Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-18T14:39:20Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TeseParcial(Cap.I)-RaimundoJunior-PPGQ.pdf: 1178770 bytes, checksum: 74333ca704cd865ec51c2e655679a37f (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-18T14:39:33Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TeseParcial(Cap.I)-RaimundoJunior-PPGQ.pdf: 1178770 bytes, checksum: 74333ca704cd865ec51c2e655679a37f (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-18T14:39:33Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TeseParcial(Cap.I)-RaimundoJunior-PPGQ.pdf: 1178770 bytes, checksum: 74333ca704cd865ec51c2e655679a37f (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2018-05-28 / The Myrtaceae family has 132 genera distributed in 5,760 species present in Australia, Southeast Asia, tropical and temperate America. In Brazil, it presents 1,018 species in 23 genera. Myrcia D.C is one of the largest genera with 282 species present in almost all territory, of which 220 are endemics. Its species are used in Brazilian popular medicine, with emphasis on Myrcia spp., which are used by the traditional population of the Amazon as astringents, diuretics, hypoglycemics, antihemorrhagics, antioxidants and in the treatment of hypertension and ulcers. The present study has evaluated the chemical composition of the essential oils of 13 species of Myrtaceae (Myrcia spp., Marlierea sp. and Calyptranthes sp.) from the Terra Firme ecosystem (Amazon). In addition, the cytotoxic, antibacterial, bacteriostatic, antifungal and larvicidal potentials of these oils have been described. Twenty-seven samples belonging to these thirteen species (18 individuals of 11 species of Myrcia, one of Marlierea caudata and one of Calyptranthes spruceana) were collected from the Adolpho Ducke Forest Reserve, EMBRAPA (Manaus) and the PANC site (Manaus). Its essential oils were obtained by hydrodistillation, dried and stored under refrigeration. The chemical characterization was carried out by means of CG-DIC and CG-EM analysis. The Arithmetic Indexes and the Spectral Similarity Indexes were obtained, whose results were compared with those described in the main databases. The mean chemical characterization of these oils was 95%, totaling 336 compounds identified, of which 34 have been abundant (50.7 to 96.17%). The most frequent and, in some cases, the most frequent components are: (E)-caryophyllene, δ-cadinene, Espatulenol, α-Copaene, β-elemene, α-humulene, Caryophyllene oxide, β-selinene, α-muurolene and α–cadinol (42.73% of nonoxygenated sesquiterpenes and 36.98% of oxygenated sesquiterpenes). This chemical variability is common to Myrcia species of other Brazilian ecosystems/biomes. Of the seven pairs of Myrcia individuals collected in distinct periods (dry and rainy), 242 compounds were identified, of which 125 were common, 41 and 76 of which were unique to the rainy and dry periods, respectively. Essential oils of the dry period have exhibit greater chemical variability. In addition, the chemical variability of the essential oils of Myrcia spp. of this ecosystem has been described by 51 cyclization pathways. Of these routes, thirteen have a high frequency (above 50%), four of which are the most prominent ones (Cariofilan, Cadinano, Aromadendrano and Eudesmano). The chemical results of this study have revealed a clear agreement of the chemical composition of Marlierea caudata with the chemistry composition of Myrcia spp.. On the other hand, this observation is not clearly evident for C. spruceana. Moreover, It should be noted that the chemical composition of the essential oils of M. magnoliifolia, M. minutiflora, M. fenestrata, M. amapensis and Marlierea caudata have been described for the first time. As for toxicity to cancer cells (Skmel 3 and ACPO2) and normal cells (MRC5), M. minutiflora presents moderate activity for human melanoma (Skmel 3) and gastric adenocarcinoma (ACPO2) as well as cytotoxic to non-neoplastic fibroblasts (MRC5). M. citrifolia, M. minutiflora, M. paivae and M. magnoliifolia present moderate to high activity against Staphylococcus aureus. M. fallax, M. sylvatica, M. paivae and C. spruceana present moderate activity against Staphylococcus aureus. As for the bacteriostatic action, all species tested have shown moderate to high activity against Pseudomonas aeroginosas. In relation to the insecticidal activity, M. citrifolia, M. bracteata, M. fenestrata, M. amazonica, M. paivae and C. spruceana are active, since after 24 h the mortality percentage of Aedes aegypti larvae was 100% in 25 mg.L- 1 of essential oil. Furthermore, the use of chemometric tools in this study has shown it possible to observe the segregation of samples by major terpene groups and their most influential cyclic pathways, whose substances of major relevance in this model have been (E)-Caryophyllene, δ-Cadinene, and Espatulenol. Its pharmacological activities described in the literature should suggest that they are responsible for the biological results observed in this work. However, novel biological assays with such isolated constituents must be necessary. Therefore, with respect to the