Os micro-organismos endofíticos são aqueles que habitam o interior de um tecido vegetal, intra ou extracelularmente sem causar-lhe nenhum prejuízo. Eles possuem uma relação de simbiose (relação interespecífica de forma mutuamente vantajosa) com a planta e podem, por isto, sintetizar substâncias com alto potencial biotecnológico. Neste trabalho, objetivou-se a avaliação da capacidade dos fungos endofíticos isolados do mangue do litoral sul do estado de São Paulo, em produzirem compostos com atividade biológica: antimicrobiana, antiproliferativa, antioxidante e leishmanicida. Os extratos brutos de doze fungos endofíticos foram avaliados quanto a sua capacidade antimicrobiana contra uma bactéria Gram-positiva, uma bactéria Gram-negativa e uma levedura patogênica pelo método de microdiluição em placa. Três dos doze fungos endofíticos testados, Diaporthe phaseolorum 41.1(1), Diaporthe sp. 54(4) e Gibberella moniliformis 99(3), destacaram-se neste teste (CIM de 62,500 a 125,000µg/mL) e posteriormente, foram realizadas as demais avaliações de atividade biológica com eles. Verificou-se atividade antioxidante pelo método DPPH (1,1-difenil-2-picrilidrazil) abaixo dos valores encontrados para os padrões butil hidroxi tolueno (BHT) (66,310% ±0,019) e ácido ascórbico (96,047% ±0,005) para os extratos dos fungos testados: D. phaseolorum 41.1(1) (8,357% ±0,005), Diaporthe sp. 54(4) (8,747% ±0,018) e G. moniliformis 99(3) (29,640% ±0,011). Somente o extrato bruto do fungo Diaporthe sp. 54(4) apresentou atividade antiproliferativa contra as linhagens de células tumorais testadas. Foram necessários 2,700µg/mL para inibir 50% do crescimento de células de leucemia K562 e 7,200µg/mL para inibir a mesma porcentagem de células tumorais de glioma K51, sendo considerado um extrato com atividade moderada contra estas linhagens tumorais. O extrato do endófito D. phaseolorum 41.1(1) demonstrou melhor atividade leishmanicida, sendo que a concentração de 7,197µg/mL inibe o crescimento de cinquenta porcennto das formas promastigotas de Leishmania amazonensis. Estes resultados destacam a importância do estudo destes micro-organismos do mangue, pois eles podem ser uma fonte de várias substâncias com atividade de interesse farmacológico. / Endophytic microorganisms are those that inhabit the interior of plant tissues, intra-or extracellularly without causing any damages. They have a symbiotic relation with the plant and they can synthesize substances with high biotechnological potential. This study aimed to review the capacity of mangrove endophytic fungi isolated from the southern coast of São Paulo state in producing compounds with biological activity: antimicrobial, antiproliferative and antioxidant. Twelve endophytic fungi extracts were screened for their antimicrobial properties against Gram-positive bacteria, a Gram-negative bacteria and pathogenic yeast by microdilution plate method. Three of them, Diaporthe phaseolorum 41.1 (1), Diaporthe sp. 54 (4) and Gibberella moniliformis 99 (3), stood out in this test (MIC 62.500 to 125.000µg/mL) and then were held other biological activities assays with them. The scavenging capacity (average sequestrant capacity + standard deviation), at 90 ppm was measured by DPPH (1,1-diphenyl-2-picrilidrazyl) method and it was found values ​​found for BHT (butil hydroxi toluen) patterns (66.310% ± 0.019) and ascorbic acid (96.047% ± 0.005) and for the extracts of fungi tested which were below than the patterns: D. phaseolorum 41.1(1) (8.357%± 0.005), Diaporthe sp. 54(4) (8.747%± 0.018) and G.moniliformis 99(3) (29.640% ± 0.011). Only the Diaporthe sp. 54(4) crude extract presented antiproliferative activity against tumor cell lines tested wich 2.7µg/mL of the crude extract were required for 50% growth inhibition of leukemia cells K562 and 7.2µg/mL to inhibit the same percentage of K51 glioma tumor cells, this extract can be considered moderately active against these tumor cell lines. The extract of the endophytic D. phaseolorum 41.1 (1) showed better leishmanicidal activity, whereas the concentration of 7.197µg/mL inhibits 50% of the growth of Leishmania amazonensis promastigote forms.These results highlight the importance of these mangrove microrganisms study and show that they can be a source of various substances with pharmacological interest activity. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O uso de produtos naturais, principalmente de origem vegetal, na terapêutica medicinal representa a forma mais antiga e difundida de medicação. Ficus pumila, planta amplamente utilizada na ornamentação de muros e paredes, conhecida como hera-miúda ou unha-de-gato, apresenta inúmeras atividades biológicas. Pela população é utilizada como antitumoral, antiinflamatório, tônico e no tratamento de doenças como diabetes e hipertensão. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo estudar a composição química e as atividades antimicrobiana e antioxidante, além da citotoxicidade de extratos hidroetanólicos de caule, raiz, folhas e frutos secos e frescos de Ficus pumila. Em relação à composição química, os resultados encontrados revelaram a presença de taninos e flavonoides em todos os extratos. O maior teor de compostos fenólicos foi exibido pela raiz seca (724,39 mg AG/g) e o menor pelo caule fresco (84,8 mg AG/g). O maior teor de flavonoides foi apresentado pela folha seca (15,30 mg quercetina/g) e o menor pelo caule seco (1,29 mg de quercetina/g). Os testes microbiológicos indicaram a atividade dos extratos contra Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus e Proteus mirabilis. Os melhores resultados foram exibidos pelos extratos de caule e raiz. Os extratos não apresentaram atividade contra Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis (BCG). A maior atividade antioxidante foi demonstrada pelo extrato de caule fresco (12,81 μg/mL) e a menor pelo extrato de folha fresca (58,56 μg/mL). A avaliação da citotoxicidade frente à cultura celular revelou a ausência de citotoxicidade dos extratos de caule, raiz e fruto nas concentrações testadas. Concluiu-se que Ficus pumila pode ser, no futuro, uma fonte de compostos antioxidantes e antimicrobianos para o desenvolvimento de novos fármacos. / The use of natural products, mainly of vegetable origin in medical therapy is the oldest form of medication and widespread. Ficus pumila plant widely used in the decoration of walls and partitions, known as Ivy - girl or cat's claw, has numerous biological activities. By population is used as antitumor, anti-inflammatory, tonic and also for the treatment for some diseases such as diabetes and hypertension. In this context, the present work aimed to study the chemical composition and antimicrobial and antioxidant activities, beyond the cytotoxicity of hydroethanolic extracts of root, stalk, leaves and dried and fresh fruits of Ficus pumila. Regarding the chemical composition, the results revealed the presence of tannins and flavonoids in all extracts. The higher content of phenolic compounds was screened by dried root (724.39 mg AG / g) and the lowest by the fresh stem (84.8 mg AG/ g). The highest content of flavonoids was presented by drought (15.30 mg quercetin/ g) and the lowest by dry leaf stem (1.29 mg quercetin/ g). Microbiological tests indicated the activity of the extracts against Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus and Proteus mirabilis. The best results were shown by the extracts of stem and root. The extracts showed no activity against Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis H37 (BCG). The highest antioxidant activity was shown by extracts of fresh stem (12.81 mg/ mL) and lowest for fresh leaf extract (58.56 mg/ mL). The cytotoxicity against the cell culture revealed the absence of cytotoxicity of extracts of root, stalk and fruit concentrations tested. It was concluded that Ficus pumila may be in the future a source of antioxidants and antimicrobial compounds for drug development.

