Orientador: Fábio Camargo Abdalla / Colaboradora: Elaine Cristina Mathias da Silva-Zacarin / Colaboradora: Monica Jones Costa / Banca: Carmem Silvia Fontanetti Christofoletti / Resumo: Foi realizado um estudo sobre o efeito do Cloreto de cádmio (CdCl2) em girinos no estágio 25 de Gosner expostos durante 4 e 16 dias à dose ambientalmente aceita pelo Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA) para os corpos d'água de classes 1 e 2. Os resultados mostraram mudanças morfofuncionais significantes. Nos ovários dos indivíduos expostos durante 4 dias observou-se a aceleração na gametogênese inicial, evidenciado pelo aumento da incidência do número de ovócitos nos estágios I, II e III e aumento da incidência de micronucléolos, que demonstram alta síntese de RNA. As técnicas histoquímica e imuno-histoquimica não revelaram mudanças relevantes causadas por esse metal traço. Nos ovários dos indivíduos expostos durante 16 dias também observou-se aceleração na gametogênese inicial, como descrito para os indivíduos expostos durante 4 dias. A imuno-histoquimica demonstrou superexpressão da HSP70, indicando estresse oxidativo ou uma resposta adaptativa fisiológica ao CdCl2. Nos testículos dos indivíduos expostos durante 4 dias, observaram-se alterações anatômicas, morte celular, modificações nas células somáticas, morte e reabsorção das células germinativas, além da degeneração do tecido gonadal, adipogênese e poligonadismo não funcional. Como observado nos ovários, para esse período de exposição; as técnicas histoquímica e imuno-histoquimica não revelaram mudanças relevantes causadas por esse metal traço, demonstrando expressão basal. Nos testículos dos indivíduos expostos durante 16 dias observou-se aceleramento do desenvolvimento testicular já observando-se início dos espermatócitos primários organizando-se para formar os ductos seminíferos primordiais, poligonadismo misto, bem como, reversão sexual. A imuno-histoquimica não demonstrou diferenças significantes entre grupo controle e exposto quanto à expressão da HSP70, porém notou-se que esta está abaixo da observada no... / Abstract: A study about the effects of cadmium chloride (CdCl2) on tadpoles at Gosner stage 25 exposed for 4 and 16 days, to dosage environmentally accepted by National Council on the Environment (CONAMA) for the water classes 1 and 2, was performed. The results showed significant morphological and functional changes. On the ovaries of individuals exposed for 4 days, acceleration in the initial gametogenesis was observed, evidenced by the increased incidence of the number of oocytes in stages I, II and III and increased incidence of micronucleoli, which demonstrates high RNA synthesis. The histochemical and immunohistochemical techniques revealed no relevant changes caused by this trace metal. On the ovaries of individuals exposed for 16 days, acceleration in the initial gametogenesis was also observed, as reported by individuals exposed for 4 days. Immunohistochemistry showed overexpression of HSP70, indicating oxidative stress or physiological adaptive response to CdCl2. On the testicles of individuals exposed for 4 days, there were cases of anatomical changes, cell death, changes in somatic cell death and resorption of the germ cells, degeneration of gonadal tissue, adipogenesis and nonfunctional polygonadism. As noted on the ovaries for this period of exposure, the histochemical and immunohistochemical techniques revealed no relevant changes caused by this trace metal, showing basal expression. On the testes of individuals exposed during 16 days, the acceleration of testicular development was observed, with early primary spermatocytes organizing to form the primary seminiferous ducts, mixed polygonadism, as well as sex reversal. Immunohistochemistry showed no significant differences between the control and exposed groups regarding the expression of HSP70, however it is notable that this expression is below that observed in the group exposed for 4 days. For these reasons, the research shows that the parameters used by CONAMA as doses... / Mestre

O risco de extinção e o declínio populacional de muitas espécies animais na região neotropical estão fortemente relacionados aos processos antrópicos, como a conversão ambiental, mas também aos fatores intrínsecos aos próprios indivíduos, como os atributos. Os anuros correspondem ao grupo vertebrado mais ameaçado atualmente, sofrendo com sérios declínios populacionais. Este trabalho buscou avaliar quais os atributos dos anfíbios neotropicais podem predizer: i) as categorias de ameaça e tendências populacionais destas espécies e ii) a ocorrência de anuros em um ambiente modificado, de matriz agrícola. Para a predição de categorias de ameaça e tendências populacionais utilizamos um banco de dados com atributos de habitat e modos reprodutivos de 3196 espécies de anuros neotropicais. Verificamos que espécies com modos reprodutivos terrestres e desenvolvimento direto tem uma maior tendência a estarem em declínio. Além disso, verificamos que embora os atributos sejam filogeneticamente estruturados, o grau de ameaça parece ser independente de suas histórias evolutivas. Para identificar possíveis relações entre atributos ecológicos e morfológicos de anuros em uma paisagem agrícola no sul do Brasil, registramos a anurofauna com uso de armadilhas de interceptação e queda e procuras ativas em três diferentes distâncias da borda em um ambiente florestal e em uma matriz agrícola. Verificamos que principalmente os atributos ecológicos, como o modo reprodutivo (tanto terrestre como aquático) e o hábito estão relacionados com a ocorrência destas espécies no sistema agrícola, assim como encontramos diferenças entre os atributos morfológicos ao longo do gradiente de distância. Ambos os resultados podem auxiliar na tomada de decisões em planos e projetos de conservação de anuros neotropicais. / The extinction risk and population decline of many animal species in neotropical region are strongly related to anthropic processes, such as environmental conversion, but they are also related to intrinsic factors such as traits. Anurans correspond to the most endangered vertebrate group, suffering serious population declines. This work aimed to evaluate which neotropical anurans traits can predict: i) the categories of threat and population trends of species, and ii) the occurrence of anuran species in modified environments, such as the agricultural matrix. First, we compiled data to 3196 neotropical anuran species. We emphasized the importance of habitat and reproductive modes in threat classifications, as well as verified that species with terrestrial reproductive modes and direct development are more likely to be declining. We also found that although anurans traits being phylogenetically structured, the degree of threat seems to be independent from their evolutionary histories. In addition, to identify possible relation among ecological and morphological anuran traits with agricultural landscape in southern Brazil, we studied the anurofauna using pitfall traps and active searches at three different border distances in a forest environment and in an agricultural matrix. We verified that mostly of the ecological traits, such as the reproductive mode (both terrestrial and aquatic) and the habit, are related to the occurrence of determined species in the agricultural system. And we also found differences among the morphological traits observed through the distance gradient from the border. Therefore, both results present practical importance since it can help herpetologists to making decision about neotropical anurans conservation.

The principal aim of this diploma thesis was the mapping of amphibian species inhabiting the Protected Landscape Area Blaník. The field research was carried out during the years 2005 to 2006. The occurrence of following 8 species and 1 synklepton was confirmed: Smooth Newt (Triturus vulgaris), Warty Newt (Triturus cristatus), Alpine Newt (Triturus alpestris), Fired Bellied Toad (Bombina bombina), Common Spadefood (Pelobates fuscus), Common Toad (Bufo bufo), European Tree Frog (Hyla arborea), Grass Frog (Rana temporaria) and Water Frogs (Rana synklepton esculenta). The determination was performed on the basis of morphologic characters and voice expressions. During the field research suitable reproductive habitats of particular species were studied with respect to numbers of specimens found there. Based on presented results, habitats valuable for protection mere marked. The records of particular species were written into maps of the species occurance.

The aim of the diploma thesis was to create the project of the educational programme with motivational components, concerned mainly on amphibians and reptiles in our country. The program is intended for pupils of the 7th classes of the basic school, mainly in the surrounding the town Horažďovice, because it takes into account the particular conditions of this region. The conceptual and structural analysis of subjects Amphibians and Reptiles in school-books, which are used in the Czech republic, was done before the programme scheduling. The next data source was the faunistic research of the area in question and comparison of results with published data. The educational programme includes the parts {\clqq}Amphibians``, {\clqq}Reptiles`` and {\clqq}Questions and tasks``. Some of the tasks were practically tested.

This dissertation is aimed at theoretical base about the Amphibians and reptiles, analyses of two series of textbooks for General science, the proposals of themes for General science by using the inter-subject relationships and the evaluation of some suggestions in practice.

