Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-13T13:13:15Z No. of bitstreams: 1 fabianovieiradelanda.pdf: 991924 bytes, checksum: 76f33860854c1fc8809b33683cbef6a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-27T20:33:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabianovieiradelanda.pdf: 991924 bytes, checksum: 76f33860854c1fc8809b33683cbef6a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T20:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabianovieiradelanda.pdf: 991924 bytes, checksum: 76f33860854c1fc8809b33683cbef6a6 (MD5) Previous issue date: 2013-03-01 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo do presente estudo foi avaliar as seguintes hipóteses: Ho- não haveria influência do cimento resinoso e do cimento obturador do canal radicular sobre a durabilidade da união entre um pino de fibra de vidro e a dentina intra-radicular; H1- haveria a influência do tipo do cimento obturador sobre a durabilidade de união entre um pino de fibra de vidro e a dentina intra-radicular: H2-haveria a influência do tipo de cimento resinoso sobre a durabilidade de união entre um pino de fibra de vidro e a dentina intra-radicular e H3-haveria a influência da profundidade da cimentação sobre a durabilidade de união entre um pino de fibra de vidro e a dentina intra-radicular. Foram utilizados 40 caninos humanos, os quais foram divididos aleatoriamente em quatro grupos.R+E Relyx U100/ Endofill, P+E Panavia F2.0/EndoFill, R+S Relyx U100/Sealer 26, P+S Panavia F2.0/Sealer 26. Ao término dos procedimentos de cimentação, os corpos de prova foram seccionados em uma máquina de corte de precisão (Lab Cut Isomet 1000 Precision Saw) em 4 fatias de 2mm referente as diferentes profundidades: Apical, Médio Apical, Médio Coronal, Coronal. Em seguida, as fatias foram submetidas a ensaios mecânicos de extrusão Push-out em uma máquina de ensaios mecânicos EMICcom célula de carga de 50N, a velocidade de 0,5mm/min.Os resultados obtidos de acordo com as diferentes profundidades de cimentação analisados foram os seguintes(p≥0,05) (Mpa),1 porção apical R+E (1,35±1,28), P+E (2,70±0,89), R+S (3,89±0,70), P+S (4,30±1,02), 2 porção médio apical R+E (1,38±1,28), P+E (2,98±1,43), R+S (4,02±1,14), P+S (4,49±1,82), 3 porção médio coronal R+E (2,46±0,73), P+E (3,72±0,78), R+S (4,85±0,71), P+S (6,14±0,73), 4 porção coronal R+E (5,59±1,08), P+E (5,74±1,06), R+S(6,71±1,07), P+S (7,40±1,51).Os resultados obtidos confirmam as três hipóteses testadas: h1,h2 e h3. / This work has sought to evaluatethe following hypothesis: Ho-there would be no influence ofresin cementandroot canalsealeron the durabilityof the union betweenthe fiberglass postand the dentin, H1- would influencethetypesealeron the durabilityof the union between thefiber glass post andthedentin: H2-wouldinfluencethe type ofresin cementon the durabilityof the union betweenthe fiber glass post andthedentinandH3-would influencethe depth ofcementationon the durabilityof the union between the fiber glass post andthe dentin. Fortyhuman canines, were randomly dividedinto four groups. G1(R +E)RelyxU100/Endofill, G2(P +E)PanaviaF2.0/EndoFill, G3(R +S) RelyxU100/Sealer26,G4(P +S) PanaviaF2.0/Sealer26.At the endof thecementingprocedure, the specimenswere sectionedin aprecisioncutting machine(Isomet 1000PrecisionLabCutSaw) on 4slices of2mm. Thenthe sliceswere subjected tomechanical testsextrusionPush-out in amechanical testing machinewith a load cellEMIC50N, speed 0.5 mm/ min.The resultsaccording to different depthcementinganalyzedwere as follows: (p ≥ 0.05) (Mpa) 1apical R+E (1.35 ±1.28), P+E (2.70 ±0.89),R+S(3.89±0.70), P+S(4.30±1.02), 2 middleapicalR+E(1.38±1.28), P+E(2.98±1.43), R+S(4.02± 1.14), P+S(4.49±1.82), 3 mediumcoronalR+E(2.46±0.73), P+E(3.72±0.78), R+S(4,85 ±0.71), P+S(6.14±0.73), 4 coronalR+E(5.59±1.08), P+E(5.74±1.06), R+S(6.71±1.07), P+S (7.40 ±1.51). The results also confirmedthe threehypothesis tested: h1, h2andh3.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-07-13T13:59:40Z No. of bitstreams: 1 emiliaadrianesilva.pdf: 2213397 bytes, checksum: 9d1b10517697f8e5f79ea9e57c98368a (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T16:55:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 emiliaadrianesilva.pdf: 2213397 bytes, checksum: 9d1b10517697f8e5f79ea9e57c98368a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T16:55:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 emiliaadrianesilva.pdf: 2213397 bytes, checksum: 9d1b10517697f8e5f79ea9e57c98368a (MD5) Previous issue date: 2011-09-15 / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do tratamento térmico na adesão de bráquetes monocristalinos silanizados após processo de silicatização. O estudo foi autorizado pelo comitê de ética da Universidade Federal de Juiz de Fora, parecer número 161/2010. Sessenta bráquetes de alumina monocristalina (Pure®, Orthotechnology, Tampa, FL, EUA) e sessenta dentes pré-molares superiores recém extraídos com finalidade ortodôntica foram randomicamente divididos em três grupos (n=20) de acordo com a estratégia de tratamento das superfícies adesivas: G1- sem tratamento (grupo controle); G2- jateamento com partículas de alumina revestidas por sílica-30 µm Cojet (3M ESPE, Irvine, CA, EUA) + aplicação do silano Monobond S (Ivoclar Vivadent, Shaan, Liechtenstein); e G3- jateamento com Cojet seguido de silanização e tratamento térmico da superfície com jato de ar (Secador Taiff Compacto Turbo, 6000W, São Paulo, SP) à 100ºC±1, a 1 cm por 60 s. Após os tratamentos de superfície, os bráquetes foram colados aos dentes com o adesivo ortodôntico Transbond XT Light Cure Adhesive (3M ESPE, Irvine, CA, EUA). Os espécimes foram armazenados em estufa com água destilada a 37ºC por 100 dias. Durante este período, metade dos espécimes de cada grupo foi submetida à termociclagem (-T) (6000 ciclos, 5ºC±1 e 55ºC±1) com banhos alternados de 30 s. Com o auxílio de uma máquina universal para ensaios mecânicos (EMIC - DL 1000, São José dos Pinhais, Paraná, Brasil – F.O. Unesp, São José dos Campos, SP) e um dispositivo tipo faca, os grupos foram submetidos ao ensaio de resistência adesiva ao cisalhamento (1mm/min) até que ocorresse o descolamento dos bráquetes. As superfícies fraturadas foram observadas sob microscopia óptica (30×) para categorização dos tipos de falha e determinação do índice de remanescente adesivo (IRA). Doze amostras representativas (n=2) foram também observadas em microscopia eletrônica de varredura. Os resultados foram submetidos à análise estatística ANOVA (2-fatores) e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey com nível de significância em 5% para ambos os testes. Para os resultados de resistência adesiva, o teste ANOVA revelou significância estatística para a interação dos fatores tratamento de superfície e termociclagem (p= 0,013) e para o tratamento de superfície (p= 0,0). O fator termociclagem não influenciou estatisticamente os resultados (p = 0,6974). As maiores e menores médias de resistência adesiva com o desvio padrão foram encontradas respectivamente em G3-T (27,59 ± 6,4 MPa) e G2-T (8,45 ± 6,7 MPa). Na análise da superfície após o ensaio, foi constatada a fratura de esmalte e/ou dentina em dezesseis espécimes. Com exceção do grupo G2, todos os outros apresentaram fratura de estrutura dentária. O modo de falha tipo misto e IRA = 1 (49,12%) foram os mais frequentes. Conclui-se que o tratamento térmico das superfícies silanizadas após o jateamento com partículas de alumina revestidas por sílica produziu valores de resistência adesiva similares aos valores encontrados no grupo controle. / The objective of this study was to evaluate the effect of heat treatment on bond strength of monocrystalline brackets silica coating and silanization process. The study was approved by the ethics committee of the Federal University of Juiz de Fora, autorization number 161/2010. Sixty brackets monocrystalline alumina (Pure®, OrthoTechnology, Tampa, FL, EUA) and sixty premolars recently extracted for orthodontic were randomly, divided in three groups (n=20) according to the strategy of treating surfaces adhesive: G1 – no treatment (control group), G2 – blasting with alumina particles coated with silica 30 µm Cojet (3M ESPE/ Irvine, CA, EUA) + application of silane Monobond S (Ivoclar Vivadent, Shaan, Liechtenstein), and G3 – blasting (Cojet) + silanization + heat treatment with a hairdryer (Taiff Compact Turbo Dryer, 6000W, São Paulo, SP) to 100ºC ± 1, to 1 cm, for 60 s. After surface treatments, the brackets were bonded to teeth with orthodontic adhesive Transbond XT Light Cure Adhesive (3M ESPE, Irvine, CA, EUA). The specimens were stored in distilled water for 100 days. During this period, half of the specimens of each group was subjected to thermocycling (-T) (6000 cycles, 5ºC ± 1ºC and 55ºC ± 1) with baths of 30 seconds. With the support of a universal mechanical testing machine (EMIC – DL 1000, Pinhais, Paraná, Brazil – FO/UNESP, São José dos Campos, SP) an device like a knife, the groups were submitted a shear bond strength test (1mm/min) until failure. The fractured surfaces were observed under debonded specimen surfaces were examined with a stereomicroscope (30×) to classify the types of failure and determine the adhesive remnant index (ARI). Twelve representative samples (n=2) were also observed in scanning electron microscopy. The results were statically analyzed using ANOVA (two-way) and means were compared by Tukey test with significance level of 5% for both tests. For the results of bond strength, the ANOVA revealed statistical significance for the interaction of surface treatment and thermocycling (p= 0,013) and the surface treatment (p= 0,0). The factor thermocycling did not influence the results statistically (p= 0,6974). The highest and lowest mean bond strength including the standard deviation were found in G3T (27,59 ± 6,4 MPa) and G2T (8,45 ± 6,7MPa). In the analysis of the surface after test was found sixteen specimens with enamel/dentin fracture. Except for G2, all others groups had fractured tooth structure. The failure mode mixed and IRA=1 (49,12%) were the most frequent. The heat treatment of the silanized surfaces after blasting with alumina particles coated with silica produced bond strength values similar to those found in the control group.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-29T17:33:39Z No. of bitstreams: 1 edsonjosedecarvalhomagacho.pdf: 642099 bytes, checksum: 1b2e21e4489c6bef6338142877dc177b (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-30T11:23:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 edsonjosedecarvalhomagacho.pdf: 642099 bytes, checksum: 1b2e21e4489c6bef6338142877dc177b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T11:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 edsonjosedecarvalhomagacho.pdf: 642099 bytes, checksum: 1b2e21e4489c6bef6338142877dc177b (MD5) Previous issue date: 2010-01-25 / Trata da avaliação da adesão medicamentosa em pessoas que desenvolveram a doença renal crônica já que favorece a ocorrência de desfechos clínicos desfavoráveis. O uso irregular das medicações pode impactar desfavoravelmente o curso da doença renal crônica (DRC), relativamente à progressão da doença e ocorrência de morbimortalidade cardiovascular. O presente estudo objetivou identificar os fatores associados à adesão medicamentosa em pacientes com doenças renais, acompanhados num ambulatório de nefrologia de atendimento multidisciplinar. Trata-se de um estudo de coorte prospectivo, realizado por um ano a partir de outubro de 2007, envolvendo 149 pacientes, convidados a participar do estudo no momento do seu comparecimento para consulta. A adesão medicamentosa foi avaliada pelo método do autorrelato em entrevista no início da pesquisa (período basal) e 12 meses após. Foi avaliada a adesão às classes medicamentosas de anti-hipertensivos betabloqueadores (BB), inibidores da enzima de conversão da angiotensina (IECA), bloqueador de receptor da angiotensina (BRA), bloqueadores de canais de cálcio (BcCa), diuréticos, às estatinas e ao ácido acetil salicílico. Foi considerado aderente o paciente que relatou os medicamentos e respectivas quantidades de comprimidos em uso prescrito na consulta que antecedeu a entrevista. O teste Minimental State Examination (MMSE) foi utilizado para excluir pacientes com declínio cognitivo. Na análise univariada realizada no período basal, os pacientes aderentes (82,6%) diferiram dos não aderentes (17,4%) por apresentar menor média de idade (49 ± 16,8 vs 59 ± 14,1, p=0,006), fazer uso de menor número de comprimidos por dia (6,3 ± 3,9 vs 8,5 ± 4,3, p=0,008), apresentar menor média de creatinina sérica (1,84 ± 0,91 vs 2,32 ± 1,25, p=0,030), maior média de filtração glomerular (52,1 ± 29,31 vs 35,24 ± 19,03, p=0,01), não apresentar a doença coronariana (0R=0,295,IC95%=[0,096-0,902],p=0,037) como comorbidade mais frequente, e não depender de cuidador na administração dos seus medicamentos (0R=4,163,IC95%=[1,688-10,269],p=0,003). Após ajuste do modelo de regressão logística, permaneceram como fatores significativamente associados à não adesão o uso de mais que cinco comprimidos por dia (IC95%=[0,99-7,41],p=0,052) e a administração da medicação feita por terceiros (OR=3,53,IC95%=[1,39-8,89],p=0,007). Na avaliação longitudinal foi observado que o percentual de não aderência aumenta com o tempo, quando se compara o período basal com a avaliação final aos 12 meses (17% VS 27%, p= 0,04). Conclusão: Na população estudada, a não aderência foi identificada em 17,8% de pacientes e apresentou associação significativa com o maior número de comprimidos em uso por dia e à administração dos medicamentos por terceiros e aumenta com o passar do tempo. / Introduction: Non-adherence to drug therapy favors the occurrence of adverse clinical outcomes in chronic diseases. Irregular use of medications can adversely impact the course of chronic kidney disease (CKD), regarding disease progression and occurrence of cardiovascular morbidity and mortality. This study aimed at identifying factors associated with drug therapy in patients with kidney disease, followed in an outpatient nephrology clinic of interdisciplinary care. Methods: This is a prospective cohort study which was conducted over a year from October 2007, involving 149 patients invited to participate in the study at the time of their visit. Adherence to drug therapy was evaluated by a self-report method in an interview at baseline and 12 months later. We evaluated adherence to drug classes of antihypertensive beta-blockers (BB), angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEIs), angiotensin receptor blockers (ARB), calcium channel blockers (CCB), diuretics, statins, and acetylsalicylic acid. The patient that reported the drugs and the respective number of prescribed pills in use in the visit that preceded the interview was considered adherent. Test Minimental State Examination (MMSE) was used to identify patients with cognitive decline, in which the assessment was done with their caregivers. Results: The univariate analysis performed at baseline showed that adherent patients (82.6%) differed from non-adherent (17.4%) due to their lower mean age (49 ± 16.8 vs 59 ± 14.1, p=0.006), use of fewer pills per day (6.3 ± 3.9 vs 8.5 ± 4.3, p=0.008), lower mean serum creatinine (1.84 ± 0.91 vs 2 32 ± 1.25, p=0.030), higher mean glomerular filtration rate (52.1 ± 29.31 vs 35.24 ± 19.03, p=0.01), absence of coronary artery disease (OR, 0.295; 95% CI, 0,096-0,902, p=0.037), such as more frequent comorbidity, and non reliance on caregivers for the administration of their medications (OR, 4.163, 95%, 1,688-10,269, p=0.003). After adjusting the logistic regression model, the factors that remained significantly associated with non-adherence were daily use of more than five pills (OR, 2.71, 95%, 0,99-7,41, p=0.052) and drug administration made by caregivers (OR, 3.53, 95%, 1,39-8,89, p=0.007). The longitudinal evaluation showed that the percentage of non-adherence increases with time, when comparing the baseline period with the final evaluation at 12 months (17% vs 27%, p=0.04). Conclusion: In the studied population, non-adherence was identified in 17.8% of the patients and significantly associated with the greatest number of pills used per day, drug administration by third parties, and with increase over the disease course.

Orientador: Priscila Gava Mazzola / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T03:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cruz_AlineAparecidada_M.pdf: 2377605 bytes, checksum: b42d9527d3edb77d190453e2eb758d31 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Objetivos: Avaliar o impacto do seguimento farmacoterapêutico sobre a adesão à hormonioterapia, qualidade de vida e nível de informação sobre a doença e o tratamento de mulheres com câncer de mama em uso de tamoxifeno. Casuística e métodos: Tratou-se de um estudo prospectivo longitudinal. O estudo foi realizado no Hospital da Mulher Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti - Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher - CAISM / UNICAMP, Campinas ¿ SP (ambulatório de oncologia clínica) entre janeiro de 2012 e dezembro de 2013. Foi realizada amostragem por conveniência. O acompanhamento farmacoterapêutico foi realizado pelo período de 1 ano, utilizando-se como método o Pharmacotherapy Workup (PW). Foram aplicados questionários validados para a avaliação de qualidade de vida (QV) (EORTCQLQ-C30 3.0 e QLQ-BR23), avaliação da adesão ao tratamento medicamentoso (Teste de Morisky-Green (TMG)) e de avaliação do nível de informação sobre a doença e o tratamento (EORTCQLQ-INFO25) no início e ao final do acompanhamento. Resultados: Um total de 60 voluntárias foram incluídas inicialmente e 21delas permaneceram até o final