Demonstramos na fase crônica da hipertensão por coarctação, depressão acentuada do controle reflexo da freqüência cardíaca (Michelini et al, Hypertension, 1992; 19:II159-II163) e que o tratamento crônico com losartan, embora não reverta os elevados níveis de pressão, normaliza o controle reflexo da freqüência cardíaca (Santos et al, Am. J. Physiol, 1995; 269:H812-H818). No presente estudo investigamos em ratos hipertensos e seus controles normotensos os efeitos do bloqueio crônico dos receptores AT1 sobre a atividade aferente do nervo depressor aórtico (NDA, protocolo I) e sobre a atividade simpática esplâncnica (ASE, protocolo II) na situação basal e após estimulação por hipotensões e hipertensões transitórias. Ratos Wistar adultos machos (180-300g) foram tratados cronicamente com veículo (VEH=água destilada, 0,1ml/100g/dia, po.) ou losartan (LOS= 10mg/kg/dia, po.) por 8 dias. No 4º dia após a determinação da pressão de cauda, foram submetidos à coarctação subdiafragmática da aorta (CH) ou à cirurgia fictícia (SHAM) e ao final do 7º dia, instrumentados com cânula arterial para registro direto da pressão arterial, realizada no 8º dia, com os animais acordados. Foram a seguir anestesiados para isolamento do nervo depressor aórtico ou do simpático esplâncnico, que foram registrados simultaneamente à pressão arterial em duas situações distintas: a) durante a situação basal (registro da atividade espontânea por 10-15 minutos), b) durante estimulação dos pressorreceptores por variações transitórias da pressão arterial (infusões/retiradas de sangue e injeções/infusões de fenilefrina e nitroprussiato de sódio iv.). Os registros da atividade neural foram retificados, integrados e aquisitados simultaneamente aos registros de pressão arterial em computador (programa de aquisição de dados Codas - Windaq DI-200, Ohio, USA). Tratamento com LOS determinou queda significante da pressão de cauda (104+-3 vs. 117+-3 mmHg nos grupos VEH). Em ambos os grupos VEH e LOS, CH determinou aumento significativo e similar da pressão arterial (em média 29%) que foi acompanhada, nos grupos tratados com VEH, por significativo aumento da variabilidade associada à depressão no ganho da correlação da atividade do NDA com a pressão arterial (CHVEH=1,04+-0,11 vs. SHAMVEH=1,63+-0,14 %/ciclo/mmHg, p<0,05, protocolo I) e por facilitação da resposta da ASE (CHVEH=-10,36+-1,05 vs. SHAMVEH=-5,81+-0,60 %/ciclo/mmHg, p<0,05, protocolo II). Nos grupos tratados com LOS, o estabelecimento da hipertensão foi acompanhado por redução da variabilidade e significativa melhora no ganho do NDA, uma vez que na faixa fisiológica de variações da pressão a depressão da atividade do NDA foi significativamente menor (CHLOS=3,30+-0,33 vs. CHVEH=2,18+-0,37 %/ciclo/mmHg, p<0,05, uma recuperação de 40% quando comparado aos respectivos controles ~5,01+-0,33 %/ciclo/mmHg). Houve ainda nos CHLOS normalização do ganho de resposta de ASE (CHLOS=-6,58+-0,62 %/ciclo/mmHg que não diferia dos SHAMLOS e SHAMVEH). O tratamento crônico com LOS determinou ainda correção parcial da atividade basal do NDA, mas não alterou a descarga espontânea da ASE. As alterações de atividade do NDA e ASE observadas nos CHLOS ocorreram simultaneamente, mas foram independentes da redução da pressão arterial pelo LOS. Nossos dados sugerem que a Ang II, ativada durante o desenvolvimento da CH, deprime a sinalização aferente pelo NDA, sendo responsável pela facilitação da resposta simpática durante alterações transitórias da pressão arterial. Nossos dados permitem ainda discriminar entre o efeito pressor e o efeito modulatório da Ang II, indicando restauração parcial do ganho da NDA e normalização da resposta simpática após o bloqueio crônico dos receptores AT1, mesmo na presença da hipertensão. / In the chronic phase of coarctation hypertension (CH) we have shown both marked depression of baroreceptor reflex control of heart rate (Michelini et al, Hypertension, 1992, 19: II159-II163) and normalization of the depressed reflex control even with the persistence of hypertension in losartan-treated animals (Santos et al, Am. J. Physiol, 1995, 269: H812-H818). In the present study we analyzed the effects of chronic AT1tors blockade on the both the afferent aortic nerve activity (AON, protocol I) and splanchnic sympathetic nerve activity (SSNA, protocol II) of CH and sham operated controls in two conditions: spontaneous activity (basal condition) and stimulated discharge during transient increases/decreases in arterial pressure. Male Wistar rats (180-300g aged 2-3 months) were chronically treated with vehicle (VEH=distilled water, 1ml/kg/day, po.) or losartan (LOS=10mg/kg/day, po.) during 8 days. Tail pressure was measured at the beginning and on the 4th day, before subdiaphragmatic aortic coarctation (CH) or sham surgery (SHAM). On day 7 the rats were instrumented with a catheter to record arterial pressure in conscious freely moving rats on day 8. Rats were then anesthetized to record AON or SSNA simultaneously with pressure during 10-15 min (basal or spontaneous activity) and during baroreceptor loading/unloading (infusion/withdrawal of blood or injections/infusions of phenylephrine and sodium nitroprusside iv.). Nerve activity was rectified and integrated and acquired simultaneously with pressure in a computer (Windaq DI-200, Ohio, USA). Losartan-treatment caused a significant decrease in tail pressure (104+-3 vs. 117+-3 mmHg in VEH groups). In both LOS- and VEH-treated groups, CH caused significant and similar increases in arterial pressure (mean of 29%) that was accompanied in the VEH groups by both significant increase in variability and depression of the AON/activity/pressure relationship (CHVEH=1,04+-0,11 vs. SHAMVEH=1,63+-0,14 %/cycle/mmHg, p<0,05, protocol I) and by potentiation of SSNA responses (CHVEH=-10,36+-1,05 vs. SHAMVEH=-5,81+-0,60 %/cycle/mmHg, p<0,05, protocol II). In the LOS-treated groups, establishment of CH was accompanied by smaller variability and marked improvement in AON gain: in the physiological range of pressure changes, depression of AON activity was significantly smaller (CHLOS=3,30+-0,33 vs. CHVEH=2,18+-0,37 %/cycle/mmHg, p<0,05, a recovery of 40% when compared to respective controls of ~5,01+-0,33 %/cycle/mmHg). CHLOS showed also normalization of SSNA responses: gain in the CHLOS=-6,58+-0,62 %/cycle/mmHg, that was not different from SHAMLOS and SHAMVEH groups. In addition chronic treatment with LOS caused partial correction of spontaneous AON activity but did not change spontaneous SSNA discharge. Both AON and SSNA responses observed in CHLOS occurred simultaneously but were independent from pressure reductions observed in these groups. The date suggested that Ang II, activated during development of hypertension, depresses the afferent signaling by aortic receptors and is factor responsible for the facilitation of SSNA during pressure changes. The date permits to discriminate between pressor and a modulatory effects of Ang II and indicates that after chronic AT1 receptors blockade hypertension persists, but there is a partial restoration of AON gain accompanied by normalization of the sympathetic response.

