Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-07-10T12:16:42Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1661395 bytes, checksum: 3b90c7dae81a55f752093bd4865ac20e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T12:16:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1661395 bytes, checksum: 3b90c7dae81a55f752093bd4865ac20e (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Serious infections caused by opportunistic fungal pathogens such as Candida genus, have been increasingly common in immunocompromised patients. The spread of drug-resistant fungi is one of the most serious threats to the successful treatment of fungal diseases, in addition, some drugs are very toxic, hindering adherence to therapy. In this context, the monoterpenes have stood out for having various pharmacological activities such as fungicide and bactericide. It also stands out the antioxidant activity of these compounds by being able to react and inactivate the different reactive species produced during a cellular oxidative stress. Based on this, the antifungal, cytotoxic and antioxidant effect of the monoterpenes (R)-(+)-citronellal (RC), (S)-(-)-citronellal (SC) and 7-hydroxycitronellal (7-OH) were studied. For the analysis of the antimicrobial potential of monoterpenes was used with the in silico analysis software Pass online. For the realization of antifungal studies used the microdilution test with different fungal strains of Candida for evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC). In addition, it was determined the Minimum Fungicidal Concentration (MFC) for seeding on plates. In carrying out cytotoxicity studies and antioxidant was used human red blood cells obtained from the transfusion unit of the University Hospital Lauro Wanderley/UFPB. For the antioxidant studies used the techniques with phenylhydrazine and hydrogen peroxide. The study showed that the in silico monoterpenes RC, SC and 7-OH were more likely to be active in percentage, compared to fungal microorganisms. The antifungal activity of experiments revealed that the RC and SC monoterpenes promoted strong antifungal effect with MIC50 of 256 μg/mL for strains of Candida albicans and Candida tropicalis and fungicidal action for presenting CFM50 512 μg/mL. The monoterpene 7-OH showed strong antifungal effect for both strains of Candida albicans and for Candida tropicalis strains with MIC50 of 256 μg/mL and MIC50 512 μg/mL, respectively, and fungicidal action with CFM50 512 μg/mL and 1024 μg/mL. The monoterpenes RC, SC and 7-OH showed no oxidant opposite effect to human erythrocytes. Furthermore, the front monoterpenes had antioxidant effect against phenylhydrazine and hydrogen peroxide. RC analysis of cytotoxicity, SC and 7-OH front of haemolysis erythrocytes showed values below 25% for all blood types tested at a concentration of 256 μg/mL. Given these results, it was possible to infer that the stereoisomerism of RC and SC monoterpenes did not interfere in the tested activities. In conclusion, these results suggest that the RC, SC-OH and 7 show antifungal and antioxidant effect with low cytotoxic effect. / As infecções graves causadas por fungos patogênicos oportunistas, tais como do gênero Candida, têm sido cada vez mais comuns em pacientes imunocomprometidos. A disseminação de fungos resistentes aos medicamentos é uma das mais graves ameaças para o sucesso do tratamento das doenças fúngicas, além disso, algumas drogas são muito tóxicas, dificultando a adesão a terapêutica. Nesse contexto, os monoterpenos têm se destacado por apresentarem diversas atividades farmacológicas tais como: fungicida e bactericida, além da atividade antioxidante, por serem capazes de reagir e inativar as diferentes espécies reativas produzidas durante um estresse oxidativo celular. Com base nisto, foram estudados os efeitos antifúngico, citotóxico e antioxidante dos monoterpenos (R)-(+)-citronelal (RC), (S)-(-)-citronelal (SC) e 7-hidroxicitronelal (7-OH). Para a análise do potencial antimicrobiano dos monoterpenos foi utilizado a análise in silico com o software Pass online. Para a realização dos estudos antifúngicos utilizou-se o teste de microdiluição com diferentes cepas fúngicas do gênero Candida para avaliação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). Além disso, determinou-se a Concentração Fungicida Mínima (CFM) por semeio em placas. Na realização dos estudos de atividade citotóxica e antioxidante utilizou-se hemácias humanas obtidas da unidade transfusional do Hospital Universitário Lauro Wanderley/UFPB. Para os estudos antioxidantes utilizou-se as técnicas com fenilhidrazina e peróxido de hidrogênio. O estudo in silico demonstrou que os monoterpenos RC, SC e 7-OH apresentaram uma maior probabilidade de serem ativos, expressa em porcentagem, frente aos microrganismos fúngicos. Os experimentos de atividade antifúngica revelaram que os monoterpenos RC e SC promoveram efeito antifúngico forte com CIM50 de 256 μg/mL para as cepas de Candida albicans e Candida tropicalis, bem como ação fungicida por apresentarem CFM50 512 μg/mL. O monoterpeno 7-OH apresentou forte efeito antifúngico tanto para as cepas de Candida albicans como para as cepas de Candida tropicalis, com CIM50 de 256 μg/mL e CIM50 512 μg/mL, respectivamente, bem como ação fungicida com CFM50 de 512 μg/mL e 1024 μg/mL. Os monoterpenos RC, SC e 7-OH não demonstraram efeito oxidante frente a eritrócitos humanos. Além disso, os monoterpenos apresentaram efeito antioxidante frente a fenilhidrazina e ao peróxido de hidrogênio. A análise da citotoxicidade de RC, SC e 7-OH frente a eritrócitos revelou valores de hemólise abaixo de 25% para todos os tipos sanguíneos testados, na concentração de 256 μg/mL. Diante desses resultados, foi possível inferir que a estereoisomeria dos monoterpenos RC e SC não interferiu nas atividades testadas. Em conclusão, estes resultados sugerem que o RC, SC e 7-OH apresentam efeito antifúngico e antioxidante, com baixo efeito citotóxico.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-09-13T12:15:49Z No. of bitstreams: 1 arquuivototal.pdf: 3577415 bytes, checksum: 0e9d2a60e77718e50720d15b7cad6fb1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-13T12:15:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquuivototal.pdf: 3577415 bytes, checksum: 0e9d2a60e77718e50720d15b7cad6fb1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In recent decades fungal infections have increased, and their high rates of morbidity and mortality have brought them much attention. Immunocompromised patients are more susceptible to microorganism infections; in particular, fungal species of the genus Aspergillus spp. Among the current infectious filamentous fungi they have a rather high incidence. Antifungal treatments have been subjected to numerous studies, and the increasing number of resistant fungal species has been highlighted. Thus, we see the importance of seeking new, more effective, and less toxic therapeutic sources. The aim of this study was to evaluate the in vitro antifungal activity and structure activity relationships of coumarin compounds against Aspergillus species. For this the MIC of 24 coumarin compounds was determined and subsequent SAR studies were performed with computer software. 