Este trabalho objetivou coletar e isolar fungos filamentosos de diferentes regiões do estado de São Paulo com potenciais para produção de enzimas amilolíticas com características físico-químicas desejáveis para aplicação industrial. Foram coletados 19 fungos nas três coletas realizadas e estes juntamente com outros cinco fungos, isolados anteriormente durante o projeto Biota/FAPESP, foram submetidos a uma seleção para a escolha do melhor produtor de amilases. Aspergillus niveus foi o que melhor produziu amilases nas condições avaliadas e foi tomado para dar continuidade ao trabalho. A etapa seguinte consistiu em avaliar as melhores condições de cultivo para a produção das amilases. Os maiores níveis de atividade enzimática foram detectados em meio Khanna, em cultivos estáticos, pH inicial 6,0, a 40°C, com 72 horas de crescimento. Milho moído, farinha de aveia, palha de arroz, maisena, amido solúvel, casca de mandioca, maltose, farelo de trigo, penetrose, amilopectina e rafinose foram as fontes de carbono que melhor induziram a síntese de amilases. Extratos enzimáticos de A. niveus obtidos sob condições ótimas de cultivo, foram submetidos a eluição em diferentes colunas cromatográficas (DEAE-Fragtogel e Sephacryl S-200) e três amilases foram purificadas (uma glucoamilase e 2 a-glucosidases- I e II), cujas massas moleculares determinadas por SDS-PAGE corresponderam à 77, 59 e 55 kDa. Os pontos isoelétricos e o conteúdo de carboidrato corresponderam respectivamente a de 3,8 e 15% para glucoamilase, 6,6 e 4% para a-glucosidase I e 6,8 e 29% para a- glucosidase II. O pH ótimo para atividade de glucoamilase foi de 5,0-5,5 e pH 6,0 para a atividade de a-glucosidase I e II. A temperatura ótima para as três enzimas foi de 65°C e as mesmas apresentaram boa estabilidade a 60 e 65°C. A glucoamilase apresentou alta afinidade para o amido, já a a-glucosidase I apresentou alta afinidade para amido, glicogênio e maltose. A maior eficiência catalítica foi verificada na presença de VII glicogênio, seguido de amido e maltose. A a-glucosidase II apresentou atividade sobre vários substratos e os valores de Kcat/Km obtidos mostraram maior preferência dessa enzima pelo glicogênio, seguido de amido, amilopectina, maltose e -NPG. A análise de Dicroísmo Circular demonstrou que as três amilases são ricas em a-hélices nas suas estruturas secundárias e o sequenciamento de aminoácidos revelou similaridade da glucoamilase de A. niveus com glucoamilases de A. terreus, A. niger, A. ficcum, A. awamori, A. kawachi e A. shirousami. O sequenciamento das a-glucosidases I e II revelaram homologia destas com a-glucosidase de A. fumigatus. Estudos do efeito de N-glicanas nas propriedades das enzimas foram avaliados mediante tratamento do meio de cultivo com tunicamicina. A glucoamilase e a a-glucosidase I perderam significativamente a especificidade pelo substrato, já a a-glucosidase II perdeu termoestabilidade com a remoção das N-glicanas. Glucoamilase e a-glucosidase II foram imobilizadas em suportes com interação iônica e por ligação covalente. Os suportes trocadores iônicos usados foram Glioxil-PEI, Glioxil-MANAE, DEAESephacel e Sepharose Q. Os suportes utilizados para interação covalente foram agarose ativada com brometo de cianogênio (BrCN) e Glioxil-Agarose, pH 10,5. A estabilidade apresentada com os derivados formados por ligações covalentes foi maior que aquela apresentada para os derivados formados a partir de ligações iônicas. O uso da trealose como aditivo aumentou significativamente a estabilidade de todos os derivados / This study aimed to collect and isolate filamentous fungi from different regions of São Paulo state with potential for amylases production with desirable physical and chemical characteristics for industrial application. It was collected 19 fungi during three different expeditions. These fungi with other five microorganisms previously isolated during the Biota project were submitted to screening tests to select a good amylases producer. Aspergillus niveus was one of the best amylase producers under experimental conditions and was chosen to continue this work. The next step was to determine the best growth conditions for the amylases production. The highest levels of enzymatic synthesis were detected in Khanna medium under static conditions, initial pH 6.0, at 40°C during 72 hours. Corn, oatmeal, rice straw, corn starch, soluble starch, cassava peel, maltose, wheat bran, penetrose, amylopectin and raffinose were the best carbon sources for amylase production. Enzymatic extracts from A. niveus obtained under the optimal culture conditions, were loaded in different chromatography columns (DEAE-Fragtogel and Sephacryl S200) where three amylases were purified (a glucoamylase and two a-glucosidases, named I and II), whose molecular weights determined by SDS-PAGE corresponded to 77, 59 and 55 kDa. The isoelectric points and carbohydrate content were 3.8 and 15% for glucoamylase, 6.6 and 4% for -glucosidase I and 6.8 and 29% for -glucosidase II, respectively. The glucoamylase optimum pH was 5.0-5.5 and 6.0 for -glucosidases I and II. The optimum reaction temperatures were 65° C for all studied enzymes and all of them showed stability at 60 and 65°C. The glucoamylase presented high affinity for starch and -glucosidase I presented high affinity for starch, glycogen and maltose. The highest catalytic efficiency was observed using glycogen, starch and maltose as substrates. The -glucosidase II hydrolyzed several substrates and the kcat/Km values showed greater performance under glycogen, followed by starch, amylopectin, maltose and -NPG hydrolysis. The Circular Dichroism (CD) analyses showed that all the studied amylases were predominantly constituted by -helices in its secondary structure. The amino acid sequencing revealed similarity among the glucoamylase from A. niveus, A. terreus, A. niger, A. ficcum, A. awamori, A. kawachi and A. shirousami. Comparing the sequencing of a-glucosidases I and II from A. niveus, both showed homology with other a-glucosidases from A. fumigatus. Studies about the effect of N-glycans under enzymatic properties were done by addition of tunicamycin in the culture medium. Glucoamylase and a-glucosidase I lost significantly their substrate specificity, and a- glucosidase II lost its thermostability after the N-glycans removal. Glucoamylase and a- glucosidase II were immobilized in ionic interaction supporters and by covalent bonds. The ion exchangers supporters used were glyoxylic-PEI, glyoxylic-MANA, DEAESephacel and Sepharose Q. The supporters used for covalent interaction were agarose activated with cyanogen bromide (BRCN) and glyoxylic-Agarose, pH 10.5. The stability presented with derivatives formed by covalent bonds was higher than those reported for the derivatives formed from ionic bonds. The use of trehalose as an additive really improved the stability of all derivatives.