Estudamos a relação entre fenótipos do diabetes e obesidade com o genótipo da ECA, em humanos e camundongos. Analisamos fenótipos relacionados com obesidade em 1600 indivíduos da população de Vitória (genotipados para o polimorfismo I/D da ECA) e em camundongos com 1 a 3 cópias do gene da ECA, submetidos ou não à dieta rica em gordura ou diabetes. Camundongos com 3 cópias e alimentados com dieta rica em gordura apresentaram menor peso, gordura periepididimal e insulinemia. Já no grupo diabético os camundongos com 3 cópias apresentaram maior mortalidade. A relação fenótipo e genótipo encontrada nos camundongos repetiu-se no estudo populacional. Estes resultados dão suporte à idéia de que o gene da ECA é um importante fator determinante nos fenótipos relacionados a doenças complexas como a síndrome X. / We studied the relationship between obesity and diabetes phenotypes with ACE genotypes using a human population (1600 individuals where ACE I/D polymorphism was determined) and engineered ACE mice models (nondiabetic or diabetic under high fat diet or control diet). Body weight, periepididymal adipose tissue weight and insulin levels were lower in 3 copies under high fat diet. Diabetic 3 copies mice had higher mortality. Presence of D allele was significantly associated with decreased body fat percentage in individuals who were at increases risk of being hyperinsulinemic. Taken together these results provide evidence for a direct role of ACE in obesity phenotypes, which may be important to unravel the complexities of metabolic syndrome.

INTRODUÇÃO: A hipertensão renovascular (HRV) decorrente da estenose de artéria renal (EAR) é uma patologia potencialmente curável, mas os benefícios da revascularização não são alcançados por todos porque selecionar pacientes com base nos critérios clínicos ou angiográficos pode não ser suficiente para se obter o sucesso clínico. Existe um grande interesse em se desenvolver exames para detectar a presença de EAR e avaliar seu significado funcional. OBJETIVOS: avaliar se a redução da Taxa de Filtração Glomerular (TFG) medida com EDTA-51Cr após o uso de captopril consegue diferenciar pacientes hipertensos com EAR daqueles sem estenose da artéria e avaliar se existe correlação entre as variações da TFG e a evolução de pacientes submetidos a diferentes tratamentos. MÉTODOS: Foram estudados 41 pacientes com hipertensão arterial de difícil controle que foram divididos em dois grupos: GP: 21 pacientes com EAR e GH: 20 pacientes sem EAR. Os pacientes foram submetidos à medida de TFG com EDTA-51Cr pré e após a administração do captopril. Os pacientes do GP realizaram simultaneamente cintilografia com DMSA-99mTc para avaliação da função renal diferencial. Os pacientes com estenose de artéria renal foram subdivididos de acordo com o tratamento recebido: clínico (GP-CL) ou por intervenção (GP-I). As medidas das TFGs antes e após o captopril foram comparadas entre os grupos. Foi também, investigado se a relação pré/pós captopril tinha correlação com a resposta clínica dos pacientes. RESULTADOS: a média da TFG (ml/min./1,73m2) no total de pacientes estudados, foi de 56,7±26,5 na fase pré-captopril e 47,0±24,4 após o captopril. A modificação da TFG determinada pelo captopril,foi avaliada pela relação da filtração glomerular pré/pós-captopril. A média da relação TFG pré/pós-captopril foi 1,36 ±0,54 no grupo total de pacientes e quando foi feita a comparação entre a TFG pré e pós-captopril, houve uma redução significativa (p= 0,016). O GH mostrou relação média da TFG pré/pós-captopril de 1,13, valor significativamente menor que o GP que teve a relação média de 1,57 (p= 0,007). Quando foi avaliada a variação da TFG após o captopril nos dois grupos não foi observada diferença estatisticamente significativa no GH (p=0,68), mas observou-se diferença significativa no GP (p<0,001). No total, 15 pacientes apresentaram melhora dos seus níveis pressóricos, sendo oito do grupo de intervenção e sete do grupo clinico, não havendo diferença estatisticamente significativa em relação à melhora clínica entre os dois grupos (p=0,36). Quando comparamos os pacientes com e sem melhora clínica não se observou diferença significativa na TFG basal (p=0,09) ou na relação TFG pré/pós-captopril (p=0,74). A função renal diferencial obtida pelo DMSA-99mTc pré e pós captopril não mostrou diferença estatisticamente significativa nos rins com e sem estenose, (p=0.09). CONCLUSÃO: O captopril acarreta uma redução significativa da TFG e esta redução é mais acentuada em pacientes com EAR, mas não houve correlação entre as mediadas da TFG e a evolução clínica dos pacientes / INTRODUCTION: Renovascular hypertension (RVH) resulting from renal artery stenosis (RAS) is a potential curable pathology, but the revascularization benefits are not reached among all patients because selecting patients on the basis of clinical and angiographic criteria may not be sufficient to achieve clinical success. There has been increasing interest in developing screening tests capable of accurately detecting the presence of RAS and also of evaluating its functional consequences PURPOSE: the purpose of this study was to evaluate if captopril induced changes in 51Cr-EDTA clearance could be used to differentiate between hypertensive patients with and without renal artery stenosis and to investigate if there was a correlation between these changes and patients clinical response to therapy. METHODS: 41 patients with poor-controlled severe hypertension were studied. Patients were divided into two groups: GP=patients with renal artery stenosis (n=21), and GH=patients