Orientador: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Ana Carolina Borsanelli / Banca: Vera Lúcia Lorenzetti Magalhães Curci / Resumo: A periodontite é uma infecção multifatorial já descrita em diferentes espécies, dentre elas os ruminantes domésticos. Em bovinos, a doença relaciona-se, dentre outros fatores, a uma microbiota potencialmente patogênica que, em sua maioria, encontra-se alojada no biofilme bucal destes animais. Biofilmes são estruturas organizadas, nas quais os constituintes convivem em cooperativismo metabólico e oferecem benefícios para a sobrevivência da microbiota local. Estas formações podem ser classificadas em supragengivais ou subgengivais, e quando mineralizadas, resultam na formação do cálculo. O cálculo supragengival em bovinos é visualizado como um depósito fortemente aderido ao dente, pigmentado de marrom ou preto que no ser humano e em outras espécies já foi descrito como um fator predisponente às doenças periodontais. O objetivo do presente estudo foi caracterizar estrutural e quimicamente o biofilme supragengival de bovinos utilizando-se das técnicas de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia de dispersão de energia (EDS), respectivamente, e relacionar os achados ao quadro clínico bucal dos animais (presença de periodontite). Foram coletados 11 dentes primeiro-molares de diferentes animais; cinco amostras sem pigmentação visível, e seis amostras pigmentadas de preto, que foram submetidas inicialmente a MEV, e posteriormente, foram selecionadas três áreas aleatórias para realização da EDS. Os resultados da MEV revelaram formações estruturais com presença de áre... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontitis is a multifactorial infection already existing in different species, among them domestic ruminants. In bovines, this disease is related, among other factors, to a potentially pathogenic microbiota that, for the most part, is housed in the oral biofilm of the animals. Biofilms are organized structures that favor the survival of the local microbiota. Biofilms can be classified as supragingival or subgingival, and when mineralized, they form the dental calculus. The supragingival calculus in bovines is visualized as pigmented brown or black deposit, already described in humans as a predisposing factor to periodontal diseases. The aim of this study was to characterize the structural and chemical the supragingival biofilm of bovines using scanning electron microscopy (SEM) and energy dispersive spectroscopy (EDS), respectively, and to relate them to the clinical status of the animals (periodontitis). Eleven premolars teeth were collected; five non-pigmented samples, and six black pigmented samples, were initially submitted to SEM and, subsequently, to EDS. SEM images revealed irregular structures similar to mineral deposits. The EDS results showed a relation between the presence of iron (p<0,014) and magnesium (p<0,001) with the occurrence of periodontitis. Regarding pigmentation, carbon (p<0,039), manganese (p<0,007) and iron (p<0,015) were the statistically significant elements. The results of the comparison between the elements, regardless of the periodontal condi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é caracterizada pela expressão do padrão de adesão agregativa (AA) em células HEp-2 e sua classificação em típica e atípica se baseia na presença ou ausência de aggR, respectivamente. O gene shf de EAEC codifica uma proteína com similaridade a IcaB, relacionada à formação de biofilme. Os objetivos deste estudo foram verificar a prevalência de shf em 113 amostras de EAEC isoladas no Brasil e investigar o envolvimento de Shf na formação de biofilme e no padrão AA de EAEC típica e atípica. O gene shf foi detectado em 25 EAEC típicas e em 16 atípicas. As amostras shf+ foram analisadas quanto ao sorogrupo, adesão em células HEp-2 e formação de biofilme. Nenhuma dessas características foi associada a shf e a formação de biofilme foi detectada em todas essas amostras. A mutagênese em shf resultou na diminuição da capacidade de formação de biofilme e na incapacidade de adesão. Foi demonstrado que o gene shf é prevalente e que Shf participa do estabelecimento do padrão AA e de formação de biofilme em EAEC típica e atípica. / Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is characterized by the expression of the aggregative adherence (AA) pattern to HEp-2 cells. The classification of EAEC in typical and atypical is based on the presence or absence of aggR, respectively. The shf gene encodes a protein with similarity to IcaB, associated with biofilm formation. The objectives of this study were to verify the prevalence of shf in 113 EAEC strains isolated in Brazil and investigate the role of the Shf in the establishment of the AA pattern and biofilm of typical and atypical EAEC. The shf gene was detected in 25 typical and in 16 atypical EAEC. The shf+ strains were analyzed regarding serogroups, adherence to HEp-2 cells and the ability to form biofilm. None of these characteristics was associated with the presence of shf and all strains were able to produce biofilm. The mutagenesis in shf reduced the biofilm formation and abolished the adherence to HEp-2 cells. This study demonstrated that shf is prevalent and Shf is involved in the AA and biofilm formation of typical and atypical EAEC.

As Escherichia coli enteropatogênica atípicas (EPECa) são capazes de causar a lesão A/E e não transportam o pEAF. Biofilmes microbianos são definidos como comunidades complexas formadas por microrganismos aderidos a superfícies envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de formação de biofilme de 92 amostras de EPEC atípicas em superfícies abióticas e células pré-fixadas, utilizando três metodologias (contagem de UFC/cm2), ensaio colorimétrico com cristal violeta e CLSM). O gene shf e bfpA parecem não ter relação com a formação de biofilme. Não houve diferença significativa de formação de biofilme nas superfícies testadas. Através de CLSM foi possível verificar a formação de biofilme em EPECa. Os biofilmes visualizados em CLSM revelaram uma grande heterogeneidade das amostras. Uma metodologia qualitativa, como CLSM deve ser empregada para indicar a formação de biofilme. A adesão e formação de biofilme por EPEC atípica de longo período pode ser uma possível explicação para os casos de diarréia persistente. / The atypical Escherichia coli enteropathogenic (EPECa) are capable to cause the lesion A/E and they don\'t transport the pEAF. Microbial biofilms are defined as complex communities formed by microrganisms adhered to surfaces embedded in an exopolysacharidic matrix. The objective of this study was to verify the capacity of formation of biofilm of 92 strains of atypical EPEC in abiotics and pre-fixed cells surfaces, using three methodologies (counting of UFC/cm2), colorimetric assay with violet crystal and CLSM). The gene shf and bfpA seem not to have relationship with the biofilm formation. There was not significant difference of biofilm formation in the tested surfaces. Through CLSM it was possible to verify the biofilm formation in EPECa. The biofilms visualized in CLSM revealed a great heterogeneity of the strains. A qualitative methodology, like CLSM should be used to indicate the biofilm formation. The adhesion and biofilm formation for atypical EPEC of long period can be a possible explanation for the cases of persistent diarrhea.

Os biofilmes constituem uma forma de crescimento que permite a maior sobrevivência e resistência de microrganismos a agentes de controle como antibióticos e desinfetantes. Apesar da grande disponibilidade de agentes antimicrobianos no mercado, há escassez de produtos específicos e efetivos na erradicação/inibição de biofilmes. Existe atualmente grande interesse na seleção de moléculas capazes de inibir o crescimento dos biofilmes ou removê-los quando já estabelecidos. Doenças como fibrose cística (P. aeruginosa) e cárie dentária (S. mutans), são patologias intrinsecamente ligadas à formação de biofilmes. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de chalconas sintéticas e derivados no controle e erradicação de biofilmes. As chalconas foram testadas quanto à capacidade de inibir a formação de biofilme e de remover biofilmes pré-estabelecidos. Os biofilmes de P. aeruginosa foram inibidos pela presença da molécula (E)-1-(3-hidroxinaftalen-2-il)-3-fenilprop-2-em-1-ona (11), mostrando redução de 48,8% na biomassa e 60,2% na viabilidade. A redução máxima na biomassa atingiu 70,9%. Já para o tratamento de biofilmes pré-estabelecidos, a molécula (1E,4E)-1,5-difenilpenta-1,4-dien-3-ona (10) mostrou redução de 53,5% na biomassa do biofilme de P. aeruginosa. Na formação do biofilme de S. mutans, a presença da molécula (1E, 4E)-1,5-bis(4-bromofenil)penta-1,4-dien-3-ona (15) reduziu a biomassa em 67,4%. Em concentrações elevadas essa redução chegou a 95,1%. Em biofilmes pré-estabelecidos de S. mutans, o tratamento com a molécula (2E,4E)-1,5-difenilpenta-2,4-dien-1-ona (12) reduziu a biomassa celular em 62,7%, e a viabilidade celular em 58,4%. Já a molécula (E)-3-(2-hidroxifenil)-1-fenilprop-2-en-1-ona (21), quando utilizada no tratamento de biofilmes pré-estabelecidos, mostrou redução de 26,4% na biomassa e 91,6% na viabilidade de S. mutans; além de evidenciar danos à estrutura celular do microrganismo. Todas as moléculas supracitadas promoveram redução na espessura dos biofilmes. Os antibióticos ampicilina e polimixina foram menos eficientes na remoção de biofilmes comparativamente às moléculas testadas. As moléculas não apresentaram CIM frente às bactérias, entretanto, afetaram a viabilidade celular. O tratamento da superfície de poliestireno com as chalconas não impediu a adesão das bactérias, e resultou na redução da hidrofobicidade do material. A superfície celular de S. mutans apresentou predomínio de cargas negativas e forte caráter hidrofóbico enquanto que P. aeruginosa apresentou baixa hidrofobicidade além de caráter básico. Os resultados evidenciam a potencialidade do uso das chalconas e seus derivados para o controle e erradicação de biofilmes Streptococcus mutans e Pseudomonas aeruginosa. / Biofilms constitute a growth mode which allows greatest survival and resistance of microorganisms to antibiotics and disinfectants. Despite the wide availability of antimicrobial agents in the market, there are few specific and effective products to the eradication / inhibition of biofilms. Thus, there is a great interest in the search of molecules able to inhibit biofilms or remove them once established. Diseases such as cystic fibrosis (P. aeruginosa) and dental caries (S. mutans), are intrinsically linked to the formation of biofilms. The aim of this study was to evaluate the potential of chalcones and their synthetic derivatives to the control and eradication of biofilms. The chalcones were tested for the ability to inhibit biofilm formation and also to remove pre-established biofilms. Biofilms of P. aeruginosa was inhibited by the presence of the molecule (E) -1- (3-hydroxynaphthalen-2-yl) -3-phenylprop-2-en-1-one (11) showing reduction of 48.8% biomass and 60.2% viability. The maximum reduction in biomass reached 70.9%. For the treatment of pre-established biofilms, the molecule (1E, 4E) -1,5-difenilpenta-1,4-dien-3-one (10) showed a 53.5% reduction in biomass of P. aeruginosa biofilm. Biofilms of S. mutans, growing in the the presence of the molecule (1E, 4E) -1,5-bis (4-bromophenyl) penta-1,4-dien-3-one (15) showed a biomass reduction of 67.4 %. At higher concentrations this reduction reached 95.1%. In pre-established biofilms of S. mutans, treatment with the molecule (2E, 4E) -1,5-difenilpenta-2,4-dien-1-one (12) reduced cell biomass in 62.7%, and cell viability by 58.4%. The molecule (E) -3- (2-hydroxyphenyl) -1-phenylprop-2-en-1-one (21), when used in the treatment of pre-established biofilms, showed 26.4% reduction in biomass and 91.6% in the viability of S. mutans; furthermore, the chalcone 21 caused damage to the cellular structure of the microorganism. All the aforementioned molecules promoted a reduction in the thickness of biofilms. The antibiotics polymyxin and ampicillin were less efficient on removing biofilms comparatively to the chalcones. The molecules affected cell viability however, no MIC was observed under the range of concentrations evaluated. The treatment of the polystyrene surface with chalcones did not prevent bacterial adhesion moreover, hydrophobicity of the material was reduced. S. mutans cell surface showed a predominance of negative charges and strong hydrophobic character while P. aeruginosa showed low hydrophobicity and basic character. The results demonstrate that synthetic chalcones and derivatives are potential candidates to the control and eradication of Streptococcus mutans and Pseudomonas aeruginosa biofilms.

Prevotella intermedia e Prevotella nigrescens são espécies comumente associadas Porphyromonas gingivalis. os objetivos foram verificar a co-agregação entre cepas de P. intermedia, P. nigrescens e P. gingivalis; quantificar a biomassa, avaliar a proporção dos microrganismos nos biofilmes mistos; verificar a interferência do co-cultivo pela técnica de dois compartimentos, avaliar os biofilmes em ensaios de Hibridização In Situ (FISH) e verificar o papel dos genes PINA0102 e PIN0398 de P. intermedia no biofilme. Assim, 9 isolados clínicos de P. intermedia e 5 de P. nigrescens, as cepas padrão P. intermedia 17, P. intermedia 25611, P. nigrescens 33563, P. gingivalis W83, P. gingivalis 33277, os mutantes Pi17D0398 e Pi17D0102 foram avaliados em variados consórcios. Os resultados mostraram que as interações investigadas são cepa específicas. / Prevotella intermedia and Prevotella nigrescens are commonly associated with periodontal diseases. The goals of this study were to determine the co-aggregation of strains of P. intermedia, P. nigrescens and P. gingivalis; to quantify the biomass of these associations, to evaluate the ratio of these microorganisms in heterotypic biofilms, to verify the modulation of biofilms in co-culture using a trans-well system; to evaluate the structure of the biofilms by Fluorescent Hybridization In Situ (FISH) and to determine the role of genes PINA0102 and PIN0398 of P. intermedia in the modulation of its biofilm. Therefore, 9 clinical isolates of P. intermedia, 5 of P. nigrescens, type strains P. intermedia 17, P. intermedia 25611, P. nigrescens 33563, P. gingivalis W83, P. gingivalis 33277 and mutant strains Pi17D0398 and Pi17D0102 were grown in consortia of two strains. Our data demonstrate that the associations of P. intermedia, P. nigrescens and P. gingivalis are strain-specific.

