Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-11-22T13:12:41Z No. of bitstreams: 1 2013_LilianCarlaPereiraBarbosa.PDF: 1701428 bytes, checksum: abb99f8df21806bc866cb91ce409ff1d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-26T13:03:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LilianCarlaPereiraBarbosa.PDF: 1701428 bytes, checksum: abb99f8df21806bc866cb91ce409ff1d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-26T13:03:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LilianCarlaPereiraBarbosa.PDF: 1701428 bytes, checksum: abb99f8df21806bc866cb91ce409ff1d (MD5) / O íon ferro é fundamental para a homeostase celular; porém, pode ser altamente danoso ao organismo quando se encontra livre, pois sua capacidade de aceitar ou doar elétrons permite catalisar a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO). Em circunstâncias normais, essa reação é minimizada pelo sequestro de ferro dentro de complexos com proteínas; na sobrecarga de ferro, os depósitos de ferro estão livres para promover a produção de ERO, sendo esta inevitável em pacientes que recebem transfusões frequentes, como na doença falciforme. A haptoglobina (Hp) é uma glicoproteína que se liga à hemoglobina (Hb) livre formando o complexo Hp-Hb que é essencial para a remoção de Hb do plasma, tendo um papel crucial contra o estresse oxidativo induzido por Hb. Outra proteína relacionada ao estresse oxidativo é a mieloperoxidase (MPO), uma enzima lisossômica com atividade microbicida oxigênio-dependente presente em monócitos e neutrófilos. Visto que ambas as proteínas apresentam polimorfismo genético que pode influenciar na proteção contra o estresse oxidativo, o objetivo do presente trabalho foi investigar a frequência dos polimorfismos nos genes da Hp e da MPO (G463A) em pacientes com doença falciforme (SS) e sua correlação com a gravidade clínica da sobrecarga de ferro, visando avaliar uma possível associação entre esses polimorfismos com a variabilidade clínica, a resposta aos tratamentos e o prognóstico, especialmente aqueles relacionados ao estresse oxidativo. Para tal, foi realizado um estudo transversal com amostra de conveniência composta por 78 pacientes com diagnóstico de doença falciforme atendidos no Hospital de Base do Distrito Federal (HBDF), sem e com sobrecarga de ferro. Os dados foram obtidos através de exames laboratoriais, questionário, pesquisa em prontuários e análises dos polimorfismos por métodos baseados na reação em cadeia da polimerase. Correlação positiva foi encontrada entre os genótipos de Hp e valores de ferritina (p=0,035; coeficiente de correlação de Spearman=0,239), tratamento com hidroxiureia (p=0,031; coeficiente de contingência= 0,369), internação por acidente vascular-cerebral (AVC) (p=0,023; coeficiente de contingência=0,379) e sequelas por AVC (p=0,031; coeficiente de contingência= 0,368), e entre os genótipos de MPO e número de internações no último ano (p=0,049; coeficiente de contingência= 0,332) e esplenectomia (p=0,024; coeficiente de contingência= 0,297). Associação significativa entre genótipos específicos da Hp e comorbidades também foram encontradas, enquanto para MPO os resultados sugeriram que a homozigose AA poderia potencializar os efeitos da asplenia. Desvio significativo no equilíbrio de Hardy-Weinberg foi observado apenas para o polimorfismo da Hp, sendo este compatível com deficiência de heterozigotos, sugerindo uma possível existência de seleção natural desfavorecendo o genótipo 1S-2 entre os pacientes com doença falciforme. Os resultados do Odds Ratio sugeriram a possibilidade de que principalmente o aumento de chances de hospitalização por AVC (OR= 6,346; IC 95%= 1,56–25,79; p=0,005) e de sequelas por AVC (OR= 6,556; IC 95%= 1,578–27,237; p=0,005) poderiam estar associados à menor frequência observada de 1S-2 em relação ao esperado. Apesar de não haver diferenças nas frequências genotípicas entre os grupos sem e com sobrecarga de ferro para nenhum dos polimorfismos analisados, quando analisadas as interações entre os polimorfismos, efeitos significativos foram mostrados apenas no grupo sem sobrecarga para o polimorfismo de Hp nos valores de proteína C-reativa ultra-sensível (PCR-us) (p=0,000) e número de transfusões (p=0,018), o mesmo ocorrendo em relação ao polimorfismo de MPO nos valores de PCR-us (p=0,000), e para a interação entre Hp/MPO também nos valores de PCR-us (p=0,000). Diferenças significativas nas comparações 2-a-2 foram observadas para MPO entre os genótipos GG e AA e entre GA e AA (p=0,000 para ambos). Apesar da associação reportada entre o fenótipo Hp1-1 e doença falciforme, nossos resultados corroboram outros indicando que existem *1diferenças entre os subtipos do alelo Hp . Esses resultados ressaltam a importância do presente estudo para um melhor entendimento do significado biológico do polimorfismo de Hp na variabilidade clínica e resposta aos tratamentos de indivíduos falcêmicos na nossa população, e também sugerem que a homozigose AA da MPO pode potencializar os efeitos da asplenia nesses indivíduos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The iron ion is essential for cellular homeostasis; however, it can be highly damaging to the body when it is free, because its ability to accept or donate electrons allows the formation of reactive oxygen species (ROS) to be catalyzed. Under normal circumstances, this reaction is minimized by sequestering iron in complexes with proteins. However, in iron overload, iron deposits are free to promote the