foi desenvolvido neste trabalho. Objetivos determinar a quantidade de lipídios totais e o perfil lipídico do Leite Humano Baseline (LHB) e dos Concentrados com o liofilizado de Leite Humano em diferentes momentos (Leite Humano concentrado no período imediato - LHCI, Leite Humano concentrado no período de 3 meses - LHC3m e Leite Humano concentrado no período de 6 meses - LHC6m). Métodos Foram obtidas 50 amostras de leite humano de mulheres doadoras do Banco de Leite Humano da FMRP-USP que aceitaram participar do estudo. A quantificação de lipídeos ocorreu pelo Analisador de Leite Humano MIRIS® e o perfil de ácidos graxos foi determinado por CG-FID, SHIMADZU®. Resultados Houve uma concentração de lipídios totais no LHCI em relação ao LHB; a concentração (% em relação ao total de ácidos graxos) dos ácidos foi de: palmítico (C16:0) 22,30% LHB, 21,46% LHCI, 21,54% LHC3m e 21,95% LHC6m (p<0,01); oleico (C18:1n-9) 30,41% LHB, 30,47% LHCI, 30,55% LHC3m e 29,79% LHC6m (p=0,46); linoléico (C18:2 n-6) 19,62% LHB, 19,88% LHCI, 19,49% LHC3m e 19,45% LHC6m (p=0,58); araquidônico (C20:4 n-6) 0,35% LHB, 0,16% LHCI, 0,13% LHC3m e 0,15% LHC6m (p<0,01); ?- linolênico (C18:3 n-3) 1,32% LHB, 1,37% LHCI, 1,34% LHC3m e 1,34% LHC6m (p=0,14); docosahexaenóico (C22:6 n- 3) 0,10% LHB, 0,06% LHCI, 0,05% LHC3m e 0,06% LHC6m (p<0,01). Há modificações específicas em alguns ácidos graxos, no entanto a somatória de ácidos graxos por suas classes estruturais não apresentam diferenças. Conclusão Apesar das pequenas diferenças encontradas no perfil lipídico, o concentrado com leite humano liofilizado é um alimento que pode vir a atender as necessidades do recém-nascido, já que houve aumento dos lipídios totaise preservação dos nutrientes essenciais presentes apenas no leite materno, mas estudos clínicos ainda precisam ser feitos para avaliar a segurança e eficácia do concentrado como alimentação dos recém-nascidos de muito baixo peso. / Introduction Very low birth weight infants (<1,500 g) require adequate nutrient intake to develop satisfactorily. Human milk is essential in its diet, since it has a balanced nutritional composition that includes essential nutrients, such as polyunsaturated fatty acids, including omega 3 and 6 acids, of extreme importance for the development of the central nervous system and retina. However, only breast milk may not be sufficient to meet these needs, thus requiring supplementation. Nowadays, the possibility of adapting the human milk plus a concentrate with lyophilized from the human milk itself, which was developed in this work, has arisen. Objectives To determine the amount of total lipids and the lipid profile of Human Baseline Milk (LHB) and Concentrates with human milk lyophilized at different times (Human Milk Concentrated in the immediate period - LHCI, Concentrated Human Milk in the 3-month period - LHC3m and Human Milk Concentrated in the 6-month period - LHC6m). Methods Fifty samples of human milk from women donors of the Human Milk Bank of FMRP-USP who were accepted to participate in the study were obtained. Lipid quantification was performed by the MIRIS® Human Milk Analyzer and the fatty acid profile was determined by CG-FID, SHIMADZU®. Results There was a total lipid concentration in LHCI relative to LHB; the concentration (% of total fatty acids) of the acids was: palmitic (C16: 0) 22.30% LHB, 21.46% LHCI, 21.54% LHC3m and 21.95% LHC6m (p <0) , 01); oleic acid (C18: 1n-9) 30.41% LHB, 30.47% LHCl, 30.55% LHC3m and 29.79% LHC6m (p = 0.46); linoleic acid (C18: 2 n-6) 19.62% LHB, 19.88% LHCI, 19.49% LHC3m and 19.45% LHC6m (p = 0.58); arachidonic (C20: 4 n-6) 0.35% LHB, 0.16% LHCl, 0.13% LHC3m and 0.15% LHC6m (p <0.01); ?-linolenic acid (C18: 3 n-3) 1.32% LHB, 1.37% LHCI, 1.34% LHC3m and 1.34% LHC6m (p = 0.14); (C22: 6 n-3) 0.10% LHB, 0.06% LHCl, 0.05% LHC3m and 0.06% LHC6m (p <0.01). There are specific modifications in some fatty acids, however the sum of fatty acids by their structural classes do not present differences. Conclusion Despite the small differences found in the lipid profile, the concentrate with freeze-dried human milk is a food that can meet the needs of the newborn, since there was an increase in total lipids and preservation of essential nutrients present only in breast milk, butclinical studies still need to be done to evaluate the safety and efficacy of concentrate as a feed for very low birth weight infants.

