Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objectives of this study were: to determine the presence of prorenin and the receptor of (pro)renin [(P)RR] in cumulus cells (CC) and oocytes; evaluate the role of prorenin in the resumption of oocyte meiosis, ovulation and on levels of plasma progesterone (P4). The mRNA expression of prorenin and (P) RR was evaluated in oocytes and cumulus cells of the bovine species. The mRNA of prorenin and (P)RR was detected in CC, in oocytes only mRNA expression of (P)RR was found. The role of prorenin in the resumption of meiosis was determined from 3 experiments using a co-culture of cumulus-oocyte complex (COC) and follicular halves. In the first experiment, three different concentrations of prorenin (10-10, 10-9, and 10-8M) were tested, which stimulated the resumption of meiosis similar to the positive control and angiotensin II (Ang II). In experiment 2, the co-culture was supplemented with prorenin (10-10M) and aliskiren (direct inhibitor of renin, 10-3M, 10-5M and 10-7M). The aliskiren blocked the resumption of meiosis-induced by prorenin in all concentrations tested. The aliskiren (10-5M and 10-7M) was also evaluated in isolation in a culture system of COCs without follicular halves and the rate of oocytes that resumed meiosis was not different of the positive control. The third experiment was conducted to evaluate the stimulation of meiosis resumption by prorenin independent of Ang II using the combination of prorenin (10-10M) and saralasin [nonspecific Ang II receptor antagonist - Sar (10-5M)], which obtained a rate of oocytes at metaphase I (MI) similar to the positive control and treatments of AngII and prorenin. The prorenin also resumed the oocyte meiosis in a culture system of COCs suplemmented with forskolin, wicth blocks the meiosis by intracellular cAMP accumulation. To evaluate the regulation of (P)RR mRNA in the theca and granulosa cells by LH, cows who achieved follicular diameter ≥12mm after synchronization were submitted to the ovariectomy 0, 3, 6, 12 and 24 hours after GnRH analogue treatment. There was a higher mRNA expression of (P)RR in the theca cells at hour 6; and at hour 3 in the granulosa cells. The effect of (P)RR in ovulation and plasma P4 during luteinization was observed cows that were synchronized and induced by GnRH analogue (IM) associated for intrafollicular aliskiren (10-5M) or PBS (0hour/0day) and the ovulation was evaluated at 24, 48 and 72 hours by ultrasound, wicth was not different of the control (PBS). The leves of plasma P4 was analysed at day 6 and 8 after GnRH and intrafollicular treatment only in the cows that ovulated. The intrafollicular (P)RR blocks decreased plasma P4 at day 6. It was concluded that the prorenin / (P)RR participates in the peri-ovulatory period: in the resumption of oocyte meiosis independently of AngII, in the ovulation by LH stimulation to (P)RR mRNA and in the P4 synthesis during luteinization. / Os objetivos deste estudo foram: determinar a presença de prorenina e receptor de (pro)renina [(P)RR] nas células do cumulus (CC) e em oócitos; avaliar o papel da prorenina na retomada da meiose oocitária; na ovulação e sobre os níveis de progesterona plasmática (P4). A expressão do RNAm de prorenina e (P)RR foi avaliada em oócitos e CC da espécie bovina. O RNAm de prorenina e (P)RR foi detectado nas células do cumulus; nos oócitos ocorreu apenas expressão de RNAm de (P)RR. O papel da prorenina na retomada da meiose foi determinado a partir de 3 experimentos utilizando um sistema de co-cultivo de complexo-cumulus oócito (COC) e metades foliculares. No primeiro experimento, foram testadas três concentrações de prorenina (10-10; 10-9; e 10-8M), as quais estimularam a retomada da meiose semelhante ao controle positivo e angiotensina II (Ang II). No experimento 2, o co-cultivo foi suplementado com prorenina (10-10M) e alisquireno (inibidor direto de renina; 10-3M, 10-5M e 10-7M). O alisquireno bloqueou a retomada da meiose induzida pela prorenina em todas concentrações testadas. O alisquireno (10-5M e 10-7M) também foi avaliado isoladamente em sistema de cultivo de COC sem metades foliculares e a taxa de oócitos que retomaram a meiose não diferiu do controle positivo. O experimento 3 foi realizado para avaliar o estímulo da retomada da meiose pela prorenina independente da Ang II utilizando a associação de prorenina (10-10M) e saralasina [antagonista do receptor da Ang II - Sar (10-5M)], a qual obteve taxa de oócitos em metáfase I (MI) semelhante ao controle positivo e aos tratamentos AngII e prorenina. A prorenina também retomou a meiose oocitária em cultivo de COCs suplementado com forskolin, que bloqueia a meiose pelo acumulo de AMPc intracelular.Para avaliar a possível influência do pico de LH na expressão do RNAm de (P)RR nas células da teca e granulosa, vacas que apresentaram folículo ≥12mm de diâmetro após a sincronização farmacológica do ciclo estral foram ovariectomizadas 0, 3, 6, 12 e 24 horas após aplicação do análogo do GnRH. Houve maior expressão de