Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-18Bitstream added on 2014-08-13T18:01:08Z : No. of bitstreams: 1 000738215.pdf: 2151140 bytes, checksum: 2b05dbf911b2b43a03712abe9d9a4c86 (MD5) / A citricultura é uma das principais atividades do agronegócio brasileiro, porém o aumento de doenças na última década tem causado grandes prejuízos a toda a cadeia produtiva. A doença cancro cítrico, causada pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é um grave problema para o setor, não havendo até o momento método eficaz para o seu controle. Nesse estudo, utilizando RNASeq, foram analisados os perfis transcricionais de dois genótipos hospedeiros contrastantes à doença: laranja doce Pêra-Rio (PR) moderadamente resistente, e Lima Ácida Galego (LG), altamente suscetível, 24, 48 e 72 horas após a infecção com Xac, no intuito de identificar genes das plantas envolvidos na interação patógeno-hospedeiro. Foram encontrados 6.330, 3.478 e 6.795 genes diferencialmente expressos (GDEs) na espécie moderadamente resistente PR, 24, 48 e 72 horas após a inoculação com Xac, respectivamente, quando comparados com seus controles. Na espécie altamente suscetível Limão Galego foram identificados 1.491, 5.621 e 2.145 GDEs após 24, 48 e 72 horas da inoculação com Xac, respectivamente. Através do programa Blast2GO, genes e vias metabólicas de fotossíntese, sinalização celular, síntese hormonais, fatores de transcrição, entre outros, foram encontrados. Esse estudo revelou diferenças associadas à resistência e desenvolvimento a nível molecular em PR e LG em resposta ao cancro cítrico, demonstrando que na espécie moderadamente resistente há uma maior ativação dos mecanismos de defesa. Tais estudos podem ser utilizados para o desenvolvimento de plantas de citros com adequado nível de resistência ao cancro cítrico / The citrus agribusiness is very important to the Brazilian economy, but the increase of diseases in the last decade has caused great economic losses to the sector. The citrus canker, caused by the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), is a serious disease that attacks all citrus species economically important worldwide and there is not an effective method for its control. In this study, RNASeq was used to analyze the transcriptional profiles of two contrasting citrus genotypes regarding citrus canker susceptibility: sweet orange Pêra Rio (PR), moderately resistant, and Mexican lime ‘Galego´ (ML), highly susceptible. Gene expression were performed in a HiScanSQ System (Illumina) using total RNA isolated from leaves collected 24, 48 and 72 hours after Xac inoculation, with leaves inoculated with water been used as control. It were found 6,330, 3,478 and 6,795 differentially expressed genes (DGEs) in moderately resistant PR specie at 24, 48 and 72 hours after Xac inoculation, respectively, when compared with their controls. In the specie highly susceptible ML, it was identified 1,491, 5,621 and 2,145 DGEs after 24, 48 and 72 hours after Xac inoculation, respectively. Through the program Blast2GO, genes and metabolic pathways related to photosynthesis, cell signaling, hormone synthesis, transcription factors, among others, were found as involved in plant defense. This study revealed differences at the molecular level between PR and ML in response to citrus canker, showing that in the specie moderately resistant there is a greater activation of host defense mechanisms. Such informations can be used for the development of citrus plants with an adequate level of resistance to citrus canker

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-04Bitstream added on 2014-08-13T18:01:06Z : No. of bitstreams: 1 000739232_20150704.pdf: 50863 bytes, checksum: 4ab6023dc27bf4cfeec7d076e8d98dfb (MD5) Bitstreams deleted on 2015-07-06T11:20:56Z: 000739232_20150704.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-06T11:21:35Z : No. of bitstreams: 1 000739232.pdf: 443929 bytes, checksum: 011f20c2432046f54d111a2b0c66aab5 (MD5) / O huanglongbing (HLB) é considerada a mais severa doença em citros, foi constatada no Brasil em 2004 e desde então tem causado sérios danos à citricultura do país, podendo colocar em risco esse importante setor do agronegócio brasileiro. A doença é causada por bactérias limitadas ao floema. Os sintomas típicos das plantas são mosqueamento, ramos amarelos, frutos deformados e pequenos. Obstruções no floema, comuns no processo infeccioso também podem afetar a fotossíntese e as relações hídricas. Os sintomas do HLB podem ser mascarados