Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Some forms of neuropathic pain are maintained by sympathetic fibers, but the underlying mechanisms are poorly understood. Thus, the aim of this study was to investigate the possible involvement of the TRPA1 receptor as well as the role of the sympathetic nervous system (involved in sympathetically maintained neuropathic pain) in a model of neuropathic pain induced by chronic sciatic nerve constriction injury (CCI) in mice. The systemic injection of the selective TRPA1 antagonist HC-030031 reversed both mechanical and cold allodynia induced by chronic sciatic nerve constriction injury. Nerve injury also sensitizes mice to the nociception induced by the intraplantar injection of a low dose of the TRPA1 agonist allyl isothiocyanate without changing TRPA1 immunoreactivity in the injected paw. Furthermore, the chemical sympathectomy produced by guanethidine largely prevented CCI-induced mechanical and cold allodynia. CCI also induced a norepinephrine-trigged nociception that was inhibited by α-adrenoceptor antagonism and norepinephrine transporter and monoamine oxidase inhibition. Finally, the peripheral injection of HC-030031 also largely reduced CCI-induced nociception by norepinephrine and mechanical or cold allodynia. Taken together, the present findings reveal the critical role of TRPA1 in mechanical and cold hypersensitivity as well as in hypersensitivity to norepinephrine following nerve injury. This article presents the role of TRPA1 receptor on the sympathetically-maintained nociception induced by nerve injury in mice. Our results suggest that TRPA1 antagonists may be useful to treat neuropathic patients that present sympathetically maintained pain. / Algumas formas de dor neuropática são mantidos por fibras simpáticas, contudo os mecanismos subjacentes são pouco compreendidos. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o possível envolvimento do receptor TRPA1, bem como o papel do sistema nervoso simpático num modelo de dor neuropática induzido pela constrição crônica do nervo ciático (CCI) em camundongos. A administração sistêmica do antagonista seletivo do receptor TRPA1, HC-030031, reverteu a alodinia mecânica e ao frio induzida pela CCI. A injeção de uma baixa dose do agonista do receptor TRPA1, isotiocianato de alila, induziu uma resposta nociceptiva nos animais que sofreram a lesão no nervo, sem alterar a imunorreatividade do TRPA1 na pata injetada. Além disso, a simpatectomia química produzida pela guanetidina amplamente previniu a alodínia mecânica e ao frio induzida pela CCI. Ainda, a injeção intraplantar de norepinefrina induziu nocicepção espontânea, a qual foi reduzida pelo antagonista α-adrenérgico, inibidor do transportador de norepinefrina e inibidor da enzima monoamina oxidase. Finalmente, a administração periférica do HC-030031 reduziu a nocicepção espontânea induzida pela norepinefrina e também a alodínia mecânica e térmica de animais neuropáticos. Assim, nossos resultados revelam o papel crítico do receptor TRPA1 na alodínia mecânica e ao frio, bem como na hipersensibilidade à norepinefrina após lesão do nervo em um modelo de dor neuropática mantida pelo simpático. Dessa forma, o receptor TRPA1 poderá ser um alvo para o desenvolvimento de novos tratamentos para esse tipo de dor.