Vor dem Hintergrund der zunehmenden Prävalenz von Adipositas ist die Erforschung der zugrunde liegenden Pathomechanismen, unter anderem der Leptinresistenz, von großer Bedeutung. Der Schwerpunkt der vorliegenden Arbeit lag in der Etablierung und Validierung einer Methode zur Bestimmung der Bioaktivität von Leptin in Serum. Aufgrund des Vorhandenseins von Leptinbindungsproteinen erscheint nur der Teil des Serumleptins funktionell entscheiden, der tatsächlich den Leptinrezeptor erreicht und eine Bioantwort im Sinne einer Gewichtsreduktion auszulösen vermag. Der Bioassay basiert auf der Nutzung von Luciferase als Reportergen im HEK-293-Zellkulturmodell. Während der Validierung konnte gezeigt werden, dass der Test ein sensitives und spezifisches Verfahren zur Messung von Leptin im Serum darstellt. Problematisch blieb die Reproduzierbarkeit der Messergebnisse, so dass deren Interpretation im Vergleich mit Ergebnissen anderer Verfahren zum Nachweis von Leptin (Radioimmunoassay) sinnvoll erscheint. Der Luciferase-Bioassay wurde zur Bestimmung des Leptins im Serum adipöser Kinder eingesetzt, wobei eine statistisch signifikante Korrelation zwischen deren Bioaktivität und klinischen Markern der Adipositas gefunden wurde.

A biological monitoring tool to assess water quality using bivalve gape behavior was developed and demonstrated. The purpose of this work was to develop methodologies for screening water quality appropriate to the goals of the watershed paradigm. A model of bivalve gape behavior based on prediction of behavior using autoregressive techniques was the foundation of the bivalve biomonitoring system. Current technology was used in developing the system to provide bivalve gape state data in a continuous real-time manner. A laboratory version of the system, including data collection and analysis hardware and software, was developed for use as a toxicological assay for determination of effective concentrations of toxicant(s) or other types of stress on bivalve gape behavior. Corbicula fluminea was monitored and challenged with copper, zinc, and chlorpyrifos using the system. Effective concentrations of 176±23µg/L copper, 768±412µg/L zinc, and 68µg/L chlorpyrifos were observed using a natural water with high dissolved organic carbon concentrations. A rugged field version of the bivalve biomonitoring system was developed and deployed in two locations. The field systems were fitted with a photovoltaic array, a single board computer, and a CDPD telemetry modem for robust remote operation. Data were telemetered at a time relevant rate of once every ten minutes. One unit was deployed in Lake Lewisville, Denton County, TX in February 2000. Data were telemetered and archived at a 92% success rate. Bivalve gape data demonstrated significant behavioral deviations on average 5 times per month. A second unit was deployed in Pecan Creek, Denton, TX in June 2001. Data from this site were telemetered and archived at a 96% success rate. Over the months of June-August 2001, 16 significant behavioral deviations were observed, 63% of which were correlated with changes in physical/chemical parameters. This work demonstrated the relative sensitivity of bivalve gape as a toxicological endpoint and the feasibility of its use in a continuous, real-time, bivalve biomonitoring system. Technical aspects of collecting, telemetering, and analyzing this type of data in a time-relevant manner were developed resulting in a system appropriate for use as a means of data collection within the watershed paradigm.

Magister Pharmaceuticae - MPharm / Due to the contribution of hypertension to various cardiovascular diseases, many studies are currently focused on identifying efficient bioactive compounds with antihypertensive activity and thus reducing the levels of cardiovascular disease. ACE inhibitors are an important component of the therapeutic regimen for treating hypertension, but due to the increase in the prevalence of side effects of synthetic compounds, alternative and complementary medicines which may consist of pure bioactive compound or a combination of various compounds from natural sources are gaining importance in overcoming hypertension. Hypericum perforatum has been studied for various activities including anti-bacterial, anti-depressant, anti-oxidant properties, but studies on its cardiovascular effects specifically ACE inhibitory activity have not yet been explored. In this study, ACEI assay-guided fractionation of the ethanol extract of Hypericum perforatum was carried out other to isolate a compound with ACE inhibition. A compound – (3-hydroxy 4, 4 dimethyl-4-butyrolactone) was isolated from an active fraction of the plant extract and was tested for ACE inhibition and its chemical structure elucidated using 1HNMR and C13NMR spectrometry and further characterized using mass spectrometry and FTIR.

