Resumo não disponível.

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Orientador: Claudio Saddy Rodrigues Coy / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T01:57:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_AnaPaulaPaiva_M.pdf: 1853908 bytes, checksum: e3ffa2637de54d6f4e2d71efbafe382d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A doença de Crohn apresenta aspectos controversos e pouco compreendidos em relação a sua etiopatogenia e à sua evolução; o que torna difícil o manejo terapêutico desta doença. Nos últimos anos os avanços da biologia molecular têm possibilitado novas descobertas, no entanto, ainda existem muitas dúvidas em relação à sua etiopatogenia e à ação de diversos mediadores inflamatórios. Objetivo: Avaliar a expressão das citocinas pró-inflamatórias TNF-a, IL-1ß e IL-8 em fragmentos de íleo terminal de pacientes portadores de doença de Crohn em uso de mesalazina e azatioprina e compará-los aos indivíduos normais. Casuística e Métodos: Foram selecionados 25 pacientes acompanhados no Ambulatório de Doença Inflamatória Intestinal do HC-UNICAMP, portadores de doença de Crohn com acometimento de íleo terminal, e que foram, de acordo com protocolos vigentes, submetidos à colonoscopia de controle para avaliação da doença ou procedimento cirúrgico para ressecção ou plastia do segmento doente. Foi obtida amostra de íleo terminal para avaliação dos mediadores inflamatórios acima citados, por meio de técnica de imunoblot. Foram estudados sete pacientes que estavam em uso de mesalazina, nove que estavam em uso de azatioprina, sendo comparados com 9 controles que não portadores de doença inflamatória intestinal. Resultados: Não foi encontrada diferença na expressão do TNF-a entre os três grupos. Foi encontrada diferença estatisticamente significativa quando avaliadas as expressões da IL1- ß e da IL-8. Os níveis de expressão de IL-8 e de IL1- ß foram maiores no grupo que estava em uso de azatioprina quando comparados aos grupos Mesalazina e Controle (p < 0,05). Conclusão: Os pacientes em uso de azatioprina apresentam maior expressão de IL-8 e IL1- ß que aqueles em uso de mesalazina e que os controles. Isto poderia estar associado à ação da mesalazina que diminui, especificamente a ativação destas interleucinas. / Abstract: Crohn's disease is an inflammatory bowel disease that is not currently understood. Much research is being carried out in order to comprehend its mechanisms of lesion and the inflammatory mediators involved in this disease. New advances in molecular biology have opened up new possibilities for further understanding this intricate pathology, yet, some doubts remain. Objective: To evaluate the expressions of TNF-a, IL-1ß and IL-8 in terminal ileum biopsies from patients with Crohn's disease in treatment with mesalazine and azathioprine, and compare these expressions. Patients and Methods: 25 patients from the Inflammatory Bowel Disease Ambulatory from the Clinic Hospital of the University of Campinas, who were submitted to colonoscopy or ileal resection and plastic surgery, were randomly selected. Biopsies from the terminal ileum were obtained and sent for imunoblotting analysis in order to determine the expressions of the proteins studied. Seven of the patients were taking mesalazine, while nine were on azathioprine and expressions were all compared to those of nine healthy controls. Results: No statistical difference was found between the expressions of TNF-a amongst the three groups. In contrast, IL1- ß and IL-8 were found in different levels of expression in the group taking azathioprine when compared to the mesalazine group and control (p<0, 05). Conclusion: Patients chronically taking azathioprine demonstrate higher levels of expression of the inflammatory mediators, IL1- ß and IL-8, in terminal ileum biopsies, when compared to mesalazine treated and healthy counterparts. This effect could be due the inhibition of these proteins' expression induced by mesalazine, cooling down bowel's inflammatory activity back to normal. / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

para diversos tipos de tratamento, como doenças auto-imunes, inflamatórias e até para pacientes submetidos a transplante de órgãos. Assim também, é capaz de causar efeitos adversos como toxicidade hepática e mais frequentemente a mielossupressão. Tiopurina Smetiltransferase (TPMT), uma enzima que catalisa a S-metilação dessas drogas, exibiu um polimorfismo genético em 10% de Caucasianos, sendo 1/300 indivíduos com completa deficiência. Pacientes intermediários ou completamente deficientes da atividade de TPMT estão em risco por excessiva toxicidade após receberem doses padrões de medicações tiopurínicas. O presente estudo visa a 1) pesquisar a frequência desses polimorfismos (TPMT*2, TPMT*3A, TPMT*3B e TPMT*3C) em populações de doadores de sangue em Hospital terciário Universitário e