Dentre as doenças parasitárias tropicais, as causadas por protozoários se apresentam como um grande desafio para a saúde pública, sendo representadas pela leishmaniose e doença de Chagas. Afetam grandes populações marginais ao processo econômico globalizado, e desta forma, não são vistas como mercados potenciais. O presente projeto visou o isolamento de novos compostos naturais de venenos animais com atividade anti-Leishmania e anti-T. cruzi. O presente estudo fracionou por diferentes técnicas cromatográficas, os venenos dos anfíbios Siphonops annulatus, Corythomantis greeningi, Aparasphenodon brunoi e Phyllomedusa hypochondrialis, visando o isolamento de peptídeos e metabólitos secundários através de ensaios biomonitorados. Utilizando-se a espectrometria de massas e seqüenciamento por degradação química de Edman, foi possível a caracterização bioquímica de cinco peptídeos ativos da secreção de Phyllomedusa hypochondrialis, sendo estes a bradicinina, as dermaseptinas 1 e 4 e as filoseptinas 7 e 8. Os peptídeos apresentaram uma Concentração Efetiva 50% (CE50) variando entre 0,7 a 20 ?g/mL em L. (L.) infantum chagasi e T. cruzi, com baixa ou nenhuma citotoxicidade para células de mamíferos nas concentrações testadas. Além disso, a separação química da secreção do anfíbio Siphonops annulatus forneceu uma fração altamente ativa em promastigotas de L. (L.) infantum chagasi, com CE50 0,065 ?g/mL, porém com toxicidade bastante elevada para macrófagos peritoneais e nenhuma seletividade nas formas intracelulares. Estudos ultraestruturais de Leishmania demonstraram severos danos mitocondriais, além da formação de grande vacúolos citoplasmáticos, levando o parasita a morte em poucas horas. O presente estudo demonstrou o potencial de peptídeos e metabólitos secundários de venenos de anfíbios, que se adequadamente estudados, poderão contribuir como novos protótipos de fármacos para a doenças negligenciadas. / Among the tropical parasitic diseases, those caused by protozoa present a major challenge to public health, being represented by leishmaniasis and Chagas disease. Affect large populations marginal to the global economic process, and thus are not seen as potential markets. This project aimed the isolation of new natural compounds in animal venoms with anti-Leishmania activity and anti-T. cruzi. The present study fractionated by different chromatographic techniques, the poisons of the amphibians Siphonops annulatus, Corythomantis greeningi, Aparasphenodon brunoi and Phyllomedusa hypochondrialis, aiming the isolation of peptides and secondary metabolites through bioguided assays. By using mass spectrometry and sequencing by Edman degradation, it was possible to do the biochemical characterization of five active peptides from the poison of Phyllomedusa hypochondrialis, as bradykinin, dermaseptins 1 and 4 and phylloseptins 7 and 8. The peptides showed a 50% Effective Concentration (EC50) ranging from 0.7 to 20 ?g/mL in L. (L.) infantum chagasi and T. cruzi, with little or no cytotoxicity to mammalian cells at the tested concentrations. In addition, the chemical separation of the poison of the amphibian Siphonops annulatus provided a highly active fraction against promastigotes of L. (L.) infantum chagasi, with an EC50 of 0.065 ?g/mL, but highly toxicity to peritoneal macrophages and without selectivity against the intracellular forms of Leishmania. Ultrastructural studies of Leishmania showed severe mitochondrial damages and the formation of large cytoplasmic vacuoles, leading to parasite death within few hours. The present study demonstrated the potential of peptides and secondary metabolites of amphibian poisons, and if adequately studied, may contribute as prototypes of new drugs for neglected diseases.

Apesar da elevada diversidade de anfíbios anuros na Mata Atlântica, as variações geográficas na riqueza e na composição das taxocenoses são pouco conhecidas. Este estudo sintetiza o conhecimento atual sobre a riqueza e a distribuição geográfica de anuros no Estado de Santa Catarina, sul do Brasil, e identifica as principais lacunas de áreas para a conservação e de conhecimento sobre as espécies. As informações foram obtidas por meio da consulta de exemplares depositados em dez coleções científicas nacionais, literatura e em campo. As visitas a campo foram realizadas em áreas carentes de informações e/ou com necessidade de coleta de espécies com problemas taxonômicos, identificadas a partir de análises preliminares. Padrões gerais de distribuição foram investigados considerando a amplitude total da distribuição geográfica de espécies ocorrentes no Estado. As variações na riqueza e endemismo de anuros foram analisadas utilizando análise de