Foram preparados novos derivados diferentemente substituídos da 3,5,8- triidróxi-4-imino-1 (4H)naftalenona. Estes novos derivados foram obtidos através de reações de acilação com cloretos de acila de cadeias lineares longas e de condensação com cetonas. Os novos derivados sintetizados foram testados quanto as suas utilidades potenciais como antibióticos, cristais líquidos e capacidade de complexação com metais de interesse analítico ou biológico. Estudou-se, também, reações de obtenção de novos derivados da 5-amino- 8-hidróxi-1 ,4-naftoquinona. / It has been prepared some new derivatives of 3.5.8-triidroxi-4-imino- 1 (4H)naphthalenone. This new derivatives were obtained through acylation reactions with acyl halides of long linear chains and condensation with ketones. The new sintetized derivatives have been submitted to some tests related with their potential use as antibiotics, liquid crystals and ability to complexate with metais of biological or analitical interest. We had also studied some reactions to obtain new derivatives of 5-amino- 8-hidroxi-1,4-naphthoquinone.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-05-15T19:13:01Z No. of bitstreams: 1 2017_MaurícioGonçalvesdaCostaSousa.pdf: 3712664 bytes, checksum: 5241969273057f8bbafbab7a9b03bb79 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-05-18T16:33:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_MaurícioGonçalvesdaCostaSousa.pdf: 3712664 bytes, checksum: 5241969273057f8bbafbab7a9b03bb79 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-18T16:33:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_MaurícioGonçalvesdaCostaSousa.pdf: 3712664 bytes, checksum: 5241969273057f8bbafbab7a9b03bb79 (MD5) / Terapias regenerativas recentes como a revascularização pulpar vem ganhando espaço na endodontia em dentes permanentes imaturos. Porém o uso das medicações difundidas para técnica como a pasta dupla antibiótica (DAP) contendo metronidazol (MTZ) e ciprofloxaxino (CIP) ou tripla antibiótica (TAP) contendo CIP, MTZ e minociclina pode causar resistência, citotoxicidade e manchamento dentinário. Em contrapartida, peptídeos de defesa do hospedeiro (PDHs) podem apresentar atividade antimicrobiana e imunomodulatória, surgindo como uma opção para a revascularização pulpar. Desta forma, este estudo objetivou avaliar o potencial antimicrobiano e imunomodulador de peptideos sintéticos (DJK-6, IDR-1018, IDR-1002 e LL-37), comparados à TAP e DAP em um modelo de infecção endodôntica in vitro. O estudo foi dividido em 3 etapas: (1) avaliação do potencial antimicrobiano dos fármacos de TAP e DAP (sozinhos ou em combinação) e dos PDHs contra as bactérias Staphylococcus aures (S.a.) e Enterococcus faecalis (E.f.) e o potencial sinérgico do CIP juntamente com IDR-1002; (2) comparação das concentrações encontradas neste estudo com as concentrações clínicas de TAP e DAP, através da viabilidade celular por MTT e produção de óxido nítrico (NO) pela reação de Griess, em linhagem de macrófagos RAW 264.7 e fibroblastos L929; (3) avaliação imunomodulatória, pela produção das citocinas IL-1α, IL-6, IL-12 e IL-10 e fator de necrose tumoral (TNF-α), por ELISA, além do NO em RAW 264.7 (RAW) e da IL-6 e NO em L929, com ou sem o recombinante de interferon gama (rIFN-γ) e antígenos mortos pelo calor (heat killed - HK)-S.a. ou HK-E.f. Na primeira etapa, o CIP se apresentou como o melhor antimicrobiano presente nas pastas e o IDR-1002, como o melhor PDH. Ademais, a combinação entre CIP e IDR-1002 apresentou ação sinérgica. A viabilidade celular não foi reduzida por nenhum dos grupos e TAP estimulou a produção de NO em RAW. Finalmente o PDH LL-37 reduziu significamente a viabilidade de células L929 e TAP, a viabilidade de RAW. Na ausência de estímulos antigênicos, TAP e DAP apresentaram um perfil pró-inflamatório na ausência dos estímulos antigênicos, aumentando na produção de IL-1α, TNF-α e IL-6 em células RAW e IL-6 em L929. Na adição dos estímulos antigênicos e rIFN-γ, as pastas apresentaram um perfil pró e anti-inflamatório: TAP reduziu a produção de IL-1α, IL-12 e IL-6 em RAW e aumentou TNF-α e NO, e a DAP reduziu a produção de IL-1α, IL-10 e IL-6 em RAW e aumentou IL-12. CIP, LL-37, IDR-1002 e a combinação de CIP com IDR-1002 apresentaram um perfil anti-inflamatório, reduzindo principalmente IL-6 e IL-12 na presença dos estímulos antigênicos e rIFN-γ. Em suma, a combinação sinérgica de CIP com IDR-1002 foi eficaz contra ambas bactérias e apresentou um papel anti-inflamatório neste modelo de infecção in vitro, podendo surgir como uma opção promissora para aplicações biotecnológicas envolvendo a revascularização pulpar. / Recent regenerative therapies such as pulpal revascularization have been diffused in endodontics in immature permanent teeth. However, the use of medications such as double antibiotic paste (DAP) containing metronidazole (MTZ) and ciprofloxaxin (CIP) or triple antibiotic paste (TAP) containing CIP, MTZ and minocycline may cause resistance, cytotoxicity and dentin discoloration. On the other hand, host defense peptides (HDPs) have antimicrobial and immunomodulatory effects, emerging as an option for pulpal revascularization. Thus, the aim of this study was to evaluate the antimicrobial and immunomodulatory potential of synthetic peptides (DJK-6, IDR-1018, IDR-1002 and LL-37) compared to TAP and DAP, in an in vitro endodontic infection model. For this, the study was divided in three stages: (1) antimicrobial potential of TAP and DAP drugs (alone or in combination) and HDPs against the bacteria Staphylococcus aures (S.a.) and Enterococcus faecalis (E.f.) and the synergistic potential of CIP and IDR-1002; (2) comparison of the findings of this study with TAP and DAP clinical concentrations, through cell viability by MTT and nitric oxide (NO) production by the Griess reaction, in RAW 264.7 macrophages and L929 fibroblasts; (3) immunomodulatory stage, by the evaluation of cytokines by ELISA: IL-1α, IL-6, IL-12, IL-10 and tumor necrosis factor (TNF-α), as well as NO in RAW 264.7 (RAW) and IL-6 and NO, in L929 with or without the recombinant interferon gamma (rIFN-γ) and heat killed antigens HK-S.a. or HK-E.f. In the first stage, CIP presented the best antimicrobial activity comparing to TAP and DAP containing antibiotics and IDR-1002, the best HDP. In addition, the combination between CIP and IDR-1002 was synergistic. The viability was not reduced by any groups and TAP stimulated NO production in RAW cells. Finally, LL-37 significantly reduced the viability of L929 and TAP, the RAW viability. Without any antigenic stimuli, TAP and DAP presented a pro-inflammatory profile up regulating IL-1α, TNF-α and IL-6 in RAW and IL-6, in L929. However, the addition of antigenic stimuli and rIFN-γ, TAP and DAP presented pro and anti-inflammatory profile reducing IL-1α, IL-12 and IL-6 in RAW and increasing TNF-α and NO, and reducing IL-1α, IL-10 and IL-6 in RAW and increasing IL-12. CIP, LL-37, IDR-1002 and the combination of CIP with IDR-1002 showed an anti-inflammatory profile, mainly reducing IL-6 and IL-12 with antigenic and rIFN-γ stimuli. In conclusion, the synergistic combination of CIP with IDR-1002 was effective against both bacteria and presented an anti-inflammatory role in this in vitro infection model may emerge as a promising option for biotechnological applications involving pulp revascularization.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / A lo largo del tiempo, los antibacterianos han sido ampliamente utilizados en el tratamiento y control de enfermedades infecciosas. Actualmente la lucha contra varias enfermedades de origen bacteriano se ha vuelto un problema de salud a nivel mundial, debido a la resistencia bacteriana. Sumado a lo anterior, la tendiente disminución en investigación y desarrollo de nuevos antibacterianos nos insta a destinar los esfuerzos en investigar nuevos compuestos activos, idealmente, frente a bacterias multirresistentes, con una estructura química y mecanismo de acción novedoso. En este sentido la cadena transportadora de electrones, y en particular la ubiquinona aparece como un blanco interesante para el desarrollo de nuevos antibacterianos. Por este motivo nuestro grupo de investigación ha llevado a cabo el desarrollo de derivados isoquinolinquinona activos en bacterias Gram positivo. Sin embargo, los factores que modulan la actividad de estos compuestos no han sido estudiados. De esta forma, el objetivo de este estudio es desarrollar un modelo 3D- QSAR/CoMFA y compararlo con la gráfica de Craig para establecer si estos modelos son útiles para el desarrollo de nuevos compuestos antibacterianos. La metodología CoMFA, la cual mide parámetros estéricos y electrostáticos de cada molécula, indica que el primer parámetro es el principal contribuyente de la actividad de esta familia de compuestos. En contraste, la gráfica de Craig, la cual relaciona la constante de hidrofobicidad y el carácter electrónico de los sustituyentes, entrega como resultado que la actividad de esta serie de compuestos depende principalmente del carácter hidrofóbico del sustituyente. Para validar estos resultados se realizó la síntesis de 8 derivados 8-aril-mercapto-pirimidoisoquinolinquinona, obteniéndose en dos pasos, con rendimientos para la última etapa entre 43% y 89%. Los compuestos obtenidos fueron evaluados para determinar su concentración inhibitoria mínima, en 6 bacterias prototipo. Los resultados muestran que 5 compuestos presentaron actividad en las bacterias Gram positivo ensayadas. Ninguno de los compuestos presento actividad en bacterias Gram negativa. En conclusión, se establece que el empleo de la gráfica de Craig y modelo CoMFA resultaron ser herramientas útiles para el desarrollo de nuevos compuestos antibacterianos de estructura 8-(4’-aril-mercapto)-pirimidoisoquinolinquinonas / Antibacterials have been used in treatment and control of infectious diseases in modern times. Today, the struggle against several diseases with bacterial origins has become a global health problem, due to bacterial resistance. In addition, diminishing research and development trends in antibacterial drugs urges us to focus resources on new active compounds. These should target multi-resistant bacteria with novel chemical structures and action mechanisms. In this sense, the electron transport chain and in particular the ubiquinone seems like an interesting target for new antibacterial developments. For this reason, our research group has conducted the development of active isoquinolinquinone derivatives on gram positive bacteria. However, the research of the factors that modulate the activity of these compounds has not been previously performed. The objective of this research is to develop a CoMFA model and compare it with Craig´s graph to establish the usefulness of these models for the development of new antibacterial compounds. The CoMFA methodology measures steric and electrostatic parameters of each molecule and indicates that the first parameters are the main contributors to the activity of this compound family. In contrast, Craig plot relates the hydrophobic and electronic constants of the substituents. From this plot, as a result of the activity of this compound series, it is derived that the hydrophobic properties of the substituents are the main contributor. To validate these results, eight derivatives of 8-aril-mercapto-pirimidoisoquinolinquinone were synthesized, in two steps, with efficiency between 42.7% and 88.5%. These compounds were evaluated to determine the minimum inhibitory concentration, using six prototype bacteria. The results show that five compounds achieved activity on the tested Gram-positive bacteria. None of these compounds revealed activity on Gram-negative bacteria. In conclusion, it has been stablished that both tools, Craig plot and CoMFA, are useful methods in the development of new antibacterial compounds of 8-(4’-aryl-mercapto)-pyrimidoisoquinolinquinone structure

O gênero Aeromonas representa um importante grupo de patógenos emergentes responsáveis por diversas afecções em animais e em humanos. Nestes, as Aeromonas têm sido associadas a infecções intestinais e extraintestinais em pessoas imunocompetentes e comprometidas, tanto na comunidade como em ambiente hospitalar. É de consenso geral que a resistência a antibióticos nessas bactérias pode vir a representar um problema potencial no tratamento das infecções. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a freqüência de resistência a distintos antibióticos em bactérias do gênero Aeromonas isoladas de humanos e de suínos, com ênfase na resistência a antibióticos -lactâmicos. Foram avaliados um total de 62 isolados, frente a um painel de 15 antibióticos, evidenciando-se uma elevada percentagem de bactérias resistentes a mais de três antibióticos -lactâmicos, além de alta resistência à tetraciclina, ao cotrimazol e ao cloranfenicol. Entre os antibióticos testados, os mais eficazes contra as Aeromonas foram os ciprofloxacina, os gentamicina e os tobramicina. Alta freqüência de Aeromonas resistentes à tetraciclina e ao cotrimazol foi evidenciada em isolados de suínos, mostrando a importância da pressão de seleção exercida por uso indiscriminado desses antibióticos nas rações. A maior parte dos isolados com resistências múltiplas apresentou plasmídios conjugativos e alguns plasmídios de baixo peso molecular; os quais, em princípio, podem estar associados à resistência a antibióticos. Entre os isolados com resistência a vários antibióticos -lactâmicos, um apresentou características fenotípicas de ESBL. A análise, através de PCR, confirmou a presença de três genes de -lactamases de espectro expandido (TEM, CTX e ampC) neste isolado. Os genes TEM e CTX foram transferidos por conjugação para E. coli, junto com a resistência ao cloranfenicol e à gentamicina, indicando que todos esses genes se encontram em plasmídio conjugativo. A análise da atividade -lactamásica em três isolados mostrou que a mesma é muito elevada em bactérias desse gênero. No isolado portador de ESBLs, as metalo--lactamases são responsáveis pela maior parte da atividade penicilinásica e apenas por uma pequena parte da atividade sobre cefotaxima. Constatou-se ainda que a atividade -lactamásica de Aeromonas é inibida por temperaturas acima de 40C, apresentando um decréscimo linear da atividade em função do tempo. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-07-04T14:20:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Adriana de Carli.pdf: 955154 bytes, checksum: 51d920df359e3b8b5871fd0d4d679bd0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-04T14:20:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Adriana de Carli.pdf: 955154 bytes, checksum: 51d920df359e3b8b5871fd0d4d679bd0 (MD5) / The genus Aeromonas represents an important group of emergent pathogens responsible for several disorders in animals and humans. In humans there are associated with intestinal and extra-intestinal infections in immunocompetent and compromised person of the community and hospital settings. It is of general concern that antibiotic resistance will potentially become a problem among Aeromonas strains causing infections. In this sense, the objective of the present work was to evaluate the frequency of resistance to different antibiotics in Aeromonas isolated from humans and suines, with enfasis in the resistance to -lactamic antibiotics. A total of 62 isolates were evaluated against a panel of 15 antibiotics showing high percentage of resistance to more than three -lactam antibiotics, as well as resistance to tetracycline, cotrimazol and cloranphenicol. The most efficient antibiotics against Aeromonas were ciprofloxacin, gentamicin, and tobramicin. High frequency of tetracyclin and cotrimazol resistance was evidenced among suine isolates, showing the selection pressure effect exerced by the indiscriminate use of these antibiotics on feed. Most isolates with multiple resistance harbored conjugative plasmids and some exhibited low molecular plasmids, that may be associated with antibiotic resistance. Among isolates with multiple resistance to -lactam antibiotics, one showed a characteristic ESBL phenotype. PCR analysis confirmed the presence of three extended spectrum -lactamase genes (TEM, CTX, and ampC) in this isolate. The TEM and CTX genes were transferred by conjugation to E. coli, together with the resistances to chloranphenicol and gentamicin, indicating that all these genes are present in a conjugative plasmid. The analysis of -lactamase activity in three isolates showed that is very high in this Aeromonas. In the isolate with ESBLs, the metalo--lactamases are responsible for the main penicillinasic activity but just for a small part of the activity on cefotaxime. The -lactamasic activity of Aeromonas is inhibited by temperatures over 40C, showing a linear decrease on the activity in function of time.

Este trabalho apresenta uma proposta de síntese de fotocatalisadores à base de titânia para fotodegradação dos antibióticos sulfametoxazol (SMX), ciprofloxacino (CIP) e norfloxacino (NOR). As sínteses foram realizadas utilizando suportes comerciais (sílica, alumina, óxido de magnésio e zeólita NaY), suportes modificados à base de sílica modificada com Al, Mo, W e Cr, e suportes modificados com Sn, a fim de de aumentar o espectro de absorção da radiação solar e promover uma maior interação entre catalisador e analito. Os sólidos foram caracterizados por diversas técnicas de caracterização elementar, estrutural, textural e morfológica: microscopia eletrônica de varredura com espectroscopia de emissão de raios X por dispersão de energia (SEM-EDX), difratometria de raios X (XRD), espectroscopia de refletância difusa no ultraviota-visível (DRS), potencial zeta, adsorção de nitrogênio, espalhamento de raios X a baixo ângulo (SAXS), espectroscopia no infravermelho (FT-IR) e espectroscopia fotoeletrônica de raios X (XPS). Em testes iniciais de degradação, os melhores resultados apresentados foram dos sólidos TiAl2O3 e SnTi-TiMoSiO2, atingindo respectivamente 84 e 71 % de degradação de SMX em água durante 60 minutos. Nos experimentos subsequentes, o sólido TiAl2O3 apresentou degradação de 100 % em água nos tempos de 20 minutos para os antibióticos CIP e NOR e 30 minutos para o SMX, e em efluente esses tempos foram para 60 e 90 minutos, respectivamente. O sólido SnTi-TiMoSiO2 apresentou 100 % de degradação em água para os antibióticos CIP e NOR em 120 minutos e em 60 minutos para o SMX, e a total degradação em efluente se deu em 60 minutos para CIP e NOR e em 90 minutos para o SMX. Em experimento utilizando a radiação solar como fonte luminosa, o sólido TiAl2O3 promoveu degradação total dos três antibióticos em apenas 15 minutos. O sólido SnTi-TiMoSiO2 possibilitou degradação de 100 % dos antibióticos CIP e NOR em 120 minutos e 70 % do SMX em 240 minutos. Avaliando a reutilização dos sólidos, TiAl2O3 apresentou degradação de 100% nos 5 ciclos de reutilização e o sólido SnTi-TiMoSiO2 apresentou degradação muito próxima de 100 %. / This study proposes a synthesis of photocatalysts based on titanium dioxide to photodegrade the antibiotics sulfamethoxazole (SMX), ciprofloxacin (CIP) and norfloxacin (NOR). The synthesis were performed using commercial supports as silica, alumina, magnesium oxide and NaY zeolite, modified supports with aluminum, molybdenum, tungsten and chromium, and modified surfaces with tin, in order to red shift the solar absorption spectrum and promote a major interaction between catalyst and analyte. The solids were characterized by many techniques of elemental, structural, textural and morphological characterization such as scanning electron microscopy/energy dispersive X ray spectroscopy (SEM-EDX), X ray diffraction (XRD), diffuse reflectance spectroscopy in ultraviolet-visible (DRS), zeta potential, nitrogen adsorption, small angle X ray scattering (SAXS), infrared spectroscopy (FT-IR) and X ray photoelectron spectroscopy (XPS). In the screening experiments the best results were found for TiAl2O3 and SnTi-TiMoSiO2 solids, reaching 84 % and 71 % of degradation of SMX, respectively, in pure water during 60 minutes. In subsequent experiments, TiAl2O3 alowed degradation of 100 % in pure water after 20 minutes of the antibiotics CIP e NOR and after 30 minutes of SMX, and in wastewater these degradation times shifted to 60 and 90 minutes, respectively. The solid SnTi-TiMoSiO2 showed 100 % degradation in pure water to antibiotics CIP and NOR in 120 minutes and 60 minutes for SMX, and total degradation in wastewater after 60 minutes for CIP and NOR and 90 minutes for SMX. The experiments using solar radiation as light source, TiAl2O3 presented total degradation of the three antibiotics in only 15 minutes, though the solid SnTi-TiMoSiO2 presented degradation of 100 % of CIP and NOR in 120 minutes and 70 % of SMX in 240 minutes. Evaluating the reuse of the photocatalysts, TiAl2O3 presented total degradation in all of 5 cycles of reusing and SnTi-TiMoSiO2 presented degradation very close to 100 %.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação Strictu Sensu em Patologia Molecular, 2014. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-08T12:21:19Z No. of bitstreams: 1 2014_IsabelCristinaMarquesFensterseifer.pdf: 3445079 bytes, checksum: e1d601504295bffdf4c22bf862853560 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-12T11:22:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_IsabelCristinaMarquesFensterseifer.pdf: 3445079 bytes, checksum: e1d601504295bffdf4c22bf862853560 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-12T11:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_IsabelCristinaMarquesFensterseifer.pdf: 3445079 bytes, checksum: e1d601504295bffdf4c22bf862853560 (MD5) / A pele é o maior e o mais exposto órgão do corpo humano. Embora seja extremamente eficaz na proteção contra intempéries do ambiente externo, infecções na pele são comuns, podendo ser causadas por bactérias, fungos ou vírus. A principal bactéria associada à infecção cutânea consiste na Staphylococcus aureus. Embora a maioria das infecções possa ser facilmente tratada, outras não apresentam a mesma facilidade. Isto tem sido observado especialmente em infecções adquiridas em feridas cirúrgicas, que são o tipo de infecção hospitalar mais comum e uma importante causa de morbidade e mortalidade. Essas infecções cada vez mais vêm sendo ocasionadas por patógenos resistentes aos tratamentos convencionais enfatizando a importância de se identificar novas terapias antimicrobianas mais eficazes. Peptídeos antimicrobianos (PAMs) têm emergido como um novo grupo promissor para serem avaliados na intervenção terapêutica de doenças infecciosas. Dentre os PAMs se destacam os ciclotídeos que são peptídeos cíclicos isolados inicialmente de plantas que possuem em sua estrutura seis resíduos de cisteína altamente conservados, que formam três pontes de dissulfeto interligadas. Essa estrutura faz com que estes peptídeos sejam altamente estáveis e tem atraído um interesse como modelos baseados em peptídeos para aplicações de concepção de drogas. Aqui os ciclotídeos CyO2, KB1 e KB2 foram avaliados com o objetivo de caracterizar suas atividades citotóxica, imunomodulatória e antiestafilocócica in vitro e in vivo em um modelo de infecção subcutânea. Nos ensaios in vitro foi observado que os ciclotídeos não apresentaram atividade citotóxica para os monócitos RAW 264.7 e apresentaram atividade antiestafilocócica variando de forte (CyO2 e KB2) a moderada (KB1). Nos ensaios de avaliação da atividade imunomodulatória, a citocina TNF-α apresentou variação significativa somente nos grupos tratados com CyO2, onde os níveis desta citocina foram reduzidos. Nos ensaios in vivo, os ciclotídeos reduziram significativamente a carga bacteriana total corroborando com a atividade antiestafilocócica in vitro. Além disso, o ciclotídeo KB2 induziu a um aumento na secreção de TNF local na maior concentração testada (3,0 mg.kg-1). Em conclusão, os ciclotídeos CyO2, KB1 e KB2 podem constituir uma nova alternativa terapêutica para o tratamento local de infecções, sendo necessários mais estudos para avaliar a aplicabilidade destes PAMs. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The skin is the largest and the most exposed organ of the human body. While it is extremely effective in protecting against external environment setbacks, skin infections are common and may be caused by bacteria, fungi or virus. The main bacterium associated with skin infection is Staphylococcus aureus. Although the majority of infections can be easily treated, others did not demonstrate the same facility. This could occurs, especially in infections acquired in surgical wounds, which are the most common hospital-acquired infections and are major cause of morbidity and mortality. These infections are increasingly caused by pathogens resistant to conventional treatments, which emphasizes the importance of identifying new and more effective antimicrobial therapies. Antimicrobial peptides (AMPs) have emerged as a promising new therapy to be evaluated in the treatment of infectious diseases. Among the AMPs, the cyclotides have been focused, being cyclic peptides originally isolated from plants sources, showing six highly conservated cysteine residues in their structure, which form three interconnected disulfide bonds. This structure produced highly stable peptides and has attracted interest as a peptide-based model for drugs designing. Here the cyclotides CyO2, KB1 and KB2 were evaluated in order to characterize their cytotoxic, immunomodulatory and antistaphylococcal activities in vitro and in vivo by using in a model of subcutaneous infection. In vitro essays showed no cytotoxicity activity to RAW 264.7 monocytes with all cyclotides. Otherwise antistaphylococcal activities ranging from strong (CyO2 and KB2) to moderate (KB1) were also observed. In trials evaluating the immunomodulatory activity, the cytokine TNF-α showed a significant variation only in groups treated with CyO2, where cytokine levels were reduced. At in vivo assays, the cyclotides significantly reduced the total bacterial load corroborating with the in vitro antistaphylococcal activity. Furthermore, the KB2 cyclotide induced an increase in local TNF secretion at the highest concentration tested (3.0 mg.kg-1). In conclusion, the cyclotides CyO2, KB1 and KB2 could represent a novel therapeutic approach for the local treatment of infections, more studies being needed to evaluate the applicability of these AMPs.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2015-05-26T17:40:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_de_mestrado FERNANDA correção após apresentação FINALIZADA DIGITAL.pdf: 1967282 bytes, checksum: 8e1bd13e2a7cb2f2b493bb443c3db0f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T17:40:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_de_mestrado FERNANDA correção após apresentação FINALIZADA DIGITAL.pdf: 1967282 bytes, checksum: 8e1bd13e2a7cb2f2b493bb443c3db0f9 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Pseudomonas aeruginosa é uma importante causa de infecções apresentando, no Brasil, altas taxas de morbidade e mortalidade. Os principais mecanismos de resistência utilizados por P. aeruginosa são a produção de β-lactamases e a expressão de bombas de efluxo. O uso de IgG e antibióticos para tratamento destas infecções tem apresentado resultados bem sucedidos, o que motiva a realização de estudos quanto a atividade in vitro da IgG humana com antibióticos frente a isolados de P. aeruginosa. O objetivo deste estudo foi detectar a presença dos genes de resistência, a relação clonal, o tempo de morte em isolados de P. aeruginosa provenientes de Infecções relacionadas à saúde (IrAS) de hospitais públicos do Recife-PE, em 2014, e verificar in vitro a taxa de fagocitose e a produção de oxido nítrico (NO) por monócitos humanos quando infectados por P. aeruginosa tratada com IgG humana em associação a Meropenem e Polimixina E. Foram avaliados 32 isolados para a detecção de genes de resistência por PCR, e para a avaliação de similaridade genética por ERIC-PCR. Destes, foram selecionados os 5 isolados apresentando maior número de genes de resistência e menor similaridade genética. Esses cinco isolados foram submetidos às associações dos sub-CIMs destes antibióticos com a IgG humana, para a determinação do tempo de morte, da taxa de fagocitose de células bacterianas e para a dosagem de NO por monócitos humanos. Foi detectado a presença do gene blaKPC em dois isolados de P. aeruginosa. Todos os isolados possuem os genes mexR, mexB, mexE e rpsL, apenas um isolado foi negativo para os genes mexA e mexF. Foram detectados 30 perfis genéticos distintos entre os isolados bacterianos. O tempo de morte dos isolados revelou que os tratamentos combinados com antibióticos, principalmente Polimixina E, são mais letais para as células bacterianas. A taxa de fagocitose por monócitos humanos revelou que quando infectados com bactéria tratada com IgG mais antibiótico, os monócitos ficam mais ativos à fagocitose e reduz drasticamente a quantidade de células bacterianas. Houve diferença significativa na produção de NO naqueles tratados com Meropenem e IgG. Com o presente estudo concluiu-se que a combinação de IgG mais antibiótico pode ser uma alternativa para o tratamento dessas infecções, pois a bactéria estará em número reduzido facilitando a fagocitose.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-06-01T19:49:04Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Kaline Sandrelli Amorim Ferreira.pdf: 1526807 bytes, checksum: ab0a7e500a7c3f5cda1ad7a0aec8e656 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-01T19:49:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Kaline Sandrelli Amorim Ferreira.pdf: 1526807 bytes, checksum: ab0a7e500a7c3f5cda1ad7a0aec8e656 (MD5) Previous issue date: 2016-12-28 / O objetivo foi estudar o perfil de liberação do moxifloxacino encapsulado em lipossomas, no humor aquoso, como um sistema de liberação controlada para aplicação intracameral. Lipossomas contendo moxifloxacino (MFLX-Lipo) foram obtidos através do método de hidratação do filme lipídico e foram caracterizados de acordo com o tamanho das partículas e sua eficiência de encapsulação. Quinze coelhas foram utilizadas para o estudo do perfil de liberação in vivo. MFLX-Lipo foi injetado na câmara anterior do olho direito de cada animal. As coelhas foram divididas em 5 grupos e uma amostra de humor aquoso (HA) foi coletada após 2, 4, 8, 24 e 48 horas após a administração de MFLX-Lipo. As concentrações de moxifloxacino (MFLX) no HA foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). MFLX-Lipo exibiu um tamanho médio de 60.5 ± 0.72 nm e uma distribuição do tamanho da partícula de 0.307. A eficiência de encapsulação do MFLX nos lipossomas foi de 92.24 ± 0.24%. No estudo de liberação in vivo do MFLX-Lipo, a concentração máxima de MFLX foi alcançada nas primeiras 2 horas após administração (4.16 ± 2.07 μg/mL) e foi seguida por um decréscimo na concentração intracameral, atingingo a concentração de 0.34 ± 0.05 μg/mL após 48 horas.A formulação lipossomal obtida exibe propriedades que a tornam adequada para a administração intraocular e oferece estabilidade e elevada eficiência de encapsulação. No estudo in vivo, MFLX-Lipo exibiu um perfil de liberação satisfatório no humor aquoso, o que sugere que se trata de uma opção para a profilaxia de patógenos frequentemente envolvidos na endoftalmite. / The purpose wasto study the release profile of moxifloxacin encapsulated in liposomes in the aqueous humor as a controlled release system for intracameral application. Liposomes containing moxifloxacin (MFLX-Lipo) were obtained using the lipid film hydration method and were characterized by particle size and encapsulation efficiency. Female rabbits were used for the in vivo profile release study. MFLX-Lipo was injected into the anterior chamber of each animal’s right eye. The rabbits were divided into 5 subgroups, and a sample of aqueous humor (AH) was collected 2, 4, 8, 24, and 48 hours after MFLX-Lipo administration. Moxifloxacin (MFLX) concentrations in the AH were analyzed using high performance liquid chromatography. MFLX-Lipo exhibited an average size of 60.5 ± 0.72 nm and a particle size distribution of 0.307. The encapsulation efficiency of MFLX in liposomes was 92.24 ± 0.24%. In the in vivo release study of MFLX-Lipo, the maximum concentration of MFLX was achieved within the first 2 hours after administration (4.16 ± 2.07 μg/mL) and was followed by a decrease in intracameral concentration (0.34 ± 0.05 μg/mL) until the 48-hour mark.The liposomal formulation obtained exhibits properties that make it suitable for intraocular administration and offers stability and high encapsulation efficiency. In the in vivo study, MFLX-Lipo exhibited a satisfactory aqueous humor release profile, which suggests that it is an option for the prophylaxis of frequent endophthalmitis pathogens.

O gênero Aeromonas representa um importante grupo de patógenos emergentes responsáveis por diversas afecções em animais e em humanos. Nestes, as Aeromonas têm sido associadas a infecções intestinais e extraintestinais em pessoas imunocompetentes e comprometidas, tanto na comunidade como em ambiente hospitalar. É de consenso geral que a resistência a antibióticos nessas bactérias pode vir a representar um problema potencial no tratamento das infecções. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a freqüência de resistência a distintos antibióticos em bactérias do gênero Aeromonas isoladas de humanos e de suínos, com ênfase na resistência a antibióticos -lactâmicos. Foram avaliados um total de 62 isolados, frente a um painel de 15 antibióticos, evidenciando-se uma elevada percentagem de bactérias resistentes a mais de três antibióticos -lactâmicos, além de alta resistência à tetraciclina, ao cotrimazol e ao cloranfenicol. Entre os antibióticos testados, os mais eficazes contra as Aeromonas foram os ciprofloxacina, os gentamicina e os tobramicina. Alta freqüência de Aeromonas resistentes à tetraciclina e ao cotrimazol foi evidenciada em isolados de suínos, mostrando a importância da pressão de seleção exercida por uso indiscriminado desses antibióticos nas rações. A maior parte dos isolados com resistências múltiplas apresentou plasmídios conjugativos e alguns plasmídios de baixo peso molecular; os quais, em princípio, podem estar associados à resistência a antibióticos. Entre os isolados com resistência a vários antibióticos -lactâmicos, um apresentou características fenotípicas de ESBL. A análise, através de PCR, confirmou a presença de três genes de -lactamases de espectro expandido (TEM, CTX e ampC) neste isolado. Os genes TEM e CTX foram transferidos por conjugação para E. coli, junto com a resistência ao cloranfenicol e à gentamicina, indicando que todos esses genes se encontram em plasmídio conjugativo. A análise da atividade -lactamásica em três isolados mostrou que a mesma é muito elevada em bactérias desse gênero. No isolado portador de ESBLs, as metalo--lactamases são responsáveis pela maior parte da atividade penicilinásica e apenas por uma pequena parte da atividade sobre cefotaxima. Constatou-se ainda que a atividade -lactamásica de Aeromonas é inibida por temperaturas acima de 40C, apresentando um decréscimo linear da atividade em função do tempo. / The genus Aeromonas represents an important group of emergent pathogens responsible for several disorders in animals and humans. In humans there are associated with intestinal and extra-intestinal infections in immunocompetent and compromised person of the community and hospital settings. It is of general concern that antibiotic resistance will potentially become a problem among Aeromonas strains causing infections. In this sense, the objective of the present work was to evaluate the frequency of resistance to different antibiotics in Aeromonas isolated from humans and suines, with enfasis in the resistance to -lactamic antibiotics. A total of 62 isolates were evaluated against a panel of 15 antibiotics showing high percentage of resistance to more than three -lactam antibiotics, as well as resistance to tetracycline, cotrimazol and cloranphenicol. The most efficient antibiotics against Aeromonas were ciprofloxacin, gentamicin, and tobramicin. High frequency of tetracyclin and cotrimazol resistance was evidenced among suine isolates, showing the selection pressure effect exerced by the indiscriminate use of these antibiotics on feed. Most isolates with multiple resistance harbored conjugative plasmids and some exhibited low molecular plasmids, that may be associated with antibiotic resistance. Among isolates with multiple resistance to -lactam antibiotics, one showed a characteristic ESBL phenotype. PCR analysis confirmed the presence of three extended spectrum -lactamase genes (TEM, CTX, and ampC) in this isolate. The TEM and CTX genes were transferred by conjugation to E. coli, together with the resistances to chloranphenicol and gentamicin, indicating that all these genes are present in a conjugative plasmid. The analysis of -lactamase activity in three isolates showed that is very high in this Aeromonas. In the isolate with ESBLs, the metalo--lactamases are responsible for the main penicillinasic activity but just for a small part of the activity on cefotaxime. The -lactamasic activity of Aeromonas is inhibited by temperatures over 40C, showing a linear decrease on the activity in function of time.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9890_Dissertação Lílian Lavagnoli.pdf: 1695314 bytes, checksum: 4e00c822d6e826f4c7b4e864077999bd (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / Há relatos de Enterobactérias resistentes aos carbapenêmicos (ERC) em todo o mundo, indicando que a disseminação da resistência se tornou um importante problema de saúde pública. Há necessidade de melhor compreensão sobre os aspectos envolvidos, incluindo os fatores de risco de infecção por esses microrganismos. O objetivo do presente estudo caso-controle exploratório foi identificar possíveis fatores de risco para a aquisição de cepas de Enterobactérias com marcador de resistência aos carbapenêmicos. A população do estudo constituiu-se de pacientes com amostra biológica positiva para ERC pela metodologia disco difusão e E-test e controles com amostra biológica negativa para ERC. Ao todo, 65 pacientes foram incluídos, 13 (20%) com ERC e 52 (80%) sem ERC. As ERC isoladas foram Serratia marcescens (6), Klebsiella pneumoniae (4) e Enterobacter cloacae (3). Análise univariada identificou tempo de internação até a coleta (p<0,001), tempo total de internação (p<0,001) e procedimento cirúrgico (p=0,004) com significância estatística. No modelo de regressão logística, tempo de internação até a coleta permaneceu com significância, resultando em odds ratio de 0,934 (IC 95%: 0,882 a 0,989). Procedimento cirúrgico teve significância limítrofe (p = 0,056; OR = 9,293; IC 95%: 0,946 a 91,255). Análise separada de uso de carbapenêmicos revelou significância estatística (p<0,001), entretanto, não se manteve na análise multivariada, que resultou em odds ratio de 0,91 (IC 95%: 0,752 a 47,63). O conhecimento dos fatores de risco associados a aquisição e a instituição de medidas preventivas pode contribuir decisivamente para a diminuição da propagação destes microorganismos no ambiente hospitalar.