Orientador: Chung Man Chin / Coorientador: Priscila Longhin Bosquesi / Banca: Eduardo René Pérez González / Banca: Renato Farina Menegon / Resumo: A leishmaniose tegumentar possui ampla distribuição mundial, segundo dados da Organização Mundial da Saúde (OMS) e estima-se que haja o surgimento de 500 mil a um milhão de casos por ano. Segundo dados do Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS), no ano de 2005 registraram-se mais de 180 milhões de casos de leishmaniose tegumentar no Brasil. Apesar da existência de tratamentos disponíveis, a cura da leishmaniose é um processo complexo, em virtude das dificuldades na administração dos fármacos injetáveis, dos inúmeros efeitos adversos e da toxicidade hepática, renal e cardíaca. Dessa forma o desenvolvimento de novos fármacos mais eficazes e menos tóxicos torna-se urgente. O bioisosterismo é uma ferramenta de modificação molecular que visa à obtenção de novos análogos com a mesma atividade biológica. Assim, tem sido utilizado na pesquisa de novos fármacos, buscando a melhoria na eficácia e segurança no tratamento de diversas doenças. O nitrofural (NF), 5-nitro-2-furaldeído semicarbazona, é um fármaco utilizado como antimicrobiano de uso tópico em vários tipos de lesões de pele, que apresenta atividade descrita contra formas amastigotas de L. donovani, L. enriettii e L. major. Baseando-se nas diversas atividades do fármaco, o trabalho proposto objetivou a síntese de bioisósteros de nitrofural e avaliação dos compostos quanto à atividade leishmanicida in vitro. Foram sintetizados e caracterizados através de métodos analíticos oito compostos, sendo um inédito. Sete deles foram avaliados quanto à atividade biológica frente às formas amastigotas de L.amazonensis, através do ensaio de MTT (brometo de 3-metil[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5 difeniltetrazólio). O composto Lapdesf-MetSFS (8) apresentou atividade comparável à da pentamidina, fármaco padrão utilizado na terapêutica. / Abstract: Cutaneous leishmaniasis is a world widely distributed disease and it is estimated, by the World Health Organization (WHO), the incidence of 500,000 to one million cases per year. According to the Department of the Unified Health System (DATASUS), in 2005 it was registered more than 180 million cases of cutaneous leishmaniasis in Brazil. Although treatments for leishmaniasis are available, it is a complex process, because of difficulties in administration, once the majority of the drugs are injectable, the several numbers of adverse effects, and liver, renal and cardiac toxicity. Due to that, the development of more effective and less toxic drugs becomes urgent. The bioisosterism is a molecular modification strategy that aims to obtain new analogues with the same biological activity. It has been used in the research for new drugs, in order to improve the effectiveness and safety in the treatment of various diseases. The nitrofural (NF) 5-nitro-2-furaldehyde semicarbazone, is a drug used as topical antimicrobial in various types of skin lesions is described which has activity against L. donovani, L. enriettii and L. major amastigote forms. Based on the various drug activities, the proposed work aimed the synthesis of bioisosters of nitrofural and evaluation of compounds for in vitro leishmanicidal activity. Were synthesized and characterized via analytical methods eight compounds, one unpublished. Seven of them were evaluated for biological activity against the amastigotesn forms of L. amazonensis by MTT assay (3-methyl bromide [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide). The Lapdesf-MetSFS (8) compound showed activity comparable to that of pentamidine, standard drug used in therapy. / Mestre