em pacientes que utilizem a Azatioprina para o tratamento da hepatite autoimune e transplantado renal, 2) padronizar os métodos para a identificação dos polimorfismos e associá-los com os níveis dos metabólitos da AZA. Esses achados podem explicar os efeitos benéficos da Azatioprina e ter importante implicação para o desenho de novas terapias específicas em doenças autoimunes e em transplante de orgãos / Thiopurine drugs such as azathioprine (AZA) are widely used for many types of treatment: autoimmune and inflammatory diseases and for patients who had undergone organ transplantation. AZA is capable of causing adverse effects such as hepatotoxicity and myelosuppression. Thiopurine S-methyltransferase (TPMT), which catalyzes the Smethylation of such drugs, exhibits a genetic polymorphism in 10% of Caucasians, and 1 / 300 individuals with complete deficiency. Patients who are intermediary or completely deficient in TPMT activity are at risk for excessive toxicity after receiving standard doses of thiopurine drugs. This recent study aims to 1) investigate the frequency of these polymorphisms (TPMT*2, TPMT*3A, TPMT * 3B and TPMT*3C) in blood donors from a terciary University Hospital and in patients using azathioprine for the treatment of autoimmune hepatitis and transplanted kidney; 2) standardize the methods for the identification of polymorphisms and associate with levels metabolites of AZA. These findings may explain the beneficial effects of azathioprine and have important implications to design new therapies for autoimmune diseases and organ transplant

A azatioprina (AZA) é um imunossupressor utilizado no tratamento de doenças autoimunes como lúpus eritematoso sistêmico, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal e contra a rejeição em transplantes de órgãos sólidos. Após mais de 40 anos de uso a AZA continua exercendo um papel central nos regimes imunomoduladores, devido ao fato de combinar eficácia, segurança e baixo custo. Sabe-se que a atividade da tiopurina metiltransferase pode determinar, pelo menos em parte, a eficácia clínica da AZA. Esta enzima apresenta polimorfismo genético co-dominante e a distribuição dos alelos variantes é significativamente diferente entre as populações. A grande variabilidade farmacocinética no metabolismo AZA justifica a sua monitorização terapêutica. Neste trabalho otimizou-se uma metodologia para a quantificação dos metabólitos da AZA, 6-TGN e 6-MMP, por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC/UV-Vis), utilizando-se um detector de ultravioleta-visível em um único comprimento de onda, após a amostra passar por uma desproteinização ácida simples e ser aquecida para a conversão dos metabólitos em suas respectivas bases livres. Os valores destes metabólitos foram determinados em uma população de 124 pacientes transplantados renais. Para adequarmos o processo às legislações locais e internacionais, foram seguidas orientações da Anvisa, FDA e CLSI. A separação foi realizada em coluna de fase reversa, sendo a fase móvel A fosfato de potássio e a fase móvel B metanol. A detecção da 6-TGN e da 6-MMP foi realizada em 342 m (UV-Vis). O estudo da linearidade da 6-TGN variou entre 0,30 e 89,71 mol/L e da 6-MMP entre 0,30 e 93,86 mol/L. As recuperações, de 95,08 a 100,80% para 6-TGN e 95,38 a 105,06% para 6-MMP. Os CV da repetibilidade, de 0,04 a 5,06%, enquanto os CV da reprodutibilidade de 4,88 a 12,73% para 6-TGN e 6-MMP. Para ambos os metabólitos o LD e o LQ foram de 0,30 mol/L e 0,13 mol/L. Os eritrócitos lavados e as amostras tratadas, prontas para a injeção no HPLC, foram armazenadas abaixo de -5°C até a análise. Nesta temperatura estiveram estáveis durante 8 semanas e 1 dia, respectivamente. Os valores das concentrações de 6-TGN e 6-MMP encontrados nas amostras dos pacientes variaram entre não detectável a 1569 mol/8 x 108 RBC (mediana de 200,50) e não detectável a 113057 mol/8 x 108 RBC (mediana de 5166), respectivamente. As correlações entre os níveis de 6-TGN ou 6-MMP e as variáveis sexo, tempo pós-transplante, número de transplantes e dosagem de AZA (mg/kg) foram examinadas em diferentes grupos. O método proposto apresenta boa relação custo-benefício, é simples, preciso e rápido na determinação das concentrações intraeritrocitárias de 6-TGN e 6-MMP em pacientes sob terapia com AZA. O método validado permite que o laboratório forneça dados farmacocinéticos úteis e precisos para o ajuste do tratamento do paciente e pode ser facilmente adaptado para a análise rotineira destes metabólitos. Os resultados das amostras dos pacientes estão de acordo com os encontrados em outros estudos, atestando a utilidade dessa ferramenta analítica no acompanhamento dos pacientes / Azathioprine (AZA) is an immunosuppressant used in autoimmune pathologies like lupus erythematosus, Chrons disease, inflammatory bowel disease and against rejection in solid organs transplant. After