do estudo. Estas apresentavam em média 2,0 ±1,4 Problemas Relacionados aos Medicamentos (PRMs) no início do acompanhamento, valor que diminuiu para 1,2 ±1,0 PRMs por voluntária (p<0,05) ao final do estudo. Os PRMs de segurança foram os mais numerosos e também foram aqueles que tiveram maior redução.A variação das pontuações dos 23 quesitos avaliados nos questionários de QV aplicados não foi significativa, oscilando pouco em torno da média inicial. Observou-se que os quesitos com maior pontuação inicialmente foram "Função social" (88,3 ± 30,6) e "Imagem corporal" (78,1 ± 31,2) e permaneceram com a melhor pontuação ao final do período de um ano. A adesão ao tratamento com tamoxifeno não apresentou diferença estatística ao final do período de estudo (p=0,289). A avaliação da quantidade de informação recebida pelas participantes quanto ao seu tratamento não apresentou diferenças significativas ao final do período de estudo para 7 dos 8 itens avaliados. Conclusão: O seguimento farmacoterapêutico foi efetivo na redução de PRMs deste grupo de mulheres, porém não modificou significativamente os parâmetros qualidade de vida, adesão ao tratamento com tamoxifeno e nível de informação sobre a doença e o tratamento / Abstract: Aims: To evaluate the impact of Pharmaceutical Care (PC) on adherence to hormonal therapy, quality of life (QOL) and level of information about the disease and treatment of breast cancer patients using tamoxifen. Methods: This was a longitudinal prospective study. It was conducted at Woman¿s Hospital Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti - Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher - CAISM/UNICAMP, Campinas ¿ SP between January 2012 and December 2013. Sampling was done for convenience. Data for the study were collected during one year, using the Pharmacotherapy Workup method (PW). We used validated questionnaires to assess quality of life (EORTC QLQ - C30 3.0 and QLQ - BR23), adherence to medication (Morisky-Green test (TMG)) and level of information about the disease and treatment (EORTC QLQ - INFO25). Results: A total of 60 volunteers were included and 21 completed the study. We initially observed a 2.0 ± 1.4 (mean ± standard deviation) drug therapy problems (DTPs) per patient and this value decreased to 1.2 ± 1.0 DTPs per patient (p < 0.05) at the end of the study. The safety DTP were the most numerous of all and were also those who had the greatest reduction. The range of scores for the two QOL questionnaires used was small, oscillating slightly around the initial mean. It can be observed that questions with higher scores initially were "social function" (88.3 ± 30.6) and "body image" (78.1 ± 31.2) and remained with the highest score at the end of one year. Adherence to treatment with tamoxifen showed no statistical difference during the period (p=0,289). The evaluation of the amount of information received by patients on their treatment was not statistically significant at the end of the study period for most items assessed. Conclusion: The PC was effective in reducing drug therapy problems of this group, but was not able to cause a statistically significant impact on quality of life parameters, adherence to tamoxifen and level of information about the disease and the treatment for the group of patients studied / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Kleber Gomes Franchini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T14:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cordeiro_IsabelleBezerra_D.pdf: 17466566 bytes, checksum: de71f83d2b4d3c8e0f0269f5d61d332d (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A proteína Focal Adhesion Kinase (FAK; PTK2) participa de vários processos celulares. A identificação das proteínas parceiras de FAK tem contribuído para o entendimento de suas múltiplas funções celulares. Utilizando um sistema de indução de FAK fusionada a uma cauda de FLAG, combinada com análises por espectrometria de massas (MS), identificamos proteínas associadas à FAK em células HEK293. Um total de 153 proteínas foram repetidamente identificadas com alta resolução por experimentos de MS. Além de confirmar interações já previamente descritas como Paxillin (PXN), Heat shock protein Hsp90 (HSP90) e Transforming growth factor beta-1-induced transcript 1 protein (TGF?1I1), as análises por MS revelaram um novo conjunto de proteínas associadas à FAK, incluindo proteínas envolvidas nas vias de síntese de proteínas, expressão gênica, crescimento celular, proliferação, morte e sobrevivência celular. Além disso, análises de bioinformática das vias indicaram que a FAK se associa com um conjunto de 30 proteínas envolvidas com a via de modificação pós-transcricional do RNA, incluindo a proteína Serine/arginine-rich splicing factor 2 (SC-35; SRSF2), que é um marcador de speckles nucleares. Esse conjunto de proteínas está associado ao spliceossomo e um conjunto similar de proteínas também foi identificado com os experimentos que utilizaram somente o domínio FERM da FAK. Validações por Western Blotting e imunocitoquímica demonstraram que FAK se associa e co-localiza com a proteína SC-35 no núcleo celular. Ainda identificamos um papel funcional da FAK no splicing do mRNA. Demonstramos que FAK pode modificar o padrão de splicing de um gene repórter E1A ao ser superexpressa em células HEK. Nosso trabalho propõe novas funções da FAK no núcleo, indicando que esta pode estar envolvida em eventos relacionados à função do RNA, como a regulação do splicing do mRNA / Abstract: Focal adhesion kinase (FAK; PTK2) has roles in many cellular processes. The identification of protein partners for FAK has greatly contributed to our understanding of its multiple function. Using inducible FLAG-tagged FAK combined with affinity/purification mass spectrometry (MS) approach, we identified proteins associated with FAK in HEK293 cells. A total of 153 proteins were repeatedly detected in high-resolution