agrupamento e análise de parcimônia de endemismo (APE). Para isso, o Estado foi dividido em cinco eco-regiões, considerando as variações na complexidade estrutural da vegetação, características de clima e heterogeneidade de relevo. Para identificar as regiões prioritárias para a conservação de anuros, bem como as principais lacunas de conhecimento e de áreas para a conservação, a área territorial do Estado foi dividida em quadrículas, e a riqueza de espécies, esforço de amostragem, representatividade da fauna, insubstituibilidade e número de espécies ameaçadas e quase ameaçadas de extinção foram analisadas para cada quadrícula e em diferentes escalas. Registramos uma riqueza em torno de 144 espécies de anuros no Estado. Esta riqueza corresponde a 60% das famílias, 37% dos gêneros e 17% das espécies de anuros conhecidas no Brasil (830 espécies). Os padrões gerais de distribuição geográfica revelaram uma fauna típica das porções sudeste e sul da Mata Atlântica. A maior riqueza de espécies, e a maior taxa de endemismo foram encontradas nas encostas e escarpas da Serra do Mar e Serra Geral, na região leste do Estado. As maiores lacunas de áreas para a conservação também foram identificadas nesta região. A área do planalto meridional apresenta relativamente poucos remanescentes de vegetação natural e as maiores lacunas de conhecimento. Não somente as áreas de elevada diversidade e endemismo devem ser consideradas como de especial prioridade na conservação de anuros no Estado de Santa Catarina, mas o aumento no conhecimento sobre a diversidade nas áreas desprovidas de informações também é prioritário. / Despite the high diversity of anurans in the Atlantic Forest, little is known about geographic variations in the richness and composition of assemblages. This study summarizes the current knowledge on the richness and geographic distribution of anurans in Santa Catarina State, southern Brazil, and identifies areas for conservation and the main knowledge gaps on species. The information was obtained by examining ten national scientific collections, literature, and in the field. Field trips were carried out in areas with little information available and/or from which specimens with taxonomic problems were needed for collections, identified based on preliminary analyses. General distribution patterns were examined using the total extent of the geographic distribution of the species found in the state. Variations in anuran richness and endemism were examined using grouping analysis and parsimony analysis of endemicity (PAE). To this end, the state was divided into five eco-regions, based on variations in the structural complexity of the vegetation, climate features, and relief heterogeneity. To identify priority regions for anuran conservation, as well as the main gaps on the knowledge and areas for conservation, the territorial area of the state was divided into squares. Species richness, sampling effort, representativeness of the fauna, irreplaceability, and number of species near threatened or threatened with extinction were analyzed for each plot and on different scales. A richness of approximately 144 anuran species was found in the state, representing 60% of families, 37% of genera, and 17% of anuran species known in Brazil (830 species). The general patterns of geographic distribution revealed a fauna typical of southeastern and southern regions of the Atlantic Forest. The highest species richness and endemic rates were found in the foothills and cliffs of the Serra do Mar and Serra Geral, in the eastern region of the state. The widest gaps regarding areas for conservation were also identified in this region. The southern highland area presents relatively few reminiscent patches of natural vegetation and is the most poorly known. Areas with high diversity and endemism levels need to be considered as of special importance regarding anuran conservation in Santa Catarina State, however, increase in the knowledge on diversity of poorly known areas should also be a priority.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A emergÃncia de mocroorganismos resistente a multidrogas, tais como Staphylococcus aureus as resistentes a meticilina, Enterococcus resistente a vancomicina, e Mycobacterium tuberculosis resistente a drogas, tem incitado esforÃospara desenvolver e pesquisar novas classes de antibiÃticos que possam ter utilidade clÃnica. Nos Ãltimos anos, uma variedade de antibiÃticos de baixo peso molecular tÃm sido isolados de diversas espÃcies animais. Estes agentes incluem peptÃdeos, lipÃdios, e alcalÃides, exibem atividade antibiÃtica contra micrÃbios do meio ambiente e considera-se que desempenhem um papel na imunidade inata. Compostos com largo espectro de atividade antimicrobiana que sÃo sintetizados pelas glÃndulas granulares presentes na pele de anuras (rÃs e sapos) tÃm recebido uma crescente atenÃÃo como agentes terapÃuticos em potencial. NÃs relatamos aqui a descoberta de um antibiÃtico esteroidal de atividade de largo espectro, bufadienolÃdeos, chamados hellebrigenin, telocinobufagin, marinobufagin e bufalin de Bufo schneideri, um sapo Brasileiro, com atividade inibitÃria diferenciada contra sete microorganismos e nenhuma atividade contra Pseudomonas aeruginosa. A secreÃÃo da pele do sapo foi obtida porcompressÃo manual das glÃndulas paracnemis e tibial. Tr~e peptÃdeos com estruta possivelmente relacionada com uma potente atividade inibitÃria para bactÃria gram positiva, Staphylococcus aureus e uma potente proteÃna com forte atividade antimicrobiana contra Pseudomonas aeruginosa (MIC = 9,64 microg/ml) foi isolada com secreÃÃes da pele de Leptodactylus pentadactylus estimuladas por adrenalina obtidas por injeÃÃo subcutÃnea de 500 micro l (100 microg/ml) e caracterizada. Os bufadienolÃdeos foram obtidos com separaÃÃo em CLAE de fase reversa sendo executado utilizando-se uma coluna C-18 (15 micro m, 100 Ao, Shim-pack PREP 250 mm x 25 mm) com um gradiente de 0-40 % de acetonitrila/Ãgua e 0,05 % de Ãcido trifluoroacÃtico. AnÃlise de NMR de alta resoluÃÃo das amostras purificadas por aplicaÃÃo de seqÃÃncia de pulsos modernos tais como 1H, 1H-COSY e NOESY, e determinaÃÃo da correlaÃÃo heteronuclear dos carbono-hidrogÃnio ligados diretamente 1H, 13C-COSY (HETCOR) e via detecÃÃo do hidrogÃnio inversa (HMQC), bem como o seqÃenciamento a longa distÃncia, COLOC e HMBC, permitindo assim sua identificaÃÃo como um esterÃide do tipo bufodienolÃdeo. A proteÃna de L. pentadactylus foi purificada por cromatografia em Sephacryl S-400 (460 mm x 6 mm) eluÃda com um tampÃo (Tris â HCl 0,05 N) e sua pureza foi avaliada poreletroforese em condiÃÃes desnayurantes e nÃo desnaturantes.A proteÃna total foi determinada pelo mÃtodo de Bradford usando albumina soro bovina como padrÃo. O isolamento dos peptÃdeos foi efetuado usando-se o exsudato liofilizado e redissolvendo em Ãgua bidestilada/TFA 0,05 % (20:1; P:V) e corrido numa coluna C18 de fase reversa em CLAE (15 micro m, 100 Ao, Shim-pack PREP 250 mm x 25 mm) eluÃda com um gradiente linear de 5 - 80% em 103 min num fluxo de 5 ml/min com acetonitrila/Ãgua e Ãcido trifluoroacÃtico 0.05 %. A atividade antimicrobiana de todas as amostras foi monitorada pelos mÃtodos de Bauer â Kirby e placa de microdiluiÃÃo padrÃousando Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 1304, Klebsiella pneumoniae ATCC 10031, Salmonella choleraesus choleraesus var typhi ATCC 6534, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 P e Pseudomonas aeruginosa HUWC 1. No primeiro mÃtodo, cada placa com agar MÃeller âHinton apÃs promover incubaÃÃo por 24 h a 35 ÂC. As zonas claras na superfÃcie do agar foram tomadas como indicativoda atividade antibacteriana. O diÃmetro destas foram mensuradas e a atividade foi expressa em Ãrea das zonas claras (mm2). As incubaÃÃes com os microorganismos foram feitas em caldo de B.H.I. por diferentes tempos atà 24 h a 35ÂC e estimada a influÃncia da desnaturaÃÃo na atividade das amostras protÃicas. ApÃs incubaÃÃo, na absorbÃncia de 492 nm cada poÃo foi determinado usando-se um Detector Shimadzu UV â VS modelo SPD - 10A VP. A mÃnima concentraÃÃo inibitÃria (MICs) se possÃvel foi determinada pelo mÃtodo da microdiluiÃÃo padrÃo. Todos os procedimentos foram executados de acordo com os manuais de instruÃÃo do Comità National de PadronizaÃÃo para LaboratÃrios ClÃnicos (Wayne, PA, USA). A hemÃlise induzida por amostras foi determinada por incubaÃÃo de uma suspensÃo 5% (v/v) de hemÃcias humanas dos tipos antigÃnicos A e O, rato e caprinos em tampÃo fosfato - salina com quantidades apropriadas das amostras a 37 ÂC atà 24 h. O sobrenadante foi mensurado em densidade optical a 541 nm. Esta foi comparada a uma suspensÃo tratada com detergente a 0,1 % com agitaÃÃo enÃrgica e definido o % de hemÃlise. Todos os compostos manifestaram moderado ou nenhuma atividade hemolÃtica. A proteÃna de L. pentadactylus apresentou uma concentraÃÃo hemolÃtica mÃnima de 2,09 x 10-4, 1,34x10-2, 1,07x10-1 e 1,34x10-2 microgramas para rato, caprino, tipos antigÃnicos humanos A e O humanos respectivamente. Sob refrigeraÃÃo estes valores decrescem. Para analisar interrelaÃÃo entre a assimetria e mecanismos, estimativa de parÃmetros cinÃticos foram obtidos pelos modelos matemÃticos de equaÃÃes de Gompertz e regressÃo nÃo linear, ANOVA e teste de comparaÃÃo mÃltipla de Tukey / A emergÃncia de mocroorganismos resistente a multidrogas, tais como Staphylococcus aureus