Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Antônio Carlos Alessi / Banca: Rosângela Zacarias Machado / Banca: Wagner Luiz Tafuri / Banca: Karen Regina Lemos / Resumo: Na Leishmaniose Visceral Canina (LVC) a resposta imune órgãoespecífica pode variar de acordo com o órgão afetado, favorecendo ou não a multiplicação do parasito Leishmania (L.) chagasi. O objetivo deste estudo foi analisar, por meio, da técnica de imuno-histoquímica, o fígado e o baço de cães com Leishmaniose Visceral (LV), considerando a carga parasitária, a densidade de células Natural Killer (NK), de macrófagos e de linfócitos, bem como, células em apoptose, de células expressando moléculas de MHC-II e as citocinas TGF-b e TNF- a. Estes resultados foram comparados com os diferentes estágios da doença. Utilizou-se 71 cães naturalmente infectados de área endêmica para LV, classificados nos grupos sintomático (S), assintomático (A) e oligossintomático (O). Um grupo controle foi composto por 10 cães de área não endêmica para LVC. As células positivas para os anticorpos CD56, caspase 3 clivada, MHC-II, TGF- , TNF- , MAC387, CD3 e para a carga parasitária (soro hiperimune de cão positivo para LVC) foram submetidas a testes não paramétricos para a comparação entre os grupos. O baço foi o órgão que apresentou a maior carga parasitária. A apoptose de linfócitos foi maior nos cães sintomáticos quando comparados ao grupo controle. A intensidade de inflamação foi elevada nos cães com doença avançada (grupo S), caracterizada pela formação de granulomas difusos contendo parasitos. O fígado mostrou menor carga parasitária, um perfil celular dos granulomas rico em linfócitos. A densidade de células NK foi baixa no fígado e baço, bem como a imunodetecção das citocinas TGF- e TNF- . A expressão de MHC-II foi maior no baço de cães do grupo S. Portanto, pode-se sugerir que existe um padrão de resposta diferenciado no baço e fígado, porém outra metodologia deveria ser utilizada para quantificar de forma mais precisa as citocinas TGF- e TNF- nestes órgãos / Abstract: In Canine Visceral Leishmaniasis (LVC), the immune response to organ-specific can vary with the affected organ, thus favoring or hindering the multiplication of the parasiteLeishmania (L.) chagasi. . The aim of this study was to analyze by immunohistochemistry, the liver and spleen of dogs with visceral leishmaniasis (VL), considering the parasitic load, the density of Natural Killer cells (NK), macrophages and lymphocytes, as well apoptosis cells, cells expressing molecules of MHC-II and the cytokines TGF- and TNF- . These results were compared with different stages of disease. We used 71 naturally infected dogs from an endemic area for VL, classifieds in the symptomatic (S), asymptomatic (A) and oligosymptomatic (O) groups. A control group consisted of 10 dogs from nonendemic area for LVC.The positive cells for CD56 antibody, cleaved caspase 3, MHC-II, TGF- , TNF- , MAC387, CD3 and parasite load (serum hyperimmune dog seropositive for VL) were subjected to nonparametric tests for comparison between groups. The spleen was the organ with the highest parasite load. The apoptosis of lymphocytes was higher in symptomatic dogs when compared to the control group. The intensity of inflammation was higher in dogs with advanced disease (group S), characterized by the formation of granulomas containing diffuse parasites. The liver showed lowest parasite load, a profile of cell granulomas rich in lymphocytes The density of NK cells was low in the liver and spleen and few cells were positive for cytokines TGF- and TNF- . Expression of MHC-II was higher in the spleen of dogs in Group S. Therefore, one may suggest that there is a differential pattern of response in the spleen and liver, but other methods should be used to quantify more accurately the cytokines TGF- and TNF- in these organs / Doutor