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-06-05T17:52:22Z No. of bitstreams: 1 LianaCostaPereiraDissertacao2014.pdf: 1788731 bytes, checksum: aaf1eef40e98ed7a21c08304f7dce33b (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-06-05T17:54:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LianaCostaPereiraDissertacao2014.pdf: 1788731 bytes, checksum: aaf1eef40e98ed7a21c08304f7dce33b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T17:54:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LianaCostaPereiraDissertacao2014.pdf: 1788731 bytes, checksum: aaf1eef40e98ed7a21c08304f7dce33b (MD5) Previous issue date: 2014-05-29 / Viral infections affect every living organism. Health care programs and vaccines have been developed to control and prevent those infections, but there is still the occurrence of severe diseases and with great social-economic importance, whose only alternative is the treatment with antivirals drugs. Those compounds possess different mechanisms of action and are specific for each virus. Nevertheless, with many viruses resistant strains rise, a growing interest in novel antivirals development or in the improvement of existing drugs have been observed. In the last few years, antimicrobial peptides have shown antiviral activities making them candidates for antiviral drugs. The present study aimed to evaluate the possible antiviral activities of synthetic peptides clavanin MO, LL-37, Cn-AMP1 and variants of the Pa-MAP1 against HSV-1 and the Aichivirus replication. The peptides cytotoxic effects against Vero cells were evaluated by MTT method, whereas the clavanin MO, the Pa-MAP 1.8 and Pa-MAP 18br showed more cytotoxicity, with concentrations higher than 15,4 ??M and 12 ??M, respectively. Considering the antivirals assays, it was observed that the peptide Pa-MAP 1 causes 90 % of HSV-1 replication, with a SI higher than 4.8 and a virucidal mechanism of action, but null against the Aichivirus. Futhermore LL- 37 presented 90 % of Aichivirus inhibition, with a SI of 3.4. Others peptides tested showed percentages below 41 %. Future studies are need in order to elucidate which HSV-1 structure does Pa-MAP1 interacts and futher extend to in vivo tests. In summary, this study it is the first one to describe antiviral tests for the treatment of the Aichivirus infection. / As infec????es virais acometem todos os organismos vivos. Para o controle e preven????o dessas infec????es, programas de sa??de p??blica e vacinas t??m sido desenvolvidos, mas ainda h?? a ocorr??ncia de doen??as graves e de grande impacto socioecon??mico cuja ??nica alternativa ?? o tratamento com antivirais. Estes possuem diferentes mecanismos de a????o e s??o espec??ficos para cada tipo viral. Entretanto, o surgimento de variantes resistentes de muitos tipos virais tem levado h?? um crescimento no interesse de desenvolver novos antivirais ou at?? mesmo melhorar os existentes. Nos ??ltimos anos, estudos sobre pept??deos antimicrobianos relatam a atividade antiviral desses compostos, tornando-os candidatos a medicamentos antivirais. O presente estudo teve como objetivo avaliar a poss??vel atividade antiviral dos pept??deos sint??ticos clavanina MO, LL-37, Cn-AMP1 e variantes da Pa-MAP contra o Herpes v??rus humano 1 e Aichiv??rus. O efeito citot??xico dos pept??deos em c??lulas Vero foi avaliado pelo m??todo do MTT, sendo que a clavanina MO, a Pa- MAP 1.8 e Pa-MAP 18br demonstraram maior citotoxicidade em concentra????es maiores que 15,4 ??M, e 12 ??M, respectivamente. Considerando os ensaios antivirais, observou-se que o pept??deo Pa-MAP1 apresentou 90 % de inibi????o da replica????o do HHV-1, com um IS maior que 4,8, sendo que seu mecanismo de a????o foi definido como virucida, por??m contra o Aichiv??rus o PI foi nulo. Al??m disso, LL-37 apresentou 90 % de inibi????o do Aichiv??rus com um IS de 3,4. Os outros pept??deos testados apresentaram percentuais abaixo de 41 % contra ambos os v??rus. Futuros estudos moleculares s??o necess??rios para se determinar com qual estrutura do HHV-1 a Pa-MAP1 interage e para estender os testes para modelos in vivo. Este estudo ?? o primeiro a relatar testes antivirais para o tratamento do Aichiv??rus.

Recombinant proteins expressed in cell culture have been shown to be relevant in the biopharmaceutical production focusing human heaths. Insulin, interferon and vaccine against B hepatitis are products obtained from recombinant expression system. Importantly, the precipitation is a widely used technique for separating proteins from a mixture due to its simplicity, and the process is incremented by the use of salts. This study initially dealt with the validation of the salt precipitation method by using the purified BSA and trypsin, and then, to investigate the precipitation process of recAVLOEc protein synthesized by cells of E. coli BL21 (DE3) pLysS used as expression system for the AVLO. This protein has shown antiviral activity and it found in the hemolymph of Lonoimia