Lentinula edodes é um cogumelo comestível que possui qualidades nutricionais, terapêuticas e medicinais. Além disso, muitos estudos na área médica têm comprovado que o cogumelo possui efeito antibiótico sobre microrganismos patogênicos ao homem. Na área agrícola, alguns trabalhos realizados com o cogumelo demonstraram possíveis efeitos no controle de fitopatógenos. O presente trabalho teve como objetivo demonstrar a produção de substâncias antimicrobianas por L. edodes ativas sobre Colletotrichum sublineolum, agente causal da antracnose em sorgo, Alternaria solani, responsável pela pinta preta do tomateiro, Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae, agente causal da mancha bacteriana em maracujazeiro e Tobacco mosaic virus (TMV), causador de mosaico foliar em fumo. Para os testes com C. sublineolum e A. solani foram utilizados extratos aquosos de L. edodes, obtidos a partir de basidiocarpos desidratados em pó, dos isolados LE JAB-K, LE 96/22, LE 96/17 e LE 95/01. Os resultados evidenciaram que o extrato aquoso de basidiocarpos do isolado LE 96/22 inibiu o crescimento micelial in vitro e a formação de apressórios por C. sublineolum. Já os extratos dos isolados LE JAB-K e LE 95/01 apresentaram efeito inibitório na germinação de conídios e na formação de apressórios do patógeno. Em contrapartida, os extratos aquosos de basidiocarpos dos diferentes isolados de L. edodes não apresentaram efeito inibitório na germinação dos conídios e no crescimento micelial de A. solani. Por sua vez, os extratos aquosos de basidiocarpos a 20% (v/v) e o filtrado do crescimento micelial de L. edodes, misturados à suspensão de X. axonopodis pv. passiflorae, exibiram redução na multiplicação bacteriana. Todos os extratos aquosos de basidiocarpos dos diferentes isolados testados na multiplicação da bactéria mostraram-se termolábeis, quando autoclavados a 121 °C por 20 min. Em experimentos com plantas de fumo, os extratos aquosos de basidiocarpos dos isolados LE 96/17 e LE 96/22 adicionados à suspensão contendo partículas do TMV reduziram significativamente a ocorrência de lesões locais nas folhas. O extrato aquoso do isolado LE 96/22 apresentou compostos antivirais de natureza termoestável. Finalmente, o extrato aquoso de basidiocarpos do isolado LE 96/22, o qual apresentou a maior atividade antimicrobiana, foi purificado parcialmente por cromatografia de troca aniônica (CTA). O pico V apresentou efeito inibitório no crescimento micelial de C. sublineolum. Por sua vez, a multiplicação de X. axonopodis pv. passiflorae foi inibida pelos picos IV, V e VII. Já os picos I, II e III, obtidos em CTA por gradiente linear de NaCl e o pico I obtido em CTA pelo método "step wise", reduziram significativamente a infectividade do TMV em plantas de fumo. Com base nesses resultados, evidencia-se a ação de preparações de L. edodes sobre fitopatógenos, o que demonstra o uso potencial do mesmo no controle de agentes causais de doenças infecciosas em plantas. / Lentinula edodes is an edible mushroom that has nutritious, therapeutical and medicinal qualities. Moreover, many studies in the medical area have shown that the mushroom exhibits antibiotic effects on pathogenic microorganism to the man. In the agricultural area, work carried out with the mushroom has demonstrated its possible effects to control phytopathogens. The objective of the present work was to demonstrate the productionof antimicrobial substances of L. edodes active on Colletotrichum sublineolum, causal agent of anthracnose in sorghum, Alternaria solani, responsible for the black spot of the tomato plants, X. axonopodis pv. passiflorae, causal agent of the bacterial spot in passion fruit plants and on Tobacco mosaic virus, causal agent of the mosaic in tobacco plants. For the test with C. sublineolum and A. solani aqueous extracts were obtained from dehydrated fruiting bodies from the shiitake isolates LE JAB-K, LE 96/22, LE 96/17 and LE 95/01. The results showed that the fruiting body aqueous extract from isolate LE 96/22 inhibited micelial growth and appressorium formation by C. sublineolum. The aqueous extracts of isolates LE JAB-K and LE 95/01 exhibited inhibitory effect on conidium germination and on formation of appressorium by the patogen. On the other hand, the extracts of the different isolates of L. edodes did not exhibit inhibitory effect on conidium germination and micelial growth of A. solani. The aqueous extracts of fruiting bodies at 20% (v/v) concentration and filtrate of the micelial growth of L. edodes, when mixed to the suspension of X. axonopodis pv. passiflorae, exhibited decreased on bacterial multiplication. All the aqueous extracts of fruiting bodies tested from the different isolates in the bacterial multiplication were thermobile, when heated at 121 °C for 20 min. In experiments with tobacco plants, the aqueous extracts of fruiting bodies of isolates LE 96/17 and LE 96/22 when added to the suspension of TMV reduced the amount of local lesions on the leaves. When the aqueous extracts of LE 96/22 were heated the antiviral nature was not lost. Finally, the aqueous extract of fruiting bodies from isolate LE 96/22 that presented major antimicrobial activity was partially purified by anion exchange chromatography (AEC). The peak V exhibited inhibitory effect on micelial growth of C. sublineolum. Multiplication of X. axonopodis pv. passiflorae was inhibited by peaks IV, V and VII. Regarding TMV infectivity, peaks I, II and III, obtained in CTA through linear gradient of NaCl, and peak I also obtained through CTA by the method "step wise", significantly reduced virus infectivity in tobacco plants. Based upon these results, it is shown that preparations of L. edodes can interfere whith phytopathogen multiplication, demonstrating its potential to control plant diseases.