As plantas quando colonizadas produzem diversas enzimas de defesa que podem impedir o estabelecimento de microrganismos. Esta condição adversa na planta hospedeira gera uma resposta do microrganismo, a qual está associada à síntese de proteínas e outras moléculas que atuam na sua interação com a planta e alteram a comunidade microbiana associada. Todos os organismos respondem a essa condição, estabelecendo biofilmes, ou sintetizando um grupo de moléculas e proteínas que os protegem de danos e facilita a recuperação. Estas são chamadas proteínas de choque térmico (HSPs), as quais não foram ainda estudadas na interação Methylobacterium - planta. As bactérias do gênero Methylobacterium são metilotróficas facultativas da classe Alfa-proteobactéria, encontradas em relações epifíticas e endofíticas com diferentes espécies vegetais. Assim, o presente trabalho teve como objetivos avaliar o efeito da deficiência da produção de biofilme e de Acil-Homoserina-Lactonas (AHLs), e do estresse térmico de M. extorquens na colonização da planta hospedeira (Saccharum sp.). Para isso, foram usadas linhagens defectivas para produção de biofilme e AHLs, juntamente com a linhagem selvagem submetida ou não ao estresse térmico. Os resultados obtidos mostram a complexidade dos mecanismos envolvidos na produção de biofilme e moléculas AHLs. O estresse térmico não afetou a colonização das raízes nem de colmos após 5 dias de inóculo, porém causou uma diminuição da colonizacão do colmo após 15 dias. A mutação para produção de AHL não causou nenhuma diferença significativa na colonização da planta hospedeira, no entanto o mutante para biofilme apresentou uma diminuição significativa da colonização tanto de raízes quanto de colmos, mostrando a grande importância da formação de biofilme na colonização da planta hospedeira. Entretanto, quando esta linhagem foi coinoculada com uma linhagem transformada (ARGFP) este resultado não foi observado. Os demais tratamentos após co-inoculação com a linhagem ARGFP apresentaram o mesmo padrão de colonização. O estudo proteômico de M. extorquens detectou um grande número de proteínas induzidas ou suprimidas nos tratamentos avaliados que podem estar associadas às alterações no padrão de interação desta bactéria com a planta hospedeira. A identificação dessas proteínas auxiliará a compreensão e o maior entendimento dos fatores envolvidos na interação bactéria-planta. / Plants produce a variety of defense enzymes when colonized that can impair the microorganisms\' establishment. This adverse condition in the host plant lead to a response from the microorganism, which is associated with the synthesis of a set of proteins and other molecules that affect the interaction with the host and shift the bacterial community associated. All organisms respond to this condition by establishing biofilms, or synthesizing a group of proteins and molecules that protect them from injuries and help them recover from damages. They are called heat shock proteins (HSPs), which is still not studied in Methylobacterium-plant interaction. The methylotrophic bacteria of the genus Methylobacterium are found in epiphytic and endophytic association with different plant species. So, in this present work the effect of a deficiency in biofilm and acyl-homoserine-lactones (AHLs) production and the effect of heat shock of M. extorquens on the host colonization (Saccharum sp.) was assessed. Defective strains for biofilm and AHLs production were used. Also the wild type AR 1.6/2 and this strain submitted to heat shock was evaluated. The results demonstrated that the mechanisms associated to biofilm and AHLs production are very complex. The heat stress has no effect on roots or stems colonization after 5 days of the inoculum, but was associated to reduction of bacterial density in stems after 15 days. The strain defective for AHL production showed similar colonization profile with wild type strain, while the biofilm mutant colonized the host plant in low density, suggesting the role of this process in plant colonization. Likewise, coinoculation of this strain with ARGFP target strain, which is AHL producer, the low density of this biofilm mutant was observed. The other treatments after coinoculation with ARGFP strain showed similar result when inoculated alone. A proteomic study of the strains showed that synthesis of many proteins were induced or suppressed in evaluated treatments, which proteins could be associated to shift in the bacteria-plant interaction. The identification of these proteins will contribute to a better understanding of the factors related to bacteria-plant interaction.