as resistentes a meticilina, Enterococcus resistente a vancomicina, e Mycobacterium tuberculosis resistente a drogas, tem incitado esforÃospara desenvolver e pesquisar novas classes de antibiÃticos que possam ter utilidade clÃnica. Nos Ãltimos anos, uma variedade de antibiÃticos de baixo peso molecular tÃm sido isolados de diversas espÃcies animais. Estes agentes incluem peptÃdeos, lipÃdios, e alcalÃides, exibem atividade antibiÃtica contra micrÃbios do meio ambiente e considera-se que desempenhem um papel na imunidade inata. Compostos com largo espectro de atividade antimicrobiana que sÃo sintetizados pelas glÃndulas granulares presentes na pele de anuras (rÃs e sapos) tÃm recebido uma crescente atenÃÃo como agentes terapÃuticos em potencial. NÃs relatamos aqui a descoberta de um antibiÃtico esteroidal de atividade de largo espectro, bufadienolÃdeos, chamados hellebrigenin, telocinobufagin, marinobufagin e bufalin de Bufo schneideri, um sapo Brasileiro, com atividade inibitÃria diferenciada contra sete microorganismos e nenhuma atividade contra Pseudomonas aeruginosa. A secreÃÃo da pele do sapo foi obtida porcompressÃo manual das glÃndulas paracnemis e tibial. Tr~e peptÃdeos com estruta possivelmente relacionada com uma potente atividade inibitÃria para bactÃria gram positiva, Staphylococcus aureus e uma potente proteÃna com forte atividade antimicrobiana contra Pseudomonas aeruginosa (MIC = 9,64 microg/ml) foi isolada com secreÃÃes da pele de Leptodactylus pentadactylus estimuladas por adrenalina obtidas por injeÃÃo subcutÃnea de 500 micro l (100 microg/ml) e caracterizada. Os bufadienolÃdeos foram obtidos com separaÃÃo em CLAE de fase reversa sendo executado utilizando-se uma coluna C-18 (15 micro m, 100 Ao, Shim-pack PREP 250 mm x 25 mm) com um gradiente de 0-40 % de acetonitrila/Ãgua e 0,05 % de Ãcido trifluoroacÃtico. AnÃlise de NMR de alta resoluÃÃo das amostras purificadas por aplicaÃÃo de seqÃÃncia de pulsos modernos tais como 1H, 1H-COSY e NOESY, e determinaÃÃo da correlaÃÃo heteronuclear dos carbono-hidrogÃnio ligados diretamente 1H, 13C-COSY (HETCOR) e via detecÃÃo do hidrogÃnio inversa (HMQC), bem como o seqÃenciamento a longa distÃncia, COLOC e HMBC, permitindo assim sua identificaÃÃo como um esterÃide do tipo bufodienolÃdeo. A proteÃna de L. pentadactylus foi purificada por cromatografia em Sephacryl S-400 (460 mm x 6 mm) eluÃda com um tampÃo (Tris â HCl 0,05 N) e sua pureza foi avaliada poreletroforese em condiÃÃes desnayurantes e nÃo desnaturantes.A proteÃna total foi determinada pelo mÃtodo de Bradford usando albumina soro bovina como padrÃo. O isolamento dos peptÃdeos foi efetuado usando-se o exsudato liofilizado e redissolvendo em Ãgua bidestilada/TFA 0,05 % (20:1; P:V) e corrido numa coluna C18 de fase reversa em CLAE (15 micro m, 100 Ao, Shim-pack PREP 250 mm x 25 mm) eluÃda com um gradiente linear de 5 - 80% em 103 min num fluxo de 5 ml/min com acetonitrila/Ãgua e Ãcido trifluoroacÃtico 0.05 %. A atividade antimicrobiana de todas as amostras foi monitorada pelos mÃtodos de Bauer â Kirby e placa de microdiluiÃÃo padrÃousando Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 1304, Klebsiella pneumoniae ATCC 10031, Salmonella choleraesus choleraesus var typhi ATCC 6534, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 P e Pseudomonas aeruginosa HUWC 1. No primeiro mÃtodo, cada placa com agar MÃeller âHinton apÃs promover incubaÃÃo por 24 h a 35 ÂC. As zonas claras na superfÃcie do agar foram tomadas como indicativoda atividade antibacteriana. O diÃmetro destas foram mensuradas e a atividade foi expressa em Ãrea das zonas claras (mm2). As incubaÃÃes com os microorganismos foram feitas em caldo de B.H.I. por diferentes tempos atà 24 h a 35ÂC e estimada a influÃncia da desnaturaÃÃo na atividade das amostras protÃicas. ApÃs incubaÃÃo, na absorbÃncia de 492 nm cada poÃo foi determinado usando-se um Detector Shimadzu UV â VS modelo SPD - 10A VP. A mÃnima concentraÃÃo inibitÃria (MICs) se possÃvel foi determinada pelo mÃtodo da microdiluiÃÃo padrÃo. Todos os procedimentos foram executados de acordo com os manuais de instruÃÃo do Comità National de PadronizaÃÃo para LaboratÃrios ClÃnicos (Wayne, PA, USA). A hemÃlise induzida por amostras foi determinada por incubaÃÃo de uma suspensÃo 5% (v/v) de hemÃcias humanas dos tipos antigÃnicos A e O, rato e caprinos em tampÃo fosfato - salina com quantidades apropriadas das amostras a 37 ÂC atà 24 h. O sobrenadante foi mensurado em densidade optical a 541 nm. Esta foi comparada a uma suspensÃo tratada com detergente a 0,1 % com agitaÃÃo enÃrgica e definido o % de hemÃlise. Todos os compostos manifestaram moderado ou nenhuma atividade hemolÃtica. A proteÃna de L. pentadactylus apresentou uma concentraÃÃo hemolÃtica mÃnima de 2,09 x 10-4, 1,34x10-2, 1,07x10-1 e 1,34x10-2 microgramas para rato, caprino, tipos antigÃnicos humanos A e O humanos respectivamente. Sob refrigeraÃÃo estes valores decrescem. Para analisar interrelaÃÃo entre a assimetria e mecanismos, estimativa de parÃmetros cinÃticos foram obtidos pelos modelos matemÃticos de equaÃÃes de Gompertz e regressÃo nÃo linear, ANOVA e teste de comparaÃÃo mÃltipla de Tukey

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-07-27T21:10:07Z No. of bitstreams: 3 Tese - Diogo Borges Provete - 2016.pdf: 3048056 bytes, checksum: 5e3c0b282d1a0790baa37204e8059ed1 (MD5) Ata de defesa - Diogo Borges Provete.PDF: 971791 bytes, checksum: d78fa4a86345ee06bcf4e49553a98347 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-07-28T11:01:30Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Tese - Diogo Borges Provete - 2016.pdf: 3048056 bytes, checksum: 5e3c0b282d1a0790baa37204e8059ed1 (MD5) Ata de defesa - Diogo Borges Provete.PDF: 971791 bytes, checksum: d78fa4a86345ee06bcf4e49553a98347 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T11:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese - Diogo Borges Provete - 2016.pdf: 3048056 bytes, checksum: 5e3c0b282d1a0790baa37204e8059ed1 (MD5) Ata de defesa - Diogo Borges Provete.PDF: 971791 bytes, checksum: d78fa4a86345ee06bcf4e49553a98347 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Phylogenetic information has increasingly been included in studies of local communities and also at broad spatial scales. Despite recent criticisms in the last four years, phylogenetic relationships may still provide insights into the organization and assembly of ecological communities. The objectives of this study were 1) to review the history of the use of phylogenetic information, as well as criticisms and perspectives of its use in community ecology; 2) understand how the size and shape of phylogenetic trees and the phylogenetic structure of metacomunidaes affect the amount of variation accounted for by a eigenvector-based method used to describe the phylogenetic composition of metacomunidaes (PCPS); 3) to test the effect of diversity of evolutionary history (MNTD and MPD) and species richness as predictors of three variables of freshwater ecosystem functioning (productivity, respiration, and decomposition); and finally 4) to test how environmental gradients, especially pond canopy cover, influence the phylogenetic structure of an anuran metacommunity from southeastern Brazil. I found that the structure of metacommunities had greater impact on eigenvalues of PCPS than tree shape metrics, such as symmetry and stemminess. In addition, decomposition and respiration were best predicted by MNTD as a linear function, while productivity was affected by the quadratic term of MNTD. Finally, pond canopy cover and floating vegetation strongly affected the phylogenetic structure of the anruan metacommunity, influencing lineage sorting. These findings 1) can help users interpret the results of PCPS; 2) provide better understand of the effect of species loss in multitrophic, freshwater ecosystems; and 3) improve our knowledge about the effect of canopy cover on the lineage composition in anuran metacomunities. / Informações filogenéticas tem sido cada vez mais incluídas em estudos de comunidades locais e em larga escala espacial. Apesar das críticas dos últimos quatro anos, relações de parentesco ainda podem fornecer idéias sobre a organização e montagem de comunidades ecológicas. Os objetivos deste estudo foram 1) revisar o histórico do uso de informações filogenéticas, bem como críticas e perspectivas quanto ao seu uso em ecologia de comunidades; 2) entender como o formato e tamanho de árvores filogenéticas e a estrutura filogenética da metacomunidade afetam a quantidade de variação capturada por um método baseado em autovetores usado para descrever a composição filogenética de metacomunidaes (PCPS); 3) testar o efeito da diversidade de história evolutiva (MNTD e MPD) e da riqueza de espécies como preditores de três métricas de funcionamento de ecossistemas aquáticos (produtividade, respiração, e decomposição); e por fim 4) testar como gradientes ambientais, especialmente cobertura de dossel, influenciam a estrutura filogenética de uma metacomunidade de anuros no sudeste do Brasil. Encontrei que a estrutura da metacomunidade teve maior impacto nos autovalores do PCPS do que métricas de formato de árvore, tais como simetria e enraizamento (stemminess). Além disso a decomposição e respiração foram melhor preditas por MNTD, enquanto produtividade foi melhor predita pelo termo quadrático desta medida. Por fim, a cobertura de dossel e vegetação flutuantes afetaram fortemente a estrutura filogenética da metacomunidade de anuros, influenciando a distribuição de linhagens. Estes resultados 1) podem auxiliar na interpretação dos resultados do PCPS por usuários; 2) permitem compreender melhor o efeito da perda de espécies em ecossistemas aquáticos multitróficos; e 3) ampliam o conhecimento sobre o efeito da cobertura de dossel sobre a composição de linhagens em metacomunidades de anuros.