por outros sintomas gerados a partir de algumas doenças, além do mais, tais sintomas podem ser confundidos com algumas deficiências minerais. O trabalho teve como objetivo verificar os efeitos do HLB no processo fotossintético, condutância estomática, transpiração, potencial hídrico e no conteúdo mineral das flores, folhas e ramos, em plantas de laranja ‘Valência’, visando conhecer as respostas fisiológicas nas plantas infectadas pela doença. Os tratamentos consistiram em plantas sadias; plantas doentes assintomáticas e plantas doentes sintomáticas. As trocas gasosas e relações hídricas foram medidas em dez/2011 e mar/2012. Para a estimativa da taxa de assimilação de carbono (A), condutância estomática (gs) e transpiração (E) foram selecionadas folhas de 8 a 9 meses de idade, porém evitou-se folhas com sintomas severos nas plantas sintomáticas, essas medidas foram realizadas às 8:00, 12:00 e 15:00 h. O potencial da água das folhas (Ψf) foi medido às 6:00 e 14:00 h, foram selecionados ramos com três folhas cada. Foram realizadas seis avaliações nutricionais para folhas e ramos, com intervalos de 30 dias cada, e as flores foram avaliadas apenas em Nov/2011. Os resultados evidenciaram que, A não foi alterada pela doença, mas a gs e a E apresentaram redução em plantas doentes, sintomáticas e assintomáticas, na ... / The huanglongbing (HLB) is considered one of the most severe diseases of citrus. Since its discovery in Brazil in 2004, it has caused serious damage to the citrus production and industry in the country, making vulnerable this important sector of the Brazilian agribusiness. This disease is caused by phloemrestricted bacteria. Typical symptoms of plants are mottled, yellow branches, and small deformed fruits. Infected trees show phloem obstructions, which can also affect photosynthesis and water relations. The symptoms of HLB may be masked by other symptoms generated from some diseases, moreover, such symptoms can be confused with some mineral deficiencies. The objective of this study was to investigate the effects of HLB in the photosynthetic process, stomatal conductance, transpiration, water potential and mineral content of the flowers, leaves and branches on orange trees [Citrus sinensis (L.) Osbeck, 'Valencia'], to determine the physiological responses in plants infected by the disease. The treatments consisted of healthy plants, plants asymptomatic patients and symptomatic diseased plants. Gas exchange and water relations were measured in December/2011 and March/2012. To estimate the rate of carbon assimilation (A), stomatal conductance (gs) and transpiration (E) were selected leaves 8-9 months old, but was avoided leaves with severe symptoms in symptomatic plants, these measurements were performed 8:00 a.m., 12:00 a.m. and 3:00 p.m. The leaf water potential (Ψf) was observed during two day periods, at 6:00 a.m. and 2:00 p.m. Nutritional assessments were carried out for six leaves and branches, with intervals of 30 days each, and the flowers were evaluated only in November/2011. The results showed that A was not affected by the disease, but gs and E decreased in symptomatic and asymptomatic diseased plants, in the second evaluation. There was a reduction in Ψf at 2:00 p.m. Once ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-06-03Bitstream added on 2014-06-13T18:35:00Z : No. of bitstreams: 1 bonini_m_me_botfca.pdf: 503952 bytes, checksum: 1553a755d247df6ec4852dd6104b7a70 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Empresa Privada / O presente trabalho teve por objetivo avaliar a produção e a sensibilidade de 48 isolados de Xanthomonas axonopodis pv. citri e de 14 isolados de Xanthomonas spp. à bacteriocinas. Estudos foram realizados para verificar o efeito da temperatura, tempo de incubação e do tipo do meio de cultura sobre a produção de bacteriocina por isolados de X. axonopodis pv. citri. Todos isolados de X. axonopodis pv. citri não foram sensíveis às bacteriocinas produzidas por eles, não sendo essas afetadas pelo meio BDA, nutriente ágar + NaCl e YPDA, nos diferentes tempos e temperaturas de incubação. Porém, isolados de X. axonopodis pv. passiflorae foram sensíveis às bacteriocinas produzidas por 25 isolados de avaliados e o isolado de X. campestri pv. campestris e o de X. axonopodis pv. manihotis apresentaram sensibilidade variável. Dos 25 isolados de X. axonopodis pv. citri apenas cinco não foram inibidos pelas bacteriocinas produzidas por dois isolados de X. axonopodis pv. passiflorae. As bacteriocinas produzidas