Foram utilizadas 144 galinhas poedeiras da linhagem Shaver White por um período de quatro semanas, com o intuito de verificar o efeito da adição de 3% dos óleos de soja, milho, canola, linhaça, salmão ou da mistura de sardinha e atum na dieta das aves, sobre a composição dos ácidos graxos na gema dos ovos e no plasma sanguíneo das aves, bem como o tempo de incorporação total de cada ácido graxo na gema dos ovos durante o período experimental. Paralelamente foram avaliados, o desempenho das aves e a qualidade externa dos ovos. Para análise estatística dos resultados empregou- se modelo fatorial 6X6 em blocos casualizados sendo as aves distribuídas em 72 gaiolas. A adição de 3% de óleo de salmão ou de milho à ração determinou redução significativa no consumo alimentar. O tratamento que recebeu 3% de óleo de salmão promoveu menor peso da casca dos ovos (g) bem como menor espessura da casca (mm). A inclusão dos óleos de linhaça, soja ou milho à dieta, determinou aumento dos ácidos graxos poliinsaturados na gema e no plasma das galinhas. A adição de óleo de sardinha e atum proporcionou maiores concentrações de ácidos graxos saturados na gema. Os teores de PUFAs n-3 foram maiores nas gemas do tratamento a base de óleo de sardinha, enquanto que no plasma a maior concentração foi observada no tratamento com óleo de linhaça. O óleo de linhaça proporcionou o maior teor de ácido &alpha;-linolênico incorporado à gema e no plasma sanguíneo. As quantidades de EPA na gema e no plasma mostraram-se maiores no grupo que recebeu 3% de óleo de sardinha e atum que, por sua vez, também foram responsáveis pelos mais elevados teores de DHA na gema dos ovos. Já com relação ao plasma, as maiores concentrações de DHA foram observadas nos grupos alimentados com óleos de salmão e sardinha/atum. Os PUFAs diminuíram na gema até o oitavo dia experimental, enquanto que os PUFAs n-3 aumentaram até este dia. Os teores de ácido &alpha;-linolênico foram crescentes até o décimo dia de experimento, enquanto que as concentrações de EPA e DHA aumentaram até o oitavo dia de experimento. / Hundred forty-four Shaver White laying hens were used over a 4 week experimental period to investigate the effect of 3% of soybean oil, corn oil, canola oil, flaxseed oil, salmon oil or tuna and sardine oil added to the diets, upon the fatty acid egg yolk composition, blood plasma levels and incorporation time of each fatty acid into the egg yolk. Reproductive performance of hens and external egg quality were evaluated. Hens were allocated into 72 cages and the experimental design was a 6X6 randomized factorial model. Hens fed 3% salmon or corn oil diet showed a significant reduction of food consumption, eggshell weight (g) and eggshell thickness (mm). The addition of flaxseed, soybean or corn oil into the diet increased the polyunsaturated fatty acids levels into the egg yolk and in the blood plasma. Adding tuna and sardine oil into the diet increased the concentration of yolk saturated fatty acids. The levels of PUFAs n-3 were increased in the tuna and sardine oil treatment, while the flaxseed oil increased the plasma fatty acids. The deposition of &alpha;-linolenic fatty acids was higher in the group fed flaxseed oil The percentage of EPA into the yolk and plasma was higher for the hens fed 3% tuna and sardine oil diet, as well as the levels of yolk DHA. The concentration of DHA into the plasma was higher for the salmon and tuna/sardine oil treatments. The PUFAs yolk decreased during the first eight days of experiment, while the PUFAs n-3 increased during the same period. The concentration of &alpha;-linolenic acid increased until ten days of experiment, while the percentage of EPA and DHA increased up to the eighth experimental day.

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A inflamação sistêmica é uma das características que marcam o diagnóstico da caquexia associada ao câncer. Entre as interações tumor-hospedeiro, o tecido adiposo branco contribui à inflamação, uma vez que ele sofre uma reorganização morfológica e lipólise, liberando ácidos graxos livres (AGLs), mediadores lipídicos (LMs) e citocinas pró-inflamatórias, que acentuam a ativação de vias de sinalização pró-inflamatória e o recrutamento de células do sistema imunológico para o tecido. O objetivo deste projeto foi investigar quais fatores inflamatórios sistêmicos estão envolvidos na inflamação do tecido adiposo e qual é a influência desses fatores sobre as enzimas envolvidas no metabolismo dos AGs ou LMs em indivíduos saudáveis (Controle), pacientes com câncer gastrointestinal com peso estável (WSC) e pacientes com câncer e caquexia (CC). Os resultados demonstraram que a resposta inflamatória sistêmica é diferente da resposta encontrada no tecido adiposo. A inflamação sistêmica dos pacientes com câncer e caquexia (CC) foi caracterizada por níveis circulantes mais elevados de ácidos graxos saturados (SFAs), tumor-necrosis-factor-&#945 (TNF-&#945), Interleukin IL-6, IL-8 e proteina Creativa (PCR), enquanto os níveis de ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs), especialmente n3-PUFAs, foram menores em CC que nos demais grupos. In vitro e em explantes de tecido adiposo, citocinas pró-inflamatórias e SFAs aumentaram a expressão das quimiocinas IL-8 e CXCL10. E também observamos um aumento na expressão destas quimiocinas na inflamação do tecido adiposo no CC, que era mais profundo no tecido adiposo visceral (VAT) quando comparado ao tecido adiposo subcutâneo (SAT). A inflamação sistêmica foi negativamente associada com a expressão de enzimas sintetizadoras dos PUFAs, embora a expressão gênica e protéica mostraram somente pequenas diferencias entre os grupos. Os efeitos dos fatores inflamatórios sobre as enzimas no tecido adiposo podem ter sido mascarados pela modulação diferenciada dos diversos tipos celulares constituintes desse tecido. Experimentos in vitro mostraram que a expressão de enzimas que modificam os AGs, tais como as dessaturases e elongases em adipócitos e macrófagos, foram reguladas em direções opostas por TNF-&#945, IL-6, LPS e palmitato. Mesmo os pacientes CC demonstrando uma maior concentração plasmática da Resolvina D1, que é um mediador lipídico de resolução da inflamação, ainda assim, a inflamação sistêmica é maior nesses pacientes, e os resultados indicam que as citoquinas inflamatórias interferem com as vias de síntese das LMs da resolução. Concluímos que, os dados revelaram um crosstalk inter-tecidual e intercelular complexo mediado por citocinas pró-inflamatórias e compostos lipídicos que aumentam a inflamação na caquexia associada ao câncer por mecanismos autoregulação. / Systemic inflammation is a hallmark of cancer cachexia. Among tumor-host interactions, the white adipose tissue (WAT) is an important contributor to inflammation as it suffers morphological reorganization and lipolysis, releasing free fatty acids (FA), bioactive lipid mediators (LM) and pro-inflammatory cytokines, which accentuate the activation of proinflammatory signaling pathways and the recruitment of immune cells to the tissue. This project aimed to investigate which inflammatory factors are involved in the local adipose tissue inflammation and what is the influence of such factors upon enzymes involved in FA or LM metabolism in healthy individuals (Control), weight stable gastro-intestinal cancer patients (WSC) and cachectic cancer patients (CC). The results demonstrated that the inflammatory signature of systemic inflammation is different from local adipose tissue inflammation. The systemic inflammation of the cachectic cancer patients was characterized by higher levels of circulating saturated fatty acids (SFA), tumor-necrosisfactor- &#945 (TNF- &#945), interleukins IL-6, IL-8 and CRP while levels of polyunsaturated fatty acids (PUFAs), especially n3-PUFAs, were lower in CC than in the other groups. In vitro and in adipose tissue explants, pro-inflammatory cytokines and SFAs were shown to increase the chemokines IL-8 and CXCL10 that were found to be augmented in adipose tissue inflammation in CC which was more profound in the visceral adipose tissue (VAT) than in subcutaneous adipose tissue (SAT). Systemic inflammation was negatively associated with the expression of PUFA synthesizing enzymes, though gene and protein expression did hardly differ between groups. The effects of inflammatory factors on enzymes in the whole tissue could have been masked by differentiated modulation of the diverse cell types in the same tissue. In vitro experiments showed that the expression of FA-modifying enzymes such as desaturases and elongases in adipocytes and macrophages was regulated into opposing directions by TNF- &#945, IL-6, LPS or palmitate. The higher plasma concentration of the pro-resolving LM resolvin D1 in CC cannot compensate the overall inflammatory status and the results indicate that inflammatory cytokines interfere with synthesis pathways of pro-resolving LM. In summary, the data revealed a complex inter-tissue and inter-cellular crosstalk mediated by pro-inflammatory cytokines and lipid compounds enhancing inflammation in cancer cachexia by feedforward mechanisms.