RNAm de (P)RR nas células da teca na hora 6; e na hora 3 nas células da granulosa. O papel do (P)RR na ovulação e sobre a P4 plasmática durante a luteinização foi verificado em vacas sincronizadas farmacológicamente, induzidas pelo análogo de GnRH (IM) associado ao alisquireno (10-5M) ou PBS intrafolicular (hora 0/ dia 0) e foram avaliadas por ultrason 24, 48 e 72 horas quanto a ovulação, a qual não diferiu do controle (PBS). Os níveis de P4 plasmática foram analisados nos dias 6 e 8 após GnRH e tratamento intrafolicular apenas nas vacas que ovularam, nas quais o bloqueio de (P)RR reduziu P4 no dia 6. Concluiu-se que a prorenina/(P)RR participa do periodo peri-ovulatório: na retomada da meiose oocitária de forma independente da AngII, na ovulação pelo estímulo de LH sobre RNAm do (P)RR e na síntese de P4 durante a luteinização.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Many studies have been developed to characterize the function of angiotensin-renin system (ARS) in the female reproductive organs. Evidences from the literature have pointed a relevant role of angiotensin II (Ang II) in mammals, through its type 2 receptor (AT2) in oocyte maturation as in ovulation. Nevertheless, the participation of Ang II in other important reproductive features such as steroidogenesis has not been fully clarified. Therefore, the main objective of this work was to detect in vitro the steroidogenic effects of Ang II in theca cells. For that, bovine theca cells were obtained from follicles (larger than 8mm of diameter) collected from a local abattoir and submitted to different treatments in a sequence of experiments. In Experiment 1, Ang II was added to LH-treated (10 ng/ml) theca cells. Experiment 2 employed Ang II, in different concentrations, in addition to insulin (100 ng ̸ml) and LH (100 ng ̸ml). Experiment 3 explored the effects of an Ang II antagonist (saralasin) in theca cells co-stimulated by insulin and LH (both at 100 ng ̸ml). After 24 hours, culture media were collected and evaluated for testosterone and androstenedione levels measured by high performance liquid chromatography (HPLC). In parallel, gene expression of key steroidogenic enzymes and proteins, respectively, HSD3B2, CYP11A1 e CYP17A1 and STAR were accessed by qRT-PCR, with exception of experiment 1, in which only CYP17A1 was evaluated. Overall, absence of Ang II action was observed in all Ang II doses evaluated. Despite the difference in gene expression for CYP17A1 against controls in experiment 1, neither an increase in androgens levels nor a negative impact of saralasin were detected. Although very important for oocyte maturation and the ovulation, Ang II seems not influence androgen production by theca cells in vitro. In conclusion our results do not support the role for Ang II in thecal steroidogenesis, at least in bovine, as the primary hypothesis of the study. / Diversos estudos vêm sendo desenvolvidos para caracterizar o sistema renina angiotensina (RAS) no aparelho reprodutivo feminino. Evidências da literatura apontam um importante papel da angiotensina II (Ang II), via receptor tipo 2 (AT2), tanto na maturação dos oócitos quanto na ovulação em mamíferos. No entanto, a participação da Ang II em outros aspectos reprodutivos importantes, como a esteroidogênese, ainda não foi completamente elucidada. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi verificar o efeito in vitro da Ang II nas células da teca cultivadas. Para isso, células da teca bovina foram obtidas de folículos com mais de 8mm de diâmetro de ovários oriundos de abatedouro local e submetidas a diferentes tratamentos em uma sequência de experimentos. No experimento 1, Ang II foi adicionada a células da teca tratadas com LH na dose de 10 ng/ml. No experimento 2, foi utilizada Ang II em diferentes concentrações em adição ao tratamento com insulina (100 ng ̸ml) e LH (100 ng ̸ml). O experimento 3, explorou o possível efeito de um antagonista da Ang II (saralasina) em células da teca co-estimuladas com insulina e LH (ambos em 100 ng ̸ml). Após 24 horas, o meio de cultura foi coletado e avaliado para verificação dos níveis de testosterona e androstenediona aferidos pela técnica de cromatografia líquida de alta performance (HPLC). Em paralelo, a expressão gênica de enzimas e proteínas chaves na esteroidogênese, respectivamente, HSD3B2, CYP11A1 e CYP17A1 e STAR, foram avaliadas por qRT-PCR, com exceção do experimento 1 onde somente a CYP17A1 foi estudada. De maneira geral, não foi observada uma ação da Ang II nas doses utilizadas. Apesar de uma diferença na expressão de CYP17A1 ter sido verificada em relação aos controles, nem o aumento dos níveis de androgênios ou um impacto negativo pelo uso de saralasina foram detectados. Embora reconhecida como muito importante para maturação oocitária e ovulação, a Ang II parece não influenciar a produção de androgênios in vitro. Em conclusão, nossos resultados não demonstraram um papel da Ang II na esteroidogênese tecal, pelo menos na espécie bovina, ao contrário da hipótese original deste estudo.

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2017-03-30T14:49:10Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3393878 bytes, checksum: bc60b9ab54d6094c6bc092787a34abdb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T14:49:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3393878 bytes, checksum: bc60b9ab54d6094c6bc092787a34abdb (MD5) Previous issue date: 2016-10-24 / Systemic hypertension (SH) is related to various cardiovascular events and emerged as a leading cause of death today. In the pathophysiology of hypertension occurring disorders in the autonomic nervous system that result in damage to neural mechanisms of central control of pressure, especially the baroreflex. Some of this damage is mediated by increased oxidative stress. Therapeutic approaches that reduce oxidative stress may prove effective in combating this disease. Sildenafil is a drug that acts by inhibiting the action of phosphodiesterase 5 (PDE5) and has been observed that this promotes a decrease in oxidative stress. The inhibition of PDE5 was efficient in improving vascular function and reduce blood pressure in experimental models. However, its effects on baroreflex control of blood pressure in the presence of renovascular hypertension have not yet been studied. The current study aimed to evaluate whether treatment with sildenafil is able to influence the baroreflex control of blood pressure. Wistar rats were subjected to sham surgery or inducer of renovascular hypertension (2K1C). After 5 weeks, the animals received vehicle (distilled water) or sildenafil citrate (45 mg / kg / day) for 7 days, totaling 4 groups: sham + vehicle, sham + sildenafil 2K1C + vehicle + 2K1C sildenafil. At the end of the treatment the animals were cannulated for hemodynamic measurements. They were evaluated: mean blood pressure, heart rate, spontaneous and induced baroreflex, cardiac autonomic tone and systemic oxidative stress. (CEUA-UFPB protocol no. 042/2015). Treatment with sildenafil had no significant effect in normotensive animals (121 ± 7 vs.118 ± 3 mmHg), but was effective in reducing blood pressure in 2K1C animals (139 ± 5 vs.175 ± 6 mmHg, p <0.01 ) the 2K1C animals showed reduced gain induced baroreflex (-1.93 ± 0.12) and spontaneous (-1.90 ± 0.22) compared to the sham group (-3.63 ± 0.31; - 3.95 ± 0.46). These parameters were normalized in hypertensive rats by treatment with sildenafil (-3.18 ± 0.23 -3.51 ± 0.29). Locks with atropine and propranolol showed alterations in the cardiac autonomic balance in the presence of hypertension, standardized, treatment, sympathetic tone (-24.5 ± 3 bpm, p <0.01) and vagal tone (110 ± 9 bpm, p <0.01). Sildenafil was also able to reduce systemic oxidative stress in 2K1C rats when compared to vehicle + 2K1C animals (1.04 ± 0.07 vs. 1.67 ± 0.08 nmol / ml). Treatment with sildenafil improved baroreflex control of blood pressure through the correction of the autonomic imbalance and reduction of oxidative stress. / A hipertensão arterial sistêmica (HAS) está relacionada a diversos eventos cardiovasculares e desponta como uma das principais causas de óbito atualmente. Na fisiopatologia da HAS ocorrem disfunções no sistema nervoso autônomo que resultam em prejuízo aos mecanismos neuronais de controle central da pressão, em especial ao barorreflexo. Parte deste dano é mediado pelo aumento do estresse oxidativo. Abordagens terapêuticas que reduzam o estresse oxidativo podem se mostrar eficazes no combate a esta doença. O sildenafil é uma droga que atua inibindo a ação da fosfodiesterase 5 (PDE5) e tem sido observado que este promove uma diminuição do estresse oxidativo. A inibição da PDE5 se mostrou eficiente na melhora da função vascular e redução da pressão arterial em modelos experimentais. Contudo, seus efeitos sobre o controle barorreflexo da pressão arterial na vigência de hipertensão renovascular ainda não foram estudados. O estudo atual teve como objetivo avaliar se o tratamento com sildenafil é capaz de influenciar o controle barorreflexo da pressão arterial. Foram utilizados ratos Wistar, submetidos à cirurgia sham ou indutora de hipertensão renovascular (2R1C). Após 5 semanas, os animais receberam veículo (água destilada) ou citrato de sildenafil (45mg/Kg/dia) durante 7 dias, perfazendo 4 grupos: sham + veículo, sham + sildenafil, 2R1C + veículo, 2R1C + sildenafil. Ao fim do tratamento os animais foram canulados para medidas hemodinâmicas. Foram avaliados: pressão arterial média, frequência cardíaca, barorreflexo espontâneo e induzido, tônus autonômico cardíaco e estresse oxidativo sistêmico. (CEUA-UFPB protocolo n. 042/2015). O tratamento com sildenafil não apresentou efeitos significativos nos animais normotensos (121 ± 7 vs.118± 3 mmHg), mas foi eficiente em reduzir a pressão arterial nos animais 2R1C (139 ± 5 vs.175 ± 6 mmHg, p < 0,01), Os animais 2R1C apresentaram redução do ganho do barorreflexo induzido (-1,93 ± 0,12) e espontâneo (-1,90 ± 0,22), quando comparados aos sham (-3,63 ± 0,31; -3,95 ± 0,46). Estes parâmetros foram normalizados nos animais hipertensos pelo tratamento com sildenafil (-3,18 ± 0,23; -3,51 ± 0,29). Os bloqueios com atropina e propranolol revelaram alterações no balanço autonômico cardíaco na vigência de hipertensão, normalizadas, pelo tratamento, o tônus simpático (-24,5 ± 3 bpm, p <0,01) e o tônus vagal (110 ± 9 bpm, p <0,01). O sildenafil também foi capaz de reduzir o estresse oxidativo sistêmico nos ratos 2R1C, quando comparado com os animais 2R1C + veículo (1,04 ± 0,07 vs. 1,67 ± 0,08 nmol/ml). O tratamento com sildenafil melhorou o controle barorreflexo da pressão arterial, por meio da correção do desbalanço autonômico e redução do estresse oxidativo.