pelos isolados de X. axonopodis pv. citri (FDC-806) e de X. axonopodis pv. passiflorae (Mar 2850-A) foram termolábeis e resistentes à lisozima e sensíveis a DNAse. A bacteriocina produzida pelo isolado de X. axonopodis pv. passiflorae foi resistente à ação de proteinase K, tripsina e RNAse enquanto que a produzida pelo isolado de X. axonopodis pv. citri foi sensível a essas enzimas. / The objective of this work was to evaluate the production and sensitivity of 48 Xanthomonas axonopodis pv. citri strains and 14 Xanthomonas spp. strains to bacteriocins. A number of studies were carried out to verify the effect of temperature, incubation time, and type of culture medium on bacteriocine yield by X. axonopodis pv. citri strains. None of the X. axonopodis pv. citri strains were sensitive to the bacteriocins produced by themselves, and were not affected by the PDA, nutrient agar + NaCl, and YPDA media, at the different incubation times and temperatures studied. However, X. axonopodis pv. passiflorae and strains were sensitive to the bacteriocins produced by the 25 Xac strains evaluated, while a X. campestri pv. campestris and X. axonopodis pv. manihotis strains showed variable sensitivity. Of the 25 X. axonopodis pv. citri strains, only five were not inhibited by the bacteriocins produced by the two X. axonopodis pv. passiflorae strains. The bacteriocins produced by X. axonopodis pv. citri (FDC-806) and X. axonopodis pv. passiflorae (Mar 2850-A) were thermolabile and resistant to lysozyme and sensitive to DNAse. The bacteriocin produced by the X. axonopodis pv. passiflorae was resistant to the action of proteinase K, trypsin and RNAse, while the bacteriocin produced by the X. axonopodis pv. citri isolate was sensitive to those enzymes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T19:03:36Z : No. of bitstreams: 1 dabbas_km_dr_jabo.pdf: 775861 bytes, checksum: a48c491be161977f84f0e0e6a52a14a7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A escaldadura da folha se destaca dentre as principais doenças que acometem a cultura da cana-de-açúcar no Brasil, provocando prejuízos em função da diminuição da produtividade e necessidade de troca precoce dos canaviais, principalmente nas variedades suscetíveis. A doença é causada pela bactéria Xanthomonas albilineans que coloniza o xilema da planta. O principal sintoma da doença é caracterizado por uma faixa clorótica que acompanha a nervura central da folha resultante da ação da fitotoxina albicidina que inibe a replicação de DNA dos cloroplastos. Os métodos de controle se baseiam no uso de variedades resistentes por meio de melhoramento genético. Diante deste fato, o objetivo do trabalho foi estudar os mecanismos moleculares envolvidos no processo de defesa de duas variedades de cana-de-açúcar, uma resistente (SP82-1176) e outra suscetível (SP78-4467), contra a infecção por X. albilineans. Para esta finalidade foi realizado um ensaio experimental seguindo uma cinética de infecção com intervalos de coleta de 6, 48 e 120 horas após a infecção com a fitobactéria. O perfil de expressão gênica foi avaliado por meio da utilização de um macroarranjo contendo 3.575 cDNAs de duas bibliotecas de folha (LV e LR) provenientes do projeto SUCEST. Os dados gerados pelas análises estatísticas evidenciaram que 473 genes foram diferencialmente expressos (induzidos ou reprimidos) na interação entre as variedade, 472 genes durante o tratamento e 994 genes foram diferencialmente expressos ao longo da cinética de infecção. Foi possível identificar genes pertencentes a famílias de fatores de transcrição como WRKY e Myb assim como proteínas envolvidas com processos de detoxificação de espécies reativas de oxigênio como as peroxidaes e outras proteínas relacionadas com mecanismos de defesa. Os dados mostram... / The leaf scald disease is one of the most devastating sugarcane diseases in Brazil, causing losses in terms of decreased productivity and the need for early replacement of sugarcane, especially in susceptible varieties. The disease is caused by the xylem-invading pathogen Xanthomonas albilineans. The main symptom of the disease is characterized by a chlorotic band that accompanies the midrib of the lea,f resulting from the action of albicidin phytotoxin, that inhibits the replication of chloroplast DNA. Leaf scald control methods are based on use of resistant varieties obtained through genetic improvement. The objective of this work was to study the molecular mecanisms involved in defense process against X. albilineans