O Hibiscus rosa-sinensis L. e o Hibiscus syriacus L., da família Malvaceae são utilizados na área ornamental, mas nos últimos anos vem ganhando espaço na área alimentícia como flores comestíveis. Alguns estudos demonstram o potencial antibacteriano destas variedades frente a diversos microrganismos e sobre sua composição nutricional e fitoquímica há poucas pesquisas. Este trabalho teve por objetivo analisar a intensidade de atividade de inibição (IINIB) e a inativação bacteriana (IINAB) in vitro dos dois extratos alcoólicos das flores dos hibiscos e a relação com os polifenóis e antocianinas, e quantificar os compostos nutricionais e bioativos comparados com a atividade antioxidante. Avaliou-se a ação antibacteriana frente às bactérias de interesse alimentar, Staphylococcus aureus e Salmonella Enteretidis resultando em diferenças significativas entre as médias dos valores arbitrários (IINIB/IINAB). Observou-se a resistência da primeira bactéria com a segunda respectivamente em ambos os extratos vegetais. O doseamento dos compostos fitoquímicos presentes constatou que as plantas possuem correlação com a atividade antibacteriana e as propriedades químicas demonstraram valores significativos do ponto de vista nutricional e detectou-se efeito relevante com a atividade antioxidante. / The Hibiscus rosa-sinensis L. and Hibiscus syriacus L., Malvaceae the family are used in the ornamental area, but in recent years has been gaining ground in the food area as edible flowers. Some studies have demonstrated the antibacterial potential of these varieties against various microorganisms and on their nutritional composition and phytochemical little research. This study aimed to analyze the intensity of activity inhibition (IINIB) and bacterial inactivation (IINAB) in vitro of both alcoholic extracts of petals of flowers of hibiscus and relationship with polyphenols and anthocyanins, and quantify the nutritional and bioactive compounds compared with antioxidant activity. We evaluated the antibacterial action on the bacteria of food interest, Staphylococcus aureus and Salmonella Enteretidis resulting in significant differences between the means of arbitrary values (IINIB/IINAB), where there was resistance from the first to the second bacterium in both extracts vegetables. The determination of phytochemical compounds found that plants have a correlation with the antibacterial activity and chemical properties showed significant amounts of nutritional standpoint and significant effect was detected with antioxidant activity.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O amendoim A. hypogaea L. é a quarta oleaginosa mais consumida no mundo e suas sementes são altamente energéticas, com grandes quantidades de lipídios, proteínas, vitaminas e carboidratos. Diversas atividades farmacológicas já foram observadas em extratos de raízes, folhas e sementes, sendo a principal delas a atividade antioxidante. Neste trabalho, foi realizada a comparação entre duas metodologias (por maceração e assistida por micro-ondas) para a extração de compostos antioxidantes, incluindo o resveratrol. Também foi realizada a comparação entre extratos de diferentes órgãos de cultivares brasileiras (IAC 886, IAC Caiapó, IAC Tatu ST, IAC 8112 e IAC 99-1) quanto à atividade antioxidante, por DPPH, ao teor de compostos fenólicos, por Folin-Ciocalteu, e ao teor de resveratrol, por HPLC. Por fim, foram estabelecidos protocolos de cultura de tecidos para explantes de sementes, visando à produção de calos e plantas in vitro para posterior dosagem de compostos de interesse, tendo em vista a possibilidade de modulação das condições in vitro. As melhores condições determinadas para a extração por maceração de antioxidantes de A. hypogaea foram 80% de etanol em água como solvente, trituração com almofariz e pistilo, 50 mL solvente por grama de material vegetal seco, 120 minutos de incubação e dois estágios de extração. As melhores condições para a extração de resveratrol assistida por micro-ondas foram o uso de 37 mL de solvente/g material vegetal seco, com agitação de 1200 rpm por 15 minutos, a 37C. De uma maneira geral, os extratos de raízes e oriundos de micro-ondas apresentaram maior atividade antioxidante (até 92,36 2,71%), teor de compostos fenólicos (até 54,15 1,39 mg EAG/g extrato) e teor de resveratrol (até 1,614 0,356 mg/g extrato). Dentre as cultivares estudadas, IAC Tatu e IAC 99-1 foram as que apresentaram os teores mais elevados. Brotos e calos friáveis foram obtidos a partir de cotilédones, eixos embrionários e folíolos embrionários cultivados em meios suplementados com BAP e picloram, respectivamente. / Peanut A. hypogaea L. is the fourth most consumed oleaginous in the world and its seeds are high energetic, with high amounts of lipides, proteins, vitamins and carbohidrates. Several pharmacological activities have been observed in extracts of roots, leaves and seeds, especially an antioxidant activity. In this work, the comparison between two extraction methodologies (by maceration and microwave assisted extraction) for the extraction of antioxidant compounds, including resveratrol, was studied. We also carried out a comparison between extracts from different organs of Brazilian cultivars (IAC 886, IAC Caiapó, Tatu ST IAC, IAC 8112 and IAC 99-1) for antioxidant activity by DPPH, the content of phenolic compounds by Folin-Ciocalteu and the resveratrol content by HPLC. Finally, we established tissue culture protocols for seed explants, aiming at the production of in vitro plant material for future measurement of compounds of interest in the view of possible modulation of in vitro conditions. The best conditions for the extraction of antioxidant from A. hypogaea compounds by maceration were 80% of ethanol in water as a solvent, trituration by mortar and pestle, 50 mL solvent/g dry plant, 120 minutes of incubation and two stages of extraction. The best conditions for the extraction of resveratrol assisted by micro-wave were the use of 37 mL of solvent for each gram of dry plant, with 1200 rpm of agitation for 15 minutes, with 37oC. In general, root extracts and assisted by microwave showed higher antioxidant activity (until 92,36 2,71%), phenolic (untill 54,15 1,39 mg AGE/g extract) and resveratrol content (untill 1,614 0,356 mg/g extract). Among the studied cultivars, IAC Tatu and IAC 99-1 showed the best results. In tissue culture, shoots and friable calli were obtained from cotiledons, embryonic axis and embryonic leaflet cultured in media supplemented with BAP and picloram, respectively.