El modelo experimental de endocarditis en conejos reproduce de manera muy aproximada la fisiopatología de la enfermedad en los humanos. Los estudios de eficacia terapéutica que utilizan este modelo plantean el problema de las diferencias de los perfiles farmacocinéticos en el suero de los humanos y de los conejos de los antibióticos que se estudian. Para soslayar este problema en el presente trabajo se recopilan los resultados de estudios de eficacia terapéutica en los que se ha empleado un modelo matemático que permite compensar la mayor velocidad de eliminación de fármacos en los animales y simular los perfiles farmacocinéticos de los antibióticos que se obtienen en el suero de los humanos y reproducirlos en conejos con endocarditis, mediante la perfusión con bombas de infusión controladas por ordenador. Se ha utilizado el modelo de endocarditis en conejos y la administración de antibióticos simulando los perfiles farmacocinéticos en humanos para evaluar tratamientos alternativos o diferentes pautas de administración en la endocarditis experimental causada por cocos grampositivos y se presentan cuatro estudios. En el primero, la evaluación de la eficacia de la combinación de ampicilina con ceftriaxona, administradas simulando la farmacocinética de ambos antibióticos en los humanos, en la endocarditis experimental por Enterococcus faecalis con resistencia de alto nivel a los aminoglucósidos mostró que dicha combinación es efectiva y reduce significativamente la carga bacteriana presente en las vegetaciones en comparación con los animales que recibieron ampicilina sola. El segundo estudio mostró que la combinación de teicoplanina y gentamicina administradas en una sola dosis diaria y con perfiles farmacocinéticos humanos tenía una eficacia similar al tratamiento convencional, ampicilina más gentamicina, en la endocarditis experimental por E. faecalis. En el tercer estudio se demostró que para el tratamiento de la endocarditis experimental por Staphylococcus aureus la combinación de ceftriaxona con gentamicina administradas una vez al día era igual de eficaz que el tratamiento convencional de cloxacilina y gentamicina. El último estudio mostraba la eficacia de la combinación de ampicilina y ceftriaxona en el tratamiento de la endocarditis experimental por E. faecalis sin resistencia a aminoglucósidos. / The experimental model of endocarditis in rabbits reproduces in an approximate way the fisiopathology of the disease in the humans. The studies of therapeutic efficacy that use this model have the problem of the differences on the pharmacokinetic profiles of the antibiotics in the human serum and the rabbits serum. In order to avoid this problem in the efficacy studies presented herein a mathematical model has been used that allows to compensate the greater speed of drug elimination in the animals and to simulate the pharmacokinetic profiles of the antibiotics that are obtained in the serum of the humans and to reproduce them in rabbits with endocarditis, by using controlled computer infusion pumps. Thus, the model of endocarditis in rabbits along the antibiotic administration simulating the pharmacokinetic profiles in humans has been used to evaluate alternative treatments or different strategies of administration in the experimental endocarditis caused by grampositive cocci in four different studies.In the first study was evaluated the efficacy of the combination of ampicillin with ceftriaxone, both antibiotics administered mimicking the pharmacokinetic profiles in human serum, in the experimental endocarditis by Enterococcus faecalis with high level resistance to aminoglycosides. It showed that this combination is effective and significantly reduces the bacterial load present in the vegetations compared with that of the animals that received only ampicillin. The second study showed that the combination teicoplanin and gentamicin, both administered in a daily dose and reproducing the human pharmacokinetic profiles had a similar efficacy that the recommended treatment, ampicillin plus gentamicin, in the treatment of experimental endocarditis due to E. faecalis. The third study included in this work showed that the combination of ceftriaxone plus gentamicin both administered once-a-day in the experimental endocarditis due to Staphylococcus aureus had a similar efficacy in reducing the bacterial load of the vegetations than the standard treatment of cloxacillin and gentamicin. The last study showed the effectiveness of the combination of ampicillin and ceftriaxone in the treatment of the experimental endocarditis due to E. faecalis without high level resistance to aminoglycosides.

