Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-06-26T01:11:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 316504.pdf: 1547020 bytes, checksum: b34d09659e361589831135b8d5198ea5 (MD5) / A pesquisa por novos compostos biologicamente ativos obtidos a partir de produtos naturais, nos últimos anos, tem sido incentivada em todo o mundo, pois são considerados muito importantes na descoberta de novos fármacos para varias doenças. Diversas estratégias, baseadas em diferentes tipos de observações, juntamente com triagens randomizadas, têm sido usadas na investigação da biodiversidade com o intuito de contribuir para o aumento do arsenal terapêutico anti-herpético. As infecções causadas pelos vírus herpéticos são um grave problema de saúde pública, devido à capacidade dos mesmos de causarem infecções agudas e recorrentes, além do aparecimento de cepas resistentes ao aciclovir, fármaco de primeira escolha disponível. Diante deste quadro, o Laboratório de Virologia Aplicada da UFSC avalia, há vários anos, a atividade antiviral de produtos naturais e sintéticos, tendo encontrado resultados promissores para muitas das amostras testadas. Inicialmente, a citotoxicidade (CC50) e a atividade anti-HSV (CI50) foram avaliadas através do ensaio colorimétrico do MTT e do ensaio de redução do número de placas de lise, respectivamente. De acordo com os resultados obtidos através da triagem dos representantes oriundos da biodiversidade terrestre e marinha, três amostras (a fração rica em trissulfato de halistanol: TSH e os compostos TSH-A e TSH-C) foram selecionadas devido aos seus promissores índices de seletividade (IS= CC50/CI50) de 15,33; 2,46 e 1,95 frente ao HSV-1 (cepa KOS). O mecanismo de ação foi avaliado através de uma sequência de ensaios, que visou avaliar a possível interferência destas amostras nas diversas etapas do ciclo de replicação viral. Na avaliação do tempo de adição, estas amostras inibiram significativamente a replicação viral, quando foram adicionadas simultaneamente ou até 3h pós-infecção. As amostras avaliadas apresentaram atividade virucida e inibiram a entrada dos vírus nas células Vero (adsorção e penetração). A análise da expressão proteica viral por Western blotting mostrou que as amostras TSH-A e TSH-C inibiram a expressão das proteínas ? (ICP27) e ? (gB), em diferentes intensidades e a TSH foi a única amostra que inibiu a expressão de todas as proteínas virais. Ao serem combinadas com o aciclovir, elas também demostraram efeito sinérgico, em concentrações equivalentes a 2x seus valores de CI50. O conjunto destes resultados indica a potencialidade destas amostras como compostos antivirais, mas ainda são necessários estudos mais aprofundados.<br> / Asbtract : The search for new biological active compounds derived from natural products in recent years has been stimulated throughout the world, because they are still considered a very important source to find new medicines against some diseases. Several strategies based in different types of observations and randomized screenings have been used to evaluate the biodiversity in order to increase the number of available anti-herpes drugs. The infections caused by herpesvirus are a serious worldwide public health problem, because these viruses are able to cause acute and persistent infections, besides the emergence of strains resistant to acyclovir, the available drug of choice. In this context, the Laboratory of Applied Virology from UFSC has been evaluating, for several years, the antiviral activity of natural and synthetic products, and found promising results for many of the samples tested. Initially, the cytotoxicity (CC50) and anti-HSV activity (IC50) were assessed by MTT and viral plaque number reduction assays, respectively. According to the results obtained through the anti-HSV screening of different taxons from the terrestrial and marine biodiversity, three samples (fraction rich in halistanol trisulphate: TSH and the compounds TSH-A and TSH-C) were selected due to their promising selectivity indices (SI=CC50/IC50) of 15.33, 2.46 and 1.95 against HSV-1 replication (KOS strain). The mechanism of action was evaluated through different methodological strategies, which aimed to detect the possible interference of these samples at various stages of the viral replication cycle. The evaluation of these samples in the addition time assay showed a significant viral replication inhibition when they were added simultaneously or up to 3h post-infection. These samples were virucidal and also inhibited viral entry into Vero cells (adsorption and penetration). In addition, the analysis of viral protein expression by Western blotting showed that the samples TSH-A and TSH-C inhibited the expression of á (ICP27) and ã (gB) proteins, at different levels of intensity and a TSH was the unique sample who inhibited all virus protein expression. When combined with acyclovir, they also demonstrated synergistic effects at concentrations equivalent to 2x their IC50 values. Taken together, these results indicate the potential of these samples as antiviral compounds, but further studies are needed.

