Orientador: Lourenço Sbragia Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T01:31:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Schmidt_AugustoFredericoSantos_D.pdf: 2455947 bytes, checksum: 2419510f01584a15bbc44f3555be5714 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A hérnia diafragmática congênita (HDC) é uma doença grave com alta mortalidade devido à hipoplasia e hipertensão pulmonar. A via do ácido retinóico tem sido implicada na patogênese da HDC e pode ser uma alternativa de intervenção na promoção da alveolarização e vascularização pulmonar. O fator de crescimento vascular do endotélio (VEGF - Vascular Endothelial Growth Factor) e seus receptores VEGFR1 e VEGFR2 têm importante função no crescimento e na vascularização pulmonar, e, possivelmente, na patogênese da HDC. No entanto, não se conhece como o tratamento pré-natal com ácido retinóico pode afetar a vascularização pulmonar e seus fatores de crescimento. O objetivo deste estudo foi analisar o efeito do tratamento pré-natal com ácido retinóico na vascularização pulmonar e na expressão pulmonar de VEGF e seus receptores VEGFR1 e VEGFR2 em fetos de rato com HDC induzida pelo nitrofen (2,4-dicloro-4'nitrodifenil éter). Fetos de ratas Sprague-Dawley prenhes foram divididos em oito grupos: 1) controle externo, 2) placebo óleo nitrofen; 3) placebo óleo ácido retinóico, 4) tratados com ácido retinóico, 5) expostos ao nitrofen sem HDC, 6) expostos ao nitrofen com HDC, 7) expostos ao nitrofen sem HDC e tratados com ácido retinóico, 8) expostos ao nitrofen com HDC e tratados com ácido retinóico. Nitrofen foi administrado por via oral (gavagem) com 9,5 dias de gestação. Ácido retinóico foi administrado por via intraperitoneal com 18,5, 19,5 e 20,5 dias de gestação na dose de 5 mg/kg/dia, a coleta fetal foi realizada com 21,5 dias (termo=22 dias). Cada grupo fetal foi composto por 25 fetos. As variáveis morfológicas estudadas foram: peso corporal (PC), peso pulmonar total (PPT), peso do pulmão esquerdo (PPE) e a relação peso pulmonar total / peso corporal (PPT/PC). A morfologia pulmonar foi estudada pela mensuração da média linear de interceptação (MLI) e seus componentes diâmetro interno dos espaços aéreos (DEA) e a relação de comprimento de transecção do parênquima / espaço aéreo (MCTP). A morfologia vascular foi estudada pela mensuração do diâmetro externo (DE), diâmetro interno (DI) e espessura proporcional da camada muscular média (ECM) de arteríolas pulmonares de resistência. A expressão de VEGF e dos receptores VEGFR1 e VEGFR2 foi analisada por meio de imunoistoquímica e western blotting. Os dados morfológicos e morfométricos foram analisados pelo teste ANOVA com pós-teste de Tukey-Kramer, a avaliação semiquantitativa da imunoistoquímica foi analisada pelo teste de Kruskal-Wallis com pós-teste de Dunn, sendo considerados significativos valores de p<0,05 para ambos os testes. A freqüência de HDC observada entre os fetos expostos ao nitrofen foi de 40%. As variáveis morfológicas apresentaram diminuição significativa nos grupos expostos ao nitrofen, especialmente nos fetos com HDC (p<0,05). O tratamento com ácido retinóico não alterou as variáveis morfométricas pulmonares. Fetos com HDC apresentaram aumento da ECM, enquanto o tratamento com ácido retinóico reduziu a ECM nos fetos com HDC (p<0.001). A presença de HDC levou à diminuição da expressão de VEGF, VEGFR1 e VEGFR2, enquanto o tratamento com ácido retinóico recuperou a expressão de VEGF e VEGFR1. A alteração sinalização da via do VEGF na HDC pode estar associada à patogênese da hipoplasia e da hipertensão pulmonar. O tratamento pré-natal com ácido retinóico pode fornecer vias para tratamento da hipertensão pulmonar na HDC por meio da redução da ECM das arteríolas pulmonares e recuperação do VEGF e seus receptores / Abstract: Congenital diaphragmatic hernia (CDH) is a life-threatening disease with high mortality due to the pulmonary hypertension and hypoplasia. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors VEGFR1 and VEGFR2 play a major role in lung vascularization, growth, and possibly in the pathogenesis of CDH. However it is not know how prenatal treatment with retinoic acid can affect lung vascularization by acting on the VEGF signaling. The purpose of this study was to analyze the effect of antenatal retinoic acid treatment on the expression of pulmonary VEGF and its receptors VEGFR-1 and VEGFR-2 in rat fetuses with CDH induced by nitrofen. Fetuses from pregnant Sprague-Dawley rats (term=22 days) were divided in eight groups: 1) external control, 2) placebo oil nitrofen, 3) placebo oil retinoic acid, 4) treated with retinoic acid, 5) exposed to nitrofen without CDH, 6) exposed to nitrofen with CDH, 7) exposed to nitrofen without CDH and treated with retinoic acid, 8) exposed to nitrofen with CDH and treated with retinoic acid. Nitrofen (2,4- dichloro-4'-nitrodiphenyl ether) was administered by gavage (100 mg) at 9,5 days of gestation. Retinoic acid was administered intraperitoneally on days 18.5, 19.5 and 20.5 of gestation (5 mg/kg), harvest was performed at 21.5 days (term =22 days). Each fetal subgroup was composed of 25 fetuses. The morphologic variables studied were: body weight, total lung weight, left lung weight, and total lung weight to body weight ratio. Pulmonary morphometry was studied by measuring the mean linear intercept and its components: internal diameter of airspaces and mean transection length / airspace. Vascular morphometry was studied by measuring the external diameter, internal diameter and proportionate thickness of the medial muscular layer of pulmonary resistance arterioles. Immunohistochemistry and Western blotting analysis were used to assess VEGF, VEGFR-1 and VEGFR-2 expression. Data was analyzed using ANOVA with Tukey's post-test and immunohistochemistry was studied semiquantitatively using Kruskal-Wallis test with Dunn's post-test. The frequency of CDH was 40%. The morphological variables showed reduction in the nitrofen group with and without CDH, which were more pronounced in the latter (p<0.05). Retinoic acid did not affect fetal morphology. There was no difference in pulmonary morphometry among groups. Fetuses with CDH had increased proportionate thickness of the medial muscular layer of pulmonary arterioles, while treatment with retinoic acid reduced this variable in fetuses with CDH (p<0.001). Fetuses with CDH had reduced VEGF, VEGFR1 and VEGFR2 expression, while retinoic acid treatment restored expression VEGF and VEGFR1. VEGF signaling disruption may be associated with pulmonary hypertension in CDH. Retinoic acid may provide a pathway for acting on pulmonary hypertension by reducing medial thickness of pulmonary arterioles and restoring expression of VEGF and its receptors / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Ciências da Cirurgia

Orientador: Renato Passini Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-11-09T15:30:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jannini_AlexandreWolf_M.pdf: 3134011 bytes, checksum: 9cae7dc9e2202285b4be1b0a5ae92bb0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Introdução: A legislação não permite a interrupção da gestação em casos de malformações fetais incompatíveis com a vida extra-uterina, cabendo ao Poder Judiciário decidir quando há uma solicitação deste tipo. Objetivos: Investigar a opinião de Magistrados e membros do Ministério Público sobre o abortamento nos casos de malformações fetais incompatíveis com a vida extra-uterina, especialmente em relação à anencefalia. Método: Análise parcial de dados obtidos em duas pesquisas realizadas pelo Centro de Pesquisas em Saúde Reprodutiva de Campinas (CEMICAMP), que objetivaram estudar a opinião destes profissionais acerca do aborto induzido. Foram obtidos dados de 1493 Magistrados e 2614 Promotores de Justiça. Foi constituído um banco de dados com as informações de interesse das pesquisas originais, analisado com auxílio do programa estatístico SAS versão 9.02, envolvendo análise bivariada e múltipla, por regressão logística. Resultados: Para 78,5% dos Magistrados e 82,6% dos membros do Ministério Público, a interrupção da gestação deveria ser permitida nos casos de qualquer malformação fetal incompatível com a vida extra-uterina. Em casos de diagnóstico de anencefalia, estes valores foram de 79,2% e 84,1%, respectivamente. Na análise multivariada, as variáveis associadas à opinião dos pesquisados foram a religiosidade, importância da religião e das concepções religiosas pessoais sobre as respostas dadas, experiência de gravidez indesejada que resultou em aborto, sexo, estado marital e o fato de possuir filhos. Conclusões: A grande maioria dos Magistrados e membros do Ministério Público foi favorável ao abortamento nas hipóteses estudadas, sendo as variáveis ligadas à religião as que mais