Durante su desarrollo los linfocitos tienen una serie de elecciones secuenciales para definir su identidad. Primero, la selección entre el linaje T (LT) o B (LB), luego la definición de su TCR como αβ o γδ posteriormente definir su identidad con los correceptores CD4 vs CD8 y, en periferia después de la activación del LT naive definir los linajes Th1, Th2, células T reguladores (Treg) o Th17. Algunos estadios de diferenciación en las células T son complejos de identificar y cuantificar. Especialmente, en sangre periférica, un ejemplo claro son las Treg o las células emigrantes tímicas recientes (RTEs). El control de la diferenciación y desarrollo de los LT se inician sin cambios en la secuencia del DNA pero con una constante activación y represión de transcritos de muchos genes. La regulación epigenética tiene un papel clave en la dinámica del genoma de los LT. Los cambios epigenéticos mantienen la estructura de la cromatina y regulan la transcripción de genes durante su desarrollo y diferenciación, principalmente por la metilación del DNA. La metilación se da en dinucleótidos CG. Sin embargo, hay unas regiones ricas en estos dinucleótidos conocidas como islas CpG (CGI), que no se metilan comúnmente y que se ubican en regiones promotoras, intergénicas o intragénicas. La metilación diferencial de estas regiones en muchos genes establecer perfiles de metilación de cada estadio de diferenciación celular y podrían ser marcadores de estadios celulares. Nuestra hipótesis es que la metilación del DNA, juega un papel clave en la diferenciación e identidad celular en humanos y que los perfiles de metilación del DNA de algunos genes, expresados diferencialmente en los estadios de maduración de los LT, como los genes que codifican para CD4 y CD8 pueden ser un marcador celular especialmente para el estadio de RTEs. Los objetivos fueron: i) analizar los patrones de metilación de los genes CD4, CD8A y CD8B durante el desarrollo de LT tímicos y periféricos; ii) diseñar una prueba molecular sensible y específica para identificar gradientes de metilación en poblaciones de LT y asociarlas con su grado de diferenciación. Estudiamos una CGI en el gen CD4 y tres CGIs en el gen CD8A en diferentes poblaciones de LT separadas por FACS sorting, de timo, sangre de cordón y sangre periférica de adultos sanos. Extrajimos el DNA, el cual se trato con bisulfito de sodio y luego se secuenció cada CGI. Nuestros resultados muestran que las CGI del gen CD4 no se metila diferencialmente en LT. La CGI-2 del gen CD8A no se metila en ningún caso, la CGI-3 presenta el mayor grado de metilación, pero sin diferencias entre linajes ni poblaciones y en la CGI-1 del gen CD8A identificamos una región diferencialmente metilada (DMR). Sobre esta región diseñamos por primera vez una prueba de PCR cuantitativa con sondas FRET, que permiten discriminar cambios en las temperaturas de melt cuando las CpG están o no metiladas en cada población de LT. Usando esta prueba pudimos analizar la DMR y pudimos discriminar claramente entre LT CD4 y CD8. Además, permite identificar en sangre periférica de adultos entre RTE CD8 y LT CD8 naive. También observamos que los LT CD4 incrementan la metilación de esta región a medida que van madurando En conclusión encontramos una región en el gen CD8A, ubicada en el extremo 5’ de la CGI-1 que puede ser un marcador epigenético para diferenciar LT CD4 y CD8 y algunos estadios de desarrollo celular. Esta región puede estar involucrada en mecanismos de regulación de la expresión del gen CD8 y con la identidad celular. / During development the lymphocytes have many choices by taking in order to define their identity. The first choice is about T (LT) or B (LB) lineage. Then the lymphocytes select their TCR αβ or γδ. Later they define their identity with CD4 vs CD8 co-receptors. Finally, in periphery they define among Th1, Th2, Th17, or regulatory T cells (Treg) lineages. Some stages of T cells differentiation are complex to identify such as Treg or Recent Thymic Emigrants (RTEs). The T cell differentiation and development are control by activation and repression a lot of specific genes. The Epigenetica and specifically the DNA methylation has a pivotal role in genome dynamics. In the human genome DNA methylation plays an important role in establishing and maintaining chromatin structures and in regulating gene transcription during development and differentiation. DNA methylation predominantly occurs at cytosine guanine dinucleotide (CpG). However, some areas are CpG rich and they are not always methylated. These regions are calling CpG islands (CGIs) and are present in many promoter genes or intragenic places. This mechanism has an important role in T-cell and lineage commitment and differentiation. The CD4 and CD8 co-receptor is coded by the CD4, and CD8A, and CD8B genes, and is the main lineage differentiation protein for T cells. CD4 gene has a CGIs upstream on the promoter and CD8A gene has three well-defined CGIs amenable to perform quantitative DNA methylation analysis. The aim of the present work is to analyze the methylation pattern of CD4 and CD8A genes and assess its possible use for staging the maturation state of CD4 and CD8 T lymphocytes. We studied three CpG islands located within promoter region of CD8A gene. The methylation analysis was performed in purified T cell populations from human thymus, cord blood and adult peripheral blood. T lymphocytes were sorted by FACS and included: i) single positive CD4 and CD8 T cells from thymus and ii) recent thymic emigrants (RTEs), naïve and memory T cells from cord blood and from adult blood. Genomic DNA from each population was treated with bisulfite and amplified by Nested-PCR with specific primers for each CpG island. The PCR products were cloned and sequenced for quantitative methylation analysis. Initial results showed that CpG Island 2 is not methylated in any of the T cell populations studied, while the CpG islands 1 and 3 have a variable degree of methylation. We identified a specific region of CD8A CpG island 1 that is differentially methylated in T cell populations. This region is clearly more methylated in CD4 T cells than in CD8 T cells. Moreover, within CD8 T cell populations there were differences between naïve and memory cells. It was also feasible to design a protocol for the rapid detection of methylation in this region. This protocol is based on the ability of FRET probes to discriminate nucleotide changes in a melting step by qPCR. Using it we were able to analyze 4 CpG positions and we determined the exact number of methylated positions (0-4) in each sample. In conclusion, we have identified a specific region in CD8A gene that is differentially methylated in T cell populations, which could be an epigenetic marker for T cell differentiation between CD4 and CD8 lymphocytes. The methylation patterns of this region are probably part of the maturation mechanisms that occur in the transition from naïve to memory cells among CD8 T lymphocytes.

