O cetoconazol é um derivado imidazólico com atividade antifúngica, empregado no tratamento de grande variedade de infecções cutâneas. O objetivo deste trabalho foi a padronização e a validação dos métodos analíticos empregando-se a espectrofotometria no ultravioleta ( UV ) por derivada de primeira ordem e a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para a determinação do cetoconazol em formulações farmacêuticas sob a forma de creme obtidas no comércio e formuladas em laboratório. O estudo da estabilidade física das formulações obtidas em laboratório foi realizado após o armazenamento sob diferentes condições de tempo, temperatura e umidade. O método espectrofotométrico no UV por derivada de primeira ordem foi padronizado a 257nm , no intervalo de concentração de 5,0 a 30,0 µg/mL em metanol. O coeficiente de correlação linear foi de 0,9997, o percentual de recuperação foi de 100,24%. A média do desvio padrão relativo foi de 0,56% para a amostra simulada e 0,41% para a amostra comercial. A determinação de cetoconazol por CLAE foi realizada empregando-se uma coluna LiChrospher® 100 RP- 18 ( 5µm ) e fase móvel constituída por uma mistura de trietilamina em metanol( 1:500 ) e solução de acetato de amônio em água (1:200 ) na proporção de 75 : 25 v/v, com vazão de 1,0 mL/min e detecção no UV a 225 nm. O terconazol foi utilizado como padrão interno. O coeficiente de correlação linear foi de 0,9981, o percentual de recuperação foi de 100,88%, a média do desvio padrão foi de 2,13% para a amostra simulada e 1,25% para a amostra comercial. A amostra simulada apresentou comportamento pseudoplástico e tixotropia em decorrência das medidas reológicas obtidas experimentalmente. / Ketoconazole is an imidazole antifungal agent used in the treatment of great variety of skin infectious diseases. The aim of this research was the standardization and the validation of two analytical methods, first derivative ultraviolet ( UV ) spectrophotometry and high performance liquid chromatography( HPLC ) to determine ketoconazole in commercial and simulated cream dosage forms preparations. The validated methods were used to study the stability of the simulated cream after storage under high temperatures and high percentage of humidity. First derivative UV spectrophotometry was standardized at 257 nm, in a range of concentration from 5.0 to 30.0 µg/mL in methanol. The coefficient of correlation was 0.9997 and the recovery average was 100.24%. The average relative standard deviation ( RSD ) was 0.56% for simulated preparation and 0.41 % for commercial preparation. The determination of ketoconazole by HPLC was performed using a LiChrospher® 100 RP-18(5µm ) column, a mobile phase consisting of triethylamine in methanol (1:500) and ammonium acetate solution in water(1:200 ) 75:25 ( v/v ), a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 225nm. Terconazole was used as internal standard. The coefficient of correlation was 0.9981, the recovery average was 100.88%, the average relative standard deviation ( RSD ) was 2.13% for the simulated preparations and 1.25% for the commercial preparations. The rheological measurements showed that the simulated preparation presented pseudoplastic and thixotropic behavior.

INTRODUÇÃO: Embora a lista dos microrganismos envolvidos em fungemias esteja em expansão, as espécies de Candida permanecem como os principais agentes etiológicos, causando morbidade e mortalidade significativas. A introdução de novos antifúngicos na prática clínica tem reforçado a necessidade de estudos que monitorem mudanças na epidemiologia e no perfil de sensibilidade de Candida spp. a nível local e global. OBJETIVO: Avaliar a prevalência e incidência de candidemia no HC-FMUSP durante o ano de 2006 e determinar o perfil de suscetibilidade das espécies isoladas. MÉTODOS: Foi realizado um estudo retrospectivo no qual os pacientes identificados foram caracterizados de acordo com variáveis clinicas disponíveis nos sistemas laboratoriais. A concentração inibitória mínima (MIC) foi determinada pelo método de microdiluição Sensititre YeastOne Ò, considerado como referência, além do Etest Ò. As seguintes drogas foram avaliadas: anfotericina B (AMB), caspofungina (CAS), fluconazol (FLU), itraconazol (ITR), voriconazol (VOR) e posaconazol (POS). O método de disco difusão (DD) também foi utilizado para FLU e VOR. Os resultados obtidos pelas três metodologias foram comparados entre si. RESULTADOS: A prevalência de Candida em hemocultura foi de 3,5%. Foram identificados 136 casos de candidemia e a incidência global foi de 1,87 casos/1.000 admissões hospitalares e 0,27 casos por 1.000 pacientes dia. A mediana de idade foi de 40 anos e 58,1% dos pacientes eram homens. Neoplasia foi a doença de base mais frequente. Na distribuição das espécies, C. albicans foi a espécie mais isolada (52,2%), seguida por C. parapsilosis (22,1%), C. tropicalis (14,8%) e C. glabrata (6,6%). O perfil de sensibilidade foi determinado em 100 cepas de Candida. Destas, 100% mostraram-se suscetíveis a AMB e CAS; 98 % ao VOR; 91%, ao FLU e 66% ao ITR. Para o POS, MIC90 foi de 0,25 µg/mL. O percentual de concordância essencial (CE) e concordância categórica (CC) entre o teste de referência e o Etest Ò foi > 93%, exceto para o itraconazol (CE 80%, CC 70%). O percentual de CC para o fluconazol e voriconazol pelo DD versus Sensititre Ò e Etest Ò foi, respectivamente: FLU 94%, 95% e VOR 96%, 98%. CONCLUSÃO: A prevalência a incidência de candidemia encontrada e a distribuição das espécies concordaram com outros dados nacionais. Observou-se uma boa atividade in vitro da maioria das drogas para