more than 40 years of use, AZA continues exerting a central role in immunomodulatory regimens, due to the fact that it combines effectiveness, safety and low cost. It is well known that thiopurine methyltransferase activity may determine, at least in part, the clinical efficacy of AZA therapy. This enzyme exhibits codominant genetic polymorphism and the distribution of these variant alleles differs significantly among populations. The considerable pharmacokinetic variability in AZA metabolism justify the therapeutic drug monitoring of this drug. In this work a methodology was improved to quantify the metabolites of AZA, 6-TGN and 6-MMP, by high performance liquid chromatography (HPLC/UV-Vis) with an ultraviolet-visible detector, using a single wavelength reading, following a simple acid deproteinization and heating to convert the metabolites into their respective free bases. The values of these metabolites were determined in a population of 124 renal transplant recipients. To adequate the process to international and local legislation, Anvisa, FDA and CLSI guidelines were followed. Separation was achieved on a reversed-phase column; mobile phase A potassium phosphate and mobile phase B methanol. Detection of 6-TGN and 6-MMP was performed at 342 m (UV-Vis). Assay linearity for 6-TGN ranged from 0.30 to 89.71 mol/L and from 0.30 to 93.86 mol/L for 6-MMP. The recoveries were 95.08, 97.76 and 100.80% for 6-TGN and 104.79, 95.38 and 105.06% for 6-MMP. Repeatability CV were 3.50, 5.06, 1.09 and 0.04, 0.35, 1.58%, while reproducibility CV were 8.65, 7.18, 8.44 and 12.73, 6.40, 4.88% for 6-TGN and 6-MMP, respectively. LOQ and LOD of 6-TNG and 6-MMP were respectively 0.30 mol/L and 0.13 mol/L for both metabolites. The washed erythrocytes and the samples treated and ready for injection into the HPLC system were stored below -5 °C until analysis, at this temperature the samples were stable for 8 weeks and for 1 day, respectively. 6-TGN and 6-MMP patient analysis values ranged from non detectable to 1569 mol/8 x 108 RBC (median of 200.50) and non detectable to 113057 mol/8 x 108 RBC (median of 5166), respectively. The correlations between 6-TGN or 6-MMP levels and variables sex, time post-transplant, number of transplants and AZA dosage (mg/kg) were examined in different groups. The proposed HPLC method has a good cost-benefit ratio, is straightforward, precise, accurate and fast at the determining 6-TGN and 6-MMP concentrations in red blood cells of patients under AZA therapy. The validated method is good enough to enable the laboratory to routinely provide useful and accurate pharmacokinetic data in time to adjust patient regimens. It can be easily adopted for routine analysis of these drug metabolites. The results of patient samples are in agreement with others studies, thus certifying the usefulness of this analytical tool in monitoring of patients

A azatioprina (AZA) é um imunossupressor utilizado no tratamento de doenças autoimunes como lúpus eritematoso sistêmico, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal e contra a rejeição em transplantes de órgãos sólidos. Após mais de 40 anos de uso a AZA continua exercendo um papel central nos regimes imunomoduladores, devido ao fato de combinar eficácia, segurança e baixo custo. Sabe-se que a atividade da tiopurina metiltransferase pode determinar, pelo menos em parte, a eficácia clínica da AZA. Esta enzima apresenta polimorfismo genético co-dominante e a distribuição dos alelos variantes é significativamente diferente entre as populações. A grande variabilidade farmacocinética no metabolismo AZA justifica a sua monitorização terapêutica. Neste trabalho otimizou-se uma metodologia para a quantificação dos metabólitos da AZA, 6-TGN e 6-MMP, por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC/UV-Vis), utilizando-se um detector de ultravioleta-visível em um único comprimento de onda, após a amostra passar por uma desproteinização ácida simples e ser aquecida para a conversão dos metabólitos em suas respectivas bases livres. Os valores destes metabólitos foram determinados em uma população de 124 pacientes transplantados renais. Para adequarmos o processo às legislações locais e internacionais, foram seguidas orientações da Anvisa, FDA e CLSI. A separação foi realizada em coluna de fase reversa, sendo a fase móvel A fosfato de potássio e a fase móvel B metanol. A detecção da 6-TGN e da 6-MMP foi realizada em 342 m (UV-Vis). O estudo da linearidade da 6-TGN variou entre 0,30 e 89,71 mol/L e da 6-MMP entre 0,30 e 93,86 mol/L. As recuperações, de 95,08 a 100,80% para 6-TGN e 95,38 a 105,06% para 6-MMP. Os CV da repetibilidade, de 0,04 a 5,06%, enquanto os CV da reprodutibilidade de 4,88 a 12,73% para 6-TGN e 6-MMP. Para ambos os metabólitos o LD e o LQ foram de 0,30 mol/L e 0,13 mol/L. Os eritrócitos lavados e as amostras tratadas, prontas para a injeção no