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-07-28T16:40:34Z No. of bitstreams: 2 Tese - Núbia Carla Santos Marques - 2016.pdf: 2449653 bytes, checksum: 5c7b386d16140f146b1b891f400d91dc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-01T12:57:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Núbia Carla Santos Marques - 2016.pdf: 2449653 bytes, checksum: 5c7b386d16140f146b1b891f400d91dc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T12:57:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Núbia Carla Santos Marques - 2016.pdf: 2449653 bytes, checksum: 5c7b386d16140f146b1b891f400d91dc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Tadpoles of anuran species that occur in Cerrado can be found in several types of habitats. This habitat plasticity is possible because tadpoles have a high diversification in morphological adaptations that ensure an optimal performance in different ecological contexts. In this study, we were interested to investigate how environmental and spatial factors can explain the patterns of occurrence and distribution of tadpoles in Brazilian Cerrado and the interaction with tadpoles‘ morphological variation. We found that occurrence of tadpoles was explained by environmental variables and seven morphology-environment interactions. The most common tadpoles morphological change is related to body and tail size, and in eyes, nostril and mouth positions. Tadpoles‘ assemblage composition and morphological variation have significantly affected by spatial factors, but local environmental factors also play a major role defining morphological variation, although to a small degree. We discuss ecomorphological guilds of tadpoles and suggest that in larger guild (benthic tadpoles) can have morphology-environment interaction, while in the smaller ones (nektonic tadpoles) changes in feeding behavior and habitat selection is more common. There is a lack of knowledge about amphibian diversity, abundance and occurrence in Brazilian Cerrado and our study provide additional information about environmental and spatial factors that contribute to the patterns of occurrence and distribution of species. Abiotic factors (e.g. vegetation in ponds and land use) and spatial factors can contribute to individuals‘ phenotype changes and play a role in patterns of occurrence and tadpoles‘ assemblage composition. / Girinos de anuros que ocorrem no Cerrado podem ser encontrados em diversos tipos de habitats, sendo essa plasticidade de hábitats possível devido as adaptações morfológicas que asseguram uma boa performance em diferentes contextos ecológicos. Nesse presente estudo, nós investigamos como fatores ambientais e espaciais podem explicar os padrões de ocorrência e distribuição de girinos do Cerrado, além da interação com a variação morfológica dos indivíduos. A ocorrência dos girinos foi explicada por variáveis ambientais e sete interações morfologia-ambiente, sendo as mudanças morfológicas mais comuns: variação no tamanho do corpo e da cauda e mudanças nas posições dos olhos, narina e boca. A composição e a variação morfológica da assembleia de girinos são significativamente afetadas por fatores espaciais, mas fatores ambientais locais também desempenham um importante papel definindo a variação morfológica dos girinos, embora em um menor grau. Abordamos as guildas ecomorfológicas dos girinos e sugerimos que em guildas maiores pode haver variação morfológica atreladas as variáveis ambientais, enquanto nas menores mudanças no comportamento de forrageio e na seleção de hábitat são mais comuns. O presente estudo fornece informações adicionais sobre fatores ambientais e espaciais que contribuem para os padrões de ocorrência e distribuições das espécies de anuros. Fatores abióticos, por exemplo presença de vegetação e uso da terra ao redor da poça, também podem estar agindo mudando o fenótipo dos indivíduos e determinando a ocorrência e a composição das assembleias. Fatores espaciais também são determinantes em assembleias de girinos, sendo um grupo que possui baixa capacidade de dispersão. Girinos estão, em geral, limitados a poça que foi previamente escolhida pelo adulto, e processos neutros como nascimentos e mortes aleatórias na população podem operar nas assembleias.