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The main groups of secondary metabolites of Glechon spathulata Benth. were evaluated by a phytochemical screening and the volatile oil obtained by hydrodistillation was analyzed by GC-MS. Volatile oil, ethanolic crude extract and hexanic, chloroformic, ethyl acetate and butanolic fractions of G. spathulata were submitted to the lethality test against Artemia salina Leach., to the antimicrobial activity by bioauthographic assay and broth microdilution. Antioxidant activity by DPPH in thin-layer chromatography (TLC) and spectrophotometric assay were also evaluated. Flavonoids, tannins, sterols and/or triterpenoids, saponins, anthocyanic pigments, volatile and fixed acids were found in G. spathulata. The GC of the oil revealed the presence of 9 constituents. All samples presented Artemia salina toxicity (LC50<1000 μg/ml). The volatile oil showed antimicrobial activity evaluated by bioauthographic assay against Gram-positive and Gram-negative bacteria and against Candida albicans, the crude extract didn t show activity against the tested microorganisms in same conditions of assay with volatile oil. Volatile oil, hexanic and ethyl acetate fractions showed good inhibitory activity against Gram-positive and Gram-negative bacterial cultures. Through DPPH method all the samples showed antioxidant activity by TLC, by spectrophotometric method, ethyl acetate, butanolic fractions and volatile oil showed excellent antioxidant activity with IC50 7,99 μg/ml; 11,75 μg/ml and 20,59 μg/ml respectively. / Os principais grupos de substâncias de Glechon spathulata Benth. foram avaliados por uma análise fitoquímica e o óleo volátil obtido por hidrodestilação foi analisado por CG-EM. O óleo volátil, o extrato bruto etanólico e as frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e butanólica de G. spathulata foram submetidos ao teste de letalidade frente a Artemia salina Leach., à atividade antimicrobiana por bioautografia e microdiluição em caldo. A atividade antioxidante pelo DPPH em cromatografia em camada delgada (CCD) e pelo ensaio espectrofotométrico também foi avaliada. Flavonóides, taninos, esteróis e/ou triterpenos, saponinas, pigmentos antociânicos, ácidos voláteis e fixos foram encontrados em G. spathulata. A CG do óleo revelou a presença de 9 constituintes. Todas as amostras apresentaram toxicidade frente à Artemia salina (CL50<1000 μg/ml). O óleo volátil apresentou atividade antimicrobiana avaliada por bioautografia contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e contra Candida albicans, o extrato bruto não apresentou atividade contra os microrganismos testados nas mesmas condições do ensaio com o óleo volátil. O óleo volátil, as frações hexânica e acetato de etila mostraram boa atividade inibitória contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Através do método do DPPH, todas as amostras mostraram atividade antioxidante por CCD e pelo método espectrofotométrico, as frações acetato de etila, butanólica e o óleo volátil demonstraram excelente atividade antioxidante com CI50 de 7,99 μg/ml; 11,75 μg/ml e 20,59 μg/ml respectivamente.

Rio Grande do Sul is among the major blackberry (Rubus sp.) producer states from Brazil, but studies evaluating this fruit in Brazil are scarce. Thus, this study was aimed at determining the nutritional characteristics and bioactive compounds of different blackberry genotypes from Rio Grande do Sul, as well as their antioxidant capacity. The blackberry genotypes (selections 07/001, 03/001, 02/96 and 99 and cultivars Guarani, Cherokee, Tupy and Xavante) evaluated were cultivated at Embrapa Temperate Climate (Pelotas, RS, Brazil, 31o40‟47‟‟S, 52o26‟24‟‟W, 60 m). The fruits had 84.8 - 90.3% humidity, 0.09 - 0.14% protein, 5.8 - 5.5% dietary fiber and 0.27 - 0.49% ash. Selection 02/96 had the lowest ash content. TSS ranged from 7.3 to 10.2 °Brix, acidity ranged between 1.30 and 1.58% citric acid and pH between 2.8 and 3.1. Selection 03/001 had the lowest TSS value and it also had lower redness, but higher color saturation than Tupy cultivar. Selection 03/001 showed more intense and brighter color than the other genotypes. The fatty acids found at higher concentration were palmitic (22-29%), oleic (13-32%) and linoleic (15-33%) acids, with small differences among the blackberry genotypes. Four different antioxidant assays were conducted to assess the antioxidant activity of both phenolic and anthocyanic fruit extracts. Regarding the phenolic extracts, selections 02/96 and 07/001 had higher antioxidant activity than the cultivars in most assays, and this activity was partially correlated to the higher amount of total phenolics in these samples. Thus, the phenolic compounds are probably the major responsible for the antioxidant activity in the diphenyl-2-picrylhydrazyl radical scavenging assay (DPPH), ferric-reducing antioxidant power assay (FRAP) and thiobarbituric acid reactive substances assay (TBARS). Quercetin seems to be responsible for the antioxidant activity of blackberry phenolic extracts in the β-carotene bleaching assay. Concerning the anthocyanic extracts, selection 02/96 and Tupy and Cherokee cultivars from harvest 2007 had higher antioxidant activity than the other genotypes in most assays. Anthocyanins appear to be the major responsible for the antioxidant activity of anthocyanic extracts in the DPPH and FRAP assays, although ascorbic acid also contributed to the DPPH antioxidant activity. It was not possible to identify the compound responsible for the TBARS antioxidant activity of anthocyanic extracts. Our results revealed that the new blackberry selections developed by Embrapa, especially selection 02/96 appears to have higher antioxidant activity than the commercial cultivars cultivated in the southern Brazil. Thus, this selection appears to be promising for nutritional and health purposes. Furthermore, the blackberry genotypes evaluated had good nutritional value with sugar and acidity levels suitable for industrialization, and they contain fatty acids important for maintaining health. / Sendo o Rio Grande do Sul um dos principais produtores de amora-preta (Rubus sp.) do Brasil e devido a escassez de trabalhos avaliando esta fruta neste país, este trabalho teve como objetivo a caracterização nutricional e