O objetivo do presente estudo foi avaliar comparativamente os efeitos dos treinamentos físicos aeróbico contínuo (TC) e aeróbico intervalado (TI) na tolerância ao esforço e na resposta vasomotora, analisando as vias de produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e a biodisponibilidade de óxido nítrico (NO), em aorta torácica isolada de ratos infartados pós-ligadura da coronária esquerda (IM). As sessões de treino de ambos TC e TI foram equalizados pelo gasto calórico total, distância total percorrida e intensidade média do VO2pico. Após 48 h da última sessão de treino, os ratos foram sacrificados e feita a retirada da aorta torácica para as analises funcionais e bioquímicas. Resultados: o IM promoveu disfunção endotelial aórtica, evidenciada por um menor relaxamento à ACh e maior constrição à NE. O grupo IM-SED apresentou menor capacidade funcional (menor tolerância ao esforço e menor VO2pico). Por outro lado, ambos os grupos IM-TC e IM-TI aumentaram a vasodilatação à ACh e diminuíram a vasoconstrição à NE. Além disso, ambos os TC e TI foram eficientes em aumentar a tolerância ao esforço e VO2pico nos grupos IM. Estes efeitos benéficos do TC e TI na função endotelial aórtica estavam associados ao aumento da via de produção de NO (ativação da eNOS por maior expressão da Akt total e fosforilada) e diminuição da produção de superóxido (redução da NOX- 1), acarretando em maior biodisponibilidade de NO. Deste modo, podemos concluir que ambos os TC e TI foram igualmente efetivos em atenuar o estresse oxidativo, restaurar a função endotelial aórtica e aumentar a capacidade funcional de ratos infartados / The aim of this study was to evaluate comparatively the effects of continuous aerobic physical training (CT) and aerobic interval training (IT) on exercise tolerance and vasomotor response, analyzing the process of production of reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO) bioavailability in thoracic aorta isolated from postinfarcted rats induced by left coronary artery ligation (MI). The training sessions of both CT and IT were equalized by total caloric expenditure, total distance running and average intensity of VO2peak. 48 h after the last training session, rats were sacrificed and the thoracic aorta was removed for the functional and biochemical analysis. Results: MI caused aortic endothelial dysfunction, evidenced by a lower relaxation to ACh and increased constriction to NE. The IM-SED group had lower functional capacity (lower exercise tolerance and lower VO2peak). Moreover, both groups CT and IT increased vasodilation to ACh and reduced vasoconstriction to NE. Furthermore, both CT and IT were effective in increasing exercise tolerance and VO2peak in IM groups. These beneficial effects of CT and IT on aortic endothelial function were associated with increased NO production pathway (activation of eNOS by increased expression of total and phosphorylated Akt), and decreased superoxide production (reduction of NOX-1), resulting in increased bioavailability of NO. Thus, we conclude that both IC and IT were equally effective in attenuating oxidative stress, restore aortic endothelial function and increase the functional capacity of infarcted rats

A inibição crônica do óxido nítrico com Nw-nitroargininemethylester (L-NAME), associado à sobrecarga de sal, leva a hipertensão grave, albuminúria, glomeruloesclerose, isquemia glomerular e fibrose intersticial, caracterizando um modelo de doença renal crônica (DRC). Achados anteriores deste laboratório e de outros sugerem que a ativação de pelo menos duas vias da imunidade inata, TLR4/NF-kB e NLRP3/IL-1beta, ocorre em vários modelos experimentais de DRC e que a progressão da lesão renal pode ser atenuada com a inibição destas vias. No presente estudo, investigamos se a ativação da imunidade inata, através da via TLR4/NF-kB ou NLRP3/IL-1beta, está envolvida na patogênese da lesão renal em outro modelo de DRC, o de inibição crônica do NO com sobrecarga de sal. Ratos Munich-Wistar machos adultos receberam sobrecarga de sal (2% Na+ na dieta e 0,5% Na+ na água do bebedouro) e L-NAME (32 mg/Kg/dia) dissolvido na salina do bebedouro (Grupo HS+N) ou tratados com alopurinol (Alo, 36 mg/Kg/dia, v.o), usado como inibidor de NLRP3 (grupo HS+N+Alo) ou tratados com ditiocarbamato de pirrolidina (PDTC, 60 mg/Kg/dia, v.o), um inibidor de NF-kB (Grupo HS+N+PDTC). Após 4 semanas, os ratos HS+N desenvolveram hipertensão arterial, albuminúria e lesão renal, juntamente com inflamação renal, estresse oxidativo e ativação de ambas as vias NLRP3/IL1-beta e TLR4/NF-kB. Alo reduziu o ácido úrico renal e inibiu a via NLRP3/IL-1beta. Esses efeitos foram associados à atenuação da hipertensão arterial, albuminúria e inflamação/fibrose intersticial, mas não à lesão glomerular. O PDTC diminuiu o ácido úrico renal e inibiu as vias NLRP3 e NF-kB, promovendo um efeito antiinflamatório e nefroprotetor mais eficiente que o Alo. As vias NLRP3/IL-1beta e TLR4/NF-kB atuam paralelamente para promover lesão/inflamação renal e devem ser simultaneamente inibidas para obter