Introdução: A prevalência de doenças crônicas tem crescido em decorrência do aumento da obesidade nos últimos anos. Peptídeos secretados pelo trato gastrointestinal, como o peptídeo semelhante ao glucagon 1 (GLP-1) e o peptídeo YY (PYY), exercem papel fundamental no controle da ingestão alimentar, pois levam informações acerca dos nutrientes ingeridos até o sistema nervoso central, possuindo efeitos anorexígenos e/ou orexígenos. Tanto GLP-1 quanto PYY são produzidos pelas células-L do íleo distal e cólon, sendo liberados após a ingestão alimentar. Além do efeito incretina produzido pelo GLP-1, ambos os peptídeos apresentam implicações no controle do apetite, o qual reflete na redução do peso corpóreo. Objetivos: Demonstrar um aumento na secreção de GLP-1 e PYY após sobrecarga oral de diferentes tipos de lipídios, comparados à controle negativo (água) e positivo (glicose). Métodos: Foi realizado um estudo experimental controlado em ratos Wistar, distribuídos em 4 grupos de acordo com a sobrecarga oral: grupo MUFA (óleo de oliva); grupo SAT (banha suína); grupo GLUC (glicose) e grupo CONT (água), foram avaliadas as concentrações séricas de GLP-1 ativo e PYY3-36 nos tempos: 0, 15, 30, 60 e 120 minutos. As sobrecargas foram isovolumétricas e isocalóricas, com exceção do grupo controle. Resultados: Houve pico de secreção do GLP-1 pós-sobrecarga no grupo MUFA no ponto 120’ vs CONT e GLUC (p≤0,001) e no ponto 30’ quando comparado ao seu baseline. Também observou-se pico de secreção de PYY no grupo MUFA vs CONT no ponto 30’ (p=0,015); no ponto 60’ vs CONT e GLUC (p=0,019) e no ponto 120’ vs CONT e SAT (p=0,02). A carga secretada do PYY foi maior no MUFA quando comparada ao CONT (p=0,04). Verificou-se forte correlação entre os níveis basais e AUC’s do GLP-1 e PYY (r=0,57; (p= 0,02); r=0,39; (p≤0,001)). A proporção GLP-1/PYY apresentou um coeficiente médio de 3,77 (±2,04). O grupo MUFA evidenciou níveis menores de glicose e maiores de insulina no ponto 15’, enquanto SAT mostrou níveis maiores de glicose e menores de insulina neste ponto, porém, sem diferença significativa. Conclusão: A sobrecarga oral de fontes de ácidos graxos monoinsaturados promoveu um pico de secreção do GLP-1 de forma rápida e no que diz respeito ao PYY, o pico foi mais sustentado. Estudos adicionais são necessários, a fim de se avalir o efeito de fontes distintas de lipídeos da dieta sobre a secreção destes peptídeos e seus efeitos na saciedade. / Background: The increased prevalence of chronic diseases has risen due to obesity. Gut peptides, such as glucagon-like peptide 1 (GLP-1) and peptide YY (PYY), play an important role controlling food intake in response to a meal. GLP-1 exerts the known incretin effect stimulating the release of insulin in a glucosedependent manner. Besides its insulinotropic effects, it is well established that GLP-1 slows gastric emptying, and also inhibits inappropriate glucagon release, additionally improves satiety. Both PYY and GLP-1 are produced by L cells of the distal ileum and colon. Objective: Demonstrate an increased secretion of PYY and GLP-1 after oral overload of different types of lipids, compared to negative (water) and positive (glucose) control. Methods: We conducted a controlled experimental study in Wistar rats, divided into 4 groups according to oral overload: MUFA group (olive oil), SAT group (lard:), carbohydrates group (glucose) and CONT group (water), It was evaluated the serum concentration of active GLP-1 and PYY3-36 in the times: 0, 15, 30, 60 and 120 minutes. Overloads were isovolumetric and isocaloric, but the control group. Results: It was verified a higher peak secretion of GLP-1 in MUFA group at 120' after overload vs. CONT and carbohydrates (p ≤ 0.001) and at 30' when compared to its baseline (p=0,01). It was shown a higher secretion peak of GLP-1 after MUFA overload at time 120’ vs CONT e GLUC (p≤0,001) and at time 30’ when compared to its baseline. It was also verified a PYY release peak in MUFA vs CONT at time 30’ (p=0,015); 60’ vs CONT e GLUC (p=0,019) and 120’ vs CONT e SAT (p=0,02). PYY release load presented higher in MUFA group when compared to CONT (p=0,04). A strong correlation was seen between baseline PYY and GLP-1 (r=0,57; p= 0,02) as their AUC’s (r=0,39; p≤0,001). GLP-1/PYY proportion release presented a mean coefficient of 3, 77(±2,04).Conclusion: monounsaturated fatty acids promoted a release peak of GLP-1 in a faster manner and concerning PYY this peak was more sustained. Further studies are necessary to evaluate whether distinct diet fatty acids can ameliorate these gut peptides release and their role on satiety.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-14T16:15:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3336095 bytes, checksum: 95e091fc2de36640318c4cb1a88e5114 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T16:15:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3336095 bytes, checksum: 95e091fc2de36640318c4cb1a88e5114 (MD5) Previous issue date: 2012-08-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A utilização de métodos de melhoramento genético pode levar à obtenção de genótipos de soja com características de interesse econômico e composição ideal de ácidos graxos na fração óleo. Para isso, é necessário o maior entendimento dos mecanismos que levam à alteração do conteúdo de ácidos graxos frente a diferentes condições de cultivo e a avaliação das substituições dos alelos dos genes que controlam essas características. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da temperatura no conteúdo de óleo, composição de ácidos graxos e expressão gênica das ω-6 e ω-3 dessaturases em genótipos contrastantes para o conteúdo de ácido oléico e linolênico e avaliar o efeito da substituição alélica das ω-3-dessaturases de ácidos graxos insaturados em soja, com base em marcadores SNPs. Para os experimentos do efeito da temperatura na via de biossíntese de ácidos graxos, foram utilizados os genótipos: CD219, variedade comercial com concentrações normais de ácido oléico (~19%) e ácido linolênico (~8%); A29, com baixa concentração de ácido linolênico (~1%) e FA22, com elevada concentração de ácido oléico (~50%). O experimento foi conduzido em duas casas de vegetação: i) com aquecimento, que permitiu a obtenção de temperaturas médias (máxima e mínima) de 32/27°C; ii) sem aquecimento, que permitiu a obtenção de temperaturas médias de 26/14°C. As sementes em desenvolvimento foram subdivididas em dez estádios de acordo com o seu peso úmido, tendo o valor de incremento entre estádios de 50 mg. O conteúdo de óleo foi determinado no extrator soxhlet e composição de ácidos graxos por cromatografia gasosa. Os possíveis genes das dessaturases foram identificados no banco de dados Phytozome e a partir dessas sequências foram desenhados primers para experimentos de expressão gênica nas sementes dos 5° e 8° estádios de desenvolvimento. Não foi observado efeito significativo da temperatura de cultivo no teor de óleo bruto em sementes maduras dos genótipos CD219, A29 e FA22. Os perfis do acúmulo de ácidos graxos insaturados durante a ontogenia das sementes variaram em função do genótipo. FA22 apresentou maior conteúdo de ácido oléico e menor conteúdo de ácido linolênico em sementes cultivadas em alta temperatura em todos os estádios de desenvolvimento. Enquanto que em CD219 esse efeito foi observado apenas nos estádios finais. Quinze genes foram identificados como potenciais constituintes da família das dessaturases: 8 referentes às ω-6-dessaturases e 7 referentes às ω-3-dessaturases. Dentre os genes das ω-6- dessaturases Glyma10g42470 e Glyma20g24530 apresentaram maior expressão relativa em sementes de soja em desenvolvimento. Dentre os genes das ω-3-dessaturases genes Glyma02g39230; Glyma14g37350 e Glyma18g06950 apresentaram os maiores valores de expressão relativa em sementes de soja em desenvolvimento. Contrariamente ao esperado, os genes das ω-6-dessaturases Glyma10g42470, Glyma15g23200 e Glyma20g24530 apresentaram maior acúmulo de transcritos na maior temperatura (32/27°C) de cultivo. O gene da ω-3-dessaturases Glyma18g06950 apresentou perfil de expressão compatível com as alterações no conteúdo de ácido linoléico/linolênico nos genótipos FA22 e CD219 em função da temperatura em sementes em desenvolvimento. Para o experimento de avaliação do efeito da substituição alélica das ω-3-dessaturases de ácidos graxos insaturados em soja com base em marcadores SNPs, foram genotipadas 185 progênies F2 derivadas do cruzamento entre A29 (mutante para três genes FAD3, 1% de 18:3∆3,6,9) e Tucunaré (genótipo normal, 11% de 18:3∆3,6,9). Os resultados demonstram que os marcadores moleculares para os genes FAD3A, FAD3B e FAD3C foram eficientes no monitoramento do conteúdo de ácido linolênico nas populações segregantes F2 e F2:3. Além disso, as substituições dos alelos no loco FAD3A proporcionam maiores variações no conteúdo de ácido linolênico que as substituições nos outros dois locos. A partir desses dados, espera-se que seja possível introduzir os alelos recessivos dos genes FAD3A, FAD3B e FAD3C da linhagem A29 em genótipos elites do Programa de Melhoramento da Qualidade da Soja (PMQS) do BIOAGRO/UFV e desenvolver linhagens de soja especiais para a agroindústria apresentando baixos teores do ácido linolênico. / The use of genetic breeding may lead to the development of soybean genotypes with traits of economic interest and improved composition of fatty acids in the oil fraction. To achieve this goal, a better understanding of the mechanisms that lead to changes in fatty acid contents under different growing conditions and evaluation of allelic substitutions of genes that control these traits are needed. In this context, the aim of this study was to evaluate the effect of temperature on oil content, fatty acid composition and gene expression of ω-6 and ω-3 desaturases in genotypes contrasting for oleic and linolenic acid contents. In addition, the effect of allelic substitutions of fatty acid ω-3-desaturases genes was also evaluated. For the experiments on the effect of temperature on fatty acid biosynthesis the following genotypes were used: CD219, commercial variety with normal concentrations of oleic acid (~ 