obliqua caterpillar. The precipitation was conducted by the use of conventional salts (ammonium sulfate and sodium sulfate) and the volatile salt ammonium carbamate. The proteins of the bacterial expression system were evaluated for their antiviral potential virus-infected cell cultures. Bacterial cells were resuspended in phosphate buffer and lysade by ultrasound. In the experimental procedure, the saturated salt solution (ammonium sulfate, sodium sulfate or ammonium carbamate) was added dropwise to the protein solution. This mixture was kept at constant temperature of 5°C for 24 h. The supernatant phase was separated from the precipitate phase by centrifugation. The protein precipitate obtained from bacterial lysate was then added to cultures of L929 and Vero cells to evaluate the cytotoxic effect; and cultures of these cells were subsequently infected with virus (EMC and measles). The results showed better efficiency of sodium sulfate on the precipitation of BSA compared to ammonium sulfate, while for trypsin, the ammonium carbamate showed more effective. Toxic effect on the culture of L929 cells was observed for the precipitate obtained by the use of ammonium sulfate and sodium sulfate. However, as expected, the precipitated protein obtained by the use of volatile ammonium carbamate salt showed a lower cytotoxic effect. Tests in L929 cultures infected with EMC, were performed; however, protein samples obtained by conventional and volatile salts used as a precipitating agent did not show antiviral action. In Vero cell cultures, the precipitated protein from cell lysate by sodium sulfate showed antiviral action for measles. / Proteínas recombinantes, expressas em culturas celulares, têm se mostrado importantes na produção de fármacos de interesse para a saúde humana. Insulina, interferons e a vacina contra a hepatite B são exemplos de produtos obtidos a partir de sistemas recombinantes de expressão. A precipitação é uma técnica amplamente empregada para separação de proteínas a partir de uma mistura devido à sua simplicidade, sendo tal fato potencializado pelo uso de sais. Este estudo, inicialmente, abordou a validação do método de precipitação salina das proteínas puras BSA e tripsina e em adição a investigação do processo de precipitação da proteína recAVLOEc, sintetizada por células de E. coli BL21 (DE3) pLysS utilizadas como sistema de expressão. Tal proteína é originalmente encontrada na hemolinfa da lagarta Lonomia obliqua. A precipitação foi conduzida por meio do uso de sais convencionais (sulfato de amônio e de sódio) e do sal volátil carbamato de amônio. As células bacterianas foram ressuspendidas em tampão fosfato e submetidas à lise mecânica. No procedimento experimental estabelecido, o contato de um concentrado proteico com uma solução salina saturada (sulfato de amônio, sulfato de sódio ou carbamato de amônio) foi mantido por 24 horas a 5°C. O sobrenadante foi isolado do precipitado por meio de centrifugação e estas frações tiveram sua concentração proteica determinada através do método de Bradford. O precipitado proteico obtido do lisado bacteriano foi então administrado em culturas de células L929 e Vero para a avaliação do efeito citotóxico e posteriormente para a verificação da ação antiviral para o EMC e o sarampo. Os resultados demonstraram maior eficiência do sulfato de sódio na precipitação da BSA quando comparado ao sulfato de amônio. Enquanto que para a tripsina o carbamato de amônio foi mais efetivo. Um efeito tóxico em culturas de L929 foi observado para os precipitados obtidos pelo uso de sulfato de amônio e de sódio. Entretanto, como esperado, o precipitado proteico obtido pelo uso do sal volátil carbamato de amônio apresentou menor efeito citotóxico. Os testes em culturas de L929 infectadas com o vírus EMC foram efetuados e as amostras de proteínas precipitadas com os sais convencionais e o sal volátil não resultaram em ação antiviral. Em culturas de células Vero, o uso do sulfato de sódio como agente de precipitação das proteínas contidas no lisado bacteriano resultou em ação antiviral para o sarampo. / Mestre em Engenharia Química