nefroproteção maior nesse modelo de DRC / Nitric oxide inhibition with Nk-nitroargininemethylester (L-NAME) along with salt overload leads to severe hypertension, albuminuria, glomerulosclerosis, glomerular ischemia and collapse, together with interstitial fibrosis, characterizing a model of chronic kidney disease (CKD). Previous findings of this laboratory and elsewhere suggest that activation of at least two pathways of innate immunity, TLR4/NF-kB and NLRP3 inflammasome/IL-1beta, occurs in several experimental models of CKD, and that progression of renal injury can be slowed with inhibition of these pathways. In the present study, we investigated whether activation of innate immunity, through either the TLR4/NFkB or NLRP3/IL-1beta pathway, is involved in the pathogenesis of renal injury in yet another CKD model, chronic NO inhibition with salt overload. Adult male Munich-Wistar rats receiving L-NAME in drinking water and salt overload (Group HS+N) were treated with Allopurinol (ALLO), used as an NLRP3 inhibitor (Group HS+N+ALLO), or PyrrolidineDithiocarbamate (PDTC) a NF-kB inhibitor (Group HS+N+PDTC). After 4 wks, HS+N rats developed hypertension, albuminuria and renal injury, along with renal inflammation, oxidative stress and activation of both the NLRP3/IL1-beta and TLR4/NF-kB pathways. ALLO lowered renal uric acid and inhibited the NLRP3 pathway. These effects were associated with amelioration of hypertension, albuminuria and interstitial inflammation/fibrosis, but not glomerular injury. PDTC lowered renal uric acid and inhibited both the NLRP3 and NF-kB pathways, promoting a more efficient anti-inflammatory and nephroprotective effect than ALLO. NLRP3/IL-1beta and TLR4/NF-kB act in parallel to promote renal injury/inflammation and must be simultaneously inhibited for best nephroprotection

Na lesão renal aguda, os mecanismos de defesa atuam como genes protetores, como a proteína heat shock 32 (HSP 32), também conhecida como heme oxigenase-1 (HO-1). A polimixina B (PmxB) é um antimicrobiano nefrotóxico. O objetivo deste estudo foi caracterizar a participação da enzima HO-1 na toxicidade da PmxB em células LLC-PK1. As células foram submetidas aos seguintes tratamentos: Controle (CTL- 0µM); Hemin (indutor de HO-1, 25µM); Hemin II (250M), Protoporfirina de zinco (ZnPP - inibidor de HO-1, 10M,); Nitro-L-arginina-metilester (L-NAME - inibidor de iNOS, 0,1mM); PmxB (375µM); PmxB + Hemin (25µM de Hemin uma hora antes da PmxB); PmxB + ZnPP (10M de ZnPP uma hora antes da PmxB); PmxB + Hemin + L-NAME (25M de Hemin e 0,1mM de L-NAME uma hora antes da PmxB). Os grupos foram avaliados em 24 e 72 horas. Foram analisados os seguintes parâmetros: desidrogenase láctica (DHL), peroxidação lipídica (MDA), expressão gênica da HO-1 por RT-PCR, síntese protéica da HO-1 por imunofluorescência, óxido nítrico (NO) pelo método de Griess e expressão protéica da HO-1 e da iNOS por western blotting. Os resultados mostraram que a PmxB elevou o DHL com aumento dos níveis de MDA. O Hemin e a ZnPP elevaram as variáveis DHL, MDA e óxido nítrico (NO). O indutor de HO-1 incrementou a expressão protéica da HO-1 e da iNOS. A PmxB se confirmou como citotóxica e a HO-1 intensificou a lesão por mecanismos oxidativos. O efeito da HO-1 na lesão celular parece ser mediado pelo NO / In the acute kidney injury, the mechanisms of defense act as protector genes, as the protein heat shock 32 (HSP 32), also known as heme oxygenase-1 (HO-1). The polymyxin B (PmxB) is a nephrotoxic antimicrobial. The aim of this study was to distinguish the role of the HO-1 enzyme in the PmxB toxicity in LLC-PK1 cells. The cells were submitted to the following treatments: Control (CTL- 0µM); Hemin (inhibitor of HO-1, 25µM); Hemin II (250M), Zinc protoporphyrin (ZnPP - inhibitor of HO-1, 10M,); NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME - inhibitor of iNOS, 0,1mM); PmxB (375µM); PmxB + Hemin (25µM of Hemin one hour before the PmxB); PmxB + ZnPP (10M of ZnPP one hour before the PmxB); PmxB + Hemin + L-NAME (25M of Hemin and 0,1mM of L-NAME one hour before the PmxB). All groups were evaluated in 24 and 72 hours. The following parameters were analysed: lactate dehydrogenase (LDH), lipid peroxidation (MDA), genic expression of HO-1 by RT-PCR, protein syntesis of HO-1 by immunofluorescence, nitric oxide (NO) by Griess method and protein expression of HO-1 and of iNOS by western blotting. The results showed that PmxB increased the LDH and the levels of MDA. Hemin and ZnPP also increased the LDH variables, MDA and nitric oxide (NO). The inducer of HO-1 improved the protein expression of HO-1 and of iNOS. The PmxB was confirmed as a cytotoxic and the HO-1 intensified the failure by oxidative mechanisms. The effect of HO-1 in the cell injury seemed to be mediated by NO