infection, in two sugarcane varieties, resistant (SP82-1176) and susceptible (SP78-4467). For this purpose, a test was conducted following a kinetics of experimental infection with collection intervals of 6, 48 and 120 hours after phytobacteria infection. The gene expression profile was evaluated by using a macroarray containing 3,575 cDNAs from two leaf libraries (LV and LR) from SUCEST. Statistical analysis showed 473 genes differentially expressed (induced or repressed) in the interaction between variety, 472 between treatments and 994 over the kinetics. It was possible to identify genes belonging to families of transcription factor, as well as Myb and WRKY, proteins involved in detoxification processes of reactive oxygen species, such as peroxidase, and other proteins related to defense mechanisms. The data also show that there was induction of genes related to signal transduction along de kinetics of... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-19Bitstream added on 2015-04-09T12:48:25Z : No. of bitstreams: 1 000819205.pdf: 7820938 bytes, checksum: b4045f963c89f07ea3405904f9001074 (MD5) / O cancro cítrico, causado pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), é uma das principais doenças que acometem a citricultura mundial e ataca uma ampla gama de espécies comerciais de citros, causando perdas significativas nos países produtores. A espécie de laranja doce Hamlin (Citrus sinensis) é suscetível ao cancro cítrico, enquanto a espécie de tangerina Satsuma (Citrus unshiu) é resistente. Para compreender os mecanismos moleculares relacionados aos sistemas de defesa ativados pela planta é importante identificar as alterações transcricionais de cada espécie vegetal sob estresse fitopatogênico, a fim de desvendar os elementos moleculares que são específicos de cada espécie. O objetivo do presente trabalho foi realizar uma análise comparativa temporal do transcriptoma de duas espécies cítricas contrastantes em resposta à Xac, pela técnica do RNA-Seq (Illumina). Um total de 5.673 e 6.231 transcritos diferencialmente expressos foi induzido nos tempos 24, 48 e 72 horas após a inoculação de Xac em Satsuma e Hamlin, respectivamente, enquanto 3.982 e 7.944 transcritos foram reprimidos. Deste total, 52 transcritos foram induzidos em comum, nas duas espécies, em todos os tempos de inoculação. Estes genes estão relacionados com a defesa basal da planta contra o ataque de Xac, pois apresentam genes que participam na percepção e reconhecimento do patógeno, genes que codificam fatores de transcrição e genes que participam na defesa da planta, como glucanases e proteinases. Entre os genes induzidos exclusivamente na espécie resistente Satsuma destacou-se uma proteinase aspártica. Esta proteína apresentou a maior expressão gênica no tempo 24 horas e pode estar envolvida na resistência desta espécie, visto que na espécie suscetível Hamlin, a expressão desta proteína foi menos expressiva e tardia, no tempo 48 horas. Outra resposta oposta entre as espécie foi na expressão de genes relacionados à ... / Citrus canker, caused by Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), is a one of the most important disease affecting citrus production worldwide and attacks a wide range of commercial species of citrus trees, causing significant losses in producing countries. Hamlin sweet orange (Citrus sinensis) is canker-sensitive, while Satsuma mandarin (Citrus unshiu) is canker-resistant. To understand the molecular mechanisms underlying the differences in responses to Xac, transcriptional profiles of these two genotypes following Xac attack were compared by RNA-Seq (Illumina). The purpose of this study was to examine simultaneous changes in gene expression profile during the early stages (24, 48 and 72 hpi) of citrus canker infection in Satsuma and Hamlin. A total of 5673 and 6231 up-regulated transcripts were identified at 24, 48 and 72 hpi in Satsuma and Hamlin, respectively, while 3982 and 7944 were down-regulated. Of these, 52 transcripts were up-regulated in common between both genotypes. These genes in common are related to basic defense against Xac, because there are genes involved in patogen perception and recognition, transcription factors and genes related to plant defense, such as glucanases and proteinases. Among up-regulated genes expressed only in Satsuma, aspartic proteinase was highlighted. This protein presented the highest gene expression 24 hpi and it can be involved in Satsuma resistance, since the expression of this protein was less