Orientador: Paulo Cezar Ceresini / Resumo: Rhizoctonia solani AG-1 IA é um patógeno habitante do solo que causa doenças em pastagens e plantas cultivadas, em vários estados brasileiros. Para penetrar e colonizar os tecidos do hospedeiro, o microrganismo utiliza enzimas que podem ser de interesse biotecnológico e industrial. O objetivo do presente trabalho foi produzir e caracterizar a α-amilase secretada por R. solani AG-1 IA utilizando produtos e resíduos agroindustriais como substratos para fermentação. Para todos os ensaios foi adotado o processo de cultivo em estado sólio (CES) à temperatura de 25 °C e umidade inicial de 60%. Inicialmente, nove isolados de R. solani provenientes de diferentes hospedeiros (arroz, braquiária e soja) foram comparados quanto à produção amilolítica. As maiores atividades enzimáticas foram proporcionadas pelos isolados TO_022 e MT_SO85, procedentes da cultura da soja. Na etapa seguinte, foi avaliado o efeito do substrato sobre a produção enzimática. Farelo de trigo (12,98 U mL-1; TO_022), farelo de soja (3,97 U mL-1; MT_SO85) e braquiária lavada (4,95 U mL-1; TO_022) induziram eficientemente a produção amilolítica. O perfil de produção enzimática no farelo de trigo, melhor substrato avaliado no cultivo, indicou o tempo de 216 h como o mais apropriado para a obtenção de α-amilases pelo isolado TO_022 (22,14 U mL-1), e 240 h para o isolado MT_SO85 (22,84 U mL-1). Para caracterização físico-química da enzima foi utilizado o extrato enzimático bruto do isolado TO_022. A α-amilase de R. sola... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rhizoctonia solani AG-1 IA is a soil-borne pathogen that causes diseases in pastures and cultivated plants in several Brazilian states. To penetrate and colonize host tissues, the microorganism uses enzymes that may be of biotechnological and industrial interest. The aim of the present work was to produce and characterize the α-amylase secreted by R. solani AG-1 IA using agroindustrial products and residues as substrates for fermentation. For all the tests, the solid state cultivation process (SSC) at 25 °C and initial humidity of 60% was adopted. Initially, nine isolates of R. solani from different hosts (rice, Brachiaria grass and soybean) were compared for amylolytic production. The major enzymatic activities were provided by the isolates TO_022 and MT_SO85, from the soybean crop. In the next step, the effect of the substrate on the enzymatic production was evaluated. Wheat bran (12.98 U mL-1; TO_022), soybean meal (3.97 U mL-1, MT_SO85) and washed ruzigrass (4.95 U mL-1; TO_022) efficiently induced amylolytic production. The enzymatic production profile in wheat bran, the best substrate evaluated in the culture, indicated the time of 216 h as the most appropriate to obtain α-amylases by the TO_022 isolate (22.14 U mL-1), and 240 h for the isolated MT_SO85 (22.84 U mL-1). For the physicochemical characterization of the enzyme, the crude enzymatic extract of the TO_022 isolate was used. The α-amylase of R. solani TO_022 exhibited maximum activity at 55 °C and pH 5.5, and ma... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by LOUISE GARBELOTTI GONÇALVES (lou_ise_gg@hotmail.com) on 2016-05-31T17:27:57Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_GONÇALVES, Louise G._2016.pdf: 1045451 bytes, checksum: 2b2d475a38ba54ed6a247190f4fc82b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-05-31T17:56:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 goncalves_lg_me_rcla.pdf: 1045451 bytes, checksum: 2b2d475a38ba54ed6a247190f4fc82b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-31T17:56:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 goncalves_lg_me_rcla.pdf: 1045451 bytes, checksum: 2b2d475a38ba54ed6a247190f4fc82b0 (MD5) Previous issue date: 2016-04-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O desenvolvimento de bioprocessos para produção de alimentos e energia, que utilizam resíduos agroindustriais como matéria-prima, é alvo de intensas pesquisas no mundo devido às limitações de novas fronteiras agrícolas e de fontes de energia renováveis. A utilização de enzimas nesses processos produtivos surge como uma forte tendência, dentre elas, as amilases. O objetivo desse estudo foi a otimização da produção de amilases empregando o fungo Rhizopus microsporus var. oligosporus, cultivado em Fermentação em Estado Sólido (FES), tendo como substrato os resíduos agroindustriais: farelo de trigo, bagaço de mandioca e bagaço de cana de açúcar. O hidrolisado obtido da hidrólise do bagaço de mandioca foi avaliado quanto à sua fermentabilidade por meio da fermentação alcoólica em batelada alimentada por Saccharomyces cerevisiae. A melhor fonte de carbono como substrato para formulação do meio de cultivo foi aquele contendo 100% de farelo de trigo. Em relação às fontes de nutrientes para produção de amilases, a maior atividade amilolítica (418 U/g) foi para a solução de nutrientes contendo (%): 1,34 de sulfato de amônio, 0,54 de monofosfato de amônio (MAP) e 1,86 de ureia. Porém, foi observado que, ao acrescentar um mínimo de 0,01 % (m/m) de extrato de levedura na solução de nutrientes, obteve-se aumento na atividade amilolítica de 418 U/g para 551 U/g. A hidrólise enzimática do bagaço de mandioca foi feita com a associação de celulases comerciais (Novozyme) (10 FPU/g no tempo zero horas) e com o extrato amilolítico (12 U/g no tempo 10 horas de reação) produzido em FES para a obtenção de um hidrolisado concentrado. Com estas condições foi possível converter 63% de bagaço em açúcares redutores com predomínio de glicose. Por meio da fermentação alcoólica em batelada alimentada por Saccharomyces cerevisiae, obteve-se eficiências de 74,6 e 76,8%, e produtividades etanólicas com 3,14 g L-1h-1 e 1,61 g L-1h-1 em 12 e 24 h, respectivamente. A produção de etanol a partir de um hidrolisado de bagaço de mandioca nas condições de hidrólise proposta foi possível, o que corresponde a uma alternativa à tecnologia da cana-de-açúcar para produção