Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T06:29:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T02:14:15Z : No. of bitstreams: 1 188883.pdf: 13070306 bytes, checksum: 87496d4169fcf0e52ab380ee0a4bd56f (MD5) / O aperfeiçoamento das formas farmacêuticas é obtido pelo emprego da farmacotécnica e da tecnologia farmacêutica. O uso de biopolímeros, como a quitosana, no prolongamento e no retardamento da liberação de medicamentos tem sido muito estudado nos últimos anos. Enzimas podem ser imobilizadas pela cápsula de quitosana/alginato e por cápsulas de glutaraldeído/quitosana/alginato. Neste estudo avaliou-se o comportamento de cápsulas de quitosana/alginato, contendo 40, 60 e 100 mL de SOD ( concentração de 2500 U/mL, no prolongamento da liberação e do emprego de filme de glutaraldeído sobre cápsulas de quitosana/alginato, contendo 40 mL de SOD, como retardador do início da liberação desta enzima, em meio ácido e básico. As cápsulas de quitosana/alginato e glutaraldeído/quitosana/alginato foram feitas de acordo com a metodologia da Aiba (1985) e a análise da liberação baseada na inibição da redução do citocromo c, conforme Flohé & Ötting (1984). As cápsulas de quitosana/alginato promoveram o prolongamento da liberação da enzima e a duração do tempo foi inversamente proporcional ao conteúdo da mesma, em ambos o pHs. Em pH 2,0 as cápsulas com 40 mL de SOD retardaram o início da liberação e o prolongamento ocorreu em menor tempo, com menor quantidade liberada que os registrados em pH 7,4. O filme de gutaraldeído sobre as cápsulas de quitosana adiou o início da liberação da SOD em cerca de 120 minutos, enquanto que nas cápsulas sem esta proteção a liberação foi imediata, quando em pH 7,4 e retardamento registrado em pH 2,0 não ultrapassou a 60 minutos. O encapsulamento da SOD em quitosana/alginato e em glutaraldeído/quitosana/alginato modifica a sua disponibilidade, que é dependente da concentração e do pH do meio.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:26Z : No. of bitstreams: 1 Publico-306.pdf: 1379103 bytes, checksum: 957dc2ce0aca421fd39f25b8e307564a (MD5) / Objetivos: Avaliar a efetividade e a segurança da vitamina C, superóxido dismutase e pentoxifilina no tratamento da retinopatia diabética em pacientes adultos acometidos por esta doença, de acordo com os critérios clínicos da American Academy of Ophthalmology (Anexo 1). Métodos: Revisão sistemática utilizando a metodologia da Colaboração Cochrane. Estratégia de Busca: As bases pesquisadas foram: Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL, The Cochrane Library - até a última edição), MEDLlNE (1966 - 2007), EMBASE (1980 - 2007), CINAHL (1982 - 2007) e Web of Science (1980 - 2007), além de bases de dados de ensaios clínicos em desenvolvimento: Current Controlled Trials (www.controlled-trials.com - com ligações para outras bases de dados de ensaios clínicos em andamento). Também foi realizada busca manual em anais de congressos, em listas de referências de artigos publicados, e feito contato com companhias farmacêuticas e autores de artigos publicados. Não houve restrição de idioma. Critérios de Inclusão: Ensaios clínicos randomizados sobre o uso da vitamina C e superóxido dismutase na retinopatia diabética, isoladamente ou em associação, controlado com nenhuma intervenção, placebo ou fotocoagulação a laser, em adultos de ambos os sexos. Também foram usados ensaios clínicos randomizados sobre o uso da pentoxifilina associada à fotocoagulação a laser controlado com placebo ou com a fotocoagulação isoladamente, em adultos de ambos os sexos. O principal critério de exclusão foi idade inferior a 20 anos ou superior a 75 anos. Coleta e análise dos dados: A extração de dados foi feita de maneira independente por dois investigadores de acordo com critérios previamente determinados e os resultados foram comparados para determinação do grau de concordância. A avaliação da qualidade metodológica não foi feita devido à ausência de estudos que preenchessem os critérios de inclusão. Resultados: Em relação à revisão sobre o uso da vitamina C e superóxido dismutase no tratamento da retinopatia diabética, um total de 241 publicações foram identificadas através da busca eletrônica. Destas, 28 foram identificados como contendo potenciais informações sobre o tratamento dos pacientes com retinopatia diabética utilizando-se estas substâncias e foram lidos na íntegra. Em relação à revisão sobre o uso da pentoxifilina no tratamento da retinopatia diabética, um total de 97 publicações foram identificadas através da busca eletrônica. Destas, 17 foram identificados como contendo potenciais informações sobre o tratamento dos pacientes com retinopatia diabética utilizando-se esta substância e foram lidos na íntegra. Contudo, verificou-se que nenhum estudo, até o momento, avaliou o tratamento da retinopatia diabética com vitamina C, superóxido dismutase e pentoxifilina segundo os critérios de inclusão de tal forma a indicar se o uso destas substâncias apresenta um impacto significativo sobre a progressão da doença ou sobre a incidência de cegueira. Conclusões: Nenhuma pesquisa, até o momento, examinou de forma adequada o tratamento da retinopatia diabética com a vitamina C, superóxido dismutase e pentoxifilina de tal forma a indicar se tais formas de intervenção apresentam um impacto significativo sobre a progressão desta condição clínica. O potencial papel destas substâncias no tratamento da retinopatia diabética permanece aberto ao debate e sugere-se que futuras pesquisas que enfoquem desfechos clínicos, sejam realizadas para se avaliar a relevância desta abordagem clínica. / Objectives: To assess the effectiveness and safety of vitamin C, superoxide dismutase and pentoxifylline for the treatment of diabetic retinopathy in adults with such clinical condition according to diagnostic criteria of the American Academy of Ophthalmology (Table 1). Methods: Systematic review with Cochrane methodology. Search strategy: Databases: Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL, The Cochrane Library - until last edition), MEDLlNE (1966 - 2007), EMBASE (1980 - 2007), CINAHL (1982 - 2007) and Web of Science (1980 - 2007), databases of developing clinical trials: Current Controlled Trials (www.controlled-trials.com - with links to other databases of ongoing clinical trials), hand searched reference lists of published articles and conference meetings. Pharmaceutical companies and authors of published articles were contacted. There was no language restriction. Inclusion criteria: Randomized controlled trials (RCTs) about the use of vitamin C and superoxide dismutase for diabetic retinopathy, isolated or in combination, compared to no intervention, placebo or laser photocoagulation, according to diagnostic criteria of the American Academy of Ophthalmology. Randomized controlled trials (RCTs) about the use of pentoxifylline associated to laser photocoagulation for diabetic retinopathy, compared to no intervention or to laser photocoagulation, according to clinical diagnostic criteria of the American Academy of Ophthalmology. The main criteria for exclusion were patients aged less than 20 years or more than 75 years. Data collection & analysis: Data abstraction and quality assessment was performed independently by two investigators according to predetermined criteria and the results were compared to determine the degree of agreement. Quality evaluation was not done because of the absence of articles which fulfilled the inclusion criteria. Main results: In relation to the review about vitamin C and superoxide dismutase for diabetic retinopathy, 241 publications were identified through electonic search. Of these, 28 were identified as containing potential information about the treatment of patients with diabetic retinopathy using such substances and were read in full. In relation to the review about the use of pentoxifylline for diabetic retinopathy, 97 publications were identified through electonic search. Of these, 17 were identified as containing potential information about the treatment of patients with diabetic retinopathy using such substances and were read in full. However, no article until the moment, evaluated the treatment of patients with diabetic retinopathy using vitamin C, superoxide dismutase and pentoxifylline in such a way as to indicate whether these substances present a significant impact on disease progression or blidness incidence. Reviewers' conclusions: No research, until the moment, examined appropriately the treatment of diabetic retinopathy in such a way as to indicate whether such interventions present a 136 significant impact on the progress of this clinical condition. The potential role of these substances in the treatment of diabetic retinopathy remains open to debate and it is suggested that future research focalising clinical outcomes should be accomplished to evaluate such important subject. / TEDE