O Bacillus cereus é um patógeno amplamente distribuído na natureza, relacionado a intoxicações alimentares e causador da coagulação doce do leite. A intoxicação pode ocorrer após a ingestão de alimentos nos quais a bactéria produziu a toxina. Em laticínios, o B. cereus é problemático por sua habilidade de formar esporos resistentes ao calor e sobreviver aos tratamentos térmicos, como a pasteurização e UHT. As espécies de Bacillus são freqüentemente isoladas de leite pasteurizado e UHT e evidências indicam que os biofilmes formados nas superfícies dos equipamentos de processamento são uma das principais fontes de contaminação. No biofilme, as células ou esporos aderidos, têm aumentada sua resistência e podem resistir ao processo de sanificação, se tornando focos de disseminação de bactérias no processo. A matriz polimérica do biofilme reage e neutraliza os agentes sanificantes, expondo as bactérias em seu interior a doses subletais, podendo levar a aquisição de resistência. Neste estudo, biofilmes de células vegetativas B. cereus foram desenvolvidos na superfície de aço inoxidável, tipo 304, com filme de condicionamento de leite. A adesão média das células foi de 1,4 x 105UFC/cm2. Também foram desenvolvidos biofilmes de esporos, com adesão média em aço inoxidável de 1,4 x 104UFC/cm2. Foi avaliada a resistência das células vegetativas e esporos de B. cereus em biofilmes, ao processo simulado de higienização por clean in place (CIP) realizado em laticínios. Após a limpeza a adesão das células vegetativas em aço inoxidável foi reduzida a aproximadamente 1CFU/cm2. Após a sanificação, os resultados permaneceram inalterados. A contaminação remanescente foi relacionada com a maior resistência das células nos biofilmes formados. Após a limpeza e sanificação a adesão média dos esporos foi de 8,9 x 101 UFC/cm2 e 3,3 x 101 UFC/cm2, respectivamente. Tendo em vista este resultado, foi observado que esporos de B. cereus são mais difíceis de remover de superfícies de aço inoxidável do que células vegetativas, com procedimentos CIP. Finalmente, foi realizada a exposição de células vegetativas de B. cereus a três concentrações subletais (3,9; 1,8 e 0,9µg/mL) de cloreto de alquil amidopropil dimetil benzil amônio para avaliação da adaptação pelo método da concentração inibitória mínima (CIM). A aquisição de resistência foi avaliada pela comparação do valor inicial de CIM (7,4µg/mL), com os valores finais, após 28 dias de exposição. Após o período de adaptação, o valor de CIM encontrado foi o dobro do original (14,9µg/mL) indicando aquisição de resistência ao sanificante pela cepa. Foi constatado ainda que o cultivo da cepa na menor concentração subletal apresentou resultados mais coerentes, sugerindo que exposição a doses subletais mais brandas resulta em uma maior resposta adaptativa. / Bacillus cereus is a pathogen widely distributed in the environment and a serious problem in the dairy industry because of its ability to form heat-resistant spores that can survive pasteurization and UHT treatments. This bacteria is responsible for foodborne diseases in man due to production of toxins that may cause gastroenteritis, diarrhoea and vomiting. In addition, B. cereus is responsible for spoilage of pasteurized milk and cream referred to as \"sweet curdling\". Bacillus strains are frequently isolated from pasteurized and UHT treated milk and evidence indicates that biofilm formed on processing equipment surfaces are major sources of milk contamination. In biofilms, adherent cells and spores acquire increased resistance and persist to the sanitization process, becoming sources of bacteria dissemination in food processing. The extracellular polymeric matrix neutralizes the sanitizing agents and exposing the bacteria in biofilms to sublethal concentrations can lead to an increased resistance. In this study, biofilms of B. cereus vegetative cells were developed in a 304 stainless steel (SS) surface with a milk conditioning film. The mean adhesion of cells on SS surface was 1.4 x 105CFU/cm2. Biofilms of B. cereus spores were also developed, and the mean adhesion found was 1.4 x 104CFU/cm2. The resistance of B. cereus vegetative cells and spores in biofilms to a simulated clean-in-place (CIP) procedure used in dairy industry was evaluated. After cleaning procedure, the population of vegetative cells in the SS surface was reduced to approximated 1 CFU/cm2. After sanitizing procedure, the cell count remained unaltered. The remaining contamination was related with the increased resistance of cells in the developed biofilms. After cleaning and sanitizing procedures, the mean of spore adhesion found was 8.9 x 101 CFU/cm2 and 3.3 x 101 CFU/cm2, respectively. These results show that B. cereus spores are more difficult to remove from SS surfaces than vegetative cells using CIP procedures. Finally, B. cereus vegetative cells were exposed to three different sublethal concentrations (3.9; 1.8 and 0.9µg/mL) of alkyl amidopropyl dimethyl benzyl ammoniun cloride, for evaluation of adaptation, using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) test. The acquired resistance was evaluated by comparing the initial MIC value (7.4µg/mL) with final MICs, after 28 days of exposure. After the adaptation period, with exception of an experiment where the MIC was threefold the original value (29.8µg/mL), in the other experiments the MICs found was double (14.9µg/mL) of the original MIC, indicating acquisition of resistance by the B. cereus strain. It was observed that the growth of cells in the mildest sublethal concentration (0.9µg/mL) resulted in more consistent effects, suggesting that the exposure to mildest sublethal concentrations results in higher adaptive responses.

Na natureza, os microorganismos podem apresentar forma de vida planctônica ou podem estar aderidos a superfícies formando comunidades conhecidas como biofilmes. A formação de biofilmes na indústria alimentícia é uma constante preocupação visto que os microorganismos aderidos podem causar contaminações persistentes, levando a deterioração do alimento e a transmissão de doenças. Uma alternativa para evitar a adesão bacteriana e a formação de biofilmes é o pré-condicionamento de superfícies com biosurfatantes, que são compostos tensoativos de origem microbiana capazes de alterar as propriedades físico-químicas e conseqüentemente modificar as interações entre a bactéria e a superfície. Os biosurfatantes, surfactina obtida de Bacillus subtilis e ramnolipídeo de Pseudomonas aeruginosa, foram testados quanto a capacidade de evitar a adesão e remover biofilmes de bactérias patogênicas de interesse alimentar. Foram avaliadas culturas individuais e mistas de Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, e Salmonella Enteritidis utilizando-se como modelo superfícies de poliestireno. O pré-condicionamento da superfície com surfactina na concentração de 0,25% reduziu a adesão de Salmonella Enteritidis e Listeria monocytogenes em 42%, enquanto que o tratamento com ramnolipídeo a 1% reduziu a adesão de Listeria monocytogenes e Staphylococcus aureus ao poliestireno em 57,8% e 67,8% respectivamente. O condicionamento com os biosurfatantes não se mostrou eficiente na redução da adesão das culturas mistas das bactérias se comparado aos resultados obtidos para as culturas individuais. O poliestireno condicionado com os biosurfatantes apresentou redução na hidrofobicidade devido ao caráter aniônico destas moléculas. A repulsão eletrostática e a redução das interações hidrofóbicas promovidas pelo condicionamento do poliestireno com ramnolipídeo foram fatores determinantes na atividade antiadesiva observada para L. monocytogenes e S. aureus, entretanto os resultados obtidos para a superfície tratada com surfactina sugerem que outros parâmetros influenciaram nos resultados observados. Após 2 h de contato a surfactina na concentração de 0,1% promoveu a remoção de 63,7% do biofilme de S. aureus, 95,9% do biofilme de L. monocytogenes, 35,5% do biofilme de S. Enteritidis e 58,5% do biofilme da cultura mista das três bactérias. Já o ramnolipídeo na concentração de 0,25% removeu 58,5% do biofilme de S. aureus, 26,5% do biofilme de L. monocytogenes, 23,0 % do biofilme de S. Enteritidis e 24% do biofilme da cultura mista após 2 h contato. De modo geral, o aumento do tempo de contato e da concentração dos biosurfatantes reduziu a remoção dos biofilmes. A surfactina e o ramnolipídeo demonstraram potencial para uso como agentes anti-adesivos assim como para a remoção de biofilmes de bactérias patogênicas de importância alimentar. / In nature, microrganisms can live as planktonic cells or can be found living in communities attached in surfaces forming biofilms. Biofilm represents a great concern for food industry, since it can be a source of persistent contamination that can lead to food spoilage and the transmission of diseases. To avoid the adhesion of bacteria and the formation of biofilms, an alternative is the pre-conditioning of surfaces using biosurfactants that are microbial compounds that can modify the physico-chemical properties of the surfaces changing bacterial interactions and consequently adhesion. The biosurfactants, surfactin obtained from Bacillus subtilis and rhamnolipids from Pseudomonas aeruginosa, were evaluated as agents to avoid the adhesion and to disrupt biofilms of food-borne pathogenic bacteria. Individual cultures and mixed cultures of Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes e Salmonella Enteritidis were studied using polystyrene as the model surface. The pre-conditioning with surfactin 0,25% reduces in 42,0% the adhesion of L. monocytogenes and S. Enteritidis, whereas the treatment using rhamnolipids 1,0% reduced in 57,8% the adhesion of L. monocytogenes and in 67,8% the adhesion of S. aureus to polystyrene. The conditioning of surface with biosurfactants was less effective to avoid adhesion of mixed cultures of the bacteria when compared with the results obtained for individual cultures. The polystyrene surface conditioned with the biosurfactants showed a reduction in the hydrophobicity due to the anionic character of the molecules. The electrostatic repulsion and the reduction on hydrophobic interactions promoted by the conditioning of surface with rhamnolipids were determinant factors to explain the anti-adhesive activity observed for L. monocytogenes and S. aureus, however, the data obtained with surfactin suggest that other parameters have influenced the results observed. After 2 h contact with surfactin at 0,1% concentration, the pre-formed biofilms of S. aureus were reduced by 63,7%, L. monocytogenes biofilms were reduce by 95,9% , S. Enteritidis biofilms by 35,5% and the mixed culture biofilm by 58,5%. The rhamnolipids at 0,25% concentration removed 58,5% of biofilm of S. aureus, 26,5% of the biofilm of L. monocytogenes, 23,0% the biofilm of S. Enteritidis and 24,0% the biofilm of the mixed culture after 2 h of contact. In general, the increase in concentration of biosurfactants and in the time of contact decreases the biofilm remove percentage. These results demonstrate that surfactin and rhamnolipids present potential to be used as agents to control the attachment and to disrupt biofilms of food-borne pathogens.

A busca por embalagens flexíveis rapidamente degradáveis tem sido intensa nos anos mais recentes. Amidos de variadas fontes têm sido avaliados para a produção de filmes, sendo que a maioria destes apresenta boas características mecânicas e de barreira ao oxigênio, entretanto, uma série de limitações é observada com relação às suas características hidrofílicas e permeabilidade ao vapor d´água. O amido de ervilha normalmente apresenta teores mais elevados de amilose, o que pode melhorar a obtenção da rede formadora de filmes. Além disto, as associações amido-goma podem modificar a gelatinização e retrogradação do amido, processos que interferem na formação de filmes. O acréscimo de plastificantes também tem se mostrado de importância para melhorar as propriedades mecânicas dos filmes. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da adição de goma xantana e de glicerol ao amido de ervilha verde de alto teor de amilose (cv. Utrillo) na elaboração de filmes e em suas características. Soluções filmogênicas (SF) com diferentes teores de amido de ervilha (3, 4 e 5%), de goma xantana (0, 0,05 e 0,1%) e de glicerol (proporção glicerol-amido de 1:5 p/p) foram estudadas. As SF foram obtidas por ebulição (5 min.), seguida de autoclavagem por 1h. a 120°C. Os filmes foram prepa rados segundo a técnica de casting. O aumento da concentração de amido na solução filmogênica aumentou a espessura, fator de ruptura, resistência à perfuração e solubilidade dos filmes em água. O aumento da concentração da goma xantana interferiu apenas nas propriedades associadas à cor dos filmes, aumentando os valores da tonalidade e decrescendo o croma a* e a transparência. O aumento da concentração do glicerol interferiu nas propriedades mecânicas dos filmes, gerando redução dos valores de resistência máxima à tração, tensão na ruptura, resistência à perfuração e fator de ruptura. O plastificante também gerou aumento do alongamento na ruptura, redução da transparência e aumento da espessura e da solubilidade do filme em água. / In the past few years, the attempt to obtain degradable flexible packaging has increased considerably. In this sense, starches obtained from different botanical sources have been evaluated to produce films. Most of these films present good mechanical characteristics and provide a good barrier to oxygen. Nevertheless, some limitations have been observed in relation to their hydrophilic properties and permeability to water vapor. Studies using starch from green peas with high levels of amylose to produce films were not found in the literature. The higher levels of amylose can improve the achievement of the matrix that forms films. In addition, starch-gum associations can modify starch gelatinization and retrogradation, processes which interfere with film formation. The addition of plasticizers has also been considered important to improve the mechanical properties of films. The aim of this study was to evaluate the effect of the addition of xanthan gum and glycerol to the starch of green peas with high content of amylose (cv. Utrillo) in the preparation of films and in their features. Filmogenic solution (FS) with different levels of pea starch (3, 4 and 5%), xanthan gum (0, 0.05 and 0.1%) and glycerol (glycerol-starch ratio of 1:5 p/p) were tested. The FS was obtained by boiling (5 min.), followed by autoclaving for 1h. at 120°C. The films were prepared by casting. The increased concentration of starch in the solution increased the thickness, factor of rupture, puncture force and solubility of films in water. Increasing amounts of xanthan affected only the properties associated with the color of the films, increasing the values of hue angle and decreasing the chroma a* and transparency. The increased concentration of glycerol interfered in the mechanical properties of the films, causing reduction of the maximum values of tensile strength, strain at break, puncture force and factor of rupture. The plasticizer also caused an increase of elongation at break, reduced transparency and increased thickness of the film and the solubility in water.

Na Odontologia, existe uma grande preocupação com a formação de placa bacteriana ou biofilme devido ao seu potencial cariogênico. Essa atenção se estende à ortodontia, devido ao acúmulo de biofilme formado nos aparelhos ortodônticos, tanto nos aparelhos removíveis quanto nos aparelhos fixos. É muito comum a presença de lesões brancas após a remoção dos bráquetes, em torno de 50 a 75% dos pacientes, provocadas pela presença do biofilme. É necessário um controle químico e mecânico rigoroso, a fim de se evitar alterações irreversíveis nos dentes e periodonto. O controle mecânico se dá pela escovação adequada, pelo correto uso de fio dental e pela frequência desses hábitos, além, claro, de um acompanhamento profissional periódico. O controle químico pode ser viabilizado pelo uso de enxaguatórios bucais, nos quais residem alguns efeitos indesejáveis e contraindicações relacionadas ao uso e à idade dos pacientes. Este estudo tem como objetivo avaliar comparativamente dois enxaguatórios bucais, um de natureza comercial (Cepacol®), e outro não comercial, elaborado com extratos hidroalcoólicos das plantas Nasturtium officinale (agrião), Rosmarinus offinalis (alecrim), Tabebuia impetiginosa (ipê roxo), Achillea millefolium (mil folhas) e Plantago major (tanchagem), desenvolvido na Faculdade de Ciências Farmacêuticas/UNESP Araraquara. Foram selecionados 40 pacientes, jovens e adultos, entre 18 e 45 anos, usuários de aparelho ortodôntico corretivo (fixo), divididos em dois grupos, o grupo do Cepacol e o grupo do Enxaguatório base de plantas. Foram coletadas amostras nos períodos de 0, 7, 15 e 21 dias e analisadas observando-se as Unidades Formadoras de Colônia (UFC) de cada amostra. Houve uma queda significativa da quantidade de bactérias após o uso do Enxaguatório à base de plantas, revelando um produto de extrema utilidade no auxílio do controle do biofilme bacteriano nas superfícies dentárias. / In dentistry, there is a great concern with the formation of plaque or biofilm, due to its cariogenic potential. This attention extends to orthodontics due to the accumulation of biofilm on orthodontic appliances, removable appliances as much in the brackets. It is very common the presence of white spots after removal of the brackets, around 50 to 75% of patients, which are caused by biofilms. It takes a rigorous mechanical and chemical control in order to avoid irreversible changes in the teeth and periodontium. The mechanical control is by proper brushing, correct flossing and also the frequency of these habits, besides, of course, a periodical professional monitoring. Chemical control can be achieved by the use of mouthwashes, home to some undesirable effects and contraindications related to the use and age of patients. This study aimed to assess two mouthwashes, a commercial type (Cepacol ®) and other non-commercial, made with hydroalcoholic extracts of plants Nasturtium officinale (watercress), offinalis Rosmarinus (rosemary), Tabebuia impetiginosa ( purple ipe), Achillea millefolium (thousand leaves) and Plantago major (plantain), developed at the Faculty of Pharmaceutical Sciences / UNESP Araraquara. We selected 40 patients, young and adults between 18 and 45 years, users of orthodontic appliance (fixed), divided into two groups, the Cepacol group and the group of herbal mouthwash. Samples were collected during periods of 0, 7,15 and 21 days and analyzed by observing the Colony Forming Units (CFU) of each sample. There was a significant decrease in the amount of bacteria after using herbal mouthwash, revealing a product of the utmost use in aiding the control of bacterial biofilms on tooth surfaces.