MS measurements. Beyond the well characterized partnering with Paxillin (PXN), Heat Shock protein 90 (HSP90) and Transforming growth factor beta-1-induced transcript 1 protein (TGFB1I1), analysis of MS data uncovered novel sets of proteins that associate with FAK, playing a role in protein synthesis, gene expression, cellular growth, proliferation, death and survival. In addition, the network analysis established the unexpected finding that a module of 30 proteins linked to RNA post-transcriptional modifications are recruited by FAK, including Serine/arginine-rich splicing factor 2 (SC-35; SRSF2), which is a marker of the nuclear speckles. Indeed, this module is found to be enriched by proteins associated with spliceosome. Remarkably, a similar set of proteins was also recruited by FAK N-terminal FERM domain. Biochemical and imunofluorescence validations established that FAK associates and co-localizes with SC-35 protein at the cell nuclei. We further pinpoint a functional role of FAK in mRNA splicing. We showed that FAK can modify the splicing site selection of the adenoviral E1A minigene in a dose-dependent manner. Our work provides new insights into the molecular function of FAK in the nucleus, indicating that it may be involved in events related to RNA function, such as pre-mRNA splicing / Doutorado / Bioquimica / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Karin Spat Albino Barcellos Silveira, Sara Teresinha Olalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T03:35:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bernusso_VanessaAline_M.pdf: 2366309 bytes, checksum: d89f227d922fcfaba6696c0e1af0fdae (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: VASP (Vasodilator-stimulated phosphoprotein) e Zyxin são proteínas reguladoras de actina que controlam a adesão célula-célula. Zyxin dirige a montagem da actina através da interação e recrutamento da VASP a sítios específicos da adesão. A fosforilação da VASP ou da Zyxin altera suas atividades nas junções aderentes. PKA fosforila VASP em serina 157, regulando, assim, importantes funções celulares de VASP. VASP interage com ABL e é substrato da oncoproteína BCR-ABL. A presença da proteína BCR-ABL promove a oncogênese em pacientes com leucemia mieloide crônica (LMC) devido à ativação constitutiva da atividade tirosina quinase. Apesar de já descrita alteração da expressão de VASP e Zyxin em diferentes tumores epiteliais, o papel de VASP e Zyxin na LMC, na via de sinalização BCR-ABL e a participação destas proteínas na hematopoiese são desconhecidos. Desta maneira, demonstramos aqui ausência de p-VASP ser157 em células de medula óssea de pacientes com LMC, em contraste com a presença de p-VASP ser157 em doadores saudáveis. Pacientes com LMC em remissão, responsivos a inibidores de tirosina quinase, apresentam p-VASP ser157, enquanto os pacientes resistentes não expressam p-VASP ser157. Utilizando células K562 inibidas para VASP ou Zyxin, observamos que VASP e Zyxin modulam as proteínas anti-apoptóticas BCL-2 e BCL-XL da via de sinalização do BCR-ABL. Em adição, células K562 silenciadas para a VASP apresentam diminuição na atividade de FAK y925 e demonstramos que VASP interage com FAK. A expressão de VASP e Zyxin e de suas formas ativas aumenta durante a diferenciação megacariocítica e a inibição de VASP implica em diminuição na expressão do marcador CD61. Identificamos no presente estudo a participação de VASP e Zyxin na via do BCR-ABL, regulando a expressão de proteínas efetoras anti-apoptóticas e, também, na diferenciação megacariocítica. Desta maneira, a expressão alterada da atividade de VASP nos pacientes com LMC pode contribuir para a patogênese da doença, seja afetando a diferenciação celular ou a adesão das células leucêmicas / Abstract: VASP (vasodilator-stimulated phosphoprotein) and Zyxin are actin regulatory proteins that control cell-cell adhesion. Zyxin directs actin assembly by interacting and recruiting VASP to specific sites of adhesion. The phosphorylation of VASP and Zyxin modifies their activity in cell-cell junctions. PKA phosphorylates VASP at serine 157 regulating VASP cellular functions. VASP interacts with ABL and VASP is a substrate of BCR-ABL oncoprotein. The presence of BCR-ABL protein drives oncogenesis in patients with chronic myeloid leukemia (CML) due to a constitutive activation of tyrosine kinase activity. It has been described an altered expression of VASP and Zyxin in different types of tumor; however the function of VASP and Zyxin in CML, in BCR-ABL pathway and in hematopoiesis remains unknown. We describe here the absence of p-VASP ser157 in CML bone marrow cells, in contrast to p-VASP ser157 expression in healthy donors. Patients responsive to tyrosine kinase inhibitors present p-VASP ser157, while resistant patients do not have p-VASP ser157. In K562 cells we observed that VASP and Zyxin modulate anti-apoptotic proteins BCL-2 and BCL-XL. VASP depletion in K562 cells decreases FAK y925 activity and VASP interacts with FAK. Expression of VASP, p-VASP, Zyxin and p-Zyxin increases during megakaryocyte differentiation and VASP inhibition affects this differentiation through reduced CD61 expression in VASP depleted cells. We identify here the participation of VASP and Zyxin in BCR-ABL pathway affecting anti-apoptotic proteins and, also, in megakaryocyte differentiation. Then, the altered expression of VASP activity in CML patients may contribute to CML pathogenesis, affecting cellular differentiation or leukemic cell adhesion / Mestrado / Fisiopatologia Médica / Mestra em Ciências

Orientador: Zelia Zilda Lourenço de Camargo Bittencourt / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T19:43:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_SilviadosSantos_M.pdf: 643334 bytes, checksum: 1213c7b103a4dea1892afe5a8078df89 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Interdisciplinaridade e Reabilitação / Mestre em Saúde, Interdisciplinaridade e Reabilitação