Orientador: Ronaldo Aloise Pilli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:32:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CorreaJunior_IvanReis_D.pdf: 7722064 bytes, checksum: 6dc8406d34eebe08d963a2c6bdabdc09 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A delactomicina é um policetídeo natural, isolado a partir de culturas de Streptomyces sp, que apresenta atividade inibitória da transposição de uma proteína reguladora Rev do vírus HIV -1. A estrutura planar da delactomicina foi estabelecida por métodos espectroscópicos e nenhuma menção foi feita a respeito de suas configurações relativa e absoluta. Neste trabalho, descrevemos a primeira síntese total da delactomicina e, por conseguinte, a sua elucidação estrutural. A estratégia de síntese proposta para a delactomicina foi orientada por algumas idéias centrais que visavam preservar a integridade da cetona b,g-insaturada, controlar adequadamente a geometria das ligações duplas presentes na estrutura e a estereoquímica absoluta dos centros estereogênicos, sem comprometer a eficiência da rota sintética. As etapas-chave na preparação da estrutura proposta da delactomicina foram: o acoplamento de Negishi catalisado por paládio(0) para a construção do segmento CII-CI6; a reação aldólica mediada por estanho(II), com seletividade sin, para a união dos segmentos C7C 1 O e C11-C 16; e a olefinação de Wittig para instalação do sistema diênico conjugado (E,E) através da junção da cadeia principal com os segmentos C5-C6 e CI-C4. Os dados espectroscópicos da (-)-delactomicina sintética se mostraram idênticos àqueles reportados para o produto natural, permitindo assim confirmar a sua identidade e estabelecer inequivocamente a sua configuração relativa. A indisponibilidade dos dados de rotação óptica ou dicroísmo circular para a delactomicina natural nos impossibilitou a determinação de sua estereoquímica absoluta / Abstract: The natural polyketide delactonmycin isolated from Streptomyces strains displays potent inhibitory activity of the nucleo-cytoplasmic translocation of the HIV -1 regulatory protein Rev. The planar structure of delactonmycin was established by spectroscopic methods, but its relative as well as its absolute configuration remained unknown. In this work, we describe the first total synthesis and structural elucidation of delactonmycin The synthetic approach to delactonmycin featured some key points to save the integrity of the b,g-unsaturated ketone, appropriately control configuration of the double bonds and the absolute stereochemistry of stereogenic centers, without compromise the synthetic route efficiency. The pivotal steps on the preparation of delactonmycin framework were: a palladium(0)-catalysed Negishi coupling reaction for the construction of C11-C 16 subunit; a diastereoselective tin-mediated syn-selective aldol reaction for assembling the subunits C7-ClO and C11-C16; and a Wittig olefination for the installation of the conjugated (E,E)-diene C5-C6 and C6-C7. The spectroscopic data of the synthetic (- )-delactonmycin nicely matched those reported for the natural product, allowing us to confirm their identity and unambiguously establish its configuration. Unfortunately, the lack of a sample of natural de1actonmycin or of its chiroptical data precluded the determination of its absolute configuration / Doutorado / Doutor em Quimica

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-24T13:14:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 263055.pdf: 1614230 bytes, checksum: d2f3885fe587dbb9aded276b6dc7c817 (MD5) / Os vírus herpéticos tipo 1 (HSV-1) e tipo 2 (HSV-2) são patógenos humanos pertencentes à família Herpesviridae, que estabelecem uma infecção latente nos neurônios que inervam a área da infecção primária e podem reativar causando infecções recorrentes localizadas. Contudo, sua resistência ao tratamento mais comumente disponível (aciclovir) faz das infecções herpéticas um grave problema de saúde mundial. Os produtos naturais são uma fonte inesgotável de compostos com promissoras atividades farmacológicas, incluindo atividade antiviral. A triagem anti-herpética de extratos de plantas tem fornecido resultados promissores, que justificam pesquisas nesta área. Neste trabalho, foi realizada uma triagem com onze extratos, e um fracionamento biomonitorado com aquele que apresentou resultados mais promissores. Desta forma, o extrato