En el nostre grup, la Unitat de Tuberculosi Experimental, es va desenvolupar una vacuna terapèutica contra la ITBL (infecció tuberculosa latent) humana, anomenada RUTI. L’objectiu d’aquest treball va ser l’estudi del mecanisme d’acció de la RUTI®, l’avaluació de l’eficàcia terapèutica d’aquesta contra la ITBL, així com desenvolupar un model experimental que ens permetés demostrar la Hipòtesi Dinàmica de la ITBL i avaluar l’eficàcia i toxicitat de la vacuna. Per a l’assoliment d’aquest objectiu, en aquest projecte de Tesi Doctoral es va treballar amb diferents models experimentals d’ITBL com ratolins, cabres i porcs. Havent demostrat, en treballs anteriors, la seva eficàcia en models experimentals de volum petit com ratolins i cobais, en aquest treball es va treballar amb ratolins per tal d’entendre millor els mecanismes d’acció de la vacuna, en aquest model experimental d’ITBL. A més, es va plantejar provar la vacuna en models grans fisiològicament més semblants als humans. Així doncs, es va realitzar un estudi de camp amb cabres latentment infectades amb l’objectiu d’avaluar l’eficàcia i bioseguretat de la vacunació amb RUTI®. També es va treballar en el desenvolupament d’un model experimental d’ITBL en minipigs que ens ajudaria a estudiar la histopatologia de la ITBL humana i serviria d’eina d’estudi de diferents estratègies terapèutiques contra aquesta. En aquest model més humanitzat, es va assajar l’eficàcia i bioseguretat de la vacunació amb RUTI®, així com també es va estudiar la fisiologia bàsica de la ITBL. / A therapeutic vaccine against human LTBI (latent tuberculous infection) was developed in our research group called ”Unitat de Tuberculosi Experimentall”. The name of this therapeutic vaccine was RUTI ®. The aim of this work was to study the mechanism of action of RUTI® as well as the evaluation of its therapeutic effectiveness against LTBI. Another objective was to develop a new experimental model of LTBI that would allow us to prove the Dynamic Hypothesis of LTBI and assess the effectiveness and toxicity of the vaccine in it. To achieve these objectives, we did some experiments with different experimental models of LTBI: mice, goats and pigs. Its effectiveness in small volume experimental models as mice and guinea pigs had been demonstrated in previous studies but in this work we did some experiments in mice in order to better understand the mechanisms of action of the vaccine, in this experimental model. In addition, vaccine testing was carried out in large models physiologically more similar to humans. Thus, a field study was carried out in LTBI goats in order to evaluate the efficacy and biosecurity of the RUTI® vaccination. We also worked on the development of an experimental model in minipigs that would allow us to study the histopathology of human LTBI and would be helpful to test some therapeutic strategies against LTBI in the future. In this humanized experimental model, the efficacy and and biosecurity of the RUTI ® vaccination was evaluated, as well as the physiology of the LTBI.

Existe poca literatura científica publicada sobre cuestiones de eficiencia en el ámbito de la gestión hospitalaria en nuestro entorno. Hay antecedentes de eficiencia y efectividad para unos pocos procesos clínicos específicos, pero en pocos casos se habla del impacto de la gestión de procesos complejos a nivel hospitalario. El propósito de este estudio es investigar, analizar e interpretar los resultados de una serie de intervenciones aplicadas en el área de gestión de pacientes de hospitalización de enfermedades agudas con el objetivo de incrementar la productividad y la eficiencia de la actividad asistencial. En concreto, esta tesis propone crear Unidades de recepción quirúrgica que faciliten el ingreso en el mismo día de la intervención quirúrgica, segmentación de la demanda de pacientes programados mediante la creación de Unidades de corta estancia quirúrgica, estandarizar la gestión de los procesos de ingreso y alta, y una herramienta que permita planificar la demanda de ingresos programados para que ésta se ajuste a la capacidad disponible en el hospital. Todo ello requiere de un sistema de gestión de pacientes con una visión global del hospital y conlleva que esta gestión se realice de forma centralizada en ciertos aspectos. Según los resultados encontrados, la puesta en marcha de las unidades de recepción y corta estancia quirúrgicas potenció un incremento en el porcentaje de pacientes que ingresaban en el mismo día de la intervención, al igual que se incrementó el porcentaje de pacientes que tenían el alta planificada. Estas unidades fueron de gran utilidad para la estandarización de los procesos de ingreso y alta del hospital y, a la vez, se consiguió reducir la estancia media prequirúrgica. La disminución de ingresos programados la tarde antes de la cirugía sin ningún criterio clínico liberó camas para los pacientes que ingresaban a través del servicio de urgencias. Ello conllevó una disminución de pacientes ingresados pendientes de cama en urgencias, facilitando la liberación de puntos de atención para visitar nuevas consultas urgentes. A la vez, estas unidades de recepción y corta estancia quirúrgicas permitían su cierre durante el fin de semana, generando un ahorro en las partidas de personal de enfermería del hospital. En esta misma línea, se segmentó la demanda de cama de hospitalización para el paciente programado, con el objetivo de acumular el mayor número de ingresos programados en unidades de hospitalización polivalentes para determinadas especialidades médicas. Estas unidades absorbían una parte importante de los ingresos programados y evitaba las cancelaciones de última hora por falta de cama, con la consecuente pérdida del recurso quirúrgico. También, esta segmentación de la demanda ofrecía la posibilidad de planificar qué tipo de ingresos podía absorber el hospital, de tal forma que a través del comité de quirófanos se condicionaban las sesiones quirúrgicas a la modalidad de paciente. Así, se ajustaba la demanda a la capacidad disponible y se evitaban también las cancelaciones de las cirugías en el último momento. Globalmente, los resultados encontrados han evidenciado la posibilidad de tener una gestión de pacientes de hospitalización más flexible, ágil y eficiente, sin alterar la calidad y la seguridad clínicas. En esta tesis se han planteado dos tipos de intervenciones, algunas suponen aspectos de mejora continua de procesos previos y otras corresponden a procesos disruptivos, de cambio total del paradigma previo del hospital. En ambos casos el liderazgo del equipo directivo es fundamental, especialmente en aspectos de gestión del cambio entre los diferentes estamentos profesionales para lograr ponerlos en marcha sin generar conflicto de intereses ni disfunciones en las propias intervenciones que mermen su objetivo principal: mejorar la productividad y la eficiencia. / There is little scientific literature published