production of ROS, which is inevitable in patients who receive frequent transfusions, as occurs in sickle cell anemia. Haptoglobin (Hp) is a glycoprotein which binds free hemoglobin (Hb), forming the Hp-Hb complex that is essential for removal of plasma Hb, having a crucial role against oxidative stress induced by Hb. Another protein related to oxidative stress is myeloperoxidase (MPO), a lysosomal enzyme with oxygen-dependent microbicidal activity present in monocytes and neutrophils. Since both proteins show genetic polymorphisms that may influence the protection against oxidative stress, the objective of this study was to investigate the frequency of polymorphisms in the Hp and MPO ( G463A) genes of patients with sickle cell disease (SS) and its correlation with the clinical severity of iron overload, aiming to evaluate a possible association between these polymorphisms and clinical variability, response to treatment and prognosis, especially those related to oxidative stress. To this end, we conducted a cross-sectional study with a convenience sample comprising 78 patients with sickle cell disease treated at Hospital de Base do Distrito Federal (HBDF), with and without iron overload. Data were obtained from laboratory tests, questionnaires, the medical records and analysis of the polymorphisms by methods based on polymerase chain reaction. Positive correlations was found between Hp genotypes and values of ferritin levels (p=0.035, Spearman's correlation coefficient= 0.239), treatment with hydroxyurea (p=0.031, contingency coefficient= 0.369), hospitalization for stroke (p=0.023, contingency coefficient= 0.379) and sequelae of stroke (p=0.031, contingency coefficient= 0.368); and between MPO genotypes and number of hospitalizations in the past 12 months (p=0.049; contingency coefficient= 0.332) and splenectomy (p=0.024, contingency coefficient= 0.297). Significant associations between specific Hp genotypes and comorbidities were also found, while for MPO, results suggested that AA homozygosis could increase the effects of asplenia. Significant deviation from the Hardy-Weinberg equilibrium was observed only for the Hp polymorphism, which was compatible with heterozygous deficit, suggesting a possible existence of natural selection disfavoring the 1S-2 genotype among patients with sickle cell anemia. Results of the Odds Ratio suggested the possibility that mainly increased chances of hospitalization for stroke (OR= 6.346; IC 95%= 1.56–25.79; p=0.005) and of sequelae from stroke (OR= 6.556; IC 95%= 1.578–27.237; p=0.005) could be associated with less frequently observed 1S-2 than was expected. Although no differences were observed in genotype frequencies between the groups with and without iron overload for any of the polymorphisms analyzed, when the interactions between the polymorphisms were analyzed, significant effects between subjects were shown only in the group without overload for Hp polymorphism in the values of high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP; p=0.000) and number of transfusions (p=0.018), with the same occurring for MPO polymorphism (p=0.000) and the interaction between Hp/MPO (p=0.000) with hs-CRP values. Significant differences in 2-to-2 comparisons were observed for MPO between the genotypes GG and AA (p=0.000), and GA and AA (p=0.000) in the hs-CRP levels. Despite the reported association between Hp1-1 phenotype and sickle cell disease, our results corroborate others *1indicating that there are biological differences between the Hp allele subtypes. These results highlight the importance of this study to better understand the biological significance of Hp polymorphism in the clinical variability and response to treatment of individuals with sickle cell disease in our population, and also suggest that MPO AA homozygosis may increase the effects of asplenia in these individuals.

Orientador: Claudia Regina Bonini-Domingos / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Joice Matos Biselli Périco / Banca: Octávio Ricci Júnior / Resumo: Os indivíduos com Doença Falciforme (DF) apresentam manifestações clínicas variáveis que podem ser decorrentes de fatores genéticos e ambientais. O presente trabalho teve como objetivo investigar se os marcadores genéticos relacionados à vasoatividade e coagulação modulam a gravidade clínica em pessoas com DF em quatro faixas etárias. Para isso, dois grupos longitudinais foram formados, o prospectivo, que avaliou 59 crianças com DF nascidas no período de maio de 2012 a dezembro de 2013, e o retrospectivo, que avaliou 392 pessoas com DF no ano de 2011. Estes dois grupos foram divididos em quatro subgrupos de estudo, de acordo com a faixa etária, em: Crianças I (de 0 a 4 anos de idade, N=59), Crianças II (de 5 a 10 anos, N=53), Adolescentes (11 a 19 anos, N=127) e Adultos (acima de 20 anos de idade, N=212). Todos os indivíduos foram genotipados para a DF, para os haplótipos da globina beta-S, e para os polimorfismos genéticos nos genes da cistationina beta-sintase (CBS, 844ins68), enzima conversora de angiotensina I (ECA1, I/D 287 pb), enzima conversora de angiotensina II (ECA2, A1075G), inibidor do ativador do plasminogênio tipo I (PAI1, -675pb 4G/5G) e adenosina deaminase (ADA, G22A). A classificação do perfil fenotípico de gravidade do subgrupo Crianças I foi realizado pelo hematologista do HEMORIO (RJ), e dos subgrupos Crianças II, Adolescentes e Adultos pela calculadora online "Sickle Cell Disease Severity Calculator". Com excessão do genótipo