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do extremo Sul Catarinense, UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A lesão térmica (queimadura) pode ser causada pela ação direta ou indireta do calor sobre um organismo. Este processo causa o desenvolvimento de inflamação tecidual, levando a hipersensibilidade dolorosa e redução da qualidade de vida dos pacientes. Até o momento, os tratamentos utilizados para tratar esta patologia dolorosa não apresentaram eficácia significativa. Desta maneira, a procura por novos tratamentos baseados em mecanismos inovadores é relevante. O receptor de potencial transitório anquirina 1 (TRPA1) é um canal iônico ativado por substâncias oxidantes (peróxido de hidrogênio) produzidas após lesão tecidual e compostos irritantes naturais (óleo de mostarda). Este canal tem sido estudado como um alvo para a descoberta de novos analgésicos e anti-inflamatórios. No entanto, mesmo que o TRPA1 já tenha sido estudado em diferentes modelos de dor e inflamação, a sua participação em modelos causados por lesão térmica carece de maiores estudos. Assim, o objetivo desta dissertação foi avaliar a participação deste receptor na nocicepção e inflamação provocadas por modelo de lesão térmica em ratos. Para isso foram utilizados ratos Wistar machos (150-300 g). Primeiramente, para escolher a melhor dose do creme não iônico contendo o antagonista TRPA1 (HC-030031, concentrações de 0,5; 0,05 e 0,005%) foi utilizado o modelo de nocicepção causado pela administração subcutânea na pata traseira direita traseira de alil isotiocianato (AITC, 10 nmol/pata, agonista TRPA1). Observou-se que as concentrações de 0,05 e 0,5% mostraram efeito antinociceptivo, então se escolheu a concentração de 0,05% do creme não iônico contendo HC-030031 para desenvolver o modelo de lesão térmica (causado por banho-maria, 70 ºC, 5 segundos, na pata traseira direita). O controle positivo do estudo para o modelo de lesão térmica foi a sulfadiazina de prata a 1%. Os animais foram divididos em Grupo 1 (controle sem tratamento), Grupo 2 (lesão térmica sem tratamento), Grupo 3 (queimadura e aplicação tópica de veículo, creme não iônico), Grupo 4 (queimadura e aplicação tópica de sulfadiazina de prata a 1%), Grupo 5 (lesão térmica e aplicação tópica de HC-030031 a 0,05%). Assim, após aplicação por 6 dias dos tratamentos (1 vez ao dia por via tópica na pata traseira direita) foram avaliadas medidas de nocicepção (alodínia mecânica, estática e dinâmica, alodinia ao calor, dor espontânea, escore facial de nocicepção e edema). No 6º dia foram retiradas amostras da pele da pata traseira direita para determinar parâmetros de inflamação (análise histológica e atividade das enzimas mieloperoxidase e NAGase ), estresse oxidativo (dosagem de peróxido de hidrogênio e medida atividade de enzimas oxidantes - superóxido dismutase e NADPH oxidase) e a imunoreatividade para o receptor TRPA1. Os resultados obtidos mostraram que o creme não iônico contendo HC-030031 apresentou efeito antinociceptivo em relação aos diferentes parâmetros de nocicepção avaliados, semelhantes aos detectados para o creme contendo sulfadiazina de prata. Ainda, o creme não iônico contendo HC-030031 reduziu o edema e a infiltração de células inflamatórias e a atividade das enzimas mieloperoxidase e NAGase . Assim, esta preparação reduziu parâmetros associados à atividade de enzimas oxidantes e a concentração de peróxido de hidrogênio, bem como a expressão do receptor TRPA1 na pele da pata após a queimadura. O creme contendo sulfadiazina de prata apresentou efeito anti-inflamatório, antioxidante, e reduziu a imunoreatividade do receptor TRPA1 no tecido da pele da pata. Dessa forma, o presente estudo buscou determinar no receptor de TRPA1 novas formas de tratamento da dor e inflamação observadas após lesão térmica.