chemistry of Myrcia volatile constituents occurring in Terra Firme (Amazonia), the present study has been evidenced very characteristic Amazonian chemotypes and without similarity with other species collected outside the region, which leads us to conclude how much to must be studied from the precious Amazonian biodiversity. / A família Myrtaceae apresenta 132 gêneros distribuídas em 5.760 espécies presentes na Austrália, sudeste da Ásia, América tropical e temperada. No Brasil, apresenta-se com 1018 espécies em 23 gêneros. Myrcia D.C é um dos maiores gêneros com 282 espécies presentes em quase todo território, sendo 220 endêmicas. Suas espécies são empregada na medicina popular brasileira, com destaque para Myrcia spp., as quais são usadas pela população tradicional da Amazônia como adstringentes, diuréticos, hipoglicemicas, anti-hemorrágicas, antioxidantes e no tratamento de hipertensão e úlceras. O presente estudo avalia a composição química dos óleos essenciais de 13 espécies de Myrtaceae (Myrcia spp., Marlierea sp. e Myrciaria sp.) de ecossistema de Terra Firme (Amazônia). Além disso são descritos os potenciais citotóxico, antibacteriano, bacteriostático, antifúngico e larvicida desses óleos. Vinte sete amostras pertencentes a essas treze espécies (18 indivíduos de 11 espécies de Mycia, um indivíduo de Marlierea caudata e outro de Calyptranthes spruceana) foram coletados na Reserva Florestal Adolpho Ducke, na EMBRAPA (Manaus) e no sítio PANC (Manaus). Seus óleos essências foram obtidos por hidrodestilação, secos e armazenado sob refrigeração. A caracterização química ocorreu por meio de análises por CG-DIC e CG-EM, cujos Índices Aritiméticos calculados e de Similaridade Espectral foram comparados com os descritos nas principais bases de dados. A média de caracterização química desses óleos foi de 95%, totalizando 336 substâncias identificadas, das quais 34 são abundantes (50,7 a 96,17%). Os componentes mais frequentes, e em alguns casos majoritários, são: (E)–cariofileno, δ–cadineno, Espatulenol, α–copaeno, β–elemeno, α–humuleno, Óxido de cariofileno, β–selineno, α–muuroleno e α–cadinol, prevalecendo estruturas sesquiterpênicas (42,73% de sesquiterpenos não-oxigenados e 36,98% de sesquiterpenos oxigenados). Essa variabilidade química é comum a espécies de Myrcia de outros ecossistemas/biomas brasileiros. Dos sete pares de indivíduos de Myrcia coletados em períodos distintos (seco e chuvoso), identificou-se 242 substâncias, sendo 125 comuns, com 41 exclusivas do período chuvoso e 76 são exclusivos do períoso seco. Os óleos essenciais do período seco apresentaram uma maior variabilidade química. Além disso, a variabilidade química dos óleos essenciais de Myrcia spp. desse ecossistema pôde ser descrita por 51 vias de ciclização. Dessas vias, treze apresentam elevada frequência (superior a 50%), sendo quatro vias de destaque pela maior ocorrência (Cariofilano, Cadinano, Aromadendrano e Eudesmano). Os resultados químicos desse estudo revelam uma clara concordância de Marlierea caudata com a química de Myrcia spp., porém o mesmo não se evidencia claramente para C. spruceana. Ressalta-se que a composição química dos óleos essenias de M. magnoliifolia, M. minutiflora, M. fenestrata, M. amapensis e Marlierea caudata são descritos pela primeira vez. Quanto à toxicidade frente a células cancerígenas (Skmel 3 e ACPO2) e normais (MRC5), M. minutiflora apresenta atividade moderada para melanoma humano (Skmel 3) e adenocarcinoma gástrico (ACPO2), bem como citotóxica para fibroblastos nãoneoplásicos (MRC5). M. amazonica e M. fenestrata também apresentam atividade moderada para Skmel 3. Quanto ao potencial antimicrobiano e bacteriostático, M. citrifolia, M. minutiflora, M. paivae e M. magnoliifolia apresentam atividade moderada a elevada frente a Staphylococcus aureus. M. fallax, M. sylvatica, M. paivae e C. spruceana apresentam atividade moderada frente a Staphylococcus aureus. Quanto a ação bacteriostática, todas as espécies ensaiadas apresentam atividade moderada a elevada frente a Pseudomonas aeroginosas. Em relação a atividade inseticida, M. citrifolia, M. bracteata, M. fenestrata, M. amazonica, M. paivae e C. spruceana são ativas, pois após 24 h o percentual de mortalidade das larvas de Aedes aegypti é de 100% em 25 mg.L-1 de óleo essencial. A aplicação de ferramentas quimiométricas nesse estudo possibilitou observar a segregação das amostras por grupos terpênicos majoritários e suas vias de ciclização mais influentes, cujas substâncias de maior relevância nesse modelo são: (E)-cariofileno, δ–cadineno e Espatulenol. Suas atividades farmacológicas descritas na literatura sugerem serem os responsáveis pelos resultados biológicos observados nesse trabalho. Contudo, novos ensaios biológicos com tais constituintes isolados talvez sejam necessários. Portanto, a respeito da química dos constituintes voláteis de Myrcia ocorrentes em Terra Firme (Amazônia), o presente estudo evidência quimiotipos amazônicos bem característicos e sem similaridade com outras espécies coletadas fora da região, o que nos leva a concluir o quanto ainda há a ser estudado a partir da preciosa biodiversidade amazônica.