de compostos bioativos de diferentes genótipos de amora-preta do Rio Grande do Sul, bem como a avaliação da sua capacidade antioxidante. Foram avaliadas amoras-pretas de diferentes genótipos (seleções 07/001, 03/001, 02/96 e 99 e cultivares Guarani, Cherokee, Tupy e Xavante) que estão sendo cultivadas na Embrapa Clima Temperado (Pelotas, RS, Brasil, 31o40‟47‟‟S, 52o26‟24‟‟O, 60 m). As frutas apresentaram umidade entre 84,8 e 90,3%; proteína entre 0,09 e 0,14%, fibra alimentar entre 5,8 e 5,5% e cinzas entre 0,27 e 0,49%. A seleção 02/96 apresentou menor teor de cinzas. Os SST variaram entre 7,3 a 10,2 ºBrix, a acidez variou entre 1,30 e 1,58% em ácido cítrico e o pH entre 2,8 e 3,1. A seleção 03/001 apresentou menor valor de SST que as demais e menor tendência ao vermelho, mas maior intensidade de cor que a cultivar Tupy. Os ácidos graxos encontrados em maior concentração foram o ácido palmítico (22-29%), oléico (13-32%) e linoléico (15-33%), com pequenas diferenças nas concentrações entre os tipos de amora. Quatro diferentes ensaios foram realizados para avaliar a atividade antioxidante de tanto de extratos fenólicos quanto antociânicos obtidos das amoras-pretas. Quanto aos extratos fenólicos, as seleções 02/96 e 07/001 apresentaram maior atividade antioxidante do que as cultivares na maioria dos ensaios, e esta atividade foi parcialmente correlacionada com a maior quantidade de fenólicos totais nestas amostras. Assim, os compostos fenólicos são provavelmente os principais responsáveis pela atividade antioxidante nos ensaios de remoção do radical difenil-2-picrilhidrazila (DPPH), poder antioxidante de redução do ferro (FRAP) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A quercetina parece ser a responsável pela atividade antioxidante dos extratos fenólicos da amora no sistema β-caroteno/ácido linoléico. Quanto aos extratos antociânicos, a seleção 02/96 e as cultivares Tupy e Cherokee da safra de 2007 apresentaram maior atividade antioxidante que os outros genótipos, na maioria dos ensaios. Antocianinas parecem ser as principais responsáveis pela atividade antioxidante dos extratos antociânicos nos ensaios de DPPH e FRAP, embora o ácido ascórbico também tenha contribuído para a atividade antioxidante dos extratos antociânicos no ensaio do DPPH. Não foi possível identificar o composto responsável pela atividade antioxidante no ensaio de TBARS. Nossos resultados revelaram que as seleções de amora desenvolvidas pela Embrapa, especialmente a seleção 02/96, parecem ter maior atividade antioxidante do que as cultivares comerciais produzidas no sul do Brasil. Assim, essa seleção parece ser promissora para fins nutricionais e de saúde. Além disso, os genótipos de amora-preta avaliados apresentaram bom valor nutricional com conteúdo de açúcar e acidez ideais para a industrialização, e contém ácidos graxos importantes para a manutenção da saúde.

Ilex paraguariensis Saint Hilaire (Aquifoliaceae), popularly known as yerba-mate, is a native species of South America and has its area of natural occurrence restricted to Brazil, Paraguay and Argentina. It is a product that still has a lot to be improved, mainly, in terms of its industrial uses, in international level. Antioxidants are composts that work as blockers of the oxide-reducers processes unchained by the free radicals, impeding the damages generated by them, being widely used in food, medicines and cosmetics, and recently, they are also being used in antioxidant therapies in diseases where free radicals are implicated. This work has as objective to evaluate the antioxidant capacity of the product yerba-mate chimarrão type, using samples of the RS and SC, in the months june, july and august, through biological and chemical assays. The biological study was accomplished in eucariotics cells of the yeast Saccharomyces cerevisiae treated with yerba-mate samples in presence of the apomorphine and paraquat dichloride agents during the aerobic metabolism (cellular multiplication). The obtained results indicate that the antioxidant capacity of the samples varies significantly in function of the type and concentration of the stressor agents, the concentrations of the samples, the mate type (native or cultivated) and of the producer state (RS and SC). Between the states, RS state presented higher antioxidant effect in vivo, where reforested mate were more efficient as cellular protectors, the opposite happened in SC state. The chemical evaluation was based on the determination of the Total Antioxidant Activity (Hydrophilic and Lipophilic), where the capacity of the sample in to sequestrate the ABTS radical, the Reducing Power, where the iron ion produced in the redox reaction forms a colored product when it reacts with the DPPH radical, with maximum absorption to 525 nm, the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical sequestrating effect, based on the capacity of the antioxidant in donating hydrogen for the DPPH radical provoking the sweeping of it of the middle of reaction, modifying the color of the solution were verified. The found values in the analyses in vitro show that the antioxidant capacity in the majority of the samples varied significantly in function of the producer state and of the mate type in the three months of analysis (June, July and August). Hydrophilic Antioxidant Activity was higher in August for all the samples, varying between 0,1336-0,5627 mM equivalent of Trolox, for Lipophilic there was a higher variation among the months of analysis, with the values being between 4,9516-27,6685 mM equivalent of Trolox. For the other chemical analyses, all the samples showed higher antioxidant activity in June, among 4,4373-12,4082 mM equivalent of quercetin to Reducer Power and 4,0221-11,1393 mM equivalent of Trolox the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical sequestrating effect. The results were obtained through the construction of standard curves, treated statisticlly through variance analysis (ANOVA) and Tukey´s post test using Microsoft Excel software. All tests were performed in triplicate. It was concluded that the yerba-mate, ingested in chimarrão form, really has a great antioxidant effect when compared to other natural products with already proven action, in chemical and biological systems, and that this property can be explored seeking the diversification in the consumption ways, fact that would facilitate the expansion of the culture in