Submitted by Leonardo Cavalcante (leo.ocavalcante@gmail.com) on 2018-05-04T10:50:22Z No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 1644804 bytes, checksum: 7a00df370b851029a3feb69162d66b6e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-04T10:50:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 1644804 bytes, checksum: 7a00df370b851029a3feb69162d66b6e (MD5) Previous issue date: 2017-11-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Arterial hypertension (AH) is a disorder that results from impairment in blood pressure control mechanisms, among which the baroreflex and the Renin Angiotensin Aldosterone System (RAAS) stand out. The actions of Angiotensin II in the AT1 receptor type (AT1R) are determinants for the elevation of arterial pressure via Gq/11 protein-coupled AT1R activation. Because of this, AT1R antagonists have been good options for HA treatment, but with undesirable side effects. TRV120027 is an AT1 receptor biased agonist, in other words, it is capable of binding to AT1R without activating Gq/11 protein, but rather some MAPKs and β-arrestin, promoting cardioprotective effects. Studies point to TRV120027 as a potential drug for the treatment of heart failure, but nothing has been reported regarding the effects of this compound on hypertension. The aim of the present study was to investigate the effects of TRV120027 on arterial pressure and its autonomic modulation, baroreflex sensitivity and serum and tissue oxidative stress in normotensive Wistar Kyoto (WKY) and spontaneously hypertensive (SHR) rats. The WKY and SHR rats were divided into four groups: WKY and SHR untreated (WKY-C and SHR-C) and treated with TRV120027 (WKY+TRV and SHR+TRV). Treatment with TRV120027 was performed intracerebroventricularly using osmotic minipumps implanted towards the lateral ventricle of the animals, through which the compound was injected for 14 days (20 ng/h/day). On the 13th day, catheters were implanted in the femoral vein and artery of the animals for drug administration and evaluation of cardiovascular parameters, respectively. After that, the animals were sacrificed and blood, kidneys and liver were collected to evaluate oxidative stress by the thiobarbituric acid method. All protocols were approved by CEUA-UFPB (N. 090/2016). Treatment with TRV120027 did not change the arterial pressure of normotensive animals (WKY-C: 119 ± 3 vs. WKY+TRV: 108 ± 3 mmHg), but was effective in reducing arterial pressure in SHR+TRV animals when compared to SHR-C group (160 ± 5 vs .181 ± 3 mmHg, respectively, p <0.05), no significant difference in heart rate was observed between the groups evaluated. Treatment improved the cardiac vagal tone in SHR+TRV when compared to SHR-C (ΔHR = +83 ± 1 vs. +54 ± 3 bpm, p <0, 05), as well as improved the sympathetic vasomotor tone (ΔPAM = -47 ± 2 vs. -64 ± 5 mmHg, p< 0,05). In addition, in SHR+TRV there was an improvement in the induced (SHR-C: -1,4 ± 0,2 vs. SHR+TRV: 2,4 ± 0,3 bpm/mmHg, p<0,05) and spontaneous (SHR-C: 0,5 ± 0,1 vs. SHR+TRV: 1,8 ± 0,2, ms/mmHg, p<0,05) baroreflex sensitivity. The TRV120027 was also able to reduce serum and renal MDA levels in SHR+TRV animals when compared to SHR-C group (Serum: 0.37 ± 0.05 vs. 2.58 ± 0.08 nmol/ml; Kidneys: 8.18 ± 0.03 vs. 11.7 ± 0.05 nmol/mg organ). The results obtained demonstrate that TRV120027, acting in the Central Nervous System, is able to reduce the arterial pressure in spontaneously hypertensive rats, improve autonomic function, restore baroreflex sensitivity and reduce peripheral oxidative stress present in these animals. These data reinforce the involvement of Gq/11 protein-dependent pathway coupled to AT1R in the hypertensive process and point to beneficial potential of the biased agonist, TRV120027, against hypertension and related events by activating β-arrestin pathway-coupled to AT1R in a biased way. / A hipertensão arterial (HA) é uma desordem que resulta do prejuízo nos mecanismos de controle da pressão arterial, dentre os quais destacam-se o barorreflexo e o Sistema Renina Angiotensina Aldosterona (SRAA). As ações da Angiotensina II no receptor do tipo AT1 (AT1R) são determinantes para a elevação da pressão arterial via ativação da proteína Gq/11. Devido a esse fato, antagonistas do AT1R têm sido boas opções para o tratamento da HA, porém com efeitos colaterais indesejados. O TRV120027 é um agonista tendencioso para o receptor AT1, ou seja, é capaz de se ligar ao AT1R sem ativar a proteína Gq/11, mas sim algumas MAPKs e a β-arrestina, promovendo efeitos cardioprotetores. Estudos apontam o TRV120027 como uma droga em potencial para o tratamento da insuficiência cardíaca, porém nada tem sido relatado sobre esse composto na hipertensão. O objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos do TRV120027 sobre a pressão arterial e sua modulação autonômica, a sensibilidade do barorreflexo e o estresse oxidativo sérico e tecidual em ratos normotensos Wistar Kyoto (WKY) e espontaneamente hipertensos (SHR). Os ratos WKY e SHR foram divididos em quatro grupos: WKY e SHR não tratados (WKY-C e SHR-C) e tratados com o TRV120027 (WKY+TRV e SHR+TRV). O tratamento com o TRV120027 foi realizado por via intracerebroventricular utilizando minibombas osmóticas acopladas a uma cânula guia implantadas em direção ao ventrículo lateral dos animais, por meio das quais o composto foi injetado durante 14 dias (20 ng/kg/dia). No 13º dia, foram implantados cateteres na veia e artéria femorais dos animais para administração de drogas e avaliação dos parâmetros cardiovasculares, respectivamente. Em seguida, os animais foram sacrificados e foi feita a coleta de sangue, rins e fígado para avaliação do estresse oxidativo pelo método do ácido tiobarbitúrico. Todos os protocolos foram aprovados pelo CEUA-UFPB (parecer nº 090/2016). O tratamento com TRV120027 não induziu alterações significativas na pressão arterial dos animais normotensos (WKY-C: 119 ± 6 vs. WKY+TRV: 108 ± 5 mmHg), mas foi eficiente em reduzir a pressão arterial nos animais SHR+TRV quando comparados ao grupo SHR-C (160 ± 5 vs.181 ± 3 mmHg, respectivamente, p<0,05), não foi observada diferença significativa na frequência cardíaca entre os grupos avaliados. O tratamento melhorou o tônus cardíaco vagal nos animais SHR+TRV quando comparados ao grupo SHR-C (ΔFC = +83 ± 1 vs. +54 ± 3 bpm, respectivamente, p< 0,05), assim como melhorou o tônus vasomotor simpático (ΔPAM = -47 ± 2 vs. -64 ± 5 mmHg, p< 0,05). Adicionalmente, nos animais SHR tratados houve melhora na sensibilidade do barorreflexo induzido (SHR-C: -1,4 ± 0,2 vs. SHR+TRV: 2,4 ± 0,3 bpm/mmHg, p<0,05). e espontâneo (SHR-C: 0,5 ± 0,1 vs. SHR+TRV: 1,8 ± 0,2, ms/mmHg, p<0,05). O TRV120027 também foi capaz de reduzir os níveis séricos e renais de MDA nos animais SHR+TRV quando comparados ao grupo SHR-C (Soro: 0,37 ± 0,05 vs. 2,58 ± 0,08 nmol/ml; Rins: 8,18 ± 0,03 vs. 11,7 ± 0,05 nmol/mg do órgão). Os resultados obtidos demonstram que o TRV120027, atuando no Sistema Nervoso Central, é capaz de reduzir a PA de ratos espontaneamente hipertensos, melhorar a função autonômica, restaurar a sensibilidade do barorreflexo e reduzir o estresse oxidativo periférico presente nesses animais. Esses dados reforçam o envolvimento da via dependente da proteína Gq/11 acoplada ao AT1R no processo hipertensivo e apontam para o potencial benéfico do agonista tendencioso TRV120027 contra a hipertensão e eventos a ela relacionados ao ativar a via da β-arrestina acoplada ao mesmo receptor, de maneira tendenciosa.

