LIMA, Beatriz de Sousa e. Antioxidant activity, anti- inflammatory and antibacterial of hexane and ethanol extracts of the leaves of soursop (Annona muricata L.). 2013. 85 f. Dissertação (mestrado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-03-22T18:05:10Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_bslima.pdf: 990144 bytes, checksum: e841fc650723050552170e047099f314 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-18T18:23:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_bslima.pdf: 990144 bytes, checksum: e841fc650723050552170e047099f314 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-18T18:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_bslima.pdf: 990144 bytes, checksum: e841fc650723050552170e047099f314 (MD5) Previous issue date: 2013 / Soursop (Annona muricata L.) is a tree of Annonaceae family widely distributed in all tropical regions of the world, produces fruit known as graviola and its leaves are used in traditional medicine as phytotherapy. Some compounds present in A. muricata have been related to antioxidant activity, anti-inflammatory and antimicrobial activities of this plant. This study aimed to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and antibacterial activities of hexane (HE) and ethanol (EE) soursop leaves extracts. To this end, we used soursop leaves for preparation of extracts for further analyzes of phytochemical composition, antioxidant capacity, ear edema assays in vivo and in vitro antibacterial activity. For analysis of the antioxidant activity of hexane and ethanol extracts were determined total polyphenols, yellows flavonoids and anthocyanins and total antioxidant capacity by ABTS●+ and DPPH methods. To evaluate the anti-inflammatory activity of the extracts was performed ear edema model induced by xylene or TPA in mice (Swiss females, 25-35g)-treated intragastrically (ig) for 7 consecutive days or topically (single dose) of different concentrations of the extracts (EE or HE):10, 100 and 1000 mg/kg. The antimicrobial activity of the extracts was evaluated against strains of Staphylococcus aureus (ATCC 14458), Listeria monocytogenes (ATCC 33090), Escherichia coli (ATCC 11775) and Salmonella choleraesuis (ATCC 14028). The extracts showed wide variety of phytochemical compounds, especially EE, and high antioxidant activity. Pretreatment via i.g. with the extracts was able to inhibit the edema induced by xylene, with a maximum percentage of inhibition of 61.72% for EE 10 and 57.08% for HE 100, but no effect on TPA-induced edema. The topical application with HE inhibited in a dose-dependent form the xylene-induced edema with maximum inhibition of 78.89% for HE1000, while for EE1000 was 67.95%, with no significant difference EE10 and EE100. As for the TPA-induced edema, HE (10, 100 and 1000 mg / kg) inhibited edema at 84.39%, 68.68% and 65.96%, while for EE (10, 100 and 1000 mg / kg ) the inhibition was 75%, 56% and 51%, respectively. Moreover, the extracts showed no antibacterial activity against all tested strains. The hexane and ethanol extracts of soursop leaves exhibit high differentiated antioxidant and anti-inflammatory activity compared to edema induced by xylene and TPA. / A gravioleira (Annona muricata L.) é uma árvore da família Annonaceae largamente distribuída em todas as regiões tropicais do mundo, produz fruto conhecido como graviola e suas folhas são usadas na medicina tradicional como fitoterápicos. Alguns compostos presentes na A. muricata já foram relacionados com as atividades antioxidante, anti-inflamatória e antimicrobiana dessa planta. Esse trabalho teve por objetivos avaliar as atividades antioxidante, anti-inflamatória e antibacteriana dos extratos hexânico (EH) e etanólico (EE) das folhas de gravioleira. Para tanto, foram utilizadas folhas de gravioleira para o preparo dos extratos utilizados em análises da composição fitoquímica, da capacidade antioxidante total, ensaios de edema de orelha in vivo e da atividade antibacteriana in vitro. Para a análise da atividade antioxidante dos extratos hexânico e etanólico foram determinados os polifenóis totais, flavonoides amarelos e antocianinas totais e a capacidade antioxidante total pelos métodos ABTS●+ e DPPH. Para avaliação da atividade anti-inflamatória dos extratos, foi utilizado o modelo de edema de orelha induzido por xileno ou TPA em camundongos (Swiss fêmeas, 25-35g) submetidos a tratamentos por via intragástrica (i.g.) por 7 dias consecutivos ou por via tópica (dose única) com diferentes concentrações dos extratos (EH ou EE): 10, 100 e 1000 mg/kg. A atividade antimicrobiana dos extratos foi avaliada contra cepas de Sthaphylococcus aureus (ATCC 14458), Listeria monocytogenes (ATCC 33090), Escherichia coli (ATCC 11775) e Salmonella choleraesuis (ATCC 14028). Os extratos apresentaram grande variedade de compostos fitoquímicos, principalmente o EE, além de elevada atividade antioxidante. O pré-tratamento por via i.g. com os extratos foi capaz de inibir o edema induzido por xileno, com um percentual máximo de inibição de 61,72% para o EE10 e de 57,08% para o EH100, mas nenhum efeito no edema induzido por TPA. O tratamento tópico por EH inibiu de forma dose-dependente o edema induzido por xileno, com máximo de inibição de 78,89% para EH1000, enquanto para EE1000 foi de 67,95%, sem diferença significativa com EE10 e EE100. Já para o edema induzido por TPA, EH (10, 100 e 1000 mg/kg) inibiram o edema em 84,39%, 68,68% e 65,96%, enquanto para EE (10, 100 e 1000 mg/kg) a inibição foi de 75%, 56% e 51%, respectivamente. Ademais, os extratos não apresentaram atividade antibacteriana frente às cepas testadas. Os extratos hexânico e etanólico das folhas de gravioleira apresentam elevada capacidade antioxidante e atividade anti-inflamatória diferenciada em relação aos edemas induzidos por xileno e TPA.