Orientador: Henrique Luiz Monteiro / Coorientador: Sandra Lia do Amaral Cardoso / Banca: Acary Souza Bulle Oliveira / Banca: José Carlos Silva Camargo Filho / Banca: Marcelo Papoti / Banca: Rômulo Araújo Fernandes / Resumo: No contexto da saúde pública nacional, pouco se conhece sobre as particularidades do tratamento com estatinas e os efeitos musculares da associação de exercícios físicos moderados ao tratamento crônico, bem como seus mecanismos. Assim, os objetivos deste estudo foram avaliar as ações do tratamento medicamentoso com estatinas na saúde pública e os efeitos da terapêutica medicamentosa isolada e em associação a um programa de exercícios físicos moderados no tecido muscular. Para tanto, foram obtidas informações sobre o estado de saúde e o tratamento medicamentoso dos prontuários médicos (n=62) de mulheres atendidas em uma unidade básica de saúde (UBS). Posteriormente, as pacientes foram avaliadas quanto ao nível sócio econômico, presença de comorbidades, medicamentos em uso, nível de atividade física, autorrelato de dor muscular, aderência ao tratamento e composição corporal (n=72). Nas etapas subsequentes, foram incluídas somente as pacientes sedentárias e na menopausa (n=61); destas, uma parcela foi submetida à biópsia muscular (n=21) e aos testes de função muscular (n=17). Para exposição ao sedentarismo (n=12) ou à prática de exercício físico (n=13) aeróbio (50 minutos) e resistido (25 minutos), três vezes por semana, durante vinte semanas, foram incluídas as pacientes que não apresentaram fatores de risco para lesão muscular por estatinas. Ao final da intervenção, todas as avaliações foram reaplicadas. Verificou-se que a conduta médica de modificar dose (48,4%) e/ou o tipo (25,4%) de estatinas objetivou adequação do perfil lipídico sem lesar a musculatura. A não aderência das pacientes à prescrição médica foi de 15,5%, ocorrendo prioritariamente em mulheres jovens (p=0,057), com menor frequência de comorbidades (p=0,011) e baixo consumo de medicamentos (p=0,001). As biópsias musculares indicaram padrões de alterações metabólicas (MET) e neurogênicas (NEU) isoladas ou... / Abstract: In the Brazilian public health context, little is known about the particularities of statin treatment, and the mechanisms implied in skeletal muscle effects due to the association of long-term treatment and moderate physical activity. Thus, the aims of this study were to evaluate the actions for statin treatment in primary care, so as to assess muscle skeletal effects of statin treatment alone and in association with a moderate physical activity program developed in basic healthcare units. So, information collection in clinical reports was conduct in order to obtain health state and medication treatments of female patients (n=62) assisted in a basic healthcare unit (BHU). Identified patients were evaluated for socioeconomic state, comorbidities, medications in use, physical activity practice, self-reported muscle pain, adherence to medication treatment and body composition (n=72). In the following steps, only sedentary and menopause patients were included (n=61); of them, a sample was submitted to muscle biopsies (n=21) and test of muscle fucntion (n=17). For sedentary state (n=12) or aerobic (50 minutes) and resistance (25 minutes) physical exercise practice (n=13), three times per week, during 20 weeks, only free-statin predisposing muscle injury factors patients were included. In the end of intervention period, all parameters were revaluated. Medical attitude of modifying statin doses (48.4%) and/or types (25.4%) aimed lipid profile adequacy without muscle injuries. The frequency of non-adherent patients were 15.5% and mainly occurred in younger females (p=0.057), with less morbidities (p=0.011) and medication consumption (p=0.001). Muscle biopsies indicated patterns of metabolic (MET) and neurogenic (NEU) injuries, that occurred alone or associated, and had influenced the time to reach peak force (NEU > MET+NEU, p=0.01) and the percentage of force loss (NEU < MET+NEU, p=0.01). Adding moderate physical exercise to regular treatment ... / Doutor