without renal artery stenosis (n=20). They were submitted to a Glomerular Filtration Rate (GFR) measurement with EDTA-51Cr pre and post captopril administration. The GP patients were submitted simultaneously to 99mTc-DMSA scintigraphies to estimate individual renal function. GP patients were further subdivided according to the treatment strategy: optimization of clinical treatment (GP-Cl) and interventional procedures (GP-I). The GFRs before and after captopril administration were compared between the groups. It was also investigated if baseline to post-captopril GFR ratio had a correlation to clinical response of patients. RESULTS: The GFR average (ml/min./1,73m2) on the total patients, was 56,7±26,5 on pre-captopril phase and 47,0±24,4 post captopril. The GFR alteration determinated by captopril was evaluated by Baseline/post-captopril GFR ratio. Baseline/post-captopril GFR mean ratio was 1,36 in total patients and the GFR had a significant decrease after captopril administration (p value 0.016). Baseline/post-captopril GFR mean ratio in GH was 1.13, value significantly lower than the GP which had the average relation of 1,57 (p= 0,007). When GFR pre and post-captopril was compared among the two groups separately, there was no significantly difference on the GH (p=0,68), but a expressive difference was observed on GP (p<0,001). 15 patients had a clinical response to the treatment. Clinical response was observed in 8/10 patients from GP-I and 7/11 from GP-Cl and there was not observed a significantly difference between the two groups (p=0,36). Comparing the groups with or without clinical improvement there was not a significantly difference on the GRF baseline (p=0,09) or on or baseline/post-captopril ratio (p=0,74). When evaluating the differential renal function obtained by pre and post-captopril DMSA-99mTc, significantly difference was not observed (p=0.09) for the kidneys with or without stenosis. CONCLUSION: captopril induced a decrease in GFR of hypertensive patients and it is more pronounced in patients with renal artery stenosis, but no correlation was observed between captopril induced decrease in GFR and clinical response of patients submitted to interventional or clinical treatment

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6151.pdf: 1975366 bytes, checksum: 23b842452d75ee4bd80f5408eccc025c (MD5) Previous issue date: 2014-08-26 / Universidade Federal de Minas Gerais / Sodium intake is induced by facilitatory signals, such as angiotensin II (ANG II) and aldosterone. Hyperosmolarity and central cholinergic activation, classic antinatriorexigenic stimuli, also induce NaCl intake when the inhibitory mechanisms of the lateral parabrachial nucleus (LPBN) are deactivated. In the present study, we investigated the possible interaction between osmoreceptors and cholinergic and angiotensinergic mechanisms in the control of water and NaCl intake induced by different dipsogenic and/or natriorexigenic stimuli combined with the blockade of LPBN inhibitory mechanisms. Rats with stainless steel cannulas implanted in the lateral ventricle (LV) or subfornical organ (SFO) and bilaterally into the LPBN were used to study the effects of injections of atropine (muscarinic cholinergic antagonist), losartan or ZD 7155 (AT1 receptor antagonists) into the LV or SFO on water and 0.3 M NaCl intake induced by bilateral injections of moxonidine (&#945;2- adrenoceptor/imidazoline agonist) into the LPBN combined with a) plasma hyperosmolarity induced by intragastric (ig) 2 M NaCl; b) injections of carbachol (cholinergic agonist) into the LV or SFO; c) subcutaneous injections of furosemide (FURO) and captopril (CAP); d) injection of ANG II into the LV. Additionally, we also investigated whether acute application of osmotic, angiotensinergic and cholinergic stimuli would activate cultured SFO dissociated cells and if the same cell would be activated by different stimuli. In rats treated with ig 2 M NaCl, injections of moxonidine (0.5 nmol/0.2 &#956;l) into the LPBN increased water and 0.3 M NaCl intake. Injections into the LV or SFO of atropine (20 nmol/1.0 &#956;l and 2 nmol/0.1 &#956;l, respectively) or losartan (100 &#956;g/1.0 &#956;l and 1 &#956;g/0.1 &#956;l, respectively) abolished water and 0.3 M NaCl intake in rats treated with ig 2 M NaCl combined with moxonidine into the LPBN. Moxonidine injected into the LPBN also increased water and 0.3 M NaCl intake induced by FURO + CAP, injections of ANG II (50 ng/1.0 &#956;l) and carbachol (4 nmol/1.0 &#956;l) into the LV or carbachol (0.5 nmol/0.1 &#956;l) into the SFO. The blockade of AT1 receptors with injections of losartan into the LV or ZD 7155 (1 &#956;g/0.1 &#956;l) into the SFO abolished water and 0.3 M NaCl intake in rats treated with carbachol into the LV or SFO combined with LPBN injections of moxonidine. However, atropine injected into the LV, despite reducing water intake, did not change 0.3 M NaCl intake in rats treated with FURO + CAP or injection of ANG II into the LV combined with injections of moxonidine into the LPBN. Injections of losartan into the LV reduced 0.06 M sucrose intake, but did not change food intake induced by 24 h of food deprivation. Finally, in vitro studies showed that osmotic, angiotensinergic and cholinergic stimuli activate SFO dissociated cells and that different stimuli can activate the same SFO cell. Therefore, the results of the present study suggest that different stimuli, such as hyperosmolarity and central cholinergic activation, facilitate NaCl intake through activation of central angiotensinergic mechanisms. / A ingestão