A sepse envolve mecanismos complexos de respostas imunológicas e inflamatórias, e o papel do NF- B é essencial. A diminuição da NO sintase endotelial (eNOS) durante a sepse contribui com a disfunção endotelial. A eritropoietina (EPO) é uma citocina protetora de diversos tecidos durante o estresse. Investigamos o papel da EPO na injúria renal aguda (IRA) induzida pela sepse usando o modelo de ligadura e punção do ceco (LPC). Ratos Wistar foram divididos em três grupos: controle; LPC e LPC+EPO (EPO, 4.000UI/kg, administrada 24h e 1h antes da cirurgia). Com a finalidade de estudar os efeitos precoces e tardios da EPO sobre a IRA induzida pela sepse realizamos três etapas de experimentos: Primeira etapa: 24 horas após LPC; Segunda etapa: 48 horas após LPC; Terceira etapa: análise de sobrevida. No estudo precoce o grupo LPC+EPO apresentou clearance de inulina significativamente maior que o grupo LPC. Recuperou os níveis de hematócrito na sepse, melhorou a pressão arterial e a acidose metabólica. No estudo tardio o grupo LPC+EPO apresentou clearance de creatinina significativamente maior que o grupo LPC. Nesta fase tardia a EPO recuperou os níveis de eNOS, suprimiu a infiltração de macrófagos no tecido renal e inibiu a ativação do NF- B. A EPO protege a função renal e aumenta a sobrevida neste modelo de sepse. A proteção da EPO na sepse é dependente, em parte, da inibição do NF- B e do aumento da expressão de eNOS / The pathophysiology of sepsis involves complex cytokine and inflammatory mediator networks, a mechanism to which nuclear factor-kappa B (NF- B ) activation is central. Downregulation of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) contributes to sepsis-induced endothelial dysfunction. Erythropoietin (EPO) has emerged as a major tissue-protective cytokine in the setting of stress. We investigated the role of EPO in sepsis-related acute kidney injury (AKI) using a cecal ligation and puncture (CLP) model. Wistar rats were divided into three groups: control (sham-operated); CLP-only; and CLP+EPO. The EPO (4000 IU/kg BW, i.p.) was administered 24 h and 1 h before CLP. To study the early and late effects of EPO on sepsis-induced AKI, we performed experiments at 24 h and 48 h after CLP/sham operation, and we plotted the survival curves. At post-procedure hour 24, CLP+EPO rats presented significantly higher inulin clearance than did CLP-only rats; EPO treatment restored hematocrit levels, as well as mean arterial pressure and metabolic balance. At post-procedure hour 48, CLP+EPO rats presented significantly higher creatinine clearance than did CLP-only rats; EPO treatment restored eNOS levels, suppressed macrophage infiltration, and inhibited NF-B activation,thereby increasing survival. In conclusion, EPO protects renal function and increases survival in this model of sepsis-induced AKI. This protection is dependent on eNOS activation and is partly due to inhibition of the inflammatory response via downregulation of NF- B

A doença de Chagas é uma parasitose extremamente negligenciada, cujo agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi. Atualmente, 21 países da América Latina são considerados regiões endêmicas, onde 75-90 milhões de pessoas estão expostas à infecção, 15-16 milhões estão infectadas e mais de 41 mil novos casos surgem por ano, entretanto, apenas os fármacos nifurtimox e benznidazol estão disponíveis no mercado. Estes, além da baixa eficácia na fase crônica da parasitose, apresentam diversos efeitos colaterais, sendo que no Brasil apenas o benznidazol é utilizado. Essa carência no arsenal terapêutico contra a doença de Chagas conduz à importância de buscar quimioterápicos mais eficazes para o seu tratamento. Face ao exposto, o objetivo do trabalho foi a síntese de compostos com dupla atividade contra o T. cruzi, utilizando a metodologia da latenciação de fármacos, em que os derivados ativos são bioisósteros de compostos nitro-heterocíclicos, sintetizados em nosso grupo de pesquisa. Os derivados propostos são pró-fármacos recíprocos do nitrofural hidroximetilado (NFOH) e de seus bioisósteros, promissores com respeito à inibição da cruzaína, com o grupamento liberador de óxido nítrico. Podem, deste modo, atuar de forma dupla na inibição da enzima cruzaína e, também, em outras cisteíno-proteases através da ação do óxido nítrico liberado. Além disso, poderiam ser inibidores de tripanotiona redutase, como ocorre com outros nitrocompostos. A síntese dos compostos intermediários foi realizada com êxito, com exceção do composto NFSOH, o qual não foi possível ser isolado. A metodologia solvent-free mostrou-se como alternativa para a síntese do NF e análogos contendo semicarbazona. Utilizaram-se diferentes métodos (direto e indireto) e diversas variações nas condições reacionais para a síntese dos ésteres nitratos correspondentes. No entanto, não se obtiveram os pró-fármacos propostos, provavelmente devido à baixa reatividade dos nitro-heterocíclicos hidroximetilados. Em paralelo, efetuaram-se estudos de Modelagem Molecular para se avaliar a possível interação com o alvo molecular, a cruzaína. A análise dos Mapas de Potencial Eletrostático (MEP) sugeriu maior deficiência eletrônica nos compostos com tiossemicarbazona. Entretanto, estudos de docking mostraram possível preferência de ataque nucleofílico da Cys25 ao grupo éster nitrato em relação à carbonila/tiocarbonila, sugerindo inativação da cruzaína pela formação de S-nitrosotiol. / Chagas\' disease is an extremely neglected disease, whose etiologic agent is the protozoan Trypanosoma cruzi. Nowadays, 21 countries in Latin America have been considered endemic area, in which 75-90 million people are exposed to infection, 15-16 million are infected and more than 41 thousands new cases are registered each year. However, nifurtimox and benznidazol are the only drugs available in the market. Besides, their low efficiency in the chronic phase of disease, they cause several side effects and in Brazil only benznidazol is applied. This scarce therapeutic armamentarium shows the importance of seeking for more effective drugs against Chagas\' disease. For these reasons, this study aims the synthesis of compounds with dual activity against T. cruzi, using the prodrug design with the active bioisosters of nitro-heterocyclic, synthesized in our research group. The derivatives proposed are mutual prodrugs of hydroxymethylnitrofurazone (NFOH) and its bioisosters, promising with respect to cruzain inhibition, with NO-releasing group. Thus, they could act with a dual mechanism, in cruzain enzyme and also in other cysteine-proteases through the nitric oxide released action. Besides, they could be trypanothione reductase inhibitors, as stated to other nitro compounds. The synthesis of the intermediate compounds was carried out successfully, except for the NFSOH compound, which could not be isolated. The solvent-free methodology proved to be an alternative for synthesis of nitrofurazone and analogues containing semicarbazone. Different methods (direct and indirect) and several variations in reaction conditions were used for the synthesis of nitrate esters proposed. Nevertheless, the prodrugs were not obtained, probably due to the low reactivity of the hydroxymethyl nitro-heterocyclic employed. At the same time, molecular modeling studies to evaluate the possible interaction with the macromolecular target cruzain were performed. The analysis of electrostatic potential maps (MEP) suggests a greater electronic impairment in compounds containing thiosemicarbazone function. Docking studies, however, showed a possible preference to the nucleofilic attack of Cys25 in the nitrate ester relatively to the carbonyl/tiocarbonyl group, suggesting cruzain inactivation by S-nitrosotiol formation.

o óxido nítrico tem sido apontado como um importante fator de desenvolvimento neural, participando ativamente como sinalizador espacial durante o processo de refinamento sináptico. Avaliamos nesse estudo a participação do óxido nítrico durante esse processo em tectos ópticos de embriões de pintos (Gallus gallus). Para tal avaliamos a imunorreatividade dos neurônios para as proteínas que formam os receptores colinérgicos e glutamatérgicos em diferentes fases do desenvolvimento embrionário, com e sem o bloqueio farmacológico da enzima de síntese do óxido nítrico (NOS). Durante o desenvolvimento embrionário, as subunidades GluR2/3 dos receptores glutamatérgicos são as que aparecem mais precocemente, no 6°dia de desenvolvimento embrionário (E6), juntamente com os neurônios imunorreativos para NOS e somente a partir de E8 é possível identificar a arquitetura laminar típica do tecto óptico.O bloqueio farmacológico da NOS mostrou diferentes padrões de marcação dependendo do tempo de sobrevida do animal. Em animais eutanasiados 24 h após o bloqueio farmacológico observou-se uma alteração na organização das camadas e no padrão radial de organização dos neurônios imunorreativos. Esse dado sugere que haja um atraso no refinamento sináptico, que se reflete em desorganização das camadas do tecto e alterações morfológicas nos neurônios. / O óxido nítrico tem sido apontado como um importante fator de desenvolvimento neural, participando ativamente como sinalizador espacial durante o processo de refinamento sináptico. Avaliamos nesse estudo a participação do óxido nítrico durante esse processo em tectos ópticos de embriões de pintos (Gallus gallus). Para tal avaliamos a imunorreatividade dos neurônios para as proteínas que formam os receptores colinérgicos e glutamatérgicos em diferentes fases do desenvolvimento embrionário, com e sem o bloqueio farmacológico da enzima de síntese do óxido nítrico (NOS). Durante o desenvolvimento embrionário, as subunidades GluR2/3 dos receptores glutamatérgicos são as que aparecem mais precocemente, no 6°dia de desenvolvimento embrionário (E6), juntamente com os neurônios imunorreativos para NOS e somente a partir de E8 é possível identificar a arquitetura laminar típica do tecto óptico.O bloqueio farmacológico da NOS mostrou diferentes padrões de marcação dependendo do tempo de sobrevida do animal. Em animais eutanasiados 24 h após o bloqueio farmacológico observou-se uma alteração na organização das camadas e no padrão radial de organização dos neurônios imunorreativos. Esse dado sugere que haja um atraso no refinamento sináptico, que se reflete em desorganização das camadas do tecto e alteração morfológicas nos neurônios.

