Memoria para optar al título Profesional de Médico Veterinario / La forma de comunicación más importante entre personas es la voz, siendo la laringe el órgano fundamental que la que emite. La voz y sus patologías tienen en los pliegues vocales el centro de atención, desde el punto de vista clínico y de la cirugía. Estas técnicas quirúrgicas reciben el nombre de fonocirugía. Para realizar ensayos de estas técnicas es necesario establecer un modelo animal experimental, para esto es necesario realizar disección de la estructura anatómica de la especie a establecer como modelo, en este caso la laringe de cerdo, y luego compararla con la del humano. El objetivo de este estudio es describir la morfología de la laringe del cerdo para homologarla con la humana, y constituirla un modelo para aplicación quirúrgica experimental. Se utilizaron 10 laringes de cerdo, conservadas en frío; material de disección y registro de parámetros anatómicos de laringes de humanos (Adaro et al., 2004). Las laringes se conservaron a una temperatura de -20 grados C hasta el momento de realizar la disección para el estudio anatómico. En el cerdo se describen: Músculos extrínsecos: Tirohioideo, Esternotiroideo e Hioepiglótico Músculos intrínsecos: Cricotiroideo, Cricoartienoideo dorsal y lapetral, Tiroaritenoideo, Aritenoideo transverso. Catílagos: Epiglotis, Tiroides, Aritenoides, Corniculado y Cricoides. La cavidad laringea se divide en tres zonas: supraglótica, glótica y subglótica. De acuerdo a los hallazgos encontrados la laringe de cerdo puede ser utilizada como modelo para prácticas fonoquirúrgicas, al observar similitudes en las principales estructuras anatómicas importantes para realizarlas.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La artritis reumatoide es una enfermedad autoinmune sistémica crónica que se caracteriza por presentar hipertrofia de la membrana sinovial, formando un tejido de granulación llamado pannus, el que invade y destruye hueso y cartílago. Uno de los eventos que facilitan la perpetuación de la enfermedad es la formación de nuevos capilares que permiten la llegada de más células inflamatorias al sitio y la posterior hipertrofia de la membrana sinovial. El presente trabajo estudia, en el curso de la enfermedad, el proceso de angiogénesis a nivel de la membrana sinovial y su relación con cambios histopatológicos indicadores de severidad del daño articular considerando tanto infiltración leucocitaria y fibrosis a nivel de membrana sinovial, como apoptósis y destrucción histológica a nivel del cartílago. Para esto, se usó un modelo murino de artritis reumatoide inducida con colágeno tipo II (CIA). Se sacrificaron 6 ratones de la cepa DBA1/lacJ (H2q), a los 14, 28, 42, 56 y 70 días post inducción (d.p.i) de CIA. En cada fecha se sacrificaron 3 controles. La sintomatología clínica comenzó a observarse a partir de los 28 d.p.i. con un índice artrítico promedio de 1,00±0,81 correspondiente a eritema articular. El cuadro avanzó hacia los 70 d.p.i. con un índice artrítico promedio de 3,83±0,40 correspondiente a edema y deformación máxima, con anquilosis. La morfometría computarizada permitió en este estudio demostrar que, en relación a los controles, la inducción de CIA, produce aumento significativo (p<0.05) del área vascular efectiva en la membrana sinovial a los 42 d.p.i. que se correlaciona con aumento también significativo (p<0.05) en la acumulación de células inflamatorias, fibrosis y destrucción del cartílago. El área vascular efectiva se estimó calculando el índice de vascularización (área lecho vascular/área de membrana sinovial) que se hizo significativo al igual que en los otro casos a los 42 d.p.i. Sin embargo, al medir el área de inmunomarcación del factor endotelial de Von Willenbrand se observaron aumentos significativos en comparación a sus respectivos controles (p<0,05), más temprano, a partir del día 28. Esto indica que la reactivación endotelial con proliferación se hace significativa antes que se forme un área vascular efectiva. El índice apoptótico fue un indicador más temprano de daño en el cartílago articular, haciéndose significativo respecto a su control también a partir del día 28. El aumento del índice de severidad clínica (índice artrítico) está altamente correlacionado con el aumento de angiogénesis r =0,95 (p <0,05) y apoptósis r= 0,90 (p < 0,05). Por otra parte, la histopatología convencional en conjunto con la inmunohistoquímica permitieron detectar cambios, que aunque discretos, son claros indicadores del comienzo del establecimiento del proceso inflamatorio como son la aparición de PMNneutrófilos en la membrana sinovial, proliferación endotelial con desarrollo de brotes angiogénicos y el aumento de la actividad apoptótica de condrocitos, que ocurren en forma más temprana y coincidieron con los primeros síntomas clínicos de la enfermedad que se detectaron a los 28 d.p.i., registrando un índice artrítico grado 1, correspondiente a eritema articular. / FONDECYT, 1040860.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La Diabetes es una de las enfermedades crónicas de mayor incidencia y prevalencia en las sociedades occidentales. Su tratamiento mediante la administración de insulina exógena presenta diversas dificultades como la imposibilidad de regular correctamente la glicemia. Por esto, la búsqueda de nuevos tratamientos y específicamente la búsqueda de una cura definitiva como el transplante de islotes de Langerhans es de suma importancia. El trasplante de islotes pancreáticos mejora día a día sus resultados clínicos gracias a numerosos adelantos en el proceso desarrollados en los últimos años. Varios estudios han sugerido que la temperatura influye, condiciona y modula la secreción de insulina, en algunos casos inhibiéndola y en otros estimulándola. A pesar de estos antecedentes, aún no existen reportes de cómo el enfriamiento influye en la secreción de insulina en concentraciones basales de glucosa. Como una forma de analizar el efecto in vitro de la temperatura sobre la secreción de insulina de los islotes de Langerhans, en el presente trabajo de memoria de título procedimos a incubar a diferentes temperaturas, islotes de Langerhans de ratas Sprague-Dawley en medio de cultivo con concentraciones basales de glucosa, para posteriormente medir la insulina secretada a cada una de las temperaturas. Los datos se secreción de insulina obtenidos, son valores normales para una concentración basal de glucosa. Las temperaturas a las que fueron sometidos a incubación los islotes de Langerhans en un primer experimento fueron de 37ºC, 30ºC, 23ºC, 16ºC, 10ºC y 3ºC. Este descenso progresivo de la temperatura se realizó con intervalos de una hora. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en las distintas concentraciones de insulina secretada entre los grupos incubados en el rango de 37ºC a 16ºC. Sin embargo, se demostró que eran estadísticamente distintas las secreciones de insulina de los grupos incubados a 10ºC y 3ºC, al compararlas con el grupo incubado a 37ºC. Además, en una segunda experiencia se demostró que el frío actúa como estímulo para la secreción de insulina en concentraciones basales de glucosa. Se concluyó que el frío induce la secreción de insulina en condiciones basales de glucosa; la necesidad de que se realicen nuevos experimentos conducentes a dilucidar el real efecto y mecanismo por el cual el enfriamiento induce esta secreción. Finalmente surge la sugerencia de estandarizar las técnicas de trabajo para el aislamiento de islotes de Langerhans, sobre todo en el proceso de digestión pancreática

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo de este estudio es describir y comparar el comportamiento farmacocinético de ivermectina (IVM) administrada por vía oral (p.o.) y subcutánea (s.c.) en perros. Previamente fue necesario adaptar y validar un método cromatográfico para detectar y cuantificar IVM en plasma canino, siguiendo las recomendaciones de la FDA. Se trabajó con ocho perros, los que fueron asignados a dos grupos experimentales de cuatro perros (Grupo A y Grupo B), de manera de obtener pesos promedios similares. A los individuos del Grupo A se les administró vía s.c. una dosis única de 200 μg/kg de peso corporal de IVM. A los individuos del Grupo B se les administró vía p.o. una dosis única de 600 μg/kg de peso corporal de IVM. Se recolectaron muestras de sangre entre 1 hora y 40 días después de la administración. Posteriormente el plasma fue analizado por cromatografía líquida de alto rendimiento con detección de fluorescencia (HPLC-FLUOR). Los resultados señalaron que, la concentración máxima alcanzada (Cmáx) y el tiempo en el que se alcanzó la máxima concentración (Tmáx) fueron significativamente mayores y en menor tiempo (p<0,05) en el Grupo B (Cmáx: 276,04 ± 34,47 ng/ml y Tmáx: 0,27 ± 0,16 días) (promedio ± DS) comparado con el Grupo A (Cmáx: 58,90 ± 10,26 ng/ml y Tmáx: 2,50 ± 0,58 días). El área bajo la curva final (ABCfinal) fue significativamente mayor (p<0,05) en el Grupo B (ABCfinal: 573,66 ± 154,60 ng/día/ml) comparado con el Grupo A (ABCfinal: 332,10 ± 92,73 ng/día/ml); lo mismo ocurrió en el caso del área bajo la curva extrapolada al infinito (ABC ) donde se observa que, en el Grupo B, los resultados son significativamente mayores (p<0,05) (ABC : 580,77 ± 155,63 ng/día/ml) comparados con el Grupo A (ABC : 345,24 ± 96,55 ng/día/ml). El Grupo A presentó un clearance (CL) significativamente más bajo (p< 0,05) (CL: 615,87 ± 175,64 ml/kg/día) que el Grupo B (CL: 1087,96 ± 276,64 ml/kg/día). No se observaron diferencias estadísticamente significativas (p>0,05) entre ambos grupos para los siguientes parámetros: constante de eliminación (Kel), vida media de eliminación (T½) y volumen de distribución (Vd) / Financiamiento: Laboratorio de Farmacología Veterinaria FAVET

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / El quitosano es un polímero natural muy estudiado actualmente, este material deriva de la quitina, que es el biopolímero más abundante en la naturaleza después de la celulosa y el componente principal del exoesqueleto de crustáceos e insectos, y paredes celulares de algunas bacterias y hongos. El quitosano es también un polisacárido cuya principal fuente de producción es la hidrólisis de la quitina en medio alcalino. Este polímero parcialmente desacetilado, está constituido por copolímeros de β-(1-4)-D-glucosamina (unidades desacetiladas) y N-acetil-D-glucosamina (unidades acetiladas). El quitosano es biodegradable, carece de toxicidad, posee actividad inmunogénica y alta viscosidad, lo que lo hace un excelente candidato como un adyuvante de depósito. El objetivo de la presente memoria de título fue evaluar la capacidad adyuvante del quitosano por medio de la vacunación de ratas con una vacuna peptídica anti GnRH inoculada parenteralmente. Si bien esto ya se ha realizado en otros estudios, no se habían evaluado anteriormente otras soluciones de quitosano como el quitosano de bajo peso molecular, o el quitosano fosforilado. Para determinar la inmunogenicidad del quitosano como adyuvante, se inoculó un grupo de ratas macho con la proteína GnRX G/Q (capaz de neutralizar el GnRH, desarrollada en el Laboratorio Biovetec de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile) junto con las soluciones de quitosano a evaluar, otro grupo de ratas con Adyuvante completo de Freund (ACF) como adyuvante y otras con la proteína suspendida en PBS como grupo control. Estas ratas fueron inoculadas 2 veces, el día 0 y 30 días después y se les extrajo sangre cada 15 días por 75 días, para medir los niveles de testosterona sérica y estimar la cantidad de inmunoglobulinas por medio de ELISA. Los resultados revelaron que las tres soluciones de quitosano en estudio fueron superiores en la generación de IgG1 al ACF, y al grupo control. Y quedó en evidencia que la proteína GnRX G/Q no es inmunogénica por si sola. También fue posible demostrar que la vacuna con quitosano como adyuvante disminuye los niveles de testosterona sérica llegando a ser más efectiva que la vacuna con ACF como adyuvante. De esta manera fue posible dar aprobada la hipótesis planteada de que el quitosano mejora la respuesta inmune en un modelo de vacuna peptídica.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se determinaron los cambios histológicos gonadales e hipotalámico-hipofisiarios en ratones hembra Balb/c inmunizados con una vacuna peptídica contra la hormona GnRH-I, basada en el antígeno recombinante GnRX/ GQ y quitosano como adyuvante, en una formulación soluble y una estrategia de micropartículas. Los animales inmunizados (días 1 y 30) desarrollaron anticuerpos específicos IgG, IgG1 e IgG2a contra el antígeno recombinante desde la primera vacunación y contra la hormona nativa GnRH-I desde la revacunación. Se observó una disminución del número de cuerpos lúteos y folículos preovulatorios en el parénquima ovárico de los individuos inmunizados, principalmente en el grupo donde se utilizó quitosano soluble como adyuvante. Por otro lado, en los animales inmunizados se determinó mediante inmunohistoquímica, un aumento de células positivas para GnRH-I en la zona hipotalámico-hipofisiaria, sin embargo, en estudios futuros se debe complementar la inmunohistoquímica de encéfalo con un método cuantitativo como qPCR, debido a la difícil estandarización y cuantificación de los resultados obtenidos mediante inmunohistoquímica encefálica en ratones

Determina el efecto del colorante azoico tartrazina sobre el tejido de cerebro y cerebelo, así como en la función cognitiva en ratas de segunda generación. Para la realización de este estudio se emplea 12 ratas preñadas de 7 días de gestación, con un peso promedio de 257,5 g. y sus respectivas crías. Las ratas preñadas son distribuidas aleatoriamente en tres grupos y acondicionadas aclimatadas en jaulas, las cuales reciben los siguientes tratamientos por vía oral en sus bebederos: grupo I: solución glucosada, grupo II: solución de tartrazina 0,1%, grupo III: solución de tartrazina 1,0 %, el consumo es ad libitum. El tratamiento es efectuado durante la gestación hasta el destete de sus crías, (28 días de nacidas), luego las madres son retiradas y las crías reciben las respectivas soluciones que habían recibido de la madre. Concluido el tratamiento se realiza la prueba de Laberinto de Morris por cuatro días y se procede al sacrificio de los animales para evaluar los niveles de lipoperoxidación y GSH, además de cambios histopatológicos de tejido de cerebro y cerebelo. De lo observado en el presente estudio de investigación se infiere que la administración de tartracina produce un daño en la función cognitiva y el tejido cerebral (medidos por estrés oxidativo e histológico) en los tejidos de ratas de segunda generación en las concentraciones empleadas. / Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los astrocitos son el tipo celular más abundante de la glia en el Sistema Nervioso Central y cuando son expuestos a factores sanguíneos durante un daño cerebral, éstos se vuelven “reactivos”, cambiando su forma estrellada a una de tipo fibroblasto. Los astrocitos “reactivos” también proliferan y migran al sitio dañado para formar la cicatriz glial, constituyendo uno de los mayores impedimentos para que ocurra la regeneración neuronal. Se piensa que estos cambios morfológicos que sufren los astrocitos in vivo, podrían tener una relación con los gatillados in vitro por Thy-1, una glicoproteína neuronal muy abundante, que se une a la Integrina αVβ3 en la membrana de astrocitos provocando cambios dramáticos en la forma de estas células. Con estos antecedentes se planteó la hipótesis de que la estimulación sostenida de la Integrina αVβ3por Thy-1 provoca la migración y/o proliferación de astrocitos, activando vías de transducción de señales que involucran a las proteínas quinasa PI3-K y Erk, respectivamente. Para poner a prueba esta hipótesis, se utilizaron ensayos in vitro de cicatrización de herida, la cual consiste en la remoción de una porción de células desde una monocapa de astrocitos en cultivo de la línea celular de rata DI-TNC1 con punta de pipeta y el subsecuente monitoreo de la migración de éstos al área libre de células después de la estimulación con el complejo soluble de Thy-1-Fc/Proteína-A. Adicionalmente, se realizaron en paralelo, análisis de Inmunofluorescencia indirecta a diferentes tiempos para la visualización de estructuras de avance como filopodios y lamelipodios en los astrocitos del borde de la herida estimulados con el complejo soluble de Thy-1-Fc/Proteína-A. Para demostrar la participación de la enzima PI3-K, los ensayos de cicatrización de herida se realizaron en presencia de inhibidores específicos de esta quinasa como son LY294002 y Wortmanina y mediante técnica de Inmunoblot se determinaron los niveles de fosforilación de un sustrato de esta enzima, la proteína Akt, en los astrocitos estimulados con el complejo Thy-1-Fc/Proteína-A. Para determinar si el complejo Thy-1-Fc/Proteína-A inducía cambios en la proliferación y viabilidad de los astrocitos, se utilizaron técnicas de MTS y de exclusión de azul de tripán, así como también se analizó el ciclo proliferativo de éstas células por citometría de flujo. Los resultados demuestran que Thy-1: 1) Induce la migración de los astrocitos DI-TNC1 al sitio de la herida; 2) Induce una mayor formación de estructuras de avance y migración como filopodios y lamelipodios, en los astrocitos del borde de la herida; 3) No induce proliferación ni aumento de la viabilidad de los astrocitos como tampoco cambios significativos en el ciclo proliferativo de éstas células; y 4) La quinasa PI3-K está implicada en la migración de los astrocitos estimulados por Thy-1. En conjunto, estos datos sugieren que la interacción de Thy-1 con la Integrina αVβ3 en la membrana de los astrocitos estimula cambios morfológicos llevando a estas células a una mayor adhesión celular para luego inducir su migración. Cabe destacar que la secuencia de eventos observados in vitro en este trabajo es similar a lo que ocurre en el proceso de astrogliosis, en el cual luego de un daño cerebral, los astrocitos se tornan reactivos, migran al sitio dañado y producen la cicatrización de la herida / Financiamiento: FIRCA 1R03TW006024 - FONDECYT 1040390 - FONDECYT 1070699

Título: Efecto hipocolesterolémico de extracto hidroalcohólico de Capsicum baccatum en un modelo experimental de hipercolesterolemia en ratas. Introducción: el ají amarillo, Capsicum baccatum, es un fruto originario de Perú y Bolivia, y es utilizado como alimento. Se ha incrementado el interés debido a su contenido fenólico, flavonoide, capsaicinoide, carotenoide, que exhiben propiedades antiinflamatorias y antioxidantes, por lo que podría disminuir el riesgo de enfermedades cardiovasculares. Objetivo: demostrar el efecto hipocolesterolémico de extracto hidroalcohólico de Capsicum baccatum en un modelo experimental de hipercolesterolemia inducida por dieta en ratas. Diseño: experimental. Institución: Centro de Investigación de Bioquímica y Nutrición. Facultad de Medicina, UNMSM, Perú. Material biológico: Capsicum baccatum, ratas Sprague-Dawley. Intervenciones: Los animales fueron asignados a seis grupos de 5 ratas cada uno: control (C), hipercolesterolemia (HC), atorvastatina 10 mg/kg (A), extracto de Capsicum baccatum 50 mg/kg (EC1), extracto de Capsicum baccatum 200 mg/kg (EC2) y extracto de Capsicum baccatum 350 mg/kg (EC3). El estudio duró 21 días, y al término se extrajeron las muestras sanguíneas. Principales medidas de resultados: colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL, triglicéridos, capacidad antioxidante FRAP, capacidad antioxidante ABTS. Resultados: El extracto hidroalcohólico de Capsicum baccatum 350 mg/kg produjo una reducción significativa (p<0,05) del colesterol total, colesterol LDL e índice de aterogenicidad en relación al grupo EC1. La capacidad antioxidante sérica fue significativamente mayor (p<0,05) en las ratas que recibieron el extracto en comparación al grupo control. Conclusiones: El extracto hidroalcohólico de Capsicum baccatum a dosis 350 mg/kg tuvo efecto hipocolesterolémico en relación al grupo HC y al grupo EC1, pero solo alcanzó diferencias significativas con éste último. / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Identifica molecularmente los serotipos de cepas sospechosas de Salmonella spp., aisladas mediante protocolos microbiológicos estandarizados, a partir de 272 muestras pareadas de hisopados rectales y vaginales de reproductoras primerizas clínicamente sanas de un criadero del distrito de Pachacamac. El ADN de los aislados sospechosos, evaluados hasta pruebas bioquímicas, es extraído y analizado mediante la técnica de PCR múltiple, para detectar la presencia de los genes inv A, prot6E y fliC específicos para Salmonella spp., Salmonella Enteritidis y Salmonella Typhimurium, respectivamente; encontrándose en 12 cepas aisladas que amplifican al gen inv A; de éstas, 10 (83.3%) amplifican para el gen fliC y ningún aislado amplifica el gen prot6E. Estos resultados confirman que Salmonella Typhimurium es el patógeno predominante en cobayos reproductoras al primer parto en esta crianza comercial. / Tesis