about efficiency issues in the hospital management field in our environment. There is background of efficiency and effectiveness for a few specific clinical processes, but few are talking about the impact of complex processes management in hospitals. The purpose of this study is to investigate, analyse and interpret the results of a number of interventions applied in the area of inpatient management of acute diseases area in order to increase productivity and efficiency of the health care activity. Specifically, this thesis proposes to create surgical reception units to facilitate the hospitalization on the same day of the surgery, demand segmentation of the scheduled patients by creating short stay surgical units, standardize the management of admissions and discharges processes, and a tool to plan scheduled inpatients demand in order to adjust it to the available capacity in the hospital. All this requires a patient management system with an overview of the hospital and this means that it has to be centrally managed in certain aspects. According to the results found, the implementation of reception and short surgical stay units potentiated an increase in the percentage of patients admitted on the same day of the surgery, as well of patients who had a scheduled discharge. These units were useful to standardize the hospital processes of admission and discharge and, in turn, the average of presurgical stay was reduced. The decrease in the hospitalizations scheduled in the evening before the surgery without any clinical judgment liberated beds for patients admitted through the emergency department. This carried a reduction of inpatients pending of bed in the emergency room, facilitating the liberation of attention points for visit new emergency consultations. In turn, these reception and short surgical stay units allowed its closure during the weekend, generating savings in nurse hospital staff. In this regard, the demand of hospitalization beds for the scheduled patient was segmented, with the aim to accumulate the highest number of scheduled hospitalizations in polyvalent inpatient units for certain medical specialties. These units absorbed an important part of the scheduled hospitalizations and avoided last minute cancellations due to lack of bed, with the consequent loss of surgical resource. Also, this demand segmentation offered the possibility to plan what type of income could absorb the hospital, so through the surgical room committee the surgical sessions were conditioned according the patient type. So, demand was fit to available capacity and last minute cancellations of surgeries were also avoided. Overall the results found show the possibility to have a patient hospitalization management more flexible, agile and efficient, without altering the quality and clinical safety. In this thesis we have proposed two types of interventions, some involve continuous improvement aspects of the previous processes and others are related to disruptive processes, of total change of the previous hospital paradigm. In both cases the management team leadership is essential, especially in aspects of management change between the different professional groups to get them started without generating a conflict of interests or dysfunctions in the interventions that reduce its main aim: the improvement of productivity and efficiency.

El óxido nítrico (ON) es una molécula endógena, de señalización intercelular y que se forma a partir del aminoácido L-arginina, a través de la enzima ON-sintasa (ONS). Está involucrado en un amplio espectro de procesos fisiopatológicos, dentro de los cuales cabe destacar los que afectan la vía respiratoria y los que implican fenómenos infecciosos. Los nitritos y nitratos (ONx) en sangre y orina son sus metabolitos estables y se utilizan como marcadores de la cuantía de su síntesis endógenaEl objetivo del estudio fue determinar el óxido nítrico expirado (ON exp) en los tres primeros días de vida del recién nacido en relación a: las horas de vida, edad gestacional, tipo de parto y riesgo de infección perinatal. Nuestra hipótesis fue que el ON exp aumentaría en recién nacidos con alto riesgo de infección perinatal. El gas expirado fue recogido utilizando una máscara facial y la concentración de ON determinada mediante quimioluminiscencia. Para la validación del sistema de recogida se realizaron diferentes experimentos: Limpieza del aire inspirado por el neonatos para evitar la contaminación con el ON ambiental; confirmación de la estanqueidad del sistema de recogida; descartar la interacción del ON con el material de recogida; limpieza del ON ambiental del sistema de recogida antes de la aplicación al recién nacido; estabilidad de las concentraciones de ON y ON2 con el tiempo; reproducibilidad intrasujeto; influencia del llanto y la sedación; El ON exp se recogió en 166 recién nacidos: 108 sanos (63 a término y 45 pretérmino). Treinta fueron neonatos con bajo riesgo de infección perinatal, y 28 con alto riesgo de infección perinatal (tratada con antibióticos pero que no tuvieron hemocultivo positivo). El ON exp total no correlacionó con la edad gestacional, el peso de nacimiento el tipo de parto ni los nitratos en sangre, si que existió relación con las horas de vida. El ONexp en el subgrupo de menos de 36 horas de vida (mediana, rango intercuartil) fue mayor en los recién nacidos con alto riesgo de infección perinatal (n= 8; 5.33 (4.5-7.2) nL/min*Kg) que en los recién nacidos sanos (n= 59; 4.13 (3.5-4.7) nL/min*Kg) o los de bajo riesgo de infección perinatal (n= 18; 3.99 (3.4-4.7) nL/min*Kg). En el subgrupo de 37 a 72 horas de vida también existieron diferencias entre los recién nacidos sanos (n= 49; 4.683 (4.1-5.3) nL/min*Kg) y los bajo riesgo de infección perinatal (n= 12; 4.55 (3.9-5.2) nL/min*Kg) por un lado y los de alto riesgo de infección perinatal por otra parte (n= 20; 9.69 (7.6-11.1) nL/min*Kg). Por lo tanto, los recién nacidos sanos, los de bajo riesgo de infección perinatal y los de alto riesgo, tienen diferencias significativas, respecto a las cifras de ONe en ppm (P= 0.026) como respecto a las cifras de ONet (p= 0.037) tanto si se examinan antes de las 36 horas de vida como después. El análisis univariado de la varianza de las cifras de ONet en relación a dos factores (nivel de riesgo de infección y horas de vida) y tres covariables (peso al nacimiento, edad gestacional y ON ambiental) mostraron que el modelo era adecuado (corrección R2= 0.530, p<0.001) y que el único factor con significación fue el nivel de riesgo de infección (sano, bajo riesgo, alto riesgo; p < 0.001). En relación a los nitritos y nitratos en sangre, no existieron diferencias significativas en relación a la edad gestacional, tipo de parto, horas de vida y riesgo de infección, ni correlación con el ON expirado. Tampoco se encontraron diferencias para dichas variables en los nitritos y nitratos en orina, ni los nitritos y nitratos/creatinina en orina.