O açaí (Euterpe oleracea) é um fruto proveniente do açaizeiro, uma palmeira nativa da Amazônia Brasileira, considerado uma “superfruta” devido ao seu alto valor nutricional, com destaque para as antocianinas, associadas a efeitos benéficos à saúde. Uma vez que genótipos de frutos desenvolvidos por programas de melhoramento têm sido avaliados a fim de identificar frutos com composição fitoquímica melhorada e potencial antioxidante, o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito do melhoramento genético na composição química, perfil de compostos bioativos e atividade antioxidante de seis genótipos de açaí (E. oleracea). Análises de composição química, perfil de antocianinas e carotenoides e de atividade antioxidante em diversos sistemas in vitro (método ABTS, oxidação da glutationa, teste da desoxirribose e células SH-SY5Y) foram realizadas em 6 genótipos e 1 amostra comercial utilizada como padrão. Com relação a composição química, de maneira geral, os genótipos apresentaram elevados teores de lipídeos (36,30 – 47,44%), fibras totais (11,31 – 15,88%), proteínas (7,78-9,50%) e cinzas (3,49 – 4,44%). Adicionalmente, as antocianinas cianidina 3-glicosídeo (12-43%) e cianidina 3-rutinosídeo (57-88%) foram identificadas nos genótipos avaliados e o genótipo L22P13 apresentou um incremento de 85% no teor de antocianinas totais. Com relação ao perfil de carotenoides, luteína, zeaxantina, α-caroteno e β-caroteno foram os principais carotenoides identificados nos genótipos avaliados, sendo que os genótipos BRS-PAMISTA e L22P13 apresentaram os teores mais elevados de carotenoides totais (125,39μg/g e 118μg/g). Com relação a atividade antioxidante, todos os genótipos reduziram a geração do radical ABTS em maior ou menor grau, embora diferenças significativas entre os genótipos e a amostra comercial não tenham sido observadas (IC50 = 73,98 – 175,7 vs. 121,7 μg/g). Entretanto, houve associação moderada e inversa entre a geração do radical ABTS e níveis de antocianinas e carotenoides. Ausência de diferenças significativas entre os extratos hidroetanólicos dos genótipos e a amostra comercial também foi observada no ensaio da desoxirribose (IC50 = 361,5 – 497,7 vs. 520,1 μg/g). Em cultura de células SH-SY5Y, os extratos hidroetanólicos na concentração de 50 μg/mL apresentaram um efeito protetor contra as espécies reativas geradas pelo H2O2 (ensaio DCFH-DA) e esse resultado foi associado ao teor de antocianinas dos extratos. Os resultados apontam genótipos promissores, com elevados teores de antocianinas e carotenoides, com potencial atividade antioxidante in vitro e um possível efeito protetor de células frente as espécies reativas. / The açaí (Euterpe oleracea) is a fruit of the açaizeiro, a native palm of the Brazilian Amazon, considered a "superfruit" due to its high nutritional value, especially anthocyanins, associated with beneficial health effects. Since fruit genotypes developed by breeding programs have been evaluated to identify fruits with improved phytochemical composition and antioxidant potential, the aim of this study was to investigate the effect of genetic improvement in the chemical composition, bioactive compounds profile and antioxidant activity of six açaí (E. oleracea) genotypes. The analysis of chemical composition, anthocyanins and carotenoids profile and antioxidant activity in various in vitro systems (ABTS method, glutathione oxidation, deoxyribose test and SH-SY5Y cells) were performed in six genotypes of açaí and one commercial sample that was used as standard. Regarding the chemical composition, in general, the genotypes showed high levels of lipids (36.30 – 47.44%), total fiber (11.31 – 15.88%), protein (7.78-9.50%) and ashes (3.49 – 4.44%). In addition, the anthocyanins cyanidin 3-glucoside (12-43%) and cyanidin 3-rutinoside (57-88%) were identified in evaluated genotypes and L22P13 genotype showed an increase of 85% in total anthocyanin content. Regarding the carotenoid profile, lutein, zeaxanthin, α-carotene and β-carotene were the main carotenoid identified in genotypes, being that BRS-PAMISTA and L22P13 genotypes showed the highest levels of total carotenoids (125.39 μg/g and 118 μg/g). Regarding the antioxidant activity, all genotypes reduced ABTS radical generation in greater or lesser extension, although there were no significant differences between hydroethanolic extracts of different genotypes and the commercial sample (IC50 = 73.98 - 175.7 vs. 121.7 μg/g). However, an inverse and moderate association between radical ABTS generation and anthocyanins and carotenoids content was observed. Absence of significant differences between hydroethanolic extracts of evaluated genotypes and the commercial sample was observed also in the deoxyribose assay (IC50 = 361.5 to 497.7 vs. 520.1 μg/g). In culture of SH-SY5Y cells, hydroethanolic extracts at concentration of 50 μg/mL had a protective effect against the reactive species generated by H2O2 (DCFH-DA assay) and this result was associated with the anthocyanins content of the extracts. The results showed promising genotypes with high levels of anthocyanins and carotenoids with antioxidant potential in vitro and a possible protective effect of cells against reactive species.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-04-04T14:58:23Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Renata Lima Nascimento.pdf: 1812879 bytes, checksum: a62043b87f27ca4dd9e3c712531f52c4 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-04-20T12:52:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Renata Lima Nascimento.pdf: 1812879 bytes, checksum: a62043b87f27ca4dd9e3c712531f52c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-20T12:52:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Renata Lima Nascimento.pdf: 1812879 bytes, checksum: a62043b87f27ca4dd9e3c712531f52c4 (MD5) / FAPESB;CAPES / Os carotenoides são pigmentos naturais, lipofílicos, de cores atraentes, e que apresentam efeitos benéficos à saúde humana, como precursores da vitamina A, atividade antioxidante e participação em diversos processos fisiológicos. Por isso, a extração destes pigmentos é vantajosa para a indústria de alimentos, principalmente quando um produto sem valor comercial, como descarte de vegetal folhoso, é utilizado como matriz. O objetivo deste trabalho foi estabelecer metodologia para a obtenção de carotenoides, a partir da folha externa do repolho, com vistas à aplicação como corante, antioxidante natural e/ou na fortificação de alimentos. Inicialmente foi realizado um planejamento fatorial 25-1, para definir as variáveis significantes na extração de carotenoides, sendo estudados os seguintes fatores e níveis: temperatura (30 e 50°C), relação massa:volume (0,5:15 e 0,5:25 g/mL), número de extrações (3 e 5), tempo (30 e 60 minutos) e esterilização (sim ou não), totalizando 16 experimentos. O etanol foi utilizado como solvente, por ser reconhecido como seguro (GRAS) e a saponificação simultânea foi empregada para eliminar uma etapa do método. Considerando-se as variáveis que apresentaram efeito significante na resposta, foi realizado um