bruto aquoso obtido por infusão das folhas de Cecropia glaziovii Sneth e suas frações acetato de etila, n-butanol e o resíduo aquoso foram testados frente ao HSV-1 (cepa KOS) e HSV-2 (cepa 333) pelo ensaio de inibição da formação de placas de lise. A fração n-butanólica foi submetida a um processo de extração metanólica em resina Amberlite®XAD-16, fornecendo a fração rica em C-glicosilflavonoides (MeOHAMB) particionada em três subfrações (AMB1, AMB2 e AMB3) também submetidas à avaliação da ação anti-herpética. As amostras não mostraram toxicidade nas concentrações máximas testadas em células VERO e GMK AH1 pelos ensaios do MTT e SRB. A subfração AMB2 inibiu significativamente a replicação de ambos os vírus testados com valores de índice de seletividade (IS = CC50/CI50) >131,4 para o HSV-1 e >66,7 para o HSV-2. A fim de determinar o mecanismo da ação anti-herpética desta subfração, outras avaliações foram realizadas: ação virucida, influência na adsorção e penetração dos vírus nas células, propagação intercelular viral, e interferência sobre a síntese de proteínas virais, além da determinação dos teores de compostos fenólicos e flavonoides totais. O mecanismo da atividade anti-herpética da subfração AMB2 parece ser mediado, ao menos em parte, pela redução da infecciosidade viral (apenas HSV-2), inibição da adsorção e penetração viral nas células, inibição da propagação viral intercelular, diminuição dos níveis da proteína ICP27 e das proteínas do envelope gD e gE do HSV-1. Tal atividade pode ser relacionada aos elevados teores de flavonoides do tipo C-glicosídeos (isoorientina e isovitexina).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-23T05:33:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 236130.pdf: 613021 bytes, checksum: c4d1d71414f8014b08ef87a4a1e7a183 (MD5) / O ácido gálico (ácido 3,4,5-trihidroxibenzóico - AG) é um composto fenólico presente em muitas plantas. Seus n-alquil ésteres, também conhecidos como galatos, em especial o galato de propila, octila e dodecila, são amplamente utilizados como antioxidantes pelas indústrias de alimentos, cosméticos e medicamentos. Os efeitos inibitórios do ácido gálico e de quinze galatos sobre a replicação do Herpes Simplex Vírus tipo 1 (HSV-1) foram investigados. Inicialmente, a citotoxicidade e a atividade anti-HSV-1 em células Vero foram avaliadas através do ensaio colorimétrico com o brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-difeniltetrazolium (MTT). Após a seleção dos compostos com atividade superior aos demais, sua atividade antiviral foi confirmada através do ensaio de redução de placas de lise. Em seguida, após nova seleção, agora de 2 compostos com atividade superior, o mecanismo da ação anti-herpética destes compostos foi estudado através de uma série de ensaios que visaram avaliar a possível interferência dos compostos sobre as diversas etapas da replicação viral. Dentre as avaliações realizadas estão: a atividade virucida, a influência sobre a adsorção e penetração dos vírus nas células, a avaliação do possível sinergismo dos compostos entre si e com o aciclovir, a avaliação da interferência sobre a síntese de proteínas virais através do ensaio de Western blotting, a avaliação da interferência sobre a expressão gênica viral através do ensaio de RT-PCR e a avaliação da interferência sobre a síntese do DNA viral através do ensaio de PCR. Após uma triagem preliminar, o AG e o galato de pentila (GP) mostraram-se mais ativos e tiveram o seu mecanismo de ação estudado através de uma série de ensaios, que visaram determinar em qual(is) etapa(s) da replicação viral eles atuam. O mecanismo de sua atividade antiviral parece ser mediado, ao menos em parte, pela redução da infectividade viral (apenas GP), inibição da adsorção e penetração viral nas células, diminuição dos níveis da proteína do capsídeo viral ICP5, da proteína ICP27 e das proteínas do envelope gB, gC, gD e gE, e interferência na síntese da proteína gD através do bloqueio da síntese de seu mRNA (apenas GP). Embora os tratamentos concomitantes com AG/GP, AG/aciclovir e GP/aciclovir não tenham resultado em interação alguma, a interferência destes dois compostos (AG e GP) em várias etapas da replicação do HSV-1 sugere a importância de estudos adicionais.