12 of the 24 tested coumarin derivatives have antifungal activity, with 5 has shown excelent activity. Thus two derivatives, 7-hydroxy-6-nitrocoumarin (Cou-UNO2), and 4-acetoxycoumarin (Cou-UMB16), with better MIC values were evaluated via inhibition of mycelial growth and conidial germination, and by mechanism of action testing. The products were evaluated in combination with antifungals standards. The results showed that 12 of the 24 tested coumarin derivatives have antifungal activity, with MIC values ranging from 1024-16μg/ml. SAR studies have showed that the presence of a short aliphatic chain, and/or electronegative groups like ring substituents are favorable for antifungal activity. The coumarin derivatives with better MIC values (16μg/ml); Cou-UNO2 and Cou-UMB16 were capable of inhibiting both the mycelial growth and conidial germination of Aspergillus spp. Their activity is on the structure of the fungal cell wall. Cou-NO2, in a sub-inhibitory concentration, enhanced the in vitro effects of azoles, and in combination with azoles (voriconazole and itraconazole) there was an additive effect. Cou-UMB16 in combination with azoles (voriconazole and itraconazole) had synergistic or additive effects depending on the strain used. Thus this study concludes that coumarin derivatives have antifungal activity against the species A. flavus and A. fumigatus. The coumarin Cou-UMB16 and Cou-UNO2 have able to inhibit the mycelial growth and conidio germination and that this activity is due to its action on the fungal cell wall and the presence of electronegative groups as substituents of the benzopyrone ring favors this activity. / As infecções fúngicas, nas últimas décadas, têm se destacado devido ao seu crescente aumento e suas elevadas taxas de morbidade e mortalidade. Pacientes imunocomprometidos são os que possuem maior susceptibilidade a estes micro-organismos. Dentre estas infecções fúngicas, as espécies pertencentes ao gênero Aspergillus spp. possuem alta incidência entre os fungos filamentosos. A terapêutica antifúngica tem sido alvo de numerosos estudos e nestes tem sido destacado o crescente aumento de espécies fúngicas resistentes. Dessa forma, destaca-se a importância da busca de novas fontes terapêuticas que se apresentem mais eficazes e com menos tóxicas ao hospedeiro. Assim o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica in vitro e relação estrutura atividade (SAR) dos compostos cumarínicos frente às espécies do gênero Aspergillus. Para tal foi determinada a CIM de 24 compostos cumarínicos e posteriormente realizado estudos SAR com softwares computacionais. Dos 24 compostos ensaiados, 12 demonstraram possuir atividade antifúngica e 5 obtiveram forte atividade antifúngica. Destes derivados cumarínicos com forte atividade antifúngica, dois merecem destaque, 7-hidroxi-6-nitrocumarina (Cou-UNO2) e 4-acetóxicumarina (Cou-UMB16), com melhores valores de CIM, foram avaliados via testes de inibição do crescimento micelial, germinação dos conídios e testes de determinação do mecanismo de ação. Por fim os produtos foram avaliados em combinação com antifúngicos padrões. Os resultados demonstraram que 12 derivados cumarínicos dos 24 ensaiados possuem atividade antifúngica, com valores de CIMs variando entre 1024-16μg/mL. A SAR demonstra que a adição de grupos eletronegativos, como substituintes do anel benzopirona, favorece a atividade antifúngica destes compostos. Os derivados cumarínicos com melhores CIM (16μg/mL), 7-hidroxi-6-nitrocumarina (Cou-UNO2) e 4-acetóxicumarina (Cou-UMB16) foram capazes de inibir o crescimento micelial e a germinação dos conídios de Aspergillus spp. E estes possuem ação sobre a estrutura da parede celular fúngica. Em uma concentração subinibitória, Cou-UNO2 potencializou a ação in vitro dos derivados azólicos e em combinação com os derivados azólicos (voriconazol e itraconazol) observou-se um efeito aditivo. Já Cou-UMB16 em combinação com os derivados azólicos (voriconazol e itraconazol) obteve um efeito sinérgico a aditivo, dependendo da linhagem utilizada. Logo este estudo conclui que os derivados cumarínicos possuem atividade antifúngica contra as espécies de A. flavus e A. fumigatus. As cumarinas Cou-UNO2 e Cou-UMB16 foram capazes de inibir o crescimento micelial e a germinação dos conídios e que esta atividade seja devido a sua ação sobre a parede celular fúngica. E que esta atividade é favorecida pela presença de moléculas eletronegativas no anel básico da cumarina (1,2-benzopirona).

Submitted by Adriele Dandara Levorato Vinche (adrielelevorato@yahoo.com.br) on 2018-03-13T14:11:39Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado Adriele Dandara Levorato Vinche.pdf: 2200417 bytes, checksum: 23e69a47a9fa5126001d659e0803e67a (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2018-03-13T18:45:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vinche_adl_dr_bot.pdf: 2200417 bytes, checksum: 23e69a47a9fa5126001d659e0803e67a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-13T18:45:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vinche_adl_dr_bot.pdf: 2200417 bytes, checksum: 23e69a47a9fa5126001d659e0803e67a (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A paracoccidioidomicose (PCM) é micose granulomatosa sistêmica causada por fungos termodimórficos do gênero Paracoccidioides. O presente estudo teve como objetivos avaliar a atividade da liriodenina, extraída de Annona macroprophyllata Donn. Sm, sobre isolados clínicos e cepas padrão de fungos do gênero Paracoccidioides e outras espécies que causam micoses sistêmicas e, através de um estudo-piloto realizado em modelo murino, avaliar a absorção da liriodenina e possíveis efeitos indesejáveis. A concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima (CFM) da liriodenina foram determinadas pelo método de microdiluição. As alterações celulares causadas pela liriodenina em P. brasiliensis / cepa padrão Pb18 foram avaliadas pela microscopia eletrônica de transmissão (MET) e de varredura (MEV). Em estudo-piloto, quatro camundongos isogênicos albinos, da linhagem BALB/c, foram utilizados para avaliar a absorção e os efeitos indesejáveis