Orientador: Christiane Pienna Soares / Coorientador: Eliana Aparecida Varanda / Coorientador: Valéria Valente / Banca: Denise Crispim Tavares / Banca: Raquel Alves dos Santos / Banca: André Gonzaga dos Santos / Banca: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Resumo: Trabalhos demonstraram que derivados da planta Casearia sylvestris protegem o DNA de danos. Dessa forma, este trabalho visa avaliar por quais mecanismos essa proteção ocorre. Os produtos naturais avaliados foram o extrato etanólico das folhas de C. sylvestris e os diterpenos clerodânicos obtidos deste extrato: casearinas B, D e X e caseargrewiina F. Para a avaliação dos efeitos propostos foram utilizadas como modelo as linhagens celulares HepG2, MRC5, XP4PA e Hepa 1c1c7. Primeiramente, os produtos naturais foram avaliados com relação à sua atividade citotóxica pelo teste do MTT e ensaio de sobrevivência clonogênica nos tempos de 24 e 48 h, obtendo-se o IC50 e o IC20. Em seguida, foi realizado o ensaio de genotoxicidade do cometa no tempo de 24 h utilizando-se incubação com a enzima FPG nas linhagens HepG2, MRC5 e XP4PA. Os produtos naturais se mostraram genotóxicos mesmo em pequenas concentrações. Após este ensaio, foi avaliada a antigenotoxicidade dos produtos naturais já nas concentrações pouco genotóxicas e não citotóxicas por 24 h. Para tanto, as células HepG2 foram expostas ao mutágeno peróxido de hidrogênio (H2O2 - 1mM) e pré e pós-tratadas com os produtos naturais. E, as linhagens MRC5 e XP4PA foram expostas à radiação ultravioleta C (UVC) e pré e pós-tratadas com os produtos naturais. Para a linhagem HepG2, o extrato etanólico, as casearinas B e D apresentaram inibição de danos fortes nas maiores concentrações testadas. Já para a linhagem MRC5 somente a casearina B foi capaz de produzir inibição moderada na concentração de 0,04 µM. Adicionalmente, foi verificada a resposta antiapoptótica dos produtos naturais pelo método da anexina-V-FITC/PI nas linhagens submetidas aos mesmos mutágenos do ensaio do cometa, aplicando-se o protocolo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies have shown that Casearia sylvestris derivatives protect DNA from damage. Thus, the aim of this study was to evaluate the mechanisms through which this protection occurs. The samples used in this study were the ethanolic extract of C. sylvestris leaves and the clerodane diterpenes obtained from this extract, including casearins B, D and X, and caseargrewiin F. The following cell lines were used: HepG2, MRC5, XP4PA and Hepa 1c1c7. First, all samples were assessed for their cytotoxic activity by using both the MTT assay and the clonogenic survival assay after 24 and 48 h of exposure, yielding the IC50 and IC20. Afterwards, the genotoxicity of the samples was assessed within 24 h following incubation with the samples using the FPG enzyme in the cell lines HepG2, MRC5 and XP4PA. The compounds proved to be genotoxic at all concentrations tested. Subsequently, the antigenotoxicity of the samples was assessed at concentrations that were at very low levels of cytotoxic or genotoxic after 24 h. HepG2 cells were exposed to the mutagen hydrogen peroxide (H2O2, 1 mM) and either pre or post-treated with the samples. Additionally, the cell lines MRC5 and XP4PA were exposed to ultraviolet C (UVC) and either pre or post-treated with the compounds. For the ethanolic extract in the HepG2 cell line, the casearins B and D showed strong inhibition of damage at the highest concentrations tested. In the MRC5 cell line, only casearin B was able to produce moderate inhibition (at 0.04 mM). Additionally, the anti-apoptotic response of the samples was assessed by an anexinV-FITC/PI assay in cell lines that were exposed to the same mutagens used in the comet assay, followed by post-treatment with the samples. The clerodane diterpenes, at high concentrations, increased the percentage of live cells and decreased... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Vera Claudia Lorenzetti Magalhães Cursi / Banca: Cristina Maria Rodrigues Monteiro / Resumo: Morte celular programada (MCP) ou apoptose é um fenômeno correspondente a resposta do hospedeiro a uma infecção viral, envolvida na morte e/ou sobrevivência da célula infectada. O vírus da cinomose, canine distemper virus (CDV) é capaz de induzir a apoptose em células linfoides circulantes, tecidos linfóides e cerebelo de cães naturalmente infectados. O CDV também afeta as células Vero e linhagens de células de tumor cervical modulando várias etapas da MCP. Além disso, a fase de imunossupressão, estabelecida a partir da infecção pelo CDV, nem sempre está associada à detecção de partículas virais nas células infectadas. No presente estudo, células mononucleares de sangue periférico de cães (CMSP) foram coletadas, cultivadas e infectadas com a estirpe vacinal de CDV (Onderstepoort) e após 24 h da infecção os eventos iniciais da apoptose foram evidenciados pela marcação e quantificação das proteínas anexina v™ e ApoTrace™. A expressão do RNA mensageiro relacionado ao gene Bax, BCl-2, caspase-3, 8 e 9 e survivin foi realizada em culturas de CMPC infectadas e não infectadas após 24h pela reação de cadeia de polimerase em tempo real. A infecção viral foi responsável pela perda da viabilidade CMPC com expressão da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC em mais de 80% das células infectadas em comparação ao grupo controle (p < 0,001) após 24 h. Os valores elevados da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC encontrados estão em contraste com a maior expressão do mRNA do survivin e da BCl-2, considerados marcadores anti-apoptotic (p < 0,0002). Além disso, Bax, caspase 3, 8 e 9 foram expressos na mesma proporção nas CMPC infectado e não infectado, sem diferenças entre elas (p < 0,005). Em síntese, as células infectadas pelo CDV aumentaram a expressão de survivin e transcrição de gene BCL-2, um mediador de... (Resumo completo, clicar acesso eletronico abaixo) / Abstract:Programmed cell death or apoptosis is a central axis of the host response to virus infection involved in cell survival and death. In this respect, several responses are developed by host cells that may control virus replication and infection. On the other hand, viruses have developed strategies to counteract host responses. Canine distemper virus (CDV) has been described to induce apoptosis in lymphoid tissues, lymphoid cells and cerebellum of naturally infected dogs. It has been also described affecting Vero cells and cervical tumor derived cells line by modulating programmed cell death pathways. In addition, the immunosuppression stage established from CDV infection is not always associated to virus detection in damaged cells. Examining the host response at early stages of immunosuppression, especially the expression of activators and/or inhibitors of apoptosis processes can provide important understanding of how the immune responses to CDV are orchestrated. For this purpose, canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) collected from healthy dogs were cultured and infected by CDV vaccine strain (Onderstepoort) and after 24 h post-infection (p.i.) early events of apoptosis were detected by search for annexin V™ and ApoTrace™ markers. The expression of mRNA of Bax, BCl-2, caspase-3, 8 and 9 and also survivin genes was performed in infected and uninfected canine PBMC at 24 h post- infection by real time polymerase chain reaction. The vaccine strain induced loss of PBMC viability with expression of annexin™ V FITC and Apo-Trace™ FITC in more than 80% of infected cells in comparison to control group (p<0.001) at 24h post-infection. The initial of early apoptosis after 24h post- infection is in contrast with higher expression of mRNA of surviving and BCl-2, two major anti-apoptotic proteins (p < 0.0002...(Complete abstract click eletronic acces below) / Mestre

Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Emanuel Carrilho / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Banca: Paulo Inácio da Costa / Resumo: Helicobacter pylori é o principal agente etiológico causador da gastrite crônica, úlcera péptica, adenocarcinoma e linfoma gástrico. Concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem modificar os fatores de virulência da bactéria e, consequentemente, a relação micro-organismo/hospedeiro, podendo alterar a progressão da infecção. Este estudo avaliou fatores de virulência de H. pylori cultivados em ½ e ¼ da concentração inibitória mínima de amoxicilina que poderiam alterar a liberação de citocinas, indução de óxido nítrico e apoptose em macrófagos RAW 264.7 infectados. A análise proteômica foi realizada por eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas diferencialmente expressas através da digestão por tripsina e espectrometria de massas A indução de óxido nítrico foi analisada através do reagente de Griess, as citocinas (interleucina - 1 beta, interleucina - 6, interleucina - 10, interleucina - 12, fator de necrose tumoral alfa e fator transformador de crescimento - beta) por ensaio imunoenzimático e apoptose por citometria, após 24 horas de infecção. Nossos resultados demonstraram que H. pylori previamente mantidos em sub-CIMs de amoxicilina apresentaram maior expressão de proteínas de choque térmico, enolase, argininosuccinato sintase, superóxido dismutase, ATP alfa sintase e proteína ativadora de neutrófilo, proteínas capazes de aumentar a indução de NO, IL - 1 β e IL - 12 e apoptose em relação à macrófagos infectados com H. pylori sem tratamento. Estes resultados sugerem que a amoxicilina em concentrações subinibitórias pode estimular a resposta imune no hospedeiro através da indução de alguns fator ... / Abstract: The infection caused by Helicobacter pylori is considered a major etiology agent in chronic gastritis, peptic ulcer, gastric carcinoma and gastric lymphomas. Sub-inhibitory concentrations of antibiotics have been shown to change virulent expression of microorganisms, which may change the progression of infection. This study assessed virulence factors of H. pylori after contact with ½ and ¼ the minimal inhibitory concentration of amoxicillin subinhibitory concentrations of amoxicillin that could modify the induction of cytokines, nitric oxide and apoptosis by infect RAW 264.7 macrophage-like cells. The proteomic analysis was realized by two dimensional electrophoresis and proteins differential expressions were characterized by tryptic digestion and mass spectroscopy. The induction of nitric oxide was assayed by Griess reagent, cytokines (interleukin - 1 beta, interleukin - 6, interleukin - 10, interleukin - 12, tumor necrosis factor alpha and transforming growth factor - beta) by Enzyme-Liked Immunoabsorbent Assay and apoptosis by annexin V - fluorescein isothiocyanate after 24 hours. Our results demonstrated that H. pylori previously maintained in sub - MICs of amoxicillin showed higher expression of virulence factors such as heat shock proteins, enolase, argininosuccinate synthetase, superoxide dismutase, ATP synthase alpha and neutrophil-activating protein inducing more oxide nitric, interleukin - 1β and interleukin - 12 and increased apoptosis than macrophages infected with H. pylori without treatment. These results suggest that amoxicillin, at sub-inhibitory concentrations, could contribute to the stimulation of immune response in the ... / Doutor

Orientador: Christiane Pienna Soares / Banca: Gisela de Aragão Umbuzeiro / Banca: Elza Tiemi Sakamoto Hojo / Banca: Daisy Maria Fávero Salvador / Banca: Eliana Aparecida Varanda / Resumo: O etanol obtido da cana-de-açúcar tem sido considerado um combustível alternativo. Entretanto, em países em desenvolvimento, a colheita de cana é realizada manualmente depois da queima, sendo responsável pela emissão sazonal de poluentes atmosféricos. A mutagenicidade dos resíduos de queima de cana (RQCA) e as partículas presentes na ROFA (residual oil fly ash) foram observados nos ensaios de micronúcleo em células sanguíneas de camundongos e de células mãe de grão de pólen de Tradescantia pallida (TRAC-MCN) particulado. O estudo também verificou a citotoxicidade, apoptose e genotoxicidade nas células tratadas com extrato orgânico contendo grande quantidade de HPAs e suspensão na biomassa do período de safra e entressafra. Uma alta freqüência de MN foi observada no TSP do período de safra que na entressafra e a porcentagem de células mortas foi maior em células tratadas com extrato orgânico contendo grande quantidade de HPAs e particulado. Elevada expressão de Bcl-2 e baixa expressão de p53 fosforilado foi verificado em células tratadas com extrato orgânico contendo grande quantidade de HPAs no período de safra e entressafra e em 24 e 48h pós-tratamento. É