Submitted by ALESSANDRA MANCHINI CARDOSO null (lemanchini@hotmail.com) on 2017-01-30T15:58:06Z No. of bitstreams: 1 ficha+dissertação.pdf: 3142311 bytes, checksum: fd89634d15b20bb2b50e11cbbb2d7552 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-03T13:34:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cardoso_am_me_sjc.pdf: 3142311 bytes, checksum: fd89634d15b20bb2b50e11cbbb2d7552 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T13:34:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cardoso_am_me_sjc.pdf: 3142311 bytes, checksum: fd89634d15b20bb2b50e11cbbb2d7552 (MD5) Previous issue date: 2017-01-16 / O objetivo deste ensaio clínico foi avaliar a influência de dois comprimentos de trabalho foraminal diferentes na dor pós-operatória e alodinia mecânica após o tratamento endodôntico concluído em sessão única ou em duas sessões. Quarenta e oito pacientes adultos, indicados para tratamento endodôntico primário de dente com periodontite apical assintomática, foram randomizados em 4 grupos (n = 12): SV0 - tratamento em sessão única e instrumentação do canal radicular até o forame apical; SV+1 - tratamento em sessão única e instrumentação do canal radicular 1 mm além do forame apical; TV0 - tratamento em duas sessões e instrumentação do canal radicular até o forame apical; TV+1 - tratamento em duas sessões e instrumentação do canal radicular 1 mm além do forame apical. Todos os participantes receberam um questionário baseado em uma escala visual analógica para registrar sua avaliação da dor em 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas e 7 dias após o término do tratamento endodôntico. Para a avaliação mecânica da alodinia, a medição da força da mordida foi realizada utilizando um gnatodinanômetro digital imediatamente antes do tratamento e 7 dias após a sua conclusão. Não houve diferença estatisticamente significante entre os 4 grupos em relação a dor pós-operatória em todos os momentos avaliados (α = 5%, teste de Kruskal-Wallis). Os valores de força de mordida foram significativamente maiores 7 dias após o tratamento endodôntico, indicando que houve uma redução significativa da dor mecânica em todos os grupos, sem diferença significativa entre eles (α = 5%, ANOVA e teste de Tukey). Todos os grupos apresentaram a mesma taxa de dor pós-operatória nos momentos avaliados e efetivamente aumentaram os limiares mecânicos de dor. / The objective of this clinical trial was to evaluate the influence of two different foraminal working lengths on postoperative pain and mechanical allodynia after endodontic treatment completed in single-visit or two-visit. Forty-eight adult patients indicated for primary endodontic treatment of tooth with asymptomatic apical periodontitis were randomly assigned to 4 groups (n = 12): SV0 – single-visit root canal treatment and instrumentation up to the apical foramen; SV+1 – single-visit root canal treatment and instrumentation 1 mm beyond the apical foramen; TV0 – two-visit root canal treatment and instrumentation up to the apical foramen; TV+1 – two-visit root canal treatment and instrumentation 1 mm beyond the apical foramen. All participants received a questionnaire based on a visual analog scale to record their assessment of pain at 3 hours, 6 hours, 12 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours and 7 days after the endodontic treatment concluded. For mechanical allodynia evaluation, bite force measurement was performed using a digital gnatodynanometer just before treatment and 7 days after its conclusion. No statistically significant difference was found among the 4 groups in relation to postoperative pain at all time points assessed (α= 5%, Kruskal-Wallis test). Bite force values were significantly higher 7 days after endodontic treatment, indicating that there was a significant reduction of mechanical pain in all groups, with no significant difference among them (α= 5%, ANOVA and Tukey’s test). All groups exhibited the same rate of postoperative pain at the time points assessed and effectively increased the mechanical pain thresholds.

O objetivo foi realizar a adaptação transcultural do 12 item Allodynia Symptom Checklist para a população brasileira e testar a confiabilidade dessa versão, já que não havia nenhum questionário de avaliação da alodínia cutânea em migranosos, sintoma que tem sido apontado como sinalizador da sensibilização central e como fator de cronificação dessa doença. A adaptação transcultural foi realizada em seis estágios: tradução, síntese, retrotradução, revisão pelo comitê de especialistas na área, pré-teste e submissão dos documentos ao comitê de especialistas. No estágio do pré-teste, foram aplicados 30 questionários em migranosos de ambos os sexos, que relataram dificuldades de compreensão e, dessa maneira, uma segunda versão foi criada e aplicada em mais 30 sujeitos, para a qual não foram relatadas dificuldades adicionais. O tempo médio de preenchimento foi de 336 e a consistência interna foi considerada adequada demonstrando uma boa correlação entre os itens ( de Cronbach = 0,77). Para testar a confiabilidade, outros 30 sujeitos preencheram o questionário, em dois momentos, sendo que para 15 deles o questionário foi autoaplicável e para os outros 15 a avaliação foi feita no formato de entrevista. A confiabilidade foi classificada como moderada (kappa ponderado linear = 0,58) e excelente ( kappa ponderado linear =0,84) respectivamente. Portanto, foi possível através desse estudo, disponibilizar em língua portuguesa um questionário válido, confiável e de fácil aplicação para a avaliação da alodínia em migranosos da população brasileira. / Since there was no portuguese questionnaire to evaluate cutaneous allodynia in migraine population, which has been pointed out as a central sensibilization flag and as risk factor of migraine chronification we aimed to perform the cross-cultural adaptation of the 12 item Allodynia Symptom Checklist for the Brazilian population and to test its reliability. It consisted in six stages: translation, synthesis, back translation, revision by a specialist committee, pretest, and submission the documents to the committee. In the pretest stage, the questionnaire was applied to 30 migraineurs of both sexes, who had some difficulty in understanding it. Thus, a second version was applied to 30 additional subjects, with no others difficulties being reported. The mean filling out time was 336and the internal consistency was considered adequate showing a good interrelation between items (Cronbachs = 0,77). To test reliability, 30 other subjects filled out the questionnaire at two different times, 15 of them in a self-report administration and 15 in a structured interview. It was classified as moderate (linear weighted kappa = 0.58) and as excellent (linear weighted kappa = 0.84) respectively. In this study, it was possible to make available in portuguese a valid, reliable and easy tool for cutaneous allodynia assessment in Brazil.