deste biocombustível. / The development of bioprocesses for food and energy production, which makes use of agricultural waste as raw material, is focus of intense research around the world due to limitations on new agricultural frontiers and on renewable energy sources. The use of enzymes in these processes emerges as a strong trend, among them, amylases. The aim of this study was the amylase production optimization employing fungus Rhizopus microsporus var. oligosporus, grown by Solid Station Fermentation (SSF), using as substrate these agricultural waste: wheat bran, cassava bagasse and sugarcane bagasse. The hydrolizate obtained from cassava bagasse hydrolysis was evaluated with regards to its fermentability through fed-batch alcoholic fermentation by Saccharomyces cerevisiae. The best carbon source as substrate for the culture medium formulation was the one containing 100% wheat bran. Regarding salts sources for amylases production, the higher amylolytic activity (418 U/g) was for the nutrient solution containing (%): ammonium sulfate 1.34; ammonium monophosphate 0.54 and urea 1.86. However, the addiction of 0.01% (w/w) yeast extract in salts solution, amylolytic activity increased from 418 U/g to 551 U/g. The enzymatic hydrolysis of cassava bagasse was performed with the combination of commercial cellulases (Novozyme) (10 FPU/g at time zero hours) and the amylolytic extract (12 U/g at time 10 hours) produced by SSF to obtain a hydrolizate concentrate. With these conditions it was possible to convert 63% of bagasse in reducing sugars predominantly glucose. Through the fed-batch alcoholic fermentation tests by Saccharomyces cerevisiae, efficiencies were determined as 74.6 and 76.8%, and the ethanolic productivities with 3.14 gL-1h-1 and 1.61 gL-1h-1, at 12 and 24 h, respectively. Ethanol production from cassava bagasse hydrolyzate in hydrolysis conditions proposal was possible, which corresponds to an alternative technology of sugarcane for production of biofuel.

Orientador: Ranulfo Monte Alegre, Vanildo Luiz Del Bianchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-08T12:41:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guandalini_NataliaCapeletti_M.pdf: 871682 bytes, checksum: e4a32e6ca78e765cdc8ad2777861e933 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O fungo Metharhizium anisopliae tem sido empregado no biocontrole de insetos em diferentes regiões do Brasil, com aplicação principal em lavouras de cana-de-açúcar. O processo de biocontrole envolve a adesão dos esporos do fungo à superfície do inseto, a destruição do mesmo através da pressão mecânica das hifas, além de processos de digestão enzimática de proteínas, quitinas e lipídeos. Por esse motivo, estudos indicam a viabilidade da produção de amilases, proteases, lipases e quitinases pelo fungo. Além disso, este fungo tem sido objeto de estudos como produtor de swainsonine, um alcalóide com ação potencial na inibição da metástase celular e do crescimento primário de tumores, sendo promissora a sua utilização em tratamentos contra o câncer e AIDS. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo estudar o potencial amilolítico de linhagens de Metarhizium anisopliae. Para a produção das enzimas utilizou-se fermentação em meio sólido. Para tanto, o microrganismo mantido em meio BDA foi inoculado através da suspensão de células na concentração de 107 esporos/g em 10 g de meio farelo e casca de arroz, em proporções de 7/3 (p/p), 6/4 (p/p) e 8/2 (p/p). A umidade inicial dos meios de cultivo variou em 47%, 65% e 74%. A fermentação ocorreu em sacos de polipropileno, os quais foram mantidos a 28ºC durante 480 horas, sendo retiradas amostras a cada 24 horas. No extrato enzimático obtido foram determinadas as atividades de a-amilase e de amiloglicosidase. Para o estudo da influência da interação de fatores como meio de cultivo, umidade, pH e concentração de esporos na produção das enzimas em estudo, foi utilizado um planejamento experimental 24-1, onde se observou que o pH apresenta influência na produção de a-amilase. Para a produção de a-amilase e amiloglicosidase, observou-se que o melhor meio de cultivo foi o constituído por farelo e casca de arroz na proporção 6/4 (p/p), com umidade de 47%. O pH ótimo para a atividade de a¿amilase e de amiloglicosidase foi de 5 - 5,5, apresentando estabilidade numa faixa de 5 ¿ 6,5 para a a¿amilase e de 5,5 ¿ 6 para a amiloglicosidase. A temperatura ótima para a atividade enzimática de a¿amilase foi de 70ºC e de 60ºC para a amiloglicosidase, apresentando estabilidade numa faixa de 10 a 50ºC. A atividade enzimática de a¿amilase foi influenciada positivamente pelos íons Mg+2, Mn+2, K+, Ca+2 e EDTA, enquanto o íon Zn+2 influenciou negativamente a atividade da enzima. Para a amiloglicosidase, todos os íons testados apresentaram efeito negativo, com destaque para o Zn+2 que apresentou a maior redução na atividade enzimática / Abstract: The fungus Metharhizium anisopliae has been used as biocontrol agent, actuating on insects in different areas of Brazil, with main application in sugarcane farmings. Such a biocontrol process involves the adhesion of the fungus spores to the surface of the insect, destruction of the same through the mechanical pressure of the hyphal, as well the processes of enzymatic digestion of proteins, chitins and lipids. For that reason, studies indicate the viability of the production of amylases, proteases, lipases and chitinases by this fungus. Besides, it is object of studies as producer of swainsonine, an alkaloid with potential action in the metastasis cellular and in the primary growth of tumors, being promising its use in treatments against the cancer and AIDS. The objective of this work was to evaluate the amylolytic potential of the strains of Metharizium anisopliae. For the enzymes production, it was utilized solid state fermentation. For that, the microorganism maintained in PDA media was inoculated through the suspension of cells in the concentration of 107 spores/g in 10 g of media