La incidència de reaccions al·lèrgiques espontànies en el gos, com per exemple la dermatitis atòpica, sembla anar en augment. Malgrat que la gestió d’aquest tipus de malalties combina diverses estratègies depenent de l’etiologia particular de cada una, l’aproximació terapèutica més estesa és l’ús de glucocorticoides, que pot conduir a una gran varietat d’efectes adversos, especialment en tractaments crònics. Per tant, és important el desenvolupament de noves teràpies pel control eficaç de processos al·lèrgics i inflamatoris associats amb un gran número de malalties cutànies en el gos. En aquest sentit, estudis recents han mostrat l’existència de nous mediadors endògens lipídics (endocannabinodes) amb propietats antiinflamatòries i analgèsiques, com per exemple la palmitoiletanolamida (PEA). La PEA i el seu anàleg sintètic adelmidrol pertanyen a un grup d’amides d’àcids grassos anomenats aliamides, que són capaces d’actuar a través de la regulació negativa de la degranulació dels mastòcits (MCs). Malgrat que és ben coneguda la seva eficàcia farmacològica en malalties inflamatòries de la pell, el mecanisme d’acció d’aquesta família de compostos encara no estat del tot clar. Per entendre millor els efectes cel·lulars de les aliamides en els gossos, es van incubar mastòcits canins recent aïllats de biòpsies de pell amb sèrum ric en IgE i es van estimular amb anti-IgE canina. L’alliberació d’histamina, prostaglandina D2 (PGD2) i factor de necrosi tumoral alfa (TNFα) es va mesurar en presència i absència de concentracions creixents de PEA. Els resultats van mostrar una inhibició significativa de l’alliberació d’histamina, PGD2 i TNFα en presència de PEA, mostrant la capacitat d’aquesta aliamida per regular negativament l’activació dels MCs cutanis canins. Un cop observats els efectes de la PEA sobre els MCs, l’objectiu va ser la seva eficàcia sobre la reacció inflamatòria al·lèrgica cutània induïda en gossos hipersensibles a Ascaris suum. Per això es van induir la formació de pàpules a la pell dels gossos a través d’injeccions intradèrmiques d'extracte d'Ascaris, substància P i anti-IgE canina, abans i després de l’administració oral d’una única dosi de PEA de 3, 10 i 30 mg/kg. Els resultats van mostrar una reducció significativa en les àrees de la pàpules induïdes tant per antigen com per anti-IgE canina després de l’administració de PEA per les dues dosis més altes. Finalment, es va avaluar l'eficàcia del tractament tòpic amb adelmidrol (2%) durant 8 dies consecutius en les respostes inflamatòries primerenques i tardanes induïdes en gossos hipersensibles a Ascaris. Per això, es van induir la formació de pàpules a través de repetides injeccions intradèrmiques d'extracte d'antigen i es van obtenir dues biòpsies dels punts d’injecció per cada gos (tractament amb adelmidrol i tractament amb vehicle). Els resultats van mostrar una reducció significativa en les àrees de les pàpules induïdes per antigen al quart i setè dia de tractament amb adelmidrol, mentre que no es va observar cap efecte amb el tractament de vehicle. A més, es va avaluar el reclutament cel·lular de les biòpsies obtingudes després de 8 dies de tractament amb adelmdrol i vehicle. Els resultats van revelar una reducció significativa del número de mastòcits amb el tractament amb adelmidrol en comparació amb el tractament amb vehicle. Per tant, els nostres resultats van mostrar que els efectes antiinflamatoris de la PEA i adelmidrol observats en els gossos poden ser degut, almenys en part, a la seva capacitat per inhibir l'alliberament dels mediadors mastocitaris preformats i de nova síntesi, i reduir el nombre de MCs. En conclusió, la PEA i adelmidrol podrien constituir una nova estratègia terapèutica per al tractament de malalties al·lèrgiques inflamatòries de la pell en els animals de companyia. / The incidence of spontaneous allergic reactions in dogs, e.g. atopic dermatitis, appears to be increasing. Although management of this kind of diseases combines different interventions depending on the particular aetiology, the most widespread therapeutic approach still relies on glucocorticoids, which can lead to a variety of adverse effects, especially with chronic treatments. Therefore, it is important to develop new effective therapies for controlling allergic and inflammatory processes associated with a number of skin diseases in the dog. In this sense, recent studies have shown the existence of new endogenous lipid mediators (endocannabinoids) with anti-inflammatory and analgesic properties, e.g. palmitoylethanolamide (PEA). PEA and its synthetic analogue adelmidrol belong to a group of fatty acid amides called aliamides which are able to act through the downregulation of mast cell (MC) degranulation. Although its pharmacological efficacy is well known in skin inflammatory diseases, the mechanism of action of this family of compounds is still unclear. To better understand the cellular effects of aliamides in dogs, canine mast cells freshly isolated from