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Os Enterococcus spp. apresentam natureza ubiquitária e são encontrados no trato gastrointestinal de diversos animais. Entretanto, estudos desses microorganismos associados a tartarugas marinhas são escassos. Os objetivos deste estudo foram: isolar enterococos a partir de amostras fecais de tartarugas marinhas encontradas no Litoral Norte do Rio Grande do Sul; determinar a prevalência das espécies; avaliar seu perfil de suscetibilidade antimicrobiana; verificar a presença de genes relacionados à resistência e à virulência e; analisar sua diversidade genética. Um total de 158 enterococos foram identificados como E. faecalis (55,7%), E. faecium (23,4%), E. hirae (15,2%) e E. casseliflavus (5,7%). A maioria dos isolados foi suscetível aos antimicrobianos testados, no entanto, fenótipos de resistência foram encontrados para eritromicina (34,2%), rifampicina (32,9%) e tetraciclina (0,63%). O gene de resistência à eritromicina msrC foi encontrado em todos os E. faecium resistentes, já o gene erm(B), não foi detectado. Somente um isolado foi resistente à tetraciclina, e este não apresentou nenhum dos genes testados. Os genes de virulência, gelE e ace (98,86%), asa (68.18%) e cylA (40,90%) foram detectados somente em E. faecalis. A atividade de gelatinase e citolisina foi verificada em 87 e 19 isolados, respectivamente. A maioria dos enterococos não foi capaz de formar biofilme. A análise dos perfis gerados por PFGE revelou um grande número de clones. Em conclusão, diferentes espécies de enterococos compõem a microbiota do trato gastrointestinal das tartarugas marinhas e a presença de determinantes de resistência e virulência nestes animais pode estar relacionada a fatores antropogênicos ou, ainda, ter origem no resistoma ambiental. / Enterococcus spp. shows an ubiquitous nature and are found in the gastrointestinal tract of several animals. However, studies of enterococus in sea turtles are scarce The aims of this study were: to isolate Enterococcus spp. from fecal samples of sea turtle found on the North coast of Rio Grande do Sul; to determine the prevalence of species; to evaluate their antimicrobial susceptibility profile; to check the presence of resistance and virulence related genes and; to analyse their genetic diversity. A total of 158 enterococci were identified as E. faecalis (55.7%) E. faecium (23.4%), E. hirae (15.2 %) and E. casseliflavus (5.7%). Most of the isolates were susceptible to the tested antimicrobials, however, resistance phenotypes were found for erythromycin (34.2%), rifampicin (32.9%) and tetracycline (0.63%). The erythromycin resistance gene msrC was detected in all E. faecium erythromycin resistant; moreover, the gene erm (B) was not detected. Only one sample was resistant to tetracycline, although it did not show any of the tetracycline resistant genes tested. Virulence genes gelE and ace (98.86%), asa (68.18%) and cylA (40.90%) were detected only in E. faecalis. The cytolysin and gelatinase activity was observed in 19 and 87 strains, respectively. Most enterococci were not able to form biofilm. The profile analysis generated by PFGE revealed a large number of clones. In conclusion, different species of enterococci were found in the microflora of sea turtle gastrointestinal tract and the presence of resistance and virulence determinants in these animals might be related to anthropogenic factors or even to an environmental resistome origin.

Listeria monocytogenes é o microrganismo patogênico de maior relevância em carnes processadas prontas para consumo. A presença frequente de L. monocytogenes no ambiente pode levar a uma contaminação dos produtos após o processamento industrial e como esses produtos não passam por tratamento bactericida antes de serem consumidos, a saúde do consumidor pode estar em risco. Para inibir a multiplicação de L. monocytogenes nos produtos cárneos durante o armazenamento em refrigeração após o processamento, os fabricantes podem utilizar diversos aditivos antimicrobianos na formulação destes produtos. Este estudo objetivou avaliar a atividade antimicrobiana de aditivos tradicionalmente empregados em produtos cárneos processados, e de quatro novos blends preparados à base de nisina (Nisaplin®) contra cepas de L. monocytogenes, fazendo-se a avaliação in vitro e in situ, em mortadelas experimentalmente contaminadas, formuladas com os compostos estudados, armazenadas à vácuo e em refrigeração (8 °C) por 70 dias. Os compostos extrato de alecrim, diacetato de sódio e Nisaplin®, quando testados in vitro, apresentaram maior eficiência na inibição das cepas de L. monocytogenes que lactato de sódio e vinagre tamponado. Quando testados in vitro, os produtos comerciais BioVia® CL600 e NovaGARD® LM100 e os quatro blends utilizados no preparo das mortadelas foram igualmente efetivos na inibição de L. monocytogenes. De acordo com os resultados dos testes in situ, o melhor controle de L. monocytogenes em mortadelas durante 70 dias a 8 °C ocorreu nos produtos preparados com o blend contendo extrato de alecrim, diacetato de sódio, vinagre tamponado e Nisaplin®. O blend contendo extrato de alecrim, lactato de sódio e Nisaplin®, foi o menos efetivo entre os blends testados. / Listeria monocytogenes is the most important microbial pathogen in ready-to-eat processed meat products. The frequent presence of L. monocytogenes in the environment can lead to product contamination after industrial processing and since these products do not have a bactericidal step before consumed, consumer health may be at risk. To inhibit the multiplication of L. monocytogenes in processed meat products during refrigerated storage, manufacturers may use various antimicrobial additives in the formulation of these products. This study aimed to evaluate the in vitro and in situ activity of additives traditionally used in processed meat products and four new blends based on nisin (Nisaplin®) against L. monocytogenes, in experimentally contaminated bolognas, formulated with the studied compounds and stored under vacuum and refrigerated (8 °C) for 70 days. Rosemary extract, sodium diacetate and Nisaplin®, when tested in vitro, were more effective than sodium lactate and buffered vinegar for the inhibition of the L. monocytogenesstrains. When tested in vitro, the commercial products BioVia® CL600 and NovaGARD® LM100 and the four blends used in bologna preparation were equally effective in inhibiting L. monocytogenes. According to the results of the in situ tests, the best control of L. monocytogenes in bolognas for 70 days at 8 °C occurred in the products prepared with the blend containing rosemary extract, sodium diacetate, buffered vinegar and Nisaplin®. The blend containing rosemary extract, sodium lactate and Nisaplin®, was the least effective among the tested blends.

O descarte de antimicrobianos e bactérias através de efluentes hospitalares tem contribuído para o aumento e disseminação da resistência antimicrobiana no ambiente natural. Esta resistência pode estar associada à aquisição de genes de resistência, presença de bombas de efluxo ou características intrínsecas das bactérias. O presente trabalho teve como objetivos: caracterizar o perfil de resistência em 60 isolados de Pseudomonas para os antimicrobianos Ceftazidima e Imipenem, detecção fenotípica das bombas de efluxo e detecção dos genes mex B, mex D, mex Y e mex F de bomba de efluxo da família Resistência-Nodulação- Divisão (RND), associados a fenótipos de resistência neste gênero bacteriano. O perfil de resistência dos isolados foi avaliado através da Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos antimicrobianos Ceftazidima e Imipenem. Para a detecção fenotípica das bombas de efluxo foi comparada a CIM do Imipenem (IMP) e da Ceftazidima (CAZ) na presença e na ausência de carbonil cianida mclorofenilhidrazona (CCCP). A presença dos genes foi verificada através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Os isolados de Pseudomonas aeruginosa (n=32) mostraram-se mais resistentes aos antimicrobianos testados do que as outras espécies do gênero (n=28). Na avaliação fenotípica das bombas de efluxo 10 isolados reduziram a CIM do IMP e 6 isolados reduziram a CIM da CAZ na presença do CCCP, indicando que bombas de efluxo possivelmente são responsáveis por esta resistência nestes isolados. Dos 60 isolados utilizados no estudo, 95% amplificaram o gene mex Y, 88% o gene mex B, 88% mex F, 48% mex D, no entanto, quando os resultados do PCR