Orientador : Profª. Drª. Rosana Nogueira de Morais / Coorientador : Prof. Dr. Anderson Joel Martino Andrade / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa: Curitiba, 31/08/2017 / Inclui referências : f. 68-81 / Área de concentração : Fisiologia / Resumo: Malformações e disfunções do sistema reprodutor masculino observadas no indivíduo adulto podem resultar de disfunções da gônada fetal. Um dos fatores que modifica a função testicular fetal é a exposição a xenobióticos, dentre os quais, o antiviral ganciclovir (GCV). A exposição ao GCV no dia 10 de gestação (DG10) causa o desenvolvimento de túbulos seminíferos contendo apenas células de Sertoli (TACS). Como o mecanismo de ação do GCV está relacionado com o metabolismo do DNA e inibição da proliferação celular, aventa-se que os TACS ocorrem por efeito citotóxico do GCV sobre as células germinativas. Para testar esta hipótese, expusemos ratas gestantes a 300 mg/kg de GCV (três injeções subcutâneas de 100 mg/kg) no DG10, 14 e 19, quando as células germinativas apresentam, respectivamente, taxas elevadas de migração, proliferação ou estão mitoticamente quiescentes. Os descendentes masculinos expostos ao GCV no DG 10 e 14 foram avaliados para marcadores de androgenização, andrógenos fecais e séricos e histomorfometria testicular, quando adultos. Nos testículos fetais (DG15 e 20), utilizamos a imunofluorescência de dupla marcação para DAZL (marcador específico de células germinativas) e Ki67 (marcador de proliferação celular) para investigar o número de gonócitos e a atividade proliferativa de células germinativas e somáticas, 24 h após a primeira injeção do GCV. Os ratos adultos expostos no DG14 apresentaram redução de 50% no peso testicular, resultado da redução nos volumes do espaço intersticial e dos túbulos seminíferos, dos quais em torno de 30% eram TACS. Apresentaram, ainda, atraso na puberdade, apesar dos níveis normais de androgênios. Nos animais expostos no DG10 os efeitos foram menos pronunciados, com redução de 30% do peso testicular e 12% de ocorrência de TACS. Em ambos os grupos, a população de células de Sertoli foi reduzida, com aumento no índice de células de Sertoli (razão entre o número de espermátides redondas por célula de Sertoli) nos animais expostos no DG14. Nos testículos fetais, o número de células germinativas foi reduzido em 50% nos ratos expostos no DG14, enquanto permaneceu inalterado naqueles expostos no DG19. No entanto, a exposição ao GCV no DG 19 reduziu a imunomarcação do Ki67 das células de Sertoli, o que indica que o GCV redução da proliferação num período da gestação em que normalmente as células de Sertoli apresentam alta taxa de proliferação. Em conclusão, a exposição ao GCV durante a gestação parece apresentar efeitos tóxicos sobre células somáticas e germinativas testiculares. No entanto, a toxicidade do GCV sobre as células germinativas é mais pronunciada e está diretamente relacionada com a taxa de proliferação. Esse efeito é tempo-dependente e, em ratos, o DG 14 é uma janela crítica de sensibilidade ao GCV, já que a exposição nesse dia causou uma perda maciça aguda das células germinativas, a qual persistiu até a idade adulta. Palavras-chave: Toxicologia. Células germinativas. Desordens reprodutivas masculinas. Antiviral / Abstract: Impairment of fetal gonadal development can lead to malformations and dysfunction of the male reproductive system in adult life. Several factors are potentially disruptors of the fetal testicular function, including exposure to xenobiotics such as the antiviral ganciclovir (GCV). Exposure to GCV at day 10 of gestation (GD10) causes the development of seminiferous tubules containing only Sertoli cells (SCOT). As the mechanism of action of GCV is related to DNA metabolism and inhibition of cell proliferation, SCOT could be a consequence of the cytotoxic effect of GCV on germ cells migration and proliferation. To test this hypothesis, we treated pregnant rats with 300 mg/kg of GCV (three subcutaneous injections of 100 mg/kg) at GD10, 14 and 19, when germ cells show high rates of migration, proliferation or are mitotically quiescent, respectively. Male offspring exposed to GCV at GD10 and 14 were evaluated for androgenic markers, fecal and serum androgens and testicular histomorphometry when adults. In the fetal testis (GD15 and 20), we used double-label immunofluorescence for DAZL (germ cell specific marker) and Ki67 (cell proliferation marker) to investigate the number of gonocytes and the proliferative activity of germ cells and somatic cells, 24 h after the first injection of GCV. The adult rats exposed at GD14 presented a 50% reduction in the testicular weight, as a result of a volume reduction of the seminiferous tubules (30% were SCOT) and of the interstitial space. GD14 animals had also delayed puberty, despite normal levels of androgens. In the animals exposed at GD10, the effects were less pronounced, with a reduction of 30% in testicular weight and 12% of SCOT. In both groups, the Sertoli cell population was reduced, with an increase in the Sertoli cell index (ratio of the number of round spermatids per Sertoli cell) in the animals exposed in GD14. In the fetal testis, the number of germ cells was reduced by 50% in the rats exposed in GD14, while it remained unchanged in GD19 testes. However, exposure to GCV in GD19 reduced Ki87's immunostaining, indicating that GCV reduced the proliferation of Sertoli cells in a period of the gestation when Sertoli cells are expected to have a high proliferation rate. In conclusion, exposure to GCV during gestation causes toxic effects on somatic and testicular germinative cells. However, the toxicity of GCV on germ cells is more pronounced and is directly related to the rate of proliferation. This effect is time-dependent and, in rats, GD14 is a critical window of sensitivity to GCV, since exposure at GD14 caused a massive acute loss of germ cells, which persisted into adulthood. Key-words: Toxicology. Germ cell. Male reproductive disorders. Antiviral.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2008 / Made available in DSpace on 2012-10-24T04:14:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Agaricus blazei, conhecido popularmente no Brasil como cogumelo-do-sol e himematsutake no Japão, é um cogumelo nativo no sudeste brasileiro e amplamente consumido devido às suas propriedades nutricionais e medicinais. Neste estudo, foi avaliada a citotoxicidade, a genotoxicidade e a atividade anti-herpética das suas frações de beta-glucanas (E-SI, E-SII e E-SIII) e do seu extrato polissacarídico (ERP). A citotoxicidade e a genotoxicidade foram avaliadas através dos ensaios do MTT e do cometa, respectivamente. A ação antiviral in vitro frente ao Herpes Simplex Vírus tipo 1 (HSV-1, cepa KOS) e Herpes Simplex Vírus tipo 2 (HSV-2, cepa 333) foi testada pelo ensaio de redução de placas de lise. Nenhuma amostra apresentou genotoxicidade, nas condições experimentais testadas, e os valores de CC50 foram maiores do que 320 µg/ml para as frações de beta-glucanas e maior do que 2.370 µg/ml para o extrato ERP. Somente o ERP mostrou atividade antiviral entre as amostras testadas, para ambos os vírus. Os valores de CI50 foram de 6,74 µg/ml para o HSV-1 e 4,62 µg/ml para o HSV-2, com índices de seletividade de 393 e 545, respectivamente. A fim de determinar o possível mecanismo da ação anti-herpética detectada para o ERP, outras análises foram realizadas: ação virucida, influência na adsorção e penetração dos vírus nas células, e na propagação intercelular viral. O ERP não teve efeito direto na inativação dos vírions, mas inibiu significativamente a adsorção, a penetração do vírus nas células hospedeiras e a difusão intercelular viral. Estes resultados sugerem que o mecanismo de ação do ERP é particularmente interessante e difere daquele do aciclovir, que é o fármaco de escolha para o tratamento de infecções herpéticas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:01:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 223442.pdf: 486908 bytes, checksum: 416277d8611ae8789a29052571a0b516 (MD5) / Os produtos naturais constituem uma fonte inesgotável de compostos com atividades farmacológicas promissoras, incluindo ação antiviral. Os materiais protéicos são encontrados em abundância na natureza e têm atividades biológicas como antibacteriana, antifúngica, antitumoral e antiviral comprovadas. Neste trabalho, a citotoxicidade (CC50) e a atividade antiviral (CE50) de peptídeos antimicrobianos (PAM) e hemolinfa de ostras (Crassostrea gigas e C. rhizophorae), foram avaliadas, em células VERO, HEp-2 e MA104 e contra os vírus herpes simplex tipo 1(HSV-1/KOS), adenovírus sorotipo 5 (AdV-5), rotavírus símio SA-11 (RV-SA11), pelo ensaio colorimétrico do MTT, utilizando diferentes estratégias. Para a hemolinfa das ostras também foi realizado o estudo da ação virucida. Dentre os PAM testados, a peneidina apresentou o maior índice de seletividade (IS= CC50/ CE50) para o HSV-1/KOS (IS = 64). A hemolinfa de ostras apresentou ação virucida contra os três vírus avaliados neste estudo, também apresentando atividade anti-herpértica (IS = 19,76/C. rhizophorae) e antiadenovírus (IS = 5,33/C. gigas), sem, no entanto, exibir ação antiviral contra o rotavírus. Foram observados, em alguns casos, baixos IS, associados a altas porcentagens de inibição da replicação viral, mais evidente no grupo dos PAM. Estudos adicionais devem ser realizados a fim de se confirmar a atividade antiviral e prováveis mecanismos ação.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2012-10-22T11:11:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 232777.pdf: 2321200 bytes, checksum: fbcc92ec5bcbd587462090ddd50bae90 (MD5) / No presente trabalho investigou-se a síntese de uma série de heterociclos aromáticos nitrogenados nominalmente 1,7-naftiridinas e 1,8-naftiridinas, tiazapirimidinona e tiadiazapirimidinona via termólise dos respectivos adutos, obtidos pela condensação com o derivado 5-metóximetilênico do ácido de Méldrum. Diferentes anéis heterociclos foram condensados ao derivado 5-metóximetilênico do ácido de Meldrum a fim de avaliar sua potencial atividade biológica como antiparasitários e antivirais. Sulfonamidas baseadas no anel quinolínico foram preparadas como protótipos de substâncias de interesse em doenças neurodegenerativas. A complexação das referidas quinolinas com zn(II) e cobre(II) também foi investigada . Derivados quinolínicos 2-amino-8-arilsulfonatos foram obtidos pela reação dos respectivos cloretos de sulfonila e 2-amino-8-hidróxiquinolina em piridina. Os testes de avaliação antiviral revelaram um derivado tiadiazólico como um interessante modelo para exploração da relação estrutura-atividade. Este composto mostrou uma percentagem de inibição de replicação do vírus HSV-1 cepa 29R de 96,6% para o tratamento simultâneo e 90,1% para o pós-tratamento. Nos ensaios de atividade antiparasitária, cloronaftiridinas mostraram-se interessantes modelos para o tratamento de leishmaniose contra cepas de Leishmania amazonensis e contra cepa Y de T.cruzi . Os resultados observados nos ensaios de atividade biológica foram bastante promissores e demonstraram que os derivados aminometilênicos do ácido de Meldrum com a incorporação do anel tiadiazólico podem ser considerados candidatos em potencial a inibidores do herpes vírus cepa 29R que é resistente ao medicamento Aciclovir.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2013-06-25T18:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 311573.pdf: 7982077 bytes, checksum: 243e7ae4350af569490079c4e00e4810 (MD5) / Agaricus brasiliensis (syn A. subrufescens) é um fungo basidiomiceto nativo no Brasil, que apresenta paredes celulares ricas em polissacarídeos, tais como ?-(1?6)-(1?3)-glicanas nos corpos de frutificação e ?-(1?2)-glico-?-(1?3)-mananas no micélio. Neste trabalho, estes polissacarídeos foram isolados e modificados quimicamente gerando seus respectivos derivados sulfatados. Os polissacarídeos nativos (FR e MI) e sulfatados (FR-S e-MI-S) foram caracterizados quimicamente e avaliados quanto as suas atividades citotóxica e anti-herpética in vitro. Uma vez que FR-S e MI-S apresentaram uma promissora ação anti-HSV-1 (cepas KOS e 29-R) e anti-HSV-2 (cepa 333), seu mecanismo de ação foi determinado. A atividade anti-herpética in vivo do MI-S também foi testada utilizando-se modelos murinos de infecção ocular, cutânea e genital. FR-S e MI-S apresentaram duas novas bandas de absorção no espectro de infravermelho em 1253 e 810 cm-1, relacionados aos grupamentos C-S-O e S=O, respectivamente. A massa molecular do FR e MI foram estimados em 609 e 310 kDa, respectivamente. FR-S (127 kDa) e MI-S (86 kDa) apresentaram massas reduzidas provavelmente devido a hidrólise ocorrida durante a reação de sulfatação. FR-S e MI-S apresentaram ~14% de enxofre na análise elementar. Análise de RMN de 1H e 13C confirmaram as estruturas mencionadas anteriormente para FR e MI, sendo o FR-S totalmente sulfatado em C-4 e C-6, enquanto o MI-S parcialmente sulfatado em C-2, C-3, C-4 e C-6. Embora FR e MI não terem apresentado atividade, FR-S e MI-S exibiram promissora ação anti-HSV, com índices de seletividade (SI=CC50/EC50) superiores a 208. FR-S e MI-S não tiveram efeito virucida, mas significativamente inibiram a adsorção e penetração, provavelmente por interagir com glicoproteínas virais. Estudos de combinação revelaram que FR-S e MI-S atuam de forma sinérgica com o aciclovir. Além disso, MI-S inibiu a expressão das proteínas virais ICP27, UL42, gB e gD. Não foi observada toxicidade nos grupos de animais não infectados e tratados com MI-S. O tratamento tópico e oral com MI-S não foi efetivo na redução da doença ocular. A aplicação tópica de MI-S nas lesões cutâneas também não foi efetiva, mas os animais infectados cutaneamente e tratados oralmente com MI-S mostraram redução significativa dos escores da doença e cura acelerada das lesões pelo HSV-1 após o nono dia. A administração vaginal de MI-S (500 µg), 20 min antes do desafio viral, significantemente reduziu os escores da doença (dias 5 a 9), títulos virais (dias 1 e 3) e mortalidade em comparação aos grupos controles. A sulfatação aumentou em 5X o efeito citotóxico do FR contra células tumorais A549, enquanto foi essencial para a atividade do MI. A combinação de fatores como o alto grau de substituição e a massa molecular relativamente menor teve impacto positivo sobre a atividade citotóxica do FR-S e MI-S. Os resultados mostram que o MI-S tem potencial a ser utilizado na redução da severidade das lesões cutâneas pelo HSV-1 e principalmente como um microbicida evitando a transmissão sexual das infecções genitais pelo HSV-2. Ainda, os resultados promissores obtidos na triagem preliminar estimulam novos estudos para avaliação do mecanismo da atividade citotóxica do MI-S e FR-S.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-04-18T04:09:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344471.pdf: 3380541 bytes, checksum: 48076199efee9bced9529cf086a86370 (MD5) Previous issue date: 2016 / Estudos utilizando folhas de Cecropia glaziovii Snethl evidenciaram grande potencial anti-herpético relacionado, principalmente, aos compostos fenólicos presentes nesta espécie. Sendo assim, o objetivo do trabalho foi aliar o potencial terapêutico desta planta associado a novas estratégicas tecnológicas, tal qual desenvolvimento de nanopartículas (NPs) a serem empregadas na elaboração de um medicamento fitoterápico. Neste trabalho, o preparo de fração enriquecida em flavonoides (FEF-Cg) a partir desta planta foi padronizado. A avaliação da atividade antiviral contra o vírus HSV-1 da FEF-Cg evidenciou um índice de seletividade > 106,33. NPs de PLGA contendo a FEF-Cg, preparadas por dupla emulsão seguida da evaporação do solvente, apresentaram diâmetro médio de 205,2 ± 1,2 nm, PDI 0,15 ± 5,44, potencial zeta de -35,59 ± 5,33 mV e valores de EE de 64,65 ± 3,09%, com um teor de 0,65 ± 3,14% em fração. Um estudo de estabilidade, realizado em temperatura ambiente (25oC) por 60 dias, demonstrou maior estabilidade para o sistema contendo os surfactantes monooleato de sorbitano e poloxamer 188 nas fases orgânica e aquosa, respectivamente. Estudos do perfil de liberação e da degradação do polímero demonstraram uma liberação controlada da FEF-Cg através da matriz polimérica e uma redução significante na massa molar do polímero durante 21 dias. Estas NPs não exibiram citotoxicidade em células Vero nas concentrações testadas e apresentaram um potencial efeito anti-herpético contra o vírus HSV-1. Filmes e hidrogéis termossensíveis de quitosana foram preparados com quatro concentrações de NPs de PLGA (1, 3, 5 e 10%, m/m) e caracterizados quanto a sua morfologia, propriedades químicas e mecânicas e citotoxicidade. Diferentes concentrações de NaHCO3 foram utilizadas na preparação de hidrogel de quitosana visando obter um hidrogel termossensível homogêneo. A caracterização das formulações mostrou que todos os hidrogéis exibiram propriedades termossensíveis alterando de um comportamento líquido à 25oC para um comportamento de gel à 37oC. Em resumo, os filmes e hidrogéis nanocompósitos demonstraram ser promissores como sistemas de liberação no tratamento de infecções por herpes.