de sódio é induzida por sinais facilitatórios, como angiotensina II (ANG II) e aldosterona. A hiperosmolaridade e a estimulação colinérgica central, estímulos classicamente considerados antinatriorexigênicos, também induzem ingestão de NaCl quando os mecanismos inibitórios do núcleo parabraquial lateral (NPBL) são bloqueados. No presente estudo, investigamos a possível interação entre osmorreceptores e mecanismos colinérgicos e angiotensinérgicos centrais no controle da ingestão de água e NaCl induzida por diferentes estímulos dipsogênicos e/ou natriorexigênicos combinados com bloqueio dos mecanismos inibitórios do NPBL. Em ratos com cânulas de aço inoxidável implantadas no ventrículo lateral (VL) ou órgão subfornical (OSF) e bilateralmente no NPBL, foram estudados os efeitos de injeções de atropina (antagonista colinérgico muscarínico), losartan ou ZD 7155 (antagonistas de receptores AT1) no VL ou diretamente no OSF na ingestão de água e NaCl 0,3 M induzida por injeções bilaterais de moxonidina (agonista adrenérgico &#945;2/imidazólico) no NPBL combinadas com: a) hiperosmolaridade plasmática induzida por sobrecarga intragástrica de NaCl 2 M; b) injeções de carbacol (agonista colinérgico) no VL ou OSF; c) injeções subcutâneas de furosemida (FURO) e captopril (CAP); d) injeção de ANG II no VL. Adicionalmente, também foi investigado se a aplicação aguda de estímulos osmóticos, angiotensinérgico e colinérgico ativariam neurônios dissociados do OSF mantidos em cultura e se um mesmo neurônio seria ativado por diferentes estímulos. Em ratos tratados com NaCl 2 M ig, injeções de moxonidina (0,5 nmol/0,2 &#956;l) no NPBL aumentaram a ingestão de água e NaCl 0,3 M. Injeções no VL ou OSF de atropina (20 nmol/1,0 &#956;l e 2 nmol/0,1 &#956;l, respectivamente) ou losartan (100 &#956;g/1,0 &#956;l e 1 &#956;g/0,1 &#956;l, respectivamente) aboliram a ingestão de água e NaCl em ratos tratados com NaCl 2 M ig que receberam injeções de moxonidina no NPBL. Injeções de moxonidina também aumentaram a ingestão de água e NaCl 0,3 M induzida por FURO + CAP, injeções de ANG II (50 ng/1,0 &#956;l) e carbacol (4 nmol/1,0 &#956;l) no VL ou carbacol (0,5 nmol/0,1 &#956;l) no OSF. O bloqueio de receptores AT1 com injeções de losartan no VL ou ZD 7155 (1 &#956;g/0,1 &#956;l) no OSF aboliu a ingestão de água e NaCl 0,3 M em ratos tratados com injeção de carbacol no VL ou OSF combinada com injeções de moxonidina no NPBL. No entanto, injeção de atropina no VL, apesar de reduzir a ingestão de água, não alterou a ingestão de NaCl 0,3 M em ratos tratados com FURO + CAP ou injeção de ANG II no VL combinados com injeções de moxonidina no NPBL. Injeções de losartan no VL reduziram a ingestão de sacarose 0,06 M, mas não alteraram a ingestão de ração induzida por privação alimentar por 24 h. Finalmente, os estudos in vitro mostraram que estímulos osmóticos, angiotensinérgico e colinérgico ativam as células dissociadas do OSF e que diferentes estímulos podem ativar uma mesma célula do OSF. Portanto, os resultados do presente estudo sugerem que diferentes estímulos, tais como hiperosmolaridade e ativação colinérgica central, facilitam a ingestão de NaCl através da ativação de mecanismos angiotensinérgicos centrais.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissGG.pdf: 347105 bytes, checksum: f975c79dc6a8a5d5738dd479a2906f82 (MD5) Previous issue date: 2006-03-10 / Financiadora de Estudos e Projetos / In this study, we investigated the participation of the AT1 receptors and of the nitric oxide (NO) into lateral septal area (LSA), on the water intake, 0,5 M NaCl intake, natriuresis, diuresis and pressor response induced by injection of angiotensin II (ANG II) in the same area. Male Holtzman rats were used weighing between 280 and 320 g, with cannulae of stainless steel implanted stereotactically into the LSA. The ANG II (25 ng/0,5 µl) injected into LSA, induced water and sodium intake and increased the urinary volume, sodium urinary excretion and arterial pressure when compared with the control group, that received 0,15 M NaCl. The pretreatment with losartan (antagonist of the AT1 angiotensin receptors) into LSA abolished the water intake, the sodium intake and the pressor effect induced by ANG II. The losartan also reduced the increase of urinary volume and of the sodium excretion induced by ANG II. The previous treatment with 7-nitroindazole (inhibit of the nitric oxide synthase enzyme) abolished the water intake and the increase of urinary volume, decreased the sodium intake and the natriuretic effect and no changed the pressor effect induced by ANG II. The results show the involvement of the AT1 angiotensinergic receptors and of the nitric oxide into LSA in the control of the cardiovascular and hydroelectrolytic balance, beyond a possible interaction between nitrergic and angiotensinergic mechanisms of the LSA in this control. / Nesse estudo, investigamos a participação dos receptores AT1 e do óxido nítrico (NO) na área septal lateral (ASL), sobre a ingestão de água, ingestão de NaCl 0,5 M, natriurese, diurese e resposta pressora induzida pela injeção de angiotensina II (ANG II) na mesma área. Foram utilizados ratos Holtzman pesando de 280 a 320 g, com cânulas de aço inoxidável implantadas estereotaxicamente na ASL. A ANG II (25 ng/0,5 µl) injetada na ASL, induziu ingestão de água e de sódio e aumentou o volume urinário, excreção urinária de sódio e pressão arterial quando comparado ao grupo controle, que recebeu NaCl 0,15 M. O pré-tratamento com losartan (antagonista dos receptores angiotensinérgicos AT1) na ASL aboliu a ingestão de água, a ingestão de sódio e o efeito pressor induzido pela ANG II. O losartan também reduziu o aumento de volume urinário e da excreção de sódio induzidos pela ANG II. O tratamento prévio com 7-nitroindazol (inibidor da enzima óxido nítrico sintase) aboliu a ingestão de água e o aumento de volume urinário, diminuiu a ingestão de sódio e o efeito natriurético e não modificou o efeito pressor induzido pela ANG II. Os resultados mostram o envolvimento dos receptores angiotensinérgicos AT1 e do NO na ASL no controle do equilíbrio hidroeletrolítico e cardiovascular, além de uma possível interação entre mecanismos angiotensinérgicos e nitrérgicos da ASL nesse controle.