A Arginina (Arg) regula a secreção de GH e insulina, e é o único precursor biológico do NO. Previamente demonstramos que animais tratados cronicamente com Arg (35mg/dia) desenvolvem resistência à insulina (RI), e o presente estudo investigou as suas bases moleculares. A RI baseou-se na redução da atividade e/ou expressão do IRS 1/2 e Akt, e do conteúdo de GLUT4; sendo o GH crucial na gênese desses efeitos. Doses mais elevadas de Arg (70mg/dia/30 dias), a maior geração de NO e a melhora do fluxo sangüíneo reverteram este quadro. Experimentos com células musculares demonstraram que a Arg estimula o metabolismo de glicose e lipídios, via NO/c-GMP. Esses achados indicam que a Arg pode ser benéfica para o tratamento de distúrbios metabólicos, como obesidade e DM2; e que ao estimular a secreção de GH, em doses adequadas, seria eficaz na terapia de distúrbios da secreção deste hormônio. Todavia, estudos adicionais são necessários para investigar a melhor dose e os efeitos crônicos in vivo da Arg, uma vez que o GH em excesso apresenta um efeito diabetogênico importante. / Arginine (Arg) regulates the secretion of GH and insulin, and it is the main biological precursor of NO. We have previously shown that animals chronically-treated with Arg (35 mg/day) developed insulin resistance (IR), and this study investigated its molecular basis. The RI relies on the reduction of the activity and/or expression of IRS 1/2 and Akt, and of the GLUT4 content; and GH has a crucial role in the genesis of these effects. Higher doses of Arg (70 mg/dia/30 days), the increased NO generation and the improvement of the blood flow reversed the RI. Experiments with muscle cells showed that Arg stimulates glucose and lipids metabolism, via NO/c-GMP activation. These findings indicate that Arg may be beneficial for the treatment of metabolic disorders, such as obesity and T2DM, and by stimulating GH secretion, Arg can, in appropriate doses, be effective for the therapy of GH secretion disorders. However, further studies are needed to investigate the best dose and the chronic effects of Arg in vivo, since that GH in excess is potentially diabetogenic.

Objetivos: Avaliar a implicação da doença periodontal (DP) avançada, e da expressão da NOS e sP dos tecidos gengivais inflamados, na intensidade de dor e na qualidade de vida de pacientes com dor crônica crânio-facial. Casuística e Métodos: foram avaliados e tratados 20 pacientes com queixas de dores crônicas crânio-faciais e DP (Grupo de Estudo), comparativamente com 20 pacientes que tinham somente DP (Grupo Controle). Todos os pacientes receberam tratamento cirúrgico periodontal. A avaliação foi realizada pré e pós-tratamento periodontal (7, 30 e 180 dias). Instrumentos de avaliação: ficha clínica EDOF-HC, Escala Visual Analógica (EVA), questionário de dor McGill, Índices de Placa (IP), Sangramento (IS), Profundidade Clínica de Sondagem (PCS) e de Inserção (PCI); questionário de qualidade de vida WHOQOL-bref e análise imunohistoquímica para a expressão da óxido nítrico sintase (NOS) e da substância P do tecido gengival inflamado. A avaliação da dor foi realizada por investigador independente. Resultados: Os grupos apresentaram evolução clínica semelhante pelos parâmetros da DP: IP (p=0,0934), IS (p=0,8657), PCS (p=0,1728) e PCI (p=0,7406) nos três momentos avaliados. Houve redução da EVA no Grupo de Estudo aos 30 dias (p<0,05) e 180 dias (p<0,05), comparativamente ao pré-operatório. Aos 180 dias houve melhora significativa das queixas iniciais (p=0,005 para o Grupo de Estudo e p = 0,027 para o Grupo Controle), comparativamente ao pré-operatório, entretanto, houve diferença significativa entre os dois grupos nos três momentos da avaliação, seja para o percentual de melhora (p<0,001), seja para os descritores de melhora Edof-HC (p=0,004 aos 30 dias e p=0,001 aos 180 dias). No Grupo de Estudo, houve redução significativa dos descritores afetivos de dor (questionário de dor McGill) aos 180 dias (p = 0,014). Os escores de qualidade de vida do Grupo de Estudo foram inferiores aos do Grupo Controle nos domínios psicológico e físico (p<0,001 e p=0,007, respectivamente). As expressões da nNOS e da iNOS foram maiores nas gengivas inflamadas do Grupo de Estudo (p<0,001 e p= 0,003, respectivamente) e a expressão da sP foi semelhante nos dois grupos (p=0,363). Conclusões: Houve redução da intensidade da dor crônica crânio-facial dos pacientes que receberam tratamento para doença periodontal avançada. A expressão da substância P foi semelhante nos tecidos gengivais inflamados dos dois grupos, mas a expressão da nNOS e iNOS foi superior na gengiva inflamada dos pacientes com dor crônica crânio-facial. Pelos dados deste estudo a Doença Periodontal avançada pode ter implicação nas queixas de dor dos pacientes com dor crônica crânio-facial. / Aims: To assess the implications of advanced periodontal disease (PD), and the expression of NOS and sP of inflamed gingival tissue, in the intensity of pain and the quality of life in patients with chronic craniofacial pain. Casuistic and Methods: Were evaluated and treated 20 patients with complaints of chronic craniofacial pain and DP (Study Group), compared with 20 patients who had only DP (Control Group). All patients received surgical periodontal treatment. The evaluation was performed at pre-operative and post-operative periodontal treatment (7, 30 and 180 days). Tools for evaluation: clinical record EDOF-HC, Visual Analogic Scale (VAS), McGill Pain Questionnaire, Scores of Plaque (IP), Bleeding (IS), Clinical Probing Depth (CPD) and Insertion (CPI), the quality of life questionnaire WHOQOL-Bref and immunohistochemical analysis for the expression of nitric oxide synthase (NOS) and substance P from inflamed gingival tissue. The assessment of pain was conducted by independent researcher Results: The groups had similar clinical evolution by parameters of the PD: IP (p=0.0934), IS (p=0.8657), PCS (p=0.1728) and PCI (p=0.7406) in the three moments evaluated. There was reduction in the VAS of Study Group at 30 days (p<0.05) and 180 days (p<0.05), compared to preoperative. At 180 days there was significant improvement of the initial complaints (p=0.005 for the Study Group and p=0.027 for the Control Group), compared to preoperative, but there was significant difference between the two groups in the three moments of assessment, for the percentage of improvement (p<0.001), and either for the improvement descriptors Edof-HC (p=0.004 at 30 days and p=0.001 for 180 days). In Study Group, there was significant reduction of pain affective descriptors (McGill Pain Questionnaire) to 180 days (p=0.014). The scores of quality of life of the Study Group were lower than the Control Group in the psychological and physical (p<0.001 and p=0.007, respectively). The nNOS and iNOS expressions were higher in inflamed gingival Study Group (p<0.001 and p=0.003, respectively) and the expression of sP was similar in the two groups (p=0.363). Conclusions: There was reduction in the intensity of chronic craniofacial pain of patients receiving treatment for advanced periodontal disease. The expression of substance P was similar in inflamed gingival tissue of the two groups, but the expression of iNOS and nNOS was higher in inflamed gingival of patients with chronic craniofacial pain. The data of this study show that advanced periodontal disease can have involvement in complaints of pain in patients with chronic craniofacial pain.

Introdução: O sedentarismo e obesidade têm sido descritos como fatores de risco relevantes para o desenvolvimento de sintomas do trato urinário inferior (STUI). No presente estudo investigamos o papel da atividade física nas alterações vesicais funcionais e moleculares induzidas por dieta hiperlipídica em ratos. Material e método: Ratos machos Wistar com oito semanas de idade foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: 1. atividade física (AF) e dieta padrão (DP); 2. AF e dieta rica em gorduras (DHL); 3. Sedentários (SED) com DP; 4. SED e DHL. Os ratos dos Grupos 1 e 2 foram submetidos a um protocolo de treinamento de natação por 10 semanas. Ao final do protocolo, realizamos estudo funcional vesical (urodinâmico) nos ratos anestesiados, e extraímos o tecido vesical para estudo molecular da via de sinalização da insulina (IRS1/IRS2/PI3K/AKT/eNOS) através do método de reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Resultados: Após 10 semanas, os grupos 1 e 2 apresentaram respectivamente menor ganho de peso corporal quando comparados aos grupos 3 (213,89 vs 261,63 gramas, p=0,04) e 4 (209,84 vs 257,57 gramas, p=0,04), assim como menor peso da gordura epididimária quando comparados aos grupos 3 (14,06 vs 19,74 gramas, p=0,01) e 4 (15,26 vs 20,38, p=0,02). Na soma das intervenções (sedentarismo e dieta hiperlipidica), o grupo 4 apresentou maior nível de insulina sérica (6,05 vs 4,14 ng/ml, p=0,038) e índice HOMA-IR (1,95 vs 1,09, p=0,006) em comparação ao grupo 1, sugerindo padrão de resistencia à insulina. A análise urodinâmica, na comparação do grupo 4 vs grupo 1, demonstrou padrão de hiperatividade vesical naquele: maior numero de micções (13,6 vs 6,0, p=0,04), maior pressão pós miccional (8,06 vs 5,08 mmHg, p=0,04), menor capacidade (0,29 vs 0,91 ml, p=0,008) e complacência vesical (0,027 vs 0,091ml/mmHg, p=0,016). Quanto ao estudo molecular da via de sinalização da insulina no tecido vesical, o efeito da dieta hiperlipídica resultou em subexpressão de toda a via (IRS1, IRS2, PI3K, AKT e NOS3). Em contrapartida, o efeito da atividade física resultou em superexpressão da via, em especial quando comparamos ratos com ingesta de gordura (grupo 2 x 4), assim como na comparação dos grupos \"extremos\" (grupo 1 x 4). Conclusão: A exposição dos ratos a DHL resultou em subexpressão molecular da via de sinalização de insulina no tecido vesical, assim como a AF gerou superexpressão desta, em especial nos ratos expostos a DHL. A exposição dos animais a DHL em associação a hábitos sedentários resultou em obesidade, resistência à insulina e padrão sugestivo de hiperatividade vesical em comparação aos expostos a AF e DP / Introduction: Sedentary lifestyle and obesity have been described as relevant risk factors for the development of lower urinary tract symptoms. In the present study we investigate the role of physical activity in the functional and molecular bladder alterations resulting from obesity induced by hyperlipidic diet in rats. Material and methods: Wistar male rats at eight weeks of age were randomized into groups: 1. physical activity (AF) and standard diet (DP); 2. AF and high fat diet (DHL); 3. sedentary (SED) with DP; 4.SED and DHL. Group 1 and 2 rats were subjected to a 10-week swimming training protocol. Urodynamic study was performed and expression of genes in bladder tissue (IRS1 / IRS2 / PI3K / AKT / eNOS) was evaluated. Results: Results: Groups 1 and 2 presented lower body weight gain than groups 3 (213.89 vs 261.63 grams (g), p=0.04) and 4 (209.84 vs 257.57 g, p=0.04), respectively. Group 4 had higher insulin level (6.05±1.79 vs 4.14±1.14 ng/ml, p=0.038) and higher homeostasis model assessment of insulin resistance (HOMA-IR) index (1.95 vs 1.09, p=0.006) than group 1. Group 4 had greater number of micturitions (13.6 vs 6.0, p=0.04), higher post-void pressure (8.06 vs 5.08, p=0.04), lower capacity (0.29 vs 0.91 ml, p=0.008) and lower bladder compliance (0.027 vs 0.091 ml/mmHg, p=0.016) versus group 1. HFD resulted in underexpression throughout insulin signaling pathway. Physical activity resulted in overexpression of the pathway, especially in comparisons between the rats with fat intake (groups 2 and 4) and the extreme groups (groups 1 and 4). Conclusion: Exposure of rats to hyperlipidic diet in addition to a sedentary pattern resulted in obesity, insulin resistance, urodynamic pattern suggestive of bladder hyperactivity and molecular subexpression of the IRS2 / PI3K / AKT / eNOS pathway in comparison to rats exposed to physical activity and standard diet. Physical activity generated overexpression of this molecular pathway, especially in rats exposed to a hyperlipidic diet

O peptídeo natriurético tipo C (CNP) é descrito como agonista vasodilatador do músculo liso vascular de artérias e veias, podendo ser produzido e liberado do endotélio vascular frente a diversos estímulos. Este promove o relaxamento vascular através da interação com seu receptor associado à enzima guanilil ciclase particulada (GCp) de membrana, levando ao aumento dos níveis de GMPc ou pelo receptor NPR-C associado à inibição de enzima adenilil ciclase e ativação de enzima fosfolipase C e canais para K+, via proteína Gi. Esta vasodilatação é descrita envolver parcialmente a via NO-GCs-GMPc, estando relacionada com a mobilização intracelular de cálcio. O modelo de hipertensão 2R-1C está associada ao consumo de NO, no ambiente celular, via reação com espécies reativas de oxigênio (EROs), especialmente ânion superóxido (O2-), caracterizando um prejuízo na vasodilatação dependente do endotélio. Desta forma, considerando as alterações descritas no modelo de hipertensão renovascular 2R-1C quanto ao estresse oxidativo e a importância do CNP como agonista vasodilatador, a hipótese do presente trabalho foi de que na aorta torácica isolada de ratos hipertensos 2R-1C, o relaxamento vascular induzido pelo CNP estaria prejudicado devido o estresse oxidativo. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi de elucidar os mecanismos celulares envolvidos nas respostas vasculares induzidas pelo CNP. Células endoteliais isoladas de aorta de ratos 2R-1C apresentaram menor [NO]c comparadas as de 2R, sugerindo disfunção endotelial. A exposição das células endoteliais à agente sequestrador de O2- (Tiron) demonstrou a participação deste ânion em 2R-1C, mas não em 2R. CNP promoveu relaxamento de anéis de aorta de ratos 2R e 2R-1C, o qual foi mais pronunciado em preparações desprovidas de camada endotelial em 2R-1C. Hidroxicobalamina (sequestrador de NO0), mas não L-NAME (inibidor de NOS), causou redução da potência do CNP em 2R-1C. ODQ (inibidor de GCs) reduziu a potência em 2R E+, atenuando isoladamente o efeito máximo e o número de Hill em preparações E- de 2R-1C ao nível controle. Em presença do inibidor seletivo de GK (Rp-8-Br-PET-cGMPS) ocorreu atenuação da potência do CNP em todos os grupos experimentais, porém o efeito máximo do CNP somente foi reduzido daquelas preparações E-. A inibição da SERCA reduziu da potência do CNP em todos os grupos experimentais, porém o efeito máximo em 2R-1C foi reduzido ao nível controle. Sobre pré-contração induzida pela EC50 de solução de cloreto de potássio (KCl) ocorreu atenuação de potência e efeito máximo do CNP em todos os grupos experimentais. Contudo, com a utilização de inibidores seletivos de canais para K+, apenas observou-se a participação de BKCa e SKCa em 2R e 2R-1C e de KV em 2R-1C no relaxamento induzido pelo CNP. A inibição de NAD(P)H-oxidase (Apocinina) foi capaz de normalizar o efeito máximo em preparações E- de 2R-1C. A inibição de junções gap mioendoteliais (ácido 18--glicirretínico) promoveu redução da potência do CNP em 2R E+. Por fim, a inibição não-seletiva de