influenciaram seu posicionamento / Abstract: Introduction: In Brazil abortion in cases of fetal malformation or anencephaly is prohibited by law. Pregnant women who want to perform an abortion in such cases must seek for a judicial order. Objectives: Evaluate the opinion of brazilian magistrates and Prosecutors about abortion in cases of fetal malformation incompatible with life and anencephaly. Methodology: It was a partial data analysis from data obtained in two researchs carried out by Centro de Pesquisas em Saúde Reprodutiva de Campinas (CEMICAMP ), to evaluate the opinion and conduct of these professionals about induced abortion. There were data from 1453 Magistrates and 2614 Prosecutors. It was made a data bank with data from the original studies, that was processed and analyzed using the statistical package SAS version 9.02. Results: For 78.5% of the Magistrates and 82.6% of the Prosecutors abortion should be permitted in cases of severe fetal malformation incompatible with life. In cases of anencephaly abortion should be permitted for 79.2% of the Magistrates and for 84.1% of the Prosecutors. Religiosity, influence of religion and personal religious convictions among responses, experience with unwanted pregnancy that ended in abortion, gender, marital status and the fact of having children had shown, in multivariable analysis, association with the opinion about abortion in the hypothesis studied. Conclusion: The great majority of Magistrates and Prosecutors had a favorable opinion about abortion in both hypothesis evaluated. Variables associated with religion had the strongest association with the opinion about abortion in cases of fetal malformation and anencephaly.Abstract: Introduction: In Brazil abortion in cases of fetal malformation or anencephaly is prohibited by law. Pregnant women who want to perform an abortion in such cases must seek for a judicial order. Objectives: Evaluate the opinion of brazilian magistrates and Prosecutors about abortion in cases of fetal malformation incompatible with life and anencephaly. Methodology: It was a partial data analysis from data obtained in two researchs carried out by Centro de Pesquisas em Saúde Reprodutiva de Campinas (CEMICAMP ), to evaluate the opinion and conduct of these professionals about induced abortion. There were data from 1453 Magistrates and 2614 Prosecutors. It was made a data bank with data from the original studies, that was processed and analyzed using the statistical package SAS version 9.02. Results: For 78.5% of the Magistrates and 82.6% of the Prosecutors abortion should be permitted in cases of severe fetal malformation incompatible with life. In cases of anencephaly abortion should be permitted for 79.2% of the Magistrates and for 84.1% of the Prosecutors. Religiosity, influence of religion and personal religious convictions among responses, experience with unwanted pregnancy that ended in abortion, gender, marital status and the fact of having children had shown, in multivariable analysis, association with the opinion about abortion in the hypothesis studied. Conclusion: The great majority of Magistrates and Prosecutors had a favorable opinion about abortion in both hypothesis evaluated. Variables associated with religion had the strongest association with the opinion about abortion in cases of fetal malformation and anencephaly / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Tocoginecologia

Orientador: Lourenço Sbragia Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:31:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nassr_AzizeCristinaCapelli_D.pdf: 6642584 bytes, checksum: 60fb43046c34664559a19ebb364b282b (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A Hérnia Diafragmática Congênita (HDC) é um defeito da formação do músculo diafragma que incide em aproximadamente 1:2500 nascidos vivos e apresenta altos índices de mortalidade fetal e neonatal decorrentes da hipoplasia e da hipertensão pulmonares. Este defeito pode ser induzido experimentalmente em ratas grávidas administrando o herbicida nitrofen que causa HDC em 24% dos fetos. A análise microscópica do pulmão da HDC demonstra a presença de hipolasia pulmonar além de alveolização e vascularização alterada. Um dos fatores de crescimento envolvidos no desenvolvimento vascular é o VEGF (vascular endothelial growth factor) e seus receptores, no entanto ainda não se conhece como a expressão desta glicoproteína e de seus receptores varia ao longo do desenvolvimento pulmonar fetal nesta doença. Utilizando o modelo experimental de HDC induzido pelo nitrofen (2,4-dicloro-4'nitrodifenil éter) investigamos o grau de hipoplasia pulmonar e por meio de análise imunoistoquímica, comparamos a expressão dos receptores para o VEGF em três fases do desenvolvimento pulmonar, pseudoglandular, canalicular e sacular de fetos de ratos normais e com HDC. Dividimos o experimento em ratas da raça Sprague-Dawley em três grupos: controle externo (CE), exposto ao óleo de oliva (OO) e expostas ao nitrofen com e sem HDC. Estudamos quatro grupos de 20 fetos cada em cinco dias gestacionais (DG) diferentes 17,5, 18,5, 19,5, 20,5 e 21,5. As variáveis morfológicas estudadas foram: peso corporal (PC), peso pulmonar total (PPT), peso do pulmão esquerdo (PPE), relação PPT/PC, volume pulmonar total (VPT) e volume do pulmão esquerdo (VPE). As variáveis histométricas estudadas foram: parênquima pulmonar (Par), espaço aéreo (EA), densidade do parênquima (DAP) e volume do parênquima do pulmão esquerdo. A avaliação imumohistoquímica foi realizada por meio da contagem de pontos de receptor de VEGFR-1 e 2. Obtivemos 37 % (100/270) de HDC nas ratas expostas ao nitrofen, todas variáveis morfológicas e histométricas indicam diminuição dos resultados no grupo nitrofen com e sem HDC em relação aos demais, mas que se acentuam mais ainda no grupo HDC. Essas alterações são mais evidentes a partir dos DG 18,5 e 19,5. A imunomarcação para os receptores VEGFR-1 aumentou nos grupos nitrofen e foram progressivamente maiores no grupo nitrofen com HDC (p<0,005) que os fetos dos grupo CE e OO a partir do dia gestacional 17,5, fase pseudoglandular com pico máximo no dia gestacional 19,5. O mesmo ocorreu com os receptores de VEGFR-2 a partir do dia gestacional 17,5, fase pseudoglandular até o dia 21,5 fase sacular do desenvolvimento pulmonar. Concluímos que o modelo é valido e que os fetos expostos ao nitrofen com e sem HDC apresentam hipoplasia pulmonar primária sendo mais acentuada nos fetos portadores de HDC. O mesmo resultado ocorre com imunomarcação para os receptores de VEGFR-1 e 2 que foram maiores na HDC. / Abstract: The Congenital Diaphragmatic Hernia (CDH) is a defect in the embryogenesis of the diaphragm with an incidence of 1:2500 liveborns and high fetal and neonatal mortality due to pulmonary hypoplasia and hypertension. This defect can be experimentally induced in fetuses of pregnant rats by the administration of Nitrofen, an herbicide that causes CDH in 24% of the fetuses. The histology of lungs in CDH shows pulmonary hipoplasia and not only the alveolarization but also the vascularization are affected. These changes lead to a high neonatal mortality because of the thickening of the middle layer of the arterioles causing pulmonary hypertension. One of the factors involved in the growth of the arterioles is VEGF (vascular endothelial growth factor) and its receptors; however, it is not known how the expression of this glycoprotein and its receptors change during lung development in this disease. In Brazil, the experimental model has never been tested. So, we tested the model and verified the degree of pulmonary hipoplasia and, using imunohystochemistry, we compared the expression of the receptor of VEGF in three different stages of lung development, pseudoglandular, canalicular and saccular, of normal rat fetuses and fetuses with CDH. Female Sprague-Dawley rats were divided in three groups: external control (EC), exposed to olive oil (OO) and exposed to nitrofen (N). We studied four groups - EC, OO, N with CDH and N without CDH - with 20 fetuses in each five different gestational days (GD) 17,5, 18,5, 19,5, 20,5, 21,5. The morphologic variables studied were: body weight (BW), total lung weight (TLW), left lung weight (LLW), relationship TLW/BW, total lung volume (TLV) and left lung volume (LLV). The hystometric variables studied were: lung parenchyma (LP), air space (AS), left lung parenchyma density (PD) and left lung parenchyma volume (PV). The immunohystochemistry variables were: points positive and negative for the receptor for VEGF 1 and 2. We had 37% (100/270) of CDH frequency in the fetuses exposed to nitrofen. All the morphological and hystometrical variables show a reduction in the nitrofen group with and without CDH, which were more pronounced in the group of fetuses with CDH. These changes are more evident from the GD 18,5 and 19,5 on. The receptors VEGFR-1 e 2 are increased in the nitrofen groups with and without CDH, but this increase is higher in the fetuses with CDH. We conclude that the model is valid and that the fetuses exposed to nitrofen with and without CDH show primary pulmonary hypoplasia that is more pronounced in CDH, the same is also observed in the receptors of VEGFR-1 and 2. / Doutorado / Pesquisa Experimental / Doutor em Cirurgia

Orientador: Lourenço Sbragia Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T14:56:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_FrancesLilianLanhellas_M.pdf: 3789177 bytes, checksum: e9b1048e4d4f077e540d297c2a998419 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Gastrosquise é um defeito congênito da parede abdominal anterior no qual as alças intestinais ficam herniadas e em contato com o líquido amniótico (LA). Assim, a exposição ao LA resulta em várias disfunções intestinais pós-natal. Para reduzir o tempo de exposição ao LA em modelo animal, usou-se um hidrogel de N-isopropilacrilamida (NIPAAm) copolimerizado com ácido acrílico (Aac), que rapidamente intumesce na presença de LA. O hidrogel foi usado para cobrir as alças expostas até o fim da gestação. A gastrosquise foi induzida em fetos de ratas fêmeas da raça Sprague-Dawley através de um corte paramediano à direita do cordão umbilical para exposição parcial das alças com 18,5 dias de gestação. Os fetos foram separados em quatro grupos: controle (C), apenas gastrosquise (G), gastrosquise + cobertura das alças com adesivo de fibrina - Beriplast® (GA) e gastrosquise + cobertura das alças com adesivo de fibrina e aderido um pedaço de hidrogel seco (GAH). Os animais foram colhidos por cesárea com 21,5 dias de gravidez e o hidrogel foi cuidadosamente removido. Os fetos e as alças intestinais foram pesados e análise morfométrica foi realizada. Resultados mostraram que o hidrogel após intumescimento pesou 34X que seu peso seco; ele possui carga elétrica assim como a maioria das proteínas presentes no LA e sua retirada não provocou lesão à camada serosa do intestino exposto como visto na MEV. A comparação dos grupos C e GAH com os grupos G ou GA mostrou que o peso, o diâmetro, a espessura das camadas e da parede intestinais foi significativamente menor nos grupos C e GAH quando comparados aos grupos G e GA indicando processo inflamatório. Sendo assim, a aplicação do hidrogel aderido pelo adesivo de fibrina mostrou servir como uma efetiva proteção das alças herniadas, com uma redução significante da inflamação na gastrosquise. / Abstract: Gastroschisis is a congenital defect of the anterior abdominal wall which leads the fetal bowel to herniate into the amniotic cavity. There, exposition to amniotic fluid (AF), results in severe postnatal intestinal dysfunction. In order to reduce exposition time to AF in an animal model, has used a hydrogel of N-isopropylacrylamide (NIPAAm) copolymerized with acrylic acid (Aac), which undergoes rapid swelling in the amniotic fluid. The hydrogel was used to coat the bowel hernia until pregnance is completed. Gastroschisis was induced in the fetuses of female Sprague-Dawley rats by partial evisceration of the bowel through a right paramedian opening of the abdominal wall in day 18,5 of pregnancy. The fetuses were separated in four groups: control (C), gastroschisis alone (G), gastroschisis + coating of the bowel hernia with fibrin adhesive -Beriplast® (GA) and gastroschisis + coating of the bowel hernia with fibrin adhesive topped by a piece of adhered dry hydrogel (GAH). Animals were harvested by cesarean section at day 21.5 of pregnancy and the hydrogel was carefully removed. Fetuses and intestinal tract were weighed and morphometric analysis was performed. Results showed that the hydrogel weight was 34X heavier than its dry weight; its electric charge and also the AF charge were negative and there was no damage to serosa layer of the intestine exposed. Comparison of the C and GAH groups with G and GA showed that the bowel weight, diameter, the layers and wall thickness was significantly reduced in C and GAH compared to G and GA. Thus, application of the hydrogel bound onto the fibrin adhesive was shown to provide an effective protection of the herniated bowel, with a significant reduction of inflammation in gastroschisis. / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia