Os objetivos deste trabalho foram investigar a modulação exercida pela infusão de angiotensina II (Ang II) sobre expressão de receptor B1 (RB1), mecanismos envolvidos nesta modulação, papel do RB1 na reatividade de anéis de aorta e os efeitos do antagonismo in vivo do RB1 na hipertrofia e inflamação vascular. Observamos que a Ang II causou hipertensão o que não foi afetado pelo tratamento com apocinina e com antagonista de RB1. Na aorta de ratos hipertensos observamos: indução de expressão de RB1, aumento da geração de espécies reativas de oxigênio e da atividade do NF-<font face=\"symbol\">kB em relação ao grupo Controle e o tratamento com apocinina reduziu estes parâmetros. O agonista de RB1 causou vasodilatação dependente de endotélio e de óxido nitrito na aorta dos ANG II. A aorta dos ANG II apresentou hipertrofia, maior atividade da ERK1/2 e expressão de interleucinas, disfunção endotelial e o antagonismo de RB1 reduziu estes parâmetros, sem alterar disfunção endotelial. Nossos resultados fornecem esclarecimentos sobre a modulação de RB1 e sua funcionalidade na aorta de ratos. / We investigated whether angiotensin II (Ang II) infusion modulates in vivo the kinin B1 receptor (B1R) expression, the mechanisms involved in this process, the role of the B1R activation in aorta and the effect of B1R antagonism in vivo upon vascular hypertrophy and inflammation. Ang II induced hypertension in Wistar was not affected by treatments with apocynin or B1R antagonism. The aorta of hypertensive rats presents: B1R expression, increased superoxide anion and NF-<font face=\"symbol\">kB activity and apocynin treatment reduced those parameters. The B1R agonist promoted endothelium and NO-dependent dilation in aorta of Ang II rats. The aorta of Ang II rats presented hypertrophy, increased MAPKs activity and interleukins expression and the B1R antagonism reduced those parameters. Those data indicated that Ang II can induce B1R expression in aorta and this receptor could participate in Ang II-induced vascular hypertrophy and inflammation.

Memoria para optar al título profesional de Bioquímico / La deposición excesiva de proteínas de matriz extracelular (MEC) se conoce como fibrosis y es una de las características de las enfermedades musculares degenerativas como la distrofia muscular de Duchenne (DMD). En esta enfermedad, la función muscular se pierde cuando las miofibras son reemplazadas por deposición de colágeno y otras proteínas de MEC. Entre los factores que desencadenan la fibrosis muscular se encuentran el Factor de Crecimiento Transformante tipo (TGF- ) y Angiotensina II (Ang II), éste último perteneciente al Sistema Renina-Angiotensina (RAS). Los principales efectos biológicos ejercidos por Ang II están mediados a través de los receptores tipo 1 y tipo 2 para Ang II denominados AT-1 y AT-2. El receptor AT-1 es responsable de mediar los efectos fibróticos dependientes de Ang II mientras que AT-2 participa como inductor de los efectos antifibróticos. En fibrosis de tejidos cardiaco, pulmonar y renal, TGF- 1 aumenta los niveles de AT-1 y AT-2, adicionando mayor complejidad a los mecanismos que regulan la fibrosis. Los efectos de TGF- 1 sobre los niveles de los receptores de Ang II en el músculo esquelético aún no se conocen. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de TGF- 1 sobre los niveles proteicos de los receptores AT-1 y AT-2 en mioblastos C2C12 y en músculo esquelético de ratón. Los resultados que se obtuvieron de los análisis in vitro en células musculares esqueléticas expuestas a TGF-b1, mostraron un aumento en los niveles proteicos de AT-2 de una manera dependiente de la dosis de TGF- 1 con un efecto máximo a las 48 h en paralelo a la inducción de fibrosis determinada por la acumulación de fibronectina y colágeno III. Sin embargo, los niveles proteicos de AT-1 no fueron afectados. Experimentos in vivo de inyección de TGF- 1 a músculo esquelético dañado de ratón, mostraron un aumento en los niveles del receptor AT-2, sin cambios en los niveles del receptor AT-1. Utilizando inhibidores farmacológicos de la actividad quinasa del receptor tipo I de TGF- y de la actividad p38 MAPK se pudo establecer que ambos eran requeridos para el aumento de los niveles proteicos de AT-2 inducido por TGF- 1, sugiriendo que el efecto es directamente mediado por los receptores de TGF- y por la vía MAPK p38. En un modelo murino de la distrofia muscular de Duchenne (ratones mdx), el cual presenta fibrosis y niveles aumentados de TGF- 1, se observó un aumento de los niveles proteicos del receptor AT-2 en diversos músculos esqueléticos comparados a los niveles observados en un ratón normal, sin embargo, los niveles del receptor AT-1 no se observó cambios. Durante la diferenciación de los mioblastos C2C12, proceso en el cual la vía de señalización