A bacia do rio Corumbataí localizada na região central do estado de São Paulo, abrange parte dos municípios de Analândia, Corumbataí, Santa Gertrudes, Rio Claro, Itirapina, Ipeúna, Charqueada e Piracicaba, durante seu percurso os rios: Passa Cinco, Ribeirão Cabeça e Ribeirão Claro, considerados seus principais afluentes, influenciam significativamente nas características de suas águas. Os testes de toxicidade vêm sendo utilizados e reconhecidos mundialmente como uma ferramenta eficaz no biomonitoramento e na avaliação da qualidade das águas e dos sedimentos. Visando avaliar e entender o decréscimo da qualidade da água e do sedimento do rio Corumbataí, após a afluência das águas do Ribeirão Claro foram analisadas amostras em cinco pontos de coleta: dois no Ribeirão Claro, dois no rio Corumbataí e um no rio São Joaquim. Foram realizados testes ecotoxicológicos com Hydra attenuata, Pseudokirchneriella subcapitata, Chironomus xanthus, Lactuca sativa e Dapnhia magna, determinações físicas, químicas e biológicas para avaliação do IQA e quantificação dos elementos químicos: Be, Al, Na, Mg, Ca, K, V, Mn, Fe, Cr, Co, Ni, Cu, Zn, As, Se, Ag, Cd, Sb, Ba, Hg, Pb, Th, Tl, U por Espectrofotometria de massas com fonte de plasma induzido (ICP-MS). As coletas ocorreram trimestralmente de Abril de 2006 a Maio de 2007. Os resultados das quantificações dos elementos químicos foram comparados aos limites determinados pela Resolução CONAMA 357/05, e observados valores de Al, Fe, Hg e Pb, acima do recomendado. As análises físicas, químicas e biológicas mostraram que o oxigênio dissolvido (OD), fósforo total, nitrogênio amoniacal, demanda bioquímica de oxigênio (DBO5dias) e os coliformes fecais estão fora dos padrões recomendados. A avaliação do IQA aponta Classificação Ruim para todas as amostras do rio São Joaquim, para o Ribeirão Claro três Ruins, uma Boa e uma Imprópria, mostrando a importância destes afluentes para a piora das águas do rio Corumbataí. Todas as amostras de água e sedimento apresentaram toxicidade para pelo menos um dos organismos utilizados, principalmente para H. attenuata, P. subcapitata e C. xanthus. A sensibilidade da H. attenuata esteve diretamente relacionada à presença dos coliformes fecais, Cu, Ag, Ni e Zn, enquanto que a da P. subcapitata esteve relacionada à presença de Zn, Na, DBO e diminuição do OD, segundo as análises estatísticas de redundância (RDA) rodadas pelo R estatístico. Os elementos químicos Al e Fe estiveram presentes nas amostras de água e sedimento, acima do recomendado pelo CONAMA para rios de Classe 2, assim como o Mn, o qual teve sua concentração elevada pelas chuvas, enquanto que os elementos Be, V, Cr, Co, Ni, As, Cu, Cd, Sb, Ba, Pb, Zn e U estiveram abaixo ou próximo aos limites. O sedimento apresentou os elementos biodisponível na seguinte ordem decrescente: Mn > Zn > Ba > Pb > Cu > V > Cr > Co > Ni > As > U > Be > Ag > Cd > Se > Hg > Sb, quando retirado o Al e o Fe. Os rios São Joaquim e Ribeirão Claro influenciaram negativamente a qualidade da água do rio Corumbataí / The Corumbataí river basin located on Central region in São Paulo State is composed by part of Anâlandia, Corumbataí, Rio Claro, Itirapina, Ipeúna, Charqueada and Piracicaba municipality. The principals affluents rivers are Passa Cinco, Ribeirão Cabeça and Ribeirão Claro that have influence on water characteristics of Corumbataí river. The toxicity test has been recommended as an efficient tool for biomonitoring and evaluation of water and sediment quality. With the aim of evaluate and understand the decrease of water and sediment qualities of Corumbataí river five sampling sites were selected: two on Ribeirão Claro river, two on Corumbataí river and one on São Joaquim river. Ecotoxicity tests were performed with Hydra attenuata, Pseudokirchneriella subcapitata, Chironomus xanthus, Lactuca sativa and Dapnhia magna. For evaluation o IQA, were carried out physical, chemical and biology determinations as well chemical elements quantification by ICP-MS, such as: Be, Al, Na, Mg, Ca, K, V, Mn, Fe, Cr, Co, Ni, Cu, Zn, As, Se, Ag, Cd, Sb, Ba, Hg, Pb, Th, Tl and U. The water samples were collected every three mouth from April 2006 to May 2007. The chemical elements quantification results were compared with values standardized by CONAMA 357/05 Resolution. The Al, Fe, Hg e Pb concentration were over the ones recommended. The physical, chemical and biology assays showed that the dissolved oxygen, total phosphorus, ammonia nitrogen, biochemical oxygen demand and fecal coliforms were out of the standard recommendation. The IQA evaluation classified all water samples from São Joaquim River as Bad, the Ribeirão Claro three water samples were Bad, one Good and another Improper. So it showed the importance of these affluents on the decrease of Corumbatai river water quality. All the water and sediment samples showed toxicity at least for one organism tested, mainly for H. attenuata, P. subcapitata e C. xanthus. The H. attenuata sensity were directly affected by fecal coliforms, Cu, Ag, Ni and Zn, meanwhile the P. subcapitata were affect by Zn, Na, DBO and lowest level of OD, as obtained by redundancy analysis (RDA) on R statistics program. The chemical elements Al and Fe were present on water and sediment sample, over the recommend concentration of CONAMA 357/05 Resolution for rivers of Class 2 as the same for the Mn, which had high concentration after rain. On the other hand the elements Be, V, Cr, Co, Ni, As, Cu, Cd, Sb, Ba, Pb, Zn and U were below or near the limits. The sediment showed the chemical elements in this order: Mn > Zn > Ba > Pb > Cu > V > Cr > Co > Ni > As > U > Be > Ag > Cd > Se > Hg > Sb, when the Al and Fe where not considered. The São Joaquim and Ribeirão Claro rivers had a negative influence on Corumbataí river water quality

Com a intenção de estabelecer métodos físico-químicos como uma alternativa ao bioensaio in vivo para determinação de atividade biológica, o conteúdo de hFSH, hTSH e hLH de diferentes preparações, nativas e recombinantes, foi determinado por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e comparado ao dado obtido pelo clássico bioensaio in vivo em camundongos ou ratos (BA). Para estes hormônios foi encontrada uma relação linear entre os dois métodos: hFSH BAUI = 0,9925 RP-HPLCUI - 1,3165, r = 0,9371, p < 0,001, n = 24; hTSH BA&mu;g = 0,9790 RP-HPLC&mu;g - 0,052, r = 0,8725 , p < 0,001, n = 14; hLH BAUI = 0,8771 RP-HPLCUI + 12,41; r = 0,9786, p < 0,01, n = 5. Para outras nove preparações de hFSH e onze preparações de hTSH foi determinada a diferença média (d) entre a bioatividade predita pela RP-HPLC através destas equações e da média das bioatividades obtidas com os dois métodos. Para o hLH não foi possível determinar esta diferença em virtude das poucas amostras disponíveis. No caso do hFSH, d ± DP = -2,11 ± 3,49 % sendo a precisão de 1,16% e no caso do hTSH, d ± DP = -2,01 ± 5,56 % com precisão de 1,68%. Amostras parcialmente alteradas apresentaram diferentes graus de atividade de hFSH, hTSH e hLH que puderam ser preditas por RP-HPLC com uma aceitável concordância com os bioensaios in vivo. Estes resultados demonstraram que o emprego de um ensaio físico-químico sem o uso de animais, tal como a RP-HPLC, é uma alternativa viável ao uso do bioensaio in vivo para a determinação da potência de hFSH e hTSH, reduzindo assim o número de animais em geral utilizados para assegurar a qualidade e eficácia de um produto farmacêutico. / With the intention of setting up physico-chemical methods as an alternative to in vivo bioassay for determining biological activity, the hFSH, hTSH and hLH content of native and recombinant preparations was determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) and compared with the data obtained by the classical mouse or rat in vivo bioassays (BA). A linear relationship between the two methods was found for these hormones: hFSH BAIU = 0.9925 RP-HPLCIU 1.3165, r = 0.9371, p < 0.001, n = 24; hTSH BA&mu;g = 0.9790 RP-HPLC&mu;g - 0.052, r = 0.8725, p < 0.001, n = 14; hLH BAIU = 0.8771 RP-HPLCIU + 12.41, r = 0.9786, p < 0.01, n = 5. For nine other hFSH and eleven hTSH preparations, the mean difference (d) between the bioactivity predicted from RP-HPLC data via these equations and the mean of the bioactivities obtained with the two methods was as follows. For hLH this difference could not be estimated due to lack of different samples. In the case of hFSH, d ± SD = -2.11 ± 3.49% with a precision of 1.16% and in the case of hTSH, d ± SD = -2.01 ± 5.56 %, with precision of 1.68%. Partly-degraded hFSH, hTSH and hLH samples presented different activity degrees that could be predicted by RP-HPLC, with an acceptable agreement with the in vivo bioassays. These results demonstrate that the employment of a non-animal physico-chemical assay, such as RP-HPLC, is a viable alternative to the use of an in vivo bioassay for hFSH and hTSH potency determination, thus reducing the number of animals currently used for assuring quality and efficacy of a pharmaceutical product.