possível concluir que os HPAs presentes no período de safra e entressafra são genotóxicos e citotóxicos. Políticas públicas deveriam ser discutidas para se buscar alternativas que diminuam a emissão desse poluente. / Abstract: Ethanol obtained from sugar cane has been considered an alternative fuel. However, in developing countries, the handly harvesting is usually done after to sugar cane burning which is responsible for seasonal emission of air pollutants. The genotoxicity of sugar cane burning residues (SCBRs) and particle surrogates of residual oil fly ash (ROFA) were observed in micronuclei (MN) assay in mouse peripheral blood and bone marrow cells as well as in the pollen mother cells of Tradescantia pallida (TRAC-MCN). The study also verified cytotoxicity and genotoxicity of cells treated with polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) and suspension, in harvesting and non-harvesting particulated biomass. Higher frequency of MN was observed in harvesting TSP than non-harvesting and the cell death was higher in cells treated with PHAs in both particulates. Bcl-2 overexpression of p53 phosphorylated low expression was verified in the cells treated with PHAs in harvesting and non-harvesting in 24 and 48 hours after treatment. We can conclude that PHAs presenting in harvesting time, which represents burning sugar cane biomass and non-harvesting time (fuel fossil combustion) are cytotoxic and genotoxic. Public politics should be discussed to found alternatives which could decrease air pollution emissions. / Doutor

Orientador: Maria Rita Pacheco / Coorientador: Paulo César Ciarlini / Banca: Janaina Fernanda Gonçalves Neto / Banca: Marcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Luciane Helena Gargaglioni Batalhão / Banca: Márcio Mateus Beloti / Resumo: A destruição dos micro-organismos ocorre principalmente por mecanismos dependentes de oxigênio e pela liberação de enzimas líticas dos grânulos intracelulares dos neutrófilos. Neutrófilos ativados in vitro e in vivo geram espécies reativas de oxigênio e sofrem apoptose rapidamente. O resveratrol possui efeitos protetores na aterosclerose, possui potencial anticancerígeno e antiinflamatório podendo também atuar como protetor e regenerador dos antioxidantes primários do organismo. O objetivo do presente estudo foi verificar o efeito protetor de diferentes concentrações de resveratrol na apoptose e produção de superóxido de neutrófilos. Uma suspensão de neutrófilos final de 1 x 106 mL de 10 cães adultos hígidos foram aliquotadas e pré- incubadas com diferentes concentrações finais de resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) durante 4 horas. A taxa de apoptose foi determinada por citometria de fluxo capilar, utilizando-se do sistema Anexina V-PE e a de superoxido por sonda HE. Nos grupos tratados com resveratrol (30, 60 e 90 Rmol) e estimulados com CAM (camptotecina) não houve diminuição nos índices apoptóticos. Na presença de PMA (forbol-12-miristato 13 acetato) a fluorescência média do brometo foi superior em todos os tratamentos. Nos grupos tratados com RV e estimulados com PMA não houve diminuição na quantidade de superóxido. Conclusões: Nas doses utilizadas o resveratrol não inibiu a apoptose de neutrófilos. A incubação dos neutrófilos com RV não afetou a viabilidade celular. As taxas de produção de superóxido não diferiram entre os tratamentos utilizados p>0,05, constatado através de citometria de fluxo / Abstract: The destruction of microorganisms occurs mainly by oxygendependent mechanisms involving the generation of reactive oxygen metabolites and also the liberation of lytic enzymes from intracellular granules. Activated neutrophils generate ROS and suffer apoptosis quickly, verified in-vitro and in- vivo. Resveratrol has protective effects against atherosclerosis, it has anticarcinogenic and anti inflammatory potential and it may also protect and regenerate body's primary antioxidants. The objective of the present study was to examine the possible protective effect of different concentrations of resveratrol on apoptosis and superoxide production of stimulated neutrophils. A