de TGF- 1 se encuentra disminuida, los niveles proteicos de los receptores AT-1 y AT-2, disminuyó. Estos resultados sugieren que los niveles proteicos de AT-2, y no los de AT-1, son modulados por el factor profibrótico TGF- 1 en células musculares esqueléticas y en músculo esquelético, y que, durante la diferenciación, tanto AT-1 como AT-2 son modulados, sugiriendo así que estos receptores tienen un papel en el desarrollo y fisiopatología de la DMD / The excessive deposition of extracellular matrix (ECM) proteins is known as fibrosis and is a key hallmark of degenerative muscle diseases such as Duchenne muscular dystrophy (DMD). In this disease, muscle function is lost when myofibers are replaced by deposition of collagen and other ECM proteins. Among the factors that triggers muscle fibrosis are Transforming Growth Factor Type beta (TGF- ) and Angiotensin II (Ang II) from the Renin-Angiotensin System (RAS). Ang II exerts its biological effects mainly through two receptors, AT-1 and AT- 2, where AT-1 is responsible for Ang II fibrotic effects and AT-2 mediates antifibrotic effects. In cardiac, pulmonary and renal fibrotic tissues TGF- 1 increases AT-1 and AT-2 levels adding more complexity to the mechanisms that regulate fibrosis. The effects of TGF-b on the AngII receptor levels in skeletal muscle are not know. The aim of this work was to evaluate the effect of TGF- 1on protein levels of AT-1 and AT-2 receptors. The results were determined by western blot assays, and they show that TGF- 1 increases fibronectin and collagen III expression in C2C12 cells. We also determined that AT-2 protein levels were increased in a dose-dependent manner with a maximal effect at 48 h. However, levels of AT-1 remain unchanged. In vivo experiments in a mice damage skeletal muscle model injected with TGF- 1 shown an increase of AT-2 protein level and no changes were observed in AT-1 protein level. TGF- 1-dependent increase of AT-2 is abolished when cells were treated with a specific inhibitor of the TGF- receptor I kinase activity and with an inhibitor of p38 MAPK pathway, suggesting that the effect is directly mediated by TGF- receptors and p38 MAPK pathway. In a murine model of DMD (mdx mice), which presents fibrosis and augmented TGF- 1 levels, AT-1 and AT-2 receptors were evaluated in several muscles, AT-1 levels remain unchanged and AT-2 levels were augmented in dystrophic muscles. However, during differentiation, in which TGF- pathway is downregulated, C2C12 myoblasts, diminished the expression of AT-1 and AT-2 receptors. These results suggest that AT-2 protein levels, and not AT-1 levels, are differentially modulated by the profibrotic factor TGF- 1 in skeletal muscle cells and skeletal muscle, and during differentiation AT-1 and AT-2 are modulated, suggesting that these receptors have a role in the development and physiopathology of DMD. / FONDECYT

As espécies reativas de oxigênio (EROs) são intermediários de vias de sinalização que regulam eventos celulares relevantes na função de células musculares lisas vasculares como migração, proliferação e contração. A NADPH oxidase é a principal fonte enzimática de EROs com finalidade sinalizadora no sistema cardiovascular. Estudos do nosso grupo demonstraram que a proteína dissulfeto isomerase (PDI), uma chaperona redox do retículo endoplasmåtico é capaz de modular a geração de EROs e a ativação de vias de sinalização redox dependentes pela Ang II. Apesar dos recentes avanços na compreensão dos mecanismos que regulam a interação entre a PDI e NADPH oxidase, o papel desta chaperona nos efeitos biológicos relacionados a EROs, como a contração vascular, não estão esclarecidos. A inibição da resposta contrátil pelo DTNB, um oxidante de tióis sugere o envolvimento de proteínas contendo tióis como a PDI e a NADPH oxidase na contração de aortas isoladas estimuladas com Ang II. Estes resultados foram confirmados por experimentos que demonstraram a expressão de PDI em todas as camadas vasculares da aorta de ratos Wistar e uma co-localização desta proteína com a isoforma NOX-1. A inibição da PDI diminuiu a geração de EROs e a reatividade vascular induzida por Ang II e NOR independente da presença do endotélio. A investigação dos mecanismos envolvidos sugere um papel da PDI na mobilização de cálcio dos estoques intracelulares via NADPH oxidase. A ativação de MAP quinases contribuiu para aumentar a mobilização de cálcio intracelular em aortas estimuladas com Ang II e NOR. No entanto, a inibição da PDI reduziu a fosforilação da ERK 1/2 em aortas estimuladas com Ang II, mas não com NOR. A análise conjunta dos nossos resultados sugere que mecanismos redox dependentes e independentes estariam envolvidos na regulação da resposta contrátil à Ang II e NOR pela PDI. / The reactive oxygen species (ROS) are