19%) and linolenic acid (~ 8%); A29, with low concentration of linolenic acid (~ 1%) and FA22, with a high concentration of oleic acid (~ 50%). The experiment was conducted in two greenhouses: one with heating, with average temperatures (maximum and minimum) of 32/27 °C, and the other with no heating, with average temperatures of 26/14 °C. The developing seeds were divided into ten stages according to the fresh weight, and the increment value between stages of 50 mg. The oil content was determined by soxhlet extractor and the fatty acid composition by gas chromatography. Possible desaturase genes were identified in the Phytozome database and from these sequences primers were designed for gene expression experiments. There was no significant effect of temperature on oil content in mature seeds of genotypes CD219, A29 and FA22. The accumulation profiles of the unsaturated fatty acids during seed ontogeny varied according the genotype. FA22 showed higher oleic and low linolenic acid contents in plants grown under high temperature at all stages of development. While in CD219 this effect was observed only in the later stages. Fifteen genes were identified as potential components of the desaturase family: 8 for ω-6-desaturases and 7 for ω-3 desaturases. Among the ω-6- desaturase genes, Glyma10g42470 and Glyma20g24530 showed higher relative expression in developing soybean seeds. Among the genes of ω-3-desaturase genes, Glyma02g39230, Glyma14g37350 and Glyma18g06950 showed higher relative expression during seed development. Contrary to expectation, ω-6-desaturases genes Glyma10g42470, Glyma15g23200 and Glyma20g24530 showed higher accumulation of transcripts under higher temperatures (32/27 °C). The ω-3-desaturase gene Glyma18g06950 showed expression profile compatible with the changes in the linoleic/ linolenic acid contents of genotypes FA22 and CD219 as a function of temperature during seed development. To evaluate the effect of allelic substitution of ω-3 desaturases genes SNP markers were genotyped in 185 F2 and F2:3 progenies derived from a cross between A29 (mutant for the three FAD3 genes, 1% 18:3∆3,6,9) and Tucunaré (normal genotype, 11% 18:3∆3,6,9). The results demonstrate that the molecular markers for genes FAD3A, FAD3B and FAD3C were efficient in monitoring the linolenic acid content in segregating populations F2 and F2:3. In addition, substitutions at the FAD3A locus provided greater variations in the linolenic acid content than substitutions in the other two loci. From these data, it is expected that it is possible to introduce the recessive alleles of genes FAD3A, FAD3B and FAD3C of A29 in elite genotypes of the Breeding Program for Soybean Quality of BIOAGRO/UFV and to develop special soybean lines for the agroindustry with low linolenic acid content.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Objetivo: Inicialmente avaliar os efeitos da exposicao em longo prazo a fumaca do cigarro na peroxidacao lipidica, em especial aos acidos graxos da serie omega-3 de tabagistas saudaveis, atraves da quantificacao plasmatica dos principais representantes destes acidos graxos. Em um segundo momento, investigar os efeitos do tratamento da compulsao e dependencia de nicotina de tabagistas saudaveis por meio de um suplementacao alimentar com omega-3. Metodos: Esta pesquisa compreendeu dois estudos. O primeiro estudo consistiu em uma avaliacao transversal no qual comparou-se os niveis de omega-3 de uma amostra de 171 fumantes e nao fumantes, pareada para idade, sexo, altura, peso e indice de massa corporal. O tratamento consistiu em um estudo clinico, duplo-cego, randomizado, placebo controlado, no qual 39 tabagistas saudaveis receberam tratamento diario (capsulas com 3g de oleo de peixe (fonte de omega-3) ou oleo mineral (como placebo) por 90 dias. A avaliacao do efeito do tratamento foi realizada utilizando medidas psicometricas e biologicas, incluindo auto-relato de consumo. As avaliacoes foram realizadas no inicio do tratamento e mensalmente. Resultados: A avaliacao do perfil lipidico da serie omega-3 demonstrou que os fumantes possuem concentracoes inferiores de um dos representantes da serie omega-3, o acido docosahexaenoico, um dos principais lipidios com acao no Sistema Nervoso Central. Apos o termino da intervencao clinica o grupo tratado com omega-3 apresentou reducao significativa nas avaliacoes dos niveis de dependencia, contudo sem alteracoes nas demais avaliacoes utilizadas ao longo do tratamento. Conclusao: Tabagistas possuem concentracoes perifericas reduzidas de omega-3, o que pode refletir alteracoes dos niveis deste composto em todo o organismo e comprometer o funcionamento normal de diferentes sistemas, tendo como um exemplo o sistema de neurotransmissao dopaminergica. Por sua vez, o tratamento com 3g/dia de omega-3 por 90 dias ocasionou reducao no nivel da dependencia de nicotina, contudo nao apresentou melhoras nos demais parametros analisados, bem como nao resultou na cessacao do consumo de cigarros / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A obesidade e suas complicações metabólicas afetam o sistema endócrino e vários órgãos, tais como os testículos. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da ingestão de diferentes dietas hiperlipídicas (rica em ácidos graxos saturados e/ou poliinsaturados) na massa corporal, no metabolismo de carboidratos e na morfologia testicular em ratos aos sete meses de idade. 39 ratos machos Wistar (três meses de idade) foram divididos em 4 grupos: SC (standard chow; n = 9), HF-S (dieta hiperlipídica rica em ácidos graxos saturados; n = 10), HF-P (dieta hiperlipídica rica em ácidos graxos poliinsaturados; n = 10), HF-SP (dieta hiperlipídica rica em ácidos graxos saturados e poliinsaturados; n = 10). A massa corporal foi monitorada semanalmente, até o final do experimento. Ao sacrifício (sete meses de idade), amostras de sangue foram coletadas e os testículos foram dissecados, pesados e processados para análises histomorfométrica, imunohistoquímica e bioquímica. Os depósitos de gordura genital foram dissecados e pesados. Os dados foram analisados por ANOVA e pós-teste de Bonferroni, considerando p < 0,05. As dietas hiperlipídicas promoveram aumento na massa corporal dos animais quando comparado ao grupo SC (p < 0,0001). Corroborando com esse resultado, os depósitos de gordura genital dos grupos hiperlipídicos (HF-S, HF-P e HF-SP) apresentaram aumento de 67%, 91% e 90% (p = 0,0004) em relação ao grupo SC, respectivamente. Quanto aos parâmetros séricos, os animais dos grupos HF-S e HF-SP apresentaram hiperglicemia (p = 0,0060), hiperinsulinemia (p = 0,0030), hipercolesterolemia (p = 0,0021). Todos os grupos hiperlipídicos apresentaram hiperleptinemia (p = 0,0019). Os níveis de triglicerídeos e testosterona não diferiram entre os grupos. Em relação ao testículo, os grupos SC, HF-P e HF-SP apresentaram maior altura do epitélio seminífero quando comparado ao grupo HF-S (p = 0,0003). No que diz respeito ao diâmetro dos túbulos seminíferos, verificou-se uma diminuição no grupo HF-SP, em comparação ao grupo SC (p = 0,0010). A proliferação celular foi reduzida no grupo HF-S comparado ao grupo SC (p = 0,0450). Não foram observadas diferenças na massa testicular e na concentração de colágeno. Diante do exposto, a administração de dieta HF, independentemente da qualidade do lipídio, promoveu o sobrepeso em ratos adultos. No entanto, a dieta rica em ácidos graxos saturados (banha de porco) promoveu alterações no metabolismo dos carboidratos e na morfologia testicular, com redução no diâmetro dos túbulos seminíferos, na altura do epitélio seminífero e na proliferação das células da linhagem espermatogênica. Estas alterações estão possivelmente relacionadas à distúrbios na espermatogênese. / Obesity and its metabolic complications affects the endocrine system and multiple organs such as the testes. This study aimed to evaluate the effects of different high-fat diets (rich in saturated and / or polyunsaturated fatty acids) on body mass, carbohydrate metabolism and testicular morphology in rats at seven months old. 39 male Wistar rats (three months old) were divided into four groups: SC (standard chow, n = 9), HF-S (high fat diet rich in saturated fatty acids, n = 10), HF-P (high fat diet rich in polyunsaturated fatty acids, n = 10), HF-SP (high fat diet rich in saturated and polyunsaturated fatty acids, n = 10). Body mass was monitored weekly until the end of the experiment. At the sacrifice (seven months old), blood samples were collected and the testes were dissected, weighed and processed for histomorphometrical, immunohistochemical and biochemical analysis. Genital fat deposits were dissected and weighed. Data were analyzed by one-way ANOVA and Bonferroni post hoc test, considering p < 0.05. Different high-fat diets promoted an increased in body mass compared with the SC group (p < 0.0001). Accordingly, the genital fat deposits were higher in the high-fat groups (HF-S, HF-P, HF-SP) than in the SC group, showing an increase of 67%, 91% and 90%, respectively (p = 0.0004). Regarding serum parameters, the animals in the HF-S and HF-SP groups presented hyperglycemia (p = 0.0060), hyperinsulinemia (p = 0.0030), hypercholesterolemia (p = 0.0021). All of the hyperlipidemic groups showed hyperleptinemia (p = 0.0019). Serum triglyceride and serum testosterone levels did not differ among the groups. Concerning the testis, the SC, HF-P and HF-SP groups showed an increase on seminiferous epithelium height compared with the HF-S group (p = 0.0003). As the seminiferous tubule diameter, there was a decrease in the HF-SP group in comparison with the SC group (p = 0.0010). Cell proliferation was reduced in HF-S group compared with the SC group (p = 0.0450). Among the groups, no difference was observed in the testicular mass and in collagen level. In conclusion, the high fat diet administration, independent of the lipid quality, promotes overweight. Diet rich in saturated fatty acids (lard) alters the carbohydrate metabolism and the testicular morphology with reductions of seminiferous epithelium height, seminiferous tubule diameter and cell proliferation which could be related to a disturbance of spermatogenesis.