da liriodenina. Os animais, sem infecção, foram divididos em dois grupos: grupo 1, com dois camundongos que receberam a dose de 0,75 mg.kg-1 e grupo 2, com dois camundongos que receberam a dose de 1,50 mg.kg-1, em única tomada. Após seis e 12 horas após a administração, os animais foram sacrificados e amostras de sangue foram coletadas para a determinação dos níveis séricos. Os intestinos foram coletados para exame histológico. O teste de sensibilidade in vitro revelou que a liriodenina possui atividade sobre parte dos fungos do gênero Paracoccidioides, com valores de CIM entre 31,2 e 250 μg.mL-1 e sobre a cepa padrão de Histoplasma capsulatum (CIM de 1,95 μg.mL-1). No entanto, menor atividade foi observada em leveduras da maioria das espécies de Candida ensaiadas, com CIM de 125 a 250 μg.mL-1, e maior atividade sobre as cepas padrões de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii (CIM de 62,5 μg.mL-1), enquanto a cepa de Aspergillus fumigatus revelou-se resistente à maior concentração de liriodenina. Deve-se ressaltar a atividade da liriodenina sobre Candida krusei, que é intrinsecamente resistente ao fluconazol e, ao contrário, a ausência de atividade sobre Candida tropicalis. A liriodenina revelou ter atividade fungicida sobre todas as cepas padrão e isolados clínicos que foram inibidos in vitro. A MET revelou alterações citoplasmáticas e danos na parede celular de P.brasiliensis. O estudo-piloto revelou que, após 12 horas da administração da liriodenina, os animais que receberam a dose de 1,50 mg.kg-1 apresentavam gases intestinais e distensão abdominal, achados não observados nos que receberam 0,75 mg.kg-1. Os exames histológicos não evidenciaram alterações de intestino com nenhuma das doses empregadas. Níveis séricos de liriodenina foram detectados em ambos os grupos de animais. No entanto, os animais que receberam 0,75 mg.kg-1 de liriodenina apresentaram aumento da concentração com o passar do tempo, enquanto achado oposto foi observado nos que receberam 1,50 mg.kg-1. Os testes de sensibilidade in vitro indicaram que a liriodenina é uma alternativa promissora no tratamento de várias micoses sistêmicas. O estudo-piloto revelou que a liriodenina é absorvida após administração por gavagem, embora a dose de 1,50 mg.kg-1 tenha induzido alterações funcionais, caracterizadas por formação exagerada de gases e conseqüente distensão abdominal, que talvez possam explicar a diminuição de sua absorção. Os resultados do presente estudo estimulam a realização da avaliação da farmacocinética da liriodenina, de sua ação antifúngica em maior número de isolados de espécies de Candida spp, Cryptococcus spp, Histoplasma capsulatum e fungos do gênero Paracoccidioides e de sua eficácia em infecções experimentais em modelo murino. Por se tratar de composto antifúngico não pertencente às classes hoje utilizadas na terapia antifúngica, pode vir a contribuir com o tratamento de pacientes com infecções fúngicas resistentes. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic granulomatous mycosis caused by thermodymorphic fungi of the genus Paracoccidioides. The present study aimed to evaluate the activity of liriodenine, extracted from Annona macroprophyllata Donn. Sm on clinical isolates and standard strains of fungi of the genus Paracoccidioides and other species that cause systemic mycoses and, through a pilot study conducted in a murine model, to assess the absorption of liriodenine and possible undesirable effects. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (CFM) of liriodenine were determined by the microdilution method. Cellular alterations caused by liriodenin in P. brasiliensis / Pb18 standard strain were evaluated by transmission electron microscopy (SEM) and scanning electron microscopy (SEM). In a pilot study, four albino isogenic mice of the BALB / c strain were used to assess the absorption and undesirable effects of liriodenine. The animals, without infection, were divided into two groups: group 1, with two mice receiving the dose of 0.75 mg.kg-1 and group 2, with two mice receiving the dose of 1.50 mg.kg- 1 , in single outlet. After six and 12 hours after administration, the animals were sacrificed and blood samples were collected for the determination of serum levels. The intestines were collected for histological examination. The in vitro sensitivity test revealed that liriodenine has activity on part of fungi of the genus Paracoccidioides, with MIC values between 31.2 and 250 μg.mL-1 and on the standard Histoplasma capsulatum strain (MIC of 1.95 μg .mL-1 ). However, lower activity was observed in yeasts of most Candida species tested, with MIC of 125 to 250 μg.mL-1 , and greater activity on the standard strains of Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii (MIC of 62.5 μg. mL-1 ), while the strain of Aspergillus fumigatus was resistant to the highest concentration of liriodenine. The activity of liriodenine on Candida krusei, which is intrinsically resistant to fluconazole and, on the contrary, the absence of activity on Candida tropicalis should be emphasized. Liriodenin reveale over all standard strains and clinical isolates that were inhibited in vitro. MET showed cytoplasmic alterations and damage to P. brasiliensis cell wall. The pilot study revealed that animals receiving the 1.50 mg.kg-1 dose had no intestinal gas and abdominal distension 12 hours after administration of liriodenine, which were not observed in those receiving 0.75 mg.kg-1 . Histological examinations showed no intestinal changes at any of the doses used. Serum levels of liriodenine were detected in both groups of animals. However, animals receiving 0.75 mg.kg-1 liriodenine showed increased concentration over time, while the opposite finding was observed in those receiving 1.50 mg.kg-1 . In vitro sensitivity tests indicated that liriodenine is a promising alternative in the treatment of various systemic mycoses. The pilot study revealed that liriodenine is absorbed after administration by gavage, although the 1.50 mg.kg-1 dose induced functional alterations, characterized by exaggerated gas formation and consequent abdominal distension, which may explain the decrease of its absorption. The results of the present study stimulate the evaluation of the pharmacokinetics of liriodenine, its antifungal action in a greater number of isolates of Candida species, Cryptococcus spp, Histoplasma capsulatum and fungi of the genus Paracoccidioides and their efficacy in experimental infections in murine model. Because it is an antifungal compound that does not belong to the classes currently used in antifungal therapy, it may contribute to the treatment of patients with resistant fungal infections.