A doença do sono é causada pelo parasita Tripanosoma brucei. Considerada uma doença negligenciada, mata milhares de pessoas todos os anos na África subsaariana. O T.brucei não apresenta resposta imune pronunciada, o que dificulta o desenvolvimento de vacinas, e os medicamentos disponíveis são escassos. Os tripanossomatídeos são comprovadamente sensíveis ao stress oxidativo causado pelo radical superóxido. Assim, as enzimas superóxido dismutases (SODs) são a primeira linha de defesa contra esse radical. As SODs são metalo enzimas (EC 1.5.1.1) capazes de catalisar a dismutação do superóxido em oxigênio molecular e peróxido de hidrogênio. São classificadas de acordo com o metal incorporado na estrutura: cobre e zinco (CuZnSOD), ferro ou manganês (Fe/MnSOD) e níquel (NiSODs). Neste trabalho de mestrado, a enzima TbFeSODB2 de T.brucei foi, expressa, purificada, cristalizada e teve sua estrutura resolvida. A estrutura cristalográfica da enzima do parasita foi comparada com a enzima humana análoga contendo manganês (HuMnSOD), onde foram evidenciadas as principais diferenças entre as duas estruturas que podem ser exploradas para o desenho do novos inibidores seletivos. Foi realizada uma análise de acoplamento estatístico, onde com base em um alinhamento múltiplo dessas enzimas determinou-se resíduos que são capazes de interferir na seletividade do metal incorporado e estado oligomérico das SODs. / Sleeping sickness, caused by the parasite Tripanosoma brucei, is considered a neglected disease, killing thousands of people every year in subsaharian Africa. T. brucei does not generate a pronounced immune response, difficulting the development of vaccines. Furthermore, available medicines are scarce. Tripanosomatides are known to be sensitive to oxidative stress caused by the superoxide radical. Therefore, the superoxide dismutase enzymes (SODs) are a primary line of defence for the parasites against this radical. SODs are metalloenzymes (EC 1.5.1.1) capable of catalyzing superoxide dismutation into molecular oxygen and hydrogen peroxide. SODs are classified according to the incorporated metal: copper/zinc (CuZnSOD), iron/manganese (Fe or MnSOD) and nickel (NiSODs). In the work presented here, TbFeSODB2 from T. brucei was expressed, purified, crystallized and its 3D structure solved. The crystal structure of the parasite enzyme was compared to the homologous human enzyme containing manganese (HuMnSOD), revealing evidence for differences between both structures which could be exploited in the design of new selective inhibitors. In addition, a statistical coupling analysis was performed on the entire Fe/MnSOD superfamily, based on a multiple sequence alignment. It was shown that this technique was able to identify novel residue determinants of metal selectivity and oligomeric state.

A doença do sono é causada pelo parasita Tripanosoma brucei. Considerada uma doença negligenciada, mata milhares de pessoas todos os anos na África subsaariana. O T.brucei não apresenta resposta imune pronunciada, o que dificulta o desenvolvimento de vacinas, e os medicamentos disponíveis são escassos. Os tripanossomatídeos são comprovadamente sensíveis ao stress oxidativo causado pelo radical superóxido. Assim, as enzimas superóxido dismutases (SODs) são a primeira linha de defesa contra esse radical. As SODs são metalo enzimas (EC 1.5.1.1) capazes de catalisar a dismutação do superóxido em oxigênio molecular e peróxido de hidrogênio. São classificadas de acordo com o metal incorporado na estrutura: cobre e zinco (CuZnSOD), ferro ou manganês (Fe/MnSOD) e níquel (NiSODs). Neste trabalho de mestrado, a enzima TbFeSODB2 de T.brucei foi, expressa, purificada, cristalizada e teve sua estrutura resolvida. A estrutura cristalográfica da enzima do parasita foi comparada com a enzima humana análoga contendo manganês (HuMnSOD), onde foram evidenciadas as principais diferenças entre as duas estruturas que podem ser exploradas para o desenho do novos inibidores seletivos. Foi realizada uma análise de acoplamento estatístico, onde com base em um alinhamento múltiplo dessas enzimas determinou-se resíduos que são capazes de interferir na seletividade do metal incorporado e estado oligomérico das SODs. / Sleeping sickness, caused by the parasite Tripanosoma brucei, is considered a neglected disease, killing thousands of people every year in subsaharian Africa. T. brucei does not generate a pronounced immune response, difficulting the development of vaccines. Furthermore, available medicines are scarce. Tripanosomatides are known to be sensitive to oxidative stress caused by the superoxide