Neste estudo, avaliou-se o efeito da exposição intermitente à Ang II, levando em consideração uma dose que tenha uma ação não pressora, sobre a liberação de citocinas inflamatórias como a interleucina-6 (IL-6) e fator de crescimento transformante beta (TGF&beta;), bem como PAI-1 e plasminogênio/plasmina. O estudo foi realizado em camundongos machos C57Bl/6, submetidos ao tratamento com Ang II (30ng/kg), com losartan (30mg/kg) ou uma combinação destes, nos tempos de: 30 minutos, 1, 3 e 10 dias. As avaliações mostraram que a Ang II não altera pressão arterial, sugerindo que os aumentos observados de IL-6 e TGF&beta; sejam decorrentes de ação direta da Ang II. A Ang II promove aumento tanto agudo de TGF&beta;, possivelmente associado à ação proteolítica da plasmina e alterações vasculares transitórias compatíveis com aumento de permeabilidade, como crônico de TGF&beta;, possivelmente associado ao aumento da expressão gênica, levando ao aumento da deposição de colágeno vascular. / This study, evaluated the effect of the intermittent exposure to Angiotensin II (Ang II), taking in account a non-pressor dose on the release of inflammatory cytokines such as interleukin-6 (IL-6), transforming growth factor beta (TGF&beta;) as well PAI-1 and plasminogen /plasmin. The study was conducted on male mice C57BL/6 subjected to the treatment with angiotensin II (30 ng/kg), losartan (30 mg/kg) or a combination thereof, at times: 30 minutes, 1, 3 and 10 days. The evaluations showed that Ang II did not change blood pressure, suggesting that the increases of IL-6 and TGF&beta; may be by due to direct action of Ang II. Ang II promotes both acute increase of TGF&beta;, possibly associated with the proteolytic action of plasmin and transient vascular changes consistent with increased permeability, such as chronic increase of TGF&beta;, possibly associated with increased gene expression, leading to increased vascular collagen deposition.

O objetivo deste estudo foi avaliar se a infusão de angiotensina II (ANG II) modulava a expressão do receptor B1 (RB1) de cininas em aorta (AO),arteríolas mesentéricas (AM) de ratos Wistar e também verificar a influência do RB1 na pressão arterial e reatividade desses vasos sanguíneos através do agonista de RB1, DABK. Os ratos receberam por 28 dias infusão de ANG II ou de ANG II e antagonista de RB1. O DABK induziu relaxamento dependente de endotélio e NO em anéis de AO de ratos ANG II. A infusão de ANG II causou hipertensão arterial, aumento da expressão de RNAm de RB1 em AO e AM, da expressão protéica de RB1 em AO e disfunção endotelial caracterizada por diminuída resposta á acetilcolina (ACH).O antagonista de B1R não interferiu no desenvolvimento de hipertensão e na disfunção endotelial causada, mas aumentou a sensibilidade da AO à ACH e a expressão de NO Sintase nos ratos ANG II. Esses resultados nos permitem sugerir que a ANG II e cininas podem atuar sinergicamente no desenvolvimento das alterações vasculares observadas nesse modelo de hipertensão arterial. / The aim of the present study was to evaluate whether the angiotensin II (ANG II) infusion modulates the kinin B1 receptor (B1R) mRNA, protein expression in aorta (AO) and mesenteric arterioles (MA) in Wistar rats. It was also verified the role of RB1 in the control of blood pressure and vascular reactivity using DABK a B1R agonist Rats were infused either with ANG II (400ng/Kg/min) or ANG II plus RB1antagonist(350ng/Kg/min) during 28 days.DABK induced endothelium-NO dependent relaxation in AO of ANG II rats. ANG II infusion caused hypertension, increased RB1 mRNA expression in AO and MA, protein expression in AO and caused endothelial dysfunction, characterized as a decreased maximal response to acetylcholine (ACH). The B1R antagonist did not interfere in the development of hypertension and endothelium dysfunction caused by ANG II, however, increased the sensitivity to ACH and NO synthase expression in AO of ANG II rats. Altogether, we may suggest that ANG II and kinins can act synergistically in the development of vascular changes in this model of hypertension.