the country. / Ilex paraguariensis Saint Hilaire (Aquifoliaceae), conhecida popularmente como erva-mate, é uma espécie nativa da América do Sul e tem sua área de ocorrência natural restrita ao Brasil, Paraguai e Argentina. É um produto que ainda tem muito a ser melhorado, principalmente, em termos dos seus usos industriais, a nível internacional. Antioxidantes são compostos que funcionam como bloqueadores dos processos óxido-redutivos desencadeados pelos radicais livres, impedindo os danos gerados por eles, sendo largamente empregados em alimentos, medicamentos e cosméticos, e recentemente, estão sendo usados também em terapias antioxidantes em doenças onde radicais livres estão implicados. Este trabalho tem como objetivo avaliar a capacidade antioxidante do produto erva-mate tipo chimarrão utilizando amostras provenientes do estado do RS e SC, nos meses de junho, julho e agosto, através de ensaios biológicos e químicos. O estudo biológico foi realizado em células eucarióticas da levedura Saccharomyces cerevisiae tratada com amostras de erva-mate em presença dos agentes estressores apomorfina e paraquat durante o metabolismo aeróbico (multiplicação celular). Os resultados obtidos indicam que a capacidade antioxidante das amostras varia significativamente em função do tipo e concentração do agente estressor, das concentrações das amostras, do tipo de erval (nativo ou reflorestado) e do estado produtor (RS e SC). Entre os estados, o RS apresentou maior efeito antioxidante in vivo, onde ervais reflorestados foram mais eficientes como protetores celulares, o contrário ocorreu no estado de SC. A avaliação química se baseou na determinação da Atividade Antioxidante Total (Hidrofílica e Lipofílica), onde se verificou a capacidade da amostra em seqüestrar o radical ABTS, do Poder Redutor, onde o íon ferro produzido na reação redox forma um produto colorido quando reage com o radical DPPH, com absorção máxima à 525 nm, e do Efeito Seqüestrante de Radicais DPPH, baseada na capacidade do antioxidante em doar hidrogênio para o radical DPPH provocando a varredura deste do meio de reação, modificando a cor da solução. Os valores encontrados nas análises in vitro mostram que a capacidade antioxidante da maioria das amostras variou significativamente em função do estado produtor e do tipo de erval nos três meses de análise (junho, julho e agosto). A Atividade Antioxidante Hidrofílica foi maior em agosto para todas as amostras, variando entre 0,1336-0,5627 mM Equivalentes de Trolox, para a Lipofílica houve grande variação entre os meses de análise, com os valores ficando entre 4,9516-27,6685 µM Equivalentes de Trolox. Para as demais análises químicas, todas as amostras mostraram maior atividade antioxidante em junho, entre 4,4373-12,4082 mM Equivalentes de Quercetina para Poder Redutor e 4,0221-11,1393 mM Equivalentes de Trolox para Efeito Seqüestrante de Radicais DPPH. Os resultados foram obtidos através da construção de curvas padrão, tratados estatisticamente através de análise de variância (ANOVA) e pós-Teste de Tukey utilizando o programa Microsoft Excel. Todos os testes foram realizados em triplicata. Concluiu-se que a erva-mate, ingerida na forma de chimarrão, possui realmente um ótimo efeito antioxidante quando comparado à outros produtos naturais de ação já comprovada, em sistemas químicos e biológicos, e que esta propriedade pode ser explorada visando a diversificação das formas de consumo, o que facilitaria a expansão da cultura pelo país.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to investigate the influence of different parameters (concentration of solvent, time, temperature and power) in extraction methods (focused microwave, conventional and ultrasound) bioactive compounds in blueberries, seeking higher yield of compounds biativos, antioxidant and antimicrobial activity of the extracts.The extracts were characterized regarding the phenolic compounds, flavonoid and anthocyanins content. The in vitro antioxidant activity was quantified by the methods of DPPH, ABTS, FRAP, and β-carotene, was calculed the IC50 and evaluated the antimicrobial activity.The results for focused microwave extraction generally indicated that the antioxidant activity (FRAP, ABTS and DPPH), total phenolics and total anthocyanins showed a positive linear trend in relation to the extraction temperature, with no significant difference between the solvent concentrations (60 and 80%). The IC50 and β-carotene showed the greatest inhibition at 60°C at solvent concentrations of 60% and 80%, respectively. The flavonoids showed no significant difference in terms of the extraction temperature or the concentration of solvent that was used. No antimicrobial activity was detected in the extracts in relation to the tested microorganisms. In the conventional method of extracting the best extraction conditions for phenolic compounds, flavonoids and anthocyanin employed 60% solvent, 60 minutes at 40ºC; however, the anthocyanins did not suffer any influence from time and temperature. The best results for the antioxidant activity using the DPPH and FRAP methods were obtained with 60% solvent, 30 minutes at 30ºC, and the DPPH was not influenced by temperature. Regarding ABTS+ the best results were reached with 60% solvent, 120 minutes, at 40ºC, while the β-carotene required 80% solvent at 40ºC, regardless of the time. The different extracts tested did not show antimicrobial activity. Ultrasound provided better phenolic extraction conditions, flavonoids and anthocyanins using 60% solvent, 20 minutes and 80 watts of power, and phenolic compounds not influenced by the power and flavonoids were not affected by the solvent. The antioxidant activity by DPPH and IC50 showed the best results com 60% solvent, 60 minutes and 80 W of power, the same conditions were found for β-carotene, but with 20 minutes of extraction. FRAP methodology is presented more efficient solvent 60%, 60 minutes and 220W power, whereas for the ABTS assay was 80% solvent and 80 W of power, independent of the extraction time. The extracts obtained through different methods of extraction showed no antimicrobial activity. However, the study confirms the antioxidant capacity of blueberries, which can be used as a functional ingredient or as a natural antioxidant in the preparation of food products. / Este trabalho teve como objetivo investigar a influência de diferentes parâmetros (concentração de solvente, tempo, temperatura