SC que foi mais frequente no... / Abstract: Sickle Cell Disease (SCD) is characterized to several clinics manifestations that vary among subjects and this clinical diversified can be caused by genetic and environmental factors. The study aim was to investigate whether genetic markers related to vaso-activity modulate clinical severity in SCD people in four age groups. Then, two longitudinal groups were formed: the prospective groups that evaluated 59 SCD children born in May 2012 to December 2013, and the retrospective group that evaluated 392 people with SCD in 2011. These groups were separated in four study subgroups according to age in: Children I (of 0 at 4 years-old, N=59), Children II (of 5 at 10 years-old, N=53), Adolescents (of 11 at 19 years-old, N=127) and Adults (above of 20 years-old, N=212). All the subjects were genotyped SCD presence, beta-S haplotypes and genetics polymorphisms in cystathionine beta-synthase (CBS, 844ins68), angiotensin converting enzyme I (ACE1, I/D 287 pb), angiotensin converting enzyme II (ACE2, A1075G), plasminogen-activator inhibitor type 1 (PAI1, -675pb 4G/5G) and adenosine deaminase (ADA, G22A) genes. The clinical severity profile classification of Children I subgroup was accomplished by Hematologist of HEMORIO, and to Children II, Adolescents and Adults subgroups was used the software online named "Sickle Cell Disease Severity Calculator". Except for the SC genotype that was more frequent in the Children I subgroup, the genotypic and allelic frequencies for the genetic markers ... / Doutor

Orientadora: Claudia Regina Bonini-Domingos / Banca: Ana Cristina Silva Pinto / Banca: Maria Stella Figueiredo / Banca: Flávia Cristina Rodrigues Lisoni / Banca: Marília de Freitas Calmon / Resumo: Níveis elevados de Hb F na vida adulta podem apresentar efeitos benéficos para indivíduos com anemia falciforme e talassemia beta. Dentre os elementos genéticos que atuam na regulação da expressão da Hb F são conhecidos os fatores de transcrição e os microRNAs. Os objetivos do trabalho foram rastrear, por footprinting filogenético, fatores de transcrição que apresentam sítios de ligação nas regiões não-codificantes dos genes da γ-globina, e microRNAs candidatos à regulação desses genes, além de avaliar a expressão desses microRNAs selecionados in silico em diferentes grupos de indivíduos com perfis distintos de expressão de Hb F. As análises in silico para o rastreamento dos fatores de transcrição foram realizadas comparando as sequências dos genes HBG1 e HBG2 de espécies de primatas do Velho e do Novo Mundo com as sequências da espécie Homo sapiens. O rastreamento in silico dos microRNAs preditos à regulação dos genes da γ-globina foi realizado a partir da utilização de bancos de dados públicos de microRNA. Para as análises de expressão dos microRNAs selecionados foram analisadas 38 amostras de sangue periférico, divididas em cinco grupos de estudo: grupo controle, anemia falciforme em uso ou não de hidroxiureia (HU), e talassemia beta na presença e ausência do alelo β0. Todas as amostras foram submetidas aos testes clássicos de diagnóstico de hemoglobinopatias, quantificação das frações de globinas por cromatografia e análise molecular para a genotipagem dos indivíduos com anemia falciforme (PCR-RFLP) e talassemia beta (PCR-AE e sequenciamento genômico), além da caracterização dos haplótipos βS e β-Tal (PCR-RFLP). Os reticulócitos foram isolados a partir do sangue total e submetidos à extração de microRNA. As análises de expressão dos microRNAs foram realizadas por PCR em tempo real (RT-PCR e q-PCR). As análises in silico apontaram... / Abstract: High levels of Hb F in adulthood may have beneficial effects for sickle cell anemia and beta-thalassemia. Some of the genetic elements that act in the regulation of Hb F expression are transcription factors and microRNAs. The aim of this study was to use phylogenetic footprinting to screen transcription factors that have binding sites in the γ-globin genes' noncoding regions, and miRNAs candidates to modulating Hb F levels, also evaluating the expression of microRNAs selected from in silico analyses in different groups with distinct profiles of Hb F expression. In silico analysis to screening of transcription factors were performed using bioinformatics tool VISTA, comparing the sequences of HBG1 and HBG2 genes in species of the Old and New World primates with the Homo sapiens sequences. The screening of predicted microRNAs to regulation of γ-globin genes was performed using public databases of microRNA. For the expression analyses of the selected microRNAs, we analized thirty-eight peripheral blood samples, divided into five groups: control group, sickle cell anemia using or not hydroxyurea (HU), and beta-thalassemia with and without allele β0. All samples were tested to hemoglobinopathies by classical diagnostic tests, quantification of globin fractions by chromatography and molecular analyses for genotyping of sickle cell anemia (PCR-RFLP) and beta-thalassemia (PCR-AE and genomic sequencing), and the characterization of haplotypes βS and β-Tal (PCR-RFLP). The reticulocytes were isolated from whole blood and submitted to microRNAs extraction. The analyses of the microRNAs expression were performed by real-time PCR (RT-PCR and qPCR). In silico analyses showed 13 transcription factors conserved between the analyzed species, which have binding sites in non-coding regions of both γ-globin genes, involved in regulating of the Hb F expression: BP1, CDC5, c-MYB, COUPTFII, CP2, GATA-1, GATA-2, NF-E2... / Doutor