CNPQ / A produção e consumo de queijos finos especialmente queijo Azul e tipo Gorgonzola tem intensificado no Brasil. A natamicina é intencionalmente utilizada no processo industrial para este tipo de produto pelo seu potencial antifúngico. O uso da natamicina é permitido pela legislação brasileira na quantidade de até 5 mg/kg na casca, e não deve ser detectável a 2 mm de profundidade. No que se refere ao queijo tipo Gorgonzola são poucas as pesquisas direcionadas à determinação de natamicina, além de pouca fiscalização sobre seu uso e quase nenhuma análise sobre o perfil nutricional destes queijos. O objetivo deste estudo foi determinar a concentração, migração e declínio do teor de natamicina, assim como avaliar as características físicas de cor, físico-químicas e químicas além de avaliar o perfil de ácidos graxos do queijo Azul industrializado e tipo Gorgonzola comercializado na Região Sudoeste do Paraná e Oeste de Santa Catarina. Para isto, foram coletadas oito amostras de queijo tipo Gorgonzola de diferentes marcas em distintos municípios pertencentes a estas regiões, e na indústria foram coletadas amostras de queijo Azul ao longo da maturação. Na determinação de natamicina, foi utilizada espectrofotometria UV na terceira derivada na casca e internamente a cada 2 mm até a profundidade de 8 mm em queijo Azul e tipo Gorgonzola. Para a caracterização físico-química foram realizadas análises de umidade, cinzas, proteínas, lipídeos, carboidratos e valor calórico. Na avaliação química determinou-se o pH, atividade de água e concentração de sódio total. Para avaliação da cor utilizou-se o método instrumental CIELAB e o perfil de ácidos graxos foi determinado por cromatografia em fase gasosa. Do total de amostras de queijo avaliadas, os resultados da quantificação de natamicina mostraram que 50% das marcas apresentaram concentração na casca acima da quantidade preconizada pela legislação, enquanto que na massa do queijo 87,5% das marcas avaliadas ultrapassaram a concentração máxima de natamicina permitida. Em queijo Azul, houve declínio da natamicina ao longo da maturação, e a concentração de 1,5% do banho de imersão em natamicina foi ideal para que a partir dos 25 dias o queijo estivesse adequado para consumo. Por meio da caracterização físico-química de queijo tipo Gorgonzola foi possível observar que as marcas diferenciam-se sob a maioria dos aspectos, porém, ainda assim, todas tiveram valores baixos de umidade e altos percentuais de lipídeos e consequentemente elevado valor energético. Do perfil de ácidos graxos, foi possível constatar que majoritariamente, estes queijos são constituídos de ácidos graxos saturados (principalmente ácido Palmítico, ácido Esteárico e ácido Mirístico). Na maturação de queijo Azul houve redução da umidade, atividade de água, aumento do teor de sódio, cinzas e do pH. Na avaliação da cor observou-se que houve alterações com redução da luminosidade e aumento da predominância do verde sobre o amarelo. / The production and consumption of fine cheeses especially blue cheese and Gorgonzola type has stepped up in Brazil. Natamycin is intentionally used in the industrial process for this type of product for its antifungal potential. The use of natamycin is allowed by Brazilian legislation in the amount of up to 5 mg/kg in the bark, and should not be detectable at 2 mm depth. Regarding to the type cheese gorgonzola there are few researches directed to the determination of natamycin, besides the little supervision over its use and almost no analysis on the nutritional profile of these cheeses. The objective of this study was to determine the concentration, migration and decline of natamycin, as well as assess the physical characteristics of color, physical chemistry and chemistry in addition to assessing the fatty acids profile of blue cheese and Gorgonzola type sold in the southwest region of Paraná and west of Santa Catarina. For this, it was collected eight samples of cheese gorgonzola type of different brands in different municipalities belonging to these regions, and in industry were collected repetitions of blue cheese along the maturation. In the determination of natamycin, was used UV spectrophotometry in the third derived in the bark and internally to each 2 mm to a depth of 8 mm in blue cheese and Gorgonzola type. For the physico-chemical characterization were performed analyzes of moisture, ashes, proteins, lipids, carbohydrates and caloric value. In the chemical evaluation it was determined that the pH, water activity and concentration of sodium. For evaluation of the color we used the method CIELAB instrumental and the fatty acids profile was determined by gas chromatography. The total number of samples of cheese evaluated, the results of the quantification of natamycin showed that 50% of the brands showed, in the skin, concentration above of the quantity recommended by legislation, while the mass of the cheese 87.5% of registered evaluated exceeded the maximum concentration of natamycin allowed. In blue cheese, there was a decrease of natamycin along the maturation, and the concentration of 1.5% of the immersion bath in natamicyn was ideal for that from the 25 days the cheese was suitable for consumption. Through the physico-chemical characterization of cheese gorgonzola type it was possible to observe that the brands differ in most aspects, however, still, all had low levels of moisture and high percentages of lipids and consequently high energy value. From the fatty acids profile, it was established that mostly, these cheeses are made up of saturated fatty acids (mainly Palmitic acid, stearic acid and myristic acid). In the maturation of blue cheese, there was a reduction of moisture and the water activity, increased sodium content, ash and pH. In the evaluation of the color, it was observed that there have been changes with reduction of brightness and increased prevalence of green on the yellow.

O desenvolvimento de fungos em alimentos e a possibilidade de produção de micotoxinas por estes fungos constituem um problema de saúde pública. Restringir a contaminação fúngica dos alimentos e matérias-primas é uma das etapas de maior importância para garantir a segurança alimentar. Uma alternativa para prevenir o desenvolvimento fúngico é a utilização de ácidos orgânicos. Estes compostos possuem ação antimicrobiana, reduzem o pH dos alimentos e o pH intracelular do microrganismo. O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de ácidos orgânicos e suas combinações contra Aspergillus flavus aflatoxigênico e posteriormente, avaliar o efeito da adição da combinação de ácidos orgânicos na estabilidade de rações peletizadas com melaço externo. Os ácidos orgânicos e sal isolados (ácido acético (AA), lático (AL), propiônico (AP) e sorbato de potássio (SP) e combinados (AA+AP, AA+SP, AL+SP, AA+AL, AL+AP e AP+SP) foram testadas in vitro para a inibição de 104 esporos. mL-1 de A. flavus NRRL 3251. Um total de 7 tratamentos, sendo: (T1: Controle sem ácido, T2: AP comercial, T3: AP1 0,025%, T4: AP2 0,1%, T5: AP+AC 0,025+0,25%, T6: AP+SP 0,025+0,25% e T7: AP+AL 0,1+0,4%) foram aplicados em ração peletizada com melaço externo e a estabilidade da ração avaliada por um período de 60 dias de armazenamento. A determinação de contagem de bolores e leveduras, umidade, pH, atividade de água e acidez foram realizadas após 1, 7, 14, 30, 45 e 60 dias. Entre os compostos avaliados individualmente, o ácido propiônico (AP) foi o mais eficiente em inibir A. flavus (CIM = 26,99 mM), seguido do ácido acético (AA) (83,26 mM) e sorbato de potássio (SP) (133,13 mM). Entre as combinações, os melhores resultados de CIM foram de AA (41,63 mM) + AP (3,37 mM), AA (4,16 mM) + SP (6,65 mM) e AP (3,37 mM) + SP (16,64 mM), demonstrando o melhor desempenho dos compostos para inibir A. flavus quando combinados. Não foi possível determinar a estabilidade das rações peletizadas com melaço externo, em decorrência da baixa atividade de água da amostra e das condições de armazenamento, estando em níveis inferiores aos necessários para o desenvolvimento de fungos deteriorantes (Aa > 0,80). Os fatores intrínsecos relacionados ao produto e os extrínsecos relacionados ao ambiente deverão ser levados em consideração para que se possa avaliar a possível efetividade dos ácidos orgânicos como antifúngicos em rações armazenadas, garantindo a segurança e qualidade do produto até o momento do consumo. / The development of molds in food and the possibility of mycotoxins production by these fungi has become a public health problem. Restricting fungal contamination of food and feedstock is one of the most important steps to ensure food safety. A way to prevent the fungal growth is the use of organic acids. These compounds have antimicrobial activity, they reduce the food pH and the intracellular pH of the microorganism. The aim of this paper was to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the organic acids and its combinations against the aflatoxigenic Aspergillus flavus and therefore, evaluate the effect of the addition of organic acids combination on the stability of animal feed pelleting with external molasses. Organic acids and salt isolated: acetic acid (AA), lactic acid (LA), propionic acid (PA) and potassium sorbate (PS) and the combined ones (AA+PA, AA+PS, LA+PS, AA+LA, LA+PA and PA+PS) were tested in vitro for the inhibition of 104 spores. mL-1 of A. flavus NRRL 3251. Seven treatments, (T1: Acid Control, T2: Comercial PA, T3: PA1 0,025%, T4: PA2 0,1%, T5: PA+CA 0,025+0,25%, T6: PA+PS 0,025+0,25% and T7: PA+LA 0,1+0,4%) were applied in animal feed pelleting with external molasses and the stability of the animal feed was evaluated for a period of 60 days of storage. The analyses of yeasts and molds count, moisture, pH, water activity and acidity were performed after 1, 7, 14, 30, 45 and 60 days. Among the compounds evaluated individually, propionic acid (PA) was the most efficient in inhibiting A. flavus (MIC = 26,99 mM), followed by acetic acid (AA) (83,26 mM) and potassium sorbate (PS) (133,13 mM). Among the combinations, the best MIC results were AA (41,63 mM) + PA (3,37 mM), AA (4,16 mM) + PS (6,65 mM) and PA (3,37 mM) + PS (16,64 mM), showing the best performance of the compounds to inhibit A. flavus when they are combined. It was not possible to determine the stability of animal feed pelleting with external molasses, due to the low water activity of the sample and the storage conditions, being in lower levels than those that are required for the fungal growth deteriorating (Aw > 0,80). Intrinsic factors related to the product and the extrinsic factors related to the environment should be considered in order to evaluate the potential effectiveness of the organic acids as antifungals in stored animal feed, ensuring the safety and quality of the product until the moment of consumption.