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to verify the type of angiotensin II (AngII) receptor involved in nuclear maturation of bovine oocytes and the possible participation of bradykinin (BK) as a mediator of AngII in this process. The first experiment was conducted to analyze the type of AngII receptor, for this cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured for 7 or 12h in the presence of follicular hemisections and AngII (10-11M), with or without the antagonists losartan (10-6M; selective for AT1 receptor), PD123319 (10-6M; selective for AT2 receptor) or saralasin (10-7M; AT1 and AT2 antagonist). Additionally, two control groups were used where the oocytes were cultivated in the absence or presence of follicular hemisections (positive and negative control, respectively). Oocytes cultured for 7h in the presence AngII reached 70,4% germinal vesicle breakdown (GVBD). When losartan was added to the maturation medium with AngII, the GVBD oocytes did not have any difference (73,2%), however when COCs were cultured in the presence of AngII + PD123319, the nuclear maturation was lower (52,1%; P<0,05). The cultivation of the oocytes for a larger period (12h) did not cause a significant difference in relation to those 7h treatments (P<0,05). These data indicate that the AT2 receptor mediate the actions of AngII during the nuclear maturation in bovine. In a second experiment, the effect of different concentrations of PD123319 was verified in the oocytes nuclear maturation in the presence of AngII (10-11M) and follicular hemisections. The culture was accomplished by 7h in a similar experimental design as previous experiment and it was verified that the inhibition induced by the antagonist happened in a dose-dependent way and there is lineal relation between concentration of PD and rates of obtained RVG (P=0,0306). To verify the participation of BK in the action mechanism of AT2 receptors, the oocytes were cultured in the presence of AngII (10-11M) and follicular hemisections with or without Hoe-140 (antagonist of B2 receptors of BK) in different concentrations (10-6, 10-7, 10-8 and 10-9M) for 7h. In this experiment, there was not any difference in the rates of GVBD oocytes among the groups treated with the antagonist and the AngII group (P>0,05). These data allow to infer that AngII acts in the nuclear maturation of the bovines oocytes activating the AT2 receptors and that the BK/receptor B2 pathway is not involved in that process. / O objetivo deste estudo foi de verificar o tipo de receptor da angiotensina II (AngII) envolvido na maturação nuclear de oócitos bovinos e a possível participação da bradicinina (BK) como mediadora da AngII nesse processo. O primeiro experimento foi conduzido para analisar o tipo de receptor, para isso os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram cultivados por 7 ou 12h na presença de hemiseções foliculares e AngII (10-11M), com ou sem os antagonistas losartan (10-6M; seletivo para receptores AT1), PD123319 (10-6M; seletivo para receptores AT2) ou saralasina (10-7M; antagonista AT1 e AT2). Adicionalmente, foram utilizados dois grupos controle, onde os oócitos foram cultivados na ausência ou na presença de hemiseções foliculares (controle positivo e negativo, respectivamente). Oócitos cultivados por 7h em presença de AngII atingiram 70,4% de rompimento da vesícula germinativa (RVG). Quando o losartan foi adicionado ao meio de cultivo com AngII, não houve diferença na percentagem de oócitos em RVG (73,2%), porém, quando os CCOs foram incubados na presença de AngII + PD123319, houve queda significativa na maturação nuclear (52,1%; P<0,05). O cultivo dos oócitos por um período maior (12h) não causou diferença significativa em relação a esses tratamentos quando foram realizados às 7h (P<0,05). Esses dados indicam que os receptores AT2 mediam as ações da AngII na maturação nuclear em bovinos. Em um segundo experimento, foi verificado o efeito de diferentes concentrações de PD123319 na maturação nuclear dos oócitos na presença de AngII (10-11M) e hemiseções foliculares. O cultivo foi realizado por 7h em um delineamento similar ao do experimento anterior e verificou-se que a inibição induzida pelo antagonista ocorreu de maneira dosedependente e há relação linear entre concentração de PD e índices de RVG obtidos (P=0,0306). Para verificar a participação da BK no mecanismo de ação dos receptores AT2, os oócitos foram cultivados na presença de AngII (10-11M) e hemiseções foliculares com ou sem Hoe-140 (antagonista de receptores B2 da BK) em diferentes concentrações (10-6, 10-7, 10-8 e 10-9M) por 7h. Nesse experimento, não houve diferença nos índices de oócitos que atingiram RVG entre os grupos tratados com o antagonista e o grupo AngII (P>0,05). Esses dados permitem inferir que a AngII atua na maturação nuclear dos oócitos bovinos ativando os receptores AT2 e que a via BK/receptor B2 não está envolvida nesse processo.