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-27T11:50:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1098371 bytes, checksum: c10e5cfb5ddc01352ee2d610856b7265 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T11:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1098371 bytes, checksum: c10e5cfb5ddc01352ee2d610856b7265 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os flavivirus West Nile (WNV), Dengue (DENV) e Zika (ZIKV) são causadores de doenças de importância epidemiológica global. Cerca de 50-100 milhões de novas infecções por DENV são estimadas para ocorrer anualmente em mais de 100 países endêmicos, com uma maior propagação documentada para áreas anteriormente não afetadas. WNV é atualmente a causa mais comum de doença neurológica causada por um arbovírus no mundo. ZIKV está associado com um aumento significativo do número de crianças nascidas com microcefalia e distúrbios neurológicos, como a síndrome de Guillain-Barré. Apesar de alguns flavivirus já apresentarem vacinas disponíveis, DENV, WNV e ZIKV ainda não apresentam vacinação eficiente e global. Diante dos desafios para o desenvolvimento de uma vacina, pesquisas para terapias antivirais têm se tornado relevantes, principalmente para casos graves das três doenças. As proteínas virais NS3 e E são alvos moleculares particularmente interessante para compostos antiflavivirais devido aos seus papéis centrais no ciclo de vida viral. Neste trabalho, derivados da indan-1,3-diona foram testados contra esses alvos. Foi realizado ensaio enzimático com a protease de WNV; ensaios virucida, pré-tratamento e pós-tratamento em células Vero com os vírus DENV e ZIKV; além de estudo de docking para a proteína E do DENV e ZIKV e protease de WNV. A indan-1,3-diona (12) se destacou apresentando alta taxa de inibição viral e baixa toxicidade contra WNV, DENV e ZIKV, atuando como inibidor alostérico da protease de WNV e por neutralização direta do DENV e ZIKV. Sendo uma molécula obtida por um novo e mais eficiente processo sintético, é promissora e sua avaliação e aprimoramento devem ser continuadas na cadeia de etapas de validação para uma nova droga antiviral. / The flaviviruses West Nile (WNV), Dengue (DENV) and Zika (ZIKV) cause diseases of global epidemiological importance. About 50-100 million of new DENV infections are estimated for a yearly total of 100 endemic countries, with a further documented spread to previously unaffected areas. WNV is currently the most common cause of neurological disease caused by an arbovirus in the world. ZIKV is associated with a significant increase in the number of children born with microcephaly and neurological disorders, such as Guillain-Barré syndrome. Although some flaviviruses already have available vaccines, DENV, WNV and ZIKV still do not have efficient and global vaccination. Facing the challenges for the development of a vaccine, the trials for antiviral therapies has made relevant, especially for the severe cases of the three diseases. The NS3 and E viral proteins are interesting molecular target for antiflaviviral compounds due to their central roles on the viral life cycle. In this work, indan-1,3-dione derivatives were tested against these targets. An enzymatic assay was performed with a WNV protease; virucidal, pre-treatment and post-treatment assays in Vero cells with the DENV and ZIKV viruses was performed; in addition to molecular docking for an E protein of DENV and ZIKV and WNV protease. Indan-1,3-dione (12) has been shown to have high viral inhibition rate and low toxicity against WNV, DENV and ZIKV, acting as an allosteric inhibitor of WNV protease and by direct neutralization of DENV and ZIKV. Being a molecule obtained by a new and more efficient synthetic process, it is promising and its evaluation and improvement should be continued in the chain of validation steps for a new antiviral drug.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-19T15:50:58Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1496637 bytes, checksum: 5fe9118e3af447fde79634e413e36251 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T15:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1496637 bytes, checksum: 5fe9118e3af447fde79634e413e36251 (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / NIK1 (NSP Interacting kinase I) é um receptor cinase da família das LRRII-RLKs (leucine rich repeat II – receptor like kinase), identificado como alvo de virulência da proteína NSP (Nuclear Shuttle Protein), sendo o principal mediador de uma via de resposta imune contra esse grupo de vírus de DNA. Aufosforilação, de NIK1 em um resíduo de treonina 474 aciona a via de resposta antiviral que culmina com a repressão da expressão de proteínas ribossomais levando à redução da síntese de proteínas da célula vegetal e virais. Apesar de sua atividade antiviral, o transcriptoma de plantas nocautes de nik1 indicam um possível envolvimento de NIK1 como regulador negativo na resposta imune contra bactérias. Com a finalidade de esclarecer o envolvimento de NIK1 na imunidade inata antibacteriana, foram conduzidos ensaios de fosforilação in vitro de NIK1, utilizando os receptores, que intermedeiam PTI (Pamp-triggered immunity), BAK1 ( Brassinosteroid insensitive 1- associated kinase) e FLS2 (Flagellin sensitive – 2). Os resultados de espectrometria de massas demonstraram que BAK1 é um possível regulador da fosforilação de NIK1, uma vez que foi capaz de fosforilar um peptídeo sintético em uma treonina correspondente à posição 474 de NIK1 e de modificar a taxa de autofosforilação desse receptor em um ensaio contendo o domínio cinase intacto de NIK1. Além disso, foi demonstrado por BiFC (complementação de fluorescência bimolecular) que NIK1 e NIK1-T474D interagem tanto com BAK1 quanto com FLS2 na membrana plasmática. Ensaios de co-imunoprecipitação (Co-IP) demonstraram que flagelina promove a dissociação de NIK1 dos receptores para formar o complexo imune ativo BAK1-FLS2. Finalmente, ensaios de Co-IP com linhagens transgênicas de Arabidopsis superexpressando NIK1 e nocautes de nik1 indicaram que NIK1 interfere com a formação do complexo BAK1/FLS2 na resposta antibacteriana, já que a superexpressão de NIK1 diminui a eficiência de formação do complexo imune na presença de flagelina, enquanto que a inativação de NIK1 resulta em efeito oposto. Coletivamente, estes resultados substanciam o argumento de que NIK1 atua regulando negativamente PTI em plantas. / NIK1 (NSP Interacting kinase I), which was first identified as a virulence target of NSP (Nuclear Shuttle Protein), is a receptor-like kinase belonging to the LRRII-RLKs (leucine rich repeat II – receptor like kinase) family and the major mediator of an immune response against this group of DNA virus. NIK1 autophosphorylation at Thr 474 triggers an antiviral response which culminates with the repression of ribosomal protein gene expression leading to suppression of host and viral protein synthesis. Despite its antiviral activity, the transcriptome of nik1 knockouts implicates NIK1 as a possible negative regulator of the immune response against bacteria. To examine the NIK1 involvement in antibacterial innate immunity, in vitro phosphorylation assays were carried out on NIK1, using the PTI (Pamp-triggered immunity)-mediated receptors, BAK1 ( Brassinosteroid insensitive 1- associated kinase) and FLS2 (Flagellin sensitive – 2). The results from mass spectrometry demonstrated that BAK1 may be a regulator of NIK1 phosphorylation, as it was capable of phosphorylating a Thr residue of a synthetic peptide corresponding to the position 474 of NIK1 and modifying the autophosphorylation rate of the NIK1 Kinase domain. Furthermore, BiFC (bimolecular fluorescence complementation) assays demonstrated that NIK1 and NIK1-T474D interact with BAK1 and FLS2 in the plasma membrane. Co-immunoprecipitation (Co-IP) assays showed that flagellin promoted the NIK1 dissociation from BAK1 and FLS2 to form an active BAK1-FLS2 immune complex. Finally, Co-IPs using NIK1- overexpressing transgenic lines and nik1 knockouts indicated that NIK1 interferes with BAK1-FLS2 complex formation in the antibacterial response, as NIK1 overexpression decreased the efficiency of the immune complex formation in the presence of flagellin, whereas NIK1 inactivation resulted in opposing effects. Collectively, these results substantiate the argument that NIK1 regulates negatively plant PTI.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-02-09T03:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336849.pdf: 8368799 bytes, checksum: 38db1bdc9122b89129a0fdc55484990c (MD5) Previous issue date: 2015 / A esponja marinha Petromica citrina é considerada uma espécie nativa do Brasil encontrada na região sul e sudeste. Entre os compostos isolados neste gênero estão os sulfatos de halistanol (esteroides sulfatados) que se destacam por suas atividades antiviral e antimicrobiana. O presente estudo teve por objetivo avaliar o potencial in vitro (atividade antiviral e antimicrobiana) e in vivo (modelos de indução da sepse) da fração n-butanólica (BF), da fração rica em halistanóis (TSH) e dos compostos isolados [sulfato de halistanol (HS) e sulfato de halistanol C (HS-C)]. O fracionamento bioguiado da fração BF foi realizado utilizando gel de permeação molecular (Sephadex LH-20) que, em um primeiro momento, proporcionou a obtenção da amostra bioativa TSH. Esta subfração foi submetida a novo processo cromatográfico com sílica de fase reversa, permitindo o isolamento do sulfato de halistanol (HS) e sulfato de halistanol C (HS-C), compostos estes identificados por ressonância magnética nuclear (RMN) e espectrometria de massas (ESI). Os resultados gerados com os ensaios de avaliação da atividade antiherpética (HSV-1) da amostra TSH, apresentaram índice de seletividade (IS) igual a 15,33, valor este superior quando comparado às amostras HS (IS=2,46) e HS-C (IS=1,45). O potencial antimicrobiano das amostras TSH, HS e HS-C foram estabelecidos por meio das técnicas de difusão em disco, bioautografia e microdiluição, sendo constatada atividade frente a três cepas ATCC S. aureus, E. faecalis e C. albicans, além de três cepas de isolados clínicos bacterianos multirresistentes (S. aureus, MRSA e VRE), sobretudo para amostra TSH foram evidenciados valores de concentrações inibitórias mínimas promissoras frente as cepas MRSA (CIM=31,25 µg/mL) e VRE (CIM=62,5 µg/mL). Com base nos resultados de atividade antimicrobiana da amostra TSH, a mesma foi submetida a ensaios em modelos experimentais de indução de sepse (in vivo). A administração via intraperitoneal dessa amostra na dose de 12 mg/kg no modelo de pneumosepse foi capaz de retardar a morte dos animais. Contudo, no modelo de ligação e perfuração cecal (CLP) a amostra TSH não exerceu efeito na taxa de sobrevivência dos animais quando administrada na dose 33 mg/Kg.<br> / Abstract : The marine sponge Petromica citrina is considered a native species found in south and southeast of Brazil. Among the compounds isolated at this genus are the halistanol sulfates (sulfated steroids), that showed antiviral and antimicrobial activities. The aim of this study was to evaluate the potential in vitro (antiviral and antimicrobial activity) and in vivo (sepsis model) of the n-butanol fraction (BF), halistanol enriched-fraction (TSH) and compounds isolated [halistanol sulfate (HS) and halistanol sulfate C (HS-C)]. Herein it was performed a chemical bioguided fractionation of BF fraction using gel permeation (Sephadex LH-20), as a first step to obtain bioactive TSH sample. This TSH fraction was then submitted to a new purification process by reversed phase chromatography yielding the halistanol sulfate (HS) and halistanol sulfate C (HS-C), that were identified by nuclear magnetic resonance (NMR) and mass spectrometry (ESI). The results of anti-herpetic activity (HSV-1) were significantly more attractive to TSH sample, that showed selectivity index SI =15.33, while HS (SI=2.46) and HS-C (SI=1.45) showed weak activities. The antimicrobial potential of TSH, HS and HS-C were established by the disk diffusion, bioautography and microdilution techniques. The results showed antimicrobial activity against three ATCC strains (S. aureus, E. faecalis and C. albicans), as well as against three clinical multiresistant strains (S. aureus, MRSA and VRE). The TSH sample, presented the most promising results with minimum inhibitory concentrations values against MRSA strains (MIC=31.25 µg/ mL) and VRE (MIC=62.5 µg/mL). Finally, the TSH was assayed in two experimental models of sepsis (in vivo). The intraperitoneal administration of this sample at 12 mg/kg in Pneumosepse model was able to delay the death of animals. On the other hand, in the cecal ligation and puncture model (CLP), TSH sample at 33 mg/kg did not shown effect on the animal survival.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:22:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 214187.pdf: 538408 bytes, checksum: bb6dfd55649ed893ed0487c38357ff01 (MD5)

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Coorientadora : Profª. Drª. Astrid Wiens Souza / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 04/08/2017 / Inclui referências : f. 120-140 / Resumo: A hepatite C crônica é um relevante problema de saúde pública, sendo alvo de inúmeras investigações em ensaios clínicos, especialmente em relação aos novos tratamentos medicamentosos. Contudo, a população brasileira tem sido pouco representada nos estudos. A primeira geração dos antivirais de ação direta (DAAs) para o tratamento da hepatite C crônica genótipo 1 (boceprevir e telaprevir) foi incorporada pelo sistema público de saúde do Brasil em 2012. Dada a recente inclusão dessas terapias, o Ministério da Saúde recomendou a realização de estudo observacional para avaliar resultados de segurança e efetividade do telaprevir e boceprevir no Brasil. Portanto, com este trabalho, o objetivo foi avaliar a efetividade, a segurança e a relação custo-efetividade destas terapias sob a perspectiva do sistema público de saúde brasileiro. Para tanto, foi realizado um estudo prospectivo longitudinal em cinco centros de referência em atendimento a pacientes com hepatite C do Estado do Paraná, entre 2014 e 2016. Os dados relativos à efetividade e à segurança foram coletados dos prontuários de pacientes tratados com boceprevir ou telaprevir. Os desfechos de eficácia incluíram a resposta virológica rápida (RVR) e a resposta virológica sustentada (RVS), e os resultados de segurança incluíram os eventos adversos relatados nos prontuários. Cento e vinte e um pacientes foram incluídos no estudo observacional (19 no grupo boceprevir e 102 no grupo telaprevir), dos quais 67 completaram o tratamento (oito no grupo boceprevir e 59 no grupo telaprevir). Dos 121 pacientes incluídos na análise por intenção de tratar 26,3% atingiram a RVR no grupo boceprevir e 84,3% no grupo telaprevir (p<0,001). A RVS foi atingida por 47,4% e 61,8% nos grupos boceprevir e telaprevir, respectivamente (p=0,424). Náusea foi o evento adverso mais prevalente no grupo boceprevir e prurido no grupo telaprevir. Em relação à tolerabilidade, 57,9% dos pacientes descontinuaram o tratamento com boceprevir e 42,2% com telaprevir. Para avaliar a relação custo-efetividade dos regimes com boceprevir, telaprevir e terapia dupla padrão (interferon peguilado associado à ribavirina) no tratamento da hepatite C crônica foi desenvolvido um modelo de Markov simulando a progressão da doença em pacientes infectados com o genótipo 1 do vírus. Os desfechos de longo prazo contemplaram anos de vida ganhos (AVG), anos de vida ajustados pela qualidade (QALYs) e razão custo-efetividade incremental (ICER). Para todos os desfechos analisados a terapia tripla com boceprevir foi dominada pela terapia tripla com telaprevir, que foi a mais efetiva entre os tratamentos analisados, a um custo de R$ 63.642,00. As ICERs corresponderam a R$ 120.693/RVS, R$ 47.718/AVG e R$ 33.464/QALY para a terapia tripla com telaprevir versus a terapia dupla. Dados do estudo de prevalência, realizado na cidade de Curitiba com pacientes atendidos entre 2013 e 2016 (n=452), revelaram a maior prevalência da infecção pelos genótipos 1 e 3 do vírus. Além disso, foi observada maior prevalência do estágio de fibrose F4 entre os pacientes avaliados. Comparando indiretamente os DAAs de primeira e segunda geração por meio de revisão sistemática com meta-análise em rede, verificou-se a superioridade do daclatasvir sobre as demais terapias analisadas. Palavras-chave: Agentes antivirais. Hepatite C. Hepatite C - Tratamento farmacológico. / Abstract: Chronic hepatitis C is a relevant public health issue, and has been under investigation through several clinical trials, especially regarding new therapies. However, the Brazilian population has been poorly represented in the studies. The first-generation direct-acting antiviral agents (DAAs) for chronic hepatitis C genotype 1 treatment (boceprevir and telaprevir) was approved by the public health system in Brazil in 2012. Due to the recent inclusion of these therapies, the Brazilian Ministry of Health recommended the conduction of an observational study to evaluate the safety and effectiveness of telaprevir and boceprevir in Brazil. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the effectiveness, safety and cost-effectiveness of the new therapies from the perspective of the Brazilian public health system. Hence, a prospective longitudinal study was conducted in five reference centers in the State of Paraná between 2014 and 2016. Data regarding effectiveness and safety were collected from patients' medical records receiving boceprevir or telaprevir. Effectiveness outcomes included rapid virological response (RVR) and sustained virological response (SVR), and safety results included the adverse events reported on the medical records. One hundred and twenty one patients were included in the observational study (19 in the boceprevir group and 102 the in telaprevir group), of which 67 completed the treatment (eight in the boceprevir group and 59 in the telaprevir group). Of the 121 patients included in the intention-to-treat analysis, 26.3% achieved RVR in the boceprevir group and 84.3% in the telaprevir group (p <0.001). SVR was achieved by 47.4% and by 61.8% in the boceprevir and telaprevir groups, respectively (p = 0.424). Nausea was the most frequent adverse event with boceprevir and pruritus with telaprevir. Regarding tolerability, 57.9% of the patients discontinued the treatment with boceprevir and 42.2% with telaprevir. To evaluate the cost-effectiveness of regimens with boceprevir, with telaprevir and standard dual therapy (peguilated interferon with ribavirin) for chronic hepatitis C treatment, a Markov model was developed simulating the natural course of the disease in patients infected with the genotype 1 of the virus. Long-term outcomes included remaining life expectancy in life years (LYs), quality-adjusted life years (QALYs) and incremental cost-effectiveness ratio (ICER). For all evaluated outcomes the regimen with boceprevir was dominated by the regimen with telaprevir, which was the most effective among the evaluated treatments, with a cost of R$ 63.642,00. ICERs were R$ 120.693/SVR, R$ 47.718/LY and R$ 33.464/QALY for triple therapy with telaprevir versus standard dual therapy. Data from the cross-sectional study, which was conducted in Curitiba with patients attended between 2013 and 2016 (n=452), revealed a higher frequency of infection by the genotypes 1 and 3. Moreover, a higher prevalence of the F4 fibrosis stage was observed in the evaluated patients. Indirect comparison of first and second-generation DAAs through network meta-analysis exhibited the superiority of daclatasvir over the other evaluated therapies. Keywords: Antiviral agents. Hepatitis C. Hepatitis C - Pharmacological treatment.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-10-16T15:09:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 989533 bytes, checksum: 691738d9623dc109309055a3300f56c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T15:09:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 989533 bytes, checksum: 691738d9623dc109309055a3300f56c3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O vírus da Dengue é um arbovírus da família Flaviviridae que acomete grande parte da população mundial, possuindo quatro sorotipos (1-4), os quais ocasionam respostas imunes duradouras, mas diferentes. São vírus de RNA fita simples com polaridade positiva de aproximadamente 11Kb, codificando 10 proteínas, sendo 3 delas estruturais e 7 não estruturais. Estudos revelam que peptídeos de secreção de anfíbios possuem várias funções, dentre elas estão atividades antiviral e antimicrobiana, com isso, sequências destes peptídeos vêm sendo sintetizadas e testadas in vitro, a fim de obter compostos ativos para a fabricação de drogas de amplo espectro e de múltipla aplicabilidade. Os peptídeos de atividade antimicrobiana (PAM) são os mais estudados e eles devem apresentar uma toxicidade seletiva e rápida ação frente aos microorganismos. Por não existir nenhuma droga antiviral eficaz conta o vírus em questão, temos por objetivo avaliar a atividade antiviral de um peptídeo sintético, denominado HS-1, onde sua sequência foi obtida previamente da secreção do anfíbio anuro Hypsiboas semilineatus. Após realizar um teste de citotoxicidade, foram realizados ensaios de neutralização a fim de se investigar seu mecanismo de ação contra o vírus da dengue. Com o intuito de verificar uma possível proteção dos receptores celulares, o peptídeo foi incubado previamente com as células, em um ensaio posterior o peptídeo foi incubado previamente com o vírus, para verificar se o PAM agia sobre a partícula viral e em seguida foram realizados ensaios para verificar se o peptídeo tinha ação sobre a adsorção, internalização e replicação viral. Os resultados foram promissores, pois mostraram que o peptídeo em questão age sobre a partícula viral dos 4 sorotipos da dengue de uma forma muito eficaz, sendo que nas maiores concentrações a inibição chega a 100%, além de ter efeito sobre a inibição da adsorção, o que foi observado para os sorotipos 2 e 3. / Dengue virus is an arbovirus of Flaviviridae family, which has been the most within the world population. There are four serologic types of dengue virus (DENV 1-4), which cause long lasting, though different, immune responses. They are single positive-strand RNA viruses with of approximately 11Kb in length. This RNA is responsible for encoding 10 proteins, 3 structural and 7 non-structural. Several studies reveal that some peptides from skin of amphibians have antimicrobial and antiviral activities. Therefore, sequences of these peptides were synthesized and tested in vitro in order to obtain biologically active compounds to develop drugs with wide spectrum and multiple applicability. The antimicrobial peptides are the most studied and they must present a selective toxicity and quick action against microorganism. Effective drugs against dengue virus haven’t been developed yet. Thereat, the present study aimed to evaluate the antiviral activity against dengue virus of the synthetic peptide HS-1, which sequence was previously obtained from the skin of the anuran Hypsiboas semilineatus. In the cytotoxicity assay, and afterwards neutralization assays were performed to investigate the mechanism of action of the HS-1 peptide against Dengue virus. The first neutralization assay was carried out to determine whether the HS-1 peptide could confer protection to cell receptors against viral infection. For this, the peptide was pre-incubated with VERO cells. In the second neutralization assay the peptide was pre-incubated with Dengue virus to evaluate the ability of this peptide to act directly on viral particle. The subsequent assays were performed in order to determine whether the peptide would act over adsorption, internalization and virus replication. The results were promising; they showed that the peptide in question acts on the viral particle of the four dengue serotypes in a very effective manner. With higher concentrations of peptide, the inhibition reached 100%. In addition, it was found very promising results against inhibition adsorption to serotypes 2 and 3.