foram comparados com a análise fenotípica, revelou que nem todos os isolados expressam os genes encontrados, portanto a resistência pode ser associada também a outros mecanismos. / The disposal of antimicrobial and bacteria through hospital effluents has contributed to the increase and spread of antimicrobial resistance in the natural environment. This resistance can be associated to gene acquisition, presence of efflux bombs or intrinsic characteristics of the bacteria. This study aimed to: characterize the resistance profile of 60 Pseudomonas isolates for Ceftazidime and Imipenem l, to detect phenotypically efflux pumps systems and detect the genes mex B mex D, mex Y and mex F responsible by the efflux pump family resistance-nodulation-division (RND). The isolates resistance profile was evaluated by Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of ceftazidime and imipenem l. For the phenotypic detection of efflux pumps the MIC of imipenem (IMP) and ceftazidime (CAZ) in the presence and absence of carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP was compared. The presence of the genes was verified by Polymerase Chain Reaction (PCR). Isolates of Pseudomonas aeruginosa (n=32) were more resistant to antimicrobials tested than other species of the genus (n=28). In the phenotypic evaluation of efflux pumps 10 isolates reduced the MIC of IMP and 6 isolates reduced the CAZ MIC in the presence of CCCP, indicating that an efflux system can be responsible for the resistance of the isolates. Of the 60 isolates used in the study, 95% amplified the mex Y, 88% mex B, 88% mex F and 48% mex D, however, when the PCR results were compared with the phenotypic analysis the results revealed that neither all isolates express genes found, therefore the resistance observed might be associated to another mechanism.

A contaminação das águas naturais representa um dos principais riscos à saúde pública, sendo conhecida a estreita relação entre a qualidade da água e inúmeras enfermidades. Enterococcus são habitantes da microbiota intestinal humana, podendo ser encontrados em praticamente todos os animais e ambientes. A importância crescente dos enterococos como patógenos oportunistas e a emergência e disseminação de cepas multiresistentes contribuiu para um maior interesse na epidemiologia desses micro-organismos. Os objetivos desse trabalho são caracterizar fenotipicamente e determinar o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de Enterococcus isolados das águas do arroio Dilúvio, em Porto Alegre. Foram coletadas amostras de água em cinco diferentes pontos do arroio, em quatro períodos do ano. Dos 348 isolados, 62,07% foram identificados como E. faecium, 13,50% como E. faecalis, 12,07% como E. casseliflavus e 12,36% como Enterococcus sp. Noventa e quatro por cento dos isolados demontraram resistência a pelo menos uma classe de antimicrobianos e 44,25% a duas classes. E. faecium foi a espécie com maior frequência de cepas resistentes (74,07%) a pelo menos duas classes de antimicrobianos, seguida de E. casseliflavus (66,67%) e E. faecalis (36,17%). No ponto 1, que corresponde a nascente do arroio, foi observado a menor incidência de cepas de Enterococcus e de cepas resistentes, quando comparados com os demais pontos de coleta. Os resultados demonstram a presença de cepas de Enterococcus resistentes isoladas em todos os pontos do arroio Dilúvio. Estes resultados mostram a necessidade de medidas sanitárias urgentes que busquem a melhoria da qualidade de suas águas a fim de evitar a contaminação e a disseminação de micro-organismos resistentes à antimicrobianos. / The contamination of natural resources of water is a major risk to public health, due to the tight relation between water quality and countless diseases. Enterococcus is ainhabit of human intestinal microbiota, and can be isolated from animals and environments. The increasing importance of enterococci as opportunistic pathogens, as well as the emergence and dissemination of multiresistant strains, contribute for a greater interest in epidemiology study of these microorganisms. The aim of this study was to characterize phenotypic and to determine the antimicrobial susceptibility of Enterococcus isolated from Dilúvio stream, in Porto Alegre. Water samples were collected in five different locations of the stream, throughout four periods of the year. Among the 348 isolates obtained 62.07% were identified as E. faecium, 13.50% as E. faecalis, 12.07% as E. casseliflavus, and 12.36% as Enterococcus sp. Ninty-four percent of the isolates were resistant to at least one antimicrobial class, and 44.25% to two classes. E. faecium was the most frequently species resistant to at least two antimicrobial classes (74,07%), followed by E. casseliflavus (66.67%) and E. faecalis (36.17%). In all locations was isolated Enterococcus resistant the results indicate the urgent sanity initiative, in order to improve the water quality of Dilúvio’s to avoid the contamination and of antimicrobial-resistant microorganisms.