intermediates of signaling pathways which regulates cellular events relevant for the vascular smooth cells function as migration, proliferation and contraction.The NADPH oxidase is the main enzimatic source of ROS with the signaling purpose on the cardiovascular system. We previously demonstrated that the protein disulfide isomerase (PDI), a redox chaperone of endoplasmic reticulum, is able to modulate the ROS generation and the activation of signaling redox ways dependent of Ang II. Although the recent advances in the understanding of mechanisms that regulate the interaction of PDI and NADPH oxidase, the role of this chaperone in the biological effects related to ROS, as vascular contraction, are not well clarified. The inhibition of the contractile response by DTNB, an oxidant thiol, suggest the involvement of proteins containing thiols as the PDI and NADPH oxidase in the contraction of isolated aortas stimulated with Ang II. These results were confirmed by experiments that demonstrated the PDI expression in Wistar rats vascular layers and a co-localization of this protein with the NOX-1 isoform. The PDI inhibition decreased ROS generation and the Ang II and NOR induced vascular reactivity endothelium independent. The investigation of involved mechanisms suggest that one PDI role is the calcium mobilization from the intracellular storage by NADPH oxidase way. The MAPkinases activation contributed to increase de intracellualar calcium in stimulated aortas with AngII and NOR. However, the PDI inhibition reduced the ERK ½ fosforilation in AngII- stimulated aorta, but not with NOR. The analyses of all of our results suggests that dependent and independent redox mechanims were involved in the regulation of contractile response to Ang II and NOR by PDI.

Em roedores, a administração de Losartan (LO) durante a nefrogênese (primeiras duas semanas de vida) leva à insuficiência renal progressiva e, mais tardiamente, à hipertensão, indicando que a Angiotensina II (AII) é indispensável a uma nefrogênese adequada. Os mediadores intracelulares desse efeito são desconhecidos. Nós investigamos se o sistema NF-kB, que tem influência na embriogênese de outros tecidos, poderia ser um desses mediadores. Trinta e duas ratas Munich Wistar, cada uma amamentando 6 filhotes, foram divididas em dois grupos: C, sem tratamento, e PDTC, que receberam o inibidor do NF-kB Pirrolidina Ditiocarbamato (PDTC), 280 mg/kg/dia na água de beber durante 21 dias. A prole (C e PDTC), constituída de ratos machos, foi acompanhada até 10 meses de vida sem qualquer tratamento. Diferentemente do observado anteriormente com o LO, o PDTC não promoveu redução do número de néfrons nem albuminúria, indicando que o sistema NF-kB não participa crucialmente da nefrogênese. No entanto, os ratos que receberam o PDTC durante a lactação apresentaram hipertensão persistente, associada a hipertrofia de miócitos e a fibrose miocárdica. Para investigar a patogênese da hipertensão (que não se pode explicar por uma redução no número de néfrons), as expressões renais dos componentes do sistema renina-angiotensina (SRA) e dos transportadores tubulares foram determinadas por PCR em tempo real (qRT-PCR) aos 3 e 10 meses de vida. Aos 3 meses, a expressão de angiotensinogênio (AGT) e renina foram significativamente aumentadas no grupo PDTC vs C, indicando que uma ativação local do SRA pode explicar o desenvolvimento da hipertensão no grupo PDTC. No entanto, a expressão de todos os componentes do SRA examinados nos animais que receberam o PDTC durante a nefrogênese estava diminuída aos 10 meses, possivelmente devido a um mecanismo compensatório, sugerindo que a hipertensão foi mantida por outros mecanismos. No túbulo proximal, observou-se um aumento da expressão do transportador sódio/glicose isoforma 1 (SGLT1) (luminal) e sódio/bicarbonato (NBC) (basolateral), bem como um aumento numérico na expressão do trocador luminal sódio/hidrogênio isoforma 3 (NHE3), sugerindo que essas anormalidades podem estar envolvidas na patogênese da hipertensão nesses animais. Aos 10 meses, a expressão de todas as moléculas estava diminuída, sugerindo a participação de outros mecanismos na manutenção da hipertensão em longo prazo. A administração de PDTC pode representar um novo modelo de hipertensão essencial, possivelmente iniciada pela ativação local do SRA e por anormalidades no transporte de sódio no túbulo proximal e mantida em longo prazo por outros mecanismos. / Losartan treatment during late murine nephrogenesis (first 2 weeks of extrauterine life) causes progressive renal injury in adult life and, at more advanced stages, hypertension, indicating a physiologic action of angiotensin II on nephrogenesis. The possible intracellular pathways that might mediate this effect are unknown. We investigated the possibility