e potência) nos métodos de extração (assistida por micro-ondas focalizada, convencional e por ultrassom) de compostos bioativos de mirtilo, visando maior rendimento dos compostos biativos, atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos. Os extratos foram caracterizados quanto o teor de fenólicos totais, flavonoides totais e antocianinas totais. As atividades antioxidante in vitro foram quantificadas pelos métodos de DPPH, ABTS, FRAP e β-caroteno, foi calculado o IC50 e avaliada a atividade antimicrobiana. Os resultados encontrados para a extração através das micro-ondas focalizadas apontam que as atividades antioxidantes medidas por FRAP, ABTS+ e DPPH, compostos fenólicos totais e antocianinas totais apresentaram uma tendência linear positiva em relação à temperatura de extração, sem diferença significativa entre as concentrações dos solventes (60 e 80%). O IC50 e o β-caroteno apresentaram maior inibição na temperatura de 60°C, porém estes somente nas condições de solvente 60% e 80%, respectivamente. Os flavonóides não tiveram diferenças significativas na temperatura de extração e nem no solvente utilizado. No método convencional de extração as melhores condições de extração para os compostos fenólicos, flavonóides e antocianinas foi utilizando 60% de solvente, 60 minutos e à 40ºC, porém as antocianinas, não sofreram influencia do tempo e da temperatura. O melhores resultados para as atividades antioxidantes, pelos métodos DPPH e FRAP, foram obtidos com solvente 60%, 30 minutos e à 30ºC, sendo que o DPPH não foi influenciado pela temperatura. Para o ABTS+ os melhores rendimentos foram com 60% solvente, 120 minutos e à 40ºC, enquanto que para o β-caroteno, 80% de solvente a 40ºC, independentemente do tempo. O ultrassom proporcionou melhores condições de extração de fenólicos, flavonóides e antocianinas utilizando 60% de solvente, 20 minutos e 80 W de potência, sendo que os compostos fenólicos não sofreram influência da potência e os flavonoides não foram influenciados pelo solvente. A atividade antioxidante pelo método DPPH e o IC50 apresentaram os melhores resultados com 60% de solvente, 60 minutos e 80 W de potência, as mesmas condições foram encontradas para o β-caroteno, porém com 20 minutos de extração. A metodologia de FRAP apresentou-se mais eficiente com solvente 60%, 60 minutos e 220W de potência, enquanto que para o método ABTS+ foi com 80% de solvente e 80 W de potência, independente do tempo de extração. Os extratos obtidos através das diferentes metodologias de extração não apresentaram atividade antimicrobiana. Contudo, o estudo confirma a capacidade antioxidante do mirtilo, podendo este ser utilizado como ingrediente funcional ou como antioxidante natural na elaboração de produtos alimentícios.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Most of the free radicals generated in the body is derived from oxygen and are associated with the development of many diseases. Medicinal plants are a natural resource in the treatment prevention of diseases and have been used for the first healthcare. These properties of the plants are related to the presence of phenolic compounds which possess several pharmacological and antioxidant properties. The high performance liquid chromatography has been used to identify and quantify these compounds in plants. Therefore, this study developed and validated an HPLC - PAD method using gold as working electrode to characterize 12 phenolic compounds in herbal extracts from Amazon. The extracts from Connarus perrotettii var angustifolius, Mansoa alliacea, Cecropia palmata, Cecropia obtusa, Bauhinia variegata and Bauhinia alboflava showed the presence of at least one of the antioxidants compounds under study. Furthermore, the species showed in vitro antioxidant activity against reactive oxygen species. The acetate fraction of the species M. alliacea showed the highest in vitro antioxidant activity (70.85 ± 4.06%) against the superoxide radical. Front of the peroxyl radical, the species C. palmata was responsible for the hidhest antioxidant activity (95.33 ± 0.95%) and against hydroxyl radical species C. obtusa showed the highest scavenging activity (98.19 ± 5.93). The study of the in vitro antioxidant activity of these species coupled with chemical characterization of their extracts comprises an important key to potential in vivo studies. Moreover, the compounds identified and quantified in these species extracts have pharmacological properties and may be linked to popular use of these medicinal plants / A maioria dos radicais livres gerados no organismo é derivada do oxigênio e estão associados ao desenvolvimento de diversas doenças. As plantas medicinais são um recurso terapêutico natural na prevenção de patologias e têm sido utilizadas a milênios pela humanidade nos primeiros cuidados com a saúde. Muitas dessas propriedades das plantas estão relacionadas com a presença de compostos fenólicos os quais possuem diversas propriedades farmacológicas e antioxidantes. A cromatografia líquida de alta eficiência tem sido utilizada na identificação e quantificação desses compostos em plantas. Dessa forma, o presente trabalho desenvolveu e validou um método de HPLC PAD utilizando eletrodo de ouro como eletrodo de trabalho para a caracterização de 12 compostos fenólicos em extratos de plantas medicinais da Amazônia. Os extratos das espécies Connarus perrotettii var angustifolius, Mansoa alliacea, Cecropia palmata, Cecropia obtusa, Bauhinia variegata e Bauhinia alboflava demonstraram a presença de pelo menos um dos compostos antioxidantes em estudo. Além disso, as espécies apresentaram atividade antioxidante in vitro frente à espécies reativas de oxigênio. A fração acetato da espécie M. alliacea demonstrou a maior atividade antioxidante in vitro (70,85 ± 4,06 %) frente ao radical superóxido. Frente ao radical peroxil, a espécie C. palmata foi responsável pela maior atividade antioxidante (95,33 ± 0,95 %) e frente ao radical hidroxil a espécie C. obtusa demonstrou a maior atividade sequestradora (98,19 ± 5,93). O estudo da atividade antioxidante in vitro dessas espécies aliada a caracterização química dos seus extratos compreende uma importante chave para possíveis estudos in vivo. Ademais, os compostos identificados e quantificados nos extratos dessas espécies apresentam propriedades farmacológicas comprovadas e podem estar associados ao uso popular dessas plantas medicinais.