skin biopsies were incubated with IgE-rich serum and were challenged with anti-canine IgE. Histamine, prostaglandin D2 (PGD2) and tumour necrosis factor-alpha (TNFα) release was measured in the presence and absence of increasing concentrations of PEA. The results showed a significant inhibition of histamine, PGD2 and TNFα release in the presence of PEA, showing the ability of this aliamide to down-modulate skin MC activation. Once observed PEA effects in canine MCs, the objective was to evaluate its efficacy on the cutaneous allergic inflammatory reaction induced in hypersensitive Ascaris suum dogs. Therefore, the formation of wheals was induced in dogs skin by intradermal injections of Ascaris extract, substance P and anti-canine IgE, before and after a single oral administration of PEA at doses of 3, 10 and 30 mg/kg. The results showed a significant reduction in wheal area induced by both antigen and anti-canine IgE challenge after PEA administration at two higher doses. Finally, the efficacy of topical adelmidrol treatment during 8 consecutive days was evaluated on induced early and late inflammatory responses in Ascaris hypersensitive dogs. Therefore, the formation of wheals was performed by repeated intradermal injections of antigen extract and two biopsies per dog were obtained from injection points (adelmidrol-treatment and vehicle-treatment). The results showed a significant reduction in the antigen-induced wheal areas after 4 and 7 days of adelmidrol treatment, whereas no effects were observed with vehicle treatment. Moreover, the cellular recruitment were analysed in biopsies obtained after 8 consecutive days of topical adelmidrol or vehicle treatment. The results revealed a significant decrease of mast cell number with adelmidrol treatment in comparison with vehicle treatment. Therefore, our findings showed that the anti-inflammatory effects of PEA and adelmidrol observed in dogs could be due, at least in part, to its ability to inhibit the release of both preformed and newly synthesised MCs mediators and to reduce the MCs cell numbers. In conclusion, PEA and adelmidrol might constitute a new therapeutic strategy for the treatment of allergic inflammatory skin diseases in companion animals.

Tesi realitzada al Laboratori de Recerca Translacional de l’Institut Català d’Oncologia – IDIBELL. / La hiperactividad del EGFR (epidermal growth factor receptor) confiere mal pronóstico. El EGFR se encuentra sobreexpresado en distintos tipos de tumores, entre ellos el cáncer de colon, pulmón, páncreas y cabeza y cuello (HNSCC). Además la cooperación con otros miembros de la familia del EGFR podría ampliar esta lista a otras neoplasias. La inhibición del EGFR es una de las vías de investigación más activa contra el cáncer. La radioterapia consigue, en un elevado porcentaje de casos, una buena respuesta. Sin embargo, la existencia de células resistentes a la radiación reduce el control tumoral. Una de las causas de la radioresistencia es la hiperactividad del EGFR. En cáncer de cabeza y cuello, el bloqueo del EGFR con el anticuerpo monoclonal anti- EGFR cetuximab aumenta el control local y la supervivencia en pacientes tratados simultáneamente con radioterapia. Sin embargo, no todos los pacientes tratados con cetuximab y radiación se benefician del tratamiento, lo que sugiere que, independientemente de la expresión del EGFR, existen mecanismos de resistencia a la combinación. La ramificación de las vías de señalización que dependen del EGFR sugiere que la topografía de la resistencia puede ser variada y múltiple. Cuanto más arriba de la vía de transmisión de señales se sitúe el by-pass, mayor debería ser la resistencia debido a que un mayor número de funciones citoprotectoras se verían liberadas. Se han descrito distintas posibilidades de by-pass al bloqueo del EGFR. Una de las oncoproteínas que podría ejercer un by-pass proximal es SRC, cuya actividad se relaciona con la progresión tumoral tanto en fases avanzadas como en lesiones premalignas. Además, SRC y EGFR comparten vías de señalización que promueven la progresión de la célula tumoral. En conjunto estos hechos sugieren que la inhibición de SRC podría aumentar la potencia antitumoral de la combinación de radioterapia y cetuximab. En este proyecto se han evaluado los efectos del tratamiento concomitante con radioterapia, cetuximab y dasatinib, y mejorado los conocimientos de los mecanismos biológicos involucrados. También se ha determinado si el uso de inhibidores de SRC podía potenciar el efecto antitumoral de la combinación de radioterapia y cetuximab en tumores dependientes del EGFR. La adición de DST al cetuximab o al cetuximab y radioterapia tuvo un efecto contrario al esperado: produjo un mayor crecimiento de los tumores, un incremento de la angiogénesis y de la síntesis de ADN, un aumento de la fosforilación de las oncoproteínas RAS, ERK1/2, AKT y STAT3; una elevación de la secreción de VEGF, y una hiperactividad del metabolismo glucolítico. El tratamiento