planejamento composto central 23 testando-se: tempo de extração (60, 90 e 120 min), relação massa:volume (0,5:10, 0,5:15 e 0,5:20 g/mL), e número de extrações (2, 3 e 4 vezes), com amostras esterilizadas e temperatura de 30°C. As respostas para este planejamento foram carotenoides totais (μg/g), porcentagem de redução dos radicais 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) e 2,2'-azino-bis (3-etilbenzotiazolina-6-sulfônico) (ABTS), todos determinados por espectrofotometria, tempo de indução (h) do óleo de palma refinado acrescido dos extratos, avaliado em Rancimat, e cor (CIELAB) analisada em colorímetro. Extração convencional com acetona foi utilizada como controle e este extrato, assim como o da condição ótima do planejamento, foi caracterizado quanto aos carotenoides majoritários por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Análise de variância (ANOVA) foi utilizada para analisar os efeitos e interações entre as variáveis independentes dos planejamentos experimentais (p < 0,05). O teor de carotenoides obtido pelo método convencional foi de 416,67 ± 6,60 μg/g, e de 393,30 ± 3,73 μg/g para a melhor condição do planejamento (amostra esterilizada, relação massa:volume de 0,5:10 g/mL e 2 extrações de 120 min a 30°C com saponificação simultânea), representando 94,39% do obtido no convencional, com menor tempo de análise e volume de solvente. O tempo de extração foi o fator que teve maior efeito em todas as respostas. Os dois tipos de extratos apresentaram all-trans-β-caroteno como pigmento principal, seguido de luteína. A porcentagem de inibição do DPPH foi de 32,06 ± 1,63 e 30,88 ± 0,22 % e do ABTS de 25,47 ± 0,60 e 20,11 ± 0,04 %, para os extratos de carotenoides obtidos pelo método convencional e condição ótima do planejamento, respectivamente. Entretanto, os mesmos não aumentaram a estabilidade oxidativa do óleo de palma refinado submetido ao Rancimat. A folha externa de repolho apresentou-se como uma potencial fonte para a obtenção de carotenoides, predominantemente all-trans-β-caroteno e luteína, produtos de alto valor agregado, com possibilidade de aplicação na indústria de alimentos em processos de fortificação e/ou como corantes e antioxidantes naturais, devendo, para isso, ser testados em matriz alimentícia na ausência de oxigênio e de temperaturas elevadas.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os representantes do gênero Arachis são conhecidos como amendoim, e suas sementes possuem grande quantidade de óleos e proteínas, podendo ser consumidas cruas. A espécie mais cultivada do gênero é Arachis hypogaea, que possui grande importância comercial. Outras espécies são também utilizadas para controle das ervas daninhas e cobertura do solo, assim como ornamentais e na alimentação. Arachis repens, popularmente conhecida como grama amendoim, é utilizada como planta ornamental, na formação de pastagens, como forragem e para cobertura do solo em substituição a várias espécies comuns de grama. Diversas substâncias bioativas têm sido identificadas em A. hypogaea. Contudo, estas substâncias ainda não foram descritas em outras espécies do gênero. O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de sistemas de cultivo in vitro para Arachis repens, visando à micropropagação e à análise comparativa da produção de resveratrol em extratos alcoólicos dos materiais produzidos in vitro, em comparação com as plantas in vivo. Segmentos nodais, internodais e foliares foram excisados de plantas in vitro e inoculados em meio MS suplementado com diferentes concentrações de BAP, TDZ, AIA e KIN, utilizados isoladamente ou em combinação. Os explantes apresentaram respostas distintas de acordo com o regulador de crescimento utilizado. Na presença de BAP foi observada a formação de calos compactos, com formação de brotos em diferentes taxas. Na presença de TDZ, segmentos nodais e internodais formaram calos compactos em todas as concentrações. Segmentos nodais cultivados na presença de diferentes concentrações de AIA em combinação com KIN apresentaram a formação de calogênese. Foi também realizada uma avaliação da atividade antioxidante e a presença de fenóis totais em extratos de diferentes materiais in vivo e produzidos in vitro. Nas análises por meio de CLAE, foi possível detectar a presença de resveratrol tanto nos materiais in vivo, quanto os produzidos in vitro. Dessa forma, o trabalho forneceu resultados preliminares sobre as possibilidades de utilização de A. repens para a produção de metabólitos especiais. / Arachis species are known as groundnut and their seeds display high oil and protein contents, being consumed in natura. The most common commercially cultivated species of the genus is Arachis hypogaea. Other Arachis species can also be used as food, ornamental, ground cover and provide weed control. Arachis repens, commonly known as grama amendoim, is used as an ornamental, forage legume and ground cover in substitution of common grass species. Different bioactive substances have been identified in A. hypogaea. However, these substances have not been described in other species of the genus. The goal of this work was the establishment of in vitro culture for Arachis repens, aiming at the micropropagation and the comparative analysis of the resveratrol production in ethanolic extracts of the in vitro produced material, in comparison to in vivo plants. Nodal, internodal and leaf segments were excised from in vitro plants and inoculated on MS medium supplemented with different concentrations of BAP, TDZ, IAA and KIN, used alone or in combination. Explants showed distinct responses in according to the growth regulator used. In the presence of BAP, compact calluses were formed, with the production of shoots in different frequencies. In the presence of TDZ, nodal and internodal segments formed compact calluses in response to all concentrations. Nodal segments cultivated in the presence of different IAA concentrations in combination with KIN showed callogenesis The evaluation of antioxidant activity and the presence of total phenolics in extracts of different in vivo and in vitro materials was also evaluated. The HPLC analysis detected the presence of resveratrol in the materials produced in vivo and in vitro. Therefore, this work provided preliminary results about the possible use of A. repens for the production of special metabolites.

The identification of bioactive compounds in Brazilian fruit is extremely important for bioprospecting of natural substances with potential pharmacotherapeutic. Likewise, evaluations of profiles of antioxidant activity and toxicity are part of the initial processes of exploitation of plant extracts, being included in the efficacy and safety parameters. The Amazonian fruits have been noted for its excellent therapeutic potential in several experimental tests. Within this context is the tucumã, an Amazon fruit comes from a palm (Astrocaryum aculeatum), widely used in the state of Amazonas to the manufacture of candy, ice cream, liqueur or fresh consumption. Studies have shown the presence of a large amount of carotenoids in the fruit pulp. However, the fruit lacks information related to the antioxidant properties and presence of other chemical constituents. The objective of this study was to evaluate the ethanol extracts of the pulp and peel tucumã for the presence of bioactive compounds, antioxidant activity and cytotoxicity. The identification of bioactive compounds and total polyphenols were performed using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Folin-Ciocalteau method, respectively. The antioxidants evaluations were made by the scavenger method of radical 2,2 - diphenyl-1-picril-hydrazyl (DPPH) and Total Reactive Antioxidant Potential (TRAP) test. The cytotoxicity assays were performed by the techniques of 3 - (4,5)-dimetiltialzolil difeniltetrazólio -2.5 (MTT) and by trypan blue exclusion. The results showed the presence of a large amount of polyphenols in the peel (790.9 ± 43.65 mg/100 g) and pulp (663.9 ± 92.40 mg/100 g) of the fruit. In addition, we detected the presence of important bioactive compounds such as flavonoids (peel = 77.9 ± 0.02 mg/100 g; pulp = 40.6 ± 0.06 mg/100 g), tannin (peel = 26.4 ± 0.01 mg/100 g; pulp = 6.4 ± 0.05 mg/100 g) and alkaloids (peel = 1.3 ± 0.29 mg/100 g; pulp = 0.7 ± 0.05 mg/100 g). Among the compounds identified were beta-carotene, rutin, quercetin, gallic acid, caffeic acid and chlorogenic acid, with higher concentrations in the peel in relation to the pulp (except the gallic acid). The extracts showed high antioxidant activity, with IC50 values corresponding to 8.98 ± 0.39 mg / ml (peel) and 11.24 ± 0.461 mg / ml (pulp) for the TRAP method, and 102.38 ± 4.8 ng / ml (peel) and 224.57 ± 3.9 (pulp) for the DPPH method. However, at concentrations above 100 μg / ml, both extracts showed cytotoxic effects. The results suggest that the ethanol extracts of the pulp and peel tucumã have high antioxidant activity in the presence of bioactive compounds that show great potential pharmacotherapeutic. / A identificação de compostos bioativos em frutos brasileiros é de extrema importância para a bioprospecção de substâncias naturais com potenciais farmacoterapêuticos. Da mesma forma, as avaliações de perfis de atividade antioxidante e de toxicidade fazem parte dos processos iniciais da exploração de extratos vegetais, sendo incluídos nos parâmetros de eficácia e segurança. Os frutos amazônicos têm se destacado por seus excelentes potenciais terapêuticos em diversos ensaios experimentais. Dentro desse contexto encontra-se o tucumã, um fruto amazônico oriundo de uma palmeira (Astrocaryum aculeatum), amplamente utilizado no estado do Amazonas para a fabricação de doces, sorvetes, licores ou para o consumo in natura. Estudos demonstram a presença de uma grande quantidade de carotenoides na polpa do fruto. No entanto, o fruto carece de informações relacionadas às propriedades antioxidantes e à presença de outros constituintes químicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar os extratos etanólicos da polpa e da casca de tucumã quanto à presença de compostos bioativos, atividade antioxidante e citotoxicidade. A identificação de compostos bioativos e de polifenóis totais foram realizadas por meio de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e método de Folin-Ciocalteau, respectivamente. As avaliações antioxidantes foram feitas pelo método de sequestro de radicais 2,2- difenil-1-picril-hidrazil (DPPH) e teste de Total Reactive Antioxidant Potential (TRAP). Os ensaios de citotoxicidade foram realizados pelas técnicas de 3-(4,5)-dimetiltialzolil -2,5 difeniltetrazólio (MTT) e exclusão por azul de Tripan. Os resultados demonstraram a presença de uma grande quantidade de polifenóis na casca (790,9 ± 43,65 mg/100g) e na polpa (663,9 ± 92,40 mg/100g) do fruto. Além disso, foi verificada a presença de compostos bioativos importantes, como flavonoides (casca = 77,9 ± 0,02 mg/100g; polpa = 40,6 ± 0,06 mg/100g), taninos (casca = 26,4 ± 0,01 mg/100g; polpa = 6,4 ± 0,05 mg/100g) e alcaloides (casca = 1,3 ± 0,29 mg/100g; polpa = 0,7 ± 0,05 mg/100g). Dentre os compostos identificados estavam beta-caroteno, rutina, quercetina, ácido gálico, ácido cafeico e ácido clorogênico, com concentrações superiores na casca em relação à polpa (com exceção do ácido gálico). Os extratos apresentaram alta atividade antioxidante, com valores de IC50 correspondentes a 8,98 ± 0,39 μg/ml (casca) e 11,24 ± 0,461 μg/ml (polpa), para o método de TRAP, e 102,38 ± 4,8 ng/ml (casca) e 224,57 ± 3,9 (polpa) para o método de DPPH. No entanto, em concentrações superiores a 100 μg/mL, ambos os extratos apresentaram efeitos citotóxicos. Os resultados sugerem que os extratos etanólicos da polpa e da casca de tucumã apresentam alta atividade antioxidante, com a presença de compostos bioativos que demonstram excelentes potenciais farmacoterapêuticos.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Nutrição, Programa de Pós-Graduação em Nutrição Humana, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-04-10T19:10:49Z No. of bitstreams: 1 2017_BrunaCristinaZacanteRamos.pdf: 1568754 bytes, checksum: 180ddf1f0e446162ffdfc9e201f9429d (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-04-20T19:51:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_BrunaCristinaZacanteRamos.pdf: 1568754 bytes, checksum: 180ddf1f0e446162ffdfc9e201f9429d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T19:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_BrunaCristinaZacanteRamos.pdf: 1568754 bytes, checksum: 180ddf1f0e446162ffdfc9e201f9429d (MD5) Previous issue date: 2018-04-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / A redução do desperdício de alimentos é uma necessidade considerando às projeções de aumento da população mundial. O aproveitamento de coprodutos da industrialização pode ser uma alternativa para atendimento desta demanda, visto que muitos resíduos da agroindústria possuem alto valor nutricional e/ou funcional, como é o caso das cascas e sementes de maracujá azedo (Passiflora edulis Sims). Na extração da polpa, estima-se que sejam gerados em torno de 250 mil toneladas/ano do coproduto, que poderia ser aproveitado como ingrediente de outros alimentos. O presente estudo teve por objetivo desenvolver farinhas alimentares a partir da mistura de casca e sementes desengorduradas e não desengorduradas provenientes da extração de polpa pelo método artesanal (onde existe a separação da casca da semente) e a partir da mistura de casca/semente obtida pelo agroindustrial (onde não ocorre a separação da casca e sementes), com o propósito de determinar a melhor relação entre a viabilidade técnica da fabricação, teor de bioativos e de aceitação sensorial das farinhas na fabricação de cookies. Para tanto, as cascas e sementes provenientes do processo artesanal e da mistura agroindustrial foram desidratadas pelo método de leito fluidizado. As farinhas foram obtidas por meio da moagem em moinho de faca, das matérias primas desidratadas: mistura agroindustrial, previamente caracterizada quanto a proporção casca e sementes, e das misturas de cascas com as sementes integrais e parcialmente desengorduradas, ambas nas proporções: 4:1, 2:1, 1:1, 1:2, e 1:4. Utilizou-se como fator de comparação a farinha de casca de maracujá comercial. A escolha das farinhas para a caracterização nutricional e elaboração dos cookies foi feita com base no rendimento, granulometria, teores dos fenólicos totais e dos flavonoides totais, e capacidade antioxidante (FRAP). A aceitação dos cookies foi determinada pelo método afetivo. A caracterização da matéria prima indicou que a secagem promoveu redução na umidade das cascas, sementes e mistura da agroindústria na ordem de 85%, 28% e 83% respectivamente. Verificou-se que a proporção casca/semente da mistura da agroindústria apresentou 94,5% de casca e 5,5% de sementes, indicando a relação 19 partes de casca para 1 parte de semente. O melhor rendimento de farinha foi obtido do produto da agroindústria (FRI), seguida da mistura da FCSI nas proporções 1:1, 1:2 e 4:1, e a de menor rendimento foi a de semente desengordurada na proporção de 1:4. A farinha obtida da mistura da agroindústria, bem como todas as proporções da FCSPD e a proporção 2:1 da FCSI obtiveram granulometria de até 1mm, enquanto que as demais apresentaram valores na ordem de 2 mm. As farinhas apresentaram teores de flavonoides de 168,7±47,5 mg/100g a 111,4±26,2 mg/100g e antocianinas de 18,1±11,2mg/100g a 7,3±2,2mg/100g. Foi detectado maiores concentrações de fenólicos totais nas farinhas com maiores proporções de sementes. A farinha com sementes parcialmente desengorduradas na proporção de 2:1 apresentou a melhor capacidade antioxidante (71,7 mg/L eq. 1000uM de trolox), enquanto que a farinha de casca comercial foi a que apresentou menor valor (31,6 mg/L eq. 1000uM de trolox). O resultado do FRAP se correlacionou de forma direta aos teores de fenólicos totais. Com base nos critérios tecnológicos e de qualidade foram selecionadas as farinhas nas seguintes proporções: FCSI 2:1, FCSPD 4:1 e a farinha da agroindústria 19:1. Os teores de lipídeos foram maiores na FCSI (21,7±0,4 g/100g), seguida da FCSPD (9,4b±0,5 g/100g) e FRI (6,2±1,2g/100g). A umidade média das farinhas foi inferior a 15% (g/100g). FCSI e FCSPD obtiveram valores superiores de proteínas (6,2 g/100g e 6,3 g/100g) em relação a FRI (4,2 g/100g), podendo essas serem classificadas como alimentos fonte de proteínas. A proporção de cinzas foi maior na FCSI (9,2 g/100g). O teor de carboidratos (obtido por diferença) variou de 81,4g/100g a 58,8g/100g, e o aporte energético variou de 455,3 Kcal/100g a 398,5Kcal/100g. Em relação ao parâmetro fibra alimentar não houve diferença estatística entre as farinhas experimentais mistas, podendo ainda serem consideradas farinhas fontes de fibras alimentares. Por meio das análises sensoriais verificou-se, que dentre os tratamentos, o biscoito tipo “cookie” feito com a adição de 25% de FCSI teve o maior índice de aceitação e as maiores médias para sabor, aparência, aroma, aceitação global e textura. / Reducing food waste is a necessity considering projections of increasing world population. The use of co-products from industrialization can be an alternative to meet this demand, since many wastes from the agroindustry have high nutritional and / or functional value, as is the case with the peels and seeds of passion fruit (Passiflora edulis Sims). In the extraction of pulp, it is estimated that about 250 thousand tons / year of the co-product, which could be used as an ingredient of other foods, will be generated. The objective of the present study was to develop food flours from the mixture of peel and defatted and non-defatted seeds obtained from pulp extraction by the artisanal method (where there is separation of the seed peel) and from the peel / seed mixture obtained by the (where no peel and seed separation occurs), with the purpose of determining the best relationship between the technical feasibility of the manufacture, bioactive content and sensory acceptance of flours in the manufacture of fiber - enriched cookies. For that, the peels and seeds from the artisanal process and the agroindustrial mixture were dehydrated by the fluidized bed method. Flours were obtained by milling the dried raw materials: an agroindustrial mixture, previously characterized as the peel and seed ratio, and the shell mixtures with the whole and partially defatted seeds, both in the proportions: 4: 1, 2: 1, 1: 1, 1: 2, and 1: 4. The commercial passion fruit pear meal was used as a comparison factor. The choice of flours for the nutritional characterization and preparation of the cookies was made based on yield, grain size, total phenolic and total flavonoid contents, and antioxidant capacity (FRAP). The acceptance of cookies was determined by the affective method. The characterization of the raw material indicated that drying promoted a reduction in the humidity of the peel, seeds and agroindustry mix in the order of 85%, 28% and 83% respectively. It was verified that the peel/ seed ratio of the agroindustry mixture showed 94.5% of husk 5.5% of seeds, indicating the ratio 19 of peel to 1 of seed. The best flour yield was obtained from the agroindustrial product (FRI), followed by mixing the FCSI in ratios 1: 1, 1: 2 and 4: 1, and the lowest yield was defatted in the proportion of 1: 4 . The flour obtained from the agroindustrial mixture, as well as all the proportions of the FCSPD and the 2: 1 ratio of the FCSI obtained granulometry of up to 1 mm, while the others presented values of 2 mm. The flours had flavonoid contents of 168.7 ± 47.5 mg / 100 g at 111.4 ± 26.2 mg / 100 g and anthocyanins from 18.1 ± 11.2 mg / 100 g at 7.3 ± 2.2 mg / 100 g . It was detected higher concentrations of total phenolics in the flours with higher proportions of seeds. The flour with 2: 1 partially defatted seeds had the best antioxidant capacity (71.7 mg / L and 1000uM trolox), while the commercial peel flour had the lowest value (31.6 mg / 1000 g of trolox). The FRAP result correlated directly with total phenolic contents. Based on the technological and quality criteria, flours were selected in the following proportions: FCSI 2: 1, FCSPD 4: 1 and 19: 1 agroindustrial flour. Lipid contents were higher in FCSI (21.7 ± 0.4 g / 100g), followed by FCSPD (9.4b ± 0.5g / 100g) and FRI (6.2 ± 1.2g / 100g). The average moisture content of the flours was less than 15% (g / 100g). FCSI and FCSPD obtained higher values of proteins (6.2 g / 100g and 6.3 g / 100g) in relation to FRI (4.2 g / 100g), which could be classified as protein source foods. The proportion of ashes was higher in FCSI (9.2 g / 100g). The carbohydrate content (obtained by difference) ranged from 81.4g / 100g to 58.8g / 100g, and the energy intake ranged from 455.3 Kcal / 100g at 398.5Kcal / 100g. Regarding the fiber dietary parameter, there was no statistical difference between the mixed experimental flours, and the sources of food fiber could be considered as flours. Through the sensorial analysis it was verified that among the treatments, the cookie type made with the addition of 25% FCSI had the highest acceptance rate and the highest averages for flavor, appearance, aroma, overall acceptance and texture.

Hoje há um grande interesse em componentes da dieta, como os polifenóis do chá verde, os quais podem exercer efeitos de proteção contra várias doenças neurológicas, incluindo Alzheimer, isquemia e acidente vascular cerebral. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da (-) epicatequina 3-galato (ECG), um dos principais antioxidantes do chá verde, em células da linhagem C6. Avaliamos morfologia e integridade celular, captação de glutamato e secreção de S100B e o efeito sobre a genotoxicidade induzida por H2O2, na presença de 0,1; 1 e 10 μM de ECG. Após 6 h de incubação, houve alteração morfológica somente com 10 μM de ECG. Entretanto, após 24 h, todas as concentrações de ECG induziram formação de processos ao redor do corpo celular. Houve perda da integridade celular (~ 6%) somente após 24 h, apenas na presença de 10 μM de ECG. Houve diminuição (~36%) na captação de glutamato após 1 h com 1 e 10 μM de ECG. Após 6 h, houve aumento na captação de glutamato (~70%) a partir de 0,1 μM. Também se observou aumento significativo na secreção de S100B com 1 μM de ECG (~ 36%) e com 10 μM (69%) após 1 h, enquanto após 6 h, todas concentrações induziram um aumento na secreção de S100B (~60%). Curiosamente, na presença de 10 μM de ECG houve efeito genotóxico, dependente do tempo de exposição. Já com doses mais baixas (0,1 e 1 μM), a ECG foi capaz de prevenir completamente a genotoxicidade induzida pelo H2O2. Em suma, demonstramos que a ECG pode modular captação de glutamato e secreção de S100B. Além disso, pode exercer efeitos genoprotetores ou genotóxicos em células C6, dependendo da concentração e do tempo de incubação. Estes resultados sugerem que a ECG pode contribuir para o papel neuroprotetor das células gliais e contrapor-se a patologias neurológicas associadas ao estresse oxidativo. / There is a current interest in dietary compounds, such as green tea polyphenols, that can favor protection against a variety of brain disorders, including Alzheimer’s disease, ischemia and stroke. The objective of the present study was to investigate the effects of (-)-epicatechin-3-gallate (ECG), one of three major green tea antioxidants, on C6 lineage cells. We evaluated cell morphology and integrity; specific astrocyte activities; glutamate uptake; S100B secretion and the effect on genotoxicity induced by H2O2 in the presence of 0.1, 1 and 10 μM ECG. During 6 h of incubation, cell morphology was altered only at 10 μM ECG; After 24 h, cells become stellate (process-bearing cells), in the presence of all concentrations of ECG. Loss of cell integrity (~ 6%) was observed after 24 h with 10 μM ECG. ECG (1–10 μM) induced a decrease (~ 36%) in glutamate uptake after 1 h, however, after 6 h, occurred a sustained increase in glutamate uptake (~ 70%) from 0.1 μM. A significant increase in S100B secretion was observed at 1 μM ECG (36%) and 10 μM ECG (69%) after 1 h, in contrast to 6 h, when all doses induced a significant increase (~ 60%). Interestingly, ECG 10 μM showed genotoxic effects depending on time of incubation. In contrast, smaller doses of ECG (0.1 and 1 μM) were able to almost completelly prevent genotoxicity induced by H2O2. In summary, this study demonstrates that ECG can induce a significant improvement in glutamate uptake and S100B secretion. Also, ECG can exert genoprotective or genotoxic effects in C6 cells depending on concentration and time of incubation. These results suggest that ECG could contribute to the neuroprotective role of astroglial cells to counteract brain pathologies associated with oxidative stress.

Aproximadamente vinte espécies do gênero Hypericum (Guttiferae) têm ocorrência natural no Brasil, e concentram-se principalmente na região Sul do País. Considerando a importância deste gênero como fonte de substâncias com variadas atividades biológicas, tais como analgésica, antidepressiva, antimicrobiana, antiviral, antiproliferativa, entre outras, o presente trabalho teve como objetivos analisar a constituição química e o potencial antioxidante de espécies de Hypericum, desenvolver protocolos para manutenção de algumas espécies nativas através de culturas de tecidos e células e validar metodologia para quantificação de benzopiranos em H. polyanthemum proveniente de cultivo a campo, in vitro e aclimatizado. Utilizando-se métodos cromatográficos e espectroscópicos, foram isolados e identificados o ácido fenólico ácido 5-O-cafeoil-1-metoxi-quínico e os flavonóides 3,7-dimetil-quercetina, 3-Ometil- quercetina, I3,II8-biapigenina, guaijaverina, isoquercitrina e hiperosídeo, todos derivados da quercetina e obtidos da fração acetato de etila das partes aéreas de H. ternum. Ainda desta espécie, porém da fração n-hexano das raízes, obteve-se o derivado de floroglucinol uliginosina B. De H. myrianthum foram isolados e identificados os flavonóides quercetina e hiperosídeo, da fração metanólica das partes aéres, bem como os derivados de floroglucinol japonicina A e uliginosina B, fração n-hexano das raízes. Através do método colorimétrico de Folin-Ciocalteau, foram quantificados os teores de fenólicos totais das espécies H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum e H. polyanthemum, verificando-se teores variando entre 37,40 a 228,36 mg EQ/g de extrato seco. Utilizando as técnicas de TRAP (Total Radical-trapping Antioxidant Parameter), ORAC-PGV (Oxygen Radical Absorbance Capacity) e reação bioautográfica e espectrofotométrica com radicais DPPH• (2,2 difenil-1-picril-hidrazil) evidenciou-se que extratos brutos metanólicos, e frações metanólicas e n-hexânicas das espécies H. caprifoliatum, H. carinatum H. myrianthum e H. polyanthemum, bem como produtos isolados de espécies de Hypericum nativas do Estado apresentam potencial antioxidante. A regeneração in vitro foi obtida em meio Murashige & Skoog modificado (MΔ) para as espécies H. campestre, H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum, H. polyanthemum e H. ternum utilizando diferentes combinações e concentrações dos reguladores de crescimento 6-benzilamino-purina (BAP), ácido naftaleno-acético (ANA) e ácido 2,4 dicloro-fenóxi-acético (2,4-D). Plântulas dessas espécies foram posteriormente aclimatizadas com sucesso, sendo cultivadas a campo. As espécies micropropagadas demonstraram perfis químicos qualitativamente similares aos apresentados pelas plantas desenvolvidas no campo, de modo que o cultivo in vitro apresenta-se como uma alternativa interessante aos métodos convencionais de produção de biomassa para extração de metabólitos secundários bioativos. Culturas de calos foram estabelecidas em meio MΔ para H. myrianthum, H. polyanthemum e H. ternum, utilizando diferentes combinações e concentrações dos reguladores de crescimento cinetina (CIN), BAP, ANA e 2,4-D. Considerando-se as importantes atividades biológicas de produtos obtidos de H. polyanthemum foi estabelecida uma metodologia para quantificação, através da técnica de CLAE, de benzopiranos no extrato apolar desta planta, espécie de ocorrência restrita. A validação analítica foi avaliada conforme o preconizado por normas reconhecidas internacionalmente, com análise dos parâmetros linearidade, seletividade, precisão (repetibilidade e precisão intermediária), exatidão e limites de detecção e quantificação, demonstrando resultados coerentes com os exigidos pela legislação vigente. Foram evidenciadas variações no teor de benzopiranos na planta micropropagada, aclimatizada e desenvolvida a campo, provavelmente devido a fatores, que vão desde a regulação endógena de processos fisiológicos até variações sazonais no cultivo. / Approximately twenty species of Hypericum genus (Guttiferae) are native of Brazil, occurring mainly in the South region. Considering the importance of the genus as a source of compounds with different biological activities, such as analgesic, antidepressant, antimicrobial, antiviral, antiproliferative, among others, the objectives of this work were to evaluate the phytochemistry and antioxidant potential of some Hypericum species, to develop protocols for the maintenance of the species through in vitro cultures and to validate a technique to quantify the benzopyrans in H. polyanthemum grown in field, in vitro and acclimatized plants. Chromatographic and spectroscopic techniques were used for the isolation and identification of the phenolic acid 5-O-caffeoyl-1-methyl ester-quinic acid and the flavonoids quercetin 3,7-dimethyl ether, quercetin 3-methyl ether, I3,II8-biapigenin, guaijaverin, isoquercitrin and hyperoside, all of them quercetin derivatives and obtained from ethyl acetate fraction of H. ternum aerial parts. From n-hexane fraction of the roots of this species the phloroglucinol derivative uliginosin B was obtained. The flavonoids quercetin and hyperoside (from aerial parts of methanolic fraction), and the phloroglucinol derivatives japonicin A and uliginosin B (from n-hexane fraction of roots) were isolated from H. myrianthum. Total phenol concentration ranging from 37.40 to 228.36 mg QE/g dry extract (Folin–Ciocalteu colorimetric method) in H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum and H. polyanthemum was measured. The antioxidant potential of the extracts obtained from H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum and H. polyanthemum and isolated compounds was determined using TRAP (Total Radicaltrapping Antioxidant Parameter), ORAC-PGR (Oxygen Radical Absorbance Capacity) and bioautographic and spectrofotometric reaction with DPPH• (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl radical techniques. In vitro regeneration of H. campestre, H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum, H. polyanthemum and H. ternum was obtained in Murashige & Skoog modified medium (MΔ) supplemented with differents combinations and concentrations of the growth regulators 6-benzylaminopurine (BAP), α-naphthalene acetic acid (ANA) and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Plantlets were acclimatizated and transferred to open field. The micropropagated species showed chemical pattern qualitatively similar to field grown plants, demonstrating that the in vitro cultures are an alternative to conventional methods for biomass production of bioactive secondary metabolites. Callus cultures of H. myrianthum, H. polyanthemum and H. ternum were established in MΔ medium using different combinations and concentrations of kinetin (CIN), BAP, ANA and 2,4-D. Considering the important biological activities of the benzopyrans isolated from H. polyanthemum, an HPLC quantification methodology was established. Analytical validation was performed according to international rules (linearity, selectivity, precision, accuracy, detection and quantitation limits) showing results coherent with those required by the current legislation. Variation of the benzopyrans concentration was observed among the micropropagated plantlet, acclimatizated and field grown plants, probably due to factors as endogenous regulation of physiological process and seasonal variation of the culture.

Este trabalho centrou-se no desenvolvimento tecnológico e na caracterização de nanopartículas poliméricas (nanocápsulas ou nanoesferas) contendo melatonina, empregando diferentes composições, métodos de preparação e concentrações de melatonina. De uma maneira geral, as diferentes suspensões nanoparticuladas foram caracterizadas segundo a determinação dos teores totais de melatonina, a determinação das taxas de associação da melatonina aos nanocarreadores, a análise morfológica, a determinação dos diâmetros médios de partículas e polidispersões, além da determinação dos valores de potenciais zeta. As suspensões de nanocápsulas ou de nanoesferas foram preparadas pelos métodos de deposição interfacial ou de nanoprecipitação, respectivamente. Foram avaliadas as influências do tipo de polímero [Eudragit® S100, Eudragit® RS100, poli(ε-caprolactona) ou poli(lactideo)], de óleo (triglicerídeos dos ácidos cáprico e caprílico, óleo mineral ou Eutanol G®) e de tensoativos (polissorbato 80, poloxamer 188, monooleato de sorbitano, monoestearato de sorbitano ou lecitina) sobre as características físico-químicas das suspensões. Os resultados demonstraram que as nanopartículas apresentaram diâmetros inferiores a 350 nm, encapsulação parcial da melatonina e morfologia esférica. As suspensões de nanoesferas apresentaram eficiências de encapsulação similares, mas diâmetros inferiores às respectivas nanocápsulas. O tipo de polímero empregado influenciou nas taxas de associação da melatonina. De acordo com a maior eficiência de encapsulação (56 %), nanocápsulas preparadas com Eudragit S100® foram selecionadas para secagem por aspersão, empregando dióxido de silício coloidal (3 % m/V). As micropartículas nanorrevestidas obtidas apresentaram eficiência de encapsulação de 93 % e foram capazes de controlar a velocidade de liberação da melatonina, comparativamente ao fármaco puro. O estudo de estabilidade das suspensões de nanocápsulas, comparativamente à nanoemulsão e à nanodispersão dos tensoativos, mostrou que a composição dos sistemas e as condições de armazenamento influenciaram a estabilidade físico-química das formulações. Um delineamento fatorial 23 foi também realizado objetivando-se a comparação das características físicoquímicas de nanocápsulas de Eudragit RS100® contendo melatonina obtidas através de deposição interfacial ou de emulsificação-difusão. As taxas de associação da melatonina não foram influenciadas pela composição das formulações e nem pelo método de preparação empregado. Por outro lado, os diâmetros, as polidispersões, os potenciais zeta, os valores de pH e a estabilidade físico-química foram influenciados pelo método de preparação e/ou pela composição dos sistemas. As propriedades antioxidantes da melatonina associada a nanopartículas foram também avaliadas. Desta forma, experimentos in vitro de lipoperoxidação de microssomas hepáticos e de lipossomas de fosfatidilcolina, induzida pelo radical ascorbil, foram realizados. Nanocápsulas ou nanoesferas preparadas com Eudragit S100® foram selecionadas para o estudo, com base na maior eficiência de associação do fármaco. Nanoemulsão também foi testada para verificar a influência da presença do polímero. A presença da melatonina foi capaz de proteger os lipídios em comparação aos controles, com influência da formulação, da dose de melatonina e do modelo de membrana empregado. Apenas os nanocarreadores poliméricos (nanocápsulas ou nanoesferas revestidas com polissorbato 80) contendo melatonina foram capazes de aumentar significativamente a atividade antioxidante deste fármaco nos dois modelos de membrana empregados. Finalmente, nanocápsulas de Eudragit S100® revestidas com polissorbato 80 foram administradas, intraperitonealmente em camundongos sadios, e os efeitos antioxidantes agudos da melatonina in vivo foram avaliados no cérebro (córtex frontal e hipocampo) e no fígado. Os resultados demonstraram que as nanocápsulas contendo melatonina foram capazes de reduzir significativamente a lipoperoxidação no córtex, no hipocampo e no fígado, ao passo que a solução do fármaco não exerceu efeito significativo. O conjunto dos resultados demonstrou a viabilidade tecnológica da preparação de sistemas poliméricos nanoparticulados e microparticulados contendo melatonina, na forma de suspensão ou de pós, com potencial aplicação tanto no aumento da atividade antioxidante quanto no controle da liberação deste fármaco. / This work has been based on the development and characterization of the melatoninloaded polymeric nanoparticles (nanocapsules or nanospheres) employing different system compositions, methods of preparation and melatonin concentrations. In general, the different nanoparticle suspensions were characterized in terms of melatonin content and its association within the particles, morphology, mean size and polydispersity of the particles, as well as the zeta potentials. The nanocapsule or nanosphere suspensions were prepared by interfacial deposition or nanoprecipitation methods, respectively. The influences of the type of the polymer [Eudragit® S100, Eudragit® RS100, poly(ε-caprolactone) or poly(lactide)], of the oil nature (caprylic/capric triglyceride, mineral oil or Eutanol G®) and of the type of surfactants (polysorbate 80, poloxamer 188, sorbitan monooleate, sorbitan monostearate or lecithin) on the physicochemical characteristics of suspensions were evaluated. The results demonstrated that the nanoparticles presented mean size lower than 350 nm, partial encapsulation of melatonin and they were spherically shape. The nanosphere suspensions presented similar encapsulation efficiencies to nanocapsules, however, the former presented a lower mean size of particles. The type of polymer used in the formulations influenced the encapsulation efficiencies. The nanocapsules prepared with Eudragit S100® were selected to be spray-dried, using colloidal silicon dioxide (3 % w/v), due to the highest encapsulation efficiency (56 %). The nanoparticle-coated microparticles presented the encapsulation efficiency of 93 % and they controlled the release rate of melatonin when compared to the pure drug. The physicochemical stability evaluation of the melatonin-loaded nanocapsule suspensions compared to the nanoemulsion or the nanodispersion of surfactants showed that the composition of the melatonin-loaded system and the storage conditions influenced the physicochemical stability of the formulations. Melatonin-loaded Eudragit RS100®-nanocapsule suspensions prepared by interfacial deposition or by emulsification-diffusion techniques were also compared in terms of physicochemical characteristics using a 23 fatorial-design. The formulation composition or the preparation methods did not influence the encapsulation efficiencies. However, the mean size, polydispersity, zeta potential, pH and physicochemical stability were influenced by the formulation composition and/or by the preparation methods. The antioxidant properties of the melatonin-loaded nanoparticle suspensions were also evaluated. Hence, phosphatidylcoline liposomes or liver microsomes were used as model of the lipid membrane and in vitro lipid peroxidation was induced by free radical ascorbyl. The melatonin-loaded Eudragit S100® nanoparticles (nanocapsules and nanospheres) were selected to this study based on the highest encapsulation efficiencies. The nanoemulsion was also evaluated for studying the influence of the presence of the polymer The results demonstrated that the lipids were protected against peroxidation due to the presence of the melatonin, and this effect depended on the type of formulation, drug concentration and on the type of the membrane model. Only the melatonin-loaded polymeric nanocarriers (polysorbate 80-coated nanocapsules or nanospheres) were able to improve the antioxidant action of melatonin in both membrane model. Finally, the in vivo acute antioxidant capacities of melatonin-loaded polysorbate 80-coated Eudragit S100® nanocapsules in the brain (frontal cortex and hippocampus) and in the liver were compared to the effect of the drug solution, after 1 h of intraperitoneal administration in mice. It was verified that the melatonin-loaded nanocapsules significantly decreased the lipid peroxidation in the cortex, in the hippocampus and in the liver. On the other hand, the melatonin solution did not significantly decrease the lipid peroxidation. Briefly, the results demonstrated the technological viability of the preparation of melatonin-loaded polymeric nanoparticulated and microparticulated systems in the form of suspension or powder. These polymeric particulated systems presented potential applications in both to improve the antioxidant activity and to control the release profile of melatonin.

Baccharis trimera (Less.) DC. (Asteraceae), popularmente conhecida como carqueja, é nativa da América sendo amplamente empregada na medicina popular para problemas hepáticos, digestivos, e como anti-inflamatória. Em sua composição química destaca-se maior acúmulo de flavonas, flavonóis e de diterpenos labdanos e clerodanos. Diversos estudos vêm sendo realizados, em especial para as atividades anti-inflamatórias e antimicrobianas. Com isso, iniciou-se o fracionamento do extrato de B. trimera visando à identificação da fração ou compostos responsáveis pela atividade anti-inflamatória. Das partes aéreas de B. trimera foram obtidas as frações diclorometano, acetato de etila, n-butanol e aquosa, além das frações saponinas e flavonóides. Essas seis frações foram avaliadas para a atividade anti-inflamatória através do modelo de inflamação aguda da pleurisia induzida por carragenina e foram avaliados os seguintes parâmetros no líquido pleural: volume de exsudato, contagem de leucócitos totais, diferencial citológico, concentração protéica e determinação de NO no exsudato. Todas as frações testadas diminuíram significativamente os parâmetros analisados quando comparados ao grupo carragenina (ANOVA, P < 0,05), evidenciando assim potencial atividade antiinflamatória. A determinação de fenóis totais e a atividade antioxidante foram avaliadas através dos métodos de Folin-Ciocalteu e através do ensaio espectrofotométrico com o radical 2,2 difenil-1-picril-hidrazil (DPPH.), respectivamente. As frações flavonóides e acetato de etila (1 mg/ml) apresentaram alto potencial antioxidante, não se diferenciando estatisticamente (ANOVA, P < 0,05) das substâncias de referência vitamina C, quercetina e luteolina nas mesmas concentrações, sugerindo dessa forma que a ação antioxidante destas frações devese à presença de flavonóides. A continuidade dos estudos fitoquímicos e a identificação do potencial antioxidante e anti-inflamatório de B. trimera, além de contribuir para a diferenciação química das espécies do gênero Baccharis poderão credenciá-la para o desenvolvimento de um fármaco com atividade anti-inflamatória e antioxidante. / Baccharis trimera (Less.) DC. (Asteraceae), popularly known as "carqueja", is native to America and it is widely used in traditional medicine for gastrointestinal treatments, for liver diseases, as digestive and to anti-inflammatory purposes. It presented accumulation of flavones, flavonols and diterpenes. Several studies have been performed to study its anti-inflammatory and antimicrobial activities. Considering this, we initiated the fractionation of B. trimera extract in order to identify the fraction or compounds responsible for its anti-inflammatory activity. From the aerial parts of B. trimera it were obtained the fractions: dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol, aqueous and also saponins and flavonoids fractions. All fractions were characterized by TLC. These six fractions were evaluated for the anti-inflammatory activity using the carrageenan-induced pleurisy, as a model of acute inflammation via i.p. The following parameters were determined in the pleural fluid: the exudate volume, total leukocyte count, cytological differences, protein concentration and determination of NO. All tested fractions decreased significantly the analyzed parameters when compared to the carrageenan group (ANOVA, P < 0.05), showing potential antiinflammatory activity. The determination of total phenols and antioxidant activity were evaluated by the Folin-Ciocalteu spectrophotometric assay and by the radical 2.2- diphenyl-1-picryl-hidrazil (DPPH.) method, respectively. The flavonoid and ethyl acetate fractions (1 mg / ml) showed high antioxidant potential that were similar (ANOVA, P < 0.05) from that of the reference substances: vitamin C, quercetin and luteolin in the same concentrations, thus suggesting that the antioxidant activity of these fractions is due to the presence of flavonoids. The phytochemical studies and the identification of potential antioxidant and anti-inflammatory activities of B. trimera, will contribute to the chemical differentiation of Baccharis species and also it should support the development of a drug with anti-inflammatory and antioxidant activity.