Resumo: O choque séptico, que é a maior causa de morte no Brasil e no Mundo, consequência de trauma infeccioso, a indução da óxido nítrico sintase (NOS) do endotélio vascular por produtos originados da parede de bactérias é considerado a causa, mas também parte da ativação de mecanismos de defesa do hospedeiro contra a infecção. Uma pronunciada hipotensão seguida de redução da reatividade vascular a mediadores vasoconstritores é determinada pela intensa liberação de mediadores relaxantes, como o próprio óxido nítrico (NO), que podem progredir para a morte do hospedeiro. Em ratos, este fenômeno é igualmente observado. O quadro de choque séptico ou Sepsis pode ser reproduzido pela injeção parenteral de endotoxina de várias bactérias Gram-negativas, como a endotoxina de E. coli (Etx), que produz intensa hipotensão aguda e prolongada, com pronunciada hiporreatividade a angiotensina II (AII)...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In septic schock that is major cause of death folowing in infeccious trauma, the induction of nitric oxide sinthase (NOS) of vascular endothelium by bacterial products is considered to be part of the defense mechanism of hosp against infection. But the hypotension and vascular hyporeactivity determinated by intense release of relaxing factors essentially from endothelial cells, in response to substances, released from walls bcteria which can progress to death of hosp. The hyporreactivity to angiotensin II (AII) is observed in Etx-induced hypotension. The current study show that the vasoconstriction response of AII in rats is reversed by an inhibitor of NOS (N NLA) in control rats, but in adrenalectomized rats these inhibitor did not reversed the hyporreactivity. The dexamethasone impaired the protective effect of N NLA against Etx-induced hyporreactivity . In adrenalectomized rats the N NLA not reverts vascular hyporreactivity to AII. The involvement of antiinflammatory nonsteroids drugs (diclofenac [Diclo] and nimesulide [Nime]) not was involved in reversion of vascular hyporreactivity to AII. Dextran injection, produced hypotension but not produced vascular hyporreactivity to AII. These mechanism is not clarified...(Complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Orientador: Maria Teresa Pepato / Coorientador: José Francisco Fracasso / Banca: José Ranali / Banca: Neoclair Molina / Banca: Wilson Abrão Saad / Banca: Iguatemy Lourenço Brunetti / Doutor

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A hipertensão essencial humana, bem como a hipertensão desenvolvida em Ratos Espontaneamente Hipertensos (SHR), são caracterizadas pelo desenvolvimento de Pressão Arterial (PA) elevada na medida em que a idade avança, sem identificação da causa primária. Está bem estabelecido que este modelo animal apresenta estresse oxidativo (EOx) concomitante a hipertensão. O mecanismo pelo qual o antioxidante reduz a pressão não está claro, por essa razão, é necessário avaliar o comportamento destas enzimas envolvidas na homeostase da PA. Ratos Wistar-Kyoto (WKY) e SHR machos receberam ácido ascórbico, 200 mg / kg / dia por sonda orogástrica durante cinco semanas. A PA, a Hipertrofia Ventricular Esquerda (HVE), o Sistema Renina-Angiotensina (SRA), o Peptídeo Natriurético Atrial (ANP) e o EOx foram comparados entre os grupos por pletismografia, estereologia, microscopia confocal de varrimento a laser, microscopia eletrônica de transmissão, western blotting e análise do RT-qPCR. Os SHR tratados com ácido ascórbico reduziram a PA e a HVE. Além disso, as enzimas envolvidas na homeostase da PA, a renina e a Enzima Conversora de Angiotensina (ECA) normalizaram-se, bem como os Receptores tipo 1 de Angiotensina II (AT1). A grande quantidade de grânulos de ANP no grupo SHR foi reduzida pelo tratamento com ácido ascórbico. O balanço oxidativo foi restabelecido nos SHR tratados com este antioxidante. O EOx nos SHR eleva os níveis de renina e de PA. Estas espécies reativas de oxigênio podem ser envolvidas no mecanismo de sinalização para aumentar a expressão de ANP nos miócitos atriais. Estes dados também mostram que o tratamento com o antioxidante (vitamin C) reduz o EOx e normaliza a PA ao menos parcialmente pela redução de taxas de renina. / The essential hypertension, as well as the Spontaneously Hypertensive Rat (SHR), is characterized by the development of high BP (BP) with advancing age, with no identified primary cause. It is well established that this animal model presents OxS concomitant hypertension. The mechanism, by which the antioxidant reduces the pressure, is not clear, for this reason, it is necessary to evaluate the behavior of enzymes involved in the homeostasis of BP. Male Wistar-Kyoto (WKY) rats and SHR received ascorbic acid, 200 mg / kg / day by orogastric gavage with lasted five weeks. The BP, Left Ventricular Hypertrophy (LVH), renin-angiotensin system (RAS), Atrial Natriuretic Peptide (ANP) and OxS results have been extensively compared among groups by plethysmography, stereology, confocal laser scanning microscopy, transmission electron microscopy, western blotting and RT-qPCR analysis. The SHR treated with ascorbic acid reduced BP and LVH. Also, the enzymes involved in the homeostasis of BP, renin and Angiotensin Converting Enzyme (ACE) normalized, as well as Angiotensin II type 1 receptor (AT1R). The large amount of ANP granules in SHR group was reduced by treatment with ascorbic acid. Oxidative balance was reestablished in SHR treated with this antioxidant. OxS in SHR elevates renin levels and BP. These reactive oxygen species may be involved in the signaling mechanism for increased expression in ANP atrial myocytes. These data also show that treatment with antioxidant (vitamin C) reduces OxS and normalizes BP at least partly by reducing rates of renin.