pronounced and delayed in Hamlin. Another opposite response between these two genotypes was the expression of genes related to cell wall. Such genes were pectato lyase, extensin, cellulose sinthase, and xiloglucano endotransglycosilase. The genes were up-regulated in Satsuma, while in Hamlin, they were down-regulated. For genes related to plant defense, both genotypes up- regulated pathogenesis-related proteins, especially 72 hpi. However, the expression of these genes did not prevent the symptoms in ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-04-09T12:48:25Z : No. of bitstreams: 1 000817619.pdf: 1071654 bytes, checksum: ea5ed62894b9a1e43e3eac685a926413 (MD5) / A ORF XAC1201 de Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) codifica uma proteína hipotética que, quando nocauteada por inserção de transposon, leva a alterações na patogenicidade da bactéria em citros. A ORF possui 819 pb e codifica a proteína XAC1201 que possui uma massa molecular de 29,1 kDa. A região codificadora foi clonada no vetor de expressão pET SUMO e a proteína de fusão His-SUMO-XAC1201 foi expressa na Escherichia coli linhagem BL21(DE3) pLysS. A melhor condição para expressão da proteína na forma solúvel foi a 28ºC e 250 rpm por 4h na presença de 0,2 mM IPTG. A purificação foi realizada por cromatografia de afinidade com íons metálicos imobilizados (IMAC) em coluna de Ni2+-Sepharose e a proteína de não fusão foi obtida após digestão com SUMO protease e nova cromatografia em coluna de Ni2+-Sepharose. O rendimento final do processo foi de 3,18% da proteína total, tendo a proteína recombinante nativa sido isolada com alto grau de pureza e na forma nativa. A identidade de XAC1201 recombinante foi confirmada pelas análises de espectrometria de massas, com mais de 80% de cobertura da sequência. Foram realizados testes enzimáticos para verificar as prováveis atividades de fosfohidrolase e histidina quinase, porém, estes testes não foram conclusivos. A análise de frequência e diversidade da ORF XAC1201 em bancos de dados sugere que se trata de uma proteína ubíqua e com função ancestral, presente em diversos filos dentro do Domínio Bacteria. A obtenção desta proteína na forma pura, solúvel e nativa é o primeiro passo para os estudos de caracterização da sua função e, devido à presença de alta identidade desta sequência com muitos outros grupos bacterianos, a elucidação da função desta proteína será de grande interesse, não apenas para Xac, como também para outros microrganismos / The ORF XAC1201 of Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) encodes a hypothetical protein and when knocked out by transposon insertion leds to changes in the pathogenicity of the bacterium in citrus. The ORF XAC1201 has 819 bp and encodes a protein with a molecular mass of 29.1 kDa. The coding region was cloned into the expression vector pET SUMO and His-SUMO-XAC1201 fusion protein was expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS strain. The best condition for protein expression in soluble form was 28°C and 250 rpm for 4 hours in the presence of 0.2 mM IPTG. Purification was performed by immobilized metal ions affinity chromatography (IMAC) on a Ni2+-Sepharose column and the non-fusion protein was obtained after digestion with SUMO protease and new chromatography on Ni2+-Sepharose column. The final process yield was 3.18% of the total protein, and the protein was obtained highly pure and in the native form. The identity of the purified protein was confirmed by mass spectrometry analysis with sequence coverage above 80%. Enzymatic assays were made to verify phosphohydrolases and histidine kinase activities, however, the results are inconclusive. It is suggested that XAC1201 is a ubiquitous protein and plays an ancestral role, since it is found in several Phyla within the Bacteria Domain. Obtaining this protein in pure, soluble and native form is the first step towards characterization studies of its function. Since this protein is present not only in Xac but has a ubiquitous presence in many other bacterial groups, the understanding of its function is of great interest to many areas