final neutrophil suspension of 1 x 106 of 10 adult healthy dogs was aliquoted and pre-incubated with different final concentrations of resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) for 4 hours. Superoxide production rate and apoptosis was determined by capillary flow cytometry used anexin V-PE system and HE probe. In PMA(forbol-12-miristato 13 acetato) presence, bromide average fluorescence was superior in every treatment. In the groups treated with resveratrol and stimulated with PMA there was no reductions in amount of superoxide. In groups treated with resveratrol and stimulated with CAM (camptotecina) there was no decrease in apoptotic index. It was also observed that the concentrations of RV used did not affected cellular viability / Doutor

Orientador: Yara Marcondes Machado Castiglia / Banca: Norma Sueli Pinheiro Módolo / Banca: Leandro Gobbo Braz / Banca: Artur Udelsmann / Banca: Fernanda Leite / Resumo: Introdução: O parecoxibe tem comprovada eficácia analgésica no tratamento da dor, entretanto seus efeitos adversos renais não estão esclarecidos. Se por um lado os inibidores da ciclooxigenase-2 geram danos ao rim por alterar a dinâmica vascular renal, por outro lado bloqueiam a inflamação, e admite-se que a inflamação esteja relacionada com prejuízos ao rim. Em casos de hipoperfusão renal, como em situação de hemorragia e hipovolemia, há diminuição direta do aporte de nutrientes e a isquemia estimula a produção de mediadores inflamatórios. O objetivo desta pesquisa foi avaliar se a dose única de parecoxibe influi na ocorrência de apoptose ou necrose em rins de ratos submetidos à hemorragia. Métodos: Vinte e quatro ratos Wistars adultos anestesiados com sevoflurano foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos (n=6): grupo placebo/ sem hemorragia (plac/ sh); grupo parecoxibe/ sem hemorragia (PCX/ sh); grupo placebo/ hemorragia (plac/ H) e grupo parecoxibe/ hemorragia (PCX/ H). Receberam bolus endovenoso em dose única de parecoxibe, 20mg/kg, ou placebo de acordo com a distribuição por grupos. Os animais dos grupos com hemorragia sofreram sangria correspondente a 30% da volemia durante 20 min. Após 80 min da administração do bolus de parecoxibe ou placebo e 30 min do fim da hemorragia, foi realizada nefrectomia bilateral para avaliação de necrose ou apoptose pela citometria de fluxo. Resultados: Os grupos que receberam parecoxibe (PCX/ sh e PCX/ H) apresentaram maior quantidade de necrose, menor quantidade de apoptose e maior quantidade de células viáveis renais pela citometria de fluxo. Conclusão: A dose única de parecoxibe gerou necrose renal, mas associou-se à proteção do órgão contra apoptose e à maior quantidade de células viáveis precocemente após hemorragia / Abstract: Introduction. Parecoxib has proven analgesic efficacy in the treatment of pain, however its adverse renal effects are unclear. The cyclooxygenase-2 inhibitors generate damage to the kidney through renal vascular dynamic changes, on the other hand they block the inflammation, and it is believed that inflammation is related to kidney damage. In cases of renal hypoperfusion, as in situation of hemorrhage and hypovolemia, there is direct reduction of nutrient input and ischemia stimulates the production of inflammatory mediators. The aim of this study was to evaluate whether a single dose of parecoxib influences the occurrence of apoptosis or necrosis in kidneys of rats submitted to hemorrhage. Methods. Twenty-four adult Wistar rats anesthetized with sevoflurane were randomly distributed into four groups (n=6): placebo/ no hemorrhage (plac/ nh), parecoxib/ no hemorrhage (PCX/ nh); placebo/ hemorrhage (plac/ H) and parecoxib/ hemorrhage (PCX/ H). The animals received single intravenous bolus of parecoxib, 20mg/kg, or placebo according to the group distribution. The animals in groups with hemorrhage suffered bleeding corresponding to 30 % of volemia during 20 min. Eighty min after the administration of parecoxib or placebo and 30 minutes after the end of the hemorrhage period, bilateral nephrectomy was performed to assess necrosis or apoptosis by flow cytometry. Results. The groups which received parecoxib (PCX/ nh and PCX/ H) showed a higher amount of renal necrosis, minor amounts of apoptosis, and higher amount of viable cells by flow cytometry. Conclusion. A single dose of parecoxib generated renal necrosis, but was associated with kidney protection against apoptosis and with increased number of viable cells early after hemorrhage / Doutor

