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Micro-organismos envolvidos em infecções urinárias de mulheres com idade superior a 15 anos atendidas no HC-UFG em 2009 e os perfis de suscetibilidade aos antimicrobianos / Micro-organisms involved in urinary tract infections in women aged over 15 years in HC-UFG attended in 2009 and profiles for antimicrobial susceptibility

SANTOS SOBRINHO, Rosemary Alves dos 06 May 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T15:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Rosemary A S Sobrinho.pdf: 331810 bytes, checksum: 90b92fefc7eba79f810a988a776beca0 (MD5) Previous issue date: 2011-05-06 / A urinary tract infection (UTI) is a very common disease and can occur at any age. The vast majority of UTIs is caused by enteric bacteria. The study aimed to identify the etiologic agents most frequently, the profile of antibiotic susceptibility and the factors possibly associated to the UTIs recurrents in women older than 15 years, cared for and / or admitted to the Hospital of the University of Goias. From March to November 2009, were invited and accepted to participate in the study 923 women in this age group and they were interviewed using a questionnaire about demographics data and risk factors for recurrent infections. Escherichia coli was the most frequent agent accounting for 67.9% of the total, followed by Enterobacter sp (6.2%), Klebsiella sp (6.2%), Proteus mirabilis (4.5%), Morganella morganii (4.0 %), Acinetobacter baumannii (2.8%) and Staphylococcus aureus (2.2%). %). E. coli showed higher rates of resistance to ampicillin in 46.7% patients with recurrent infection and 50.0% in infections nonrecurring; amoxicillin/clavulanate (32.6% and 35.7%), trimethoprim-sulfamethoxazole (30,0 and 25,0%, respectively) and 100,0% susceptibility to imipenem and nitrofurantoin in both groups. Enterobacter sp showed greater resistance to ampicillin, amoxicillin/clavulanic, norfloxacin and gentamicin (>88.0%) and greater susceptibility to amikacin, cefepime, imipinem and cephalosporins. Klebsiella sp showed high resistance to ampicillin and amoxicillin / clavulanate (> 60.0%) and greater susceptibility to quinolones (> 60.0%), amikacin and imipenem (100.0%) in both groups. There were no statistically significant differences between the risk for recurrent infection or not assessed for menopause, hypertension, hysterectomy, SEL (Systemic Erythematosus Lupus) and smoking. The only risk factor associated to recurrent infection in patients older than 50 years with diabetes. In this study, there was a greater number of E. coli in UTIs, followed by other enterobacteria such as Enterobacter sp and Klebsiella sp. Among all drugs tested, all the micro-organisms, were resistant generally to penicillins, being the most effective quinolones and carbapenems. / A infecção do trato urinário (ITU) é uma patologia muito frequente, podendo ocorrer em qualquer idade. A grande maioria das ITUs é causada por bactérias entéricas. O estudo teve como objetivos identificar os agentes etiológicos mais frequentes, o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos e os fatores possivelmente desencadeantes associados às ITUs recorrentes em mulheres com idade superior a 15 anos, atendidas e/ou internadas no Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Goiás. No período de março a novembro de 2009, foram convidadas e aceitaram participar da pesquisa 923 mulheres nesta faixa etária e entrevistadas por meio de questionário sobre dados demográficos e fatores de risco para infecções recorrentes. Escherichia coli foi o agente mais frequente representando 67,9% do total, seguido por Enterobacter sp (6,2%), Klebsiella sp (6,2%), Proteus mirabilis (4,5%), Morganella morganii (4,0%), Acinetobacter baumanii (2,8%) e Staphylococcus aureus (2,2%). E. coli apresentou taxas maiores de resistência à ampicilina 46,7% nas pacientes com infecção recorrente e 50,0% nas com infecções não recorrentes; amoxilina/ácido clavulânico (32,6% e 35,7%), sulfametoxazol-trimetoprima (30,0 e 25,0%) respectivamente e 100,0% de suscetibilidade para nitrofurantoína e imipenem em ambos os grupos. Enterobacter sp demonstrou maior resistência à ampicilina, amoxicilina/ácido clavulânico, norfloxacina e gentamicina (>88,0%) e maior suscetibilidade à amicacina, cefepime, imipinem e cefalosporinas. Klebsiella sp demonstrou alta resistência para ampicilina e amoxicilina/ácido clavulânico (>60,0%) e maior suscetibilidade às quinolonas (>60,0%), amicacina e imipenem (100,0%) nos dois grupos estudados. Não foram detectadas diferenças estatisticamente significantes entre o risco para infecção recorrente ou não avaliado para menopausa, hipertensão, histerectomia, LES (Lúpus Eritematoso Sistêmico) e tabagismo. O único fator de risco associado à infecção recorrente foi diabetes em pacientes com mais de 50 anos. Neste estudo, verificou-se um maior número de E. coli nas ITUs e incidência bem menor de outras enterobactérias como Enterobacter sp e Klebsiella sp. Entre os antimicrobianos testados todos os micro-organismos foram resistentes, de um modo geral, às penicilinas sendo mais efetivos as quinolonas e carbapenemas.
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DetecÃÃo de betalactamases de espectro expandindo (ESBL) em cepas de coliformes isolados de hortaliÃas minimante comercializadas na cidade de Fortaleza -CE / Detention of extendedspectrum β-betalactamases (ESBL) in cepas of isolated coliformes of minimally processed vegetables (MPV),marketed in the city of Fortaleza-CearÃ

Francisco AfrÃnio Cunha 24 August 2007 (has links)
nÃo hà / HortaliÃas minimamente processadas (HMP) normalmente consistem de hortaliÃas frescas, cruas, lavadas, descascadas, cortadas, sanitizadas, centrifugadas, empacotadas e acondicionadas sob refrigeraÃÃo. HortaliÃas sÃo potenciais veÃculos de microrganismos que podem estar associadas à doenÃas transmitidas por alimentos. InÃmeras sÃo as causas para a presenÃa de elevada carga microbiana nesse tipo de produto, entre as quais estÃo: as tÃcnicas de cultivo, armazenamento, transporte e distribuiÃÃo para consumo, a prÃtica do uso de adubo orgÃnico, a utilizaÃÃo de Ãgua contaminada para rrigaÃÃo, o transporte realizado em engradados abertos e as condiÃÃes de higiene no manuseio e preparo de refeiÃÃes, principalmente quando tais alimentos sÃo consumidos crus. O objetivo desse estudo foi determinar a presenÃa de Enzimas Betalactamases de Espectro Expandido (ESBL) em cepas de Enterobacteriaceae isoladas de HMP comercializadas na cidade de Fortaleza e verificar se as hortaliÃas analisadas a atendem a RDC N 12 de 02 de janeiro de 2001, que rege o padrÃo microbiolÃgico dos alimentos no Brasil. Foram coletadas 80 amostras de HMP comercializadas em Fortaleza. As hortaliÃas estudadas foram: 8 amostras de acelga; 10 alface; 8 tomate cereja; 8 repolho roxo, repolho verde; 10 cenoura e vagem; 8 cenoura ralada; 10 cenoura ralada, repolho verde e repolho roxo; 10 saladas; 8 coentro, cebola e salsa picados. As anÃlises foram realizadas de abril de 2006 a maio de 2007. As contagens de microrganismos aerÃbios mesÃfilos variaram de 5,60 a 13,35 log UFC/ g de HMP. As contagens de bolores e leveduras variaram de 5,54 a 9,88 log UFC/ g de HMP. A contagem de coliformes totais e coliformes a 45ÂC foram bastante elevadas. O principal bolor isolado e identificado foi o enicillium spp. Todas as amostras de acelga, cenoura ralada, cenoura e vagem, cenoura ralada, repolho roxo e repolho verde, coentro e salsa picados encontravam-se imprÃprias para o consumo, pois apresentaram quantidades superiores a 100 coliformesa 45ÂC/g de amostra. Das amostras de alface 50% apresentavam contagem decoliformes a 45ÂC acima do permitido peÃa legislaÃÃo. Dos tomates cereja analisados 75% estavam dentro padrÃes microbiolÃgicos exigidos pela legislaÃÃo brasileira, para coliforme a 45ÂC. Das amostras de repolho roxo, repolho verde 87% estavam com contagem de coliformes acima do permitido. Das amostras de salada 80% estavam fora dos padrÃes. NÃo foram detectadas Salmonellas nas amostras de HMP analisadas. As principais cepas de Enterobacteriaceae isoladas foram E. coli, K. pneumoniae e E. aerogenes. Todas as cepas de K. pneumoniae e E. aerogenes foram resistentes à ampicilina. Foram detectadas cepas de E. coli, K pneumoniae e E aerogenes com multiresistÃncia aos antibiÃticos testados. NÃo foi observada resistÃncia a ciprofloxacina, ceftazidima e imipenem. NÃo foram detectadas amostras de enterobactÃrias produtoras de ESBL. NÃo foram identificadas cepas de E. coli O15:H7 entre as cepas de E. coli isoladas de HMP. As condiÃÃes higiÃnico-sanitÃrias desses produtos podem ser melhoradas com a aplicaÃÃo de Boas PrÃticas em toda a cadeia produtiva. / Minimally processed vegetables (MPV) normally consist of fresh raw vegetables, washed, peeled, cut, disinfected, centrifugal dryed packed and kept under refrigeration. Vegetables are potential vehicle of microorganisms that can be associated to the outbreaks of foodborne. Countless are the causes for the presence high microbial load in that product type, among which are: the cultivation techniques, storage, transport and distribution for consumption, the practice of the use of organic fertilizer, the use of polluted water for irrigation, the transport accomplished in open crates and the hygiene conditions in the handling and preparation of meals, mainly when such foods are consumed raw. The objective of this study was to determine the presence of extendedspectrum β-betalactamases (ESBL) in strains of Enterobacteriaceae isolated of MPV marketed in the city of Fortaleza and to verify if the analyzed vegetables assists the Brazilian Food Sanitation Standard, RDC N 12, 02 of january 2001. 80 samples of MPV were collected marketed in Fortaleza. Were collected vegetables studied: 8 samples beet; 10 lettuce; 8 of cherry-colored tomato; 8 purple cabbage, green cabbage; 10 carrot and green bean; 8 grated carrot; 10 grated carrot, green cabbage and purple cabbage; 10 salads; 8 cilantro, onion and parsley pricked. The analyses were accomplished of april from 2006 to may of 2007. The countings of mesophiles aerobic, varied from 5,60 to 13,35 log UFC / g of MPV. The countings of moulds and yeasts, varied from 5,54 to 9,88 log UFC / g MPV. The counting of total coliforms and fecal coliforms were quite high. The main isolated and identified mold was the Penicillium spp. All of the beet samples, grated carrot, carrot and green bean, grated carrot, purple cabbage and green cabbage, cilantro and parsley pricked met inappropriate for the consumption, because they presented amounts superior of 100 fecal coliforms / g samples. Of the samples of lettuce 50% they presented fecal coliforms counting above legislation. Of the tomatoes cherry analyzed 75% were inside patterns of the Brazilian legislation, for fecal coliforms. Of the samples of purple cabbage, green cabbage 87% were with fecal coliforms counting above. Of the samples of salad 80% were out of the patterns. Salmonellas were not detected in the samples of MPV analyzed. The main isolated Enterobacteriaceae were E. coli, K. pneumoniae and E. aerogenes. All of the strains of K. pneumoniae and E. aerogenes were resistant to the ampicillin. Strains of E. coli, K pneumoniae and E. aerogenes with multidrug resistance were detected. Resistance to ciprofloxacin, ceftazidime and imipenem was not observed. Enterobacteriaceae samples producing of ESBL were not detected. Were not identified strains of E. coli O15:H7 among the strains of E. coli isolated of MPV. The hygienicsanitary conditions of those products can be improved with the application of Good Practices in the whole productive chain.
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Investigação bacteriológica e molecular de salmonella sp. em granjas de postura comercial / Bacteriological and molecular salmonella sp. investigation at commercial laying houses

Moraes, Dunya Mara Cardoso 11 April 2014 (has links)
Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-10-21T16:50:44Z No. of bitstreams: 2 Tese - Dunya Mara Cardoso Moraes - 2014.pdf: 1962001 bytes, checksum: 0651e62e269992f431e635168bd6edf9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-11-08T17:37:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Dunya Mara Cardoso Moraes - 2014.pdf: 1962001 bytes, checksum: 0651e62e269992f431e635168bd6edf9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-08T17:37:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Dunya Mara Cardoso Moraes - 2014.pdf: 1962001 bytes, checksum: 0651e62e269992f431e635168bd6edf9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The purpose of this research was to investigate presence of Salmonella sp. by conventional bacterial identification and real-time PCR on eggshell, albumen, and yolk of washed and unwashed commercial white and brown eggs; in samples of flooring material from transport crates (meconium); raising environment (swab of cages and drinking fountains); cloacal swab; food and insects from growing, rearing and production phases in a commercial group of laying hens. Also, was examinated the susceptibility profile of Salmonella isolates to 14 antimicrobials: sulfamethoxazole (25μg), trimethoprim-sulfamethoxazole (25μg), enrofloxacin (5μg), tetracyclin (30μg) sulphonamides (300μg), ciprofloxacin (10μg), amoxicillin and clavulanic acid (3μg), ampicillin (20μg), ceftiofur (30μg), gentamicin (10μg), oxytetracycline (30μg), neomycin (30μg), doxycycline (30μg) and apramycin (15μg); and evaluated the presence of virulence gene spvC and resistence genes intl1, sul1 and blaTEM. A total of 68 dozens of white eggs and 61 dozens of brown eggs were randomly collected in poultry houses and 30 dozens and 34 dozens of white and brown eggs, respectively, were collected in egg-storage room (on the farm). Each collected dozen corresponded to three sample units: eggshell, albumen and yolk, totaling 387 samples. Salmonella spp. was detected by conventional bacteriology in 5.4% of analyzed samples and in 16% by qPCR. Salmonella Agona represented 18.2% of identified serovars, Salmonella enterica subs. enterica O:4.5 18.2%, Salmonella Schwarzengrund 18.2%, Salmonella Cerro 13.6%, Salmonella Anatum 13.6%, Salmonella Enteritidis 9.1%, Salmonella Johannesburg 4.5%, Salmonella Corvallis 4.5%, Salmonella Livingstone and Salmonella Senftenberg. From 864 samples collected (248 samples originated from growing, 392 from rearing and 224 from production phase), 2,8% where positives in bacteriologic technique and 15,3% in qPCR. Contamination was higher in growing and rearing phases and declined in production phase. Twenty four isolations of Salmonella where typified as Salmonella Agona (41,7%), Salmonella Livingstone (33,3%), Salmonella Cerro (16,7%), Salmonella Senftenberg (4,2%) and Salmonella Schwarzengrund (4,2%). The highest resistance percentage observed were to sulfamethoxazole (91,0%), sulphonamides (51%) and ceftiofur (28,9%) and 0% to ciprofloxacin. Only Salmonella Johannesburg and Salmonella Corvallis showed resistance to only one antibiotic and others serovars were resistant to at least two antimicrobials, noting that Salmonella Schwarzengrund presented resistance to 13 of them. The gene spvC was dectected only in serovar Enteritidis, while intl1 was present in six of ten analyzed serovars and the gene sul1 in three of them, always in association with intl1. The gene blaTEM was not identified. In conclusion, this research points numerous serovars circulating in commercial egg structures and phenotypic antimicrobials resistance investigation, along with antimicrobial resistance genes in isolates of Salmonella sp. are important investigation tools to determinate genetic profile of these bacteria. / Objetivou-se com esta pesquisa investigar a presença de Salmonella sp por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia por bacteriologia convencional convencionalconvencionalconvencionalconvencionalconvencional convencionalconvencional e PCR em tempo real em casca, albúmen e gema de ovos comerciais brancos e vermelhos, lavados e não lavados; em amostras de forros de caixa de transporte, amostras de ambientes de criação (suabes de gaiola e bebedouro), suabes de cloaca, ração e insetos oriundos das fases de cria, recria e produção de um lote de poedeiras comerciais e investigar o perfil de suscetibilidade de isolados de Salmonella frente 14 antimicrobianos sulfametoxazol (25μg), sulfametoxazol-trimetoprim (25μg), enrofloxacina (5μg), tetraciclina (30μg), sulfonamidas (300μg), ciprofloxacina (10μg), amoxilina ácido clavulânico (3μg), ampicilina (20μg), ceftiofur (30μg), gentamicina (10μg), oxitetraciclina (30μg), neomicina (30μg), doxiciclina (30μg) e apramicina (15μg) e avaliar a presença do gene de virulência spvC e dos genes de resistência intl1, sul1 e blaTEM. Foram colhidas, nos galpões, 68 dúzias de ovos brancos e 27 dúzias de vermelhos e nos entrepostos, após classificação e sanitização, 30 e 34 de dúzias de ovos brancos e vermelhos, respectivamente. Cada dúzia de ovos correspondeu a três amostras: uma amostra de pool casca, uma de pool de albúmen e uma de pool gema, totalizando 387 amostras. Obteve-se pela bacteriologia convencional 5,4% (21/387) e PCR em tempo real 16,0% (62/387) de amostras positivas para Salmonella. Os sorovares identificados foram Salmonella Agona, Salmonella enterica subs. enterica O:4,5, Salmonella Schwarzengrund, Salmonella Cerro, Salmonella Anatum, Salmonella Enteritidis, Salmonella Johannesburg e Salmonella Corvallis. Foram coletadas também 864 amostras no fluxo de produção de ovos e Salmonella sp. foi isolada pela bacteriologia convencional em 2,8% das amostras e pelo PCR em tempo real em 15,3%, sendo que 248 amostras foram originadas da cria, 392 na recria e 224 na produção. De acordo com a analise estatística a infecção evoluiu da fase de cria para a recria e ao chegar a fase de produção o nível de infecção declinou. Os 24 isolados de Salmonella foram tipificados e os sorovares identificados foram Salmonella Agona, Salmonella Livingstone, Salmonella Cerro, Salmonella Senftenberg e Salmonella Schwarzengrund. Foram analisadas também 45 isolados de Salmonella pertencentes aos sorovares Agona, Livingstone, Cerro, Schwarzengrund, Salmonella enterica subs. enterica O:4,5, Anatum, Enteritidis, Johannesburg, Corvallis e Senftenberg. Os maiores percentuais de resistência foram para sulfametoxazol (91,0%), sulfonamidas (51,0%) e ceftiofur (28,9%). O gene spvC foi detectado somente no sorovar Enteritidis, enquanto o gene intl1 esteve presente em seis dos dez sorovares analisados, o gene sul1 em três deles sempre em associação com intl1 e o gene blaTEM não foi identificado. Conclui-se com essa pesquisa que existe uma variedade de sorovares circulantes em granjas de postura e em ovos comerciais; a investigação fenotípica de resistência aos antimicrobianos aliada a pesquisa dos genes de virulência e de resistência aos antibióticos em isolados de Salmonella sp. circulantes em granjas de postura comercial são importante ferramenta de investigação para determinação do perfil genético dessas bactérias. Palavras
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Sistemas líquido-cristalinos de monoleína e água para veiculação de antimicrobianos com aplicabilidade bucal / Liquid crystalline systems formed by monoolein and water with antimicrobial agents to buccal release

Carla Souza 26 March 2013 (has links)
Cristais líquidos são sistemas que se apresentam em um estado intermediário entre o estado sólido e líquido. A monoleína é um lipídio polar com capacidade de formar diferentes tipos de cristais líquidos liotrópicos na presença de água, caracterizados como fase lamelar, cúbica e hexagonal. Devido à capacidade de controlar a liberação dos fármacos incorporados e às propriedades mucoadesivas, estes sistemas são considerados potenciais veículos para a liberação controlada de fármacos na mucosa bucal. Sabendo que o desenvolvimento da cárie e doença periodontal está relacionado com a formação do biofilme, é necessário seu controle e prevenção para manutenção da saúde bucal. Dentre os agentes químicos disponíveis para prevenir e/ou diminuir a formação do biofilme, cloreto de cetilpiridínio (CCP), polihexametileno biguanida (PHMB) e Triclosan® têm sido amplamente utilizados. Em vista disso, o objetivo deste estudo foi desenvolver e caracterizar sistemas líquido-cristalinos de fase lamelar e cúbica formados por monoleína e água contendo antimicrobianos com aplicabilidade bucal. Os sistemas foram desenvolvidos usando monoleína e água e os antimicrobianos avaliados foram o CCP, o PHMB e o Triclosan®. A formação das fases líquido-cristalinas com e sem a presença de cada fármaco estudado foi identificada por microscopia de luz polarizada. Além disso, foi avaliado o intumescimento dos sistemas contendo os fármacos estudados após contato com saliva artificial; a atividade antimicrobiana e o perfil de liberação in vitro, bem como o tempo de permanência e a força de mucoadesão ex vivo em mucosa de bochecha de porco. Foi possível obter os sistemas líquido-cristalinos para os fármacos avaliados, e o intumescimento de todos os sistemas foi caracterizado como cinética de segunda ordem. Os resultados do perfil de liberação e da atividade antimicrobiana in vitro para PHMB e Triclosan® foram favoráveis para aplicação bucal, no entanto, o CCP não é adequado para veiculação neste sistema. O perfil de liberação dos fármacos à partir desses sistemas foi influenciado pelas propriedades físico-químicas e concentração dos fármacos, bem como pelo intumescimento. Ainda, a fase lamelar apresentou maior tempo de permanência que a fase cúbica e a força de mucoadesão média da fase lamelar foi de 1,02 ± 0,50 N e da fase cúbica foi de 0,45 ± 0,10 N. Logo, os sistemas líquido-cristalinos de monoleína e água são um interessante veículo com potencial para liberação controlada dos antimicrobianos PHMB e Triclosan® na mucosa bucal com o objetivo de otimizar a eficácia destes fármacos. / Liquid crystals are systems which are in an intermediate state between solids and liquids. Monoolein is a polar lipid capable of forming different types of lyotropic liquid crystals in aqueous environment, which can be classified into lamellar, cubic and hexagonal mesophases. Due to its ability to control drug release and its mucoadhesive properties, these systems have been considerated as potential vehicle to control drug release on buccal mucosa. Based on the knowledge that the development of caries and periodontal disease is related to the biofilm formation, it is necessary their control and prevention to maintain the buccal health. Among the available chemical agents to prevent and/or reduce biofilm formation, cetylpyridinium chloride (CPC), polyhexamethylene biguanide (PHMB) and Triclosan® have been widely used. Based on these facts, the objective of this study was to develop and characterize liquid-crystalline systems formed by monoolein and water, containing antimicrobial agents with buccal applicability. The systems were developed using monoolein and water, and the antimicrobial agents evaluated were CCP, PHMB and Triclosan®. The liquid-crystalline phases with and without the presence of each drug was identified by polarized light microscopy. Furthermore, it was evaluated the swelling of the systems containing the drugs studied after contact with artificial saliva; the in vitro antimicrobial activity and its release profile, as well as the residence time and ex vivo mucoadhesion strength on pig cheek mucosa. It was possible to obtain liquid-crystalline phases for all drugs, and the swelling of all systems was characterized according to second-order kinetics. The results of release profile and antimicrobial activity in vitro to PHMB and Triclosan® were favorable for buccal application, however CCP is not suitable to be released from these systems. The drug release profile from these systems was influenced by the physicochemical properties and loading of the drugs, as well as by swelling. Furthermore, the lamellar phase showed greater residence time that the cubic phase and the mucoadhesion strength average of lamellar phase was 1.02 ± 0.50 N and for cubic phase was 0.45 ± 0.10 N. Thus, the liquid crystalline systems forming by monoolein and water are an interesting vehicle with potential to control release of the PHMB and Triclosan® on the buccal mucosa in order to optimize the drug effectiveness.
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Atividade antimicrobiana de extratos e frações do cultivo in vitro de Lentinula edodes contra Xanthomonas axonopodis pv passiflorae, Guignardia citricarpa, Colletotrichum sublineolum e Tobacco mo / Antimicrobial activity of extracts and fractions from culture in vitro of Lentinula edodes against Xanthomonas axonopodis pv passiflorae, Guignardia citricarpa, Colletotrichum sublineolum and Tobacco mosaic virus

Marizete de Fátima Pimentel Godoy 29 September 2008 (has links)
Os cogumelos comestíveis contêm substâncias funcionais de interesse, tais como proteínas e glucanas, as quais apresentam potencial antimicrobiano contra bactérias, fungos e até mesmo propriedades antivirais. O objetivo deste trabalho foi identificar extratos do cultivo in vitro do micélio de Lentinula edodes com propriedades contra fitopatógenos. Duas linhagens de L. edodes foram cultivadas em pequena escala em três diferentes meios de cultivo e após 0, 20, 40 e 60 dias, o micélio e o filtrado foram extraídos com solventes de diferentes polaridades. Os extratos foram testados contra Xanthomonas axonopodis pv passiflorae e Guignardia citricarpa, para verificar as melhores condições de cultivo para a produção de compostos bioativos. Com isso, foram selecionados os meios GPL (glicose, peptona e extrato de levedura) e SML (sacarose, extrato de malte e extrato de levedura) para o cultivo em grande escala de L. edodes. Após 60 dias, o micélio foi extraído com etanol, etanol 70% e água. O filtrado foi extraído com acetato de etila através de partição líquido-líquido. Os extratos foram testados contra G. citricarpa, Colletotrichum sublineolum e o Vírus do mosaico do fumo (TMV). Os extratos etanol e etanol 70% do meio SML foram ativos in vitro contra os fungos, constatando-se através de RMNH1, a presença, nestes extratos, de possíveis açúcares ausentes no meio de cultivo. As suspensões de TMV foram inoculadas mecanicamente em Nicotiana tabacum var. TNN (hospedeira de lesão local) cultivadas em casa de vegetação, através do método da meia-folha. Somente o extrato aquoso do micélio da linhagem LE 96/17 inibiu a expressão de sintomas de lesão local pelo TMV e a taxa de inibição foi de 82% na concentração de 0,5 mg/mL. Este extrato ativo foi purificado por coluna de Sephadex, rendendo 16 frações, sendo que as frações ativas 6/7 e 8/9 reduziram a infectividade do TMV em 95,5 % e 79%, respectivamente. Os espectros de RMNH1 sugeriram que estas frações são constituídas possivelmente por peptídeos e composto aromático. Os resultados de espectrometria de massas revelaram a provável presença de compostos já descritos na literatura e que apresentam conhecida atividade antimicrobiana. Experimentos comprovaram que o extrato bruto ativo não apresentou efeito viricida e, este mesmo extrato e a subfração resultante, não induziram resistência nas plantas de fumo. / Edible mushrooms contain functional compounds, such as proteins and glucans, which exhibit antimicrobial potential against bacteria, fungi and antiviral activity. The aim of this work was to identify extracts from submerged mycelium of Lentinula edodes with antimicrobial properties against phytopathogens. Two strains of L. edodes were grown in small scale in three different culture media and after 0, 20, 40 and 60 days, the mycelium and the filtrate were extracted with solvents of different polarities. Extracts were bioassayed against Xanthomonas axonopodis pv passiflorae and Guignardia citricarpa to verify the best condition for growth to produce bioactive compounds. After this, L. edodes was grown in large scale in the selected media, GPL (glucose, peptone and yeast extract) and SML (sucrose, malt extract and yeast extract). After 60 days, the mycelium was extracted with ethanol, ethanol 70% and water. The filtrate was extracted through liquid-liquid partition with ethyl acetate. The extracts were bioassayed against G. citricarpa, Colletotrichum sublineolum and Tobacco Mosaic Virus (TMV). The ethanol and ethanol 70% extracts from medium SML were active in vitro against the fungi and it was verified through H1NMR, the possible presence of sugars in these extracts, which were absent in the culture medium. The TMV suspensions were mechanically inoculated in Nicotiana tabacum TNN (local lesion host) grown in greenhouse, through the half-leaf method. Only the mycelium aqueous extract of strain LE 96/17 inhibited the expression of symptoms of local lesions by TMV and the inhibition ratio was around 82% at 0.5 mg/mL. This active extract was purified by Sephadex column, yielding 16 fractions. Active fractions 6/7 and 8/9 reduced infectivity by 95.5 and 79%, respectively. The H1NMR spectra suggested that fractions 6/7 and 8/9 possibly have peptides and aromatic compound. The results of mass spectrometry revealed the possible presence of compounds already described in the literature and exhibiting antimicrobial activity. The experiments showed that the active crude extract did not exhibit viricidal effect and that such extract and its resulting subfraction inhibited the infectivity of TMV and did not induce resistance in tobacco plants.
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Genes codificadores dos peptídeos antimicrobianos e de outras proteínas envolvidas na resposta imune de in Apis mellifera / Genes encoding antimicrobial peptides and immune-related proteins in Apis mellifera.

Anete Pedro Lourenço 11 January 2008 (has links)
Os insetos desenvolveram um sistema imune eficiente contra parasitas e patógenos, que compreende a resposta celular e a humoral. Os mecanismos celulares envolvem a fagocitose e a encapsulação pelos hemócitos, enquanto que as respostas humorais incluem a ativação da Profenoloxidase, e a síntese pelo corpo gorduroso dos peptídeos antimicrobianos, que são liberados na hemolinfa. Duas vias de sinalização intracelular, Toll e Imd, controlam a expressão dos genes codificadores dos peptídeos antimicrobianos. A análise do Genoma da abelha Apis mellifera permitiu a identificação dos genes dessas vias. No entanto, pouco se conhece do mecanismo de resposta imune nessas abelhas. Desta maneira, nos propusemos analisar a transcrição de genes efetores da resposta imune (abaecina, hymenoptaecina, defensina, transferrina, profenoloxidase), assim como os genes integrantes das vias de sinalização, tais como os genes de reconhecimento de microorganismos (PGRP, GNBP) e ainda, os de sinalização (cactus, relish, dorsal 1-B). Avaliamos também possíveis proteínas implicadas na resposta imune, como as proteínas de estocagem Vitelogenina, Hexamerina 70a, Lipoforina I/II e Lipoforina III. Finalmente, analisamos o efeito da nutrição e do envelhecimento sobre a imunidade em abelhas. Para análise da expressão dos genes das vias de sinalização, as abelhas foram infectadas com bactérias Serratia marcescens ou Micrococcus luteus por injeção ou via alimentação. A infecção com esses microorganismos provocou a transcrição de peptídeos antimicrobianos e de transferrina em altas quantidades após 3 e 12 horas de tratamento, além da alteração na quantidade de transcritos de outros genes. O papel dos genes profenoloxidase e dorsal na imunidade, descritos como codificadores de importantes proteínas em outros insetos, foi avaliado através da metodologia de silenciamento gênico por RNA de interferência. Observamos a diminuição da transcrição do gene alvo, mostrando a eficiência da metodologia. No entanto, a simples injeção de um RNA de fita dupla foi capaz de ativar o sistema imune de abelhas. Este efeito contribuiu para a dificuldade de atribuição do papel da Profenoloxidase na imunidade de abelhas. Contudo, os resultados de silenciamento de dorsal e suas isoformas, nos levaram a considerar que dorsal 1-A ou dorsal 2 participam da via de sinalização intracelular para produção de peptídeos antimicrobianos, principalmente de defensina. Em relação às proteínas de estocagem, tanto a quantidade de transcritos quanto de proteínas diminui após infecção com bactérias, indicando que estas proteínas estão envolvidas de alguma forma no processo de imunidade em abelhas. Além disso, consumo de alimentos ricos em proteína aumentou os níveis de transcritos das proteínas de estocagem, o que muito provavelmente favorece a manutenção da capacidade de resposta imune de abelhas. O efeito do envelhecimento no declínio da imunidade foi analisado em abelhas nutridoras (novas) e forrageiras (velhas) de uma colônia típica. Além disso, foram utilizadas abelhas de uma colônia single-cohort, que eram de uma mesma idade, mas algumas eram nutridoras, enquanto outras eram forrageiras. Todas as abelhas, independentemente da idade ou comportamento, foram capazes de ativar o sistema imune após infecção pela bactéria S. marcescens. No entanto, as abelhas com o comportamento de forrageira, independentemente da idade, sempre foram mais susceptíveis a infecções que as nutridoras. Este fato se deve, muito provavelmente, às diferenças fisiológicas entre essas abelhas, que proporciona às nutridoras maior competência à sobrevivência. / Insects have developed an efficient immune system against parasites and pathogens, which is comprised of both cellular and humoral responses. The cellular mechanisms involve phagocytosis and encapsulation by hemocytes, whereas the humoral responses include activation of prophenoloxidase and synthesis of antimicrobial peptides by the fat body, which are released into the hemolymph. Two signaling pathways, Toll and Imd, control the expression of genes encoding antimicrobial peptides. Genome-wide analyses of the honey bee, Apis mellifera, have identified predicted genes for these signaling pathways. However, immune response mechanisms in honey bees were not yet in depth studied. We analyzed the transcription of effector genes (abaecin, hymenoptaecin, defensin, transferin, prophenoloxidase), as well as other immune genes, such as pathogen recognition genes (PGRP, GNBP) and signaling genes (cactus, relish, dorsal 1- B). We also investigated the role of the storage proteins Vitellogenin, Hexamerin 70a, Lipophorin I/II and Lipophorin III in the honey bee immunity. Finally, we analyzed the effect of nutrition and aging on honey bee immunity. Gene expression of signaling pathway components was assessed in honey bees that had been infected with the bacteria Serratia marcescens or Micrococcus luteus through injection or oral challenge. Honey bees infected with these microorganisms had strong up-regulation of antimicrobial peptide genes and of transferin, and also other changes in transcript abundance after 3 and 12 hours of challenge. The roles of prophenoloxidase and dorsal in the immune response, described as genes encoding important proteins in other insects, were also investigated. In this case we used RNA interference (RNAi) to silence the expression of these genes. RNAi efficiently silenced the target genes. However, injection of doublestranded RNA in honey bees induced a reaction by the immune system. This made it difficult to determine the role of prophenoloxidase in honey bee immunity. Yet, silencing of dorsal and its isoforms led us to consider dorsal 1-A or dorsal 2 as members of the signaling pathways that produce antimicrobial peptides, especially defensin. The abundance of storage proteins transcripts and proteins was lower in infected bees than in controls, giving evidence that these proteins participate in the immune process in honey bees. Moreover, protein consumption caused up-regulation of genes encoding storage proteins, which may favor the maintenace of the immune response capacity. The effect of aging on decline in immunity was analyzed in (young) nurse bees and (old) foragers from normal free-flying colony. We also examined bees from a single-cohort colony, in which all individuals were at the same age; but some were nursing, while others were foraging. All the bees, independent of age or behavior, were able to activate the immune system after infection with S. marcescens. However, foragers, independent of age, were always more susceptible to infections than were nurse bees. This is probably due to physiological differences between bees, which confers to the nurses more competence to survivorship.
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Isolamento e identificação de compostos com atividade antibacteriana da própolis vermelha brasileira / Isolation and identification of compounds presenting antibacterial activity in Brazilian red propolis

Ingridy Simone Ribeiro Cabral 31 October 2008 (has links)
A própolis é uma substância resinosa coletada pelas abelhas de diversas partes das plantas, à qual têm sido atribuídas propriedades antimicrobiana, antioxidante, antinflamatória, antiviral, entre outras. Sua composição química depende de vários fatores, como a localização geográfica. Um novo tipo de própolis brasileira, denominada de própolis vermelha, por sua coloração intensa característica, foi identificada e coletada em região de mangue do Estado de Alagoas. O objetivo deste trabalho foi fracionar e isolar compostos com atividade antibacteriana dessa nova variedade de própolis. O extrato etanólico da própolis vermelha foi fracionado pela técnica de extração líquido-líquido, originando as frações hexânica (fr-Hex) e clorofórmica (fr-Clo). A fr-Clo apresentou alta atividade antibacteriana pelos testes de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM), contra as bactérias Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans e Actinomyces naeslundii. Dessa forma, a fr-Clo foi refracionada por coluna seca gerando sete sub-frações. Após a avaliação da atividade antibacteriana das sub-frações pelas técnicas de CIM e CBM, a sub-fração 3, a mais bioativa, foi purificada em coluna de Sephadex LH-20. Dessa purificação foram obtidas três sub-frações bioativas, as quais foram submetidas ao isolamento dos compostos pela técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) preparativa. Dois compostos foram isolados e denominados de composto 1 e composto 2. O composto 2 foi o mais potente para as atividades inibitória e bactericida e sua CIM para os três tipos de bactéria testados variou entre 15,6 e 31,2 µg/mL, enquanto para o composto 1, este parâmetro variou de 31,2 a 62,5 µg/mL. As CBM do composto 1 e do composto 2 variaram entre 125 e 250 µg/mL e entre 31,2 e 62,5 µg/mL, respectivamente. Por meio da técnica Ressonância Magnética Nuclear (RMN) foi possível identificar o composto 1 como pertencente à classe das isoflavanas e o composto 2 como uma chalcona (isoliquiritigenina). A forte atividade antibacteriana apresentada pelos compostos isolados da própolis vermelha torna este produto uma importante fonte de compostos antibacterianos naturais. / Propolis is a resinous material, collected by honeybees from several parts of plants, known for its antimicrobial, antioxidant, anti-inflammatory, antiviral properties, among others. Its composition varies according to several factors, such as the geographical location. A novel type of Brazilian propolis, named red propolis due to its intense characteristic color, was collected in a mangrove area in the State of Alagoas. This research aimed to fractionate and isolate the compounds in this new type of propolis that present antibacterial activity. The ethanolic extract of red propolis (EEP) was fractionated using the liquid-liquid extraction technique, yielding the hexanic (Hex-fr) and the chloroformic fractions (Chlo-fr). Chlo-fr showed high antibacterial activity determined by the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) tests against Staphylococcus aureus Streptococcus mutans, and Actinomyces naeslundii. Thus, Chlo-fr was refractionated by Dry-Column Chromatography, yielding seven subfractions. After submitted to MIC and MBC techniques to assess their antibacterial activity, and subfraction 3, the most bioactive of them, was purified in Sephadex LH-20 column. After this purification, three bioactive subfractions were obtained, submitted to isolation of compounds using preparative High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Two compounds were isolated and named compound 1 and compound 2. Compound 2 presented the highest inhibitory and bactericidal activities and its MIC for the three types of bacteria tested ranged from 15.6 to 31.2 µg/mL, whereas for compound 1, this parameter ranged from 31.2 to 62.5 µg/mL. MBC of compound 1 and compound 2 ranged from 125 to 250 µg/mL and from 31.2 to 62.5 µg/mL, respectively. Through Nuclear Magnetic Resonance tecnique (NMR), it was possible to identify the compound 1 as belonging to class of isoflavans and the compound 2 as a chalcone (isoliquiritigenin). Due to the strong antibacterial activity presented by the compounds isolated from red propolis, it can be concluded that this product is an important source of natural antibacterial compounds.
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Epidemiologia e perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de bactérias clinicamente relevantes, isoladas no Hospital Universitário da UFJF: implicações na higiene, limpeza e no gerenciamento do controle de infecção hospitalar

Bouzada, Maria Lucia Morcerf 25 September 2009 (has links)
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-29T14:48:03Z No. of bitstreams: 1 marialuciamorcerfbouzada.pdf: 9067703 bytes, checksum: 2940aab07899460cc22fb287a8d86abc (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-30T11:21:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marialuciamorcerfbouzada.pdf: 9067703 bytes, checksum: 2940aab07899460cc22fb287a8d86abc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T11:21:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marialuciamorcerfbouzada.pdf: 9067703 bytes, checksum: 2940aab07899460cc22fb287a8d86abc (MD5) Previous issue date: 2009-09-25 / É bem estabelecido que patógenos putativos bacterianos são ubíquos e amplamente distribuídos no ambiente hospitalar. Este estudo teve como objetivos detectar a persistência bacteriana no ambiente nosocomial, após a limpeza por varredura úmida pela equipe associada ao serviço de Higiene e Limpeza Hospitalar e determinar os perfis de susceptibilidade dos microrganismos persistentes a drogas antimicrobianas e aos desinfetantes comumente utilizados no serviço de saúde. A água de enxágüe da varredura úmida para limpeza de áreas críticas do Hospital Universitário da Universidade Federal de Juiz de Fora foi processada para isolamento seletivo de representantes da família Enterobacteriaceae (ENT), bastonetes Gram negativo não fermentadores (BGNF), estafilococos coagulase negativo (SCN) e enterococos (ENT). Os microrganismos foram caracterizados bioquimicamente e os perfis de susceptibilidade a antimicrobianos e desinfetantes avaliados pelos métodos de difusão em disco e diluição em ágar. Quinhentos e quarenta e sete linhagens bacterianas foram recuperadas mas, somente estafilococos coagulase negativo e bastonetes Gram negativo não fermentadores foram isoladas em todas as áreas críticas. Foi detectado resistência a todas as drogas testadas com exceção para vancomicina em estafilococos coagulase negativo. Pelo menos 44% das bactérias isoladas apresentaram resistência a mais de uma droga. Os padrões de susceptibilidade aos desinfetantes variaram entre as concentrações 0,125 a 1,0% (quaternário de amônia, hipoclorito de sódio e ácido peracético/H2O2). Hospitais podem funcionar como reservatório de microrganismos, muitos dos quais podem se apresentar mutirresistentes aos antibióticos. Alguns destes microrganismos podem ser veiculados por pacientes e funcionários. Prevenir o espalhamento de microrganismos de relevância clínica depende da qualidade do serviço de limpeza hospitalar. O monitoramento da susceptibilidade bacteriana a antimicrobianos e aos desinfetantes pode ajudar no gerenciamento de infecções hospitalares. / It is well known that putative pathogenic bacteria are ubiquitous and widely distributed in the hospital environment. This study aimed to detect bacterial persistence in the nosocomial environment after mopping by the cleaning staff. Microorganism susceptibility patterns to antimicrobial drugs and disinfectants commonly used in health services were also investigated. Rinse water of mops used to clean critical areas of the Federal University of Juiz de Fora University Hospital was processed for selective isolation of enterobacteriaceae (GNR), non-fermenting Gram negative rods (NFGNR), coagulase-negative staphylococci (CNS) and enterococci (ENT). Isolated bacteria were biochemically characterized and their susceptibility patterns to antimicrobial drugs and disinfectants evaluated by disk diffusion and agar dilution methods. Five hundred and forty seven bacterial strains were recovered but only CNSs and NFGNRs isolated in the critical areas. Resistance was detected against all drugs with exception of CNS to vancomycin. At least 44% of the isolated bacteria were resistant to more than one drug. Susceptibility patterns to disinfectants were determined to concentrations in the range of 0.125 to 1% (quaternary ammonium, sodium hypochlorite and peracetic acid/H2O2). Hospitals provide reservoirs of microorganisms many of which may be multiresistant to antibiotics. Some of these organisms are borne by patients and staff, but the hospital environment is a substantial repository for others. Preventing the spread of clinical relevant bacteria depends on the quality of hospital cleaning services. Monitoring bacteria susceptibility to antimicrobials and disinfectants may help the management of nosocomial infections.
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Avaliação do potencial terapêutico e estudo da atividade imunomodulatória e antimicrobiana in vitro e in vivo de diferentes formas de clavaninas

Silva, Osmar Nascimento 24 February 2010 (has links)
Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-04-27T12:18:28Z No. of bitstreams: 1 osmarnascimentosilva.pdf: 3091891 bytes, checksum: 8e0f2ed0de0225b3ed16c08cdd6fee62 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:47:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 osmarnascimentosilva.pdf: 3091891 bytes, checksum: 8e0f2ed0de0225b3ed16c08cdd6fee62 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:47:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 osmarnascimentosilva.pdf: 3091891 bytes, checksum: 8e0f2ed0de0225b3ed16c08cdd6fee62 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As infecções relacionadas à assistência à saúde (IrAS), são uma das principais causas de mortalidade e aumento dos custos hospitalares em países desenvolvidos e em desenvolvimento. Nos casos em que um paciente adquire uma IrA e esta não é tratada adequadamente, a mesma pode evoluir para um quadro mais grave, podendo levar a sepse e consequentemente na maioria dos casos a morte. A sepse representa um importante problema de saúde pública, entretanto, um tratamento eficaz para esta síndrome ainda não foi encontrado. Peptídeos antimicrobianos foram relatados para modular a resposta à infecção bacteriana na sepse, independente dos mecanismos de resistência conhecidos para os antibióticos. Desta forma, procurou-se investigar a atividade imunomodulatória de duas formas de clavaninas sobre monócitos RAW 264.7, bem como a atividade antimicrobiana e a citotoxicidade in vitro. Em ensaios in vivo a genotoxicidade, a ação das clavaninas sobre a migração de neutrófilos e a eficácia do tratamento com as clavaninas em um modelo de infecção de ferida operatória por S. aureus e sepse polimicrobiana grave também foram avaliadas. Os estudos in vitro demostraram que as clavaninas inibiram completamente o crescimento de E. coli, K. pneumoniae e S. aureus, preveniram a secreção de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-12) e NO, e aumentaram a secreção de IL-10. Além disso, as clavaninas não apresentaram atividade citotóxica sobre as células RAW 264.7. Nos experimentos in vivo, as clavaninas não apresentaram genotoxicidade, além de apresentarem-se quimoatraentes para neutrófilos. As clavaninas, também, reduziram significativamente as unidades formadoras de colônias de S. aureus no modelo experimental de ferida operatória, e reduziram a mortalidade dos animais sépticos em mais de 50%, quando comparados com animais controle. Devido à sua ação direta sobre células do sistema imune e microorganismos, as clavaninas aparentam ser compostos potenciais para o tratamento de infecções bacterianas graves como a sepse, demonstrando alto valor biotecnológico. / Healthcare-associated infections (HAIs) are a major cause of mortality, also increasing hospital costs in developed and developing countries. When a patient acquires HAIs and this is not properly handled, disease may clearly worst, leading to sepsis and consequently in major to death. Despite of sepsis represents an important public health problem, any effective treatment for this syndrome was obtained until now. In this view, antimicrobial peptides have been reported as modulators of immune response to bacterial infection in sepsis, with independent activity of mechanisms that lead to antibiotic. Thus, the immunomodulatory activity of two different forms of clavanins over RAW 264.7 monocytes, as well the in vitro antimicrobial and cytotoxic activities were here investigated. Furthermore, in vivo genotoxicity assays, the evaluation of clavanins activity on neutrophil migration and also the efficacy of treatment with clavanins in a wound S. aureus infection model and severe polymicrobial sepsis were also evaluated. Moreover, in vitro studies demonstrated that clavanins are able of inhibit the growth of E. coli, K. pneumoniae and S. aureus. Clavanins also prevented the secretion of proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-12) and NO, and increased the IL-10secretion. In addition, clavanins showed none cytotoxicity on RAW 264.7 cells. During in vivo experiments, the clavanins showed no genotoxicity, showing however, a clear chemotactic effect for neutrophils. Clavanins also significantly reduced the colony-forming units of S. aureus in an experimental model of surgical wound infection and reduced the mortality of septic animals in more than 50 %, when compared to control group. Due to their direct activities over immune cells and microorganisms, clavanins are potential compounds for the treatment of serious bacterial infections such as sepsis, showing an enormous and remarkable biotechnological value.
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Prospecção de peptídeos bacterianos com atividade anti-Leishmania

Silva, Carolina dos Santos Fernandes da 31 October 2016 (has links)
Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-05-10T13:03:57Z No. of bitstreams: 1 carolinadossantosfernandesdasilva.pdf: 3138226 bytes, checksum: 48d21f2f7120dba69bf9b23c69d8ed0b (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-05-22T15:24:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carolinadossantosfernandesdasilva.pdf: 3138226 bytes, checksum: 48d21f2f7120dba69bf9b23c69d8ed0b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-22T15:24:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carolinadossantosfernandesdasilva.pdf: 3138226 bytes, checksum: 48d21f2f7120dba69bf9b23c69d8ed0b (MD5) Previous issue date: 2016-10-31 / Peptídeos antimicrobianos são um grupo diverso de moléculas bioativas produzidas naturalmente por uma variedade de organismos procariotos e eucariotos, e que tem atividade antimicrobiana. Tendo em vista que o Brasil representa o país de maior incidência de leishmaniose no continente americano e a inexistência de peptídeos bacterianos com atividade neste parasito, o objetivo desde trabalho foi a prospecção de peptídeos produzidos por bactérias com ênfase na atividade anti-Leishmania. Foram utilizadas 466 amostras bacterianas para a obtenção de extratos brutos extracelulares, investigados quanto a atividade antimicrobiana total, utilizando como células-alvo culturas de bactérias (Grampositivas e negativas), leveduras (Candida sp) e Leishmania sp. Esta avaliação da atividade antimicrobiana total permitiu definir as amostras produtoras de substâncias bioativas, bem como a caracterização do espectro de ação da substância antimicrobiana. E somente os extratos que tiveram atividade anti- Leishmania foram submetidos a precipitação protéica para avaliação da produção de peptídeos antimicrobianos. Quanto à caracterização da amostra produtora, foram realizados testes morfo-tintoriais, genéticos e metabólicos para garantia da pureza da cultura e determinação do melhor momento fisiológico de produção da substância antimicrobiana. Em relação ao espectro de ação, 222 extratos tiveram atividade antagônica ao crescimento bacteriano; 05 extratos tiveram atividade antagônica à Candida sp.; e 20 extratos tiveram atividade antagônica ao crescimento de Leishmania sp., totalizando 51 % de amostras positivas para produção de substâncias antimicrobianas. Quanto à atividade anti-Leishmania, os valores médios de inibição de extratos a 20 mg/mL em formas promastigotas do parasito pelo método do MTT foi de 33 % em L. braziliensis e L. chagasi, 30,7 % em L. major e 29 % em L. amazonensis. A redução da viabilidade de formas amastigotas também foi observada para o extrato bruto a 40 mg/mL de Staphylococcus edpidermidis (CGP360), com valor de 60 %. E esse mesmo extrato não apresentou toxicidade para macrófagos peritoneais, resultado importante para novas drogas de uso sistêmico. Quanto à caracterização da amostra produtora, observou-se que a produção da substância antagonista com maior atividade anti- Leishmania ocorreu em extratos advindos de culturas crescidas em meios TSB e BHI e provenientes da fase estacionária de crescimento. Estudos adicionais devem ser realizados para uma melhor compreensão da interação dos extratos bacterianos em espécies de Leishmania, mas os resultados descritos neste trabalho são promissores e inéditos na literatura científica. / Antimicrobial peptides are a diverse group of bioactive molecules naturally produced by a variety of prokaryotic and eukaryotic organisms with antimicrobial activity. Brazil represents the highest incidence country of leishmaniasis in the American continent, so the objective of this work was prospect bacteria peptides with anti-Leishmania activity. A total of 466 bacterial samples were used to produce extracellular crude extracts to evaluate antimicrobial activity against bacterial cells (Gram-positive and negative bacteria), yeast (Candida sp) and Leishmania sp. and characterize antimicrobial spectrum of action. Only Leishmania activity extracts were submitted to protein precipitation and tested to peptides production. The producing sample were characterized by genetic, morphologic and metabolic tests, and the best physiological moment of peptides production was determinate. The results showed that 222 extracts had bacterial activity, 05 extracts had Candida activity, and 20 extracts had Leishmania activity, summarizing 51 % of positive samples to antimicrobial substances production. For promastigote Leishmania activity, 20 mg/ mL extracts showed inhibition values by MTT method of 33 % in L. braziliensis and L. chagasi, 30.7 % in L. major and 29 % in L. amazonensis. The amastigote forms viability was observed for 40 mg/mL crude extract of Staphylococcus edpidermidis (CGP360), with a reduction value of 60 %. And this same extract did not have toxicity to peritoneal macrophages, an important result for new drugs of systemic use. Concerning the characterization of the producing sample, it was observed that the production of the antagonistic substance with the highest anti-Leishmania activity occurred in TSB and BHI media extracts coming from stationary phase. Additional studies should be performed to better understand the interaction of bacterial extracts in Leishmania species, but the results described in this paper are promising and unpublished in the scientific literature.

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