Neste trabalho, objetivou-se avaliar as propriedades físicas e microbiológicas de resinas acrílicas a base de polimetilmetacrilato após a incorporação de sal de diacetato de clorexidina (CDA) às mesmas. Para tal, foram confeccionados corpos de prova (CDPs) com as resinas VIPI COR e Duralay, sem e com incorporação de 0,5%; 1,0% e 2,0% de CDA, totalizando 8 grupos. A cromatografia líquida foi utilizada para mensurar a liberação de CDA pelas resinas acrílicas, e ainda, mensurar sua lixiviação de monômeros residuais.Para isso, os CDPs foram armazenados individualmente em placas para cultura celular de 24 poços contendo 1 ml de água destilada estéril em cada poço. Após tempo de armazenagem de 2 horas, 7 dias, 14 dias, 21 dias e 28 dias, a 37oC, a solução foi retirada e a liberação de clorexidina ou monômeros residuais foi avaliada utilizando-se HPLC associado a espectrometria ultravioleta. A atividade antifúngica para C. albicans foi avaliada utilizando teste de difusão em ágar, no qual os CDPs foram colocados em placas de BHI previamente inoculadas com C. albicans, com medição do halo de inibição após 48 horas de incubação a 37C. A análise do grau de conversão das resinas se deu através da técnica de espectroscopia de infravermelho transformada de Fourier FTIR utilizando-se uma amostra de resina não polimerizada de cada grupo e realizados 4 scans de absorbância. Para a mensuração da sorção de água por parte das resinas contendo CDA, foram confeccionados 10 corpos de prova para cada grupo, que foram posicionados em suporte dentro de dessecador a 37C para remoção de umidade intrínseca (m1) e depois imersos em 100 ml de água deionizada por 7 dias a 37C, tendo a água trocada diariamente. Após este intervalo, os corpos foram secos para obter a nova massa da resina (m2). As massas obtidas foram incluídas em fórmula matemática para obtenção do grau de sorção. Após obtenção dos resultados, quando comparou-se o halo inibição entre os grupos testados e de mesma marca, apenas as análises entre grupo CDA 2% x grupo CDA 1% e entre CDA 1% x CDA 0,5% não apresentaram diferenças significantes. Quanto a liberação de CDA, a análise de variância demonstrou que dois dos três fatores avaliados (concentração do fármaco e tempo de armazenagem) alteram de maneira significativa a taxa de liberação da clorexidina (p<0,0001), entretanto a marca do material pareceu não influenciar de maneira significativa na liberação do fármaco. Quanto ao grau de conversão, os valores obtidos não foram significantes e apresentou-se menor apenas nos grupos com CDA 2% . Para ambas a sorção de água aumentou conforme a incorporação do sal cresceu e houve aumento significativo nas concentrações de 1.0% e 2.0%. Podemos concluir que a incorporação da clorexidina às resinas a base de PMMA: é capaz de inibir o crescimento de C. albicans; não alterou o grau de conversão das resinas testadas; não altera a liberação de monômeros residuais; e, altera a sorção de água das resinas acrílicas a base de PMMA quando concentrações maiores de CDA são adicionadas. / This work aimed to evaluate physical and microbiological properties of PMMA acrylic resins after incorporating chlorhexidine diacetate salt (CDA) to them . For that, specimens ( CDPs ) were made with resins VIPI COR and Duralay , with and without incorporation of 0.5 % , 1.0 % and 2.0 % of CDA , totaling 8 groups . The liquid chromatography was used to measure the release of CDA by acrylic resins , and also to measure leaching of residual monomers . For that, CDPs were stored individually in cell culture plates to 24 well containing 1 ml of sterile distilled water in each well. Storage time after 2 hours , 7 days, 14 days, 21 days and 28 days at 37 C , the solution was removed and release of residual monomers or chlorhexidine was evaluated by using ultraviolet spectrometry combined with HPLC. The antifungal activity to C. albicans was evaluated using the agar diffusion method , in which the CDPs were placed on BHI plates inoculated with C. albicans with measuring the zone of inhibition after 48 hours incubation at 37 C. The analysis of the resins conversion degree is given by infrared spectroscopy Fourier transform - FTIR using an uncured resin sample in each group and 4 scans performed absorbance . For the measurement of resins containing CDA s water sorption, 10 specimens were prepared for each group , which were placed in support within desiccator 37 C to remove intrinsic ( m1 ) and then immersed moisture in 100 ml deionized water for 7 days at 37 C , and the water was changed daily. After this interval , the specimens were dried to obtain the new resins weight ( m2 ) . The masses obtained were included in the mathematical formula for the degree of sorption. After obtaining results, when compared the inhibition halo between the tested groups and the same brand , only the analyzes between group CDA2 % x CDA 1 % group and from CDA 1 % x CDA0.5 %,showed no significant differences . About the release of CDA , analysis of variance showed that two of the three factors assessed ( drug concentration and storage time ) significantly change the rate of release of chlorhexidine ( p < 0.0001 ) , however the material mark seemed not significantly influence the drug release . About the conversion degree , the values were not significant and were minor only in groups with CDA 2 % . For both water sorption increased with the incorporation of salt grew and there was significant increase in concentrations of 1.0 % and 2.0 % . We conclude that the incorporation of chlorhexidine to the PMMA based resin : is able to inhibit the growth of C. Albicans ; did not alter the degree of conversion of the resins tested , does not alter the release of residual monomers , and changes the water sorption of the base PMMA acrylic resins when CDA concentrations are incorporated.