COX (Indometacina) apenas reduziu a potência do CNP em preparações E+ de 2R. A partir da análise do conjunto de dados obtidos em estudos realizados em células endoteliais isoladas e funcionais pode-se concluir a participação do sistema de peptídeos natriuréticos sobre a modulação do tônus vascular em preparações isoladas de ratos 2R e 2R-1C. Assim, o relaxamento vascular induzido pelo CNP não se encontra prejudicado em aorta torácica isolada de 2R-1C. O endotélio vascular modula negativamente o relaxamento induzido pelo CNP em aorta de ratos 2R e 2R-1C. Embora haja disfunção endotelial em 2R-1C, esta não é suficiente para alterar a mobilização de cálcio induzida pelo CNP. O relaxamento induzido pelo peptídeo envolve a participação de metabólitos de NOS e de espécie NO0, assim como as enzimas NAD(P)H oxidase, GCs, GK e SERCA parecem estar relacionadas com o efeito vasodilatador induzido pelo CNP mais pronunciado em 2R-1C. Assim também, a sinalização desencadeada pelo CNP leva à ativação de canais para K+ em ambos os grupos, envolvendo a mediação através de junções gap mioendoteliais em 2R, mas não em 2R-1C. / C-type natriuretic peptide (CNP) acts as a vasodilator agonist that relaxes vascular smooth muscle cells from arteries and veins, and it can be produced and released from the vascular endothelium by several stimuli. This peptide induces vascular relaxation through interaction with its receptor which is associated with particulate guanylyl cylase (pGC), leading to the increase in cGMP levels or it can also can interacts with NPR-C receptor associated with the inhibition of adenylyl cyclase and the activation of phospholipase C and K+ channels, via Gi protein. This vasodilation is related to partially involves NO-sGC-cGMP and intracellular calcium mobilization. 2K-1C hypertension is related to NO consumption, in the cellular environment through reaction with reactive oxygen species (ROS), mainly superoxide anion (O2-), characterizing impaired endothelium-dependent relaxation. So, in view of the changes in renovascular hypertension 2K-1C through oxidative stress and the importance of CNP like a vasodilator agonist, the hypothesis of the present work was on thoracic aorta isolated from renal hypertensive rats (2K-1C) the vascular relaxation induced by CNP would be impaired due to oxidative stress. In this context, the study aimed to demonstrate the cellular mechanisms involved on vascular responses induced by CNP. Endothelial cells isolated from 2K-1C rat aortas showed decreased [NO]c compared to 2K, suggesting endothelial dysfunction. In the presence of O2- scavenger (Tiron) there was the participation of this anion on endothelial cells from 2K-1C, but not on 2K ones. CNP caused relaxation of aortic rings from 2K and 2K-1C rats which was enhanced on denuded rings from 2K-1C. Hydroxicobalamine (NO0 scavenger) but not L-NAME (NOS inhibitor) decreased the potency of CNP on intact aortic rings from 2K-1C. ODQ (sGC inhibitor) decreased potency in intact vascular rings from 2K, just reducing maximum effect and Hill number on denuded aortic rings from 2K-1C to a control level. In the presence of selective GK inhibitor (Rp-8-Br-PET-cGMPS) occurred an attenuation of CNP potency in all experimental groups, but the maximum effect of CNP was reduced only in aortic rings without endothelial layer. SERCA inhibition decreased CNP potency of all experimental groups, but maximum effect was reduced on 2K-1C to control levels. Under pre-contraction elicited by EC50 of potassium chloride (KCl) solution there was a decreased CNP potency and maximum effect in all experimental groups. However, the presence of selective inhibitor of K+ channels showed the contribution of BKCa and SKCa on 2K and 2K-1C and KV on 2K-1C in the CNP induced relaxation. NAD(P)H-oxidase inhibition (Apocinin) was able to normalize maximum effect of CNP on denuded vessels from 2K-1C. Myoendothelial gap junctions inhibition (18--glicirrhetinic acid) reduced CNP potency on intact aortic rings from 2K. Finally, the non-selective COX inhibition (Indometacin) induced a lower CNP potency on intact aortic rings from 2K. The analysis of the data obtained from isolated endothelial cells and functional studies allow us to conclude the participation of natriuretic peptide system in the modulation of vascular tone on aortic rings isolated from 2K and 2K-1C rats. Thus, the vascular relaxation induced by CNP is not impaired on aortic rings isolated from 2K-1C. Vascular endothelium negatively modulates the relaxation induced by CNP on 2K and 2K-1C rat aortas. Although 2K-1C exhibits endothelial dysfunction, it is not sufficient to impair calcium mobilization induced by CNP. CNP induced relaxation involves NOS metabolites and NO0 specie, as well as the activity of NAD(P)H oxidase, sGC, GK and SERCA is related to the enhanced vasodilator effect induced by CNP on 2K-1C. Similarly, CNP pathway leads to K+ channels activation in both experimental groups and the signal mediation through myoendothelial gap junctions on 2K aortas, but not on 2K-1C ones.