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Na gravidez a circulação sistêmica materna se adapta para favorecer a perfusão úteroplacentária e o sistema renina-angiotensina (SRA) tem um papel importante nessa adaptação. O objetivo deste estudo foi investigar a contribuição do SRA para a regulação cardiovascular materna no final da gravidez, assim como a via L-arginina-NO-GMPc em plaquetas de ratas normotensas e espontaneamente hipertensas (SHR). O leito arterial mesentérico (LAM) e plaquetas foram obtidos no 20 dia de gravidez de ratas Wistar (NG) e SHR (HG) e respectivos controles em diestro (ND e HD). A pressão arterial sistólica foi reduzida no final da gravidez de ratas NG e HG. Os efeitos vasodilatadores induzidos pela angiotensina II e pela angiotensina 1-7, avaliados em LAM pré-contraído com norepinefrina, foram maiores em ratas HG do que nos outros grupos. A expressão da enzima óxido nítrico sintase (NOS) endotelial, avaliada em LAM pela técnica de Western Blotting, foi maior em NG e HG comparada com os respectivos controles. Enquanto isso, a expressão da enzima conversora de angiotensina (ECA) e dos receptores AT1 se apresentou aumentada em HD comparada aos grupos normotensos e a gravidez levou à redução das expressões em HG. A expressão de ECA2 foi maior nos grupos hipertensos do que dos grupos normotensos. O dano oxidativo, avaliado pela formação de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, foi menor em LAM de ratas NG e HG. A atividade da superóxido dismutase foi menor em HG comparada a HD. Enquanto isso, a gravidez aumentou a atividade da catalase em ratas normotensas e aumentou a atividade da glutationa peroxidase em ratas hipertensas. Em suspensão de plaquetas, as expressões de NOS endotelial e induzível, avaliadas por Western Blotting, assim como, a atividade da NOS intraplaquetária, mensurada pela conversão de L-[3H]-arginina a L-[3H]-citrulina, foram reduzidas em NG comparadas a ND, apesar do influxo inalterado de Larginina. Paradoxalmente, os níveis de GMPc foram similares entre ND e NG, assim como a expressão de fosfodiasterase5 (PDE5) e a agregação plaquetária induzida por ADP. Em SHR, o influxo de L-arginina foi reduzido na gravidez. Ratas HG apresentaram menor expressão de NOS induzível e atividade da NOS quando comparadas com ratas HD. A expressão das enzimas guanilato ciclase solúvel e PDE5 foram menores em HG comparadas a HD, mas nenhuma diferença foi observada nos níveis de GMPc entre os dois grupos. Entretanto, níveis aumentados de GMPc foram observados em HG comparado aos grupos normotensos e a agregação plaquetária permaneceu inalterada. Os resultados sugerem que a redução da pressão arterial para valores normais no final da gravidez em SHR pode estar relacionada ao aumento da produção de NO e das respostas vasodilatadoras induzidas por angiotensina II e angiotensina 1-7, assim como à redução da expressão de ECA e receptores AT1 e do estado oxidativo no LAM. Além disso, este estudo revela a presença da via L-arginina-NO-GMPc em plaquetas de ratos. Apesar de uma reduzida biodisponibilidade plaquetária de NO, a agregação plaquetária permanece inalterada em HG, o que pode estar relacionado ao aumento dos níveis de GMPc e à reduzida expressão de PDE5. / During pregnancy the systemic maternal circulation adapts to facilitate uteroplacental perfusion and the renin-angiotensin system (RAS) plays an important role in this adaptation. The objective of this study was to investigate the contribution of RAS on the maternal cardiovascular regulation at the end of pregnancy as well as the L-arginine-NO-cGMP pathway in platelets from normotensive and spontaneously hypertensive rats (SHR). Mesenteric arterial bed (MAB) and platelets were obtained in the 20th day of pregnancy from female SHR (SHR-P) and normotensive controls (P) or age-matched non-pregnant rats (SHRNP and NP). The systolic blood pressure in P and SHR-P rats was reduced at the end of pregnancy. The vasodilator effects of angiotensin II and angiotensin 1-7, evaluated in norepinephrine preconstricted MAB, were higher in SHR-P than in other groups. Endothelial nitric oxide synthase (NOS) expression in MAB was evaluated by Western Blotting and was increased in P and SHR-P compared to their non-pregnant counterparts. Angiotensinconverting enzyme (ACE) and AT1 receptor expressions were increased in MAB from SHRNP compared to normotensive groups and the pregnancy reduced their expressions in SHR. On the other hand, ACE2 expression was higher in MAB from hypertensive than normotensive groups. Oxidative damage, evaluated by formation of thiobarbituric acid reaction substances (TBARS), was reduced in the pregnant groups compared to their nonpregnant counterparts. Superoxide dismutase activity was reduced in SHR-P compared to non-pregnant group. Pregnancy increased catalase activity in normotensive rats and increased glutathione peroxidase activity in SHR. In the platelet suspension, intraplatelet NOS activity measured by the conversion of L-[3H]-arginine to L-[3H]-citruline was reduced in P compared to NP, despite unchanged in L-arginine influx. The expressions of endothelial and inducible NOS, evaluated by Western Blotting, were decreased during pregnancy in normotensive rats. Paradoxically, cGMP levels were similar between NP and P, as well as phosphodiesterase5 (PDE5) expression and platelet aggregation induced by ADP. In SHR, L-arginine influx was reduced in SHR-P compared to SHR-NP. SHR-P had impaired NOS activity and reduced inducible NOS expression compared with SHR-NP. Soluble guanylate cyclase and PDE5 expressions were lower in SHR-P compared to SHR-NP while no differences were noted in cGMP levels between groups. However, increased levels of cGMP levels were observed in SHR-P compared to normotensive groups and platelet aggregability remained unaltered. The results suggest that the reduction of blood pressure to normal values at the end of pregnancy in SHR may be related to an increased NO production and vasorelaxation to Ang II and Ang 1-7 associated with decreased expression of vascular ACE and AT1 receptors and oxidative status. Morover, this study reveals the presence of L-arginine-NO-cGMP pathway in rat platelets. Despite reduced platelet NO bioavailability in pregnant hypertensive rats, platelet aggregability remains unaltered, which may be related to increased levels of cGMP and reduced expression of PDE5.