Com a intenção de estabelecer métodos físico-químicos como uma alternativa ao bioensaio in vivo para determinação de atividade biológica, o conteúdo de hFSH, hTSH e hLH de diferentes preparações, nativas e recombinantes, foi determinado por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e comparado ao dado obtido pelo clássico bioensaio in vivo em camundongos ou ratos (BA). Para estes hormônios foi encontrada uma relação linear entre os dois métodos: hFSH BAUI = 0,9925 RP-HPLCUI - 1,3165, r = 0,9371, p < 0,001, n = 24; hTSH BA&mu;g = 0,9790 RP-HPLC&mu;g - 0,052, r = 0,8725 , p < 0,001, n = 14; hLH BAUI = 0,8771 RP-HPLCUI + 12,41; r = 0,9786, p < 0,01, n = 5. Para outras nove preparações de hFSH e onze preparações de hTSH foi determinada a diferença média (d) entre a bioatividade predita pela RP-HPLC através destas equações e da média das bioatividades obtidas com os dois métodos. Para o hLH não foi possível determinar esta diferença em virtude das poucas amostras disponíveis. No caso do hFSH, d ± DP = -2,11 ± 3,49 % sendo a precisão de 1,16% e no caso do hTSH, d ± DP = -2,01 ± 5,56 % com precisão de 1,68%. Amostras parcialmente alteradas apresentaram diferentes graus de atividade de hFSH, hTSH e hLH que puderam ser preditas por RP-HPLC com uma aceitável concordância com os bioensaios in vivo. Estes resultados demonstraram que o emprego de um ensaio físico-químico sem o uso de animais, tal como a RP-HPLC, é uma alternativa viável ao uso do bioensaio in vivo para a determinação da potência de hFSH e hTSH, reduzindo assim o número de animais em geral utilizados para assegurar a qualidade e eficácia de um produto farmacêutico. / With the intention of setting up physico-chemical methods as an alternative to in vivo bioassay for determining biological activity, the hFSH, hTSH and hLH content of native and recombinant preparations was determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) and compared with the data obtained by the classical mouse or rat in vivo bioassays (BA). A linear relationship between the two methods was found for these hormones: hFSH BAIU = 0.9925 RP-HPLCIU 1.3165, r = 0.9371, p < 0.001, n = 24; hTSH BA&mu;g = 0.9790 RP-HPLC&mu;g - 0.052, r = 0.8725, p < 0.001, n = 14; hLH BAIU = 0.8771 RP-HPLCIU + 12.41, r = 0.9786, p < 0.01, n = 5. For nine other hFSH and eleven hTSH preparations, the mean difference (d) between the bioactivity predicted from RP-HPLC data via these equations and the mean of the bioactivities obtained with the two methods was as follows. For hLH this difference could not be estimated due to lack of different samples. In the case of hFSH, d ± SD = -2.11 ± 3.49% with a precision of 1.16% and in the case of hTSH, d ± SD = -2.01 ± 5.56 %, with precision of 1.68%. Partly-degraded hFSH, hTSH and hLH samples presented different activity degrees that could be predicted by RP-HPLC, with an acceptable agreement with the in vivo bioassays. These results demonstrate that the employment of a non-animal physico-chemical assay, such as RP-HPLC, is a viable alternative to the use of an in vivo bioassay for hFSH and hTSH potency determination, thus reducing the number of animals currently used for assuring quality and efficacy of a pharmaceutical product.

Toxoplasma gondii é um protozoário formador de cistos capaz de infectar diversas espécies de aves e mamíferos domésticos e selvagens, incluindo o homem. Apesar de evidências sorológicas da infecção por T. gondii em animais selvagens, pouco se sabe sobre o papel da vida selvagem na cadeia epidemiológica e tampouco a susceptibilidade das variadas espécies a este parasito. O presente trabalho consistiu no isolamento e caracterização genotípica de T. gondii de tecidos de animais selvagens, de vida livre e de cativeiro, provenientes de diversas localidades do Brasil e na detecção sorológica de anticorpos contra o parasito nas amostras em que foi possível obter o soro. A sorologia foi realizada em 54 amostras de soros de aves e mamíferos de várias espécies por meio do Teste de Aglutinação Modificado (MAT). Deste total, 18 amostras (cinco de aves e 13 de mamíferos) foram positivas para anticorpos anti-T. gondii. Para o isolamento do parasito foi realizado o bioensaio em camundongos. Homogenados de coração e cérebro de cada um dos animais foram submetidos à digestão péptica e inoculados em grupos de cinco camundongos. Tecidos dos camundongos que vinham à óbito eram examinados para constatar a presença de formas de T. gondii. Seis semanas após inoculação, foi colhido sangue dos camundongos para a realização de testes sorológicos (MAT) para detecção de anticorpos anti-T. gondii e dois meses após a inoculação estes animais foram submetidos à eutanásia para a procura por cistos teciduais do parasito. Por meio desta prova biológica foi possível isolar T. gondii em 18 animais selvagens (16 de diversas espécies de mamíferos