that the NF-kB system, known to participate in the embryogenesis of other tissues, could be one of these mediators. Soon after delivery, thirty-two Munich-Wistar dams, each nursing 6 male pups, were divided in 2 groups: C, untreated, and PDTC, receiving the NF-kB inhibitor pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC), 280 mg/kg/day in drinking water during 21 days. After weaning (at 25 days), the offspring (C and PDTC) were followed until 10 months of age with no further treatment. Unlike Losartan, neonatal PDTC treatment promoted no reduction in the number of nephrons and no abnormal albuminuria, indicating that the NF-kB system does not participate decisively in nephrogenesis. Nevertheless, rats that received PDTC during lactation exhibited stable hypertension associated with myocardial hypertrophy and fibrosis. To investigate the pathogenesis of hypertension, which cannot be ascribed to number of nephrons reduction, the renal expressions of the renin-angiotensin system (RAS) components and of several molecules involved in sodium transport were determined by qRT-PCR at 3 and 10 months of life. The renal expression of renin and angiotensinogen in PDTC-treated rats at 3 months of age was significantly higher in comparison with control, but lower than age-matched controls at 10 months of age, suggesting that, although hypertension may be initiated by a derangement in the RAS, it was maintained by other mechanisms in the long run. At 3 months of age, there was upregulation of the luminal sodium/glucose transporter and the basolateral sodium/bicarbonate transporter at the proximal tubule, as well as a numerically higher expression of the luminal sodium/hydrogen exchanger, suggesting that these abnormalities might also be related to the pathogenesis of hypertension in these rats. At 10 months of age, however, the expression of all these transporters was reduced, suggesting that none of them was responsible for the long-term maintenance of high blood pressure. Neonatal PDTC administration represents a new model of essential hypertension, possibly related to local renal activation of the RAS and to deranged sodium transport at the proximal tubule. In the long run, hypertension must be maintained by other mechanisms.

En esta tesis se presentan resultados sobre el mecanismo por el cual la angiotensina II y endotelina 1 aumentan la producción de especies reactivas del oxígeno (ERO) en tejido cardíaco. A través de las ERO, dichas hormonas producen señales intracelulares que pueden conducir a la insuficiencia e hipertrofia cardíaca debido al aumento de calcio intracelular por activación del intercambiador Na<SUP>+</SUP>/H<SUP>+</SUP>(NHE-1). Entre las estrategias estudiadas para prevenir/revertir la hipertrofia cardiaca se encuentra la inhibición de la actividad del NHE-1 con sildenafil, un inhibidor de la fosfodiesterasa 5 A (PDE5A). Debido a esto, como ya se adelantó en el último informe de avance de la tesis, se consideró importante incluir el estudio del mecanismo por el cual el sildenafil inhibe la actividad del NHE-1.

A prevalência do sobrepeso e da obesidade está aumentando rapidamente no mundo e está presente em indivíduos de todas as faixas etárias, incluindo em crianças, e seus efeitos deletérios tendem a se prolongar até a vida adulta. Um dos modelos experimentais utilizados para se estudar os efeitos da obesidade é a dieta da cafeteria, com alimentos ricos em calorias. O acúmulo de gordura corporal tem sido implicado em distúrbios da função reprodutiva feminina. Resultados prévios evidenciaram uma instalação da puberdade precoce, alterações no ciclo reprodutivo e nas concentrações plasmáticas dos hormônios envolvidos no controle da reprodução e, em conseqüência, redução na ovulação e ciclos anovulatórios em mulheres e ratas que apresentam sobrepeso ou são obesas. A Angiotensina II (Ang II) tem sido relacionada com alterações patológicas associadas à obesidade e está envolvida no controle da reprodução feminina. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi investigar uma possível participação da Ang II, através da administração intraperitoneal (ip) diária a partir do desmame do antagonista losartan do receptor AT1 de Ang II sobre parâmetros reprodutivos, incluindo a instalação da puberdade, o ciclo estral, o comportamento sexual, a ovulação e o perfil dos esteróides gonadais, do hormônio luteinizante (LH) e da prolactina ao longo da tarde do proestro em ratas submetidas à ingestão da dieta da cafeteria a partir do desmame. Para avaliar os efeitos da dieta da cafeteria sobre o metabolismo, realizamos a medida do peso das gorduras retroperitoneal e perigonadal, das concentrações de triglicerídeos e colesteróis total, HDL (lipoproteína de alta densidade) e LDL (lipoproteína de baixa densidade) e realizamos um teste intravenoso (iv) de tolerância à glicose (ivGTT). O presente estudo confirmou dados obtidos em outros protocolos experimentais sobre a antecipação na data da instalação da puberdade e a redução na ovulação de fêmeas obesas, provavelmente induzida pela ausência dos picos de progesterona e do LH. Essas fêmeas apresentaram aumento de gorduras corporais, resistência à insulina, elevadas concentrações de triglicerídeos e LDL e redução no HDL. A administração crônica de losartan evitou a redução na ovulação verificada nas fêmeas do grupo cafeteria, assim como dos picos de LH e de progesterona na tarde do proestro. O losartan parece evitar parcialmente a instalação da puberdade precoce e prolonga ainda mais a fase de diestro 2 do ciclo estral induzidas pela dieta da cafeteria. O comportamento sexual das ratas não foi alterado pelo antagonista do receptor AT1 de Ang II. Esses resultados sugerem que a associação da administração precoce do antagonista losartan de Ang II em ratas submetidas à dieta da cafeteria a partir do desmame, previne a obesidade, da resistência à insulina e do aumento de triglicerídeos e colesterol LDL. O bloqueio dos receptores de Ang II ainda parece contribuir para a antecipação da puberdade e do prolongamento do ciclo estral observado nas fêmeas submetidas à dieta da cafeteria e contribui para inibir os efeitos da dieta sobre o pico pré-ovulatório de LH e de progesterona. / The prevalence of overweight and obesity is increasing rapidly in the world and encompasses individuals of all ages, including children, and its deleterious effects tend to extend to adulthood. One of the experimental models used to study the obesity effects is the cafeteria diet offered to rodents with the objective to develop obesity by the intake of foods rich in calories. Studies have shown that the intake of hypercaloric diets like cafeteria diet induces body fat storage, insulin resistance and improvement of triglycerides and cholesterol levels. Fat pad storage has been implicated in female reproductive disfunctions. Previous results evidenced a precocious onset of puberty, alterations in reproductive cycle and in plasma levels of hormones involved in the control of reproduction as well as a reduction on ovulation and anovulatory cycles in obese or overweight women and female rats. The Angiotensin II (Ang II) has been related to deleterious alterations associated with obesity and studies shown an involvement of Ang II in the control of female reproduction. In this manner, the objective of this work was to investigate a possible participation of Ang II, through the diary intraperitoneal (ip) administration from weaning of the AT1 receptor antagonist losartan, on the effect of the intake of cafeteria diet offered in early life on reproductive parameters, including the onset of puberty, estrous cycle, sexual behavior, ovulation rates and the profile of the gonadal steroids, luteinizing hormone (LH) and prolactin through the proestrous afternoon in female rats. To verify the effects of the cafeteria diet on the metabolism, we measure the retroperitoneal and perigonadal fat pad weights, the triglycerides and total cholesterol, HDL (high density lipoprotein) and LDL (ligh density lipoprotein) and we realized an intravenous (iv) glucose tolerance test (ivGTT). The present study confirmed data obtained in other experimental protocols on the earlier onset of puberty and a reduction of ovulation rates in female rats submitted to cafeteria diet, probably due to the absence of the preovulatory surge on proestrous afternoon of progesterone and of LH observed in this group. These females presented higher fat pads weights, insulin resistance, elevated levels of triglycerides and LDL and reduced levels of HDL. Losartan administration avoided the reduction in ovulation verified in females of cafeteria group, as well as the LH surge on proestrous afternoon. Losartan seems to prevent partially the precocious onset of puberty and promotes and additional increase in the phase 2 of diestrous induced by cafeteria diet. Sexual behavior of female rats was not altered by the antagonist of AT1 receptor of Ang II. These results suggest that the association of precocious administration of antagonist losartan of Ang II in female rats submitted to cafeteria diet since weaning, inhibits the occurrence of fat pad storage, of insulin resistance and of the improvement of triglycerides and cholesterol LDL levels. The Ang II seems to contribute to the earlier onset of puberty and to the prolongation of the estrous cycle of female submitted to cafeteria diet and the administration of losartan revert the inhibitory effects of the cafeteria diet on preovulatory LH and progesterone surges and, in consequence, the ovulation rates of these female rats is reestablished.