Resinas macias para reembasamento de próteses são largamente utilizadas após cirurgias para estabilizarem a prótese e condicionarem o tecido, aguardando a completa cicatrização. É importante que o material não seja facilmente colonizado por biofilme oral e se possível, evite a contaminação do sítio cirúrgico. Objetivou-se avaliar o efeito da incorporação de clorexidina às resinas acrílicas macias para o reembasamento de próteses totais, através de análises de liberação, citotoxicidade e efeito inibitório de um biofilme de C. albicans. Foram confeccionados corpos de provas (CDPs) com as resinas Trusoft e Coe-soft, com incorporação de 0%, 0,5%, 1,0% e 2,0% de clorexidina, totalizando 8 grupos. A liberação de clorexidina foi avaliada através da mensuração da mudança na densidade óptica da solução de armazenamento, na qual ficaram imersos os CDPs, por espectrometria UV, a cada 48 horas, durante 40 dias. A citotoxicidade celular foi avaliada em fibroblastos (linhagem L929), que ficaram 24 horas em contato com meio de cultura no qual os CDPs ficaram previamente imersos, pela técnica de absorção de corante vermelho neutro após 24, 48 e 72 horas e semanalmente até o 28 dia. E, por fim, a atividade antifúngica contra a C. albicans (ATCC 10231) foi avaliada de duas maneiras: (1) teste de difusão em ágar, no qual os CDPs foram colocados em placas de BHI previamente inoculadas com C. albicans, com medição do halo de inibição após 48 horas de incubação a 37C; (2) a avaliação da inibição da formação de um biofilme de C. albicans sobre a superfície dos CDPs pela quantificação por metil tetrazólio (MTT) a cada 48 horas, durante 22 dias, com leitura feita em espectrofotômetro de UV. Os dados obtidos foram inseridos no programa SigmaStat (versão 3.1, USA) para realizar as análises estatísticas. As diferenças estatísticas foram determinadas por análises de variâncias do tipo ANOVA e todos os procedimentos para comparações múltiplas pareadas foram feitos utilizando-se o método Holm-Sidak, com nível de significância global igual a 0,05. A clorexidina adicionada às resinas testadas foi capaz de ser liberada para o meio de armazenagem, proporcionalmente à quantidade de clorexidina incorporada, porém com diferentes cinéticas de liberação entre as resinas, visto que a Trusoft libera até 71% do total de clorexidina liberada nas primeiras 48 horas e a Coe-soft, até 44%. Ambas as resinas com incorporação de clorexidina apresentaram efeito citotóxico adicional, se comparadas às resinas sem clorexidina, porém para a Coe-soft não houve diferença estatística dos valores, apenas para a Trusoft (p<0,001). Ocorreu formação de halo de inibição proporcionalmente às concentrações de resinas adicionadas, com maiores halos para a resina Trusoft (p<0,001), e sem formação de halo para as resinas sem clorexidina; a inibição da formação de biofilme, realizada somente com a resina Coe-soft, mostrou total inibição durante 8, 12 e 16 dias, para a incorporação de 0,5%, 1,0% e 2,0% respectivamente, sendo uma diminuição estatisticamente significativa (p<0,001) em relação à resina sem incorporação de clorexidina, que não apresentou inibição do biofilme. / Denture soft lining materials are widely used after dental surgeries, tissue conditioning and stabilization of prostheses, until the complete tissue healing. It is important that this material not became easily colonized by oral biofilm and if possible, avoid contamination of the surgical site. The aim of this study was to evaluate the effect of chlorhexidine incorporation into resin-based soft denture lining material, considering the drug release analysis, cytotoxicity and C. albicans biofilm inhibition. Specimens were done using Trusoft and Coe-soft, incorporating 0%, 0.5%, 1.0% and 2.0% of chlorhexidine, totaling eight groups. The chlorhexidine release was evaluated through the measurement of change in optical density of the storage solution, which the specimens were immersed, by UV spectrometry, after every 48 hours for 40 days. The cellular cytotoxicity was evaluated in fibroblasts (strain L929), which were 24 hours in contact with culture medium, in which the specimens were previously immersed, the technique of neutral red dye uptake was used after 24, 48 and 72 hours and weekly until 28th day. Finally, the antifungal activity against C. albicans (ATCC 10231) was evaluated by two different ways: (1) agar diffusion test, in which the specimens were placed over the top of BHI agar plates previously inoculated with C. albicans, and the measurement of inhibition zone was done after 48h of incubation at 37C, (2) C. albicans biofilm inhibition over the specimens surface, which was mensured after every each 48 hours of biofilm and specimens co-incubation, by methyl tetrazolium (MTT), in UV/vis spectrophotometer, during 22 days. Data were analyzed with the SigmaStat software (version 3.1, USA). Statistical differences were determined by analysis of variance ANOVA and all procedures for multiple paired comparisons were made using the Holm-Sidak method, with overall significance level of 0.05. The chlorhexidine added to both resins, Trusoft and Coe-soft, can be released to the storage medium, with a dose-related effect, however the resins presented different release kinetics, since the Trusof released up to 71% of the total amount of the chlorhexidine released within the first 48 hours and Coe-soft release only up to 44%, considering the citotoxic effect, both chlorhexidine incorporated resins showed some extra cytotoxic effect, if compared to resins without chlorhexidine, but for Coe-soft no statistical difference of values was founded, only for Trusoft (p<0.001); considering the C. albicans inhibition, the agar diffusion test values were dose-related for both resins, however with bigger inhibition zones for Trusoft (p<0.001), and without any inhibition for the resins without clorexidine. For the C. albicans biofilm inhibition test, performed only with Coe-soft resin, it was verified a complete inhibition at 8, 12 and 16 days for the incorporation of 0.5%, 1.0% and 2.0% of clorexidine respectively, a statistically significant decrease (p<0.001) if compared to the resin without incorporation of chlorhexidine, which showed no inhibitory effect over the biofilm formation.