e duas de aves) provenientes de diferentes localidades. T. gondii foi isolado em uma coruja-buraqueira (Athene cunicularia), um pica-pau-de-banda-branca (Dryocopus lineatus), um gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus), um lobo-guará (Chrysocyon brachyurus), uma mucura (Didelphis marsupialis), uma paca (Cuniculus paca), três queixadas (Tayassu pecari), uma raposa-do-campo (Pseudalopex etulus), três tamanduás-mirim (Tamandua tetradactyla), três tatus-galinha (Dasypus novemcinctus) e dois tatuspeba (Eufractus sexcinctus). Dezesseis dos 18 isolados obtidos foram letais para 100% dos camundongos infectados. O isolado de um tatu-peba não causou mortalidade em camundongos e o isolado da coruja-buraqueira causou 50% de mortalidade. A caracterização genotípica dos isolados foi realizada pela técnica de PCR/RFLP utilizando 12 marcadores genotípicos. As amostras primárias dos tecidos provenientes dos animais selvagens que foram positivas na PCR de triagem também foram submetidas à caracterização genotípica. Por meio da PCR/RFLP foi possível obter o genótipo completo de 22 amostras, 15 delas provenientes de isolados e sete de amostras primárias de tecidos. Dos 18 isolados obtidos através do bioensaio, em três (tatu-peba, coruja-buraqueira e mucura) não foi possível obter a caracterização completa de todos os 12 marcadores utilizados. Pela análise das 22 amostras caracterizadas foram observados 17 genótipos diferentes, sendo que 13 deles são inéditos. A mortalidade de camundongos infectados foi comparada com a ocorrência dos diferentes alelos no marcador CS3 nos 15 genótipos provenientes de isolados, dos quais, sete apresentaram o alelo tipo I, seis o alelo tipo II e os alelos u-1 e u-3 foram encontrados em um isolado cada. Todos os isolados apresentaram 100% de mortalidade para os camundongos infectados. / Toxoplasma gondii is an intracellular protozoan parasite that infects almost all warmblooded animals, including humans. Although studies indicate that wild animals are frequently positive for antibodies anti-T. gondii, the role of wild life in the epidemiology of this parasite is not well understood nor the susceptibility of different wild species. The present study aimed to isolate T. gondii from free-living and captive wild birds and mammals from different locations from Brazil, to perform the genotipic characterization of T. gondii found in the analyzed tissue samples and to detect aintibodies anti-T. gondii in samples which were possible to obtain the serum. Serology was performed in 54 serum samples from different species of wild birds and mammals by the Modified Agglutination Test (MAT). From this total, 18 samples (five from birds and 13 from mammals) were seropositive for antibodies anti-T. gondii. For the isolation of the parasite, mice bioassay was performed. Brain and heart homogenates were submitted to peptic digestion and were inoculated in groups of five mice per animal sampled. Tissues of mice that died were examined for the presence of T. gondii. Mice were bled six weeks post-inoculation, and their sera were tested for anti-T. gondii antibodies by MAT. Surviving mice were euthanized two months after the inoculation and their brains were examined for the presence of T.gondii tissue cysts. T. gondii was isolated in 18 wild animals (16 from different species of mammals and two from birds) from different locations. T. gondii was isolated from one burrowing owl (Athene cunicularia), one lineated woodpecker (Dryocopus lienatus), three collared anteater (Tamandua tetradactyla), one hoary fox (Pseudalopex vetulus), one maned wolf (Chrysocyon brachyurus), one oncilla (Leopardus tigrinus), one opossum (Didelphis marsupialis), one paca (Cuniculus paca), three nine-banded armadillo (Dasypus novemcinctus), two six-banded armadillo (Euphractus sexcincticus) and three white-lipped peccary (Tayassu pecari). Sixteen of the 18 isolates were lethal to 100% of inoculated mice. The genotypic characterization was performed using 12 PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) Primary tissue samples which were positive in a trial PCR were also submitted to genotypic characterization. It was possible, by PCR/RFLP, to obtain the complete genotype of 22 samples, 15 from isolates and seven from primary tissue samples. It was not possible to accomplish the complete genotypic characterization in three isolates; one burrowing owl, one opossum and one sixbanded armadillo. In this 22 samples characterized, a total of 17 different genotypes were found with 13 of them described for the first time. Mortality of infected mice was compared between the different alleles of the marker CS3 in the 15 genotypes originated from isolates, which seven were type I, six were type II and alleles u-1 and u-3 were found in one isolate each. All the isolates presented 100% of mortality in infected mice.

Para avaliar o efeito de diferentes linhagens de leveduras, Saccharomyces cerevisiae, vivas, na redução de aflatoxicoses e, contribuir para o entendimento do modo de ação destas leveduras sobre aflatoxina B1 marcada com trítio (AFB13H), foram conduzidos três experimentos. No primeiro experimento, foram utilizados ratos Wistar para investigar o efeito de duas linhagens de S. cerevisiae (Y1026 e Y904), e da suplementação com aminoácidos na redução de aflatoxicoses. O bioensaio, em delineamento inteiramente casualizado, foi conduzido por 28 dias para avaliar sete tratamentos (dietas), sendo um livre de aflatoxinas e seis contendo 400&#61549;g kg-1 de aflatoxinas; destes, cinco com leveduras, a saber: Y1026 (níveis de 0,5; 1,0 e 5,0%) e Y904 (níveis de 1% e 1%+1000ppm de metionina + 1000 ppm de cisteína). Não foram observadas diferenças estatistiticamente significativas no consumo de alimentos, ganho de peso, conversão alimentar e função hepática entre os animais submetidos aos diferentes tratamentos. No entanto, o exame histopatológico revelou que os animais que receberam aflatoxinas sem leveduras sofreram danos mais severos em relação aos que receberam aflatoxinas juntamente com leveduras, os quais apresentaram poucos danos celulares. Conclui-se que, as duas linhagens de leveduras em todas as situações estudadas apresentaram capacidade de reduzir as aflatoxicoses. O segundo ensaio foi conduzido com o objetivo de investigar o efeito de diferentes doses da levedura Y1026 no controle de aflatoxicoses em ratos. Neste bioensaio, os animais foram distribuídos em gaiolas individuais ao acaso, e foram submetidos a 7 tratamentos (dietas) por 60 dias, sendo uma sem aflatoxinas e seis contaminadas com 550 &#61549;g kg-1 de aflatoxinas, das quais cinco contendo a levedura Y1026 (doses: 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 e 5,0%). Foram realizadas análises sobre o aproveitamento do alimento, funções hepáticas e tecido hepático. O consumo de alimentos pelos animais alimentados com dieta livre de aflatoxinas foi maior do que pelos animais que receberam dietas contaminadas com a toxina, os demais parâmetros para julgamento do aproveitamento dos alimentos não diferiram estatisticamente entre os animais que foram submetidos a ambos os tratamentos. A atividade de enzimas hepáticas foi maior nos animais que não receberam a toxina do que nos demais. O exame histopatológico revelou que os animais que receberam aflatoxinas e aflatoxinas mais 0,2 ou 0,5% da levedura apresentaram sinais claros de hepatotoxidez e que os demais animais que ingeriram os níveis mais altos da levedura sofreram poucos danos celulares. Conclui-se que, a dose de levedura Y1026 aplicada foi determinante na redução das aflatoxicoses em ratos Wistar. No último bioensaio, trinta ratos foram alimentados por 28 dias seguindo-se quatro tratamentos (dietas): uma dieta livre de aflatoxinas e as outras três contaminadas com 500 &#61549;g kg 1 de aflatoxina, sendo uma o controle com aflatoxinas e as outras duas na presença de 1% de levedura Y1026 ou Y904. No 18º dia, seis animais de cada um dos tratamentos que recebiam aflatoxinas foram transferidos para gaiolas metabólicas, onde permaneceram por cinco dias em adaptação e, no 23º dia, estes receberam, por via oral, uma dose simples de 2&#61549;Ci/animal de AFB13H. Os animais restantes (três ratos em cada um dos tratamentos) foram utilizados nos exames histopatológicos. A radioatividade foi determinada 12, 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a introdução do material radioativo nos animais. Os animais que receberam dietas contendo as leveduras apresentaram a absorção, a distribuição e a excreção da radioatividade mais lenta do que aqueles que não receberam os probióticos. O exame histopatológico revelou que os animais que ingeriram leveduras sofreram poucos danos celulares e que aqueles que não receberam levedura foram muito afetados. As leveduras apresentaram habilidade de reduzir aflatoxicoses e modificaram a absorção, a distribuição e a excreção da radioatividade de AFB13H em ratos Wistar. / The capacity of Saccharomyces cerevisiae, from two Strain, to reduce aflatoxicosis and the effect of yeast cells on tritium-labeled B1 aflatoxin (AFB13H) were investigated in three distinct studies. The effects of S. cerevisiae Y1026 and Y904 strains and diets amended with amino acids on the reduction of aflatoxicosis in Wistar rats were evaluated in the first study. A completely randomized block-designed bioassay with Wistar rats was conducted to evaluate seven formulations (Treatments), which consisted of an aflatoxin-free formulation and six formulations with 400 &#61549;g kg-1 of aflatoxins. Of these, three formulations had the yeast strain Y1026 (at 0.5, 1.0 and 5.0%) and two had the strain Y904 (at 1% and 1%+1000ppm of methionine + 1000 ppm of cysteine). No statistical differences were observed for the food consumption, weights of the body organs, feed conversion and liver function between the animals fed the different treatments. Histopathological analysis revealed that animals fed aflatoxins diet without yeast cells had liver damage caused by the toxins and those that were fed aflatoxin-diet amended with yeast cells had less liver tissue damage. Therefore, the results obtained suggested that the presence of either yeast strain in the formulations caused a reduction in aflatoxicosis. The second study was conducted to investigate the effect of different dosages of the yeast strain Y1026 on the control of aflatoxicosis in rats. The bioassay was conducted with rats randomly placed in individual cages and fed seven different diets (7 treatments) for 60 days. These were an aflatoxin-free formulation and six others containing aflatoxins at 550 &#61549;g kg-1, of which five had the yeast strain Y1026 (concentrations at 0.2; 0.5; 1.0; 2.0 and 5%). Feed conversion, liver functions indexes and liver tissue parameters were evaluated. The activity of the liver enzymes was greater in animals that fed the toxin-free diet when compared to other animals. Histopathological analysis showed that animals fed aflatoxin containing diets with and without 0.2 or 0.5% yeast cells showed clear signs of hepatotoxicity, while animals that were fed diets with higher concentrations of yeast cells had less liver tissue damage. The concentration of the yeast cells (Y1026) used in the formulations was correlated with the reduction of aflatoxicosis in Wistar rats. The third study fed Wistar rats an aflatoxin-free diet and diets with aflatoxins (at 500 &#61549;g kg 1) and aflatoxin amended with a 1% concentration of the yeast strains Y1026 or Y904. In this study, six animals from each group fed the aflatoxin-diets were transferred to metabolic cages and received a single oral dose of AFB13H at 2&#61549;Ci/animal. Three animals of each treatment were kept at the initial conditions and their liver tissues were used for histopathological analysis. Radiation levels in the animals were monitored at 12, 24, 48, 72, 96 and 120 h after receiving the labeled aflatoxin. Animals fed diets with active yeast cells had absorption, distribution and excretion levels of the labeled toxin different than those that did not receive the probiotic. Histopathological analysis showed that animals fed diets with yeast cells had less liver tissue damage while those fed the aflatoxin-diet had significantly higher liver damage. Therefore, these results indicate that active yeast cells have the ability to reduce aflatoxicosis and modify the absorption, distribution and excretion of radioactivity from AFB13H in Wistar rats.

Orientador: Edivaldo Domingues Velini / Resumo: Esta pesquisa foi realizada em Campinas SP/Brasil e teve como o objetivo estudar a persistência do herbicida sulfentrazone em solos cultivados com cana-deaçúcar e soja, e nesta, os efeitos da toxicidade do resíduo do herbicida nas culturas sucedâneas de milheto, girassol, aveia, trigo e feijão. Os solos dos ensaios com a soja e a cana-de-açúcar tiveram as seguintes características, respectivamente, 46% e 23% da argila; 12% e 13% do silte; 42% e 64% da areia 4% e 1% de MO e com pHs de 5,.8 e 6,4. As experiências foram projetadas em blocos ao acaso com 5 repetições. As amostras do solo foram coletadas na profundidade de 0-10cm, de 0-704 DAT (23 amostras) e de 0-539 DAT (24 amostras) nos experimentos de cana-de-açúcar e soja, respectivamente. A persistência do sulfentrazone foi avaliada por bioensaios usando a beterraba como a planta do teste. No ensaio com a cana-deaçúcar, os efeitos do sulfentrazone na beterraba foram detectados até 601 e 704 DAT para 0,6 e 1,2 kg a.i./ha, respectivamente. No ensaio com a soja, foram observados, os efeitos das mesmas doses até 376 e 539 DAT. Pelas análises das diversas características de desenvolvimento nas nas culturas que sucederam a soja, foi demonstrado que o resíduo do sulfentrazone afetou crescimento e o rendimento das culturas de milheto e aveia; por outro lado, o girassol e o feijão não foram afetados; o trigo foi afetado, somente, pela dose mais elevada. / Abstract: This research was carried out in Campinas - SP / Brazil and had as objective to study the residual effects and persistence of sulfentrazone in sugarcane and soybean ecosystems and the toxicity of the residues of this herbicide to millet, sunflower, oats, wheat and beans cultivated in succession to soybean. The soils of the soybean and sugarcane fields had, respectively, 46% and 23% of clay; 12% and 13% of silt; 42% and 64% of sand 4% and y% of OM and pHs of 5,8 and 1,1.The experiments were designed in randomized blocks with 5 replications. Soil samples were collected at the depth of 0-10cm, from 0-704 DAT (23 timings) and from 0-539 DAT (24 timings) in sugarcane and soybean experiments, respectively. The persistence of sulfentrazone was evaluated by bioassay using sugar beet as test plant. In sugarcane field, the effects of sulfentrazone on sugar beet were detected up to 601 and 704 DAT for 0,6 and 1,2 kg a.i./ha, respectively. In soybean field the effects of the same rates were noticed up to 376 and 539 DAT. Concerning to the crops in succession to soybeans, the residues of sulfentrazone affected the growth and yield of millet and oats; sunflower and beans were not affected; wheat was affected by the higher rate, only. / Doutor

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The sediment has been shown as an important indicator of the health of aquatic ecosystems, since most contaminants of a basin river system are washed down into the aquatic systems and can be deposited in this compartment. In this way, based on the importance of sediment to the water quality, the main objective of this work was to evaluate the quality of the sediment of the River João Leite, upstream and downstream of a dam public supply, through ecotoxicological of sediments compared to the physical-chemical parameters in two seasons (dry and rainy season). The work presented here addresses important aspects when assessing sediment quality, through four articles divided into chapters. The first chapter is the characterization of the space-exploratory study area considering its features and the relationship between the type of soil, polluting sources and composition of the sediment. The second chapter corresponds to a physical-chemical characterization of the sampled site as well as the lifting of a possible contaminant (metals), and its potential for bioavailability. The third and fourth chapters are focused on ecotoxicological assessment, where the organisms-test Ceriodaphnia dubia were used in the third chapter and Branchiura sowerbyi in the fourth chapter. The results of this study point to the need to deploy evaluations focused on the sediments of the River João Leite as everyday monitoring, since the site has problems of degradation, with high degree of anthropization, together with the lack of soil management and conservation. To the metals contaminants, the environment revealed toxicity unlikely to uncertain. And toxicity tests with the test organisms, Ceriodaphnia dubia and Branchiura sowerbyi, revealed in some cases acute effect, but mostly chronic effect and possible effect hormetc, which are evidence of an environment that is suffering disruptions, whether from metals or is by the performance of other contaminants as non-ionic organic compounds, such as pesticides, widely used in the region. Thus, this category of work being pioneered in the region is evident the need for further research aimed at this type of compartment (sediment) and especially that such studies become part of regular monitoring aimed to ensure water quality of the River João Leite. / O monitoramento da qualidade ambiental aquática é o modo de detectar alterações em suas características essenciais à vida. O Ribeirão João Leite, situado no estado de Goiás, evidencia bem a necessidade de constante monitoramento, visto sua importância socioeconômica, o crescimento acelerado e desordenado que assola a região, a utilização do solo voltada na sua maior parte para agricultura e pecuária e principalmente devido ao barramento de água destinada ao abastecimento público. Pesquisas voltadas para coluna d’água são desenvolvidas de forma corriqueira para o local. Entretanto avaliações voltadas para a qualidade dos sedimentos nesse ambiente são inexistentes, apesar da importância de tal compartimento. Os sedimentos têm se mostrado como um importante indicador da saúde dos ecossistemas aquáticos, visto que a maioria dos contaminantes de uma bacia hidrográfica são carreados para dentro dos sistemas aquáticos e podem ser depositados neste compartimento. Dessa forma, baseado na importância do sedimento para a qualidade da água, o objetivo principal desse trabalho foi avaliar a qualidade do sedimento do Ribeirão João Leite, a montante e a jusante de uma barragem de abastecimento público, por meio de ensaios ecotoxicológicos de sedimento em comparação com os parâmetros físicos-químicos em duas épocas do ano (estação chuvosa e seca). O trabalho aqui apresentado aborda aspectos importantes quando se trata de avaliar a qualidade de sedimentos, por meio de quatro artigos divididos em capítulos. O primeiro capítulo corresponde à caracterização exploratória-espacial da área de estudo considerando suas características e as relações entre o tipo de solo, fontes poluidoras e a composição dos sedimentos. O segundo capítulo corresponde à caracterização físico-química do local amostrado bem como o levantamento de um possível contaminante (metais), e o seu potencial para biodisponibilidade. O terceiro e quarto capítulos estão voltados à avaliação ecotoxicológica, onde foram utilizados os organismos-teste Ceriodaphnia dubia no terceiro capítulo, e Branchiura sowerbyi no quarto capítulo. Os resultados desse estudo apontam para necessidade de implantar avaliações voltadas para os sedimentos do Ribeirão João Leite como monitoramento corriqueiro, visto que o local possui problemas de degradação, com elevado grau de antropização aliado à falta de manejo e conservação dos solos. Para os contaminantes metais o ambiente revelou toxicidade de improvável à incerta. Os testes de toxicidade com os organismos-teste, Ceriodaphnia dubia e Branchiura sowerbyi, revelaram em alguns casos efeito agudo, mas principalmente efeito crônico e possível efeito hormético, que são evidências de um ambiente que está sofrendo perturbações, seja por metais, seja pela atuação de outros contaminantes como compostos orgânicos não iônicos, como pesticidas, muito utilizados na região. Desta forma, sendo esta categoria de trabalho pioneira na região é evidente a necessidade de que se realizem mais estudos voltados para esse tipo de compartimento (sedimentos) e principalmente que tais estudos se tornem parte integrante dos monitoramentos periódicos voltados para garantir a qualidade da água do Ribeirão João Leite.