A angiotensina (Ang) II e aldosterona induzem hipertensão arterial por mecanismos em parte mediados pela imunidade adaptativa, envolvendo linfócitos T auxiliares respondedores (Tresp). Os linfócitos T reguladores (Treg) são capazes de suprimir os efeitos próinflamatórios do sistema imune. O presente estudo avaliou se a transferência adotiva de Treg é capaz de prevenir a hipertensão e a lesão vascular induzidas pela Ang II ou pela aldosterona, em dois protocolos distintos. No protocolo com Ang II, camundongos machos C57BL/6 sofreram a injeção endovenosa de Treg ou Tresp, sendo depois infundidos com Ang II (1&#956;g/kg/min), ou salina (grupo controle) por 14 dias. No protocolo com aldosterona, um outro conjunto de animais sofreu injeções de Treg ou Tresp, sendo depois infundido com aldosterona (600&#956;g/kg/d) ou salina (grupo controle), pelo mesmo intervalo de tempo. O grupo tratado com aldosterona recebeu salina 1% na água. Tanto o grupo Ang II como aldosterona apresentaram elevação da pressão arterial sistólica (43% e 31% respectivamente), da atividade da NADPH oxidase na aorta (1,5 e 1,9 vezes, respectivamente) e no coração (1,8 e 2,4 vezes, respectivamente) e uma redução da resposta vasodilatadora à acetilcolina (de 70% e 56%, respectivamente), quando comparados com os respectivos controles (P<0,05). Adicionalmente, a administração de Ang II proporcionou um aumento rigidez vascular (P<0,001), na expressão de VCAM-1 nas artérias mesentéricas (P<0,05), na infiltração aórtica de macrófagos e linfócitos T (P<0,001) e nos níveis plasmáticos das citocinas inflamatórias interferon (INF)-&#947;, interleucina (IL)-6, Tumor necrosis factor (TNF)-&#945; e IL-10 (P<0,05). Ang II causou uma queda de 43% no número de células Foxp3+ no córtex renal, enquanto que a transferência adotiva de Treg aumentou as células Foxp3+ em duas vezes em comparação com o controle. A administração de Treg preveniu o remodelamento vascular induzido pela aldosterona, observado na relação média/lúmen e na área transversal da média das artérias mesentéricas (P<0,05). Todos os parâmetros acima foram prevenidos com a administração de Treg, mas não de Tresp. Estes resultados demonstram que Treg são capazes de impedir a lesão vascular e a hipertensão mediadas por Ang II ou por aldosterona, em parte através de ações antiinflamatórias. Em conclusão, uma abordagem imuno-modulatória pode prevenir o aumento da pressão arterial, o estresse oxidativo vascular, a inflamação e a disfunção endotelial induzidos por Ang II ou aldosterona. / Angiotensin (Ang) II and aldosterone (aldo) induce hypertension through mechanisms in part mediated by adaptive immunity and T responder lymphocytes. T regulatory (Treg) lymphocytes suppress pro-inflammatory mediators of the immune system. We questioned whether Treg adoptive transfer will blunt Ang II or aldo-induced hypertension and vascular injury, by evaluating two distinct protocols. In the Ang II protocol, male C57BL/6 mice were injected i.v. with Treg or T responder cells, and then infused with Ang II (1&#956;g/kg/min) or saline, for 14 days. In the aldosterone protocol, another set of animals was injected with Treg or T responder cells, and then infused with aldosterone (600&#956;g/kg/d) or saline, for the same period. The aldosterone group received saline 1% in drinking water. Both Ang II and aldosterone treated mice presented an increase in systolic blood pressure (43% and 31% respectively), of NADPH oxidase activity in aorta (1.5 and 1.9 fold, respectively) and heart (1.8 and 2.4 fold respectively) and an impaired vasodilatory response do acetylcholine (by 70% and 56% respectively), when compared to their controls (P<0.05). In addition, Ang II administration resulted in increased vascular stiffness (P<0.001), mesenteric artery vascular cell adhesion molecule (VCAM-1) expression (P<0.05), aortic macrophage and T cell infiltration (P<0.001), and the plasma levels of the inflammatory cytokines INF-&#947;, IL-6, TNF-&#945;, and IL-10 (P<0,05). AngII caused a 43% decrease in the number of Foxp3+ cells in the renal cortex, while Treg adoptive transfer increased Foxp3+ cells 2-fold compared to control. Treg administration prevented aldosterone-induced vascular remodelling, as observed by media to lumen ratio and media cross sectional area analysis of mesenteric arteries (P<0,05). All the above were prevented by Treg but not by T responder cell adoptive transfer. These results demonstrate that Treg suppress Ang II or aldo-mediated vascular injury and BP elevation, in part through anti-inflammatory actions. These findings suggest that an immunomodulatory approach can prevent Ang II or aldosterone-induced blood pressure elevation, vascular oxidative stress, inflammation and endothelial dysfunction.