Orientador: Silvio Aparecido Lopes / Banca: Fabrício Eustáquio Lanza / Banca: Nelson Arno Wulff / Banca: Antonio de Góes / Banca: Eduardo Augusto Girardi / Resumo: Huanglongbing (HLB) é considerada a mais importante doença da citricultura mundial. No Brasil, está associada principalmente a bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las), transmitida pelo inseto Diaphorina citri. Apesar da grande importância comercial, poucas são as informações sobre vários aspectos desta doença limeiras ácidas, inclusive o potencial que esta representa como fonte de inóculo para as laranjeiras. O objetivo do presente trabalho foi (i) avaliar a favorabilidade da limeira ácida 'Tahiti' à reprodução de D. citri e multiplicação de Las, (ii) caracterizar sintomas foliares e danos em raízes de plantas afetadas e (iii) avaliar, por meio de inoculações cruzadas, seu potencial como fonte de inóculo para a laranjeira 'Valência' e vice-versa. Ambos os hospedeiros estavam enxertados em limoeiro 'Cravo', com 2 anos de idade. O capítulo I contém revisão de literatura, o II estudo comparativo de plantas das duas hospedeiras como criadouro de D. citri e o III caracterização de sintomas foliares, danos em raízes e resultados das inoculações cruzadas, usando como inóculo borbulhas doentes e insetos infectivos. A 'Tahiti' foi menos favorável que a 'Valência' ao desenvolvimento do inseto. Nela as taxas de oviposição e sobrevivência de ninfas foram menores, ou seja, 59,7 e 48,5%, respectivamente, em relação à 'Valência' no primeiro experimento, e de 75,4 e 33,4% no segundo experimento. Em 'Tahiti' as manchas amarelas foliares foram mais intensas, porém os danos nas raízes ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Huanglongbing (HLB) is considered the most important disease of citrus worldwide. In Brazil, the bacterium most commonly associated with the disease is Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) transmitted by the insect Diaphorina citri. Despite the great commercial importance, little is known about the disease on acid limes. The objectives of this study were (i) to evaluate the favorability of the 'Tahiti' acid lime for the reproduction of D. citri and multiplication of Las, (ii) characterize foliar symptoms and root damage on infected plants and (iii) to evaluate, through cross inoculations, the potential that diseased 'Tahiti' represents as source of inoculum to sweet orange 'Valencia' and vice versa. Both hosts were two-year-old and growing on 'Cravo' Rangpur lime rootstock. Chapter I contains literature review, II a comparative study of the favorability of the two hosts for D. citri reproduction, and III a characterization of foliar symptoms, root damage and the results of cross inoculation experiments, using as inoculum diseased budsticks and infective insects. 'Tahiti' was less favorable than 'Valencia' to insect development. On these plants oviposition rates and nymph survival were, respectively, 59.7 and 48.5% of those on 'Valencia' in the first experiment, and 75.4 e 33.4 % in the second experiment. On 'Tahiti' the yellow leaf spots were more intense, but root damage like those on 'Valencia'. Unexpectedly, several experimental plants were infected with Phytophthora sp... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-28. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:25:26Z : No. of bitstreams: 1 000858045.pdf: 980954 bytes, checksum: 6bcdb403af4689c3a8fd68979044e591 (MD5) / Huanglongbing (HLB) doença dos citros emergiu como a principal ameaça à produção de citros no mundo, associado com a bactéria (Candidatus Liberibacter asiaticus - Las) limitada ao floema e ao vetor (Diaphorina citri). No Brasil, o HLB foi relatado pela primeira vez em 2004 e rapidamente se espalhou para todas as regiões geográficas do Estado de São Paulo (SPS), Paraná (PR) e Minas Gerais (MG). No entanto, informações sobre a diversidade genética desta bactéria são pouco conhecidas. Aqui nós testamos a hipótese H0: ambas as regiões geográficas diferentes e espécies de citros não moldam a diversidade genética de populações de Las do Brasil. Para comprovar a hipótese, DNA de 199 amostras de plantas cítricas com sintomas de HLB foram amplificados com 9 conjuntos de iniciadores microssatélites, sendo os iniciadores diretos marcados com corantes fluorescentes. Níveis moderadamente baixos de diversidade genética (HNei = 0,11 - 0,26) foram observados em todas as populações desta bactéria. Com uso da estatística F de Wright (FST), nenhuma diferença estatística foi observada entre populações de Las de todas as sete subdivisões das regiões geográficas do SPS e de MG (FST <0,095). Mas, valores significativos de diferenciação entre populações (FST = 0,118 - 0,191) foram obtidos para populações de Las do PR comparado com as do SPS e MG. Também, valores ainda mais altos e significativos (FST = 0,275 - 0,445) foram observados comparando populações de Las em laranjeiras doce do SPS, MG e PR com as populações de diferentes espécies de citros cultivados na região Sudeste do SPS. Por meio de métodos de agrupamento realizados por estatística Bayesiana e de coordenada principal pode-se agrupar todos os isolados estudados em três populações geneticamente distintas: 1. Um grupo contempla todas as estirpes das regiões do SPS mais MG, 2. Um segundo contendo somente as estirpes de Las do PR, 3. E... / Citrus huanglongbing (HLB) disease emerged as a primary threat for citrus production worldwide, associated with the phloem and vectored (Diaphorina citri) limited - bacterium Candidatus Liberibacter asiaticus (Las). In Brazil, HLB was first reported in 2004 and quickly spread for all geographic regions of the States of Sao Paulo (SP), Parana (PR) and Minas Gerais (MG). However, information about genetic diversity of this bacterium is poorly known. Here we tested the hypothesis H0: different geographic regions and citrus species have no influence on genetic diversity of Las populations in Brazil. To test this hypothesis, total DNA from 199 samples from citrus plants with symptoms of HLB was amplified by 9 sets of forwardfluorescent microsatellites primers. Moderately low levels of genetic diversity (HNei = 0,11 to 0,26) were observed through all populations. By Wright's F-statistics (FST), no statistic difference was observed among Las populations from all the seven previously subdivided geographic regions of SP and MG (FST <0,095). But significant FST values (0,118 to 0,191) were obtained for Las population from PR compared to SP and MG. On the other hand, highest and significant values for FST index (0,275 to 0,445) were observed comparing Las populations from sweet orange trees from SP, MG, and PR and the populations from different citrus species grown at the Southeast region of SP. By Bayesian statistics and principal coordinate analysis all isolates studied were clustered in three genetically different populations: 1. a group that includes all strains from SP regions and MG, 2. A second composed only by Las strains from PR, and 3. a third where strains from different citrus species were grouped. In conclusion, after 10 years of the HLB first report in Brazil, that genetically homogeneous populations of Las infecting sweet orange are present at different geographic regions sampled, with the exception of the populations ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-30Bitstream added on 2014-06-13T18:53:48Z : No. of bitstreams: 1 000739267.pdf: 1408117 bytes, checksum: 58d04ea359763c0637ec0685a1f80385 (MD5) / Huanglongbing (HLB) ou greening é uma doença de difícil controle e altamente destrutiva que, no Brasil, está associada as bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus e Ca. L. americanus, transmitidas pelo inseto Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae). Ca. L. asiaticus é atualmente a mais frequentemente encontrada no campo. Este trabalho objetivou o aprimoramento de metodologia que envolve o uso de folhas jovens destacadas de laranja doce (Citrus sinensis L.) para estudos sobre a transmissão de Ca. L. asiaticus por D. citri. Os experimentos envolveram diferentes números de insetos adultos (1, 4 ou 8 indivíduos), diferentes períodos de acesso à inoculação (PAI) da bactéria (1, 24, 48 ou 72 horas) e diferentes períodos de incubação (PI) da bactéria nas folhas (1, 7, e 15 dias) após o PAI e comparação com a inoculação em mudas. Insetos e folhas foram avaliados por qPCR para detecção e quantificação de Ca. L. asiaticus. Com PAI de 1 dia Ca. L. asiaticus foi detectada, no total dos 3 PIs, em 19, 29 e 36% das folhas expostas, respectivamente, a 1, 4 ou 8 insetos. Este aparente efeito de dose (aumento da taxa de inoculação bem sucedida com o aumento no número de indivíduos) foi ainda maior quanto maiores foram os PAIs e PIs. O método se mostrou útil para estudos da transmissão de Ca. L. asiaticus por D. citri com as seguintes vantagens em relação ao uso de plantas inteiras: menor tempo necessário para obtenção dos resultados, maior economia de material, drástica redução da área necessária para a condução dos experimentos / Huanglongbing (HLB) or greening disease is difficult-to-control citrus disease that, in Brazil, is associated bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus and Ca. L. americanus, transmitted by insect Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae). Ca L. asiaticus is currently the most frequently encountered in the field. This study