Candida spp., exceto itraconazol. Houve uma boa concordância essencial entre os métodos utilizados, exceto também para itraconazol. As discordâncias de categoria observadas entre os métodos resultaram em erros menores na maior parte dos casos / INTRODUCTION: Although the spectrum of fungi causing bloodstream infections continues to expand, Candida species remain responsible for the majority of cases, causing significant morbidity and mortality. The introduction of new antifungal agents in the clinical practice has increased the need for new studies for monitoring changes in the epidemiology and susceptibility profiles of candidemia at a local and global level. PURPOSE: To determine the prevalence and incidence of candidemia, species distribution and antifungal susceptibility patterns at large Brazilian tertiary public hospital during 2006. METHODS: Data were collected retrospectively. Patients were evaluated for selected variables. The minimal inhibitory concentrations (MIC) were determined using Sensititre YeastOne Ò, considered the reference method, and Etest Ò. The following drugs were tested: amphotericin B (AMB); caspofungin (CAS); and posaconazole (POS),fluconazole (FLU) and voriconazole (VOR). The disk diffusion method was also employed for FLU and VOR. MIC results obtained by Etest Ò, Sensititre YeastOne Ò and disk diffusion were compared. RESULTS: The prevalence of Candida spp. from blood cultures was 3,5%. One hundred and thirty-six cases of candidemia were identified. The overall incidence of candidemia was 1,87 cases per 1.000 admissions and 0,27 cases per 1.000 patient-days. 58.1% patients were male and the median age was 40 years. Cancer was the most frequent underlying disease. C. albicans was the most commonly identified species (52,2%), followed by C. parapsilosis (22,1%), C. tropicalis (14,8%) and C. glabrata (6,6%). The susceptibility profile of 100 Candida spp. isolates was: 100% to AMB B and CAS; 98 % to voriconazole; 91% to fluconazole; and 66% itraconazole. For posaconazole MIC90 was 0,25 µg/mL. The percentage of essential agreement (EA) and categorical agreement (CA) between the reference and test methods was > 93%, except for itraconazole (EA 80%, CA 70%). The (CA) between Sensititre YeastOne Ò versus disk diffusion and Etest Ò versus disk diffusion were respectively: FLU (94%) (95%) and VOR (96%) (98%). Minor errors accounted for the majority of all categorical errors. CONCLUSION: The prevalence and incidence of candidemia found in this study were in agreement with previous national reports. There was a good in vitro activity for most drugs tested against Candida spp. except for itraconazole. A good EA was demonstrated between methods except again for itraconazole. Minor errors accounted for the majority of all categorical errors for between methods.

O uso de plantas na cura de enfermidades tem sido objeto de muitos estudos e desde épocas remotas está ligado ao desenvolvimento cultural de civilizações. Estudos anteriores em espécies de Myristicaceae descrevem a ocorrência da classe de lignóides como principal metabólito secundário. Variedades de estruturas químicas e de atividades biológicas são atribuídas aos lignóides. Estes metabólitos encontram-se acumulados em todas as partes da planta, principalmente nos frutos, onde os compostos predominantes são neolignanas. O presente trabalho foi realizado com Virola molissima que se encontra dispersa na Reserva Adolpho Ducke, situada nas proximidades de Manaus-AM. Os frutos foram coletados durante o mês de novembro, estação de seca na região. Não existe registro de estudo fitoquímico desta espécie. A partir de extratos de pericarpos, arilos, tegumentos e amêndoas dos frutos da Virola molissima foram isoladas por fracionamento cromatográfico as neolignanas tetrahidrofurânica, ariltetralônica e diarilbutânica. As neolignanas isoladas foram identificadas por comparação de seus dados de Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio e de Carbono Treze, com aqueles descritos na literatura. A atividade antifúngica da neolignana ariltetralônica, pura ou em mistura, foi testada contra basidiomicetos Pycnoporus sanguineus, Trametes villosa e Lenzites trabeas. Estes fungos são xilófagos e causam o apodrecimento da madeira. / The use of plants in the treatment of diseases has been object of many studies, and since remote ages, the issue is linked to the cultural development of civilizations. Previous studies on Myristicaceous species described the occurrence of lignoids as its main secondary metabolites, which are known by varieties of chemical structures and biological activities. These lignoids are accumulated in all parts of the plant, mainly in the fruits, where the major constituent are neolignans. Present work was carried out on Virola molissima dispersed in Adolpho Ducke Reserve, located around Manaus, Amazon State, Brazil. Its fruits were collected during November, a month of dry season in this region. This species has not been phytochemically studied. Tetrahydrofuran, aryltetralone and dibenzylbutane neolignans were isolated from the extracts of pericarps, arils, seed coats and seeds of V. molissima fruits, by chromatographic fractionations. The structures of the isolated neolignans were elucidated through a Nuclear comparison between Magnetic Resonance of 1Hidrogen and 13Carbon data, and those described in the literature. The antifungal activity of the aryltetralone neolignan, pure or in mixture, was assayed against basidiomycetes Pycnoporus sanguineus, Trametes villosa and Lenzites trabeas. These fungi are xylophagus and they cause the decay of the wood.

Microrganismos endofíticos são definidos como organismos que habitam em pelo menos durante um período de seu ciclo vital, o interior de um vegetal, sem causar aparentemente nenhum dano a este. Na busca de novos organismos e novos metabólitos secundários, um estudo foi conduzido visando avaliar a diversidade química de bactérias endofíticas por meio do isolamento e identificação de metabólitos secundários produzido por bactérias endofíticas de etnovariedades de mandioca, mantidas por tribos indígenas da Amazônia brasileira. Sessenta e sete bactérias endofíticas de mandioca foram selecionadas e submetidas à uma seleção através de testes de antagonismo in vitro. A bactéria endofítica, Bacillus pumilus foi a que apresentou forte ação inibitória contra os fitopatógenos Rhizoctonia solani, Pythium e Sclerotium rolfsii. Essa bactéria foi identificada através do sequenciamento de um fragmento do gene de 16S rRNA e por meio da análise de ácidos graxos (FAME). A obtenção dos metabólitos da bactéria selecionada foi realizada através da extração dos meios de cultura com os solventes hexano, acetato de etila e diclorometano. Após a concentração dos extratos, seus constituintes químicos foram realizados através de cromatografia em camada delgada, cromatografia em coluna, cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas CG-EM) e cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro de massas (CL-EM). Os extratos obtidos por meio de diclorometano e acetato de etila continham diferentes componentes químicos que mostraram atividade inibitória contra os três fitopatógenos testados. O método cromatográfico CL-EM permitiu a identificação de uma substância antifúngica produzida pela bactéria endofítica, Bacillus pumilus, conhecida como pumilacidina. / Endophytic microorganisms are defined as organisms that inhabit the interior of a vegetable at least during a period of the vital cycle, without causing any apparent damage. In the search for new organisms and new secondary metabolites, a study was conducted to evaluate the chemical diversity of endophytic bacteria through the isolation and identification of secondary metabolites produced by endophytic bacteria of cassava cultivated by Brazilian Amazon Indian tribes. Sixty seven endophytic bacteria isolated from cassava were screened using in vitro antagonisms tests. An endophytic bacterium, the Bacillus pumilus, which showed a strong inhibitory activity against Rhizoctonia solani, Pythium aphanidermatum and Sclerotium rolfsii was selected. This bacterium was identified by sequencing of 16S rRNA genes and by FAME. The bacterial endophytic localization was confirmed by cassava cell tissue examination using scanning electron microscopy. The bacterial metabolites were extracted from the culture media using the solvents hexan, ethyl acetate and dichloromethane. After concentrate the extracts their chemical constituents were analyzed using thin layer chromatography (TLC), chromatography column, gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC/MS) and liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC/MS). The extracts obtained with dichloromethane and ethyl acetate contained different chemical compounds that showed inhibitory activity against the three plant-pathogenic fungi tested. The LC/MS method allowed the identification of an antifungal compound produced by the B. pumilus, which is known as pumilacidin.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-04-15T19:16:37Z No. of bitstreams: 1 edilenebolutaribaptista.pdf: 6189497 bytes, checksum: 9b5a9896c31c59b43d9001520bb0f8c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-04-24T03:18:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 edilenebolutaribaptista.pdf: 6189497 bytes, checksum: 9b5a9896c31c59b43d9001520bb0f8c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-24T03:18:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 edilenebolutaribaptista.pdf: 6189497 bytes, checksum: 9b5a9896c31c59b43d9001520bb0f8c9 (MD5) Previous issue date: 2015-12-11 / As dermatofitoses são doenças fúngicas que nos animais são causadas principalmente por microrganismos dos gêneros Microsporum spp e Trichophyton spp. Afetam os tecidos queratinizados resultando no aparecimento de lesões em anel e alopecia e podem ser transmissíveis ao homem. Na busca por tratamentos naturais alternativos aos fármacos sintéticos de toxicidade conhecida, os óleos essenciais destacam-se por possuírem uma composição química complexa e diversas ações farmacológicas conhecidas. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma formulação veterinária de uso tópico com óleo essencial para tratamento da dermatofitose e avaliar a sua estabilidade. Foram realizadas a caracterização morfológica dos fungos Trichophyton mentagrophytes ATCC 11480, Microsporum canis ATCC 32903 e Microsporum gypseum ATCC 14683; a identificação e quantificação dos componentes químicos dos óleos essenciais da Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) L.R. Landrum e do Eucalyptus smithii e, posteriormente, a análise de seus potenciais antifúngicos. Uma formulação tópica (creme aniônico tipo O/A) com o óleo da P. pseudocaryophyllus foi desenvolvida e submetida a 50 °C e 90% de Umidade Relativa - UR por 3 meses para o estudo de estabilidade acelerada. Durante esse período, foram avaliados os parâmetros organolépticos e físico-químicos da formulação, além do estudo termoanalítico, espectroscópico na região do infravermelho e de cromatografia gasosa (CG). Os resultados para a P. pseudocaryophyllus foram mais promissores indicando uma concentração inibitória mínima (CIM) de 250 μg/mL para os três fungos e uma concentração fungicida mínima (CFM) de 250 μg/mL para o M. canis e de 1000 μg/mL para T. mentagrophytes e M. gypseum. A formulação contendo o óleo da P. pseudocaryophyllus na concentração de 1% (m/m) mostrou-se eficaz no combate fúngico e, por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV), foram observadas as principais alterações morfológicas nas hifas e macroconídeos dos fungos causadas pelos óleos e pela formulação. Durante o estudo de estabilidade a formulação manteve-se estável em relação aos parâmetros organolépticos e físicoquímicos, apresentando apenas uma perda na concentração de eugenol (composto majoritário do óleo essencial) comprovada por CG. Por meio de técnicas termoanalíticas foi possível verificar a estabilidade térmica e avaliar a compatibilidade entre os excipientes e o óleo essencial. De forma geral, os resultados encontrados para a formulação foram satisfatórios, porém vale ressaltar que os estudos termoanalíticos ainda não substituem os estudos convencionais de estabilidade e que para avaliar a real toxicidade dessa formulação, testes de segurança precisam ser realizados antes da comercialização do produto. / Dermatophytosis are fungal diseases and they are caused in animals by microorganisms of the genus Microsporum spp and Trichophyton spp. Tissues containing keratin are affected resulting in ring lesions and alopecia and it can be transmitted to humans.Trying to find alternative natural treatments, the essential oils are notable for having a complex chemical composition and many known pharmacological actions. The objective of this study was to develop a veterinary formulation for topical use with essential oil to treat the dermatophytosis and evaluate its stability. A morphological characterization of the fungi Trichophyton mentagrophytes ATCC 11480, Microsporum canis ATCC 32903 and Microsporum gypseum ATCC 14683 was performed and also the identification and quantification of chemical components of the essential oils of Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) L.R. Landrum and the Eucalyptus smithii and, subsequently , the analysis of their potential antifungal. A topical formulation (anionic cream type O/A) with the oil of P. pseudocaryophyllus was developed and submitted to 50 °C and 90% relative humidity for 3 months to study of accelerated stability. During this period, physical, chemical and organoleptic parameters of the formulation were evaluated, in addition to thermoanalytical, infrared spectroscopic and gas chromatography (GC) study. The results for P. pseudocaryophyllus were more promising indicating a minimum inhibitory concentration (MIC) of 250 μg mL-1 for all three fungi and minimum fungicidal concentration (MFC) of 250 μg mL-1 for M. canis and 1000 μg mL-1 for T. mentagrophytes and M. gypseum. The formulation containing the oil of P. pseudocaryophyllus with a concentration of 1% (w/w) was effective in combating fungal and, by scanning electron microscopy (SEM), the main morphological changes in hyphae and fungal macroconidia caused by oils and the formulation were observed. During stability study, the formulation was stable in relation to physical, chemical and organoleptic parameters, with only a loss in eugenol concentration (major compound of the essential oil) confirmed by GC. It was possible to verify, by thermoanalytical techniques, the thermal stability and to evaluate the compatibility of the excipients and the essential oil. In general, the results of formulation were satisfactory, but it´s important to emphasize that the thermoanalytical studies does not replace conventional stability studies. To evaluate the real toxicity of this formulation, safety tests need to be performed before to marketing the product.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-20T12:27:34Z No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-26T20:24:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T20:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) Previous issue date: 2010-06-12 / Doenças causadas por patógenos, incluindo bactérias e fungos podem gerar muitos problemas à saúde humana e à agricultura. Em cultivares economicamente importantes, tais patógenos podem contribuir para perdas significativas no rendimento da produção agrícola. Um fator agravante para esses dois cenários é o uso intensivo de compostos convencionais para combater esses patógenos, levando à seleção de microrganismos extremamente resistentes. Além disso, tais compostos podem trazer severas conseqüências ao meio ambiente bem como à saúde humana e animal. Desta forma, a busca por novos compostos capazes de controlar efetivamente bactérias e fungos patogênicos resistentes, têm sido prioritária. Por estas razões, este trabalho reporta o isolamento de uma nova proteína heterodimérica (Pa-AFP1) de sementes de Passiflora alata com propriedades antifúngicas. Pa-AFP1 foi purificada utilizando precipitação com sulfato de amônio 70-100%, subseqüente cromatografia de troca aniônica em Q-Sepharose e cromatografia de HPLC fase reversa em coluna C4. Análise da massa molecular por meio de gel Tricina-SDS-PAGE revelou uma massa molecular de aproximadamente 4.500 Da para a cadeia menor e cerca de 7.000 Da para cadeia maior totalizando um heterodímero com cerca de 11.500 Da. A massa da forma oligomérica também foi obtida por espectrometria de massa (11569. 63 Da). Análise da seqüência N-terminal mostrou alta identidade entre Pa-AFP1 e albuminas 2S, adicionando assim uma nova proteína à pequena lista de albuminas 2S com atividade antimicrobiana. Além disso, Pa-AFP1 foi capaz de inibir eficientemente o fungo filamentoso Colletotrichum gloeosporiodes, mas foi incapaz de inibir bactérias e fungos leveduriformes. Em suma, Pa-AFP1 poderá futuramente contribuir para o desenvolvimento de produtos biotecnológicos contra fungos fitopatogênicos. / Diseases caused by pathogens, including bacteria and fungi can generate many problems to human health and agriculture. In important economically cultivars, such pathogens may contribute to significant losses in yield of agricultural production. The aggravating factor for these two scenarios is the intensive use of conventional compounds to combat these pathogens, leading to selection of highly resistant microorganisms. Furthermore, these compounds can bring severe consequences to the environment, human and animal health. Thus the search for new compounds capable of effectively controlling bacteria and fungi resistant has been a priority. In this report a heterodimeric antifungal protein named Pa-AFP1, showing higher identity with the 2S albumin family, was purified by using 70-100% ammonium sulfate saturation and further purification steps such as anionic exchange Q-Sepharose chromatography associated with HPLC reversed-phase C4 chromatography. Analysis by Tricine-SDS-PAGE revealed two peptide molecular masses of approximately 4,500 Da and 7,000 Da, in the presence of β-mercapthoetanol, while by removing the reducing agent, a single protein with molecular mass of about 11,500 Da was obtained. Moreover, dimeric mass was confirmed by MALDI-TOF analyses (11,569.76 Da). The antifungal protein, named Pa-AFP1, efficiently inhibited the growth of filamentous fungi Colletotrichum gloeosporiodes, and was added to a short list of 2S albumins with antimicrobial properties. Otherwise, this same peptide showed no activity toward bacteria and yeasts. In summary, this compound could be used in the future to develop biotechnological products for the control of phytopathogenic fungi.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_claudia_giordani.pdf: 2276944 bytes, checksum: 55ee4444fa59202346411910205995d3 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / The rescue and use of medicinal plants have been gaining space in human and veterinary medicine, as treatment and prophylaxis of diseases. In the treatment of mycosis, there is still issues regarding the limited amount of drugs and the occurrence of resistance, adverse reactions and relapses. Thus, the objective was to conduct a survey of medicinal plants and toxic found in the region of the Veterinary Clinic-Federal University of Pelotas, organize an instructional manual of the studied plants and uses in animal health, and to determine the antifungal effect of plant extracts on clinical isolates of Malassezia pachydermatis. In the survey, animal owners in the Veterinary Ambulatory were interviewed and visited. There were 111 interviews, which 74 species cited for medical use but the minority used them in animals. With respect to toxic plants 20 species were observed, but only six were reported by the population, and from the results in the survey was made a manual on plants. To evaluate the antifungal activity were tested six hydroalcoholic extracts of Aroeira, Carqueja, Erva-de-bicho, Lanceta, Pitangueira e Rabo-de-lagarto, the techniques microdilution and disk diffusion against M. pachydermatis isolated from dogs (dermatitis=38, otitis=10). The extracts that resulted in higher activity were Aroeira, Erva-de-Bicho and Pitangueira. From these results, we can see the importance of further studies of the activities of plants to determine more precisely its action and toxicity. With this study concludes that there are many medicinal and toxic species distributed in the region of the Veterinary Clinic-UFPel, but is still scarce use of medicinal plants in animal, and that the hydroalcoholic extracts of Aroeira, Erva-de-bicho and Pitangueira had action on M. pachydermatis, opening the possibility of numerous studies in veterinary medicine. / O resgate e uso das plantas medicinais vêm ganhando espaço na medicina e veterinária, como tratamento e profilaxia de doenças. No tratamento das micoses, ainda observa-se uma quantidade limitada de medicamentos e a ocorrência de resistência, reações adversas e recidivas. Assim, objetivou-se realizar um levantamento das plantas medicinais e tóxicas encontradas na região do Ambulatório Veterinário-Universidade Federal de Pelotas, organizar um manual didático das plantas estudadas e usos na saúde animal, e determinar a ação antifúngica de extratos vegetais sobre isolados clínicos de Malassezia pachydermatis. No levantamento, foram entrevistados e visitados proprietários de animais atendidos no Ambulatório Veterinário. Foram 111 entrevistas, citando 74 espécies medicinais, porém a minoria usava-as em animais. Com relação às plantas tóxicas foram observadas 20 espécies, porém apenas seis eram relatadas pela população; e por fim, confeccionado um manual informativo das plantas. Para avaliação da atividade antifúngica foram testados extratos hidroalcoólicos de Aroeira, Carqueja, Erva-de-bicho, Lanceta, Pitangueira e Rabo-de-lagarto, pelas técnicas de microdiluição em caldo e difusão em disco frente a M. pachydermatis isolada de cães (dermatite=38; otite=10). Os extratos com maior atividade foram Aroeira, Erva-de-bicho e Pitangueira. Assim, percebe-se a importância de aprofundar os estudos sobre as plantas, determinando mais precisamente sua ação e toxicidade. Com o estudo conclui-se que existem muitas espécies medicinais e tóxicas na região do Ambulatório Veterinário-UFPel, porém ainda é escasso o uso das plantas medicinais em animais; e que os extratos hidroalcoólicos de Aroeira, Erva-de-bicho e Pitangueira apresentaram ação sobre M. pachydermatis, abrindo a possibilidade de inúmeras pesquisas em veterinária.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_isabel_madrid.pdf: 2158071 bytes, checksum: 0cdf6bd60773cb623d04e6df539e8aa9 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Sporotrichosis has been receiving attention in any world in the several areas of the health as an important fungal disease. So, this work aimed: (i) to study cases of sporotrichosis diagnosed in the south region of Rio Grande do Sul in a period of ten years, (ii) to study the morphological and pathogenicity characteristics of S. schenckii isolates, (iii) to determine the sensitivity of S. schenckii isolates to the commercial disinfectants. Sporotrichosis cases were analysed as for geographical distribution, it clinical forms of the disease, presence of the fungus in different anatomical sites and tecidual inflammatory response. The 42 S. schenckii isolates originating from clinical cases, environment isolates and reference strains used in the phenotypic study were evaluated as for macromorphology in Sabouraud agar added of chloramphenicol, potato agar and ágar lactrimel, incubated 25ºC and 35ºC for 21 days. The micromorphology was analyzed in potato agar to 25ºC whereas the termotholerance was evaluated in ágar Sabouraud added of 1% yeast extract, incubated 41ºC for seven days. Ultraestructural study of nine clinical isolates and two reference strains of S. schenckii were carried by transmission electron microscopy. Susceptibility of 12 S. schenckii isolates to disinfectants was performed by the techniques of broth microdilution, agar diffusion and direct exposute test. The 103 cases of sporotrichosis in animals demonstrated that this is an endemic mycosis in the south region of Rio Grande do Sul being more frequent in young felines and adult dogs. The felines developed disseminated cutaneous form with more frequency. Therefore, in canines, the fixed cutaneous form was predominant though it has taken place in 18.2% of the dog to respiratory form with absence of cutaneous lesions. Research of the S. schenckii in nails, oral cavity, conjunctival mucosa, blood and testicles demonstrated high fungal positivity in samples of oral cavity (45.2%) and testicles (46.6%). The study of the hematological alterations related with the clinical form of the disease demonstrated that animals with the cutaneous fixed form of the mycosis do not present alterations in the blood count. However, animals with the cutaneous disseminated form develop important alterations characterized mainly for leucocytosis with neutrophilia and anaemia. Morphological analyzes of 42 clinical and environmental isolates of S. schenckii demonstrated macro and micromorphogical differences in the different culture medium utilized. In the thermotolerance evaluation 26.2% isolates were capable of growth at 41oC, specially isolates of feline sporotrichosis. The ultraestructural study showed presence of granules of melanin in all S. schenckii isolates of canine sporotrichosis and correlation among melanin and cell wall thickness. In vitro evaluation of disinfectants demonstrated chlorexidine digluconate antifungal activity in the microdilution broth and agar diffusion techniques and the sodium hypochlorite showed best performance in the direct exposure test. The presence of the organic matter interfered in the antifungal action of both disinfectants. Sodium hypochlorite showed better results with total elimination of the fungal load in the absence of organic matter and a reduction of 60 % of the fungal load in the presence of this. / A esporotricose tem se destacado mundialmente nas diversas áreas da saúde como uma importante doença fúngica. Assim, este trabalho teve como objetivos: (i) estudar casos de esporotricose diagnosticados na região sul do Rio Grande do Sul num período de dez anos, (ii) estudar as características morfológicas e de patogenicidade de isolados de Sporothrix schenckii, (iii) determinar a suscetibilidade de S. schenckii a desinfetantes comerciais. Os casos de esporotricose foram analisados quanto a distribuição geográfica, forma clíinica da doença, presença do fungo em diferentes sítios anatômicos e resposta tecidual. Os 42 isolados de S. schenckii provenientes de casos clínicos, isolados do ambiente e cepas de referência utilizados no estudo fenotípico foram avaliados quanto a macromorfologia em ágar Sabouraud acrescido de cloranfenicol, ágar batata e ágar lactrimel incubados a 25ºC e 35ºC por 21 dias. A micromorfologia foi avaliada em ágar batata a 25ºC enquanto que a termotolerância foi avaliada em ágar Sabouraud acrecido de extrato de levedura 1% incubado a 41ºC por sete dias. O estudo ultraestrural dos nove isolados clínicos e duas cepas de referência de S. schenckii foi realizado por microscopia eletrônica de transmissão. A suscetiblidade de 12 isolados de S. schenckii a desinfetantes foi realizada pelas técnicas de microdiluição em caldo, difusão em agar e teste de exposição direta. Os 103 casos de esporotricose em animais demonstraram que esta é uma micose endêmica na região sul do Rio Grande do Sul ocorrendo com mais freqüência em felinos jovens e cães adultos. Os felinos desenvolveram principalmente