constituted by bran and rice chaff, in proportions of 7/3 (p/p), 6/4 (p/p) and 8/2 (p/p). The initial moisture content of fermentation was varied on 47%, 65% and 74%. The experiments were carried in polypropylene bags, which were incubated at 28ºC for 480 hours of fermentation, being removed from it, samples every 24 hours. From the crude enzymatic solution, there were determined the activities of a-amylase and the amiloglucosidase. For the study of the interaction of factors such as cultivation medium, moisture, pH and inoculum size in the enzymes production, a statistical design 24-1 was used, where it was observed that the pH presents influence in the production of a-amylase. For the production of a-amylase and amiloglicosidase, it was concluded that the best cultivation medium is constituted by bran and rice chaff in the proportion 6/4 (p/p), with a moisture content of 47%. The optimum pH for a-amylase and amiloglicosidase was of 5 - 5,5, presenting stability in a pH range from 5 to 6,5 for the a- amylase and 5,5 to 6 for the amiloglicosidase activity. The best temperature for a-amylase activity was 70ºC and 60ºC for the amiloglicosidase, presenting stability in a range from 10 to 50ºC. The a-amylase activity was influenced positively by the ions Mg+2, Mn+2, K+, Ca+2 and EDTA, while the ion Zn+2 influenced negatively the enzyme activity. For the amiloglicosidase, all of the tested ions presented negative effect, with prominence for Zn+2 that presented the largest reduction in the enzymatic activity / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Jaime Aparecido Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T16:20:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Botelho_JulianaNunes_D.pdf: 1920977 bytes, checksum: 99c53e9c14bfc15c6b8859cce1fe5dec (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Sacarose é o carboidrato mais cariogênico da dieta e o amido é considerado não cariogênico para esmalte e moderadamente cariogênico para dentina. Por outro lado, a combinação de amido e sacarose (amido+sacarose) tem sido considerada mais cariogênica que apenas sacarose, mas esse ainda é um assunto em debate. Além do mais, o efeito do dentifrício fluoretado na cariogenicidade dessa combinação é desconhecido. Assim, com o objetivo de estudar esse assunto três experimentos foram conduzidos: (i) o primeiro avaliou efeito de amido+sacarose na desmineralização de esmalte e dentina, usando um modelo de biofilme de S. mutans modificado pela adição de saliva para simular a ação da amilase, (ii) o segundo avaliou in situ o efeito do dentifrício contendo 1.100 µg F/g (DF) na progressão da desmineralização da dentina radicular, e o terceiro (iii) avaliou in situ o efeito do fluoreto no potencial cariogênico de amido+sacarose na desmineralização de esmalte e dentina. In vitro, biofilmes de S. mutans foram formados sobre blocos de esmalte e dentina radicular, por 5 e 4 dias respectivamente, em meio de cultura contendo saliva e expostos a um dos seguintes tratamentos: amido a 1%, sacarose a 10% ou de sua combinação (8x/dia). Os biofilmes foram analisados quanto às suas composições bioquímicas e microbiológicas, e a desmineralização dos blocos foi avaliada. Biofilmes expostos à combinação foram mais acidogênicos (p<0,0001) e provocaram maior desmineralização (p<0,0001) no esmalte e dentina que o efeito dos carboidratos isolados. In situ, o efeito do DF foi testado em um estudo piloto, cruzado no qual sacarose a 10% foi aplicada extraoralmente 8x/dia em 2 fases de 14 dias. Após 10 e 14 dias em cada fase, a desmineralização da dentina foi avaliada. O efeito do dentifrício foi significativo (p<0,0001), mas o efeito do tempo não (p>0,05). Esses resultados sugerem que o DF com 1.100 µg F/g é capaz de diminuir a cárie dentinária mesmo sob alto desafio cariogênico de acúmulo de biofilme e exposição à sacarose. In situ, o efeito dos tratamentos (água, amido a 2%, sacarose a 10% e amido+sacarose) e o efeito do dentifrício (não fluoretado e fluoretado) foram testados em um estudo cruzado, cego, boca-dividida em 4 fases de 14 dias. Os voluntários usaram dois dos tratamentos 8x/dia e um dos dentifrícios 3x/dia. O efeito dos fatores (dentifrício e tratamentos) foram significativos (p<0,05) para esmalte e dentina, mas a interação não (p>0,05). Os resultados sugerem que, independente do desafio cariogênico provocado pelos diferentes carboidratos da dieta testados, o dentifrício fluoretado é efetivo na redução da desmineralização de esmalte e dentina. Em conclusão, os resultados sugerem que amido deve aumentar o potencial cariogênico da sacarose mas que fluoreto de dentifrício é capaz de reduzir a desmineralização tanto do esmalte quanto da dentina provocada pela combinação desses carboidratos / Abstract: Sucrose is the most cariogenic dietary carbohydrate while starch is considered non-cariogenic for enamel and slightly cariogenic for dentine. The combination starch and sucrose (starch+sucrose) has been considered more cariogenic than sucrose alone but this subject remains debatable. Also, the effect of fluoride toothpaste on the cariogenicity of this combination is unknown. The aims of this study were to evaluate: (i) the effect of starch+sucrose on enamel and dentine demineralization using an S. mutans biofilm model modified by adding human saliva to simulate amylase action; (ii) the in situ effect of fluoride toothpaste (FT) containing 1100 µg F/g on dentine demineralization progression; and (iii) the in situ effect of fluoride on the cariogenic potential of starch+sucrose on enamel and dentine demineralization. In vitro, S. mutans biofilms were grown on enamel and root dentine slabs for 5 and 4 days, respectively, in a saliva-containing medium and exposed to the following treatment: 1% starch; 10% sucrose; or starch+sucrose (8x/day). Biofilms were then analyzed for their biochemical and microbiological compositions, and dental demineralization was evaluated. Biofilms exposed to starch+sucrose were more acidogenic (p < 0.0001) and caused higher demineralization (p < 0.0001) on either enamel or dentine than those exposed to each carbohydrate alone. The in situ effect of FT on dentine demineralization was tested in a pilot crossover study, in which 10% sucrose was applied extra-orally to the slabs 8x/day in 2 phases of 14 days each. At days 10 and 14 of each phase, dentine demineralization was evaluated. The effect of toothpaste was significant (p<0.0001), but the effect of time was not (p>0.05). The results suggest that FT at 1100 µg F/g can reduce dentine demineralization even under high cariogenic challenges - biofilm accumulation and sugar exposure. The in situ effect of the treatments (water, 2% starch, 10% sucrose and starch+sucrose) and that of the toothpastes (non-FT and FT) were tested in a crossover, single-blind and split-mouth study conducted in 4 phases of 14 days each. The volunteers used two of the treatments 8 times/day and one of the toothpastes 3 times/day. The effect of the factors (toothpaste and treatments) was significant (p<0.05) for enamel and dentine, but not (p>0.05) for the interaction. The findings suggest that, regardless of the cariogenic challenge provoked by the different sources of the dietary sugars tested, fluoride toothpaste is effective in reducing enamel and dentine demineralization. In conclusion, the results suggest that starch may enhance the cariogenic potential of sucrose and fluoride from toothpaste reduces enamel and dentine demineralization caused by the combination of these carbohydrates / Doutorado / Cariologia / Doutora em Odontologia

Introdução: A saliva total (ST) além do produto das glândulas salivares estará acrescida de resíduos da descamação celular das mucosas oral, cavidade nasal, faringe; fluidos gengivais, leucócitos, bactérias, restos alimentares, hormônios, drogas e etc. Entre outras características está sua capacidade protetora e cicatrizante. Objetivo: Avaliar e verificar a atividade das enzimas, alfa amilase e peroxidases; ácido siálico, concentração proteica de mucinas e proteínas totais; pH e fluxo na ST não estimulada de recém nascido a termo (RNT) em aleitamento materno exclusivo. Casuística e Metodologia: As amostras salivares foram colhidas de 22 RNT em aleitamento materno exclusivo; do alojamento conjunto, do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo (HU-USP), no período de setembro a outubro de 2017, após assinatura de termo de consentimento livre e esclarecido pelos responsáveis. Critérios de Inclusão: RNT saudáveis, em aleitamento materno exclusivo, com peso adequado para idade gestacional (AIG). Critérios de Exclusão: Portadores de doença sistêmica, Malformação Congênita, Doenças Neurológicas, Sepse neonatal, Distúrbios metabólicos de difícil correção (hipoglicemia refratária),Distúrbios hidroeletrolíticos, Distúrbios acido/básicos, Doenças hemolíticas, Infecções Congênitas do grupo ZTORCHS. Resultados: Verificamos a presença de todos os componentes do estudo (alfa amilase, peroxidases; ácido siálico, concentração proteica de mucinas e proteínas totais, pH e fluxo), em quantidade pequena, justificada pela imaturidade funcional das glândulas salivares, sem diferenças estatísticas entre elas. Verificamos para esta amostra diferenças estatisticamente significante quanto à: idade das mães de primeira gestação; a evolução das notas do índice Apgar de primeiro minuto para as notas do quinto minuto de vida extrauterina; como elemento mais significativo dos resultados, está a quantidade aumentada de alfa amilase para os recém nascidos de nota oito na índice de Apgar do primeiro minuto. Conclusão: A saliva total embora sofra modificações quantitativas e qualitativas com o crescimento desenvolvimento da criança, neste precoce período neonatal reflete não só seu caráter protetor e indiretamente imunológico; o funcionamento glandular; assim como através da quantidade aumentada de alfa amilase nos recém nascidos com nota oito do índice de Apgar, mostrando a ação do Sistema Nervoso Simpático e Parassimpático, uma vez que as glândulas salivares reagem de forma direta a seus estímulos / Introduction: The total saliva (TS) in addition to the salivary gland product will be increased by residues of the cellular desquamation of the oral mucosa, nasal cavity, pharynx; gingival fluids, leukocytes, bacteria, food debris, hormones, drugs, and so on. Among other characteristics is its protective and healing capacity. Objective: To evaluate and verify the activity of the enzymes, alpha amylase and peroxidases; sialic acid, protein concentration of mucins and total proteins; pH and flow in the unstimulated ST of term newborn (TNF) in exclusive breastfeeding. Casuistry and Methodology: Salivary samples were collected from 22 TNF in exclusive breastfeeding; of the University Hospital of the University of São Paulo (HU-USP), from September to October 2017, after signing an informed consent form. Inclusion Criteria: RNT healthy, exclusively breastfed, with adequate weight for gestational age (AIG). Exclusion Criteria: Systemic disease carriers, Congenital malformation, Neurological diseases, Neonatal sepsis, Metabolic disorders of difficult correction (hypoglycemia refractory), Hydroelectrolytic disorders, Acid / basic disorders, Hemolytic diseases, Congenital infections of the ZTORCHS group. Results: We verified the presence of all components of the study (alpha amylase, peroxidases, sialic acid, protein concentration of mucins and total proteins, pH and flow), in a small amount, justified by the functional immaturity of the salivary glands, without statistical differences between them . We verified for this sample statistically significant differences as to: the age of the mothers of first gestation; the evolution of the first-minute Apgar score notes to the fifth-minute notes of extrauterine life; as the most significant element of the results is the increased amount of alpha amylase for infants of note eight in the first minute Apgar score. Conclusion: Although total saliva undergoes quantitative and qualitative changes with the child\'s growth development, in this early neonatal period it reflects not only its protective and indirectly immunological nature; glandular functioning; as well as through the increased amount of alpha amylase in newborns with an eight note Apgar score, showing the action of the Sympathetic and Parasympathetic Nervous System, since the salivary glands react directly to their stimuli

Introdução: A saliva total (ST) além do produto das glândulas salivares estará acrescida de resíduos da descamação celular das mucosas oral, cavidade nasal, faringe; fluidos gengivais, leucócitos, bactérias, restos alimentares, hormônios, drogas e etc. Entre outras características está sua capacidade protetora e cicatrizante. Objetivo: Avaliar e verificar a atividade das enzimas, alfa amilase e peroxidases; ácido siálico, concentração proteica de mucinas e proteínas totais; pH e fluxo na ST não estimulada de recém nascido a termo (RNT) em aleitamento materno exclusivo. Casuística e Metodologia: As amostras salivares foram colhidas de 22 RNT em aleitamento materno exclusivo; do alojamento conjunto, do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo (HU-USP), no período de setembro a outubro de 2017, após assinatura de termo de consentimento livre e esclarecido pelos responsáveis. Critérios de Inclusão: RNT saudáveis, em aleitamento materno exclusivo, com peso adequado para idade gestacional (AIG). Critérios de Exclusão: Portadores de doença sistêmica, Malformação Congênita, Doenças Neurológicas, Sepse neonatal, Distúrbios metabólicos de difícil correção (hipoglicemia refratária),Distúrbios hidroeletrolíticos, Distúrbios acido/básicos, Doenças hemolíticas, Infecções Congênitas do grupo ZTORCHS. Resultados: Verificamos a presença de todos os componentes do estudo (alfa amilase, peroxidases; ácido siálico, concentração proteica de mucinas e proteínas totais, pH e fluxo), em quantidade pequena, justificada pela imaturidade funcional das glândulas salivares, sem diferenças estatísticas entre elas. Verificamos para esta amostra diferenças estatisticamente significante quanto à: idade das mães de primeira gestação; a evolução das notas do índice Apgar de primeiro minuto para as notas do quinto minuto de vida extrauterina; como elemento mais significativo dos resultados, está a quantidade aumentada de alfa amilase para os recém nascidos de nota oito na índice de Apgar do primeiro minuto. Conclusão: A saliva total embora sofra modificações quantitativas e qualitativas com o crescimento desenvolvimento da criança, neste precoce período neonatal reflete não só seu caráter protetor e indiretamente imunológico; o funcionamento glandular; assim como através da quantidade aumentada de alfa amilase nos recém nascidos com nota oito do índice de Apgar, mostrando a ação do Sistema Nervoso Simpático e Parassimpático, uma vez que as glândulas salivares reagem de forma direta a seus estímulos / Introduction: The total saliva (TS) in addition to the salivary gland product will be increased by residues of the cellular desquamation of the oral mucosa, nasal cavity, pharynx; gingival fluids, leukocytes, bacteria, food debris, hormones, drugs, and so on. Among other characteristics is its protective and healing capacity. Objective: To evaluate and verify the activity of the enzymes, alpha amylase and peroxidases; sialic acid, protein concentration of mucins and total proteins; pH and flow in the unstimulated ST of term newborn (TNF) in exclusive breastfeeding. Casuistry and Methodology: Salivary samples were collected from 22 TNF in exclusive breastfeeding; of the University Hospital of the University of São Paulo (HU-USP), from September to October 2017, after signing an informed consent form. Inclusion Criteria: RNT healthy, exclusively breastfed, with adequate weight for gestational age (AIG). Exclusion Criteria: Systemic disease carriers, Congenital malformation, Neurological diseases, Neonatal sepsis, Metabolic disorders of difficult correction (hypoglycemia refractory), Hydroelectrolytic disorders, Acid / basic disorders, Hemolytic diseases, Congenital infections of the ZTORCHS group. Results: We verified the presence of all components of the study (alpha amylase, peroxidases, sialic acid, protein concentration of mucins and total proteins, pH and flow), in a small amount, justified by the functional immaturity of the salivary glands, without statistical differences between them . We verified for this sample statistically significant differences as to: the age of the mothers of first gestation; the evolution of the first-minute Apgar score notes to the fifth-minute notes of extrauterine life; as the most significant element of the results is the increased amount of alpha amylase for infants of note eight in the first minute Apgar score. Conclusion: Although total saliva undergoes quantitative and qualitative changes with the child\'s growth development, in this early neonatal period it reflects not only its protective and indirectly immunological nature; glandular functioning; as well as through the increased amount of alpha amylase in newborns with an eight note Apgar score, showing the action of the Sympathetic and Parasympathetic Nervous System, since the salivary glands react directly to their stimuli

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-08-23T17:16:34Z No. of bitstreams: 1 SILVIO MAGRI FILHO.pdf: 583881 bytes, checksum: 8163d00e54a8b712b124036c73fdf2fb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-23T17:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SILVIO MAGRI FILHO.pdf: 583881 bytes, checksum: 8163d00e54a8b712b124036c73fdf2fb (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / This work was produced and determined the activity of an enzyme complex extracted from the fungus Aspergillus awamori and evaluated the apparent digestibility coefficients (CDAs) of crude protein, gross energy and dry matter ration reference tambaqui with 3 increasing levels of enzyme solution obtained from the fungus. The experiment was a completely randomized design with four treatments (100ml water solution without enzyme/kg of ration, 100 ml of enzyme/kg feed, 150 ml of enzyme/kg of ration and 200 mL of enzymatic solution/Kg ration) and three replications in time. It was installed on Aquaculture Research Laboratory in the Department of Animal Science LAPOA - PUC Goiás. A total of 96 tambaqui, Colossoma macropomum, with an average weight of 55.69 (± 2.55) g, distributed in twelve tanks of 100 liters, system in closed recirculating water containing 8 fish per experimental unit. Fish were fed every hour in the morning, at 8:00 h, 9:00 h, 10:00 h, 11:00 h and 12:00 h. Thirty minutes after the last meal the fish were transferred to units collect feces for up to 300 L. To determine digestibility was added will feed the chromic oxide-III marked as inert. The addition of the enzyme solution improved the digestibility of the ration, increasing the utilization of dry matter, crude protein and gross energy in the inclusion level of 0.05% (P <0.05%). / Neste trabalho foi produzido e determinado a atividade de um complexo enzimático extraído do fungo Aspergillus awamori e avaliou-se os coeficiente de digestibilidade aparente (CDa) da proteína bruta, energia bruta e matéria seca de ração referência para juvenis de tambaqui com 3 níveis crescentes de solução enzimática obtida do fungo. O experimento foi montado em delineamento inteiramente casualizado com quatro tratamentos (100ml de água sem solução enzimática/Kg de ração; 100 ml de solução enzimática/Kg da ração; 150 ml de solução enzimática/Kg da ração e 200 mL de solução enzimática/Kg da ração) e três repetições no tempo. Foi instalado no Laboratório de Pesquisas em Aquicultura LAPOA do Departamento de Zootecnia da PUC Goiás. Foram utilizados 96 juvenis de tambaqui, Colossoma macropomum, com peso médio de 55,69 (±2,55) g, distribuídos em doze aquários de 100 litros, em sistema de fechado de recirculação de água, contendo 8 peixes por unidade experimental. Os peixes foram alimentados de hora em hora no período matutino, as 8:00h, 9:00h, 10:00h, 11:00h e 12:00h. Trinta minutos após a última refeição os peixes foram transferidos para as unidades de coleta de fezes, com capacidade para 300 L. Para determinação da digestibilidade foi adicionado á ração o óxido de crômio-III como marcado inerte. A adição da solução enzimática melhorou a digestibilidade aparente da ração, aumentando o aproveitamento da matéria seca, da proteína bruta e da energia bruta no nível de inclusão de 0,05% (P<0,05%).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-14Bitstream added on 2014-06-13T18:44:48Z : No. of bitstreams: 1 santos_mjp_dr_araca.pdf: 438923 bytes, checksum: 1893aba26b44643aa75f1f27e03945d3 (MD5) / O objetivo desta pesquisa foi analisar os níveis de atividade da alfa-amilase, de cortisol salivar e avaliar o comportamento durante o tratamento odontológico, de pacientes portadores de retardo do desenvolvimento neuropsicomotor (rdnpm), participantes da dinâmica de arte, comparando seus valores segundo os procedimentos odontológicos realizados (cirurgia, dentística e prevenção), o gênero, a idade, estímulo artístico, odontopediatria e comportamento. Participaram 71 crianças, sendo 52 portadoras de rdnpm assistidos no Centro de Assistência Odontológica a Portadores de Necessidades Especiais (CAOE), e 19 crianças neurologicamente saudáveis, assistidas na clínica de Odontopediatria, da Faculdade de Odontologia de Araçatuba-FOA-UNESP; todos na faixa etária de 6 a 12 anos e de ambos os sexos. Os pacientes selecionados foram divididos em grupos, de acordo com a necessidade de tratamento odontológico (cirurgia, dentística, e prevenção). Esses mesmos pacientes foram analisados segundo o gênero (masculino e feminino) e a idade, agrupados em dois blocos, um de 6 a 9 anos e outro de 10 a 12 anos. Os níveis de alfa-amilase e cortisol salivar foram avaliados em 3 situações: inicialmente os pacientes foram calibrados por meio de análise de seus níveis habituais de cortisol e alfa amilase, através da coleta de saliva, no período da manhã, na situação SEST (sem estímulos odontológicos ou artísticos). Os mesmos pacientes foram atendidos nos consultórios, na situação TO, onde receberam tratamentos odontológicos e as coletas de saliva foram realizadas após as assistências, para se analisar os níveis de cortisol e alfa-amilase, sem a participação deles nas atividades do projeto da arte. Na situação EATO, os pacientes participaram das atividades... / The purpose of this study was to analyze the levels of alpha-amylase and salivary cortisol and to assess the behavior during dental treatment of patients with neuro-psychomotor development retardation (NPDR), who received art´s dynamics, comparing their values according to the accomplished dental procedures (surgery, dentistry and prevention), gender, age, artistic stimulus, pediatric dentistry and behavior. The study included 71 children aging from six to twelve years old, from both genders: 52 with NPDR assisted at the Dental Care Center for Patients with Special Needs (CAOE - Centro de Assistência Odontológica ao Excepcional, Araçatuba, São Paulo, Brazil), and 19 neurologically healthy children, assisted at the Pediatric Dentistry Clinic, both from Araçatuba School of Dentistry, UNESP. These patients were divided into groups, according to the dental treatment necessity (surgery group, dentistry group and preventive group), and analyzed according to gender (male or female) and age (grouped into two sub-groups: from 6 to 9 years old and from 10 to 12 years old). Alpha-amylase and salivary cortisol levels were evaluated in three situations. Initially, the patients were calibrated through the normal cortisol and alpha-amylase levels, in the morning, in the situation called WDAS (without dental treatment and without artistic stimulus). The same patients were attended at the Clinics, in the situation called DT (dental treatment), where they received dental treatments and, following, saliva collection, in order to analyze the levels of cortisol and alpha-amylase, without receiving activities from the arts project. In the situation called DTAS (with dental treatment and artistic stimulus), previously to the dental treatments, patients took part in art’s dynamics activities, and saliva collection was accomplished... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SUZANE MARTINS FERREIRA.pdf: 4234283 bytes, checksum: a9da923ebc0cff306eed06dbcfb32a27 (MD5) Previous issue date: 2012-03-09 / The rice (Oryza sativa L.) is a cereal consumed worldwide, and the energy base of food, constituting about 23% of total daily calories and about 14% of the protein. The grains are broken rice by-products generated in the processing industry for the processing of rice and cereals have been used for the production of modified starch to be ideal source of low cost, easily obtainable and allows industrial production. The purpose of this study was to determine the enzymatic hydrolysis of grain flour broken rice flour to produce a modified with &#945;-amylase and amyloglucosidase, and drying temperatures (40, 80, 100, 120 and 140 ° C) in its physical, chemical and technological. It also aimed to develop a product similar to flour gluten-free rice milk, by means of mixture design, using flour as components of broken grains of rice and dried enzymatically modified (FDM), milk powder and sugar. The analyzes in FDM were broken and composition, determination of reducing sugars, glucose, color coordinates, solubility and absorption in water and milk analysis and scanning electron microscopy. The enzymatic hydrolysis at 40 ° C was more efficient using 2U of &#945;-amylase / g flour in time of 2 hours and 3U of amyloglucosidase / g of flour in the time of three hours of hydrolysis. The FDM at 40, 80 and 100 ° C showed a reducing sugar of 111.37, 108.15 and 116.04 mg / g of flour and glucose 83.20, 75.90 and 77.30 mg / g flour respectively, which are significantly higher than the grain flour fresh broken and the other drying temperatures tratamentos.As influence the composition of the FDM at different temperatures, an increase in lipid content with increasing drying temperature and changes in its structure. The FDM 40, 80 and 100 ° C had a content of reducing sugars, glucose, solubility in water and in milk significantly larger than the grain flour broken.The FDM from 100 ° C exhibited characteristics of a flour resistant to shear force, and stable to heating at lower temperatures. They also had a darker color with yellow tones and slightly red in the other treatments. The product similar to the rice flour milk was selected with the formulation 10% sugar, 31% milk powder and 59% of the FDM 100 ° C, and evaluated for composition and quality parameters. The formulation presented with sensory acceptance score of 7.95, good strength characteristics, technological characteristics as an index of solubility in water and milk, color coordinates and nutritional composition similar to milk commercial flour. / O arroz (Oryza sativa L.) é um cereal consumido em todo o mundo, sendo a base energética da alimentação humana, constituindo cerca de 23% das calorias diárias totais e cerca de 14% das proteínas. Os grãos quebrados de arroz são subprodutos gerados na indústria processadora de arroz durante o beneficiamento do cereal e tem sido utilizados para produção de amidos modificados, sendo ideal por ser fonte de baixo custo, fácil aquisição e que permite produção industrial. O propósito deste trabalho foi determinar o efeito da hidrólise enzimática da farinha de grãos quebrados de arroz para produção de uma farinha modificada, com &#945;-amilase e amiloglucosidase, e das temperaturas de secagem (40, 80, 100, 120 e 140°C), em suas características físicas, químicas e tecnológicas. Também teve como objetivo desenvolver um produto similar à farinha láctea de arroz sem glúten, por meio do delineamento de misturas, utilizando como componentes a farinha de grãos quebrados de arroz modificada enzimaticamente e seca (FMS), leite em pó e açúcar refinado. As análises realizadas nas farinhas de grãos quebrados e nas FMS foram composição centesimal, determinação de açúcares redutores, glicose, coordenadas de cor, solubilidade e absorção em água e leite e análise de microscopia eletrônica de varredura. A hidrólise enzimática na temperatura de 40°C foi mais eficiente utilizando as concentrações de 2UE de &#945;-amilase /g de farinha no tempo de 2 horas e 3,5UE de amiloglucosidase /g de farinha no tempo de 3 horas de hidrólise. As FMS a 40, 80 e 100°C apresentaram teores de açúcares redutores de 111,37; 108,15 e 116,04 mg/g de farinha e glicose de 83,20; 75,90 e 77,30 mg/g de farinha respectivamente, sendo estes significativamente maiores em relação a farinha de grãos quebrados in natura e aos demais tratamentos.As temperaturas de secagem influenciaram na composição centesimal da FMS em diferentes temperaturas, apresentando um aumento no teor de lipídios com o aumento da temperatura de secagem e modificação em sua estrutura. As FMS em 40, 80 e 100°C apresentaram conteúdo de açúcares redutores, glicose, solubilidade em água e em leite significativamente maiores que a farinha de grãos quebrados. As FMS a partir de 100°C apresentaram características de uma farinha resistente a força de cisalhamento, ao aquecimento e estável a temperaturas mais baixas. Também apresentaram uma coloração mais escura, com tonalidades amarelas e levemente vermelhas em relação aos demais tratamentos. O produto similar à farinha láctea de arroz foi selecionado, com a formulação de 10% de açúcar, 31% de leite em pó e 59% de FMS a 100°C, e avaliados quanto à composição centesimal e parâmetros de qualidade. A formulação apresentou aceitação sensorial com score de 7,95, boas características de firmeza, características tecnológicas como índice de solubilidade em água e leite, coordenadas de cor e composição nutricional semelhantes às farinhas lácteas comerciais.