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: José Buratini Junior / Banca: Gisele Zocardi Mingotti / Resumo: O fator de crescimento fibroblástico (FGF10) atua de forma parácrina no complexo cumulus-oócito, aumentando a expressão de genes relacionados à expansão das células do cumulus e à competência oócitária. Objetivou-se com o presente estudo testar se a adição do FGF10 ao meio de maturação melhora a maturação, diminui as taxas de oócitos apoptóticos e influencia na produção de embriões in vitro e na expressão de genes relacionados à competência e implantação embrionárias (COX2, CDX2 e PLAC8). Em todos os experimentos, oócitos foram obtidos de abatedouro, coletados de vacas adultas e maturados por 22 h em meio TCM 199 suplementado com: 2.5 ng/mL FGF10, 10 ng/mL FGF10, 50 ng/mL FGF10 ou na ausência de FGF10 (grupo controle). No Experimento 1, depois da maturação, os oócitos foram fixados e corados com TUNEL para determinar a porcentagem de oócitos apoptóticos e posteriormente com Hoechst-33342 para avaliação dos diferentes estágios da meiose (metáfase 1, metáfase 2 ou metáfase 2 com extrusão do primeiro corpúsculo polar). No Experimento 2, os oócitos foram fertilizados e cultivados até o estágio de blastocisto inicial. No experimento 3 avaliou-se o efeito da suplementação do FGF10 ao meio de maturação in vitro sobre a expressão dos genes COX2, CDX2 e PLAC8 em embriões bovinos. No experimento 1, os resultados demonstraram que a dose de 2,5 ng/mL FGF10 aumentou a porcentagem de oócitos com extrusão do primeiro corpúsculo polar (36%) quando comparado as doses de 10 ng/mL FGF10 (13%), 50 ng/mL FGF10 (12%) e grupo controle (19%; p≤0.05). Com relação ao número de oócitos apoptóticos, as maiores doses de FGF10 apresentaram menor quantidade de oócitos TUNEL-positivos (10 ng/mL and 50 ng/mL FGF10, 5% e 6%, respectivamente) quando comparados a menor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre

Orientador: Maria José Soares Mendes-Giannini / Banca: Christiane Pienna Soares / Banca: Maria Célia Jamur / Banca: Rosely Maria Zancopé Oliviera / Banca: Sônia Rozental / Resumo: Os mecanismos de virulência de Paracoccidioides brasiliensis não estão completamente esclarecidos. Há consenso que subcultivos sucessivos deste fungo acarretam a perda de sua patogenicidade que pode ser revertida pelo reisolamento do agente após passagem em animal, recuperando assim alguns fatores de virulência. No presente estudo, tivemos como objetivo clonar e sequenciar uma banda polimórfica de 300pb do DNA genômico do isolado de P. brasiliensis com alta virulência (após reisolamento de animal), e assim caracterizar um provável fator de virulência deste fungo. Os resultados mostraram que as adesinas são capazes de induzir apoptose nas células estudadas por diferentes mecanismos. Assim podemos concluir que P. brasiliensis dispõe, como outros patógenos, de adesinas que participam, não só da adesão deste fungo às células do hospedeiro, mas também de outros importantes mecanismos que possa estar contribuindo para a sua patogênese. / Abstract: The Paracoccidioides brasiliensis virulence mechanisms are not completely clarified. There is a consensus that successive subculturing of this fungus causes the loss of its pathogenicity, which can be reversed by passage in animals, with recovery of some factors of virulence. In the present study, we cloned and sequenced a polymorphic band of 300bp from P. brasiliensis genomic DNA of the one isolate with high virulence (after reisolation of animal). Thus, we can conclude that P. brasiliensis use, as many other pathogens, the adhesins as virulence factors to participate, not only of the adhesion of this fungus to the host cells, but in other important mechanisms to its pathogenesis. / Doutor