Existe uma associação entre hipertensão arterial e prejuízo da função reprodutiva. No modelo experimental dois-rins, um-clipe (2R1C), a hipertensão de origem renovascular é estabelecida pelo aumento na produção de angiotensina II (Ang II). O presente estudo analisou a evolução temporal dos efeitos da hipertensão promovida pelo modelo 2R1C sobre a função reprodutiva de ratos, bem como a participação dos receptores de Ang II do tipo 1 (AT1) nesse processo. Para tanto, avaliamos as manifestações do comportamento sexual, da gametogênese e das concentrações plasmáticas de Ang ll, hormônio luteinizante (LH), testosterona, prolactina e corticosterona de ratos submetidos ao modelo 2R1C (clipados) ou à cirurgia fictícia (controle) pertencentes aos grupos 7, 14, 21 e 28 dias de procedimento cirúrgico. Essas mesmas análises dos parâmetros endócrinos e do comportamento sexual foram realizadas em outros dois grupos, após 28 dias de clipamento ou cirurgia fictícia, que receberam o tratamento com losartan, um antagonista dos receptores AT1. Os ratos dos quatro grupos analisados, aos 7, 14, 21 e 28 dias de clipamento, sem o tratamento com losartan, apresentaram um aumento nas concentrações plasmáticas de Ang ll e uma resposta hipertensora, quando comparados aos seus respectivos controles. As demais análises das dosagens hormonais mostram que o emprego do modelo 2R1C promoveu redução nas concentrações plasmáticas de LH somente no grupo 7 dias de clipamento e elevação do LH circulante nos grupos 21 e 28 dias de clipamento. As concentrações plasmáticas de prolactina aumentaram nos grupos 14, 21 e 28 dias de clipamento. Além disso, ocorreu diminuição nas concentrações plasmáticas de testosterona no grupo 28 dias de clipamento. Por outro lado, não houve alterações nas concentrações plasmáticas de corticosterona em nenhum grupo. Todos os animais clipados manifestaram inibição de um ou mais parâmetros do comportamento sexual, ocorrendo maior comprometimento desta função com o avanço temporal da hipertensão. Os grupos 21 e 28 dias de clipamento também apresentaram um dano da espermatogênese. O tratamento com losartan normalizou a pressão arterial e preveniu as alterações da prolactina, do LH, do comportamento sexual e da espermatogênese de ratos clipados por 28 dias. Somado a isso, o losartan ocasionou uma elevação nas concetrações plasmáticas de testosterona no grupo clipado e produziu um aumento na Ang ll circulante nos grupos controle e clipado por 28 dias. Os resultados deste estudo evidenciam que a Ang ll exerce influência modulatória sobre parâmetros endócrinos e comportamentais da função reprodutiva, representando um dos principais elementos determinantes do comprometimento do comportamento sexual e da espermatogênese de ratos com hipertensão renovascular. / There is an association between hypertension and reproductive function impairment. In the two-kidney, one-clip model (2K1C), the renovascular hypertension is established by plasma angiotensin II (Ang II) increases. The present study aimed to analyze the temporal evolution of hypertension effects on rat reproductive function submitted to a 2K1C model. It was also analyzed the AT1 receptors participation in this process. Sexual behavior manifestations, gametogenesis and plasmatic concentrations of Ang II, luteinizing hormone (LH), testosterone, prolactin and corticosterone in rats submited to 2K1C model (clipping) or to sham surgery (control) from groups at 7, 14 , 21 and 28 days after surgery were evaluated. These endocrine parameters and sexual behavior analysis were conducted in two other groups after 28 days of 2K1C or sham surgery, which received losartan treatment - an AT1 receptor antagonist. The rats from the four groups on days 7, 14, 21, and 28 after clipping procedure, without losartan treatment, showed an increase in plasma Ang ll levels and a hypertensive response, compared to their respective control groups. The other hormonal measurements showed that the 2K1C model caused a reduction in plasma LH only in the 7 days after clipping procedure group and a plasma LH elevation in the 21 and 28 days after clipping groups. Plasma prolactin increased in 14, 21, and 28 days after clipping procedure groups. Moreover, there was a decrease in plasma testosterone in the 28 days after clipping group. On the other hand, there were no changes in plasma corticosterone in any group. All clipping animals showed inhibition of one or more sexual behavior parameters and the temporal advancement of hypertension promoted a greater impairment in this function. The 21 and 28 days after clipping procedure groups presented spermatogenesis dysfunction. Losartan treatment normalized the blood pressure and prevented the changes on plasma prolactin and LH levels, sexual behavior and spermatogenesis after 28 days clipping procedure. In addition, losartan treatment caused a rise in plasma testosterone clipping group levels and an increase in circulating Ang ll control and clipping group levels after 28 days of surgery procedure. Together, these results suggest that Ang ll acts modulating behavioral and endocrine parameters of reproductive function in a 2K1C rat model. Therefore, Ang II seems to represent one of the major elements inducing sexual behavior and spermatogenesis impairment in rats with renovascular hypertension.

A estimulação neonatal tem sido utilizada há algumas décadas como modelo experimental para analisar os mecanismos pelos quais variações precoces do ambiente do animal afetam o desenvolvimento de sistemas neurais, dando origem a alterações comportamentais e neuroendócrinas estáveis. Uma das alterações mais características é a diminuição do medo a ambientes novos e uma resposta menos acentuada da secreção de glicocorticóides pela supra-renal a estímulos estressantes. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da manipulação neonatal sobre o sistema angiotensinérgico, sobre a regulação hídrica e o desenvolvimento renal, visto que os ratos apresentam os rins e o trato urinário imaturos ao nascimento e seu desenvolvimento depende de angiotensina II. Investigamos aspectos do desenvolvimento e também da função renal em ratos machos de diferentes idades (11, 45 e 90 dias). Para isso, ratos Wistar foram divididos em dois grupos, dos quais um deles foi submetido a 1 minuto diário de manipulação durante os primeiros 10 dias de vida (grupo manipulado), enquanto o outro grupo não sofreu nenhum tipo de intervenção (grupo não manipulado). Aos 11 dias, os animais foram pesados e em seguida decapitados para coleta de sangue, seguido de extração e pesagem dos rins e das glândulas supra-renais. Os animais de 45 e de 90 dias permaneceram por um período de 24h em gaiolas metabólicas para análise da ingestão hídrica basal, do volume urinário e para posterior cálculo da taxa de filtração glomerular (TFG). Em seguida, estes mesmos animais foram pesados e logo decapitados para coleta de sangue e extração de rins e glândulas supra-renais para serem pesados. Nos animais de 11 dias, não observamos diferenças no peso corporal, peso renal, peso das supra-renais e na espessura de córtex renal entre os grupos manipulado e não manipulado. Os animais manipulados de 11 dias exibiram um aumento nas concentrações plasmáticas de angiotensina II, associada a uma redução de corticosterona plasmática, quando comparados aos animais não manipulados de mesma idade. Nos animais de 90 dias manipulados, quando comparados aos não manipulados, observamos uma redução de peso renal, embora não tenhamos observado redução da espessura do córtex renal. Esses animais apresentaram também uma redução de ingestão hídrica basal e de volume urinário, bem como redução de TFG. Ainda, apresentaram concentrações reduzidas de angiotensina II plasmática, acompanhadas de redução na concentração de corticosterona. Não foram encontradas diferenças significativas em nenhum dos parâmetros analisados nos animais de 45 dias de idade. Este conjunto de resultados sugere que a manipulação neonatal produz efeitos sobre osistema angiotensinérgico, manifestados através das diferentes concentrações plasmáticas de angiotensina II observadas entre os animais manipulados e não manipulados. Ainda, que estes efeitos podem estar envolvidos nas alterações dos mecanismos que permeiam a regulação do equilíbrio hidroeletrolítico, observadas na idade adulta desses animais.

A prolactina (PRL) é um hormônio polipeptídico com múltiplas ações. Estudos têm revelado que além das funções mais conhecidas relacionadas ao desenvolvimento da glândula mamária e à síntese e manutenção da liberação de leite, esse hormônio parece ser decisivo no comportamento maternal. Nesse caso a PRL poderia atuar em sinergismo com outros hormônios, como a ocitocina (OCT) e a angiotensina II (ANG II), promovendo um ajuste fino da circuitaria neural do encéfalo que leva a rata de um estado de aversão e negligência à receptividade e cuidado maternal de filhotes. Junto da corticosterona (CORT), a ANG II é um hormônio marcador do estresse em ratos. Considerando a hiporresponsividade ao estresse e uma maior liberação de PRL basal, que se correlacionam na rata em fase de lactação, esta dissertação teve o objetivo de verificar a possível participação da ANG II na resposta da PRL e no comportamento maternal de ratas lactantes submetidas ao estresse crônico e agudo. O papel do sistema angiotensinérgico foi investigado por meio da administração crônica do antagonista losartan na água de beber. A aplicação de estresse crônico e agudo foi realizada segundo o modelo da contenção nos sete primeiros dias, e numa aplicação única no sétimo dia, respectivamente. O comportamento maternal nos diferentes grupos de ratas foi analisado mediante um protocolo padrão de registro comportamental. Esses estudos demonstraram que a ANG II basal possivelmente participa do comportamento maternal pró-ativo, como a presença da mãe no ninho e a construção do ninho, além da lactação, que é um comportamento parcialmente reflexo e pró-ativo. Por outro lado, a sobreposição entre a administração de losartan e estresse agudo ou crônico parece levar as ratas a um comportamento maternal similar ao grupo controle. O comportamento das lactantes junto aos filhotes não é influenciado pelo estresse crônico, ao contrário do estresse agudo, que estimula a mãe a permanecer mais tempo fora do ninho em relação ao controle, sem qualquer envolvimento com o cuidado maternal. A administração individual de losartan e de estresse crônico não interfere nos níveis de CORT; no entanto, quando esses fatores são somados há uma marcante elevação dos níveis plasmáticos do corticosteróide. Houve apenas uma tendência de redução da PRL nas ratas submetidas ao estresse crônico; porém, quando o estresse crônico é aplicado em ratas previamente tratadas com losartan, há uma significativa elevação da PRL em relação ao grupo que recebeu apenas o estresse. Isoladamente, o fármaco leva a uma tendência de redução dos altos níveis basais de PRL, típicos de lactantes. Assim, podemos concluir que a ANG II possivelmente modula, mediante os receptores AT1, o comportamento maternal de forma direta e indireta, interferindo nas concentrações basais de PRL e de outros hormônios, como provavelmente a OCT. Esses hormônios podem configurar as ligações sinápticas entre os neurônios hipotalâmicos responsáveis pela transdução de estímulos endógenos na mãe e nociceptivos externos dos filhotes em sinais que levam à responsividade motora e cognitiva do cuidado maternal.

A estimulação neonatal tem sido utilizada há algumas décadas como modelo experimental para analisar os mecanismos pelos quais variações precoces do ambiente do animal afetam o desenvolvimento de sistemas neurais, dando origem a alterações comportamentais e neuroendócrinas estáveis. Uma das alterações mais características é a diminuição do medo a ambientes novos e uma resposta menos acentuada da secreção de glicocorticóides pela supra-renal a estímulos estressantes. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da manipulação neonatal sobre o sistema angiotensinérgico, sobre a regulação hídrica e o desenvolvimento renal, visto que os ratos apresentam os rins e o trato urinário imaturos ao nascimento e seu desenvolvimento depende de angiotensina II. Investigamos aspectos do desenvolvimento e também da função renal em ratos machos de diferentes idades (11, 45 e 90 dias). Para isso, ratos Wistar foram divididos em dois grupos, dos quais um deles foi submetido a 1 minuto diário de manipulação durante os primeiros 10 dias de vida (grupo manipulado), enquanto o outro grupo não sofreu nenhum tipo de intervenção (grupo não manipulado). Aos 11 dias, os animais foram pesados e em seguida decapitados para coleta de sangue, seguido de extração e pesagem dos rins e das glândulas supra-renais. Os animais de 45 e de 90 dias permaneceram por um período de 24h em gaiolas metabólicas para análise da ingestão hídrica basal, do volume urinário e para posterior cálculo da taxa de filtração glomerular (TFG). Em seguida, estes mesmos animais foram pesados e logo decapitados para coleta de sangue e extração de rins e glândulas supra-renais para serem pesados. Nos animais de 11 dias, não observamos diferenças no peso corporal, peso renal, peso das supra-renais e na espessura de córtex renal entre os grupos manipulado e não manipulado. Os animais manipulados de 11 dias exibiram um aumento nas concentrações plasmáticas de angiotensina II, associada a uma redução de corticosterona plasmática, quando comparados aos animais não manipulados de mesma idade. Nos animais de 90 dias manipulados, quando comparados aos não manipulados, observamos uma redução de peso renal, embora não tenhamos observado redução da espessura do córtex renal. Esses animais apresentaram também uma redução de ingestão hídrica basal e de volume urinário, bem como redução de TFG. Ainda, apresentaram concentrações reduzidas de angiotensina II plasmática, acompanhadas de redução na concentração de corticosterona. Não foram encontradas diferenças significativas em nenhum dos parâmetros analisados nos animais de 45 dias de idade. Este conjunto de resultados sugere que a manipulação neonatal produz efeitos sobre osistema angiotensinérgico, manifestados através das diferentes concentrações plasmáticas de angiotensina II observadas entre os animais manipulados e não manipulados. Ainda, que estes efeitos podem estar envolvidos nas alterações dos mecanismos que permeiam a regulação do equilíbrio hidroeletrolítico, observadas na idade adulta desses animais.