a forma cutânea disseminada enquanto que em caninos, a forma cutânea fixa foi a mais freqüente embora tenha ocorrido em 18,2% dos caninos, a forma respiratória com ausência de lesões cutâneas. A pesquisa do fungo S. schenckii em unhas, cavidade oral, mucosa conjuntival, sangue e testículos revelou alta positividade fúngica em amostras de testículos (46,6%) e cavidade oral (45,2%). O hemograma de animais com a forma cutânea fixa não apresentou alterações nos valores hematológicos enquanto que aqueles com a forma cutânea disseminada apresentaram alterações tanto no leucograma como no eritrograma, caracterizadas por leucocitose por neutrofilia e anemia normocítica e normocrômica. A análise morfológica de 42 isolados clínicos e do ambiente de S. schenckii demonstrou diferenças macro e micromorfológicas nos diferentes meios de cultivo utilizados. Na avaliação da termotolerância obteve-se 26,2% dos isolados termotolerantes, sendo a maioria proveniente de casos de esporotricose felina. O estudo ultraestrutural revelou presença de grânulos de melanina em todos os isolados de S. schenckii originados de esporotricose canina e correlação entre presença de melanina e espessura da parede celular. A avaliação in vitro de desinfetantes demonstrou maior ação antifúngica do digluconato de clorexidina nas técnicas de microdiluição em caldo e difusão em agar enquanto que o hipoclorido de sódio apresentou melhor eficácia na técnica de exposição direta. A presença de matéria orgânica interferiu na ação antifúngica de ambos os desinfetantes, entretanto, o hipoclorito de sódio apresentou melhores resultados com inativação total da carga fúngica na ausência de matéria orgânica e redução de 60% da carga fúngica na presença desta.

Avec la prise de conscience de l'impact environnemental et sanitaire des pesticides et l'apparition de phénomènes de résistance face à ces produits, les exigences règlementaires européennes (UE 1107/2009) encadrant leur mise sur le marché sont de plus en plus drastiques. Pour répondre à ces exigences, de nouveaux types de produits de protection des cultures font leur apparition : les bio-pesticides, ou produits de biocontrôle. Il s'agit de produits naturels d'origine végétale, animale ou microbienne, à priori moins rémanent et impactant pour l'environnement que les pesticides conventionnels. C'est dans ce contexte que mes travaux de thèse ont eu pour but le développement de biopesticides d'origine végétale destinés à lutter contre les champignons pathogènes des plantes, pour lesquels il existe encore peu ou pas de moyens de lutte naturels. Au cours de cette thèse, j'ai pu sélectionner à travers différents criblages, écologique, économique et biologique deux extraits végétaux efficaces sur des cibles biologiques d'intérêt et présentant une toxicité sur organismes non cibles bien plus faible que des fongicides conventionnels. Les molécules responsables de l'activité ont été identifiées par fractionnement bio-guidé et analyses spectrales. L'activité des extraits a pu être validée en champs notamment sur mildiou de la vigne (Plasmopara viticola) et moniliose de la nectarine (Monilinia fructigena) après une optimisation de leur formulation. / With the awareness of the environmental and sanitary impact of pesticides and emergence of resistance phenomena, the European regulation requirements (EU 1107/2009) supervising their marketing authorization are more and more drastic. To meet these requirements, new phytoprotection products are emerging: biopesticides also called biocontrol products. They are natural product of plant, animal or microbial origins, likely to be less persistent and more environmentally friendly than conventional pesticides.It is against this background that my thesis work aimed to develop some biopesticides from plant origin, for protection against phytopathogenic fungi for which there are no or few natural product.In this work, I selected, by ecological, economical and biological screening, two plant extracts, effective against biological targets and far less toxic against non-target organism than tested conventional pesticides.Active molecules were identified by bioguided fractionation and spectral analysis. Extracts activities have been evaluated in field test against vine downy mildew (Plasmopara viticola) and Moniliose infection (Monilinia fructigena)

Les champignons du genre Aspergillus sont des moisissures banales de l'environnement. Elles sont présentes dans le sol et sur des végétaux en décomposition. Les Aspergillus se propagent par l'intermédiaire de spores microscopiques en suspension dans l'air. L'Homme et les animaux sont exposés en permanence aux spores aspergillaires mais les défenses immunes empêchent leur développement dans l'organisme. Lorsque ces défenses sont amoindries, une aspergillose est possible. Dans ce cas, Aspergillus fumigatus et A. flavus sont le plus souvent incriminés. Les oiseaux sont beaucoup plus sensibles que les mammifères et l'environnement représenté par les élevages aviaires est propice à la prolifération des moisissures du genre Aspergillus. L'objectif de ce travail de thèse a été de caractériser la diversité génétique et la sensibilité aux antifongiques d'isolats d'Aspergillus provenant d'élevages aviaires dans la province du Guangxi en Chine. La première partie de la thèse est une analyse bibliographique sur les champignons du genre Aspergillus, les aspergilloses et les caractéristiques de l'élevage aviaire en Chine. Une première enquête a été réalisée dans 3 élevages près de la ville de Nanning et dans un