Listeria monocytogenes é o microrganismo patogênico de maior relevância em carnes processadas prontas para consumo. A presença frequente de L. monocytogenes no ambiente pode levar a uma contaminação dos produtos após o processamento industrial e como esses produtos não passam por tratamento bactericida antes de serem consumidos, a saúde do consumidor pode estar em risco. Para inibir a multiplicação de L. monocytogenes nos produtos cárneos durante o armazenamento em refrigeração após o processamento, os fabricantes podem utilizar diversos aditivos antimicrobianos na formulação destes produtos. Este estudo objetivou avaliar a atividade antimicrobiana de aditivos tradicionalmente empregados em produtos cárneos processados, e de quatro novos blends preparados à base de nisina (Nisaplin®) contra cepas de L. monocytogenes, fazendo-se a avaliação in vitro e in situ, em mortadelas experimentalmente contaminadas, formuladas com os compostos estudados, armazenadas à vácuo e em refrigeração (8 °C) por 70 dias. Os compostos extrato de alecrim, diacetato de sódio e Nisaplin®, quando testados in vitro, apresentaram maior eficiência na inibição das cepas de L. monocytogenes que lactato de sódio e vinagre tamponado. Quando testados in vitro, os produtos comerciais BioVia® CL600 e NovaGARD® LM100 e os quatro blends utilizados no preparo das mortadelas foram igualmente efetivos na inibição de L. monocytogenes. De acordo com os resultados dos testes in situ, o melhor controle de L. monocytogenes em mortadelas durante 70 dias a 8 °C ocorreu nos produtos preparados com o blend contendo extrato de alecrim, diacetato de sódio, vinagre tamponado e Nisaplin®. O blend contendo extrato de alecrim, lactato de sódio e Nisaplin®, foi o menos efetivo entre os blends testados. / Listeria monocytogenes is the most important microbial pathogen in ready-to-eat processed meat products. The frequent presence of L. monocytogenes in the environment can lead to product contamination after industrial processing and since these products do not have a bactericidal step before consumed, consumer health may be at risk. To inhibit the multiplication of L. monocytogenes in processed meat products during refrigerated storage, manufacturers may use various antimicrobial additives in the formulation of these products. This study aimed to evaluate the in vitro and in situ activity of additives traditionally used in processed meat products and four new blends based on nisin (Nisaplin®) against L. monocytogenes, in experimentally contaminated bolognas, formulated with the studied compounds and stored under vacuum and refrigerated (8 °C) for 70 days. Rosemary extract, sodium diacetate and Nisaplin®, when tested in vitro, were more effective than sodium lactate and buffered vinegar for the inhibition of the L. monocytogenesstrains. When tested in vitro, the commercial products BioVia® CL600 and NovaGARD® LM100 and the four blends used in bologna preparation were equally effective in inhibiting L. monocytogenes. According to the results of the in situ tests, the best control of L. monocytogenes in bolognas for 70 days at 8 °C occurred in the products prepared with the blend containing rosemary extract, sodium diacetate, buffered vinegar and Nisaplin®. The blend containing rosemary extract, sodium lactate and Nisaplin®, was the least effective among the tested blends.