The Fabaceae family is comprised of approximately 18 000 species in 650 genera, with wide geographic distribution. The species Glycyrrhiza glabra (licorice) and Periandra dulcis (licorice-of-the-earth) belong to the family Fabaceae. Licorice displays a variety of pharmacological activities, such as antiulcer, antiinflammatory, antioxidant, antimicrobial, among others. In ethnomedicine Brazilian, P. dulcis is used as a substitute/adulterant G. glabra. This study aimed to differentiate plants for antioxidant activity, the HPLC chromatographic profile and the antimicrobial activity. Plants roots were ground and macerated using as solvent ethanol: water (70:30, v/v). Became fractionation of crude extracts with organic solvents of increasing polarity (CH2Cl2, EtOAc, n-BuOH). The crude extract and the fractions were investigated for the content of total polyphenols, the antioxidant activity by DPPH and the inhibition of lipid peroxidation by TBARS method. The content of total phenolics ranged from 70.29 ± 2.98 to 85.78 ± 1.08 mg/g for P. dulcis and 137.7 ± 1.37 to 83.26 ± 2.71 mg/g to G. glabra. In the DPPH assay, the dichloromethane fraction was most effective in capturing free radicals in both plants. The butanol fraction of P. dulcis showed the greatest inhibition of TBARS, with IC50 of 1.38 ± 1.22 μg/mL and better chart the decay. In G. glabra, the dichloromethane fraction showed the best IC50 of 1.91 ± 0.73 μg/mL, but the best graphic decay was observed in the crude extract. Using the method proposed by the Brazilian Pharmacopoeia Fourth Edition, it was possible to differentiate the plants through the HPLC profiles. The absence of glycyrrhizin acid is evidence of falsification. However, the method does not allow the identification of the plant adulterant. The antimicrobial activity of the species was similar, varying only for Saccharomyces cerevisiae and Fusarium proliferatum. The sub-fractionation of P. dulcis improved activity against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella pullorum. / A família Fabaceae é constituída por aproximadamente 18000 espécies em 650 gêneros, com ampla distribuição geográfica. As espécies Glycyrrhiza glabra (alcaçuz) e Periandra dulcis (alcaçuz-da-terra) pertencem à família Fabaceae. Alcaçuz exibe uma variedade de atividades farmacológicas, como antiúlcera, antiinflamatória, antioxidante, antimicrobiana, entre outras. Na etnomedicina brasileira, P. dulcis é utilizado como substituto/adulterante de G. glabra. O presente trabalho objetivou a diferenciação das plantas quanto à atividade antioxidante, o perfil cromatográfico por CLAE e à atividade antimicrobiana. As raízes das plantas foram moídas e maceradas utilizando como solvente etanol:água (70:30, v/v). Fez-se fracionamento dos extratos brutos com solventes orgânicos de polaridades crescentes (CH2Cl2, AcOEt, n-BuOH). O extrato bruto e as frações foram investigados quanto ao conteúdo de polifenóis totais, atividade antioxidante pelo método do DPPH e inibição da peroxidação lipídica pelo método do TBARS. O conteúdo de fenóis totais variou de 70,29 ± 2,98 a 85,78 ± 1,08 mg/g para P. dulcis e 137,7 ± 1,37 a 83,26 ± 2,71 mg/g para G. glabra. No ensaio do DPPH, a fração diclorometano foi mais eficiente na captação de radicais livres em ambas as plantas. A fração butanólica de P. dulcis demonstrou a maior inibição dos níveis de TBARS, com IC50 de 1,38 ± 1,22 μg/mL e melhor decaimento gráfico. Em G. glabra, a fração diclorometano demonstrou o melhor IC50 de 1,91 ± 0,73 μg/mL, mas o melhor decaimento gráfico foi observado no extrato bruto. Utilizando o método proposto pela IV Edição da Farmacopéia Brasileira, foi possível diferenciar as plantas através dos perfis cromatográficos obtidos por CLAE. A ausência do ácido glicirrizínico é indício de adulteração. Contudo, o método não permite a identificação da planta adulterante. A atividade antimicrobiana das espécies foi semelhante, variando apenas para Saccharomyces cerevisiae e Fusarium proliferatum. O sub-fracionamento de P. dulcis melhorou a atividade frente à Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella pullorum.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The deficit of estrogen that accompanies menopause may be involved in the metabolic changes and increased oxidative stress during non-reproductive female life. Hormone replacement therapy (HRT) has been used to attenuate the menopausal symptoms. It is prescribed either as the replacement of estrogen alone or the combination of estrogen with progestins. Superoxide dismutase (SOD) is a key enzyme in the control of reactive oxygen species levels and SOD modulators may have potential use as therapeutic agents in oxidative stress-associated disorders. The objectives of this study were to evaluate: i) the effects of natural and synthetic estrogens and progestins on the activity of SOD from human blood in vitro; and ii) the effect of the hormone therapy with estrogen or estrogen plus progestin on the markers of oxidative stress in the blood of postmenopausal women and the relationship among these markers and the serum levels of estradiol and progesterone. The in vitro effect of steroid hormones (17 β-estradiol 17-acetate, progesterone, β-estradiol 3-benzoate and medroxyprogesterone 17-acetate) was evaluated in the enzyme purified from human erythrocytes (CuZnSOD) (Sigma) and in samples of erythrocytes (cytosolic CuZnSOD) and platelets-rich plasma (PRP) (MnSOD and cytosolic and extracellular CuZnSOD) obtained from healthy men and women. Hormones caused a dose-dependent stimulation