radical. Therefore, the superoxide dismutase enzymes (SODs) are a primary line of defence for the parasites against this radical. SODs are metalloenzymes (EC 1.5.1.1) capable of catalyzing superoxide dismutation into molecular oxygen and hydrogen peroxide. SODs are classified according to the incorporated metal: copper/zinc (CuZnSOD), iron/manganese (Fe or MnSOD) and nickel (NiSODs). In the work presented here, TbFeSODB2 from T. brucei was expressed, purified, crystallized and its 3D structure solved. The crystal structure of the parasite enzyme was compared to the homologous human enzyme containing manganese (HuMnSOD), revealing evidence for differences between both structures which could be exploited in the design of new selective inhibitors. In addition, a statistical coupling analysis was performed on the entire Fe/MnSOD superfamily, based on a multiple sequence alignment. It was shown that this technique was able to identify novel residue determinants of metal selectivity and oligomeric state.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 248604.pdf: 837714 bytes, checksum: 019309fd773e7f81d605fc584437ac7a (MD5) / A proteína celular do prion (PrPC) é expressa em vários tipos celulares, especialmente em neurônios. Sua função fisiológica é desconhecida, no entanto, seu papel no desenvolvimento das doenças neurodegenerativas foi bem descrito, as quais resultam de uma mudança conformacional da PrPC para a forma scrapie (PrPSC). Vários estudos têm mostrado uma associação entre a PrPC, o metabolismo do cobre e a atividade antioxidante da superóxido dismutase (SOD). Contudo, os processos celulares envolvendo a PrPC, neste contexto, permanecem indefinidos. Considerando que o padrão de expressão protéica da SOD em vasos lesados foi similar ao verificado no cérebro de camundongos knockout para a PrPC, a hipótese do presente estudo foi que alterações da expressão da PrPC levariam à anormalidade da regulação do cobre e induziriam sub-atividade da SOD da parede vascular. Assim, nossos objetivos foram estudar se a expressão da PrPC sofre indução por agentes que desencadeiam o estresse do retículo endoplasmático (RE) e determinar seu envolvimento no que se refere à atividade da SOD. Análises de western blotting e RT-PCR foram usadas para determinar a ocorrência de alteração da expressão da PrPC na presença de estresse do RE. Células musculares lisas de aorta de coelho foram cultivadas por diferentes períodos de tempo (4, 8 e 18 horas), com agentes estressores do RE, angiotensina II (AngII, 100 nM), tunicamicina (Tn, 5 g/mL) e 7-cetocolesterol (7kc, 5 g/mL). A atividade da SOD foi determinada pelo método de inibição da redução do citocromo c, e a atividade basal da SOD foi 13,9 1,2 U/mg de proteína. O estresse do RE produziu diminuição significativa na atividade da SOD após incubação por 4 horas com Tn (29%) e 7kc (12%), 8 horas com Tn (37%), bem como, após 18 horas com AngII (42%) e 7kc (32%); inversamente, foi observado um aumento significativo na atividade da SOD nas células expostas a AngII (41%) durante 8 horas. A concentração celular de cobre, determinada através de espectroscopia de absorção atômica, foi cerca de 9 vezes maior nas células estimuladas com AngII por 8 horas. As análises de western blotting para as isoenzimas da SOD mostraram um perfil variado de expressão, em todos os tempos de incubação com os diferentes estímulos, que não se correlacionou com a atividade enzimática. A expressão da PrPC diminuiu após a exposição a todos os estímulos nos diferentes tempos de incubação. Os ensaios de RT-PCR mostraram aumento da expressão do mRNA para PrPC apenas nas células estimuladas durante 8 horas com os diferentes agentes estressores. A expressão do mRNA para PrPC também foi avaliada em fragmentos de artérias ilíacas de coelhos submetidos à lesão por cateter balão, com sobrevida de 7 e 14 dias, bem como logo após a lesão. Neste ensaio, a expressão do mRNA para PrPC apresentou aumento pronunciado no grupo avaliado logo após a lesão. Os resultados obtidos com os modelos de estresse do RE vascular aqui utilizados não demonstraram um perfil de atividade antioxidante para a PrPC. O que não descarta a hipótese desta proteína estar envolvida em outro tipo de resposta celular frente ao estresse oxidativo. Palavras-chave: superóxido dismutase, proteína celular do prion, estresse do retículo endoplasmático, células musculares lisas de aorta de coelho.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T21:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T02:47:48Z : No. of bitstreams: 1 184426.pdf: 19410415 bytes, checksum: 65707fa98d106af5611cc55c8828e6b5 (MD5) / Este trabalho avaliou os efeitos das vitaminas E e C na supersensibilidade dopaminérgica induzida por haloperidol, um modelo animal de discinesia tardia. Os resultados mostram que a vitamina E atenuou os parâmetros comportamentais indicativos de supersensibilidade, enquanto a vitamina C potencializou o efeito do neuroléptico, porém a administração concomitante destas vitaminas atenuou os parâmetros que caracterizam o fenômeno. A avaliação das enzimas catalase, superóxido dismutase, e glutationa peroxidase, e ainda da glutationa total, da glutationa oxidada, bem como a razão destas, não foi alterada pelos tratamentos com haloperidol ou com as vitaminas empregadas no presente estudo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-05Bitstream added on 2014-06-13T18:48:24Z : No. of bitstreams: 1 castro_mp_dr_jabo.pdf: 623759 bytes, checksum: 8b47fffe94519815df98fe793f386239 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Facta / A destruição dos micro-organismos ocorre principalmente por mecanismos dependentes de oxigênio e pela liberação de enzimas líticas dos grânulos intracelulares dos neutrófilos. Neutrófilos ativados in vitro e in vivo geram espécies reativas de oxigênio e sofrem apoptose rapidamente. O resveratrol possui efeitos protetores na aterosclerose, possui potencial anticancerígeno e antiinflamatório podendo também atuar como protetor e regenerador dos antioxidantes primários do organismo. O objetivo do presente estudo foi verificar o efeito protetor de diferentes concentrações de resveratrol na apoptose e produção de superóxido de neutrófilos. Uma suspensão de neutrófilos final de 1 x 106 mL de 10 cães adultos hígidos foram aliquotadas e pré- incubadas com diferentes concentrações finais de resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) durante 4 horas. A taxa de apoptose foi determinada por citometria de fluxo capilar, utilizando-se do sistema Anexina V-PE e a de superoxido por sonda HE. Nos grupos tratados com resveratrol (30, 60 e 90 Rmol) e estimulados com CAM (camptotecina) não houve diminuição nos índices apoptóticos. Na presença de PMA (forbol-12-miristato 13 acetato) a fluorescência média do brometo foi superior em todos os tratamentos. Nos grupos tratados com RV e estimulados com PMA não houve diminuição na quantidade de superóxido. Conclusões: Nas doses utilizadas o resveratrol não inibiu a apoptose de neutrófilos. A incubação dos neutrófilos com RV não afetou a viabilidade celular. As taxas de produção de superóxido não diferiram entre os tratamentos utilizados p>0,05, constatado através de citometria de fluxo / The destruction of microorganisms occurs mainly by oxygendependent mechanisms involving the generation of reactive oxygen metabolites and also the liberation of lytic enzymes from intracellular granules. Activated neutrophils generate ROS and suffer apoptosis quickly, verified in-vitro and in- vivo. Resveratrol has protective effects against atherosclerosis, it has anticarcinogenic and anti inflammatory potential and it may also protect and regenerate body’s primary antioxidants. The objective of the present study was to examine the possible protective effect of different concentrations of resveratrol on apoptosis and superoxide production of stimulated neutrophils. A final neutrophil suspension of 1 x 106 of 10 adult healthy dogs was aliquoted and pre-incubated with different final concentrations of resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) for 4 hours. Superoxide production rate and apoptosis was determined by capillary flow cytometry used anexin V-PE system and HE probe. In PMA(forbol-12-miristato 13 acetato) presence, bromide average fluorescence was superior in every treatment. In the groups treated with resveratrol and stimulated with PMA there was no reductions in amount of superoxide. In groups treated with resveratrol and stimulated with CAM (camptotecina) there was no decrease in apoptotic index. It was also observed that the concentrations of RV used did not affected cellular viability

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-08Bitstream added on 2015-04-09T12:48:01Z : No. of bitstreams: 1 000814570.pdf: 325846 bytes, checksum: 38c71d9ed63b85ebabb85fe53a185b6e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Oxidative stress occurs due to an imbalance between oxidants and antioxidant defenses. Considering that dogs with leishmaniasis may develop uremia, which affects the oxidative metabolism and apoptosis of neutrophils, we proposed to investigate the hypothesis that oxidative stress, alteration of oxidative metabolism and apoptosis of neutrophils in dogs varies according to stage of leishmaniasis and that uremia, commonly occurs in late stages of disease, would contribute to such variations. To this, we evaluated plasma markers of oxidative stress (total antioxidant capacity, lipid peroxidation, glutathione, uric acid, bilirubin and albumin), superoxide production (method of nitroblue tetrazolium reduction and flow cytometry with the probe hydroethidine), and viability and apoptosis rate (morphological method and flow cytometry using annexin V-PE system) on neutrophils from dogs with leishmaniasis classified according to the LeishVet Consensus in moderate stage of the disease, very severe stage when uremia is installed and dogs with uremia negative for leishmaniasis, comparing them to healthy dogs. Leishmaniasis regardless of stage and uremia cause oxidative stress with reduced total antioxidant capacity, which may be related to greater induced production of superoxide and stimulated apoptosis observed in these groups. While spontaneously, neutrophils of dogs in very severe stage and with uremia had lower viability, increased apoptosis and higher lipid peroxidation, suggesting that uremia is the cause of such changes. Can be concluded that the intensity of oxidative stress does not vary with the stage of leishmaniasis, however uremic condition contributes to reduce the viability of neutrophils in late-stage dogs. Changes of neutrophil oxidative metabolism occur concomitant with oxidative stress and increased neutrophil apoptosis in both leishmaniasis and in uremia alone / FAPESP: 2011/14083-0

Resumo:O estresse oxidativo ocorre quando há desequilíbrio entre as defesas antioxidantes e os agentes oxidantes no organismo. Considerando que cães com leishmaniose visceral podem desenvolver uremia, o que afeta o metabolismo oxidativo e a apoptose dos neutrófilos, propusemos investigar a hipótese de que o estresse oxidativo, a alteração do metabolismo oxidativo e da apoptose dos neutrófilos de cães variam com o estágio da doença e que a instalação do quadro de uremia contribui para esta variação. Para tal, foram avaliados marcadores plasmáticos de estresse oxidativo (capacidade antioxidante total, peroxidação lipídica, glutationa, ácido úrico, bilirrubina e albumina), a produção de superóxido (método de redução do tetrazólio nitroazul e citometria de fluxo com a sonda hidroetidina), viabilidade e taxa de apoptose (método morfológico e citometria de fluxo utilizando o sistema anexina V-PE) de neutrófilos de cães com leishmaniose classificados de acordo com o LeishVet Consensus em estágio moderado da doença, estágio muito severo quando a uremia está instalada e de cães com uremia sem leishmaniose, comparando-os a cães saudáveis. A leishmaniose, independentemente do estágio, e a uremia causam estresse oxidativo levando à redução da capacidade antioxidante total, que pode estar relacionado à maior produção de superóxido e maior apoptose induzida observada nesses grupos. Espontaneamente, neutrófilos de cães com leishmaniose muito severa e com uremia possuem menor viabilidade, maior apoptose e maior peroxidação lipídica, sugerindo que a uremia seja a causa de tais alterações. Conclui-se que ocorre estresse oxidativo independente do estágio da leishmaniose, entretanto a condição urêmica contribui para diminuição da viabilidade dos neutrófilos em cães no estágio final da doença. As alterações do metabolismo oxidativo dos neutrófilos ocorrem concomitante ao / Abstract:Oxidative stress occurs due to an imbalance between oxidants and antioxidant defenses. Considering that dogs with leishmaniasis may develop uremia, which affects the oxidative metabolism and apoptosis of neutrophils, we proposed to investigate the hypothesis that oxidative stress, alteration of oxidative metabolism and apoptosis of neutrophils in dogs varies according to stage of leishmaniasis and that uremia, commonly occurs in late stages of disease, would contribute to such variations. To this, we evaluated plasma markers of oxidative stress (total antioxidant capacity, lipid peroxidation, glutathione, uric acid, bilirubin and albumin), superoxide production (method of nitroblue tetrazolium reduction and flow cytometry with the probe hydroethidine), and viability and apoptosis rate (morphological method and flow cytometry using