CNPQ / A produção e consumo de queijos finos especialmente queijo Azul e tipo Gorgonzola tem intensificado no Brasil. A natamicina é intencionalmente utilizada no processo industrial para este tipo de produto pelo seu potencial antifúngico. O uso da natamicina é permitido pela legislação brasileira na quantidade de até 5 mg/kg na casca, e não deve ser detectável a 2 mm de profundidade. No que se refere ao queijo tipo Gorgonzola são poucas as pesquisas direcionadas à determinação de natamicina, além de pouca fiscalização sobre seu uso e quase nenhuma análise sobre o perfil nutricional destes queijos. O objetivo deste estudo foi determinar a concentração, migração e declínio do teor de natamicina, assim como avaliar as características físicas de cor, físico-químicas e químicas além de avaliar o perfil de ácidos graxos do queijo Azul industrializado e tipo Gorgonzola comercializado na Região Sudoeste do Paraná e Oeste de Santa Catarina. Para isto, foram coletadas oito amostras de queijo tipo Gorgonzola de diferentes marcas em distintos municípios pertencentes a estas regiões, e na indústria foram coletadas amostras de queijo Azul ao longo da maturação. Na determinação de natamicina, foi utilizada espectrofotometria UV na terceira derivada na casca e internamente a cada 2 mm até a profundidade de 8 mm em queijo Azul e tipo Gorgonzola. Para a caracterização físico-química foram realizadas análises de umidade, cinzas, proteínas, lipídeos, carboidratos e valor calórico. Na avaliação química determinou-se o pH, atividade de água e concentração de sódio total. Para avaliação da cor utilizou-se o método instrumental CIELAB e o perfil de ácidos graxos foi determinado por cromatografia em fase gasosa. Do total de amostras de queijo avaliadas, os resultados da quantificação de natamicina mostraram que 50% das marcas apresentaram concentração na casca acima da quantidade preconizada pela legislação, enquanto que na massa do queijo 87,5% das marcas avaliadas ultrapassaram a concentração máxima de natamicina permitida. Em queijo Azul, houve declínio da natamicina ao longo da maturação, e a concentração de 1,5% do banho de imersão em natamicina foi ideal para que a partir dos 25 dias o queijo estivesse adequado para consumo. Por meio da caracterização físico-química de queijo tipo Gorgonzola foi possível observar que as marcas diferenciam-se sob a maioria dos aspectos, porém, ainda assim, todas tiveram valores baixos de umidade e altos percentuais de lipídeos e consequentemente elevado valor energético. Do perfil de ácidos graxos, foi possível constatar que majoritariamente, estes queijos são constituídos de ácidos graxos saturados (principalmente ácido Palmítico, ácido Esteárico e ácido Mirístico). Na maturação de queijo Azul houve redução da umidade, atividade de água, aumento do teor de sódio, cinzas e do pH. Na avaliação da cor observou-se que houve alterações com redução da luminosidade e aumento da predominância do verde sobre o amarelo. / The production and consumption of fine cheeses especially blue cheese and Gorgonzola type has stepped up in Brazil. Natamycin is intentionally used in the industrial process for this type of product for its antifungal potential. The use of natamycin is allowed by Brazilian legislation in the amount of up to 5 mg/kg in the bark, and should not be detectable at 2 mm depth. Regarding to the type cheese gorgonzola there are few researches directed to the determination of natamycin, besides the little supervision over its use and almost no analysis on the nutritional profile of these cheeses. The objective of this study was to determine the concentration, migration and decline of natamycin, as well as assess the physical characteristics of color, physical chemistry and chemistry in addition to assessing the fatty acids profile of blue cheese and Gorgonzola type sold in the southwest region of Paraná and west of Santa Catarina. For this, it was collected eight samples of cheese gorgonzola type of different brands in different municipalities belonging to these regions, and in industry were collected repetitions of blue cheese along the maturation. In the determination of natamycin, was used UV spectrophotometry in the third derived in the bark and internally to each 2 mm to a depth of 8 mm in blue cheese and Gorgonzola type. For the physico-chemical characterization were performed analyzes of moisture, ashes, proteins, lipids, carbohydrates and caloric value. In the chemical evaluation it was determined that the pH, water activity and concentration of sodium. For evaluation of the color we used the method CIELAB instrumental and the fatty acids profile was determined by gas chromatography. The total number of samples of cheese evaluated, the results of the quantification of natamycin showed that 50% of the brands showed, in the skin, concentration above of the quantity recommended by legislation, while the mass of the cheese 87.5% of registered evaluated exceeded the maximum concentration of natamycin allowed. In blue cheese, there was a decrease of natamycin along the maturation, and the concentration of 1.5% of the immersion bath in natamicyn was ideal for that from the 25 days the cheese was suitable for consumption. Through the physico-chemical characterization of cheese gorgonzola type it was possible to observe that the brands differ in most aspects, however, still, all had low levels of moisture and high percentages of lipids and consequently high energy value. From the fatty acids profile, it was established that mostly, these cheeses are made up of saturated fatty acids (mainly Palmitic acid, stearic acid and myristic acid). In the maturation of blue cheese, there was a reduction of moisture and the water activity, increased sodium content, ash and pH. In the evaluation of the color, it was observed that there have been changes with reduction of brightness and increased prevalence of green on the yellow.

O desenvolvimento de fungos em alimentos e a possibilidade de produção de micotoxinas por estes fungos constituem um problema de saúde pública. Restringir a contaminação fúngica dos alimentos e matérias-primas é uma das etapas de maior importância para garantir a segurança alimentar. Uma alternativa para prevenir o desenvolvimento fúngico é a utilização de ácidos orgânicos. Estes compostos possuem ação antimicrobiana, reduzem o pH dos alimentos e o pH intracelular do microrganismo. O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de ácidos orgânicos e suas combinações contra Aspergillus flavus aflatoxigênico e posteriormente, avaliar o efeito da adição da combinação de ácidos orgânicos na estabilidade de rações peletizadas com melaço externo. Os ácidos orgânicos e sal isolados (ácido acético (AA), lático (AL), propiônico (AP) e sorbato de potássio (SP) e combinados (AA+AP, AA+SP, AL+SP, AA+AL, AL+AP e AP+SP) foram testadas in vitro para a inibição de 104 esporos. mL-1 de A. flavus NRRL 3251. Um total de 7 tratamentos, sendo: (T1: Controle sem ácido, T2: AP comercial, T3: AP1 0,025%, T4: AP2 0,1%, T5: AP+AC 0,025+0,25%, T6: AP+SP 0,025+0,25% e T7: AP+AL 0,1+0,4%) foram aplicados em ração peletizada com melaço externo e a estabilidade da ração avaliada por um período de 60 dias de armazenamento. A determinação de contagem de bolores e leveduras, umidade, pH, atividade de água e acidez foram realizadas após 1, 7, 14, 30, 45 e 60 dias. Entre os compostos avaliados individualmente, o ácido propiônico (AP) foi o mais eficiente em inibir A. flavus (CIM = 26,99 mM), seguido do ácido acético (AA) (83,26 mM) e sorbato de potássio (SP) (133,13 mM). Entre as combinações, os melhores resultados de CIM foram de AA (41,63 mM) + AP (3,37 mM), AA (4,16 mM) + SP (6,65 mM) e AP (3,37 mM) + SP (16,64 mM), demonstrando o melhor desempenho dos compostos para inibir A. flavus quando combinados. Não foi possível determinar a estabilidade das rações peletizadas com melaço externo, em decorrência da baixa atividade de água da amostra e das condições de armazenamento, estando em níveis inferiores aos necessários para o desenvolvimento de fungos deteriorantes (Aa > 0,80). Os fatores intrínsecos relacionados ao produto e os extrínsecos relacionados ao ambiente deverão ser levados em consideração para que se possa avaliar a possível efetividade dos ácidos orgânicos como antifúngicos em rações armazenadas, garantindo a segurança e qualidade do produto até o momento do consumo. / The development of molds in food and the possibility of mycotoxins production by these fungi has become a public health problem. Restricting fungal contamination of food and feedstock is one of the most important steps to ensure food safety. A way to prevent the fungal growth is the use of organic acids. These compounds have antimicrobial activity, they reduce the food pH and the intracellular pH of the microorganism. The aim of this paper was to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the organic acids and its combinations against the aflatoxigenic Aspergillus flavus and therefore, evaluate the effect of the addition of organic acids combination on the stability of animal feed pelleting with external molasses. Organic acids and salt isolated: acetic acid (AA), lactic acid (LA), propionic acid (PA) and potassium sorbate (PS) and the combined ones (AA+PA, AA+PS, LA+PS, AA+LA, LA+PA and PA+PS) were tested in vitro for the inhibition of 104 spores. mL-1 of A. flavus NRRL 3251. Seven treatments, (T1: Acid Control, T2: Comercial PA, T3: PA1 0,025%, T4: PA2 0,1%, T5: PA+CA 0,025+0,25%, T6: PA+PS 0,025+0,25% and T7: PA+LA 0,1+0,4%) were applied in animal feed pelleting with external molasses and the stability of the animal feed was evaluated for a period of 60 days of storage. The analyses of yeasts and molds count, moisture, pH, water activity and acidity were performed after 1, 7, 14, 30, 45 and 60 days. Among the compounds evaluated individually, propionic acid (PA) was the most efficient in inhibiting A. flavus (MIC = 26,99 mM), followed by acetic acid (AA) (83,26 mM) and potassium sorbate (PS) (133,13 mM). Among the combinations, the best MIC results were AA (41,63 mM) + PA (3,37 mM), AA (4,16 mM) + PS (6,65 mM) and PA (3,37 mM) + PS (16,64 mM), showing the best performance of the compounds to inhibit A. flavus when they are combined. It was not possible to determine the stability of animal feed pelleting with external molasses, due to the low water activity of the sample and the storage conditions, being in lower levels than those that are required for the fungal growth deteriorating (Aw > 0,80). Intrinsic factors related to the product and the extrinsic factors related to the environment should be considered in order to evaluate the potential effectiveness of the organic acids as antifungals in stored animal feed, ensuring the safety and quality of the product until the moment of consumption.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 7083796 bytes, checksum: 2aa6f174655d082d78cc059fc1eef2e0 (MD5) Previous issue date: 2014-03-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Mucormycoses are infections that have high rates of morbidity and mortality. They show high resistance to antifungal agents, and there is a limited therapeutic arsenal currently available, therefore, there is a great need to give priority to testing therapeutic agents for the treatment of mucormycosis. Along this line, the use of essential oils and phytoconstituents has been emphasized as a new therapeutic approach. The objective of this work was to investigate the antifungal activity of the essential oil (EO) of Thymus vulgaris, and its constituents thymol and p-cymene against Rhizopus oryzae and Rhizopus microsporus, through microbiological screening, determination of minimal inhibitory concentration (MICs) and minimal fungicidal concentration (MFCs), effects on mycelial growth and germination of sporangiospores, fungal morphology and interaction with ergosterol. Also was evaluated the preclinical acute toxicity in mice. In microbiological screening the T. vulgaris essential oil showed antifungal potential against resistant strains of R. oryzae.The MIC of EO and thymol varied 128 512 μg/mL, but the MFC of EO and thymol varied 512 1024 μg/mL and 128 1024 μg/mL, respectively. The results also showed that EO and thymol significantly inhibited mycelial development and germination of sporangiospores of both species of Rhizopus. Investigation of the mechanism of antifungal action showed that EO and thymol interact with ergosterol. These data indicate that EO of T. vulgaris and thymol possess strong antifungal activity, which can be related to their interaction with ergosterol, supporting the possible use of these products in the treatment of mucormycosis. In preclinical acute toxicology the doses of 125, 250, 500 and 1000 mg/kg intraperitoneally (i.p.) showed depressive activity on the central nervous system (CNS). In addition to these parameters was observed that the doses of 125 and 250 mg/kg did not change the body and organs weight of the animals, but it was observed change some of the hematological parameters of the mice. The EO showed DL50 of 250 mg/kg for male and 459.6 mg/kg for female; however the thymol showed DL50 of 222.3 mg/kg for male and 1551 mg/kg for female. These data indicate that EO of T. vulgaris and thymol possess strong antifungal activity, which can be related to their interaction with ergosterol. / As mucormicoses são infecções que possuem elevadas taxas de morbidade e mortalidade, limitado arsenal terapêutico, devido a resistência aos antifúngicos. Portanto, existe uma significativa necessidade de priorizar, testar e aplicar melhorias terapêuticas para o tratamento das mucormicoses. É nesse contexto, que os óleos essenciais e fitoconstituintes vem se destacando como uma nova abordagem terapêutica. O objetivo deste trabalho foi investigar a atividade antifúngica in vitro do óleo essencial (OE) de Thymus vulgaris L. e de seus componentes majoritários (timol e p-cimeno) contra Rhizopus oryzae e Rhizopus microsporus, através da triagem microbiológica, da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e fungicida mínima (CFM), avaliação dos efeitos dos fitoconstituintes no crescimento micelial, na germinação dos esporos fúngicos, na morfologia fúngica e interação com ergosterol. Também foi avaliada a toxicidade pré-clínica aguda em camundongos. Na triagem microbiológica o óleo essencial de T. vulgaris apresentou um dos melhores perfis antifúngicos contra cepas resistentes de R. oryzae. A CIM dos produtos variou entre 128-512 μg/mL, já as CFMs do óleo essencial e timol variaram entre 512-1024 μg/mL e 128-1024 μg/mL, respectivamente. Os resultados também mostraram que tanto o OE como o timol inibiram significativamente o desenvolvimento micelial e a germinação de esporos de ambas as espécies de Rhizopus. Em seguida foi mostrado que os produtos testados alteram a morfologia de R. oryzae e R. microsporus. Na investigação do mecanismo de ação antifúngica foi evidenciado que o OE e o timol interagem com o ergosterol, esterol presente na membrana dos fungos. No ensaio toxicológico pré-clínica agudo, as doses de 125, 250, 500 e 1000 mg/kg via intraperitoneal (i.p.) apresentaram atividade depressora do sistema nervoso central (SNC). Adicionalmente a estes parâmetros foi evidenciado que o OE e o timol nas doses de 125 e 250 mg/kg não promoveram alterações significativas na evolução ponderal e peso dos órgãos dos camundongos. Entretanto, ambas as doses das drogas-teste alteram alguns parâmetros hematológicos dos camundongos. Após 72 h de observação o OE apresentou DL50 estimada em 250 mg/kg para camundongos machos e 459,6 mg/kg para as fêmeas. Já o timol apresentou DL50 estimada em 222,3 mg/kg para os machos e 1551 mg/kg para as fêmeas. Estes dados indicam que o óleo essencial de T. vulgaris e timol, apresentam forte atividade antifúngica, que pode estar relacionada com a interação com ergosterol e consequentemente lise de membrana.