of erythrocyte CuZnSOD activity at low concentrations (physiological), but this effect was abolished at higher concentrations. The combination of an estrogen with a progestin had a synergic effect on the erythrocyte CuZnSOD activity. In the PRP the activity of MnSOD was not affected by hormones, whereas the CuZnSOD activity was modulated only by the natural, but not by the synthetic hormone derivatives. Four groups of women were selected to evaluate blood markers of oxidative stress: premenopausal women (n=24), postmenopausal women without hormone therapy (HT) (n=31), postmenopausal women with estrogen-only HT (ET) (n=12) and estrogen plus progestin HT (EPT) (n=16). The levels of protein carbonyl, lipid peroxidation and the activity of catalase and glutathione peroxidase did not differ among groups. However, the activities of SOD isoforms (CuZn and MnSOD) and total plasma antioxidant power (FRAP) were significantly higher in postmenopausal women under EPT compared with postmenopausal women without HT, whereas ET increased only the activity of CuZnSOD in postmenopausal women. The duration of HT and serum E2 levels were positively correlated with the activity of CuZnSOD and the total antioxidant power of plasma (FRAP levels), whereas progesterone levels were positively correlated with the activity of CuZnSOD and negatively correlated with protein carbonyl levels. The total antioxidant power of plasma was positively correlated to the CuZnSOD activity and to the GPx activity. The present study demonstrated for the first time, that the natural and synthetic steroid hormones have a direct biphasic effect on CuZnSOD activity of human erythrocytes in vitro. We also observed that the hormone replacement therapy increase the antioxidant status of postmenopausal women due to an increase of the enzymatic antioxidant defenses and this effect is more remarkable with the combined hormone therapy (estrogen plus progestin). / O déficit de estrogênio, que acompanha a menopausa pode ser relacionado às alterações metabólicas e ao aumento do estresse oxidativo, observados na fase não reprodutiva feminina. A terapia de reposição hormonal é utilizada para atenuar os sintomas da menopausa. Ela é prescrita como reposição de estrogênio ou uma combinação de estrogênio com progestina. A superóxido dismutase (SOD) é uma enzima chave no controle dos níveis de espécies reativas de oxigênio e, moduladores da SOD podem ser úteis como agentes terapêuticos em desordens associadas ao estresse oxidativo. Os objetivos deste estudo foram avaliar: i) os efeitos, in vitro, de estrógenos e progesterona, naturais e sintéticos, sobre a atividade da SOD presente em sangue humano, e ii) o efeito da terapia hormonal com estrogênio ou estrogênio mais progestinas sobre os marcadores de estresse oxidativo no sangue de mulheres na pós-menopausa e a relação entre esses marcadores e os níveis séricos de estradiol e progesterona. O efeito, in vitro, de hormônios esteroides (acetato de 17β-estradiol (E2), progesterona, 3-benzoato de 17β-estradiol e 17-acetato de medroxiprogesterona) foi avaliado na enzima purificada a partir de eritrócitos humanos (CuZnSOD) (Sigma), e em amostras de eritrócitos (CuZnSOD citosólica) e de plasma rico em plaquetas (PRP) (CuZnSOD, citosólica e extracelular, e MnSOD, mitocondrial), obtidas a partir de homens e mulheres saudáveis. Os hormônios, em concentrações baixas (fisiológica), causaram uma estimulação, dose dependente, da atividade da CuZnSOD eritrocitária, embora, este efeito tenha sido suprimido em concentrações mais elevadas. Ademais, a combinação de um estrogênio com uma progestina apresentou um efeito sinérgico sobre a atividade da CuZnSOD eritrocitária. No PRP a atividade da MnSOD não foi afetada por hormônios, enquanto que a atividade da CuZnSOD foi modulada apenas pelos esteroides naturais. Quatro grupos de mulheres foram selecionados para avaliar marcadores sanguíneos de estresse oxidativo: mulheres na pré-menopausa (n = 24), mulheres na pós-menopausa sem terapia hormonal (TH) (n = 31), mulheres na pós-pausa utilizando TH, composta apenas de estrogênio (ET) (n = 12), ou de uma combinação de estrogênio mais progestinas (EPT) (n = 16). Os níveis de proteína carbonilada, peroxidação lipídica e da atividade de catalase e glutationa peroxidase (GPx) não diferiram entre os grupos. No entanto, as atividades das isoformas da SOD (CuZn e MnSOD) e o poder antioxidante total do plasma (FRAP) foram significativamente maiores em mulheres na pós-menopausa sob EPT em comparação com mulheres na pós-menopausa sem TH, enquanto que a ET aumentou apenas a atividade da CuZnSOD em mulheres na pós-menopausa. A duração da TH e os níveis séricos de E2 foram positivamente correlacionados com a atividade da CuZnSOD e com o poder antioxidante total do plasma (FRAP), enquanto que os níveis de progesterona foram positivamente correlacionados com a atividade da CuZnSOD e negativamente correlacionados com os níveis de proteína carbonilada. O poder antioxidante total do plasma foi positivamente correlacionada com a atividade da CuZnSOD e da GPx. O presente estudo demonstrou, pela primeira vez, que os hormônios esteroides, naturais e sintéticos, têm um efeito direto e bifásico na atividade da CuZnSOD eritrocitária humana in vitro. Também foi observado que a terapia de reposição hormonal aumenta a capacidade antioxidante de mulheres na pós-menopausa devido a um aumento das defesas antioxidantes enzimáticas (SODs) e que este efeito é ainda mais pronunciado com o uso de terapia hormonal combinada (estrogênio e progestinas).