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:18:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FLAVIA QUEIROZ DE OLIVEIRA.pdf: 771334 bytes, checksum: 4a8901cbaaff36710ad317e89ac63ae6 (MD5) Previous issue date: 2011-01-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The red mombin fruit Spondias purpurea is a tropical fruit of vital importance to farmers in semi-arid region of Brazil, but it presents as a major factor limiting the occurrence of fruit flies Ceratitis capitata (Diptera: Tephritidae). Several papers have discussed the applicability of natural products such as essential oils, this pest control programs. However little is known about the effectiveness of this tactic in controlling C. capitata, as well as the impact of alternative technology in fruit quality. In this study we evaluated the effects of alternative substances as potential repellents and insecticides to C. capitata, and fruit quality of red mombin fruit. The experiments were performed at the Laboratory of Entomology UFPB Areia/PB. Three experiments were conducted: repellent activity (test I), insecticidal activity (test II) and physical and chemical quality of fruits (test III). For the all tests were used for red mombin fruit ripe fruit, water and disinfected with hypochlorite 0.1%, and dry in paper towels at room temperature. They were then treated with the following products: proagrim, essential oil of fennel and orange essential oil, both of the following concentrations, 0.0 (control), 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0% (w/v). For treatment of fruit products were diluted in water. While the second experiment, we used the same products and concentration of which was that the insecticidal activity via topical application of products on eggs, larvae of 1st, 2nd and 3rd instars and pupae. The results obtained in the first trial, no choice, revealed that the tested products significantly affected the fruit of red mombin fruit infestation by C. capitata. The effect of pesticides on fruit infestation reduction was dose-dependent. The average fertility of C. capitata (number of larvae per fruit) in fruit of red mombin fruit ranged from 1.65 (1%) to 1.025 (3%) when applied orange oil, 0.25 (1%) 0,075 (3%) for fennel oil and 2.1 (1%) to 0.95 (3%) when applied proagrim. The free-choice test results confirmed that no-choice, demonstrating the repellent action of the tested products. The preference index recorded was 0.5398 for orange oil; 0.3435 to 0.1717 and proagrim product for oil and fennel. In the trial of insecticide activity, it was found that, regardless of the product and the developmental stage of C. capitata mortality was directly related to increased concentrations. The median lethal concentrations (LC) of the product proagrim estimated for eggs of C. capitata was 1.6965% (w/v), which was 50higher than the average concentrations lethal (LC) estimated for larvae of 1st, 2nd and 3rd instar larvae of C. capitata, corresponding to 0.3409, 0.2277 and 0.1800% (w/v), respectively. While the estimated LC5050 of fennel oil to larvae of 1st, 2nd and 3rd instar were 0.5419, 0.5189, and 0.5464% (w/v), respectively. Low-dose response was found in all stages evaluated C. capitata after application of orange oil product. Regarding the effects of these products on fruit quality of red mombin fruit, it was found that no there is product-independent linear relationship between ° Brix and pH vs concentration vs concentration of fruit red mombin fruit. Products proagrim orange oil and promote greater weight losses of fruit pulp of red mombin fruit, from product oil of fennel. However, concentrations above 2.5% of fennel oil in fruits of red mombin fruit should be taken judiciously, in order to avoid compromising the physical quality, as well as reducing the degree Brix of fruit pulp of red mombin fruit. / A ciriguela Spondias purpurea é uma frutífera tropical de importância vital para os agricultores do semi-árido do Brasil, porém tem como um dos fatores limitantes a