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Débora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Nicola Amanda Conran Zorzetto / Banca: Flávio Augusto Naoum / Banca: Ana Elizabete Silva / Resumo: A doença falciforme (DF) é uma anemia hemolítica hereditária causada pela presença da hemoglobina S (Hb S). No Brasil, as formas mais comuns são a homozigose (Hb SS) e a associação da Hb S com as hemoglobinas C (Hb SC), D-Punjab (Hb SD) e beta-talassemia (Hb Sβ-tal). A inflamação na DF é uma condição crônica, com constante liberação de citocinas pró-inflamatórias, e relacionada aos eventos de hipóxia e angiogênese, também característicos da doença. O comportamento desses eventos nos genótipos da DF podem explicar as variações frequentemente encontradas nas manifestações clínicas da doença nos indivíduos. Assim, o objetivo desse estudo foi analisar os processos de inflamação, hipóxia e angiogênese nos genótipos Hb SS, Hb SD, Hb Sβ-tal e Hb SC da DF, comparando os resultados obtidos com um grupo controle sem hemoglobinopatias. Inicialmente, o perfil hemolítico dos indivíduos com DF foi avaliado, considerando-se a porcentagem de reticulócitos e os níveis de lactato desidrogenase (LDH), aspartato aminotransferase (AST) e bilirrubina indireta (BI). O perfil inflamatório foi avaliado pela quantificação dos níveis plasmáticos de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-8 e TNF-α), proteínas antiinflamatórias (TGF-β1 e ANXA1), fatores responsivos à hipóxia (HIF-1α e VEGF) e polimorfismos genéticos capazes de influenciar nas vias estudas. A porcentagem de reticulócitos e os níveis de LDH, AST e BI foram mais elevados no genótipo Hb SS, seguido pelo genótipo Hb SD, enquanto os grupos com Hb Sβ-tal e Hb SC apresentaram perfil hemolítico mais brando. Os níveis plasmáticos dos marcadores inflamatórios IL-1β, IL-8, TNF-α e TGF-β1 foram aumentados na DF em relação ao controle, especialmente no genótipo Hb SS, evidenciando a inflamação presente e mais grave no grupo com maior intensidade hemolítica. A ANXA1 esteve reduzida... / Abstract: Sickle cell disease (SCD) is a hereditary hemolytic anemia caused by the presence of hemoglobin S (Hb S). In Brazil, the most common forms of SCD are the homozygous (Hb SS) and the association of Hb S with hemoglobins C (Hb SC), D-Punjab (Hb SD) and beta thalassemia (Hb Sβ-thal). Inflammation in SCD is a chronic condition, with the recurrent release of pro-inflammatory cytokines, and is related to hypoxic and angiogenenic events, which are characteristics of the disease. The behavior of these events in SCD genotypes could explain variations frequently found in the clinical manifestations of patients. Thus, the aim of the study was to verify the inflammation, hypoxia and angiogenesis processes in the Hb SS, Hb SD, Hb Sβ-thal and Hb SC genotypes of SCD, comparing the results to a control group without hemoglobinopathies. At first, the hemolytic profile of SCD individuals was evaluated considering the reticulocytes percentage and the lactate dehydrogenase (LDH), aspartate aminotransferase (AST), and indirect bilirubin (IB) levels. The inflammatory profile was analyzed by quantifying the plasma levels of proinflammatory cytokines (IL-1β, IL-8, and TNF-α), anti-inflammatory proteins (TGF-β1 and ANXA1), responsive factors to hypoxia (HIF-1α and VEGF), and genetic polymorphisms able to influence the studied pathways. The percentage of reticulocytes and the LDH, AST, and IB levels were higher in the Hb SS genotype, followed by Hb SD, while the Hb Sβ-thal and Hb SC genotypes presented milder hemolytic profile. The plasma levels of inflammatory markers IL-1β, IL-8, TNF-α, and TGF-β1 were higher in SCD than in the control group, especially in the Hb SS genotype, demonstrating the presence of more severe inflammation in the group with greater hemolytic intensity. The ANXA1 was reduced in SCD, reflecting the imbalance between inflammatory response propagation and inflammation ... / Doutor

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:47Z : No. of bitstreams: 1 000845999_20180227.pdf: 347925 bytes, checksum: 3a31aa79333a7cdbe8ce3d8722a87de9 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-03-02T12:39:57Z: 000845999_20180227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-03-02T12:40:54Z : No. of bitstreams: 1 000845999.pdf: 1832367 bytes, checksum: 99a50f0dd46526bfabff0be50a865649 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Níveis elevados de Hb F na vida adulta podem apresentar efeitos benéficos para indivíduos com anemia falciforme e talassemia beta. Dentre os elementos genéticos que atuam na regulação da expressão da Hb F são conhecidos os fatores de transcrição e os microRNAs. Os objetivos do trabalho foram rastrear, por footprinting filogenético, fatores de transcrição que apresentam sítios de ligação nas regiões não-codificantes dos genes da γ-globina, e microRNAs candidatos à regulação desses genes, além de avaliar a expressão desses microRNAs selecionados in silico em diferentes grupos de indivíduos com perfis distintos de expressão de Hb F. As análises in silico para o rastreamento dos fatores de transcrição foram realizadas comparando as sequências dos genes HBG1 e HBG2 de espécies de primatas do Velho e do Novo Mundo com as sequências da espécie Homo sapiens. O rastreamento in silico dos microRNAs preditos à regulação dos genes da γ-globina foi realizado a partir da utilização de bancos de dados públicos