A angiotensina II (AngII) pode ativar as vias de sinalização das proteínas quinases ativadas por mitógenos (MAPKs). Investigamos o papel da obesidade e das MAPKs na resposta à AngII em ratos obesos por injeção de glutamato monossódico (Ob). Artérias mesentéricas de resistência com endotélio intacto e não as artérias sem endotélio, isoladas de Ob, respondem menos à AngII. As respostas à noradrenalina e ao cloreto de potássio estavam inalteradas. Aumento da expressão do receptor AT2 (AT2R), da óxido nítrico sintase (eNOS) e da ERK1/2 podem estar envolvidos na menor resposta pois a inibição do AT2R, da eNOS e da ERK1/2 corrigiram-na. A maior ativação da ERK1/2 nos Ob levou à maior ativação da eNOS e maior geração de NO, diminuindo a resposta à Ang II. Concluímos que na obesidade, a resposta contrátil à Ang II é menor, como possível mecanismo adaptativo frente ao aumento da ativação do sistema renina-angiotensina. Esse mecanismo envolve a participação do endotélio com maior liberação de NO, aumento do número de AT2R, e da fosforilação da eNOS e da ERK1/2. / Angiotensin II (AngII) can activate mitogen-activated protein kinases (MAPKs) pathways. We investigated the role of obesity and MAPKs in AngII response in monosodium glutamate-induced obese rats (Ob). Endothelium-intact but not endothelium-denuded mesenteric resistance arteries isolated from Ob exhibited a lower response to AngII. The response to nordrenaline and potassium chloride were unaltered. Increased expression of AT2 receptor, nitric oxide synthase (eNOS) and ERK1/2 might be involved in the reduced response since inhibition of AT2R, eNOS and ERK1/2 corrected it. Increased activation of ERK 1/2 in Ob might activate eNOS, generating more NO and vasodilation that contributed to reduce the contraction to AngII. We concluded that, in obesity, the lower response to AngII might be an adaptive mechanism against the increased activation of the renin-angiotensin system. This mechanism involves the participation of the endothelium through a greater release of NO, increased AT2R, eNOS and ERK1/2 expressions.

Os Hormônios Tiroideanos (HT) representam um fenótipo de cardioproteção e influenciam no estado trófico do tecido cardíaco através de diversos mecanismos, dentre eles a modulação dos componentes do Sistema Renina Angiotensina- a Angiotensina II e seus receptores (AT1 e AT2). Este estudo teve como objetivos avaliar o papel do receptor AT2 na cardioproteção induzida pelo HT e a participação da proteína quinase ativada por AMP (AMPK) nesse processo. O modelo de isquemia e reperfusão (I/R) foi desenvolvido em corações de ratos submetidos ao hipertiroidismo experimental na presença ou ausêcia do antagonista do receptor AT2 (PD123319), utilizando-se o aparto de Langendorff. Os resultados mostraram que o HT exerce efeito cardioprotetor com aumento na expressão protéica do receptor AT2 e da AMPK fosforilada, que foi prevenido com a administração do PD, seguido de piora da função cardíaca. Estes dados sugerem que parte da cardioproteção induzida pelo HT é mediada pelo receptor AT2, e que a AMPK também está envolvida proteção do miocárdio após injúria por I/R. / Thyroid Hormones (TH) is a phenotype of cardioprotection and may influence the trophic state of cardiac tissue through several mechanisms, including the modulation of the components of renin-angiotensin system - angiotensin II and its receptors (AT1 and AT2). The present study aimed to evaluate the role of AT2 receptor in cardioprotection mediated by the TH and the involvement of AMP-activated protein kinase (AMPK) in this context. A model of Ischemia and Reperfusion (I/R) was performed in isolated hearts of rats subjected to experimental hyperthyroidism, in the presence or absence of the AT2 receptor antagonist (PD123319), using the Langendorff system. The results showed that TH exerts cardioprotective effect with increased levels of AT2 and phosphorylated AMP protein expression, which was prevented by the administration of PD, with a loss in cardiac function. These data suggest that part of the TH-induced cardioprotection is mediated by the AT2 receptor with the involvement of AMPK in protection of the myocardium after I/R injury.

A disfunção cardiovascular induzida pelo consumo crônico de etanol esta associada à formação de espécies reativas de oxigênio (ERO). A angiotensina II, via receptores AT1, é um importante formador de ERO no sistema cardiovascular. O objetivo foi avaliar a participação dos receptores AT1 nas disfunções cardiovasculares induzidas pelo consumo crônico de etanol. Ratos Wistar foram divididos em quatro grupos: Controle: recebeu água \"ad libitum\"; Etanol: recebeu solução de etanol 20% (vol./vol.); Controle+Losartan: recebeu água \"ad libitum\" e losartan (10 mg/kg) diariamente por gavagem; Etanol+Losartan: recebeu solução de etanol 20% e losartan. Foram realizadas aferições semanais da pressão arterial e freqüência cardíaca dos animais. Foram realizadas as dosagens para determinar: o nível de etanol no sangue; os níveis plasmáticos e teciduais (aorta e leito arterial mesentérico) de angiotensina I (ANG I) e ANG II; a atividade plasmática da renina; atividade plasmática e tecidual da enzima conversora de angiotensina (ECA); níveis plasmáticos de aldosterona; níveis plasmáticos do peptídeo natriurético atrial (ANP), vasopressina (AVP) e ocitocina (OT); a osmolaridade e o sódio plasmático; nitrato plasmático e tecidual; espécies reativas ao ácido tiobarbitútico (TBARS); a formação tecidual de ânion superóxido; a capacidade antioxidante total; além de verificar a expressão gênica e protéica (aorta) da via das MAPKs, via do óxido nítrico (NO), das ciclooxigenases (COX), além dos componentes do sistema renina angiontensina (SRA). A artéria aorta torácica foi isolada e foram obtidas curvas concentração-resposta para fenilefrina, acetilcolina (Ach) e nitroprussiato de sódio (NPS). O tratamento crônico de etanol aumentou a pressão arterial sistólica, diastólica e média dos animais, sem afetar a freqüência cardíaca; induziu o aumento da atividade plasmática da renina, aumento da atividade da ECA e dos níveis plasmáticos de ANG I e ANG II, sendo que tais efeitos não foram prevenidos pela administração de losartan. Não houve alteração dos níveis teciduais de ANG I e ANG II. O tratamento com etanol não alterou a osmolaridade ou os níveis plasmáticos de sódio e de aldosterona. Nos animais tratados cronicamente com etanol houve redução plasmática de AVP, OT e aumento de ANP. O losartan não preveniu estes efeitos induzidos pelo etanol. O etanol promoveu aumento dos níveis plasmáticos de TBARS, os níveis teciduais de ânion superóxido, e o tratamento com losartan preveniu tais respostas. O tratamento com etanol não alterou os níveis plasmáticos de peróxido de hidrogênio e da atividade plasmática da SOD. Houve redução dos níveis plasmáticos e teciduais do NO, alteração da capacidade antioxidante plasmática total e o tratamento com losartan preveniu esses efeitos. O consumo etanol potencializou a resposta vasoconstritora induzida pela fenilefrina em anéis de aorta com e sem endotélio. O losartan preveniu tal resposta contrátil. No entanto, o tratamento com etanol não alterou a resposta de relaxamento induzida pela Ach e pelo NPS em anéis de aorta. O etanol foi capaz de alterar a expressão gênica e protéica da via das MAPKs, via do NO-AKT, das COX, e os componentes do SRA. Portanto, conclui-se que o consumo crônico de etanol ativa o SRA sistêmico, induz estresse oxidativo sistêmico e vascular, altera a reatividade vascular, reduz os níveis plasmáticos de NO, altera a expressão gênica e protéica da via das MAPKs, do NO, das COX e os componentes do SRA, e promove alterações neuro-humorais que, em conjunto, contribuem para a elevação da pressão arterial sistêmica e alterações cardiovasculares pela ação da ANG II via receptor AT1. / The cardiovascular dysfunction induced by chronic ethanol consumption is associated with the formation of reactive oxygen species (ROS). Angiotensin II via AT1 receptors is a major maker of ROS in the cardiovascular system. To evaluate the role of AT1 receptors in the cardiovascular dysfunction induced by chronic ethanol consumption. Male Wistar rats were divided into four groups: Control: received water \"ad libitum\"; Ethanol: received ethanol solution 20% (vol./vol.); Control+Losartan: received water \"ad libitum\" and losartan (10 mg/kg) daily by gavage; Losartan+Ethanol: received 20% ethanol solution and losartan. The measurements were performed to determine: the level of ethanol in blood, plasma and tissue levels (aorta and mesenteric arterial bed) of angiotensin I (ANG I) to ANG II, plasma renin activity, plasma and tissue activity of angiotensin converting enzyme (ACE), plasma aldosterone levels, plasma levels of atrial natriuretic peptide (ANP), vasopressin (AVP) and oxytocin (OT); osmolality and sodium, plasma and tissue nitrate (NO); tiobarbitútico reactive to acid species (TBARS); tissue formation superoxide anion, total antioxidant capacity, besides verifying the gene and protein expression of MAPK pathway, the nitric oxide (NO), the cyclooxygenase (COX), in addition to the components of the renin angiotensin (RAS). The thoracic aorta was isolated and concentration-response curves for phenylephrine, acetylcholine and sodium nitroprusside were obtained. Chronic ethanol treatment increased systolic blood pressure, diastolic and mean animals, without affecting heart rate; induced increase in plasma renin activity, increased plasma and tissue levels of ACE and plasma levels of ANG I and ANG II, and these effects were prevented by administration of losartan. There were no changes in tissue levels of ANG I and ANG II. The treatment with ethanol did not alter osmolarity and plasma levels of sodium and aldosterone. In animals chronically treated with ethanol was reduced plasma AVP, OT and ANP increase. Losartan did not prevent these effects induced by ethanol. Ethanol promoted increased plasma levels of TBARS, tissue levels of superoxide anion, and treatment with losartan prevented these responses. The ethanol treatment did not alter plasma levels of hydrogen peroxide and plasma activity of SOD. There was a reduction in plasma and tissue levels of NO, alteration in total plasma antioxidant capacity and treatment with losartan prevented these effects. The consumption ethanol potentiated the pressor response induced by phenylephrine in aortic rings with and without endothelium. The losartan prevented this contractile response. However, treatment with ethanol did not alter the response of relaxation induced by Ach and SNP in aortic rings. The ethanol was able to alter the gene and protein expression via the MAPK, via the NOAKT, the COX, and the components of the RAS. Therefore, it is concluded that chronic consumption of ethanol activates the systemic RAS, induces systemic oxidative stress and vascular change vascular reactivity, reduces plasma levels of NO, alters gene and protein expression via the MAPK, NO, the COX and RAS components, and promotes neurohumoral changes that, together, contribute to the elevation of blood pressure and cardiovascular changes by the action of ANG II via AT1 receptor.

Vários fatores são responsáveis pelo desenvolvimento de doenças cardiovasculares, dentre eles o alto consumo de colesterol. Segundo a AHA, o consumo recomendado de colesterol é de 300mg/dia. No entanto esses valores nem sempre são respeitados. Na maioria das vezes a consequência do alto consumo de colesterol é o desenvolvimento da dislipidemia, a qual favorece o desenvolvimento da disfunção endotelial. É descrito que o alto consumo de colesterol pode levar ao risco do desenvolvimento de doenças cardiovasculares antes mesmo do desenvolvimento da dislipidemia, uma vez que, em alguns casos o consumo recomendado de colesterol na dieta diária é ultrapassado, e mesmo em estágios crônicos desse consumo não se observa o seu desenvolvimento. Dessa forma o consumo crônico de altas concentrações de colesterol poderia favorecer alterações no sistema vascular, antes mesmo da instalação do processo dislipidêmico. O objetivo desse trabalho foi estudar os efeitos da ingestão de altas concentrações de colesterol por camundongos sobre as repostas de angiotensina II (Ang II) em aorta torácica, bem como avaliar a participação da NAD(P)H oxidase nesse processo. Os animais foram divididos em grupo tratados com ração colesterol 1% (RC) ou ração colesterol padrão (RP), durante 1 mês ou 3 meses. O tratamento com RC não alterou o peso dos animais nem foram observadas alterações morfológicas em aorta torácica, sugerindo que a alteração na funcionalidade deste tecido não foi decorrente de modificações estruturais. O tratamento com RC acarretou no aumento dos níveis basais de O-2 produzido em parte pela NOX-1 e NOX-4, além do aumento da expressão proteica de NOX-1 em aorta torácica de animais tratados 3 meses. No estudo funcional foi observado um aumento do Emax da Ang II em animais tratados durante 1 mês e 3 meses, uma reposta independente de endotélio. Esse aumento foi restaurado na presença de Tiron, mostrando a contribuição de O-2 no aumento do Emax de Ang II em aorta torácica. Na presença de inibidores de NOX-1 e NOX-4 também foi observada à restauração do Emax observada na ausência dos mesmos, mostrando a participação das subunidades na produção de O-2. Os animais tratados com RC não apresentaram alterações no perfil lipídico, esse fato deve-se principalmente pela falta do ácido cólico na dieta. O Emax da Ang II foi aumentado em aorta torácica de camundongos tratados com RC em decorrência de aumento nos níveis basais de O-2 produzido pela NOX-1 e NOX-4. Os níveis basais de O-2 aumentados possivelmente devem esta reagindo com o NO diminuindo sua disponibilidade, aumentando assim os efeitos contrateis da Ang II em aorta torácica. Algumas hipóteses são levantadas para explicar o aumento basal de O-2 em aorta torácica. 1º Aumento na concentração de colesterol nos bolsões lipídicos presente nas caveolas. 2º Formação de oxisterois, 3º formação de micropartículas. Os resultados obtidos e as hipóteses levantadas nesse trabalho, como, aumento na produção de oxisterois e micropartículas podem servir como possíveis alvos de estudos para o desenvolvimento de novos marcadores, e no diagnostico precoce de alterações vasculares decorrentes do consumo excessivo de colesterol iniciada em indivíduos jovens. / Several factors are responsible for the development of cardiovascular disease, including high cholesterol intake. According to AMH, the recommended intake of cholesterol is 300 mg/ daily, however these values are not always respected. Most often the consequence of high cholesterol consumption is the development of dyslipidemia, which favors the development of endothelial dysfunction. It is described that a high intake of cholesterol can lead to the risk of developing cardiovascular disease even before the development of dyslipidemia, since in some cases the recommended daily intake of cholesterol in the diet is exceeded, and even chronic stages of consumption not observing the development. Thus, chronic exposure to high concentrations of cholesterol could promote changes in the vascular system, even before the installation process dyslipidemic. The aim of this work was to study the effects of ingestion of high concentrations of cholesterol in mice on the responses to angiotensin II (Ang II) in the thoracic aorta, as well as evaluate the involvement of NAD(P)H oxidase in this process. The animals were divided into groups treated with 1% cholesterol diet (CD) or standard chow (SC) for 1 month or 3 months. Treatment with SC did not change the weight of the animals was not observed morphological changes in the thoracic aorta, suggesting that the change in the functionality of this tissue was not due to structural changes. Treatment with SC resulted in increased basal levels of O-2, produced in part by NOX- 1 and NOX- 4, in addition to increased protein expression of NOX- 1 in the thoracic aorta of animals treated three months . In the functional study, we observed an increase in the Emax of Ang II in animals treated for 1 month and 3 months, an independent response of endothelium. This increase was restored in the presence of Tiron, showing the contribution of O-2 in increasing the Emax of Ang II in the thoracic aorta. In the presence of inhibitors of NOX-1 and NOX-4 was also observed Emax restoration observed in the absence thereof, showing the involvement of subunits for the production of O-2. The animals treated with CD showed no changes in lipid profile, this is due largely to the lack of cholic acid in the diet. The Emax of Ang II was increased in the thoracic aorta of mice treated with CD as a result of an increase in basal levels of O-2, produced by NOX- 1 and NOX- 4. The basal levels of O-2 increased this should possibly reacting with NO decreasing its availability, thereby increasing the contractile effects of Ang II in thoracic aorta. Some hypotheses were proposed to explain the increased basal O-2 in the thoracic aorta. 1º Increase in the concentration of cholesterol in lipid pockets present in caveolae. 2º Formation of oxysterols; 3º microparticle formation . The results obtained and the hypotheses in this work, as an increase in the production of oxysterols and microparticles can serve as potential targets for the development of studies of new markers, and early diagnosis of vascular alterations caused by excessive consumption of cholesterol began in young individuals.