Foram utilizadas 144 galinhas poedeiras da linhagem Shaver White por um período de quatro semanas, com o intuito de verificar o efeito da adição de 3% dos óleos de soja, milho, canola, linhaça, salmão ou da mistura de sardinha e atum na dieta das aves, sobre a composição dos ácidos graxos na gema dos ovos e no plasma sanguíneo das aves, bem como o tempo de incorporação total de cada ácido graxo na gema dos ovos durante o período experimental. Paralelamente foram avaliados, o desempenho das aves e a qualidade externa dos ovos. Para análise estatística dos resultados empregou- se modelo fatorial 6X6 em blocos casualizados sendo as aves distribuídas em 72 gaiolas. A adição de 3% de óleo de salmão ou de milho à ração determinou redução significativa no consumo alimentar. O tratamento que recebeu 3% de óleo de salmão promoveu menor peso da casca dos ovos (g) bem como menor espessura da casca (mm). A inclusão dos óleos de linhaça, soja ou milho à dieta, determinou aumento dos ácidos graxos poliinsaturados na gema e no plasma das galinhas. A adição de óleo de sardinha e atum proporcionou maiores concentrações de ácidos graxos saturados na gema. Os teores de PUFAs n-3 foram maiores nas gemas do tratamento a base de óleo de sardinha, enquanto que no plasma a maior concentração foi observada no tratamento com óleo de linhaça. O óleo de linhaça proporcionou o maior teor de ácido &alpha;-linolênico incorporado à gema e no plasma sanguíneo. As quantidades de EPA na gema e no plasma mostraram-se maiores no grupo que recebeu 3% de óleo de sardinha e atum que, por sua vez, também foram responsáveis pelos mais elevados teores de DHA na gema dos ovos. Já com relação ao plasma, as maiores concentrações de DHA foram observadas nos grupos alimentados com óleos de salmão e sardinha/atum. Os PUFAs diminuíram na gema até o oitavo dia experimental, enquanto que os PUFAs n-3 aumentaram até este dia. Os teores de ácido &alpha;-linolênico foram crescentes até o décimo dia de experimento, enquanto que as concentrações de EPA e DHA aumentaram até o oitavo dia de experimento. / Hundred forty-four Shaver White laying hens were used over a 4 week experimental period to investigate the effect of 3% of soybean oil, corn oil, canola oil, flaxseed oil, salmon oil or tuna and sardine oil added to the diets, upon the fatty acid egg yolk composition, blood plasma levels and incorporation time of each fatty acid into the egg yolk. Reproductive performance of hens and external egg quality were evaluated. Hens were allocated into 72 cages and the experimental design was a 6X6 randomized factorial model. Hens fed 3% salmon or corn oil diet showed a significant reduction of food consumption, eggshell weight (g) and eggshell thickness (mm). The addition of flaxseed, soybean or corn oil into the diet increased the polyunsaturated fatty acids levels into the egg yolk and in the blood plasma. Adding tuna and sardine oil into the diet increased the concentration of yolk saturated fatty acids. The levels of PUFAs n-3 were increased in the tuna and sardine oil treatment, while the flaxseed oil increased the plasma fatty acids. The deposition of &alpha;-linolenic fatty acids was higher in the group fed flaxseed oil The percentage of EPA into the yolk and plasma was higher for the hens fed 3% tuna and sardine oil diet, as well as the levels of yolk DHA. The concentration of DHA into the plasma was higher for the salmon and tuna/sardine oil treatments. The PUFAs yolk decreased during the first eight days of experiment, while the PUFAs n-3 increased during the same period. The concentration of &alpha;-linolenic acid increased until ten days of experiment, while the percentage of EPA and DHA increased up to the eighth experimental day.