combinado con dasatinib e inhibidores de las quinasas JAK, HER2 y MET no inhibió el exceso de fosforilación de ERK inducido por dasatinib, una respuesta reactiva similar a la descrita con C225 y que sugiere la implicación de mecanismos de acción, comunes e independientes de JAK, HER2 y MET. Por el contrario el bloqueo de EGFR por el inhibidor tirosina quinasa AG1478 dio lugar a una inhibición completa de la fosforilación de ERK y AKT a pesar de la presencia de DST, indicando que la quinasa del EGFR está implicada en el efecto antagónico inducido por dasatinib. Por último, este trabajo contribuye a la idea que la combinación de terapias moleculares puede dar lugar a antagonismos, que pueden ponerse de manifiesto durante una investigación preclínica antes de ser evaluados en ensayos clínicos. / Aberrant epidermal growth factor receptor (EGFR) signalling drives oncogenesis in many carcinomas, including head and neck squamous cell cancer (HNSCC). Irrespective of the mechanism of activation, EGFR overexpression is a major origin of resistance to cancer cell death—and a relevant cause of local failures after radiotherapy. The blockage of EGFR by the monoclonal antibody cetuximab in combination with radiotherapy has been shown to improve survival and local control in head and neck cancers. However, major responses are limited in part due to the robustness of signalling networking, which grants alternative routes to avoid blockage of EGFR. SRC-family kinases occupy a central position within the cell signal networking, which makes SRC a potential target in cancer treatment. In this project we evaluated the effects of the concomitant treatment with radiotherapy, cetuximab and dasatinib, and improved the knowledge of the biological mechanisms involved; to determine whether SRC inhibitors could potentiate the antitumor effects of radiotherapy and cetuximab combination in EGFR-dependent tumours. Unexpectedly, the addition of dasatinib to cetuximab or cetuximab and radiotherapy resulted in an antagonistic effect which was characterized by increased tumour growth; an increase in the angiogenesis and DNA synthesis; association with the inhibition of SRC; an increase in cell signalling involving phosphorylation of RAS, ERK1/2, AKT and STAT3 oncoproteins; elevation of VEGF secretion and hyperactivity of glycolytic metabolism. Also, the simultaneous blockade of SRC and JAK kinases, HER2 or MET, induced a similar reaction to that described with cetuximab suggesting the involvement of mechanisms of action, common and independent, of JAK, HER2 and MET. Conversely, blocking EGFR with the tyrosine kinase inhibitor AG1478 resulted in a complete inhibition of ERK and AKT phosphorylation, despite the presence of dasatinib, indicating that the EGFR kinase is involved in the induced antagonistic effect of dasatinib. Finally, this project contributes to the idea that the combination of molecular therapies can result in antagonism, which may become perceptible during a preclinical research before being evaluated in clinical trials.

L’estirament és una tècnica que manté o millora l’amplitud de moviment d’una articulació o d’un conjunt d’articulacions, per una acció d’allargament i tracció de les estructures que sol·licita. Suposa una tècnica per cuidar, prevenir i mantenir o desenvolupar les capacitats de cada individu. No tots els estiraments es realitzen de la mateixa manera ni tenen el mateix objectiu, en funció de la seva aplicació s’obté un efecte o un altre. Tot estirament realitzat durant l’escalfament influeix en nombroses variables, com la força explosiva i l’estat d’ànim, que contribueixen a afrontar d’una manera més o menys òptima un entrenament o una competició. Aquesta tesi doctoral es basa en l’estudi sobre l’estirament i el seu objectiu ha estat avaluar i comparar l’eficàcia aguda o immediata de diferents tipus d’estirament en l’escalfament esportiu de l’esportista sa i veure com influeixen sobre aspectes fisiològics, psicològics i de percepció, és a dir: l’opinió del participant a l’estudi. L’estudi s’ha dividit en dues fases que comparteixen el mateix protocol, amb diferents intervencions, així en la primera fase s’ha analitzat la repercussió de diferents tipus d’estirament estàtic durant l’escalfament esportiu. S’han comparat els estiraments estàtics actius, els passius i les tècniques neuromusculars (contracció, relaxació, estirament) i el no estirament. En la segona fase s’ha analitzat la repercussió de diferents tipus d’estirament actiu durant l’escalfament esportiu. Els estiraments comparats són: l’estirament estàtic actiu en tensió activa, l’estirament dinàmic i el no estirament. La força explosiva de l’extremitat inferior es pot objectivar mitjançant el test de salts proposat per Bosco. L’estat d’ànim, mitjançant la prova de perfils d’estat d’ànim POMS (Profile of Mood States) i les preferències del participant amb un qüestionari d’opinió. La mostra total emprada en les dues fases de l’estudi ha estat de 97 participants.

Professional responsibility in medicine exists since the beginning of medicine itself. The Hammurabi Code, which dates from 1728 bC, already mentions some articles related to the professional responsibility of the doctor. In all eras, laws and medicine haven been forced to adapt to all the scientific advances and social changes that haven been made. Medical responsibility has has had to change as well. The current approach of responsibility is not supposed to be anymore the search of “guilt” but the searching of all those factors that have influenced in a non desired attending procedure so that it has provoked in a patient the appearance of and adverse reaction, complications and sequels that could have been avoided. The aim of this thesis is to make quantitative and qualitative analysis of medical responsibility based on expert reports accomplished by the forensic doctors in the city of Barcelona from 2004 to 2009 which have been obtained from the archives of “Servei de Clínica Medicoforense de l'Institut de Medicina Legal de Catalunya”. The mainlines have been basically obtained from the reports of the forensic doctors, however, there has been some cases where a computing followup has been made by getting the court sentences of the pursued procedures and, therefore, the court decisions. The statistics analysis has been undertaken as it follows: the descriptive statistics, which are mean, median, standard deviation, minimum and maximum have been used to study the quantitative variables. As for the qualitative variables, we have calculated absolute and relative frequency tables. In order to analyse relationship between two qualitative variables, it has been performed contingency tables between both variables, along with the corresponding bar graphs. To stablish if there was a statistically significant association, khi squared has been run, as well as likelihood ratios, depending on what was most appropriated at each situation. Whenever “age” as a quantitative variable has been involved in the analysis, Krskal-Wallis non-parametric test has been used, but only if the covariates had more than two categories, while Wilcoxon non-parametric test has been used in case it had only two categories. (eg Wasserman, 2006). Finally, a survival analysis has been performed, the aim of which was the analysis of how long it takes to happen a well defined event (eg Klein & Moeschberger, 2003) The most relevant results have been: The sampling consists of 283 expert/proficient reports belonging to years 2004-2009. In 89.05% of cases, forensic's report is performed at a magistrate court's request. Talking about reasons of claims, it has been viewed that complaints about wrong therapeutical results are the most frequent ones (32.86%), specially when patient remains with sequels. This is followed by bad surgery technique (19.08%). Complications in clinical course rank third (13.7%) and finally we find mistaken diagnosis. (11.66%). The average age of affected patients by a medical malpractice is 48.38 years. When referring to sex, 62.7% are women while 37.2% corresponds to men. There are more complaints related to surgical specialties than to medical ones, and among those, orthopaedic surgery and traumatology rank first, followed by gynaecology and obstetrics. Private medical centres own the 40.28% of claims. The 28.6% belongs to public health centres. The remain correspond to other kind of centres. 88.34% Of claims are against doctors, while the rest of percentage are against other kind of professionals. Based upon the results we have obtained, we can confirm that the penal law is not the most appropriate law to ensue a likely medical malpractice claim. It is a process that generates stress, anxiety and insecurity to the doctor and to the family as well. Creation of arbitration tribunals and preventive legal medicine at hospitals could be part of the solution to that situation.

PROPÓSITO: Determinar los factores de riesgo cardiovascular, la tendencia de distintos tipos de tratamientos que afectan a pacientes con DMAE exudativa y estratificar el riesgo global de los sujetos mediante calculadoras prediseñadas. MÉTODOS: Estudio epidemiológico, observacional, multicéntrico y transversal de 915 pacientes afectos de DMAE activa con o sin tratamiento previo. RESULTADOS: La edad media de los pacientes diagnosticados fue de 75,7 años y sus características más frecuentes fueron la localización subfoveal (81,9%) y el subtipo predominantemente clásico (55,8%). El tamaño medio fue de 2111,9 μm, agudeza visual (AV) de 0,2 y bilateralidad del 22,3%. El 77,7% de los pacientes fueron tratados para la DMAE de forma farmacológica y el número medio de tratamientos fue de 1,5. Se observó que con la edad, la dislipemia tiende a disminuir (<70 años: 37,4% versus >80 años: 21%) mientras que la hipertensión (HTA) suele aumentar (<70 años: 67,3% versus >80 años: 81,9%) ; de igual modo, los fármacos para el control del colesterol son menos recetados en pacientes mayores de 80 años mientras que aumentan los de la HTA. En cuanto a las calculadoras de riesgo cardiovascular, la NCEP ATP III estableció alto riesgo en el 60,9% de los pacientes, mientras que para el Framingham fue del 36,8%. CONCLUSIONES: El avance de la edad es el principal factor de riesgo para un mayor índice de bilateralización, un empeoramiento de AV y un mayor tamaño y frecuencia de las formas ocultas. A mayor edad también aumenta la incidencia de ictus así como la frecuencia de HTA mientras que disminuye la de dislipemia; de igual forma, las estatinas disminuyen y aumenta el uso de antihipertensivos. El tabaquismo, en el momento del diagnóstico, sólo afecta al 10% de los pacientes. El ácido acetilsalicílico es el agente antitrombótico más prescrito por delante de los anticoagulantes. El sistema de clasificación de riesgo de Framingham estratifica a los sujetos como pacientes de menor riesgo que el de NCEP ATP III. / PURPOSE: To determine cardiovascular risk factors, treatment trends in patients with exudative ARMD and rank global risk subjects by predesigned calculators. METHODS: Epidemiologic, observational, multicentric and transversal study of 915 patients with active ARMD with or without previous treatment. RESULTS: Patients’ mean age of diagnosis was 75,7 years and main characteristics were subfoveal localization (81,9%) and predominantly classic subtype (55,8%). The mean size was 2111,9 μm, visual acuity (VA) of 0,2 and bilateral condition in 22,3%. About 77,7% of patients were treated pharmacologically for exudative ARMD and the mean number of treatments was 1,5. Over the years, it can be observed that dyslipidemia tends to drecrease (<70 years: 37,4% versus >80 years: 21%) and hypertension (HTN) tends to increase (<70 years: 67,3% versus >80 years: 81,9%). Similarly, drugs to control colesterol are less prescribed in patients with more than 80 years as drugs to reduce HTN increase. In terms of risk cardiovascular calculators, NECP ATP III establishes high risk in 60,9% of the patients while Framingham calculador reduces the high risk to the level of 36,8% of the sample. CONCLUSIONS: The pass of the age is the principal risk factor for a higher index of bilateralization, VA worsening and greater size and frequency of occult forms. With the age, incidence of ictus and frequency of HTN increase as dyslipidemia diminishes. Similarly, statins decrease and the use of HTN drugs increases. Smoking, at the stage of diagnosis, is just affecting 10% of patients. Acid acetilsalicilic is the most antithrombotic drug prescribed in detrimental of anticoagulant drugs. Framingham’s classification risk stratifies subjects with lower risk than NCEP ATP III.