Orientador: Fernando Galembeck / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-24T05:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Burgo_ThiagoAugustodeLima_D.pdf: 54614783 bytes, checksum: 04e6b01b521de52d69d91a83d891d034 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A triboeletrização de polímeros gera domínios macroscópicos de carga positiva e negativa, verificando a geometria fractal de mosaicos de carga previamente detectados por microscopia de sonda elétrica. Utilizando métodos analíticos adequados (espectroscopia de perda de energia de elétrons, microespectroscopia infravermelho/Raman e carbonização/colorimetria) e cálculos teóricos, espécies positivas foram identificadas como hidrocarbocátions e espécies negativas como fluorocarbânions. A triboeletrização de PTFE com PE é entendida como segue: a ruptura homolítica mecanoquímica da cadeia é seguida por transferência eletrônica dos radicais livres de hidrocarbonetos para os radicais mais eletronegativos do fluorocarbono. Os íons gerados pelos fragmentos de cadeia sofrem auto-ordenamento de acordo com a teoria de Flory- Huggins, formando os padrões macroscópicos observados experimentalmente. Estes resultados mostram que a triboeletrização só pode ser compreendida considerando os eventos químicos complexos provocados por ação mecânica, acoplados a conceitos bem estabelecidos pela físico-química. Além disso, o atrito entre superfícies dielétricas produz padrões de carga fixos e estáveis que contribuem para interações eletrostáticas entre superfícies. Medidas de coeficiente de resistência de rolamento de esferas de vidro sobre PTFE triboeletrizado, bem como de atrito estático de pellets de polietileno e imagens de microscopia de força lateral, mostraram que as forças de atrito aumentam muitas vezes em superfícies triboeletrizadas, nas quais as contribuições das interações eletrostáticas podem suplantar todas outras contribuições. Estes resultados são explicados considerando um mecanismo segundo o qual a indução de carga por uma superfície triboeletrizada no contato com outra superfície dissipa energia durante o atrito, sugerindo novas abordagens para controlar atrito em interfaces pelo controle da formação de tribocargas / Abstract: Tribocharged polymers display macroscopically patterned positive and negative domains, verifying the fractal geometry of electrostatic mosaics previously detected by electric probe microscopy. Using suitable analytical techniques (electron energy-loss spectral imaging, infrared/Raman microspectrophotometry and carbonization/colorimetry) and theoretical calculations, the positive species were identified as hydrocarbocations and the negative species as fluorocarbanions. A comprehensive model is presented for PTFE tribocharging with PE: mechanochemical chain homolytic rupture is followed by electron transfer from hydrocarbon free radicals to the more electronegative fluorocarbon radicals. Polymer ions self-assemble according to Flory-Huggins theory, thus forming the experimentally observed macroscopic patterns. These results show that tribocharging can only be understood by considering the complex chemical events triggered by mechanical action, coupled to well-established physicochemical concepts. Also, friction between dielectric surfaces produces patterns of fixed, stable electric charges that in turn contribute electrostatic components to surface interactions between the contacting solids. The coefficient of rolling resistance of glass beads on tribocharged PTFE was measured, as well as the static friction coefficient of polyethylene pellets on PTFE and friction force on the scanning probe during lateral-force microscopy imaging. Results show that friction coefficients may increase many-fold on tribocharged surfaces and the contribution of electrostatic interactions may supersede all other contributions to friction. These results are explained considering a mechanism according to which charge induction by an electrified surface on a contacting body accounts for energy dissipation during friction suggesting new approaches to control friction coefficients, by controlling tribocharge formation / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T05:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_AngelicaAparecidaAntoniellis_M.pdf: 1268408 bytes, checksum: 22c750391706cfa07cb1fd66d9e8a9c1 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Durante a resposta inflamatória, os neutrófilos e outros leucócitos aderem ao endotélio, deixando os vasos sanguíneos e movimentando-se ativamente em direção ao foco inflamatório. A migração dos neutrófilos para sítios inflamatórios depende de uma série de eventos adesivos e quimiotáticos, resultantes da ativação de moléculas de adesão como as selectinas e integrinas e receptores de quimiocinas. Devido às suas propriedades, os neutrófilos podem ser ativados por proteínas de sinalização intracelular, as Rho GTPases, que auxiliam os neutrófilos a desempenhar esta função por interferirem em mudanças no citoesqueleto. Estas proteínas também estão envolvidas na adesão e proliferação celular. Os neutrófilos são capazes de sintetizar óxido nítrico (NO), sendo que esta produção de NO é um importante componente da resposta imune inata durante a inflamação. Estudos demonstraram que os neutrófilos têm papel indutor na geração de inflamação e esforços visando compreender o mecanismo adesivo destas células nos processos inflamatórios podem ser um ponto chave para intervenções farmacológicas em doenças que são caracterizadas por inflamação vascular com consequente obstrução de fluxo sanguíneo. Diante disso, este estudo objetivou avaliar o papel da via do NO e das Rho GTPases no mecanismo pelo qual os estímulos inflamatórios aumentam a adesão de neutrófilos. Também foi avaliado os efeitos da sinvastatina na modulação das propriedades adesivas de neutrófilos, como ferramenta para