de microRNA. Para as análises de expressão dos microRNAs selecionados foram analisadas 38 amostras de sangue periférico, divididas em cinco grupos de estudo: grupo controle, anemia falciforme em uso ou não de hidroxiureia (HU), e talassemia beta na presença e ausência do alelo β0. Todas as amostras foram submetidas aos testes clássicos de diagnóstico de hemoglobinopatias, quantificação das frações de globinas por cromatografia e análise molecular para a genotipagem dos indivíduos com anemia falciforme (PCR-RFLP) e talassemia beta (PCR-AE e sequenciamento genômico), além da caracterização dos haplótipos βS e β-Tal (PCR-RFLP). Os reticulócitos foram isolados a partir do sangue total e submetidos à extração de microRNA. As análises de expressão dos microRNAs foram realizadas por PCR em tempo real (RT-PCR e q-PCR). As análises in silico apontaram... / High levels of Hb F in adulthood may have beneficial effects for sickle cell anemia and beta-thalassemia. Some of the genetic elements that act in the regulation of Hb F expression are transcription factors and microRNAs. The aim of this study was to use phylogenetic footprinting to screen transcription factors that have binding sites in the γ-globin genes' noncoding regions, and miRNAs candidates to modulating Hb F levels, also evaluating the expression of microRNAs selected from in silico analyses in different groups with distinct profiles of Hb F expression. In silico analysis to screening of transcription factors were performed using bioinformatics tool VISTA, comparing the sequences of HBG1 and HBG2 genes in species of the Old and New World primates with the Homo sapiens sequences. The screening of predicted microRNAs to regulation of γ-globin genes was performed using public databases of microRNA. For the expression analyses of the selected microRNAs, we analized thirty-eight peripheral blood samples, divided into five groups: control group, sickle cell anemia using or not hydroxyurea (HU), and beta-thalassemia with and without allele β0. All samples were tested to hemoglobinopathies by classical diagnostic tests, quantification of globin fractions by chromatography and molecular analyses for genotyping of sickle cell anemia (PCR-RFLP) and beta-thalassemia (PCR-AE and genomic sequencing), and the characterization of haplotypes βS and β-Tal (PCR-RFLP). The reticulocytes were isolated from whole blood and submitted to microRNAs extraction. The analyses of the microRNAs expression were performed by real-time PCR (RT-PCR and qPCR). In silico analyses showed 13 transcription factors conserved between the analyzed species, which have binding sites in non-coding regions of both γ-globin genes, involved in regulating of the Hb F expression: BP1, CDC5, c-MYB, COUPTFII, CP2, GATA-1, GATA-2, NF-E2...

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Débora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Flavio Augusto Naoum / Resumo: A Anemia Falciforme (AF) é caracterizada pela presença da hemoglobina S em homozigose (Hb SS). As pessoas com AF frequentemente apresentam manifestações clínicas relacionadas a processos de vaso-oclusão como o acidente vascular encefálico (AVE) e síndrome torácica aguda (STA). A regulação da vasoconstrição e vasodilatação é um fator importante na modulação destas manifestações clínicas, sendo alvo de estudos. Neste trabalho, os polimorfismos nos genes de duas enzimas - enzima conversora de angiotensina 1 e 2 (ECA1 e ECA2) e o polimorfismo do inibidor do ativador do plasminogênio tipo 1, relacionado com a fibrinólise, foram avaliados. O Sistema Renina-Angiotensina-Aldosterona atua na manutenção da pressão arterial e do volume sanguíneo por meio do equilíbrio hídrico e eletrolítico e regulação do tônus vascular. A ECA 1 é a principal enzima desse sistema, e cliva a Angiotensina I em Angiotensina II, um potente vasoconstritor. Uma enzima homóloga, a ECA 2, é capaz de clivar a Angiotensina II em Angiotensina 1-7, uma vasodilatadora. Os polimorfismos I/D no gene ECA1 (rs1799752) e A/G (rs2106809) no gene ECA2 foram estudados neste trabalho. Além disso, a regulação fibrinolítica também está relacionada às manifestações clínicas na AF. O inibidor do ativador do plasminogênio tipo 1 (PAI-1) é um regulador da fibrinólise, inibindo os ativadores do plasminogênio e a formação de plasmina, responsável pela degradação do coágulo. O polimorfismo mais estudado no gene PAI1, de inserção de... / Abstract: Sickle cell anemia (SCA) is characterized by the presence of hemoglobin S in homozygous (Hb SS). People with AF frequently presents clinical manifestations related to vasoocclusion processes such as stroke and acute chest syndrome (ACS). The regulation of vasoconstriction and vasodilation is an important factor in the modulation of these complications, being the object of many studies. In this work, the polymorphisms in the genes of two enzymes - angiotensin-converting enzyme 1 and 2 (ACE1 and ACE2) - and fibrinolysis-related plasminogen activator inhibitor type 1 polymorphism were evaluated. The Renin-Angiotensin-Aldosterone System acts in the maintenance of blood pressure and blood volume through fluid and electrolyte balance and vasodilation and vasoconstriction. ACE 1 is the main enzyme in this system, and cleaves Angiotensin I in Angiotensin II, a potent vasoconstrictor. A homologous enzyme, ACE 2, is capable of cleaving Angiotensin II in Angiotensin I-7, a vasodilator. The I/D polymorphisms in the ACE1 gene (rs1799752) and A/G (rs2106809) in the ACE2 