élevage (incluant un éclosoir) à proximité de la ville de Guilin. Des écouvillonnages pharyngés et des prélèvements d'air ont été réalisés pendant plusieurs semaines. Des prélèvements ont également été faits sur des œufs dans l'éclosoir. Cette enquête a montré que le niveau de contamination fongique dépendait du type d'élevage. De nombreux isolats fongiques ont pu être collectés : 188 isolats d'A. fumigatus et 159 isolats d'A. flavus. La seconde partie du travail expérimental a porté sur la caractérisation de la diversité génétique d'A. fumigatus et d'A. flavus. Pour cela, la technique MLVA (multiple locus VNTR analysis) a été utilisée. Pour A. flavus, 8 marqueurs VNTR (variable-number tandem-repeat) ont été sélectionnés et une réaction PCR multiplex a été mise au point. Au total, 91 isolats d'A. flavus, incluant 6 souches de référence, ont été caractérisées avec le panel des 8 marqueurs VNTR. Cette analyse a permis de définir 78 génotypes distincts et un index de discrimination de 0,993. L'analyse de 188 isolats d'A. fumigatus avec 10 marqueurs VNTR a permis de définir 142 génotypes distincts. Certains génotypes d'A. flavus ou d'A. fumigatus sont clairement regroupés dans le nuage de point généré par l'analyse MST (minimum spanning tree). La troisième partie du travail expérimental a porté sur la sensibilité aux antifongiques de 177 isolats d'A. fumigatus. Ces isolats ont été récupérés dans des élevages aviaires en Chine et en France. Les isolats de Chine sont pour la plupart sensibles avec des valeurs minimales inhibitrices (vis-à-vis de l'itraconazole) comprises entre 0,38 et 0,75 µg/mL. Les isolats de France sont pour la plupart sensibles avec des valeurs minimales inhibitrices (vis-à-vis de l'itraconazole) comprises entre 0.19 and 1 µg/mL. Quatre souches ont été considérées comme résistantes : 2 souches provenant de deux élevages en Chine et 2 souches provenant de deux élevages en France. Des mutations sur le gène Cyp51A ont été détectées pour 11 isolats (3 résistants et 8 sensibles). Vingt et une mutations nucléotidiques ont été identifiées. Onze de ces mutations sont silencieuses et 9 sont à l'origine d'un changement de la composition de la protéine. Sept substitutions ont déjà été décrites dans la littérature ; les mutations A116R, E130D et Q131H sont originales. / Fungi of the genus Aspergillus are moulds, which occur most frequently in soil, water and decaying vegetation. They sporulate abundantly and the spores are easily dispersed into the environment by air. As a result of this ubiquitous presence, animals and people are constantly exposed to Aspergillus spores. Aspergillus fumigatus and A. flavus are recognized as predominant causes of fungal diseases in humans and wide range of animals. Birds are much more sensitive that mammals and in avian farms, environmental conditions are favorable to the development of many fungal species, including Aspergillus spp. The objective of the present study was to assess the genetic diversity and antifungal susceptibility of Aspergillus isolates from avian farms in Guangxi, China. The first part of the experimental work related the evolution of fungal contamination in 3 avian farms near the city of Nanning and one farm (including a hatchery) near the city of Guilin. Pharyngeal swabs and air samples were collected during several weeks and 3 cycles of hatching were monitored. The average contamination level with Aspergillus spp. and Mucorales was significantly different according to the farms. The survey allowed to collect a total number of 188 A. fumigatus and 159 A. flavus isolates. The second part of the work was about the genetic diversity of A. fumigatus and A. flavus. For that purpose, the Multiple Locus Variable-number tandem-repeat (VNTR) Analysis was specifically developed and used. For A. flavus, 8 VNTR markers were selected and a multiplex reaction was designed. A total number of 91 A. flavus isolates, including 6 reference strains were typed with the panel of 8 VNTRs. This analysis yielded 78 different genotypes, which corresponds to a combined loci index of 0.993. Among all genotypes, 71 were only found once. The analysis of 188 A. fumigatus isolates using 10 VNTR markers led to the resolution of 142 distinct genotypes. Clusters of A. flavus or A. fumigatus isolates could be defined by using the graphing algorithm Minimum Spanning Tree. The third part of the experimental work was about the antifungal susceptibility of 177 A. fumigatus isolates collected in avian farms in China and France. Most of the isolates from China were susceptible to itraconazole with a Minimum Inhibitory Concentration (MIC) comprised between 0.38 and 0.75 µg/mL. Most of the isolates from birds and avian farms in France were susceptible to itraconazole with a MIC comprised between 0.19 and 1 µg/mL. MIC values of isolates collected in farms with antifungal chemoprophylaxis were not higher than those of isolates collected from birds (that never received antifungal drugs before the sampling). Susceptibility testings demonstrated that 4 isolates should be considered as resistant to itraconazole: (2 isolates from avian farms in Guangxi, China and 2 isolates from avian farms in France). A modification of the Cyp51A sequence was identified in 11 isolates (3 azole-resistant and 8 azole-susceptible isolates). Twenty-one nucleotidic mutations were detected. Eleven of these mutations were silent and 10 yielded to amino acid substitutions. Seven of these substitutions had already been described whereas mutations A116R, E130D and Q131H were original.