HPLC, foram armazenadas abaixo de -5°C até a análise. Nesta temperatura estiveram estáveis durante 8 semanas e 1 dia, respectivamente. Os valores das concentrações de 6-TGN e 6-MMP encontrados nas amostras dos pacientes variaram entre não detectável a 1569 mol/8 x 108 RBC (mediana de 200,50) e não detectável a 113057 mol/8 x 108 RBC (mediana de 5166), respectivamente. As correlações entre os níveis de 6-TGN ou 6-MMP e as variáveis sexo, tempo pós-transplante, número de transplantes e dosagem de AZA (mg/kg) foram examinadas em diferentes grupos. O método proposto apresenta boa relação custo-benefício, é simples, preciso e rápido na determinação das concentrações intraeritrocitárias de 6-TGN e 6-MMP em pacientes sob terapia com AZA. O método validado permite que o laboratório forneça dados farmacocinéticos úteis e precisos para o ajuste do tratamento do paciente e pode ser facilmente adaptado para a análise rotineira destes metabólitos. Os resultados das amostras dos pacientes estão de acordo com os encontrados em outros estudos, atestando a utilidade dessa ferramenta analítica no acompanhamento dos pacientes / Azathioprine (AZA) is an immunosuppressant used in autoimmune pathologies like lupus erythematosus, Chrons disease, inflammatory bowel disease and against rejection in solid organs transplant. After more than 40 years of use, AZA continues exerting a central role in immunomodulatory regimens, due to the fact that it combines effectiveness, safety and low cost. It is well known that thiopurine methyltransferase activity may determine, at least in part, the clinical efficacy of AZA therapy. This enzyme exhibits codominant genetic polymorphism and the distribution of these variant alleles differs significantly among populations. The considerable pharmacokinetic variability in AZA metabolism justify the therapeutic drug monitoring of this drug. In this work a methodology was improved to quantify the metabolites of AZA, 6-TGN and 6-MMP, by high performance liquid chromatography (HPLC/UV-Vis) with an ultraviolet-visible detector, using a single wavelength reading, following a simple acid deproteinization and heating to convert the metabolites into their respective free bases. The values of these metabolites were determined in a population of 124 renal transplant recipients. To adequate the process to international and local legislation, Anvisa, FDA and CLSI guidelines were followed. Separation was achieved on a reversed-phase column; mobile phase A potassium phosphate and mobile phase B methanol. Detection of 6-TGN and 6-MMP was performed at 342 m (UV-Vis). Assay linearity for 6-TGN ranged from 0.30 to 89.71 mol/L and from 0.30 to 93.86 mol/L for 6-MMP. The recoveries were 95.08, 97.76 and 100.80% for 6-TGN and 104.79, 95.38 and 105.06% for 6-MMP. Repeatability CV were 3.50, 5.06, 1.09 and 0.04, 0.35, 1.58%, while reproducibility CV were 8.65, 7.18, 8.44 and 12.73, 6.40, 4.88% for 6-TGN and 6-MMP, respectively. LOQ and LOD of 6-TNG and 6-MMP were respectively 0.30 mol/L and 0.13 mol/L for both metabolites. The washed erythrocytes and the samples treated and ready for injection into the HPLC system were stored below -5 °C until analysis, at this temperature the samples were stable for 8 weeks and for 1 day, respectively. 6-TGN and 6-MMP patient analysis values ranged from non detectable to 1569 mol/8 x 108 RBC (median of 200.50) and non detectable to 113057 mol/8 x 108 RBC (median of 5166), respectively. The correlations between 6-TGN or 6-MMP levels and variables sex, time post-transplant, number of transplants and AZA dosage (mg/kg) were examined in different groups. The proposed HPLC method has a good cost-benefit ratio, is straightforward, precise, accurate and fast at the determining 6-TGN and 6-MMP concentrations in red blood cells of patients under AZA therapy. The validated method is good enough to enable the laboratory to routinely provide useful and accurate pharmacokinetic data in time to adjust patient regimens. It can be easily adopted for routine analysis of these drug metabolites. The results of patient samples are in agreement with others studies, thus certifying the usefulness of this analytical tool in monitoring of patients

Orientadores: Elizete Aparecida Lomazi da Costa Pinto, Maria Marluce dos Santos Vilela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:25:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Davanco_Taciana_D.pdf: 2427326 bytes, checksum: 95e80c1ee79f6b95668f4d4d893d1a87 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A Doença de Crohn (DC) e uma desordem inflamatória intestinal crônica, com evidencia de inflamação transmural granulomatosa da mucosa. Ha aumento da permeabilidade intestinal, redução da atividade do sistema muco ciliar, alterações nas junções epiteliais, deficiência de oligoelementos ate desnutrição grave. A etiopatogenia permanece e desconhecida, mas ha hipóteses sobre a genética da doença e alterações da regulação da resposta imune da mucosa para a microbiota intestinal. O diagnostico e estabelecido pelos sintomas e sinais, imagens da endoscopia e radiologia, e histologia do tecido intestinal. O objetivo desta pesquisa foi investigar o efeito de um concentrado de proteínas de soro de leite bovino enriquecido com TGF-? sobre a inflamação e o estado nutricional dos pacientes com DC sob terapia com azatioprina sozinha ou combinada com anti-TNF? (infliximab). O desenho do estudo e prospectivo e de intervenção via oral por dezesseis semanas com um concentrado de proteínas do soro de leite enriquecido com TGF-?. Foram realizadas analises de composição centesimal, grau de hidrolise, solubilidade e determinação total de aminoácidos do suplemento da proteína do soro de leite bovino. A ingestão alimentar e estado nutricional foram avaliados antes e apos a intervenção. Para avaliação sensorial do suplemento foi aplicado teste de aceitação utilizando escala hedônica facial de 9 pontos. A inflamação foi avaliada antes, durante e apos a intervenção, através da medida do índice de atividade da doença e da dosagem do sistema oxidante H2O2 pelos granulócitos e antioxidante enzimatico da Glutationa eritrocitaria (GSH). O grupo total de pacientes com doença de Crohn apresentou, em sua maioria, consumo adequado de carboidratos e lipídeos, e o consumo de proteína foi superior ao recomendado em mais da metade dos pacientes. Constatou-se inadequação na ingestão de vitaminas A, C, D, E, fibras, cálcio, folato, ferro e zinco. A ingestão de proteínas do soro de leite resultou em melhora da composição corporal dos pacientes. A avaliação sensorial mostrou que cerca de 30% dos indivíduos gostaram do suplemento com relação a todos os atributos avaliados, já metade deles não gostaram e 20% o classificaram como "mais ou menos". A avaliação clinica pelo Índice de atividade da Doença de Crohn (IADC), mostrou que a suplementação nutricional no grupo de pacientes sob terapia combinada Azatioprina e Infliximab reduziu significativamente o IADC revelado pela melhora dos sintomas clínicos dos pacientes. O grupo de pacientes que apresentava a DC com sintomas mais leves estava sob terapia com AZA sozinha e mostrou produção de GSH similar ao controle saudável. No entanto, o grupo sob terapia combinada AZA + anti- TNF-? (Infliximab) apresentou valores de GSH significativamente mais elevados do que o controle saudável antes (p=0,023) e apos a suplementação (p<0,01). Do mesmo modo, valores significativamente mais altos de GSH no grupo da terapia combinada antes (p=0,048) e apos a suplementação foi observado quando comparado ao grupo AZA. Os valores mais elevados de GSH no grupo de terapia combinada podem ser interpretados como efeito dessa terapia, combinada, uma vez que não se observou diferença significativa quando se comparou os valores de GSH antes e apos receber a suplementação. " Em relação a produção basal de H2O2, o grupo de pacientes sob terapia com AZA sozinha mostrou resultados similares ao controle saudável, enquanto o grupo sob terapia combinada mostrou valores inferiores significativos (p<0,01) em relação ao controle saudável. A capacidade máxima de produção de espécies reativas de oxigênio não apresentou diferença significativa entre o controle saudável e os pacientes em uso de imunossupressores. Como também não foi observada diferença significativa entre H2O2 antes e apos a suplementação. Esses resultados demonstram, pela primeira vez, que a terapia combinada na DC reduz de modo acentuado a geração de espécies reativas do oxigênio por granulócitos e, o aumento de GSH encontrado nesses pacientes, reforça seu relevante papel no equilíbrio do balanço H2O2 (oxidante) versus GSH (antioxidante). Com resultados de H2O2 tão baixos e de GSH mais elevados no grupo de pacientes sob terapia combinada, o suplemento oferecido a esses pacientes pode ser metabolizado e aproveitado de modo a ter impacto na melhora no IADC e na composição corporal. O grupo sob terapia combinada, mas não suplementado, não apresentou melhora do IADC nem do índice de massa corporal. Esses resultados são muito relevantes uma vez que os pacientes ao iniciarem a terapia combinada apresentavam doença de moderada para grave e ao receberem o suplemento já se encontravam com o IADC ?150. Nessa fase, o suplemento teve sua contribuição porque não havia mais desequilíbrio no sistema oxidante versus antioxidante. Alem disso, o curto período de 16 semanas de suplementação com o concentrado de proteína do soro de leite enriquecido com TGF- ? foi suficiente para promover melhoras no IADC e no Índice de massa corporal. Concluímos que o suplemento tem grande potencial para ser comercializado e auxiliar na melhoria da clinica de indivíduos com doença de Crohn. Entretanto, para encorajar a suplementação com o concentrado de soro de leite enriquecido com TGF- ? de modo regular e fundamental melhorar a qualidade sensorial do produto / Abstract: Crohn's disease (AD) is a chronic inflammatory bowel disorder, with evidence of transmural granulomatous inflammation of the mucosa. There is increased intestinal permeability, reduced the activity of the ciliary mucus, changes in epithelial junctions, and trace element deficiency to severe malnutrition. The etiopathogenesis remains an enigma, but there are hypotheses about the genetics of disease and changes in regulation of the mucosal immune response to intestinal microbiota. The diagnosis is established by the symptoms and signs, endoscopy and radiology images, and histology of the intestinal tissue. The objective of this research was to investigate the role of a protein concentrate of whey enriched with TGF-? on inflammation and nutritional status of patients with Crohn's disease under treatment with azathioprine alone or combined with anti-TNF (infliximab). The study design is prospective and intervention orally for sixteen weeks with a protein concentrate of whey enriched with TGF-?. Were analyzed for chemical composition, degree of hydrolysis, solubility and total amino acid determination of protein supplementation of whey. Dietary intake and nutritional status were evaluated before and after intervention. To supplement the sensory evaluation test was applied for acceptance facial hedonic scale of 9 points. Inflammation was assessed before, during and after the intervention by measuring the index of disease activity and dosage of the oxidant system H2O2 by granulocytes and erythrocyte antioxidant enzyme glutathione (GSH). The total group of patients with Crohn's disease had, in most cases, adequate intake of carbohydrates and lipids, and protein consumption was higher than recommended in more than half of patients. It was found inadequate intake of vitamins A, C, D, E, fiber, calcium, folate, iron and zinc. Protein intake of whey resulted in improved body composition of patients. The sensory evaluation showed that about 30% of individuals liked the supplement with respect to all attributes, since half of them did not like and 20% classified it as "more or less". The clinical activity index for Crohn's disease (CDAI), showed that nutritional supplementation in patients under azathioprine and infliximab combination therapy significantly reduced the IADC revealed by the improvement of clinical symptoms of patients. The group of patients who presented with the DC milder symptoms were being treated with AZA alone and showed production of GSH similar to healthy control. However, the AZA group under combined therapy + anti-TNF-? (infliximab) had GSH values significantly higher than healthy controls before (p = 0.023) and after supplementation (p <0.01). Similarly, significantly higher values of GSH in the combined therapy group before (p = 0.048) and after supplementation was observed when compared to the AZA group. Highest levels of GSH in the combined therapy group can be interpreted as an effect of this therapy, combined, since there was no significant difference when comparing the values before and after receiving GSH supplementation. "In relation to the basal production of H2O2, the group of patients on AZA therapy alone showed similar results to healthy control, while the group under combined therapy showed significant lower values (p <0.01) compared to healthy control. The ability Maximum production of reactive oxygen species showed no significant difference between healthy control and patients using immunosuppressive drugs. Nor was no significant difference between H2O2 before and after supplementation. These results demonstrate for the first time that therapy combined in DC markedly reduces the generation of reactive oxygen species by granulocytes and the increase of GSH found in these patients, strengthen its important role in balancing the balance sheet H2O2 (oxidative) versus GSH (antioxidant). With results of H2O2 as low GSH and higher in the group of patients on combination therapy, the supplement offered to these patients could be metabolized and used in order to have an impact on improvement in CDAI and body composition. The group under combined therapy, but not supplementation, showed no improvement in the CDAI or the body mass index. These results are very relevant since patients starting combination therapy had moderate to severe disease and to receive the supplement has met with the CDAI ? 150. At this stage, the supplement had its contribution because there was an imbalance in oxidant versus antioxidant system. Moreover, the short period of 16 weeks of supplementation with protein concentrate of whey enriched with TGF-? was sufficient to promote improvements in CDAI and Score body mass. We conclude that the supplement has great potential to be commercialized and help to improve the clinic from individuals with Crohn's disease. However, to encourage supplementation with the concentrate of whey enriched with TGF-? on a regular basis is essential to improve the sensory quality of the product / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-10-19T12:36:45Z No. of bitstreams: 1 marciavaleriacolli.pdf: 304302 bytes, checksum: de86bd7cd514eef910c8c52ed56c803e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-25T12:18:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marciavaleriacolli.pdf: 304302 bytes, checksum: de86bd7cd514eef910c8c52ed56c803e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-25T12:18:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marciavaleriacolli.pdf: 304302 bytes, checksum: de86bd7cd514eef910c8c52ed56c803e (MD5) Previous issue date: 2007-12-06 / A doença de Crohn (DC) é uma doença inflamatória intestinal idiopática e de expressivo aumento em sua incidência nas últimas décadas. Apresenta manifestações clínicas proteiformes e potencial evolutivo incerto, muitas vezes fatal. Até o momento, não existe qualquer terapia curativa para esta afecção. A azatioprina (AZA) é uma medicação potente e eficaz, que tem sido largamente utilizada no tratamento de pacientes com DC que se tornam dependentes ou refratários aos corticosteróides. Entretanto, esta droga pode apresentar expressiva toxicidade. Para otimizar seus benefícios e minimizar os riscos, é importante que se conheça seu mecanismo de ação, o perfil de efeitos adversos, e como estes podem ser abordados. Objetivos: Avaliar a incidência, abordagem e evolução dos efeitos adversos da AZA no tratamento de pacientes com DC. Material e Métodos: Foram avaliados prospectivamente, de janeiro de 2002 a dezembro de 2006, 106 pacientes (45 homens e 61 mulheres, média de idade de 36,3 anos, variação 12-68 anos), portadores de DC em uso de AZA, atendidos no ambulatório de Doenças Inflamatórias Intestinais do Hospital Universitário da UFJF. Foram registrados por ocasião das visitas ambulatoriais, dados sóciodemográficos relevantes, características clínicas relacionadas à DC, dose e tempo de uso da AZA, e uso de drogas concomitantes direcionadas à DC. Todos os pacientes foram submetidos a rotinas laboratoriais para monitorização da toxicidade durante o tratamento. Assim, foram realizados hemogramas e dosagem de aminotransferases e amilase na inclusão ao estudo. A monitorização subseqüente envolveu hemograma a cada duas semanas durante oito semanas, e depois a cada um ou dois meses durante todo o período da terapia. Dosagem de aminotransferases foi realizada a cada três meses. Além disso, todos os pacientes foram alertados a retornarem prontamente em caso de dor faríngea ou qualquer outro sinal de infecção. Leucopenia foi definida pela contagem de leucócitos abaixo de 4.000 células/mm³ e leucopenia grave quando os mesmos estivessem abaixo de 2.000 células/mm3; trombocitopenia foi considerada quando a contagem de plaquetas foi inferior a 130.000 células/mm3. A AZA foi suspensa ou sua dose reduzida em caso de febre, doenças concomitantes ou toxicidade relacionada à droga. Para fins comparativos, os pacientes foram divididos em grupos com e sem a toxicidade a AZA. Resultados: 56 (52,7%) dos pacientes estudados apresentaram pelo menos um efeito adverso, requerendo redução transitória da dose da droga; 18 (17%) necessitaram suspender definitivamente o uso de AZA, geralmente devido a reações de hipersensibilidade. Náuseas e vômitos, frequentemente leves, ocorreram em 29 (27,4%); a raça negra e aqueles com comorbidades apresentaram mais intolerância gastrointestinal do que os brancos e aqueles sem outras doenças associadas (p=0,04). Leucopenia foi o efeito adverso mais freqüente, ocorrendo em 36 (34%). O tempo de uso de AZA foi maior em pacientes com leucopenia do que nos não leucopênicos (p=0,001), enquanto a dose média de AZA foi menor naqueles com leucopenia comparados aos não leucopênicos (p=0,005). Não houve infecções graves, neoplasias ou óbitos durante o tratamento com AZA. Conclusão: A AZA mostrou ser uma droga relativamente segura no tratamento da DC, desde que seja mantida supervisão clínica e laboratorial periódica durante todo o tratamento. / Crohn’s disease (CD) is an inflammatory bowel disease whose etiology is unknown and that has its incidence increasing significantly during the last decades. Polymorphous clinical manifestations and a doubtful evolution, sometimes fatal, are the more striking features of its natural history. Until nowadays, there is no curative therapy for CD. Azathioprine (AZA) is one of the most efficient and employed drugs in CD patients,especially those who became dependent or non-responders to corticosteroid treatment. However, AZA is a drug which has a potential toxicity and to try to reduce its side effects it is necessary to know its action mechanism as well the list of potential adverse reactions and how to manage them. Aims: To evaluate the incidence, approach and course of AZA side effects in the treatment of CD patients. Methods and Material: From January 2002 to December 2006 106 CD patients were followed prospectively (45 men and 61 women, with a mean age of 36,3 years – range 12-68) in the outpatient Service of Inflammatory Bowel Disease of Universitary Hospital of Federal University of Juiz de Fora, Brazil, and being treated with AZA. Socio-demographic, clinical features of CD patients, AZA doses and time of using, and concomitant other drugs used were registered. All patients were submitted to laboratorial routine for toxicity monitoring during the treatment. Thus, red and white blood cell count and measurement of aminotransferases and amilase levels were analysed at the study beginning; subsequent monitoring included red and white blood cell count at every two weeks for the first two months and lately every four to eight weeks. Aminotransferases levels were determinated every three months. Moreover, all the patients were instructed to search for medical assistance in case of any sign of infections as well as sore throat. Leucopoenia was defined as white blood cells count below 4.000/mm³, and severe as lower 2.000/mm³; trombocytopenia when platelets count were under 130.000/mm³. AZA was stopped or doses reduced when fever, adverse reactions or toxicity AZA-related and associated diseases occurred. In order to comparison, subgroups of patients were studied separately, those with and without AZA-toxicity. Results: 56 (52,7%) patients presented at least one side effect needing transient dose reduction; 18 (17%) had to interrupt definitively the AZA ministration, most of them in consequence of hypersensitivity reactions. Slight nausea and vomits occurred in 29 (27,4%); black race and those with co morbidities have had much more gastrointestinal intolerance than white and those without any other associated disease (p=0,04). Leucopoenia was the most frequent adverse reaction, observed in 36 (34%) and the time of AZA using was higher in patients with leucopoenia than in those nonleucopoenics (p=0,001). However, the mean dose of AZA was lower in patients with leucopoenia than in those non-leucopoenics (p=0,005). No one serious infection, malignant tumors or death occurred during AZA treatment. Conclusions: The AZA use showed to be a reasonable safe drug in CD treatment since that a clinical and laboratorial serious control is performed during all the time of therapy.

para diversos tipos de tratamento, como doenças auto-imunes, inflamatórias e até para pacientes submetidos a transplante de órgãos. Assim também, é capaz de causar efeitos adversos como toxicidade hepática e mais frequentemente a mielossupressão. Tiopurina Smetiltransferase (TPMT), uma enzima que catalisa a S-metilação dessas drogas, exibiu um polimorfismo genético em 10% de Caucasianos, sendo 1/300 indivíduos com completa deficiência. Pacientes intermediários ou completamente deficientes da atividade de TPMT estão em risco por excessiva toxicidade após receberem doses padrões de medicações tiopurínicas. O presente estudo visa a 1) pesquisar a frequência desses polimorfismos (TPMT*2, TPMT*3A, TPMT*3B e TPMT*3C) em populações de doadores de sangue em Hospital terciário Universitário e em pacientes que utilizem a Azatioprina para o tratamento da hepatite autoimune e transplantado renal, 2) padronizar os métodos para a identificação dos polimorfismos e associá-los com os níveis dos metabólitos da AZA. Esses achados podem explicar os efeitos benéficos da Azatioprina e ter importante implicação para o desenho de novas terapias específicas em doenças autoimunes e em transplante de orgãos / Thiopurine drugs such as azathioprine (AZA) are widely used for many types of treatment: autoimmune and inflammatory diseases and for patients who had undergone organ transplantation. AZA is capable of causing adverse effects such as hepatotoxicity and myelosuppression. Thiopurine S-methyltransferase (TPMT), which catalyzes the Smethylation of such drugs, exhibits a genetic polymorphism in 10% of Caucasians, and 1 / 300 individuals with complete deficiency. Patients who are intermediary or completely deficient in TPMT activity are at risk for excessive toxicity after receiving standard doses of thiopurine drugs. This recent study aims to 1) investigate the frequency of these polymorphisms (TPMT*2, TPMT*3A, TPMT * 3B and TPMT*3C) in blood donors from a terciary University Hospital and in patients using azathioprine for the treatment of autoimmune hepatitis and transplanted kidney; 2) standardize the methods for the identification of polymorphisms and associate with levels metabolites of AZA. These findings may explain the beneficial effects of azathioprine and have important implications to design new therapies for autoimmune diseases and organ transplant