gene are studied in this paper. In addition, fibrinolytic regulation is also related to clinical complications in SCD. The plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1) is a regulator of fibrinolysis, inhibiting plasminogen activators and the formation of plasmin, responsible for clot degradation. The most studied polymorphism in the PAI1 gene, of insertion of a guanine (4G/5G) in the promoter region of the gene, increases the enzyme activity and decreases the fibrinolytic action. To verify if these polymorphisms are related to the presence of the clinical manifestations, stroke and ACS, we genotyped 392 people with SCA. The samples were characterized according to their hemoglobin profile, subjected to DNA extraction, and used for the detection of polymorphisms by PCR-RFLP. The frequencies of the polymorphisms were analyzed ... / Mestre

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Banca: Nicola Amanda Conran Zorzetto / Resumo: A anemia falciforme (AF) é uma anemia hemolítica hereditária que acarreta ao portador manifestações clínicas complexas e diversificadas. Na AF o estresse oxidativo é um dos fatores que interferem no fenótipo do portador, uma vez que influencia nos processos de vaso-oclusão aumentando as propriedades adesivas dos eritrócitos, leucócitos e plaquetas ao endotélio. Durante a transformação do eritrócito discóide com hemoglobina (Hb) S em eritrócito afoiçado, dentre os eventos bioquímicos e polimerizantes da célula, ocorre a degradação oxidativa dessa Hb, com a liberação agentes pró-oxidantes. Estes promovem a oxidação de lipídeos e também de proteínas e DNA, modificando mecanismos celulares que levam a célula a apoptose e, consequentemente, causam danos aos tecidos. Neste contexto, os principais meios de defesa no organismo são divididos em dois grupos, enzimáticos e não enzimáticos. Entre as enzimas detoxificantes de fase II mais estudadas estão as GSTs, que pertencem a uma família multifuncional de enzimas que catalisam a conjugação da molécula de GSH e possuem papel fundamental em mecanismos de defesa contra compostos endo e xenobióticos. Considerando a grande incidência da AF em nosso país e as manifestações clínicas diferenciadas nos portadores, o presente trabalho pretendeu investigar os polimorfismos das GSTs (GSTM1, GSTT1 e GSTP1) e verificar sua influência sob parâmetros oxidativos - peroxidação lipídica por TBARS, e lesão de DNA pela avaliação de Corpos de Howell-Jolly e Ensaio Cometa em portadores da AF. Foram avaliadas amostras de 91 indivíduos com AF com e sem o uso de HU e 99 amostas de um grupo controle. Para o desenvolvimento do trabalho, as amostras foram separadas em três grupos: indivíduos portadores de anemia falciforme em uso de hidroxiureia (AF + HU: 46 indivíduos), indivíduos portadores de anemia falciforme sem uso de hidroxiureia (AF - HU: 45 indivíduos) e o grupo ... / Abstract: Sickle cell anemia (SCA) is an inherited hemolytic disease that leads complex and diverse clinical manifestations. In SCA, oxidative stress is one of the factors that affect the phenotype of the carrier, in response of its influences on vaso-occlusion processes that increases the adhesive properties of erythrocytes, leukocytes and platelets to the endothelium. During the transformation of discoid erythrocytes with hemoglobin (Hb) S into sickle cells, among the biochemical and polymerizing events, the oxidative degradation of this Hb occurs, releasing pro-oxidants agents. They promote oxidation of lipids and proteins and modify cellular mechanisms that lead to cell apoptosis and cause tissue damage. In this context, the main means of body defense are divided in two groups: enzymatic and non-enzymatic. Among the phase II detoxifying enzymes, the most studied are Glutathione S-transferases (GSTs), which belong to a family of multifunctional enzymes that catalyze the combination of the glutathione (GSH) molecule and have a central role in mechanisms of defense against xenobiotic compounds. Considering the high incidence of SCA in our country and the different clinical manifestations in patients, this study aimed to investigate polymorphisms of GSTs (GSTM1 , GSTT1 and GSTP1 ) and determine its influence on oxidative parameters - lipid peroxidation by TBARS and DNA damage by evaluation of Howell -Jolly bodies (HJB) and comet assay in patients with SCA. Samples of 91 patients with SCA with and without hydroxyurea (HU) use and 99 samples of a control group were evaluated. For the work development, the samples were separated into three groups: individuals with sickle cell anemia using hydroxyurea (SCA + HU: 46 individuals), individuals with sickle cell disease without use of hydroxyurea (SCA - HU: 45 individuals) and control group (CG: 99 individuals) to verify the influence of medication on the evaluated parameters. Only the genotypic profile ... / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2015-04-09T12:47:33Z : No. of bitstreams: 1 000811540.pdf: 772912 bytes, checksum: 9fe40489ccb3153a59c8440d6126a541 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A anemia falciforme (AF) é uma anemia hemolítica hereditária que acarreta ao portador manifestações clínicas complexas e diversificadas. Na AF o estresse oxidativo é um dos fatores que interferem no fenótipo do portador, uma vez que influencia nos processos de vaso-oclusão aumentando as propriedades adesivas dos eritrócitos, leucócitos e plaquetas ao endotélio. Durante a transformação do eritrócito discóide com hemoglobina (Hb) S em eritrócito afoiçado, dentre os eventos bioquímicos e polimerizantes da célula, ocorre a degradação oxidativa dessa Hb, com a liberação agentes pró-oxidantes. Estes promovem a oxidação de lipídeos e também de proteínas e DNA, modificando mecanismos celulares que levam a célula a apoptose e, consequentemente, causam danos aos tecidos. Neste contexto, os principais meios de defesa no organismo são divididos em dois grupos, enzimáticos e não enzimáticos. Entre as enzimas detoxificantes de fase II mais estudadas estão as GSTs, que pertencem a uma família multifuncional de enzimas que catalisam a conjugação da molécula de GSH e possuem papel fundamental em mecanismos de defesa contra compostos endo e xenobióticos. Considerando a grande incidência da AF em nosso país e as manifestações clínicas diferenciadas nos portadores, o presente trabalho pretendeu investigar os polimorfismos das GSTs (GSTM1, GSTT1 e GSTP1) e verificar sua influência sob parâmetros oxidativos – peroxidação lipídica por TBARS, e lesão de DNA pela avaliação de Corpos de Howell-Jolly e Ensaio Cometa em portadores da AF. Foram avaliadas amostras de 91 indivíduos com AF com e sem o uso de HU e 99 amostas de um grupo controle. Para o desenvolvimento do trabalho, as amostras foram separadas em três grupos: indivíduos portadores de anemia falciforme em uso de hidroxiureia (AF + HU: 46 indivíduos), indivíduos portadores de anemia falciforme sem uso de hidroxiureia (AF – HU: 45 indivíduos) e o grupo ... / Sickle cell anemia (SCA) is an inherited hemolytic disease that leads complex and diverse clinical manifestations. In SCA, oxidative stress is one of the factors that affect the phenotype of the carrier, in response of its influences on vaso-occlusion processes that increases the adhesive properties of erythrocytes, leukocytes and platelets to the endothelium. During the transformation of discoid erythrocytes with hemoglobin (Hb) S into sickle cells, among the biochemical and polymerizing events, the oxidative degradation of this Hb occurs, releasing pro-oxidants agents. They promote oxidation of lipids and proteins and modify cellular mechanisms that lead to cell apoptosis and cause tissue damage. In this context, the main means of body defense are divided in two groups: enzymatic and non-enzymatic. Among the phase II detoxifying enzymes, the most studied are Glutathione S-transferases (GSTs), which belong to a family of multifunctional enzymes that catalyze the combination of the glutathione (GSH) molecule and have a central role in mechanisms of defense against xenobiotic compounds. Considering the high incidence of SCA in our country and the different clinical manifestations in patients, this study aimed to investigate polymorphisms of GSTs (GSTM1 , GSTT1 and GSTP1 ) and determine its influence on oxidative parameters - lipid peroxidation by TBARS and DNA damage by evaluation of Howell -Jolly bodies (HJB) and comet assay in patients with SCA. Samples of 91 patients with SCA with and without hydroxyurea (HU) use and 99 samples of a control group were evaluated. For the work development, the samples were separated into three groups: individuals with sickle cell anemia using hydroxyurea (SCA + HU: 46 individuals), individuals with sickle cell disease without use of hydroxyurea (SCA - HU: 45 individuals) and control group (CG: 99 individuals) to verify the influence of medication on the evaluated parameters. Only the genotypic profile ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-24Bitstream added on 2014-12-02T11:21:27Z : No. of bitstreams: 1 000799353_20160224.pdf: 289799 bytes, checksum: 0b2547aa37c5af1df5323abf3c3ac04e (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-24T11:27:50Z: 000799353_20160224.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-24T11:28:33Z : No. of bitstreams: 1 000799353.pdf: 4598958 bytes, checksum: c90c43cb77dd0d3eaea210da3979de05 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A doença falciforme (DF) é caracterizada por heterogeneidade clínica variando de pessoas com relativamente poucas complicações clínicas e expectativa de vida normal, até aqueles com complicações graves, como hipertensão pulmonar, priapismo, acidente vascular cerebral (AVC), úlceras de perna, episódios de dor, síndrome torácica aguda (STA) e osteonecrose. O tratamento com a hidroxiureia (HU) tem conquistado espaço na terapia adotada pelos clínicos e sua experiência na DF vem sendo acumulada ao longo dos últimos 25 anos. Porém, muitos estudos têm sido elaborados para investigar as variações genéticas que possam explicar o porquê de alguns pacientes tolerarem e respondem ao uso de HU, enquanto, outros ainda precisam ser tratados por terapias alternativas. Diante disso, nosso objetivo foi avaliar a resposta ao tratamento com a HU considerando a influência dos polimorfismos genéticos envolvidos na fisiopatologia da DF. Para isso, usamos a calculadora de gravidade da DF (CGDF); rastreamos os polimorfismos -509C/T (TGFB1), -308G/A (TNFA), 313 A/G (GSTP1), -786T/C (NOS3), nulos (GSTM1 e GSTT1); e avaliamos os marcadores de estresse oxidativo (catalase, glutationa peroxidase-GPx, glutationa S-transferase-GST, glutationa redutase-GR e as espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico-TBARS). O estudo envolveu 520 pacientes, acima de cinco anos de idade, provenientes do Instituto de Hematologia do Rio de Janeiro/RJ-HEMORIO. A CGDF foi validada para os pacientes brasileiros e os escores de gravidade foram relacionados com os