Avaliação tecnológica e atividade antioxidante de produtos secos por spray-drying de Ilex paraguariensis A. St. Hil. – Aquifoliaceae (erva-mate) Ilex paraguariensis A. St. Hil. é uma espécie popularmente conhecida como erva-mate. O presente trabalho refere-se ao desenvolvimento e caracterização tecnológica de produtos secos por spray-drying, a partir de solução extrativa aquosa de I. paraguariensis, bem como de frações polifenólicas. Adicionalmente foi desenvolvido e validado um método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para a quantificação de polifenóis presentes tanto na matéria-prima vegetal como nos produtos secos. O método mostrou-se adequado para a quantificação de polifenóis em todas as preparações de I. paraguariensis. Quatro produtos secos por spray-drying foram preparados a partir do decocto. Entre os quatro produtos, o produto contendo 30 % de Aerosil® (PSI-A) apresentou as melhores características tecnológicas e de estabilidade frente à fotodegradação. Na avaliação da atividade antioxidante, no modelo experimental in vitro, tanto os produtos secos como as frações polifenólicas demonstraram atividade antioxidante, de maneira dose-dependente, caracterizada pela redução da quimiluminescência no ensaio de TRAP, baixos níveis de TBARS e aumento da atividade scavenger de radicais hidroxila. Fatias de fígado de ratos foram utilizadas como modelo ex vivo. Entre os produtos por spray-drying testados PSI-A e PSI-D e a fração FAB foram eficazes na redução da produção de TBARS quando comparados ao controle pré-incubado com ter-butilhidroperóxido (t- BHT), corroborando os ensaios in vitro. Para o ensaio in vivo empregou-se o modelo de dano hepático induzido por tetracloreto de carbono (CCl4), sendo o produto seco PSI-A selecionado para avaliação com base nos resultados obtidos na caracterização tecnológica. A administração de PSI-A, por via oral, durante 30 dias, na dose de 386 mg/kg, resultou em dano hepático menor, evidenciado por níveis menores de lipoperoxidação e maior atividade das enzimas superóxido desmutase e catalase, quando comparados ao controle. O conjunto de resultados sugere que o desenvolvimento tecnológico dos produtos secos, bem como de frações purificadas apresentou atividade antioxidante significante medida em ensaios in vitro e ex-vivo. Adicionalmente, os resultados também evidenciam efeito hepatoprotetor frente ao estresse oxidativo e dano hepático provocado pelo tetracloreto de carbono, medidos em ensaios in vivo. Estudos adicionais visando a investigar o papel destes produtos em patologias em que o estresse oxidativo parece estar envolvido são necessários. / Ilex paraguariensis A. St. Hil. is a plant specie traditionally known as maté. The present work was designed in view to develop, in semi-industrial scale, spray-dried extracts of Ilex paraguariensis from aqueous extracts as well as polyphenol fractions. Four spray-dried extracts were prepared from the aqueous extract using different excipients. In order to quantify the polyphenols present in raw plant material, spray-dried extracts and polyphenol fractions, a liquid chromatography (LC) method was validated. The spray-dried extract containing 30% of Aerosil® (SPD-A) presented the best technological characteristics and photostability. In vitro antioxidant activity evaluation of both spray-dried extracts and polyphenolic fractions showed a dose-dependent antioxidant activity. Quimiluminescence reduction in TRAP assay, low TBARS content and hydroxyl free radicals scavenger activity were observed. Rats liver slices were used for antioxidant test in ex vivo model.SPD-A and SPD-D (containing 15% of Aerosil® and 15% of Avicel®) spray-dried extracts and polyphenol fraction FAB were able to reduce TBARS production when compared to the control group preincubated with ter-butylhydroperoxide (t- BHT). Based on the technological characteristics and photostability, PSI-A spray-dried extract was selected for in vivo antioxidant activity evaluation using carbon tetrachloride (CCl4) induced hepatic damage as a model. Oral administration of 386 mg/kg of SPD-A during 30 days resulted in decreased liver damage as a consequence of lower lipoperoxidation levels and higher activity of superoxide dismutase and catalase enzymes when compared to a control group. In synthesis, the results suggest that both spray-dried extracts and purified fractions presented significant in vitro and ex vivo antioxidant activity. Additionally, in vivo antioxidant activity evaluation demonstrated a hepatic protection effect against oxidative stress and carbon tetrachlorideinduced damage. Further experiments aiming to investigate both spray-dried extracts and polyphenol fractions function in diseases involving oxidative stress represent a very interesting perspective.