Os osteoblastos são células de origem mesenquimal envolvidas na formação óssea. Essas células podem sofrer alterações decorrentes de traumas, intervenções, e infecções. As infecções podem ser minimizadas a partir do uso de antimicrobianos. O poli(L-lactídeo) ou PLLA, é um polímero sintético que se destaca por sua biocompatibilidade e absorção, o qual pode ser utilizado como um liberador farmacológico local, como alternativa à terapêutica antimicrobiana sistêmica. Esse polímero também é empregado como matriz de suporte celular na engenharia de tecidos ósseos, por auxiliar na reparação e regeneração. A incorporação de partículas nesse polímero pode gerar reações adversas, portanto, devemos nos certificar que o dispositivo polimérico incorporado com antimicrobianos não seja citotóxico. Proposição: Analisar a estrutura e a citotoxidade em osteoblastos de dispositivos poliméricos de PLLA incorporados com antimicrobianos, sendo eles: Amoxicilina ou Azitromicina ou Clindamicina ou Metronidazol para uso local. Metodologia: Foram confeccionados 270 dispositivos poliméricos com 6mm de diâmetro composto de PLLA com a incorporação de antimicrobianos a 20%, Amoxicilina (AM) ou Azitromicina (AZ) ou Clindamicina (CL) ou Metronidazol (ME) sendo confeccionados através de dois métodos: eletrofiação (malhas) ou deposição (filmes). Posteriormente, foi realizado o teste de citotoxicidade direta MTT nesses dispositivos com a cultura de osteoblastos em 24, 48 e 72h de experimento. Para análise da estrutura do dispositivo, foram feitas análises macroscópicas através de fotografias digitais e microscópicas com Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV). Resultados: A reação de citotoxidade mostrou que malhas e filmes incorporados à antimicrobianos são compatíveis com a cultura de osteoblastos, não apresentando citotoxicidade em nenhum momento do estudo (p<0.05). Na fotografia pudemos observar que os dispositivos apresentam coloração semelhante em relação às malhas e coloração diferenciada para filmes dependendo do tipo de antimicrobiano incorporado. No MEV, através da análise dos dispositivos pudemos notar que houve diferença no aspecto das superfícies dos filmes, sendo que os filmes de AM apresentaram aspecto irregular e poroso, enquanto AZ aparece liso com alguns grânulos, os de CL e ME possui superfícies ásperas e os de PLLA apresentaram superfície lisa. Quanto às malhas, notamos que todas as amostras apresentaram microfibras e poros que imitam a matriz extracelular, diferenciando-se apenas na espessura das fibras. Houve a presença de osteoblastos em todos os filmes confeccionados, mas os filmes de AM não induziram a proliferação, aparecendo apenas células isoladas. Enquanto nas malhas só foram observados osteoblastos em malhas de AM, ME e PLLA. Conclusão: Os dispositivos poliméricos confeccionados com PLLA incorporados com antimicrobianos podem ser usados na reparação e regeneração óssea uma vez que não apresentaram citotoxicidade em osteoblastos. / Osteoblasts are mesenquima originated cells, which are involved in the bone formation. These cells may suffer alterations due to traumas, interventions and infeccions. The infections can be minimized by the handling of antimicrobials. Poly (L-lactide) or PLLA is a synthetic polymer known for its biocompatibility and absorption, which can be used as a local pharmacological releaser, as an alternative to the systemic antimicrobial therapy. This polymer also can be frequently used as a supporting structure to cellular matrix in the bone tissue engineering as it can be used for support in repair and regeneration. The particle incorporation in this polymer can create side effects, therefore, we need to certificate that the polymeric device incorporated with antimicrobials are not cytotoxic. Proposition: Analyse the structure and cytotoxicity in osteoblasts of PLLA polymeric devices associated with antimicrobials, being them: Amoxicillin, Azithromycin, Clindamycin and Metronidazole. Methods: For this study 270 polymerical devices were manufactured with 6mm diameter of PLLA with a 20% antimicrobials incorporation of Amoxicillin (AM), Azithromycin (AZ), Clindamycin (CL) and Metronidazole (ME) that have been produced through two methods: eletrospinning (mesh) or casting (film). Afterwards a MTT cytotoxicity test was made over the periods of 24, 48 and 72 hours of experiment. To make a structural analysis of the device a macroscopic analysis was performed through photographs and microscopic imaging with scanning electron microscope (SEM). Results: The cytotoxicity reaction exhibited that meshes and films incorporated with antimicrobials are comparable with the osteoblasts culture, indicating that there was no cytotoxicity in any moment (p < 0.05). In the phothograph we could observe that the devices showed a similar coloration among the meshes and different coloration for the films depending on the incorporated antimicrobial. The SEM analysis displayed a difference in the surface appearance of the films. The AM films displayed an irregular and porous appearance, meanwhile, AZ looked smooth with few grains, the CL and ME have rough surfaces and PLLA presents smooth surfaces. As for the meshes, we noticed that all the samples had microfibers and pores that mimic the extracellular matrix, differing only in the thickness of the fibers. Osteoblasts were present in all films but AM did not induce proliferation, with only isolated cells emerging. In meshes osteoblasts were only found in AM, ME and PLLA. Conclusion: Polymeric devices made with PLLA incorporated with antimicrobials can be used in bone repair and regeneration given that they did not offer cytotoxicity for osteoblasts.