annexin V-PE system) on neutrophils from dogs with leishmaniasis classified according to the LeishVet Consensus in moderate stage of the disease, very severe stage when uremia is installed and dogs with uremia negative for leishmaniasis, comparing them to healthy dogs. Leishmaniasis regardless of stage and uremia cause oxidative stress with reduced total antioxidant capacity, which may be related to greater induced production of superoxide and stimulated apoptosis observed in these groups. While spontaneously, neutrophils of dogs in very severe stage and with uremia had lower viability, increased apoptosis and higher lipid peroxidation, suggesting that uremia is the cause of such changes. Can be concluded that the intensity of oxidative stress does not vary with the stage of leishmaniasis, however uremic condition contributes to reduce the viability of neutrophils in late-stage dogs. Changes of neutrophil oxidative metabolism occur concomitant with oxidative stress and increased neutrophil apoptosis in both leishmaniasis and in uremia alone / Orientador: Paulo César Ciarlini / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Mary Marcondes / Mestre

Orientador: Maria Rita Pacheco / Coorientador: Paulo César Ciarlini / Banca: Janaina Fernanda Gonçalves Neto / Banca: Marcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Luciane Helena Gargaglioni Batalhão / Banca: Márcio Mateus Beloti / Resumo: A destruição dos micro-organismos ocorre principalmente por mecanismos dependentes de oxigênio e pela liberação de enzimas líticas dos grânulos intracelulares dos neutrófilos. Neutrófilos ativados in vitro e in vivo geram espécies reativas de oxigênio e sofrem apoptose rapidamente. O resveratrol possui efeitos protetores na aterosclerose, possui potencial anticancerígeno e antiinflamatório podendo também atuar como protetor e regenerador dos antioxidantes primários do organismo. O objetivo do presente estudo foi verificar o efeito protetor de diferentes concentrações de resveratrol na apoptose e produção de superóxido de neutrófilos. Uma suspensão de neutrófilos final de 1 x 106 mL de 10 cães adultos hígidos foram aliquotadas e pré- incubadas com diferentes concentrações finais de resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) durante 4 horas. A taxa de apoptose foi determinada por citometria de fluxo capilar, utilizando-se do sistema Anexina V-PE e a de superoxido por sonda HE. Nos grupos tratados com resveratrol (30, 60 e 90 Rmol) e estimulados com CAM (camptotecina) não houve diminuição nos índices apoptóticos. Na presença de PMA (forbol-12-miristato 13 acetato) a fluorescência média do brometo foi superior em todos os tratamentos. Nos grupos tratados com RV e estimulados com PMA não houve diminuição na quantidade de superóxido. Conclusões: Nas doses utilizadas o resveratrol não inibiu a apoptose de neutrófilos. A incubação dos neutrófilos com RV não afetou a viabilidade celular. As taxas de produção de superóxido não diferiram entre os tratamentos utilizados p>0,05, constatado através de citometria de fluxo / Abstract: The destruction of microorganisms occurs mainly by oxygendependent mechanisms involving the generation of reactive oxygen metabolites and also the liberation of lytic enzymes from intracellular granules. Activated neutrophils generate ROS and suffer apoptosis quickly, verified in-vitro and in- vivo. Resveratrol has protective effects against atherosclerosis, it has anticarcinogenic and anti inflammatory potential and it may also protect and regenerate body's primary antioxidants. The objective of the present study was to examine the possible protective effect of different concentrations of resveratrol on apoptosis and superoxide production of stimulated neutrophils. A final neutrophil suspension of 1 x 106 of 10 adult healthy dogs was aliquoted and pre-incubated with different final concentrations of resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) for 4 hours. Superoxide production rate and apoptosis was determined by capillary flow cytometry used anexin V-PE system and HE probe. In PMA(forbol-12-miristato 13 acetato) presence, bromide average fluorescence was superior in every treatment. In the groups treated with resveratrol and stimulated with PMA there was no reductions in amount of superoxide. In groups treated with resveratrol and stimulated with CAM (camptotecina) there was no decrease in apoptotic index. It was also observed that the concentrations of RV used did not affected cellular viability / Doutor