O objetivo foi realizar a adaptação transcultural do 12 item Allodynia Symptom Checklist para a população brasileira e testar a confiabilidade dessa versão, já que não havia nenhum questionário de avaliação da alodínia cutânea em migranosos, sintoma que tem sido apontado como sinalizador da sensibilização central e como fator de cronificação dessa doença. A adaptação transcultural foi realizada em seis estágios: tradução, síntese, retrotradução, revisão pelo comitê de especialistas na área, pré-teste e submissão dos documentos ao comitê de especialistas. No estágio do pré-teste, foram aplicados 30 questionários em migranosos de ambos os sexos, que relataram dificuldades de compreensão e, dessa maneira, uma segunda versão foi criada e aplicada em mais 30 sujeitos, para a qual não foram relatadas dificuldades adicionais. O tempo médio de preenchimento foi de 336 e a consistência interna foi considerada adequada demonstrando uma boa correlação entre os itens ( de Cronbach = 0,77). Para testar a confiabilidade, outros 30 sujeitos preencheram o questionário, em dois momentos, sendo que para 15 deles o questionário foi autoaplicável e para os outros 15 a avaliação foi feita no formato de entrevista. A confiabilidade foi classificada como moderada (kappa ponderado linear = 0,58) e excelente ( kappa ponderado linear =0,84) respectivamente. Portanto, foi possível através desse estudo, disponibilizar em língua portuguesa um questionário válido, confiável e de fácil aplicação para a avaliação da alodínia em migranosos da população brasileira. / Since there was no portuguese questionnaire to evaluate cutaneous allodynia in migraine population, which has been pointed out as a central sensibilization flag and as risk factor of migraine chronification we aimed to perform the cross-cultural adaptation of the 12 item Allodynia Symptom Checklist for the Brazilian population and to test its reliability. It consisted in six stages: translation, synthesis, back translation, revision by a specialist committee, pretest, and submission the documents to the committee. In the pretest stage, the questionnaire was applied to 30 migraineurs of both sexes, who had some difficulty in understanding it. Thus, a second version was applied to 30 additional subjects, with no others difficulties being reported. The mean filling out time was 336and the internal consistency was considered adequate showing a good interrelation between items (Cronbachs = 0,77). To test reliability, 30 other subjects filled out the questionnaire at two different times, 15 of them in a self-report administration and 15 in a structured interview. It was classified as moderate (linear weighted kappa = 0.58) and as excellent (linear weighted kappa = 0.84) respectively. In this study, it was possible to make available in portuguese a valid, reliable and easy tool for cutaneous allodynia assessment in Brazil.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Recent studies have indicated that nearly half of all surgical patients present a picture of moderate to severe pain what become important to understand the mechanisms involved postoperative pain to be better treat it. Previous studies have shown that incisions can cause mast cell degranulation. Thus, the aim of this study was to investigate the involvement of mast cells and its inflammatory mediators, histamine, serotonin and tryptase in a model of postoperative pain in mice. The depletion of mast cell mediators produced by repeated pre-treatment with compound 48/80 (1, 3, 10 and 10 μg/paw), that promote mast cell