marcadores de estresse oxidativo. Em relação aos polimorfismos, a presença do alelo nulo do gene GSTM1 aumentou a chance de ocorrência de priapismo em pacientes com a DF. A mutação do gene TGFB1 mostrou efeito protetor na ocorrência de STA e úlceras de perna, e à presença do alelo mutante para o gene NOS3 diminuiu a chance de ocorrência de retinopatia e priapismo. Para os marcadores bioquímicos, ... / Sickle cell disease (SCD) is characterized by a very heterogeneous clinical ranging from patients who have normal life expectancy with relatively few complications; others can have severe complications such as pulmonary hypertension, priapism, stroke, leg ulceration, recurrent painful episodes, acute chest syndrome (ACS) and avascular necrosis of bone (AVN). Treatment with hydroxyurea (HU) has become more adopted by medical and HU experience in DF has been accumulated over the last 25 years. However, many studies have been designed to investigate the genetic variations that may explain why some patients tolerate and respond to the use of HU, while others still need to be treated with alternative therapies. In view of this, we aimed to evaluate the response to HU treatment considering the genetic polymorphisms influence involved in the pathophysiology of SCD. For this, we used the calculator severity of DF (CGDF); detected the polymorphisms -509C/T (TGFB1), -308G/A (TNFA), 313 A/G (GSTP1), -786T/C (NOS3), null (GSTM1 and GSTT1), we assessed markers of oxidative stress (catalase, glutathione peroxidase-GPx, glutathione S-transferase-GST, glutathione reductase-GR and the thiobarbituric acid reactive species-TBARS). The study involved 520 patients older than 5 years, from the Instituto de Hematologia do Rio de Janeiro/RJ-HEMORIO. The CGDF was validated for Brazilian patients and severity scores were related to oxidative stress markers. The presence of the GSTM1 null allele increased the occurrence chance of priapism in SCD patients. TGFB1 gene mutation had a protective effect on the occurrence of STA and leg ulcers, and the presence of the mutant allele for the NOS3 gene decreased the occurrence chance of retinopathy and priapism. For biochemical markers, we found that the decreased of enzymes activity (catalase, Gpx and GR), and the increased in GST activity were associated with greater SCD severity. In addition, lipid peroxidation levels ...

Orientador: Claudia Regina Bonini-Domingos / Banca: Flávio Augusto Naoum / Banca: Ana Paula Girol / Resumo: A anemia falciforme (AF) é uma anemia hemolítica hereditária, autossômica recessiva, causada pela mutação em um único nucleotídeo no gene da beta globina (HBB:c.20A>T). Essa alteração resulta na produção de uma hemoglobina anormal, denominada hemoglobina S (Hb S). Em condições de hipóxia, essas hemoglobinas se polimerizam dentro do eritrócito, ocasionando alteração em sua estrutura e resultando na formação de eritrócitos falciformes, que são menos flexíveis, aderem ao endotélio e são propensos à hemólise, favorencendo os dois principais eventos fisiopatológicos da AF, a hemólise e a vasoclusão, que dirigem os processos envolvidos nos diferentes tipos de manifestações clínicas que esses indivíduos podem apresentar ao longo da vida. A úlcera de perna é uma condição clínica frequente nesses indivíduos e a etiologia dessa complicação pode estar relacionada a eventos hemolíticos e angiogênicos. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi avaliar a presença de marcadores hemolíticos e de angiogenese em pacientes com AF, na presença ou ausência de úlcera de perna, a fim de contribuir com o entendimento a respeito dos mecanismos envolvidos na ocorrência de tal manifestação clínica. Para isso, foram avaliados os polimorfismos que regulam a expressão de proteínas que participam do processo de angiogênese, como TGF-β1, VEGFA1 e HIF-1α; os marcadores de hemólise, como níveis de hemoglobina (Hb), lactato desidrogenase (LDH), bilirrubina indireta (BI), aspartato aminotransferase (AST) e... / Abstract: The sickle cell anemia (SCA) is an inherited hemolytic anemia, autosomal recessive, caused by mutations in a single nucleotide in the beta globin gene (HBB:c.20A>T). This change results in production of an abnormal hemoglobin called hemoglobin S (Hb S). In hypoxic conditions, these hemoglobins polymerize within the erythrocyte, causing changes in their structure and resulting in the formation of sickle erythrocytes, which are less flexible, adhere to the endothelium and are prone to hemolysis, favoring the two main pathophysiological events of alpha hemolysis and vasoclusão, driving the processes involved in different types of clinical manifestations that these individuals may have lifelong. The leg ulcer is a common clinical condition of these individuals and the etiology of this complication may be related to haemolytic and angiogenic events. Thus, the objective of this study was to evaluate the presence of hemolytic markers and angiogenesis in patients with AF in the presence or absence of leg ulcer in order to contribute to the understanding of the mechanisms involved in the occurrence of such clinical manifestation. For this, we evaluated the polymorphisms that regulate the expression of proteins involved in the angiogenesis process, such as TGF-β1, VEGFA1 and HIF-1α; the markers of hemolysis, such as hemoglobin (Hb), lactate dehydrogenase (LDH), bilirubin indirect (BI), aspartate aminotransferase (AST) and reticulocyte count (RET); addition of protein synthesis of VEGFA ... / Mestre