<br> / Abstract : Studies employing Cecropia glaziovii Snethl leaves have shown great potential regarding its antiherpes activity, mainly related to the phenolic compounds present in this species. Thus, the main goal of this work was to combine the therapeutic potential of this species to new technological strategies targeting at the development of an herbal nanoparticulate system (NPs) to be used in the preparation of a phytotherapeutic formulation. In this work the preparation procedures for the EFF-Cg were standardized. The antiviral activity was tested against HSV-1, the results for selectivity index values was > 106.33. PLGA NPs containing the EFF-Cg were prepared using the double-emulsion evaporation method and it presented a mean diameter of 205.2 ± 1.2 nm, PDI of 0.15 ± 5.44, zeta potential of -35.59 ± 5.33 mV, EE value of 64.65 ± 3.09% and EFF-Cg load of 0.65 ± 3.14%. A stability study of the formulations performed in room temperature (25oC) for 60 days, demonstrated highest colloidal stability using the sorbitan monooleate and the poloxamer 188 surfactant in the organic and aqueous phases, respectively. Drug delivery study and polymer degradation demonstrated a controlled release of the drug through the polymer matrix and a significant reduction of molecular weight of the polymer at 21-day period. These NPs not exhibit cytotoxicity over Vero cells and presented a potential antiherpes effect against HSV-1 virus. The chitosan films and chitosan thermosensitive hydrogels were prepared with four different concentrations of PLGA NPs (1, 3, 5 and 10%, w/w) and were characterized in term of morphology, chemical, mechanical properties and cytotoxicity. Chitosan thermosensitive hydrogel was prepared with different NaHCO3 concentrations to choice the optimal condition to obtain homogeneous thermosensitive hydrogel. The formulations were characterized and the results showed that all hydrogels exhibited thermosensitive property, changing from liquid-like behavior at 25°C to gel-like behavior at 37°C. In summary, films and hydrogels nanocomposites demonstrated a promising system for the effective drug delivery in the treatment of herpes infections.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T05:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 199387.pdf: 1862183 bytes, checksum: ce2752913a422a41812e3f52141f8f11 (MD5) / Araucaria angustifolia é uma árvore de grande porte que ocorre na floresta ombrófila mista, um ecossistema único dentro do domínio da Mata Atlântica. É a única espécie da família Araucariaceae natural da região sul do Brasil. Atualmente está incluída na lista das espécies ameaçadas de extinção, devido a intensa exploração de sua madeira pelas indústrias madeireiras e de papel e celulose. O objetivo deste trabalho foi o isolamento e a identificação em Araucaria angustifolia substâncias potencialmente ativas, biomonitorado por ensaios de citotoxicidade e atividade antiviral para o vírus herpético tipo-1 (HSV-1), expressa pelo Índice de Seletividade (IS). Assim, partindo-se de um extrato hidroalcoólico das folhas (acículas) do material vegetal, seguido de partição com solventes de polaridade crescente, foi possível estabelecer a atividade antiviral para as frações acetato de etila (FAE, IS=9) e n-butaol (FBU, IS=11). Da FAE seguiu-se a subfração mais ativa SFAE-II (IS=7,13), e desta as subfrações SFAE-II-B, SFAE-II-C e SFAE-II-D (IS=7,13). Após purificação das subfrações, foi possível isolar as substâncias II-B [1] (bilobetina), II-C e II-D [2] (cupressuflavona), sendo que a substância II-C trata-se, provavelmente, de uma biflavona do tipo robustaflavona. Esta substância foi posteriormente acetilada, e os espectros de RMN estão sendo aguardados para a confirmação estrutural. Da FBU foram isolados esses mesmos biflavonóides, além de duas outras substâncias caracterizadas como taninos condensados (proantocianidinas), os quais parecem ter grande importância para a atividade antiviral das frações. A subfração mais ativa derivada da FBU foi a SFBU-I (IS=13,96), a qual deu origem a SFBU-I-4 (IS=51,71) e SFBU-I-5 (IS=57,56). Da SFBU-I-4 obteve-se a substância T4, e da SFBU-I-5 foi obtida a FR-1 (IS=38,16), a qual foi acetilada e purificada. Dessa forma, a Araucaria angustifolia mostra-se como uma fonte viável de obtenção de metabólitos secundários potencialmente ativos, devendo ser mais aprofundados os estudos de elucidação estrutural, assim como a pesquisa de outras atividades relacionadas a esses compostos. Assim, atribuindo-se à espécie outra importância, no caso a obtenção de substâncias ativas, que não a exploração de sua madeira, contribui-se para a sua preservação, uma vez que foram pesquisadas as partes aéreas da planta.