degranulation, prevented postoperative nociception (98 ± 23% of inhibition) and reduced histamine and serotonin levels (88 ± 4% and 68 ± 10%, respectively) and tryptase activity (82 ± 14% of reduction) in paw tissue. Furthermore, plantar surgery produced immense mast cell degranulation, as assessed by histology and confirmed by the increased levels of serotonin (three fold higher) and histamine (fifteen fold higher) and by increased activity of tryptase (two fold higher) in the perfused tissue after surgery. Accordingly, pre-treatment with the mast cell membrane stabilizer cromoglycate (200 μg/paw, i.pl.) prevented mechanical allodynia (inhibition of 96 ± 21%) and an increase in histamine (44 ± 10% of inhibition) and serotonin (73 ± 5% of inhibition) levels and prevented the tryptase release (100% of inhibition) induced by plantar surgery. Finally, local treatment with H1 (promethazine, 100 μg/paw, i.pl.), 5-HT3 (ondansetron, 10 μg/paw, i.pl.), 5-HT2A (ketanserin, 5 μg/paw, i.pl.) or PAR-2 (ENMD-1068, 10-100 nmol/paw) receptor antagonists or with the tryptase inhibitor (gabexate, 0.01-1 nmol/paw) partially decreased postoperative nociception in mice. Thus, mast cell activation mechanisms as well as release of mast cells inflammatory mediators and activation of its respective receptors are interesting targets for the development of novel therapies to treat postoperative pain. / Estudos recentes indicam que praticamente a metade de todos os pacientes submetidos à procedimentos cirúrgicos apresentam um quadro de dor moderada à severa, o que torna importante entender os mecanismos envolvidos na dor pós-operatória para melhor tratá-la. Dados da literatura demonstram que incisões podem causar a degranulação de mastócitos. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o envolvimento dos mastócitos e seus mediadores inflamatórios, serotonina, histamina e triptase, em um modelo de dor pós-operatória em camundongos. A depleção dos mediadores dos mastócitos produzida pelo pré-tratamento repetido com o composto 48/80 (1, 3, 10 e 10 μg/pata), que promove degranulação de mastócitos, preveniu a nocicepção pós-operatória (98 ± 23% de inibição) e reduziu os níveis de histamina e serotonina (88 ± 4 % e 68 ± 10%, de redução, respectivamente) e a atividade da triptase (82 ± 14% de redução) no tecido da pata. Além disso, a cirurgia plantar produziu grande degranulação dos mastócitos, como avaliado por histologia e confirmado pelo aumento dos níveis de serotonina (três vezes maior) e histamina (quinze vezes maior) e pelo aumento na atividade da triptase (duas vezes maior) no perfusato tecidual após a cirurgia. O pré-tratamento com o estabilizador da membrana celular dos mastócitos, cromoglicato (200 μg/pata, i.pl.), preveniu a nocicepção mecânica (inibição de 96 ± 21%) e o aumento dos níveis de histamina (44 ± 10% de inibição) e serotonina (73 ± 5% de inibição), bem como preveniu a liberação de triptase (100% de inibição) induzida pela cirurgia plantar. Finalmente, o tratamento local com os antagonistas dos receptores H1 (prometazina, 100 μg/pata, i.pl.), 5-HT3 (ondansetrona, 10 μg/pata, i.pl.), 5-HT2A (cetanserina, 5 μg/pata, i.pl.) ou PAR-2 (ENMD-1068, 10-100 nmol/pata) ou com o inibidor da triptase (gabexato, 0,01-1 nmol/pata) reduziu parcialmente a dor pós-operatória em camundongos. Assim, os mecanismos de ativação de mastócitos, bem como a liberação dos seus mediadores inflamatórios e conseqüente ativação dos seus respectivos receptores são alvos interessantes para o desenvolvimento de novas terapias para tratar a dor pós-operatória.