auxiliar no estudo do envolvimento das Rho GTPases, Rac1 e RhoA, no processo adesivo destas células. Este mecanismo foi estudado a partir de neutrófilos isolados do sangue periférico por ensaios de adesão estática e em fluxo e citometria de fluxo. Além disso, foi analisada a expressão gênica das Rho GTPases, Rac1 e RhoA, através de PCR em tempo real. Sob potente estímulo de TNF-?, as propriedades adesivas dos neutrófilos aumentam significativamente. Inibidores de NO sintase e doadores de NO não alteraram as propriedades adesivas de neutrófilos quando estimulados com TNF-?. Não observamos grande diferença quanto à adesão e expressão das moléculas de adesão na superfície dos neutrófilos usando inibidor de Rac1, porém o composto Y-27632, inibidor de ROCK (Rho-associated coiled coil forming protein serine/threonine kinase), proteína efetora de RhoA, mostrou aumentar a adesão dos neutrófilos sob condições basais. O uso da sinvastatina modulou as propriedades adesivas e a expressão de Mac-1 nos neutrófilos na presença de um estímulo inflamatório, apoiando evidências de seu uso como anti-inflamatório. Em destaque foi observado que o Y-27632 reverteu o efeito da sinvastatina sob estímulo de TNF-? e que o mevalonato e os isoprenóides intermediários da via do colesterol, GGPP e FPP, não foram capazes de reverter o efeito da sinvastatina. Dados indicam que a via de sinalização dependente em NO-GMPc aparentemente não modula as propriedades adesivas dos neutrófilos sob condições inflamatórias. Por outro lado, resultados indicam que as Rho GTPases parecem estar envolvidas na regulação das propriedades adesivas dos neutrófilos sob condições inflamatórias. O envolvimento de ROCK na adesão celular ainda não está completamente compreendido, mas de acordo com nossos resultados podemos sugerir a hipótese de que esta enzima efetora tenha um papel na inducão de adesão dos neutrófilos na presença de um estímulo inflamatório. A sinvastatina foi capaz de inibir as propriedades adesivas de neutrófilos quando ativados indicando mais uma utilidade desta classe de drogas no tratamento de doenças inflamatórias. O papel das Rho GTPases nas propriedades adesivas dos neutrófilos sob condições inflamatórios ainda precisa ser melhor elucidado / Abstract: During the inflammatory response, neutrophils and other leukocytes adhere to the endothelium leaving the blood vessels and actively moving towards the inflammatory focus. The migration of neutrophils to inflammatory sites depends on a variety of chemotactic and adhesive events resulting from the activation of adhesion molecules such as selectins and integrins and chemokine receptors. Due to its properties, neutrophils may be activated by small intracellular signaling proteins, the Rho GTPases, which help neutrophils to fulfill this function by interfering in cytoskeletal changes. These proteins are also involved in cell adhesion and proliferation. The neutrophils are able to synthesize nitric oxide (NO), and this production of NO is an important component of innate immunity during inflammation. Studies have shown that neutrophils play a role in inducing inflammation and generation of efforts to understand the adhesive mechanism exerted by neutrophils in inflammatory processes may be a key point for pharmacological interventions for diseases that are characterized by vascular inflammation with consequent obstruction of blood flow. Thus, this study aimed to evaluate the role of the NO pathway and the Rho GTPases in the mechanism by which inflammatory stimuli increases neutrophil adhesion. We also assessed the effects of simvastatin on neutrophil adhesive properties as a tool to aid in studying the involvement of Rho GTPases, RhoA and Rac1 in these mechansims. Neutrophils were isolated from peripheral blood and aspects of adhesion studied by static and flow adhesion assays as well as flow cytometry. In addition, we analyzed the gene expression of Rho GTPases, Rac1 and RhoA by real time - PCR. Following a strong stimulation with TNF-?, the adhesive properties of neutrophils increase significantly. NO synthase inhibitors and NO donors did not modify the adhesive properties of neutrophils when stimulated with TNF-?. We did not observe any significant differences in the adhesion of neutrophils and the expression of adhesion molecules on their surface in the presence of a Rac1 inhibitor. However, an inhibitor of ROCK (Rho-associated coiled coil forming protein serine/threonine kinase, an efector protin for the RhoA), Y-27632, was shown to increase the adhesion of neutrophils under basal conditions. The use of simvastatin decreased adhesive properties and modulated the expression of Mac-1 of neutrophils in the presence of an inflammatory stimulus, supporting the use of this class of drugs as anti-inflammatory agents. Importantly, the attenuating effects of simvastatin on TNF-? stimulated neutrophil adhesion were reversed by Y-27632, whereas the cholesterol pathway intermediates, mevalonate, and the isoprenoids, GGPP FPP, were unable to reverse the effects of this drug. Data indicate that the NO-cGMP signaling pathway does not appear to modulate the adhesive properties of neutrophils under inflammatory conditions. Moreover, results suggest that Rho GTPases may be involved in the regulat ion of the adhesive properties of neutrophils. The involvement of ROCK in cellular adhesion is not yet fully understood but, according to our findings, it may be hypothesized that this protein effector has a role in the induction of neutrophil adhesion. Simvastatin was able to inhibit the adhesive properties of neutrophils when activated, indicating another use of this class of drugs for the treatment of inflammatory diseases. The role of Rho GTPases in the adhesive properties of neutrophils under inflammatory conditions should be further elucidated / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador : Kleber Gomes Franchini / Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T00:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antunes_JoaoEustaquio_D.pdf: 5472161 bytes, checksum: d84f6389e6baf3e2959126f6345e6a14 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A compreensão de como a quinase de adesão focal (FAK) contribui para os processos de hipertrofia, insuficiência cardíaca e câncer são de grande interesse científico. Um dos nossos objetivos específicos é desenvolver inibidores desta tirosina quinase com vistas à sua aplicação terapêutica no tratamento de insuficiência cardíaca e câncer. Portanto, foi realizado planejamento racional e a síntese de inibidores farmacológicos para a FAK. Estudos computacionais de docking e farmacocinéticos permitiram selecionar 28 estruturas de quinazolina mais promissoras em relação à capacidade de inibir a FAK. Desta forma, economiza-se tempo e dinheiro para obter-se a síntese apenas de 6 das estruturas pré-selecionadas. Uma quinazolina denominada 4-BZLO foi sintetizada após o planejamento racional. Tal quinazolina foi capaz de inibir em 50% da atividade da FAK in vitro com aproximadamente 1nM. Os testes de pureza da síntese, absorção por via oral, melhor resultado em triagem em células que superexpressam a FAK e o melhor resultado para triagem em duas linhagens de célula leucêmicas e tumor sólido permitiram direcionar o 4- BZLO para ser o composto líder deste estudo. O composto 4-BZLO apresentou resultado promissor para experimentos com camundongos submetidos à coarctação da aorta, que induz hipertrofia cardíaca. Para avaliar se o tratamento preventivo seria eficiente para hipertrofia cardíaca, foi realizado experimento em animais tratados com 30mg/Kg/dia durante 30 dias. Após este período, foi realizada cirurgia de coarctação da aorta para induzir a hipertrofia cardíaca nos animais e os mesmos foram tratados por mais 30 dias. Parâmetros tais como: peso médio do ventrículo esquerdo sobre peso corpóreo de cada animal (LVW/BW), medida da espessura da parede do ventrículo esquerdo (LVWT) e parâmetros histológicos (diâmetro dos miócitos cardíacos) demonstrou que nos animais tratados houve regressão da hipertrofia comparada ao controle (animais sem tratamento). Outro estudo realizado no qual os animais foram tratados de maneira curativa, ou seja, o tratamento foi realizado somente após a coarctação da aorta demonstrou uma melhora no quadro de hipertrofia e função cardíaca. O modelo de fibrose cardíaca foi usado para avaliar se tratamento com 4-BZLO é capaz de reduzir a fibrose cardíaca nos animais. Os resultados obtidos demonstraram que os animais tratados com 4-BZLO por 30 dias apresentaram redução da acumulação de colágeno, que é um indicador de fibrose, em relação ao controle. Nosso laboratório desenvolveu camundongos transgênicos específicos para a FAK que desenvolve moderada hipertrofia cardíaca. Assim, tal modelo permitiu testar o tratamento com o 4-BZLO para hipertrofia cardíaca induzida pela FAK. Os animais transgênicos específicos para a FAK foram tratados com o composto líder e houve melhora dos parâmetros cardíacos. Os resultados obtidos permitiram concluir que a quinazolina denominada 4-BZLO é um bom candidato a fármaco como inibidor da FAK / Abstract: Understanding how the focal adhesion kinase (FAK) contributes to the processes of hypertrophy, heart failure and cancer are of great scientific interest. One of our goals is to develop specific inhibitors of this tyrosine kinase with potential therapeutic application in the treatment of heart failure and cancer. In this view, we used rational design to select a group of possible FAK inhibitors. Computational studies such as docking and pharmacokinetic studies allowed us to select 28 structures most likely to inhibit FAK. In this way, we saved up time and money in devising the synthesis of 6 pre-selected structures. Accordingly, quinazoline 4-BZLO was prepared and was able to inhibit the in vitro activity of FAK by 50% at a concentration of approximately 1nM. Several factors contributed to 4-BZLO being chosen as the lead compound in this study: 1) the degree of purity achieved during synthesis; 2) good oral bioavailability; 3) the best inhibition values in cells over expressing FAK in screening, 4) the best result against two leukemic cell lines and one solid tumor target. 4-BZLO showed promising results in experiments with mice subjected to aortic coarctation, which develops cardiac hypertrophy. To assess whether 4- BZLO would be effective for the preventive treatment of cardiac hypertrophy, an experiment was conducted in animals treated with 30 mg/kg/day for 30 days. After this period, an aortic coarctation was performed surgically in order to induce cardiac hypertrophy in animals, and these were further treated for 30 days. Parameters such as left ventricular weight per body weight ratio (LVW/BW), measurement of the left ventricle wall thickness (LVWT), and histological parameters, such as the diameter of cardiac myocytes in treated animals showed that there was a regression of hypertrophy, compared to untreated animals (control). A similar study, where treatment with 4-BZLO was performed only after aortic coarctation showed an improvement regarding hypertrophy and cardiac function. A cardiac fibrosis model was used and the results obtained demonstrated that animals treated with 4-BZLO for 30 days showed a reduction of collagen accumulation, which is an indicator of fibrosis, equal to the control group. Our laboratory has developed transgenic mice specific for FAK, which develop moderate cardiac hypertrophy. Consequently, this model allows us to test 4-BZLO for the treatment of FAK induced cardiac hypertrophy. The transgenic animals were treated with 4-BZLO, leading to an improvement of the cardiac parameters. These results showed that synthetic quinazoline 4-BZLO is a good drug candidate for the inhibition of the FAK enzyme / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia