Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CLAUDIA CANCIAN.pdf: 3546960 bytes, checksum: 64850f6a21d9697f12768c1f9889281a (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / The excess of adipose tissue associated to pathological states, characterizes obesity and overweight. Recent studies have pointed out that the obesity might originate from hormonal and/or neural changes occurred in critical periods of development. Lactation is considered an important developmental window; nutritional changes in this phase might program the offspring metabolism to determine the installation of obesity in adult life. Within this context, few studies have explored the mother adjustments to the offspring changes. Objective: The objective of this present study was to investigate the mother’s morpho-physiological adaptations promoted by the offspring obesity induced in the lactation period. Methodology: Mothers of two kinds of obesity obtained during lactation were studied. In the hyper-nutrition model of lactation the number of offsprings was manipulated 3 days after birth forming a reduced-litter (NR, 3 offsprings) and normal-litter (NN, 9 offsprings). In the hypothalamic obesity model the offsprings received monosodium glutamate (MSG, 4g/Kg) or saline (CON, control) from the 2nd day after birth for five consecutive days. Thus, 4 groups of mothers were evaluated: Mothers-NR x Mothers-NN;Mothers-MSG x Mothers-CON. All groups had body weight and food intake monitored throughout the lactation period. The litter weight was also evaluated during this period. On the 21st day of lactation, after weaning, the rats were anesthetized and received a dose of oxytocin (5U/I) to stimulate milk ejection. Then the milk was collected and aliquots used for the analysis of composition by the creamatocrit and proteins. Next, the rats were sacrificed and the blood collected for biochemical analysis and the fat deposits were extracted and weighed. Mammal tissue samples, white adipose tissue (WAT), brown adipose tissue (BAT) and pancreas were all submitted to histological procedures, dyed with H&E and analyzed through microscopy. The milk leukocytes content was also evaluated through the histological technique. Data were expressed as mean ± standard error of the mean (sem) and evaluated through the Student t test (p<0,05). Results and Discussion: Mothers-NR presented about 36% reduction in the consumption of food and water. 10% reduction in food intake, without changes in water consumption was observed with the Mothers-MSG. There was no alteration of body weight. However, Mothers-NR and Mothers-MSG presented increase of about 56% and 40%, respectively, in ovary fat content. These changes were followed by retroperitoneal fat adipose hypertrophy, (Mothers-NR 67%, Mothers-MSG 22%). The Mothers-NR presented ovary fat hypertrophy (30%), also presented 28% increase in the number of BAT adipose. Biochemical measurements of plasma revealed that both groups presented increase in glucose (Mothers-NR 33%, Mothers-MSG 35%) triglycerides (Mothers-NR 43%, Mothers-MSG 73%) and insulin (Mothers-NR 46%, Mothers-MSG 69%) when compared to the control groups. However, only the Mothers-NR presented changes followed by increase in the milk calories (32%) and fat content (44%). The Mothers-MSG’s milk presented only increase in the amount of leukocytes (54%). The mammal gland in both groups presented increase in adipose content (Mothers-NR 1215%, Mothers-MSG 41%). Morphological changes were also observed in the endocrine pancreas of both groups. Mothers-MSG’s pancreatic islets presented hypertrophy (69%), while the Mothers-NR’s pancreatic islets presented hypotrophy (24%) in relation to the control groups. Morpho-physiological adjustments observed in this data are probably related to the lower energy demand, promoted by the reduction in the number of offsprings, in the case of Mothers-NR and due to changes of suction provoked in the MSG offsprings by the hypothalamic lesion induced by MSG. Conclusion: Data analysis shows that the offspring manipulation promoted the following mother adaptations: i) increase in body fat content and changes in the lipid profile and mother plasma carbohydrates. ii) changes in the milk composition, with increase in the caloric content. These changes were followed by alteration of the mammal gland morphology. iii) changes in the endocrine pancreas histo-morphology, increasing insulin circulating levels. / O acúmulo excessivo de tecido adiposo associado à estados patológicos, caracteriza a obesidade e sobrepeso. Estudos recentes apontam que a obesidade pode ser oriunda das alterações hormonais e/ou neurais ocorridas em períodos críticos do desenvolvimento. A lactação é considerada uma importante janela do desenvolvimento, alterações nesta fase podem programar o metabolismo do filhote e determinar a instalação de obesidade na vida adulta. Dentro deste contexto, poucos estudos exploram os ajustes maternos frente a de modificações da prole. Objetivo: Deste modo, o objetivo do presente estudo foi investigar as adaptações morfofisiológicas maternas promovidas pela obesidade da prole induzida no período lactacional. Metodologia: Progenitoras de dois modelos de obesidade obtidos durante a lactação foram estudadas. No modelo de hipernutrição lactacional o número de filhotes da prole foi manipulado no 3º dia após o nascimento, formando Ninhada-Reduzida (NR, 3 filhotes) e Ninhada-Normal (NN, 9 filhotes). No modelo de obesidade hipotalâmica, os filhotes receberam no 2º dia após o nascimento glutamato monossódico (MSG, 4g/Kg) ou salina (CON, controles) durante 5 dias consecutivos. Assim, 4 grupos de mães foram avaliadas: Mães-NR versus Mães-NN; Mães-MSG versus Mães-CON. Para todos os grupos foi acompanhado o peso corporal e a ingesta alimentar durante a lactação. O peso das ninhadas também foi avaliado neste período. No 21º de lactação, as ratas foram anestesiadas e receberam uma dose de ocitocina (5U/I) para estimular ejeção do leite. Posteriormente, o leite foi coletado e alíquotas usadas para análises da composição pelo crematócrito e dosagens das proteínas. Em seguida, as ratas foram sacrificadas, o sangue coletado para análises bioquímicas e os depósitos de gordura retirados e pesados. Amostras do tecido mamário, tecido adiposo branco (TAB), tecido adiposo marrom (TAM) e do pâncreas foram submetidas a procedimentos histológicos, coradas com hematoxilina e eosina (H&E) e analisadas sob microscópio de luz. O teor de leucócitos do leite também foi avaliado por técnica histológica. Os dados foram expressos como média ± erro padrão médio (epm) e avaliados pelo teste t de Student (p<0,05). Resultados e Discussão: Mães-NR apresentaram redução de aproximadamente 36% no consumo de ração e água. Redução de 10% na ingesta alimentar, sem alterar o consumo de água também foi observado nas Mães- MSG. Em ambos, o peso corporal não foi afetado. Todavia, Mães-NR e Mães-MSG apresentaram aumentos de aproximadamente 56% e 40%, respectivamente no teor de gordura ovariana. Estas alterações foram acompanhadas de hipertrofia dos adipócitos da gordura retroperitoneal, (Mães-NR 67%, Mães-MSG 22%). As Mães-NR apresentaram hipertrofia (30%) na gordura ovariana e também apresentaram aumento de 28% no número de adipócitos do TAM. Análises bioquímicas do plasma demonstraram que em ambos os grupos ocorreu aumento de glicose (Mães-NR 33%, Mães-MSG 35%), triglicerídeos (Mães-NR 43%, Mães-MSG 73%) e insulina (Mães-NR 46%, Mães-MSG 69%), comparados aos respectivos grupos controles. Todavia, apenas nas Mães-NR estas alterações foram acompanhadas de aumento das calorias do leite (32%) e do teor de gorduras (44%). O leite de Mães-MSG apresentou apenas aumento na quantidade de leucócitos (54%). A glândula mamária de ambos os grupos apresentou aumento no teor de adipócitos (Mães-NR 1215%, Mães-MSG 41%). Alterações morfológicas também foram observadas no pâncreas endócrino de ambos os grupos. Ilhotas pancreáticas de Mães-MSG apresentaram hipertrofia (70%), enquanto ilhotas pancreáticas de Mães-NR apresentaram hipotrofia (24%), em relação aos grupos controles. Os ajustes morfofisiológicos observados em nossos dados provavelmente estão relacionados a menor demanda energética, promovida pela redução do número de filhotes da prole, no caso de Mães-NR e por alterações na sucção provocadas nos filhotes MSG pela lesão hipotalâmica induzida pelo MSG. Conclusão: A análise dos dados demonstra que as manipulações da prole, promoveram as seguintes adaptações maternas: i) Elevação do teor de gordura corporal e alteração do perfil lipídico e de carboidratos do plasma materno. ii) Modificação da composição do leite, aumentando o teor calórico. Estas mudanças são acompanhadas das alterações na morfologia da glândula mamária. iii) alteração da histomorfologia do pâncreas endócrino, elevando os níveis circulantes de insulina.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Americo Moraes.pdf: 5820633 bytes, checksum: 965e01013ad416e0fcd25ab3ad7ec73d (MD5) Previous issue date: 2009-09-25 / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / Currently, studies of aspects of evolutionary biology in neotropical fishes diversity are still lacking, despite the strong environmental impact caused by human action that has had a negative effect in native species, many of which probably still unknown to science. The knowledge of genetic variability within and between populations is of utmost importance for planning of both fish breeding and conservation of natural populations. In the present study we have analyzed, especially through molecular cytogenetics techniques, 29 specimens of Pseudoplatystoma reticulatum (Paraguay river, state of Mato Grosso do Sul), 14 specimens of Pimelodus britskii (Igua?u river, state of Paran?), 6 specimens of Sorubim lima (Paraguay river, state of Mato Grosso do Sul) and 10 specimens of Steindachneridion parahybae (Para?ba do Sul river, state of S?o Paulo). Results indicate 2n = 56 chromosomes for all species, a distinct karyotype formula composed mainly of biarmed chromosomes. Other particular features were found, regarding the location for Ag+NORs and fluorescent in situ hybridization with 5S and 18S probes. Except P. britskii, which showed NORs in the terminal region of the long arm, all species showed Ag+NORs in the terminal position of the short arm. Another peculiar feature of this fish was the co-localization of one of the 5S and 18S rDNA sites, which could be considered an apomorphy to the others Pimelodidae studied. The present work aims to contribute to the collection of data on the cytogenetics studies of Siluriformes, considering that much of the here presented information are the first characterization of the karyotype macro-struture of analysed fishes. / Considerando-se a diversidade ictiofaun?stica neotropical, estudos sobre aspectos de biologia evolutiva s?o ainda pouco expressivos. Em contraste, o forte impacto ambiental causado pela a??o humana tem refletido negativamente sobre as esp?cies nativas, muitas ainda desconhecidas da ci?ncia. O conhecimento da variabilidade gen?tica intra e inter populacional ? de extrema import?ncia para o planejamento tanto da piscicultura quanto para a conserva??o das popula??es naturais. No presente trabalho foram analisados citogeneticamente, sobretudo aplicando t?cnicas de citogen?tica molecular, 29 exemplares de Pseudoplatystoma reticulatum (rio Paraguai, MS), 14 esp?cimes de Pimelodus britskii (rio Igua?u, PR), 6 indiv?duos de Sorubim lima (rio Paraguai, MS), e 10 exemplares de Steindachneridion parahybae (rio Para?ba do Sul, SP). Os dados obtidos revelaram 2n = 56 cromossomos para todas as esp?cies analisadas, f?rmulas cariot?picas distintas, compostas basicamente de cromossomos de dois bra?os e caracter?sticas pr?prias em rela??o ? localiza??o das RONs atrav?s da impregna??o pelo ?on Ag+ e pela hibrida??o fluorescente in situ com sondas de DNAr 5S e 18S. Com exce??o de P. britskii, que apresentou RONs na regi?o terminal do bra?o longo, todas as outras esp?cies apresentaram marca??es das Ag+RONs em posi??o terminal no bra?o curto. Outra caracter?stica peculiar de P. britskii foi a localiza??o sint?nica de um dos s?tios de DNAr 5S e o 18S em cromossomos subteloc?ntricos, atributo que pode ser considerado uma apomorfia em rela??o a outros pimelod?deos estudados. O presente estudo visa contribuir com o acervo de dados citogen?ticos a respeito dos Siluriformes em estudo, considerandose que muitas das informa??es correntes tratam-se das primeiras caracteriza??es da macroestrutura cariot?pica das esp?cies de peixes analisadas.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maelin da Silva.pdf: 4148919 bytes, checksum: c40d33739dbca2809bfaa5126daa2f6d (MD5) Previous issue date: 2010-03-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The order Gymnotiformes ranges the electrical fish. It’s distributed by South and Central America. Family Gymnotidae show two genus; Gymnotus and Eletrophurus, the last one was recently included in this family. Genus Gymnotus is the most widespread and show 33 species and present great number of cytogenetics studies. Our objectives in the present study were analyse the meiotic behaviour of multiple sexual chromosomes system X1X1X2X2/X1X2Y of G. pantanal, isolate sequences of repetitive DNA from three species of Gymnotus; G. sylvius, G. paraguensis and G. pantanal, inhabiting in simpatry at Piquiri River - PR – BR, verify the association of these sequences with sexual chromosomes and mapping the rDNA 5S gene at G. paraguensis and G. pantanal. Meiotic analysis of G. pantanal presented one trivalent in pachytene of profase I formed by X1, X2 and Y chromosomes, totally paired characterizing a recent sexual chromosomes system. In the metaphase II was visualized cells 18+Y and 18+X1X2 chromosomes with normal disjunction of sexual chromosomes and balanced gametes. The mapping of repetitive DNA sequences, isolated by Cot1, presented location in centromeric and Nucleor Organization Regions (NORs) of all analyzed species, included the sexual chromosomes of G. pantanal, standard similar of heterocromatin obtained by C banding. Hybridization with rDNA 5S probes presented a standard unique for all species analyzed. Our data suggest a recent origin for sex chromosomes of G. pantanal and a differentiate evolutionary dynamic for the distribution of rDNA 5S in the karyotype of species analyzed, suggesting that character can be broadly utilized among the Gyminotidae as cytotaxonomic marker. / A ordem Gymnotiformes compreende os peixes elétricos, que estão amplamente distribuídos pelas Américas Central e do Sul. A família Gymnotidae possui apenas dois gêneros Gymnotus e Eletrophurus, sendo que este último foi recentemente incluído à família. O gênero Gymnotus é o mais especioso da ordem com 33 espécies, e é também o que comporta maior número de estudos citogenéticos. O presente trabalho teve por objetivos analisar o comportamento meiótico do sistema de cromossomos sexuais múltiplo X1X1X2X2/X1X2Y em G. pantanal. Isolar sequências de DNA repetitivo das três espécies que habitam em simpatria o rio Piquiri – Paraná – Brasil: G. sylvius, G. paraguensis e G. pantanal, e neste último a possível associação dessas sequências aos cromossomos sexuais. E mapear o DNAr 5S em G. paraguensis e G. pantanal. A Análise meiótica revelou a formação de um trivalente no estágio de paquíteno da Prófase I em G. pantanal formado pelos cromossomos X1, X2 e Y, pareados complementarmente caracterizando um sistema de determinação sexual recente. A metáfase II apresentou células com 18+Y e 18+X1X2 cromossomos, caracterizando uma disjunção típica dos cromossomos sexuais, dando origem a gametas balanceados. O mapeamento de sequências de DNA repetitivos isolados por C0t – 1 apresentou localização em região centromérica e na região das regiões organizadoras de nucléolos de todas as espécies analisadas, inclusive nos cromossomos sexuais de G. pantanal, padrão coincidente com blocos heterocromáticos. A hibridização com sondas de DNAr 5S revelou padrão de marcação próprio em todas as espécies analisadas. Nossos dados sugerem uma origem recente para os cromossomos sexuais de G. pantanal e uma dinâmica evolutiva diferenciada para distribuição do DNAr 5S no cariótipo das espécies analisadas. Sugerindo que este caráter possa ser mais amplamente utilizado entre os Gymnotidae como marcador citotaxonômico.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3800.pdf: 3103184 bytes, checksum: b20924abb8bacc68de4e6fa59d95ebdd (MD5) Previous issue date: 2011-06-28 / Universidade Federal de Sao Carlos / This work presents the study of the effects of an RGD disintegrin from Rhinocerophis alternatus (ancient Bothrops alternatus) in key steps of the metastatic cascade. Disintegrins are cysteine-rich peptides, which have several biological activities related to cell-cell interaction and cell adhesion. The correct pairing of disulfide bonds exposes the adhesive motif which confers binding specificity of disintegrins. These molecules selectively blocks the adhesive function of integrins, which directly participate in various physiological and pathological processes. In the first part of this work, we use the DisBa-01, a disintegrin from B.alternatus in fusion with 6 histidines in pET28a expression vector. The DisBa-01 in the flow system inhibited adhesion of B16F10 melanoma cells and platelets to type I collagen and activated the adhesion of B16F10 melanoma cells to type III collagen. In transmigration and adhesion of breast cancer cells MDA-MB-231, the DisBa-01 had the tendency to reduce these stages of metastatic cascade. The disintegrins have been instrumental in the development of molecules with potential therapeutic application and the effects produced by DisBa-01 in this work as well as others from our laboratory, led us in the second part of this work, the production of the disintegrin B.alternatus without the fusion peptide (called ATN) which conferred increased solubility of the disintegrin. ATN was isolated by two molecular exclusions chromatography and ion exchange chromatography and biological characterization was directed to the anti-metastatic effect of this molecule. In this sense, the ATN was unable to promote the adhesion of human erythroleukemia K562 cells, but inhibited the adhesion of tumor cells K562, B16F10 and MDA-MB-231 to fibronectin had no effect in fibroblasts. ATN is not able to detach the fibroblasts adhered to fibronectin but promotes the detachment of K562 and B16F10 cells previously adhered to fibronectin. However, it does not induce fragmentation of cellular DNA, showing no pro-apoptotic effect. In cell proliferation, the ATN has negative effect with 48 hours of incubation with B16F10 tumor cells, but fibroblasts and MDA-MB-231 this effect was not observed. By flow cytometry we observed the interaction of ATN with &#945;v&#946;3 integrin. The MDA-MB-231 Tx migration was inhibited by ATN and changed the actin cytoskeleton of these cells. However, an increased activity of MMP-9 was observed in MDA-MB-231 treated with ATN and the invasion of MDA-MB-231 was induced by the RGD disintegrin. These results encourage further studies with this disintegrin in seeking the best concentração of the disintegrin, the identification of cytotoxic activity as well as the best method of distribution of this molecule in vivo. / Este trabalho apresenta o estudo dos efeitos de uma desintegrina RGD de Rhinocerophis alternatus (antiga Bothrops alternatus) nas principais etapas da cascata metastática. Desintegrinas são peptídeos ricos em cisteína, os quais apresentam diversas atividades biológicas relacionadas à interação célula-célula e adesão celular. O pareamento correto das pontes de dissulfeto expõe o motivo adesivo, o qual confere a especificidade de ligação das desintegrinas. Estas moléculas seletivamente bloqueiam a função adesiva das integrinas, as quais participam diretamente de diversos processos fisiológicos e patológicos. Na primeira parte deste trabalho utilizamos a DisBa-01, uma desintegrina de B.alternatus fusionada com 6 histidinas em sequência referente ao peptídeo de fusão presente no vetor pET28a. A DisBa-01 em sistema de adesão sob fluxo inibiu a adesão de células de melanoma B16F10 e de plaquetas ao colágeno tipo I e ativou a adesão das células de melanoma B16F10 ao colágeno tipo III. Na transmigração e na adesão das células de câncer de mama MDA-MB-231 pelas células endoteliais, a DisBa-01 apresentou a tendência à redução destas etapas da cascata metastática. As desintegrinas têm sido instrumentos no desenvolvimento de moléculas com potencial aplicação terapêutica e juntamente com esses efeitos apresentados pela DisBa-01 neste trabalho assim como em outros de nosso laboratório, nos conduziu para a segunda parte deste trabalho, a produção da desintegrina de B.alternatus sem o peptídeo de fusão (ATN) que conferiu aumento de solubilidade da desintegrina. A ATN foi isolada através de duas cromatografias de exclusão molecular e uma cromatografia de troca de iônica e a caracterização biológica foi direcionada ao papel anti-metastático desta molécula. Neste sentido, a ATN não foi capaz de promover a adesão das células de eritroleucemia humana (K562), mas inibiu a adesão das células tumorais K562, B16F10 e MDA-MB-231 à fibronectina, mas não apresentou efeito sobre os fibroblastos. A ATN não desadere os fibroblastos aderidos à fibronectina mas, promove o descolamento das células K562 e B16F10 previamente aderidas à fibronectina. No entanto, não induz fragmentação do DNA celular, não apresentando efeito pró-apoptótico. Na proliferação celular, a ATN apresenta efeito com 48 horas de incubação com células tumorais B16F10 mas, em fibroblasto e células MDA-MB-231 esse efeito não foi observado. Por citometria de fluxo verificamos a interação da ATN com a integrina &#945;v&#946;3. A migração das células MDA-MB-231 Texas foi inibida pela ATN assim como alterou o citoesqueleto de actina destas células. No entanto, um aumento da atividade da MMP-9 foi observado nas células MDA-MB-231 tratadas com ATN assim como a invasão das células MDA-MB-231 foi induzida por esta desintegrina-RGD. Estes resultados incentivam a continuação dos estudos com esse peptídeo no sentido de buscar a melhor concentração desta desintegrina, a identificação de atividade citotóxica assim como melhor método de distribuição desta molécula in vivo.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao GNC primeira parte.pdf: 75754 bytes, checksum: 7caa36c31bb043ddbf91465bd48e4bbb (MD5) Previous issue date: 2008-07-31 / Breast cancer is the second most common tumor in the world and the first among women. In the past two decades, several breast cancer studies focused on the expression and on the possible routes of cellular signaling for the epithelial cell adhesion molecule (EpCAM). This molecule was found to be overexpressed in various malignant tissues of epithelial origin, including breast cancer. The importance of EpCAM protein in tumor cells is still controversial. First, because it is believed that the cell adhesion role of EpCAM reduces the ability of metastasis. On the other hand, replacing the strong cell adhesion performed by cadherins instead of weak homophilic adhesion of EpCAM may be associated with the promotion of invasion and tumor metastasis. The aim of our study was to analyze the implications of EpCAM in breast ductal carcinoma infiltration. By using immunohistochemistry methods, we noticed the absence of EpCAM expression in 10 case (10,2%), low EpCAM levels expression in 45 cases (45,9%) and overexpression in 43 cases (43,9%). Unlike other published studies, the overexpression of the EpCAM protein did not correlate with the five-year overall survival of breast cancer patients, even those with axillary lymph node involvement. Similarly, there was no correlation between EpCAM s protein expression and classical prognostic factors, including the size of the tumor, axillary lymph node involvement, hormone receptors, c-erbB-2 overexpression and p53 immunodetection. The presence of distant metastasis , reported in 26 cases (26,5%), did not correlate significantly with the overexpression of EpCAM / O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais freqüente no mundo e o primeiro entre as mulheres. Há cerca de duas décadas, diversos estudos sobre câncer de mama enfocaram a expressão e as possíveis rotas de sinalização celular da molécula de adesão celular epitelial (EpCAM). Esta molécula foi encontrada hiperexpressa em vários tecidos neoplásicos de origem epitelial, incluindo o câncer de mama. A importância da proteína EpCAM no suporte celular de tumores é controversa. Por um lado, acredita-se que a função de adesão celular de EpCAM reduza a capacidade de metastatização, mas por outro lado, a substituição da forte adesão celular de caderinas pela fraca adesão homofílica de EpCAM estaria associada à promoção de invasão tumoral e metástase. Nosso estudo consiste na análise das implicações clínicopatológicas da proteína EpCAM no carcinoma ductal infiltrante de mama. Utilizando técnicas de imuno-histoquímica, observamos a ausência da expressão de EpCAM em 10 casos (10,2%), baixa expressão em 45 casos (45,9%) e superexpressão em 43 casos (43,9%). Diferentemente de outros estudos, a superexpressão da proteína EpCAM não se correlacionou com a sobrevida global das pacientes em cinco anos, nem mesmo naquelas com comprometimento de linfonodos axilares. Da mesma forma, não houve correlação da expressão da proteína EpCAM com nenhum dos fatores prognósticos analisados, entre eles tamanho do tumor, linfonodos axilares, receptores hormonais, cerbB-2 e p53. A presença de metástase à distância, relatada em 26 casos (26,5%) não correlacionou-se significativamente com a superexpressão de EpCAM

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-11-10T18:07:11Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Douglas Endrigo Perez Pereia - 2014.pdf: 1726049 bytes, checksum: 6458dcad45ca242b032db7ff26c4f792 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-11-10T20:00:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Douglas Endrigo Perez Pereia - 2014.pdf: 1726049 bytes, checksum: 6458dcad45ca242b032db7ff26c4f792 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-10T20:00:00Z (GMT). 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Initially, the fungi were analyzed for cellulase production capacity among the fungal cellulase-producing fungus capable of producing the highest levels of cellulase was selected for the experiments of xylanase and cellulase production by submerged fermentation and biochemical analysis of the enzyme secreted. Among the isolated fungi, fungus called IFBMD01 was that higher activity of cellulase in the supernatant when cultivated with wheat bran as carbon source. This was identified as Aspergillus cf niger. The enzymes studied with their respective results were: FPase with better production time of 7 days, showing activity of 0.10 U / mL, optimum pH 5.5, optimum temperature of 60 ° C; CMCase with better time production 6 days, showing activity of 8.19 U / mL, pH optimum of 5, optimum temperature of 70 º C; Avicelase with better production time of 9 days, showing activity of 0.01 U / mL, pH optimum of 5.5 and optimum temperature of 60 ° C; xylanase, with better production time 3 days, showing activity of 35.5 U / mL, and the optimum pH of 5 and the optimum temperature of 50 ° C, the β-Glycosidase, with higher production on the sixth day showing activity of 0.98 U / mL, with the optimum pH 5 and optimum temperature of 60 ° C. The activity of β-glucosidase showing in the culture supernatant was influenced by the ions Mn2 +, NH4, K +, Mg2 +, Ca2 +, Ba2 +, Al3 +, Na +, and Co2+, as well as EDTA, glucose, xylose and cellobiose. In the culture supernatant of the fungus A. niger IFBMD01 grown on FT for 3 and 6 days protein bands were visualized with activity against xylan and CMC molecular weight be 30 to be 66 kDa. / A biomassa lignocelulósica é constituída pela celulose, hemicelulose e lignina, presentes na parede das células vegetais. A xilana é o principal componente da fração de hemicelulose da lignocelulose. A conversão da lignocelulose à açúcares fermentáveis é realizada por um complexo de celulases e xilanases: enzimas que hidrolisam as frações de celulose e xilana. O objetivo deste trabalho foi analisar a produção de celulases e xilanases por fungos isolados a partir de solo e material em decomposição do Bioma Cerrado. Inicialmente, os fungos foram analisados quanto à capacidade de produção de celulases por atividade em placa, neste experimento, os fungos produtores de maiores níveis de celulases foram selecionados para os experimentos de produção de celulases e xilanases por fermentação submersa utilizando meio suplementado com resíduos lignocelulósicos como fonte de carbono. Dentre os fungos analisados, o isolado IFBMD01 apresentou maior atividade de celulases e xilanases no sobrenadante de cultura do fungo cultivado em meio com farelo de trigo, sendo que o pico de produção FPAses, CMCases, Avicelases e xilanases foram obtidos após 7, 6, 9 e 3 dias de cultivo respectivamente. A caracterização bioquímica das celulases e xilanases produzidas pelo isolado IFBMD01 demonstrou que: as enzimas com atividade de FPase apresentaram atividade de 0,10 U/mL, pH e temperatura ótimos de 5,5e 60ºC; as CMCases apresentaram atividade de 8,19 U/mL, pH ótimo de 5 e temperatura ótima de 70ºC; as Avicelases apresentaram atividade de 0,01 U/mL, pH ótimo de 5,5 e temperatura ótima de 60ºC; as xilanase apresentaram atividade de 35,5 U/mL, sendo o pH ótimo de 5 e a temperatura ótima de 50ºC e as β-glicosidases apresentaram atividade de 0,98 U/mL, com o pH ótimo de 5 e temperatura ótima de 60ºC. A atividade de β-glicosidase presente no sobrenadante de cultura foi influenciada pelos íons Mn2+, NH4, K+, Mg2+, Ca2+, Ba2+, Al3+, Na+ e Co2+, assim como por EDTA, glicose, xilose e celobiose. No sobrenadante de cultura do isolado IFBMD01 cultivado em FT por 3 e 6 dias foram visualizadas bandas de proteínas com atividade contra xilana e CMC, com massa molecular aproximada de 30 a 66 kDa. A identificação morfológica e molecular do isolado IFBMD01 demonstrou que é um isolado de Aspergillus cf niger.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kamila Caroline Camargo.pdf: 3696475 bytes, checksum: 886b21796d7054b1ce4963cb6ea656e9 (MD5) Previous issue date: 2013-03-26 / Membrane type I MMP (MT1-MMP) is involved in cellular adhesion, proliferation, migration and cell death during organogenesis and adult phase of vertebrates. However, its role in the development of the small intestinal has not been established. We formulated the hypothesis that this metalloproteinase would play a relevant role in the development of the intestinal mucosa. To assess this hypothesis was detected the labeling of MT1-MMP by immunohistochemistry in the intestinal mucosa along the pre-and postnatal development of rats and chickens so that from a comparative analysis, it were possible infer about the role of this metalloproteinase.In thepre natal phase of rats, the labeling of MT1-MMP correlates with events that lead to morphogenesis of villi and establishment of the tecidual homeostasis. In the pre natal phase of chickens, the labeling of MT1-MMP correlates with events that lead to growth of the intestine. In the postnatal phase of rats and chickens, the labeling of MT1-MMP was maintained in the intestinal mucosa, which led us to suggest that this metalloproteinase have a relevant role in the tecidual homeostasis throughout adulthood.We suggest that the role of that MT1-MMPin the remodeling and growth of the intestinal mucosa of rats and chickens is related with adhesion, proliferation, migration and death of epithelial cells and migration of mesenchymalcells. This is the first work that evidence the MT1-MMP in the small intestine of vertebrates during development, making it possible that further studies willclarify its role in the formation of this important organ. / A metaloproteinase de membrana 1 (MT1-MMP) é envolvida em processos de adesão proliferação, migração celular e morte celular durante a organogênese e na fase adulta de vertebrados. Entretanto, o seu papel no desenvolvimento do intestino delgado de vertebrados ainda não foi estabelecido. Nós formulamos a hipótese de que essa metaloproteinase de membrana teria um papel relevante no processo de desenvolvimento da mucosa intestinal. Para avaliar essa hipótese, detectou-se a marcação da MT1-MMP por imunohistoquímica na mucosa intestinal ao longo do desenvolvimento pré e pós-natal de ratos e galinhas para que, a partir de uma análise comparativa, fosse possível inferir a respeito do papel dessa metaloproteinase. No período pré-natal de ratos, a marcação da MT1-MMP correlaciona com eventos que levam à morfogênese das vilosidades e estabelecimento da homeostase tecidual. No período pré-natal de galinhas, a marcação da MT1-MMP correlaciona com eventos que levam ao crescimento do intestino. No período pós-natal de ratos e galinhas, a marcação da MT1-MMP foi mantida no epitélio intestinal, o que nos levou a sugerir que essa metaloproteinase tem um papel importante na homeostase tecidual durante toda a vida adulta.Nós sugerimos que o papel da MT1-MMPna remodelação e crescimento da mucosa intestinal de ratos e galinhas está relacionado com adesão, proliferação, migração e morte de células epiteliais e migração de células mesenquimais. Esse é o primeiro trabalho que evidencia a MT1-MMP no intestino delgado de vertebrados durante o desenvolvimento, possibilitando estudos subsequentes que venham a esclarecer o papel dessa metaloproteinase na formação desse importante órgão.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3396.pdf: 1502102 bytes, checksum: fd6d26f7010be2711e731c2e16e98353 (MD5) Previous issue date: 2010-11-26 / Financiadora de Estudos e Projetos / The São Francisco river comprises one of the largest and most important river basins of Brazil and one of its main characteristics is the variety of fish species. The genus Salminus (Characiformes: Characidae) constitutes a group of migratory fish with great economic importance in fishing and gastronomy. Within this genus, Salminus hilarii (tabarana), due to its high degree of selectivity for the environment and to occupy the top of the food chain, of great importance to the ecosystem and a good indicator of environmental impacts. Many studies on conservation and population genetics have been conducted using molecular markers such as microsatellites, which can provide data on the genetic processes that are acting in a given population. These markers have relatively conserved flanking sequences, which allows the use of primers that were originally designed for other phylogenetically related species. In this study, nine polymorphic microsatellite loci isolated from Salminus franciscanus were used to assess the genetic variation of S. hilarii collected in three localities in the upper São Francisco river basin, aiming to evaluate the level of genetic variation and identify evidence of population structure, providing support for conservation of this group of fish and contributing effectively to maintain the biodiversity of this ecosystem. The cross amplification results were efficient and were able to identify a relatively high level of genetic variation. Moreover, it was possible to observe the absence of genetic structure between populations, suggesting the occurrence of gene flow between them enough to maintenance of the genetic homogeneity of this populations. These results are important tools, since they can provide information for understanding the behavior and biology of these fish to fisheries management and conservation programs. / O Rio São Francisco compõe uma das maiores e mais importantes bacias hidrográficas do território brasileiro e uma de suas principais características é a variedade da ictiofauna. O gênero Salminus (Characiformes: Characidae), constitui um grupo de peixes migradores com grande importância econômica, na pesca esportiva e na gastronomia. Dentro desse gênero, destaca-se Salminus hilarii (tabarana), devido ao seu alto grau de seletividade pelo ambiente e por ocupar o topo da cadeia alimentar. Isso confere à espécie uma grande importância para o ecossistema e a coloca na posição de uma boa indicadora de impactos ambientais. Muitos estudos sobre genética da conservação e de populações têm sido realizados utilizando marcadores moleculares, tais como os microssatélites, capazes de fornecer dados sobre os processos genéticos que estão atuando em uma determinada população. Esses marcadores possuem sequências flanqueadoras relativamente conservadas, o que permite a utilização de primers que foram desenhados originalmente para outra espécie em espécies filogeneticamente próximas. Assim, utilizando nove locos polimórficos de microssatélites isolados de Salminus franciscanus, o objetivo do presente estudo foi analisar a variação genética de S. hilarii coletados em três localidades na bacia do alto São Francisco e identificar evidências de estruturação populacional, produzindo conhecimentos genéticos aos estudos de conservação deste grupo de peixes e contribuindo de maneira efetiva para a manutenção da biodiversidade desse ecossistema. Os resultados obtidos evidenciaram que a amplificação heteróloga foi eficiente e permitiu identificar uma variação genética relativamente alta na espécie em estudo. Além disso, foi possível observar a ausência de estrutura genética entre as populações, indicando a ocorrência de fluxo gênico entre as populações suficiente para manter a homogeneidade genética entre elas. Esses resultados constituem ferramentas importantes, uma vez que contribuem para o entendimento do comportamento e biologia desses peixes, e para programas de manejo de pesca e conservação da tabarana.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-01-15T17:06:54Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosane de Paula Castro - 2012.pdf: 7116126 bytes, checksum: d96286a63399d5f5187348a56b34a414 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-18T09:12:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosane de Paula Castro - 2012.pdf: 7116126 bytes, checksum: d96286a63399d5f5187348a56b34a414 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-18T09:12:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosane de Paula Castro - 2012.pdf: 7116126 bytes, checksum: d96286a63399d5f5187348a56b34a414 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In this work will be done initially, a review of the fundamentals of crystallography, besides the description of Direct Methods, commonly used in structural determination of small molecules, and the process of refinement of the obtained structure. The techniques for crystal growth will be presented and also a discussion about the process of data collection in the CAD4 diffractometer. Next, the process of obtaining single crystals and the crystallographic analysis of five novel compounds, which were synthesized by the Laborat´orio de Avaliac¸ ˜ao e S´ıntese de Substˆancias Bioativas (LASSBio) of Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), are presented. These compounds are analogues of drugs, derivatives of N-phenylpiperazine and N-acylhydrazones, fragments that have important biological activities. The crystallographic structures of the following derivatives of N-phenylpiperazine were elucidated : LASSBio-1597, very active as anti-inflammatory, and an inclusion complex of the antipsychotic prototype, LASSBio-579, a dopamine receptor agonist, in β- cyclodextrin. The other compounds elucidated by X-ray crystallography are the N-acylhydrazones derivatives LASSBio-1606 analogue of Piroxicam, and compounds LASSBio-1586 polymorph I and LASSBio-1586 polymorph II , combretastatin-A4 analogue having potent anti-cancer activity, whose crystallographic analysis aimed to verify the existence of polymorphism suggested by DSC analysis (Differential scanning calorimetry). / Neste trabalho será feita, inicialmente, uma revisão dos fundamentos de cristalografia, além da descrição dos Métodos Diretos, correntemente utilizados na determinação estrutural de pequenas moléculas, e do processo de refinamento da estrutura obtida. Serão apresentadas técnicas de crescimento de cristais e, também, uma discussão sobre o processo de coleta de dados no Difratômetro CAD4. Posteriormente, serão apresentados o processo de obtenção dos monocristais e as análises cristalográficas de cinco compostos inéditos, que foram sintetizados pelo Laboratório de Avaliação e Síıntese de Substâncias Bioativas (LASSBio) da Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). Estes compostos são análogos de fármacos, derivados de N-fenilpiperazina e de N-acilidrazona, fragmentos que apresentam importantes atividades biológicas. Foram elucidadas as estruturas cristalográficas dos seguintes derivados de N-fenilpiperazina: LASSBio-1597, bastante ativo como antiinflamatório, e o complexo de inclusão do protótipo antipsicótico, LASSBio-579, um agonista do receptor de dopamina, em β-ciclodextrina. Os outros compostos elucidados por cristalografia de raios X foram os derivados de N-acilidrazona LASSBio-1606, análogo do medicamento Piroxicam, e os compostos LASSBio-1586 polimorfo I e LASSBio-1586 polimorfo II, análogos da Combretastatina - A4 com potente atividade citotóxica tendo aplicações no tratamento de câncer, cuja análise cristalográfica teve como objetivo verificar a existência do polimorfismo sugerido pela análise de DSC (Differential scanning calorimetry).

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A utilizaÃÃo de microrganismos como sistemas heterÃlogos de expressÃo de proteÃnas tem se mostrado uma estratÃgia alternativa e/ou complementar aos passos tradicionais utilizados no processo de purificaÃÃo de proteÃnas. Diante deste contexto, quitinases (EC 3.2.1.14), enzimas hidrolÃticas capazes de degradar quitina, tÃm sido expressas em diferentes sistemas heterÃlogos, incluindo bactÃrias e leveduras. Quitina à um polÃmero linear composto de resÃduos de N-acetil-&#946;-D-glucosamina (GlcNAc), sendo um importante constituinte estrutural da carapaÃa de crustÃceos e membrana peritrÃfica de insetos e, ainda, da parede celular de fungos. Este trabalho teve por objetivo expressar uma quitinase, codificada pela ORF cv3316, de Chromobacterium violaceum ATCC 12472 na levedura metilotrÃfica Pichia pastoris, estirpes GS115 e KM71H, alÃm de purificar e caracterizar a proteÃna recombinante (rCHI3316). A estirpe GS115, portando a construÃÃo (pPICZ&#945;A-CV3316), foi selecionada para os experimentos posteriores, pois apresentou um maior nÃvel de expressÃo quando comparada à cepa KM71H. Cromatografia de afinidade em coluna de nÃquel imobilizado foi utilizada para purificar a quitinase recombinante (rCHI3316), que foi eluÃda como um Ãnico pico com imidazol 0,04 M. A proteÃna purificada se mostrou homogÃnea quando submetida à eletroforese em gel de poliacrilamida 15% em presenÃa de SDS e &#61538;-mercaptoetanol (SDS-PAGE). Nessas condiÃÃes, uma Ãnica banda com massa molecular aparente de aproximadamente 87 kDa foi observada. A quitinase rCHI3316 de C. violaceum foi expressa de forma solÃvel utilizando o sistema de expressÃo P. pastoris e, alÃm disso, sua purificaÃÃo foi realizada de forma satisfatÃria. O conteÃdo de estrutura secundÃria foi estimado por espectroscopia de dicroÃsmo circular (CD), com a proteÃna submetida a diferentes temperaturas (10-90 ÂC). Na temperatura de 24 ÂC, o espectro de CD revelou a predominÃncia do conteÃdo de hÃlice alfa (38%), folha beta (26 %) e estrutura randÃmica (37%). Entre as temperaturas de 10-50 ÂC, rCHI3316 exibiu um espectro caracterÃstico de folha beta. A partir de 60 ÂC atà 90 ÂC, rCHI3316 adquiriu uma conformaÃÃo caracterÃstica de hÃlice alfa. A temperatura mÃdia para essa transiÃÃo conformacional foi calculada como sendo 59,6 &#61617; 1,21 ÂC. Experimentos de espectroscopia de fluorescÃncia, com excitaÃÃo a 280 e 290 nm, produziram espectros de emissÃo com comprimentos de onda mÃximos iguais a 339 e 342 nm, respectivamente. Esses valores sÃo caracterÃsticos de resÃduos de triptofano parcialmente expostos ao solvente. Atividade quitinolÃtica contra vÃrios substratos e dependÃncia de pH da atividade enzimÃtica da proteÃna pura foram avaliados. A rCHI3316 exibiu atividade hidrolÃtica sobre os substratos quitina coloidal (1.189,40 U/mgP), 4-nitrofenil N-Nâ-diacetil-&#946;-D-quitobiosÃdeo (30.411,0 U/mgP) e 4-nitrofenil N-Nâ-Nââ-triacetilquitotriose (13.150,0 U/mgP); entretanto, nenhuma atividade enzimÃtica da rCHI3316 foi detectada frente a 4-nitofenil N-acetil-&#946;-D-glucosaminÃdeo. A enzima exibiu atividade quitinolÃtica Ãtima (100%) em pH 5,0; quando quitina coloidal foi utilizada como substrato. Em adiÃÃo, a atividade antifÃngica contra fungos fitopatogÃnicos, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani e Penicillium herquei foi investigada. rCHI3316 nÃo inibiu a germinaÃÃo e o crescimento micelial dos esporos dos fungos testados, na concentraÃÃo de 0,63 mgP.ml-1. Estudos subseqÃentes deverÃo ser realizados na intenÃÃo de descobrir potenciais aplicaÃÃes desta proteÃna como uma ferramenta biolÃgica no controle de outros fungos fitopatogÃnicos bem como insetos considerados pragas. / Microorganisms are a valuable tool for the expression of proteins from a variety of sources, including plants, animals and other microorganisms. Thus, chitinases, a group of glycosil hydrolases capable to hydrolize chitin, have already been expressed and purified from different systems including bacteria and yeast. Chitin, a linear polymer of N-acetyl-&#946;-D-glucosamine (GlcNAc), is an important structural component found in the crustacean shells, in the peritrophic membrane of insect guts as well as in the fungi cell walls. The aim of this work was to express a chitinase (encoded by the ORF CV3316) from Chromobacterium violaceum ATCC 12472, using the methylotrophic yeast Pichia pastoris strains GS115 and KM71H. Furthermore, purification and partial characterization of the recombinant protein were also achieved. The GS115 strain carrying the expression cassette pPICZ&#945;A-CV3316 was selected due to its higher expression level as compared to KM71H strain. Immobilized metal ion affinity chromatography was employed to purify the recombinant chitinase which was eluted as a single peak at 0.04 M imidazol. The homogeneity of the purified protein was confirmed as judged by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In these conditions, the recombinant chitinase migrated as a single protein band with an apparent molecular mass of about 87 kDa. Thus, a chitinase from C. violaceum ATCC 12472 was successfully expressed in P. pastoris and the soluble recombinant protein purified. The content of secondary structure was investigated by circular dichroism (CD) spectroscopy. At 24 oC the CD spectrum revealed secondary structure contents of 37% (alpha helix), 26% (beta sheet) and 38% (random coil). The CD spectra obtained in the temperature range 10-50 oC were characteristic of beta sheet. In contrast, the CD spectra generated in the range 60-90 oC were characteristic of alpha helix. The midpoint temperature of this conformational transition was 59.6 &#61617;1.2 oC as calculated from the CD experimental data. Fluorescence spectroscopy was carried out with excitation at 280 and 290 nm, producing emission spectra in which the wavelengths of maximum emission were 339 and 342 nm, respectively. This behavior is characteristic of tryptophan residues in limited contact with water. Chitinolytic activity against several substrates and the pH dependency of the enzymatic activity of the pure protein were all accessed. The purified enzyme showed hydrolytic activity on the following substrates: colloidal chitin (1,189.4 U.mgP-1), 4-nitrophenyl N-Nâ-diacetyl-&#61538;-D-chitobioside (30,411.0 U.mgP-1) and 4-nitrophenyl &#946;-D-N-Nâ-Nâ-triacetylchitotriose (13,150.0 U.mgP-1); and, respectively. In contrast, no activity was detected using 4-nitrophenyl N-acetyl-&#946;-D-glucosaminide as substrate. The enzyme presented an optimal chitinolytic activity at pH 5.0 using colloidal chitin as a substrate. Additionally, the antifungal activity against the phytopathogenic fungi, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani and Penicillium herquei was investigated. The recombinant chitinase did not inhibit the spore germination and the mycelium growth of the tested fungi, at the 0.63 mgP.ml-1 concentration. Further studies should be carried out in order to discover potential applications of this protein as a biotechnological tool in the control of other phytopathogenic fungi as well as economically important pests.