Orientador: Eliana Cotta de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T21:29:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bassora_FernandaDutraSantiago_M.pdf: 2612060 bytes, checksum: 0ddcd23de6e1ce1f879247d7a9c9b2d7 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Está bem estabelecida na literatura especializada a associação inversa entre as concentrações plasmáticas de colesterol das lipoproteínas de alta densidade (HDL-C) e a incidência de doença arterial coronariana (DAC). Além de propriedades anti-oxidante, anti-inflamatória e anti-trombótica, a HDL participa do transporte reverso de colesterol, via pela qual o colesterol é captado das lipoproteínas e das membranas células periféricas e transportado ao fígado para sua excreção na forma livre ou de ácidos biliares. A lipase hepática (LH) possui função crucial no transporte reverso do colesterol, por sua atividade lipolítica e pela função de ligante à lipoproteínas facilitando sua captação tissular. A proteína de transferência de ésteres de colesterol (CETP), e mesma importância metabólica, promove a troca de ésteres de colesterol por triglicérides entre a HDL e as lipoproteínas ricas em triglicérides. Mutações nos genes que codificam estas proteínas têm sido muito estudadas para se compreender a função destas no metabolismo lipídico. O modelo experimental da hiperalfalipoproteinemia tem sido utilizado no decorrer dos últimos anos com o intuito de elucidar os mecanismos de ação da HDL e das proteínas reguladoras do seu metabolismo. A hiperalfalipoproteinemia é caracterizada pelo aumento das concentrações de HDL-C e é causada principalmente por deficiências genética de CETP e/ou LH. Os objetivos desta dissertação foram o de se estabelecer à modulação da hiperalfalipoproteinemia sobre os parâmetros antropométricos, bioquímicos, moleculares (¿514C/T do gene da LH e I405V do gene da CETP) e radiológicos (espessura da camada íntima média de carótidas) em uma amostra populacional brasileira. O estudo foi conduzido em 291 voluntários de ambos os sexos, classificados como hiperalfalipoproteinemicos (Hiper-A), HDL-C =68mg/dL, ou controles, HDL-C<68 e =32 mg/dL, de acordo com o valor do percentil 90, obtido em um estudo prévio do Laboratório de Lípides a partir população normolipidêmica. Os polimorfismos LH-514C/T e CETP I405V foram identificados através de técnicas de reação em cadeia polimerase (PCR) e a espessura da camada íntima-média de carótidas (EIM) pela ultra-sonografia de alta resolução. Em um primeiro trabalho observou-se em um sub-grupo de 169 indivíduos, com a medida da EIM, que somente a idade foi correlacionada com a EIM na hiperalfalipoproteinemia, enquanto que em controles houve modulação positiva pela idade, sexo masculino, pressão arterial sistólica, e controversamente com relatos da literatura, com HDL-C. Apesar de Hiper-A possuir um perfil com maior número de fatores de risco cardiovasculares, a semelhança encontrada na EIM de carótidas, assim como, da freqüência de EIM maior que 1 mm poderia, em parte, ser explicada pela grande diferença de modulação entre os grupos apontando para um traço protetor contra a aterosclerose carotídea em hiperalfalipoproteinemia. A ateroproteção reduzida em controles, tanto em homens quanto em mulheres, está de acordo com a observada associação negativa neste grupo entre EIM e a CETP com possível presença de HDL com a composição química alterada (ricas em TG e pobres em ésteres de colesterol), e ocorreu possìvelmente no sub-grupo masculino, com perfil pró-aterogênico evidente. Em um segundo trabalho, no sub-grupo de 169 indivíduos, com a medida da EIM, foi avaliado o efeito do polimorfismo LH-514C/T sobre a espessura da camada íntima-média de carótidas na hiperalfalipoproteinemia. Não se observou nenhuma variação de EIM em ambos os grupos em função deste polimorfismo. Quando comparados os grupos, o genótipo CC do polimorfismo LH-514C/T mostrou apenas tendência a maior EIM de carótidas em hiperalfalipoproteinemia (p<0,09), mas a freqüência de EIM maior que 1 mm foi igual. Em um terceiro trabalho, em 282-291 indivíduos foram avaliadas as semelhanças de freqüências entre os polimorfismos LH-514C/T e CETP I405V na hiperalfalipoproteinemia e normolipidemia. Ambos apresentaram altas freqüências, similares entre grupos e entre o polimorfismo LH-514C/T, CC 39%, CT+TT 61%; e o polimorfismo CETP I405V: II 26%, IV+VV 74% e CTL: CC 40%, CT+TT 60%, II 43% e IV+VV 57%. Descrevemos o polimorfismo LH-514C/T na hiperalfalipoproteinemia os TT vs CC apresentaram cintura menor, concentrações mais baixas de colesterol plasmático (C), fosfolípides (FL), LDL-C, estimativa do tamanho da LDL (LDL-C/ApoB). O polimorfismo CETP I405V na hiperalfalipoproteinemia em VV vs II, mostrou alta pressão arterial sangüínea e menores concentrações plasmáticas de HDL2TG e HDL3TG. O genótipo IV teve maiores concentrações plasmáticas de ApoAI e pressão arterial diastólica quando comparado com o genótipo II. Em resumo esta dissertação aponta para efeitos ateroprotetores ou neutros da hiperalfalipoproteinemia em uma amostra de população brasileira sobre a aterosclerose carotídea, inclusive no polimorfismo LH -514C/T. Os polimorfismos LH-514C/T e CETP I405V foram muito semelhantes com relação aos lípides e lipoproteínas séricos, mas não às proteínas reguladoras, oferecendo modulação protetora na hiperalfalipoproteinemia / Abstract: There is an inverse relationship between plasma concentration of high-density lipoprotein (HDL-C) and the risk of coronary arterial disease (CAD). Beyond anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-thrombotic properties, HDL plays a role on the reverse cholesterol transport, where cholesterol is taken from lipoproteins and peripheral cells to the liver for excretion. Hepatic lipase (HL) plays a key role in this process, by its lipolitic activities and ligand functions. Cholesterol ester transfer protein (CETP), of equal metabolic importance, facilitates the exchange of cholesterol ester and triglycerides between HDL and triglyceride rich-lipoproteins. Mutations and polymorphisms of these enzymes have being studied in order to evaluate its activity and metabolic consequences. Hyperalphalipoproteinemia (Hyper-A) has being used in the latest years with the purpose of evaluating the anti and pro-atherogenic mechanisms of HDL and of regulating proteins. The aim of this work was to establish the modulation of hyperalphalipoproteinemia in relation to controls on the anthropometric, biochemical, radiological and molecular manifestations. This study was conducted on 291 volunteers, classified as Hyper-A, HDL-C=68mg/dL and controls, HDL-C <68 e 32 mg/dL according to the percentile 90th, obtained from a local normolipidemic population study. We determined clinic data, lipid, lipoproteins and radiological parameters of volunteers. The HL-514C/T and CETP I405V polymorphism were determined by polymerase chain reaction methods. The carotid intima-media thickness measurements were performed high performance ultrasound. We showed in the first manuscript that although possessing a higher risk coronary vascular disease profile the similarity found in carotid could in part be explained by the striking differences in its modulation between the two groups, indicating a protective trait against carotid atherosclerosis in hyperalphalipoproteinemia. In the Hyper-A population, was only correlated with age, while in controls had a positive correlation with age, male sex, systolic blood pressure, and surprisingly with HDL-C. This dissociation between IMT and HDL-C could be accounted for by a small HDL particle number in CTL. In the manuscript 2, the ¿514C/T polymorphism did not contribute to variations in the carotid IMT and Hyper-A did not modulate the IMT variations, contrary to Rundek et al., (2002) who investigated the ¿514C/T polymorphism on variations in the carotid IMT in 87 stroke-free subjects suggested that CC genotypes had increase of carotid IMT, FMT and HALP. The HL-514C/T e CETP I405V polymorphisms, were no associate, were highly prevalent in the two groups but were not associated with HDL-C. In Hyper-A, LH-514C/T induced lower plasma cholesterol (C), phospholipids (PL), LDL-C and LDL size (LDL-C/ApoB). In Hyper-A CETP I405V decreased blood pressure, reduced TG in HDL subfractions 2 and 3 of (HDL2TG and HDL3TG) and increase ApoAI. The HL -514C/T polymorphism in Hyper-A the TT vs CC had lower waist hip-circumference, cholesterol (C) concentrations, phospholipids (PL), LDL-C and estimated size particle by LDL-C/ApoB. The genotype TT was different between 2 groups: in Hyper-A with relation the CTL, had lower HL, estimated size particle by TG/HDL-C and higher HDL2C, HDL3C, HDL3TG, ApoAI and C concentrations and had higher C, estimated size particle by LDL-C/ApoB, ApoAI, HDL2C, HDL3C and estimated size particle by TG/HDL-C. The CETP I405V polymorphism in Hyper-A, the VV vs II had higher Systolic Blood Pressure and lower HDL2TG e HDL3TG concentrations. The IV genotype had higher ApoAI concentration and Diastolic Blood Pressure. In Hyper A, the VV genotype had higher HDL2C, HDL3C, ApoAI, e TG concentrations and reduced concentration of VLDL- and estimated size particle of LDL by TG/HDL-C. In summary, this work indicates an athero-protector and neutral effect on the carotid atherosclerosis in Hyper-A between HL-514C/T and CETP I405V polymorphisms both modulated for plasma lipids more atheroprotective / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

A homeostase intracelular do colesterol é mantida, em células de mamíferos, por meio de uma série de mecanismos, porém pode haver uma ruptura deste balanço intracelular podendo levar ao desenvolvimento de doenças, como a lesão aterosclerótica que hoje em dia está acometendo grande parte da população mundial. A enzima HMG-CoA redutase, que possui cisteínas reativas em sua estrutura, pode ser alvo de estudos sobre o bloqueio do processo aterosclerótico, por meio de prostaglandinas da família das ciclopentenônicas (CP-PGs), particularmente a prostaglandina A2 (PGA2), que desviam completamente a síntese de novo de colesterol no sentido da síntese de fosfolípides em macrófagos/foam cells e outras preparações de macrófagos inflamatórios. Dessa forma o objetivo deste estudo foi investigar o efeito da PGA2 sobre a HMG-CoA redutase, em tipos celulares relacionados ao processo aterogênico, demonstrando seu mecanismo de ação por ligação covalente a cisteínas reativas desta enzima. Utilizaram-se macrófagos U937 que foram incubados ou não com LDL oxidada, tornando-se-os foam cells. As células foram tratadas com dose não tóxica (1 μM) de PGA2 ou com mistura controle por um período de 24 h. Outros grupos de macrófagos U937 e foam cells foram tratados com PGA2 biotinilada (com ou sem ditiotreitol, DTT 10 mM) na presença ou ausência de PGA2 (10 μM e 20 μM), por 2 h e 6 h. Foi feito também um estudo da atividade da HMG-CoA, através de kit específico e curvas de crescimentos celular em resposta PGA2. Nossos resultados mostraram aumento na imunodetecção de HMG-CoA redutase em macrófagos, quando tratados com LDL oxidada e tratados com PGA2 biotinilada por 2 h e 6 h, sendo que o tratamento com DTT produziu uma dramática redução na incorporação da mesma à enzima. A PGA2 foi capaz de reduzir a atividade da HMG-CoA em até 86,4% nas doses utilizadas. Macrófagos e foam cells tratados com PGA2 (1 μM) tiveram um aumento na proliferação celular quando comparados com aqueles que não receberam tratamento ou que foram tratadas com doses mais altas da PGA2. Nossos achados contribuem para esclarecer o mecanismo pelo qual ocorre a ação da PGA2 na reversão do processo aterosclerótico via inibição da enzima HMG-CoA redutase via ligação covalente nas cisteínas reativas desta enzima. / The intracellular cholesterol homeostasis is maintained in mammalian cells by a variety of mechanisms, although there may be intracellular breakdown of this balance that can lead to the development of diseases such as atherosclerotic lesions that are nowadays mostly affecting the population worldwide. The enzyme HMG-CoA reductase, which has critical reactive cysteines in its structure, may be target anti-atherosclerotic treatments , once cyclopentenonic prostaglandins (CP-PGs), particularly prostaglandin A2 (PGA2), which completely diverts de novo synthesis of cholesterol toward the direction of phospholipid synthesis in macrophages/foam cells in macrophage/foam cells and other inflammatory macrophage preparations. Thus the objective of this study was to investigate the effect of PGA2 on the HMG-CoA reductase in cell types related to the atherogenic process, demonstrating its mechanism of action by covalent binding to reactive cysteines of this enzyme. Macrophages U937 were used were incubated or not with LDL oxidized, making-up the foam cells. Cells were treated with non-toxic dose of PGA2 (1 μM) or with a mixture control for a period of 24 h. Other groups and U937 macrophage foam cells were treated with biotinylated PGA2 (with or without dithiothreitol, DTT, 10 mM) in the presence or absence of PGA2 (10 mM and 20 mM) for 2 h and 6 h. Was also made a study of the activity of HMG-CoA through kit specific and cell growth curves in response to PGA2. Our results showed the increase in immunodetection of HMG-CoA reductase into macrophages, when treated with LDL oxidized and treated with biotinylated PGA2 for 2 h and 6 h, and the DTT treatment produced a dramatic reduction the incorporation of the same enzyme. The PGA2 was able to reduce the activity of HMG-CoA to 86.4% at the doses used. Macrophages and foam cells treated with PGA2 (1 mM) had an increase in cell proliferation compared with those receiving no treatment or were treated with higher doses of PGA2. Our findings help to clarify the mechanism by which the action occurs in the PGA2 reversal of atherosclerosis by inhibiting the enzyme HMG-CoA reductase by way of covalent bond in the reactive cysteines of this enzyme.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2916_1.pdf: 1087622 bytes, checksum: ae8ab660983d9509bfff32d83791522d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundamento: Pacientes com doença renal crônica (DRC) apresentam sinergismo entre os fatores de risco tradicionais para aterosclerose e os emergentes como desnutrição, inflamação, estresse oxidativo, anemia, alteração do metabolismo de cálcio, fósforo e paratormônio (PTH). Objetivos: Determinar a frequência da síndrome malnutrição, inflamação e aterosclerose nos renais crônicos coronariopatas e calcular seu escore de Framingham. Métodos: os pacientes foram submetidos à bioquímica sanguínea, radiografia de tórax, eletrocardiograma e cálculo do índice tíbio-braquial (ITB). Pacientes com sintomas de insuficiência coronariana obstrutiva (ICO), isquemia em cintilografia miocárdica e/ou presença de disfunção sistólica (fração de ejeção de ventrículo esquerdo (FEVE) inferior a 45%) no ecocardiograma de repouso, idade maior que 50 anos e diabete melito (DM) como causa da DRC ou dois ou mais fatores de risco, realizaram cineangiocoronariografia. Assintomáticos, não diabéticos, sem fatores de risco, foram investigados com ecocardiograma e com único fator de risco com ecocardiograma e cintilografia. Resultados: Foram selecionados 46 pacientes, 58,7% homens. A média de idade foi 50,70 ± 11,7 anos; 82,6% hemodialíticos. Tempo médio de hemodiálise 61,96 ± 55,1 meses. No ecocardiograma a FEVE foi 63 ± 9% (n = 44). Na amostra, 28 pacientes (60,9%) foram submetidos à cineangiocoronariografia, dos quais 53,6% (n = 15) apresentaram ICO e 39,1% (n = 18) não se submeteram à cineangiocoronariografia. Não ocorreram associações significativas entre presença ou não de ICO e características clínicas, uso de drogas cardioprotetoras, situação pré-paratiroidectomia ou pré-transplante renal, sintomas, médias do ITB, albumina sérica e da proteína C reativa (PCR). A média de idade dos pacientes sem ICO foi 55,5 ± 8,6 anos, significativamente maior que no grupo sem cineangiocoronariografia (46,4 ± 13,3 p = 0,041). No grupo com ICO, 53,3% estavam pré-paratiroidectomia, com média de PTH 1.060,0 ± 939,5 pg/mL. Não houve diferença significativa em relação ao grupo de pacientes sem ICO (15,4% p = 0,055 pré-paratiroidectomia) com média de PTH 529,2 ± 429,6 pg/mL (p = 0,063), possivelmente pela limitação do tamanho da amostra. A ocorrência de PCR alterada foi de 40% no grupo com ICO. Conclusão: A frequência da síndrome malnutrição, inflamação e aterosclerose no grupo de coronariopatas com DRC não foi maior do que no grupo sem ICO. Essa população não apresentou maiores escores de Framingham, reforçando o efeito sinérgico de fatores de risco emergentes, dependentes da uremia e dos processos dialíticos

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5721_1.pdf: 8282548 bytes, checksum: e7e234c7f774b8e21afdf238da1c0013 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Em portadores de esquistossomose mansônica hepatoesplênica (EMH), os níveis plasmáticos do colesterol total e esterificado, e de lecitina: colesterol aciltransferase (LCAT) estão diminuídos, sugerindo que a EMH exerça efeito protetor contra a aterosclerose. O objetivo do estudo foi avaliar o índice tornozelo-braço (ITB) em portadores de EMH, operados e não operados (grupos I e II), e em não portadores de EMH (grupo III). Foram avaliados os ITB de 116 membros inferiores de 58 voluntários, através de duas técnicas (I e II), distribuídos da seguinte forma: grupo I: 17 pacientes, com média de idades de 44,8±10,5 anos; grupo II, 21 pacientes, com média de idades de 38,0±12,8 anos, e grupo III 20 voluntários sadios, com média de idades de 37,0±13,5 anos. Na técnica I, o ITB tomou-se a maior pressão sistólica do tornozelo, aferidas nas artérias tibial posterior e pediosa, e a maior pressão encontrada em um dos membros superiores. Na técnica II, foram utilizadas a menor pressão do tornozelo e a maior pressão braquial. Além dos ITB, foi medido o índice de massa corporal (IMC) e avaliado os fatores de riscos associados à aterosclerose. As médias do peso e IMC foram maiores no grupo controle (p<0,005). Em relação às doenças e fatores de riscos associados à aterosclerose, nenhum voluntário apresentou diabetes, doença coronariana e acidente vascular cerebral nos três grupos. A hipertensão arterial sistêmica (HAS) e o hábito de fumar foram mais freqüentes no grupo II, ocorrendo em oito pacientes (38,0%) e em dois pacientes (9,5%), respectivamente; sem diferença entre os grupos (p>0,05). Quando se utilizou a técnica I para medir o ITB, a maioria dos membros (77,6%) apresentou índices normais (0,9 e 1,2), 19% apresentaram índices >1,2 e 3,4% apresentaram aterosclerose periférica (ITB <0,9). Quando se utilizou a técnica II, a maioria dos membros (73,3%) apresentou valores normais de ITB, 8,6% apresentaram ITB >1,2 e 18,1% apresentaram ITB <0,9 (p>0,05). Quando se comparou os grupos, utilizando-se a técnica I, não se observou ITB <0,9 em nenhum dos três grupos. Quando se utilizou a técnica II, ITB <0,9 foi observado em 5 (29,4%), 5 (23,8%) e em 5(25%) dos pacientes dos grupos I, II e III, respectivamente (p>0,05). Pode-se concluir que não houve diferença significante entre os grupos em relação ao ITB, quando se utilizou as técnicas I e II. Houve tendência a maior sensibilidade para se diagnosticar aterosclerose periférica quando se utilizou a técnica II enquanto que a técnica I avaliou melhor o estado funcional do membro

Orientador: Otavio Rizzi Coelho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:13:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tornatore_ThaisFranchini_M.pdf: 1907097 bytes, checksum: 5b1b181996681047fcf543481e55173d (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A aterosclerose é caracterizada pelo recrutamento de monócitos e linfócitos para a parede do vaso. O efeito desencadeador deste processo é o acúmulo de partículas de LDL minimamente oxidadas, as quais estimulam as células endoteliais a produzirem moléculas pró-inflamatórias. Em adição à LDL oxidada, vários outros fatores modulam a inflamação tais como forças hemodinâmicas, hormônios sexuais e infecção. O objetivo deste estudo foi demonstrar o efeito anti-aterogênico do DMA, 6,7-Dimetoxi-4-N-(3¿-N¿,N¿-dimetil)fenilaminoquinazolina, em camundongos LDLr-/- . Este efeito pode ser relacionado com a propriedade anti-inflamatória do composto estudado, por evidências de que o mesmo aumenta a biodisponibilidade de adenosina nos tecidos pela inibição da adenosina quinase. Nossos resultados mostraram que o DMA administrado via oral, tanto no tratamento preventivo, quanto no tratamento de lesões pré estabelecidas, em camundongos LDLr-/- alimentados com dieta hipercolesterolêmica (1,25% colesterol e 0,5% ácido cólico) diminui o tamanho das placas ateroscleróticas em 67% e 52%, respectivamente, em relação ao grupo controle que recebeu veículo. Esses dados foram obtidos através da planimetria das lesões ateroscleróticas na base da artéria aorta com a coloroção Oil Red O específica para lipídios. A dieta hipercolesterolêmica (HC) por 15 e 30 dias reduziu o triglicéride sérico, medido pelo sistema de cromatografia líquida, em cerca de 50% sendo que o tratamento com DMA cancelou esta redução. A dieta HC por 15 e 30 dias aumentou o colesterol sérico, em cerca de 2 vezes nos camundongos LDLr-/-. Camundongos tratados com DMA e dieta HC apresentaram níveis de colesterol total maiores do que o grupo alimentado somente com dieta HC. Dados revelaram que este aumento foi devido ao maior nível de HDL circulante nos camundongos tratados com o composto DMA. Todos os camundongos em tratamento, tanto com DMA quanto com veículo, apresentaram redução do peso corporal em relação ao grupo de camundongos alimentados com dieta hipercolesterolêmica (HC) / Abstract: Atherosclerosis is characterized by the recruitment of monocytes and lymphocytes to the artery wall. A triggering event for this process is the accumulation of minimmally oxidized LDL, which stimulates the overlying endothelial cells to produce a number of pro-inflammatory molecules, including hemodynamic forces, sex hormones and infection. We demonstrated that DMA, ,7-Dimethoxi-4-N-(3¿-N¿,N¿-dimethyl)phenilaminoquinazoline, have an anti-atherogenic effect in mice LDLr-/-. This effect could have a relationship with an anti-inflammatory property of adenosine in tissues, by the inhibition of adenosine kinase. Results showed that DMA administrated by oral via, as prevent treatment, as pre-established lesions, in mice LDLr-/- with hypercholesterolemic diet (1,25% cholesterol and 0,5% colic acid), decreases atherosclerotic lesions in 67% and 52% respectively in relation of the vehicle group. These data was obtained by planimmetric study of atherosclerotic lesions in the base of aortic arthery with Oil Red O especific for lipids. The hypercholesterolemic diet by 15 and 30 days, decreases serum tryglicerides in 50%, in the other way, the treatment with DMA cancelled this reduction. At the same time, HC diet by 15 and 30 days increases total cholesterol serum, in 2 times in mice LDLr-/-. Mice treatment with DMA and hypercholesterolemic diet showed serum cholesterol higher than the HC group (control). Results demonstrated that this increase have relationship with higher HDL serum level in mice treated with compound. All mice in treatment (DMA and Vehicle group) had the weight decreased. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Joyce Maria Annichino-Bizzacchi, Valder Roberval Arruda / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:25:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabri_DanielaRamos_D.pdf: 28613634 bytes, checksum: 506450d54c214e02520051f098953569 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As complicacoes associadas a aterosclerose sao as causas mais comum de morte na populacao ocidental. O entendimento da aterosclerose como uma doenca inflamatoria e a associacao da coagulacao com fenomenos inflamatorios e complicacoes da doenca arterial oferecem novas oportunidades de prevencao e tratamento.Estudos populacionais demonstraram que o risco de infarto agudo do miocardio esta reduzido em 80% em homens hemofilicos A (HA) se comparados com controles pareados em idade e sexo. No entanto, lesoes ateroscleroticas iniciais foram identificadas em pequenos grupos de pacientes com coagulopatias por estudo ultrassonografico de arterias carotida e femural de forma semelhante aos controles pareados.O objetivo deste estudo e determinar o papel dos fatores VIII e IX dacoagulacao no desenvolvimento da doenca aterosclerotica em dois diferentesmodelos animais de dilipidemia. Comparamos grupos de animais deficientes deFVIII (HA) ou animais deficientes de FIX (HB) deficientes apoliproteina E (APOE-/-) ou deficientes de receptores de lipoproteina de baixa densidade (LDLR-/-) comanimais hemostaticamente normais deficientes apenas de apoE (APOE-/-) ou deLDLR (LDLR-/-). Todos animais da linhagem C57Bl/6, pareados em sexo e idade.Nossos resultados sugerem que o FVIII tem um papel protetor e tempodependente no desenvolvimento da aterosclerose nos animais deficientes de apoE, independente dos seus elevados niveis de colesterol. No entanto, essaprotecao nao foi evidente nos animais LDLR-/-.A deficiencia severa do FIX (<1%) nao protegeu contra o desenvolvimento da aterosclerose. Surpreendentemente, estes animais apresentaram significantemente mais lesoes nos periodos mais tardios nos dois modelos de doenca aterosclerotica utilizados. Os animais HB/APOE-/- apresentaram altos indices de mortalidade a partir de 20 semanas do periodo de dieta. Os elevados niveis de FIX nao influenciou o desenvolvimento da doenca arterial nos modelos apoE, mas mostrou-se como fator de risco para trombose venosa.Este estudo demonstra que o FVIII e o FIX tem papeis heterogeneos na evolução da aterosclerose, sugerindo participacao em mecanismos independentes ao da coagulacao no desenvolvimento da doenca arterial, e novos estudos devem ser realizados visando novas possibilidades terapeuticas tambem para os pacientes hemofilicos de idade mais avancada com risco de doenca cardiovasculares. / Abstract: Complications of atherosclerosis are the most common causes of death in Western societies. The knowledge that atherosclerosis is an inflammatory disease and coagulation affects the disease's complications offers new opportunities for prevention and treatment. Population studies demonstrated that the risk for myocardial infarction is reduced by 80% among hemophilia A (HA) men compared to age and gender-matched controls. However, early atherosclerotic lesions were readily identified in small cohorts of adults HA and hemophilia B (HB) by ultrasonography of carotid and femoral arteries in a similar fashion to an agecontrol male group. Here we sought to determine the role of FVIII and FIX on the development of atherosclerosis in two different mouse models. We compared a group of FVIII (HA) or FIX deficient mice (HB) lacking the low-density lipoprotein receptor (LDLR- /-) or apolipoprotein E (APOE-/-) with hemostatically normal littermate controls lacking either LDLR (LDLR-/-) or apoE (APOE-/-). All mice were on C57Bl/6 background and all groups were matched for gender and age. Our results suggest that FVIII has a protective and time dependent effect on development of atherosclerosis in apoE deficient mice, independently of higher cholesterol levels. Notably, FVIII deficiency did not influence the vascular disease of LDLR-/- mice. Severe FIX deficiency (<1% of normal) did not protect against the development of atherosclerosis. Unexpectedly, the rates of lesions were higher at late time points in the APOE-/- model. In addition, high levels of FIX was did not influence the vascular disease in APOE-/- whereas venous thrombosis was documented in 3/6 mice. Moreover, in the HB/APOE-/- model, the rates of atherosclerosis were higher at week 22 and beyond this age these mice presented high rates of mortality than controls. These data demonstrate that FVIII and FIX play a rather heterogeneous role in the development of atherosclerosis which suggest that there are coagulation independent mechanisms in the development of vascular diseases. Further studies in hemophilia B subjects and carriers are warranted to define the FIX effect on the onset and progression of occlusive vascular disease which may raises concerns on the onset cardiovascular risks on an aging hemophilia population. / Doutorado / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Eliana Cotta de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T13:08:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castanho_VeraSylvia_M.pdf: 2472228 bytes, checksum: a33218da4b6d453cb923b139094eb04a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A aterosclerose é a principal causa de morte na civilização ocidental. É uma doença progressiva e insidiosa que geralmente começa na infancia e tem manifestações clínicas na maturidade, principalmente através da Doença Arterial Coronariana (DAC). No Brasil, observa-se uma tendência de aumento da mortalidade por DAC, desde 1930, porém, no Município de São Paulo, detectou-se, desde a década de 70, um declínio na mortalidade geral por DAC no sexo masculino de 13,83% e um aumento com relação ao sexo feminino de 1,93%. Por outro lado, a prevalência da DAC aumentou tanto no sexo masculino, em 5,70%, quanto no feminino, em 13,74%. Em outros países, esse comportamento ascendente não tem sido relatado. Nos EUA, nas últimas duas décadas, houve queda de 45% na incidência de DAC, mas apesar disso essa doença ainda permanece como a principal causa de morte naquele país. Por inúmeras razões, as mulheres sempre foram consideradas protegidas contra a DAC e excluídas por muitos anos dos estudos epidemiológicos. Atualmente, com as crescentes taxas de incidência e de mortalidade no sexo feminino e também por apresentarem pior prognóstico durante o infarto e nos procedimentos de revascularização pós-infarto, maior atenção vem sendo dada à doença. O Brasil é um dos países com menor diferença de incidência de DAC entre os sexos. Neste estudo determinamos as prevalências de alguns fatores de risco para a DAC, tais como aumento do colesterol sanguíneo, hipertensão arterial, tabagismo, diabetes mellitus, obesidade e sedentarismo, comparando-os entre os sexos, em diferentes faixas etárias e diferentes índices de massa corpórea (IMC). Avaliamos também a influência destes sobre o colesterol sangüíneo total. Para tal, 873 adultos voluntários preencheram um questionário contendo infomações sobre dados antropométricos e a presença de fatores de risco, além da medida do colesterol total sangüíneo pelo método de reflectância, utilizando-se o Reflotron (Merck). Analisou-se os resultados através do programa SAS, na população total e em sub-grupos de idade e de índice de massa corpórea. As mulheres apresentaram prevalências de fatores de risco iguais ou menores com relação aos homens. Apresentaram menor prevalência do que os homens de colesterol sangüíneo total, abaixo de 200 mg/dL. Essa diferença localizou-se no grupo etário igual ou superior aos 55 anos. Para a hipertensão arterial, os dois sub-grupos de idades, mostraram maiores prevalências e a diferença foi duas vezes maior nas mais jovens quando comparadas aos homens mais jovens. Com relação à obesidade, a prevalência na mulher não foi diferente da encontrada no homem em idade mais alta. Somente na mulher a freqüência aumentou com a idade. O diabetes mellitus não ocorreu em homens jovens nessa população e sim em mulheres jovens. Nos grupos de maior faixa etária não houve diferença entre os sexos. Com relação ao sedentarismo não se observaram diferenças entre os sexos ou entre os grupos etários. O fumo foi fator de risco de maior prevalência masculina; porém, não houve diferença significativa entre os dois sub-grupos etários mais jovens. O sexo, a idade, o IMC, a hipertensão e o sedentarismo relacionaram-se com o colesterol sangüíneo total. O sexo mostrou interação significativa com a idade e com o IMC, nas análises logísticas. As mulheres apresentaram maior chànce com relação aos homens de serem hipercolesterolêmicas com o aumento da idade. A chance em indivíduos com sobrepeso e obesidade foi 23% maior do que naqueles com IMC nos limites de referência. Após os 50 anos, as mulheres apresentam duas vezes mais chance de terem colesterol > 240mg/dL do que os homens, que apresentam chance 20% maior, abaixo de 50 anos. Em indivíduos com sobrepeso ou obesidade, também após os 50 anos, a chance de hipercolesterolemia caiu para 1,02 com relação a 1,8 na faixa etária abaixo de 50 anos, ou seja, o impacto do sobrepeso muda no grupo jovem. Os resultados obtidos nessa população indicam que a menor diferença entre os sexos na incidência de DAC no Brasil pode ser explicada, pelo menos em parte, pela conglomeração de fatores de risco mais ou igualmente prevalentes na mulher. Além disso, as altas prevalências de fatores de risco nessa população apontam para a necessidade da implantação de medidas de controle desses para a prevenção da DAC em nosso país / Abstract: This study aimed at comparing the prevalence of various risk factors for coronary heart disease (CHD) between the sexes in a Brazilian population. Eight hundred and seventy-three adult volunteers had their total blood cholesterol (CHOL) measured and filled in a questionnaire with information on the presence of the following risk factors for CHD: diabetes mellitus, hypertension, obesity, sedentary lifestyle and cigarette smoking. The data were ana1yzed for the total population and according to sub-groups of age, sex and body mass index (BMI): 45 versus < 45 years old (y) for men, and 5 versus <55 y for women, and 5 versus <25 kglm2. CHOL was associated with BMI, sexo age, hypertension and sedentariness. Age and sex presented a very significant interaction at alIlages and BMI and sex presented it at and afier the age 50y. The population presented high ftequencies of all the risk factors evaluated. High CHOL and hypertension were more prevalent among women as compared to men. Hypertension, diabetes and smoking showed equal or higher prevalence in women in premenopausal ages as compared to men. Obesity and sedentariness were equally prevalent in both sexes respectively in the postmenopausal age group and at alI ages. We conc1ude that: 1- Age, sex, BMI, hypertension and sedentariness influenced CHOL in this population; 2- The prevalence of the CHD risk factors indicate that there is an urgent need for its control in Brazil; 3- These results may explain the high rates of incidence of CHD in Brazilian women as compared to men / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Luis Alberto Magna / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T18:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dalpino_Dirceu_M.pdf: 1692260 bytes, checksum: b4ea574ae451d2b794563c4f1aea075d (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Muitos pacientes portadores de hanseníase virchoviana, após longo tempo de evolução, apresentam alterações dérmicas muito semelhantes aos xantomas e seus exames histológicos mostram numerosos macrófagos carregados de material lipídico. Esses fatos, associados a alterações humorais dos lipídeos descritas na literatura, sugerindo alterações no metabolismo dos mesmos, levou-nos a estudos, visando estabelecer valores médios em pacientes, utilizando-se de novas determinações lipoprotêicas e de apoproteínas muito mais precisas. Para tanto, selecionamos 82 pacientes virchovianos internados no Instituto Lauro de Souza Lima, Bauru, S.P. ou atendidos ambulatorialmente no Centro de Saúde I da mesma cidade, que não estivessem apresentando surto reacional do tipo eritema nodoso e dosamos o colesterol, triglicérides, HDL-colesterol, LDL-colesterol, apoproteínas AI e B, Lipoproteína(a), lipídeos totais e suas frações. Efetuamos também as dosagens da glicemia e do ácido úrico por estarem associados com distúrbios lipídicos, quando em níveis aumentados. Concomitantemente, efetuamos o levantamento dos dados de necrópsias realizadas neste Instituto entre 1971 e 1989, com a finalidade de obtermos informações anatomopatológicas, que sugerissem possíveis alterações nos valores dos lipídeos e das ipoproteínas em pacientes virchovianos. O valor médio do colesterol e do LDL-colesterol em nossos pacientes não apresentou diferença estatística significativa em relação ao do grupo controle. Já o valor médio do HDL colesterol apresentou diferença estatística significativa em relação ao grupo controle, porém está dentro dos limites da normalidade. Por outro lado a Lipoproteína(a) apresentou valor médio acima de 20 mg/dl em 64,6% dos pacientes, contra 33,3% no grupo controle. Na análise dos dados de necrópsia não se observou relação entre idade, forma clínica e a presença de aterosclerose. Das 209 necrópsias realizadas, 166 (79,4%) são de pacientes virchovianos. A aterosclerose estava presente em 92% dos virchovianos e 93% das outras formas clínicas. O encontro de Lipoproteína(a) aumentada, em pacientes portadores de hanseníase virchoviana é importante, porque existe uma comprovada relação entre esta lipoproteína e alterações vasculares tipo ateroscleróticas e distúrbios na fibrinólise / Abstract: An alteration in the lipid metabolism of lepromatous leprosy patients has been reported by several workers.The cardiovascular disease, especially the atherosclerosis, is frequentely refered in the anatomopathological description of lepromatous leprosy inpatients from Instituto Lauro de Souza Lima in the city of Bauru . A subnormal level of serum total cholesterol has been observed in active lepromatous leprosy. Concerned of this fact, we determined the blood level of the protector and risk factor of the cardiovascular diseases in 82 lepromatous leprosy inpatients from that Institute and outpatients of the Healthcare Center-I Ambulatory, in Bauru.We didn't confirm the low cholesterol level refered in many surveys and the value of the HDL cholesterol was dif.ferent from the data found among lepromatous leprosy patients from India. Fibrinolytic activity is significantly decreased in patients of lepromatous Ieprosy and in erythema nodosum leprosum40,41,42,67,68. Plasminogen and apolipoprotein(a) are also genetically linked on human chromosome 6, and partial amino acid sequence ofboth is homologous31 . On the values observed we can state that the level of the lipoprotein(a) is very important for the determination of the cardiovasvular disease risk and alterations in the fibrinolytic activity of the lepromatous leprosy patients. This is so because we found high increased blood level of lipoprotein(a) in those patients when compared to the levei found in other surveys / Mestrado / Mestre em Medicina Interna

A osteoporose é uma doença osteometabólica que atinge milhares de pessoas; e as doenças cardiovasculares são as principais causas de mortes no mundo. Estudos demonstram que pacientes com baixa densidade mineral óssea apresentam maior risco de desenvolverem doenças cardiovasculares. No entanto, os mecanismos patológicos, fisiológicos e moleculares que correlacionam a osteoporose e a aterosclerose ainda são desconhecidos. O objetivo deste estudo in vivo foi realizar avaliação histológica e imuno-histoquímica do osso fêmur de camundongos ovariectomizados e ateroscleróticos após tratamento com três drogas: doxiciclina, atorvastatina e vitamina D. Foram utilizados 36 camundongos fêmeas, como controle (linhagem C57BL/6), divididos aleatoriamente em seis grupos: Grupo I: Água; Grupo II: Etanol; Grupo III: Azeite; Grupo IV: Doxiciclina; Grupo V: Atorvastatina e Grupo VI: Vitamina D; e 36 camundongos fêmeas knockout para Apolipoproteína E (ApoE-/-) divididos aleatoriamente em seis grupos: Grupo VII: Água OVX; Grupo VIII: Etanol OVX; Grupo IX: Azeite OVX; Grupo X: Doxiciclina OVX; Grupo XI: Atorvastatina OVX e Grupo XII: Vitamina D OVX. Após indução dos quadros de osteoporose e aterosclerose foi realizado o tratamento conforme cada grupo. Decorrido o tempo experimental, os animais foram eutanasiados e o material coletado submetido ao processamento histotécnico para análise histológica, em cortes corados com Tricrômio de Masson e avaliação da expressão por imunohistoquímica de TRAP, IL-1&beta;, TNF-&alpha;, RANKL e MMP-9. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística por meio dos testes One-Way ANOVA, seguido pelo pósteste de Bonferroni (histologia e colesterol); Kruskal Wallis e Student-Newman-Keuls (imuno-histoquímica). O nível de significância adotado foi de 5%. Os resultados obtidos evidenciaram diferença significativa entre o número de células imunorreativas para MMP-9, TRAP, IL-1&beta;, TNF-&alpha; e RANKL nos grupos VII e X; VIII e XI; demonstrando a ação da Doxiciclina e Atorvastatina sob tais moléculas. Os resultados histológicos evidenciaram a eficácia da vitamina D no tratamento da osteoporose, uma vez que promoveu aumento da área óssea / Osteoporosis is an osteometabolic disease that affects thousands of people; and cardiovascular diseases are the leading causes of death in the world. Studies have shown that patients with low bone density are at a higher risk of developing cardiovascular disease. However, the pathological, physiological and molecular mechanisms that are correlated to osteoporosis and atherosclerosis are still unknown. The present work in vivo was to perform a histological and immunohistochemical evaluation of the femoral bone of ovariectomized and atherosclerotic mice after treatment with three drugs: doxycycline, atorvastatin and vitamin D. Thirty-six female mice were used as controls (C57BL/6 strain) randomly divided into six groups: Group I: Water; Group II: Ethanol; Group III: Olive oil; Group IV: Doxycycline; Group V: Atorvastatin and Group VI: Vitamin D; and the 36 knockout mice for Apolipoprotein E (ApoE-/-) randomly divided into six groups: Group VII: Water OVX; Group VIII: Ethanol OVX; Group IX: OVX olive oil; Group X: Doxycycline OVX; Group XI: Atorvastatin OVX and Group XII: Vitamin D OVX. After induction of osteoporosis and atherosclerosis, treatment was performed according to each group. After the experimental time, the animals were euthanized and the collected material submitted to histotechnical processing for histological analysis in stained sections with Masson\'s Trichrome and evaluation of the expression by immunohistochemistry of TRAP, IL-1&beta;, TNF-&alpha;, RANKL and MMP-9. The results were submitted to statistical analysis using One-Way ANOVA, followed by Bonferroni post-test (histology and cholesterol); Kruskal Wallis and Student-Newman-Keuls (immunohistochemistry). The level of significance was 5%. The results obtained showed a significant difference between the number of immunoreactive cells for MMP-9, TRAP, IL-1&beta;, TNF-&alpha; and RANKL in groups VII and X; VIII and XI; demonstrating the action of Doxycycline and Atorvastatin on such molecules. The histological results evidenced the efficacy of vitamin D in the treatment of osteoporosis, since it promoted increased bone area

A lipoproteína de baixa densidade eletronegativa (LDL-) é um importante antígeno envolvido na patogênese da aterosclerose. A LDL(-) provoca resposta inflamatória e imunológica, levando à produção de autoanticorpos anti-LDL(-) e a formação subsequente de imunocomplexos (IC-LDL-), os quais também contribuem com o processo aterosclerótico. Diante disso, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e validação de imunoensaios para quantificação plasmática de LDL(-), anti-LDL(-) e IC-LDL(-), assim como o desenvolvimento de ferramentas aplicáveis em um biossensor para LDL(-). Após a padronização de cada ELISA, foram avaliadas as características de desempenho dos métodos: limites de detecção (LD) e quantificação (LQ), precisão intra e inter-ensaios, exatidão, linearidade de diluição e interferentes. Os LD e LQ do ELISA para LDL(-) foram 0,423 mg/L e 0,517 mg/L de LDL(-), respectivamente. As concentrações plasmáticas de LDL(-) apresentaram linearidade quando os plasmas foram diluídos 1:1000, 1:2000, 1:4000 e 1:8000. Os LD e LQ do ELISA para anti-LDL(-) foram 0,0028 mg/L e 0,0032 mg/L de anti-LDL(-), respectivamente. Os plasmas apresentaram linearidade na diluição quando diluídos 1:100, 1:200, 1:400 e 1:800. Os LD e LQ do ELISA para IC-LDL(-) foram 0,023 g/L e 0,034 g/L de IC-LDL(-), respectivamente. Os plasmas apresentaram linearidade quando diluídos 1:12,5, 1:25, 1:50 e 1:100. Os três ELISAs apresentaram precisão intra e inter-ensaios e recuperação dentro dos limites requeridos para imunoensaios. Para o desenvolvimento de um biossensor para LDL(-), uma proteína recombinante, denominada GFP5-scFv, foi expressa em bactérias Escherichia coli da linhagem BL21(DE3). Para obtenção dessa proteína foi realizada a inserção da sequência de DNA de um fragmento variável de cadeia única (scFv) anti-LDL(-) em um vetor bacteriano com a sequência de DNA da proteína verde fluorescente (GFP5). Dessa forma, a GFP5-scFv é fluorescente e tem afinidade pela LDL(-). Também foram sintetizadas nanopartículas de ouro, as quais podem ser eficientemente utilizadas na supressão da emissão da fluorescência de GFP5-scFv. Portanto, os imunoensaios validados e os aplicativos desenvolvidos para o biossensor são ferramentas que tem potencial para serem utilizadas na avaliação da patogênese da aterosclerose. / The electronegative low-density lipoprotein (LDL) is an important antigen involved in the pathogenesis of atherosclerosis. The LDL(-) causes inflammatory and immune response, leading to production of autoantibodies anti-LDL(-) and the subsequent formation of immune complexes (IC-LDL), which also contribute to the atherosclerotic process. Thus, this study aimed to develop and validate immunoassays for quantification of plasma LDL(-), anti-LDL(-) and LDL-IC(-) as well as developing tools applicable to a biosensor for LDL(-). After the standardization of each ELISA, were evaluated the performance characteristics of methods: limits of detection (LD) and quantification (LQ), intra- and inter-assays precision, accuracy, linearity of dilution and interferences. The LD and LQ of LDL(-) ELISA were 0.423 mg/L and 0.517 mg/L of LDL(-), respectively. Plasmas showed linearity when diluted 1:1000, 1:2000, 1:4000 and 1:8000. The LD and LQ of anti-LDL(-) ELISA were 0.0028 mg/L and 0.0032 mg/L of anti-LDL(-), respectively. Plasmas showed linearity when diluted 1:100, 1:200, 1:400 and 1:800. The LD and LQ of IC-LDL(-) ELISA were 0.023 g/L and 0.034 g/L of LDL-IC(-), respectively. Plasma showed linearity when diluted 1:12.5, 1:25, 1:50 and 1:100. The three ELISAs showed good intra- and inter-assays precision and recovery within the limits required for immunoassays. To develop a biosensor for LDL(-), a recombinant protein, called GFP5-scFv was expressed in Escherichia coli BL21(DE3) strain. The obtainment of this protein was performed inserting the DNA sequence of an anti-LDL(-) single chain variable fragment (scFv) in a bacterial vector with a DNA sequence of green fluorescent protein (GFP5). Thus, the scFv-GFP5 is fluorescent and has affinity for LDL(-). Were also synthesized gold nanoparticles, which can be efficiently used for quenching the fluorescence emission of GFP5-scFv. Therefore, immunoassays validated and developed applications for the biosensor are tools that have potential to be used in evaluating the pathogenesis of atherosclerosis.