aimed to the upgrading of methodology that involves the use of detached young leaves of sweet orange (Citrus sinensis L.) for studies on the transmission of Ca. L. asiaticus by D. citri. The experiments involved different numbers of adult insects (1, 4 or 8 individuals), different inoculation access periods (IAP) of bacteria (1, 24, 48 or 72 hours) and different incubation periods (IP) of the bacteria on leaves (1, 7, and 15 days) after PAI and comparison with inoculation seedlings. Insects and leaves were assessed by qPCR for the detection and quantification of Ca L. asiaticus. With PAI 1 day Ca. L. asiaticus was detected in all of the three IPs, 19, 29 and 36% of the exposed leaves, respectively, at 1, 4 or 8 insects. This apparent dose effect (increased rate of successful inoculation with the increase in the number of individuals) was greater the higher were the PAIs and PIs. The method proved useful for studies of transmission of Ca L. asiaticus by D. citri with the following advantages over the use of whole plants: less time needed to obtain the results, the largest economy of material, drastically reducing the area required for conducting experiments

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-04Bitstream added on 2014-06-13T18:54:06Z : No. of bitstreams: 1 faria_act_me_jabo.pdf: 1121101 bytes, checksum: 31146cb54a347b3fc8cc68d8a356b030 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Xanthomonas aliblineans é um importante patógeno da cana-de-açúcar, causando grandes perdas na produção. Este trabalho teve como objetivos o desenvolvimento de um antissoro específico para X. albilineans bem como a caracterização molecular e fenotípica de um banco de isolados de diferentes regiões do Brasil. O antissoro foi produzido a partir da imunização de coelhos da raça Nova Zelândia, utilizando com antígeno, o isolado 2256 utilizado neste trabalho. Os isolados foram obtidos de canas sintomáticas, coletadas a campo, utilizando-se meio de cultura seletivo XAS. “Simple Sequence Repeats” - SSRs obtidas a partir da análise do genoma de X. albilineans foram utilizadas para o desenho de 15 “primers”, e o polimorfismo avaliado em gel de poliacrilamida corados com nitrato de prata. O antissoro desenvolvido foi altamente específico para X. albilineans. Os 15 “primers” amplificaram um total de 54 alelos polimórficos. A análise de agrupamento mostrou a existência de variabilidade genética entre os isolados coletados em diferentes estados brasileiros, os quais foram divididos em três grupos principais, embora não foi possível agrupar esses indivíduos por local de coleta. A avaliação da patogenicidade mostrou a existência de diversidade patogênica entre os isolados, embora vários deles não tenham sido distinguidos molecularmente pelo marcadores utilizados. Dois alelos foram identificados como associados a patogenicidade, sendo que um deles, , está localizado no loco que codifica a síntese de peptídeos não ribossomais (non ribosomal peptide synthetase – NRPS), os quais estão associados à virulência de muitas bactérias fitopatogênicas / Xanthomonas albilineans is an important pathogen of sugarcane, causing important losses in production. This study aimed to develop an antiserum specific for X. albilineans and the phenotypic and molecular characterization of a set of isolates from different regions of Brazil. The antiserum was produced from immunizing New Zealand rabbits, using as antigen, the isolated 2256 used in this work. The isolates were obtained from symptomatic canes, collected in the field, using selective culture media XAS. Simple Sequence Repeats - SSRs obtained from the analysis of the genome of X. albilineans were used to design 15 primers and the polymorphism analyzed on polyacrylamide gels stained with silver nitrate. The antiserum developed was highly specific for X. albilineans. The 15 primers amplified a total of 54 polymorphic alleles. Cluster analysis showed the existence of genetic variability among isolates collected in different Brazilian states, which were divided into three main groups, although it was not possible to group these individuals based on collect site. The evaluation showed the presence of pathogenic diversity among isolates, although many of them have not been distinguished with the molecular markers used. Two alleles were identified as being associated with pathogenicity, one of which is located in the site encoding the non-ribosomal peptide synthetase - NRPS, which are associated with virulence of many pathogenic bacteria