ocorrência de moscas-das-frutas Ceratitis capitata (Diptera: Tephritidae). Diversos trabalhos têm discutido a aplicabilidade de produtos naturais, como óleos essenciais, em programas de controle desta praga. No entanto, pouco se sabe sobre a eficiência dessa tática no controle de C. capitata, assim como o impacto dessa tecnologia alternativa na qualidade dos frutos. Nesse trabalho avaliou-se os efeitos de substâncias alternativas como potenciais produtos repelentes e inseticidas à C. capitata, e na qualidade de frutos de ciriguela. Os experimentos foram realizados no Laboratório de Entomologia da UFPB Areia. Foram executados três ensaios: I- Ensaio de atividade repelente, II- Ensaio de atividade inseticida e III- Ensaio de qualidade físico-química dos frutos. Para todos os ensaios foram utilizados frutos de ciriguela maduros, higienizados com água e hipoclorito a 0,1%, e secos sob papel absorvente em temperatura ambiente. Em seguida foram tratados com os seguintes produtos: proagrim, óleo essencial de erva-doce e óleo essencial de laranja, ambos nas seguintes concentrações, 0,0 (testemunha); 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0% (m/v). Para o tratamento dos frutos os produtos foram diluídos em água. Enquanto que no segundo ensaio, foram utilizados os mesmos produtos e concentrações, sendo que foi avaliada a atividade inseticida através de aplicações tópicas dos produtos em ovos, larvas de 1º, 2º e 3º instar e pupas. Os resultados obtidos no primeiro ensaio, sem chance de escolha, revelaram que os produtos testados afetaram significativamente a infestação de frutos de ciriguela por C. capitata. O efeito dos produtos na redução da infestação de frutos foi tipo dose-dependente. A fecundidade média de C. capitata (número de larvas/fruto) em frutos de ciriguela variou entre 1,65 (1%) a 1,025 (3%) quando aplicado óleo de laranja; 0,25 (1%) a 0,075 (3%) para óleo de erva-doce e de 2,1 (1%) a 0,95 (3%) quando aplicado o proagrim. O ensaio com chance de escolha confirmou os resultados daquele sem chance de escolha, demonstrando a ação repelente dos produtos testados. O índice de preferência registrado foi de 0,5398, para óleo de laranja; 0,3435 para o produto proagrim e de 0,1717 para óleo de erva-doce. No ensaio de atividade inseticida, verificou-se que, independente do produto e do estágio de desenvolvimento de C. capitata a mortalidade foi diretamente relacionada com o aumento das concentrações. A concentração média letal (CL) do produto proagrim estimada para ovos de C. capitata foi de 1,6965 % (m/v), a qual foi superior as concentrações médias letais (CL) estimadas para larvas de 1º, 2º e 3º ínstar de C. capitata, correspondendo a 0,3409, 0,2277 e 0,1800 % (m/v), respectivamente. Enquanto que as CL 50 50 estimadas do óleo de erva-doce para larvas de 1º, 2º e de 3º instar foram de 0,5419, 0,5189, e de 0,5464 % (m/v), respectivamente. Baixa dose-resposta foi encontrada em todos os estágios avaliados de C. capitata após aplicação do produto óleo de laranja. Com relação aos efeitos destes produtos na qualidade de frutos de ciriguela, constatou-se que independente do produto não existe relação linear entre °Brix vs concentração e pH vs concentração de frutos de ciriguela. Os produtos proagrim e óleo de laranja promovem maiores perdas de peso de polpa de fruto de ciriguela, em relação ao produto óleo de erva-doce. No entanto, concentrações acima de 2,5% do óleo de erva-doce em frutos de ciriguela devem ser adotadas de forma criteriosa, para que se evite o comprometimento da qualidade física, assim como a redução do grau Brix de polpas de frutos de ciriguela.

A utilização do glicerol proveniente da fabricação do biodiesel como substrato para a obtenção de produtos biotecnológicos é uma alternativa promissora como forma de disposição adequada deste subproduto. O bioinseticida formulado com toxinas de Bacillus thuringiensis tem sido utilizado para o controle de insetos veiculadores de doenças, como a dengue, que atingem milhões de pessoas em todo o mundo. Para que este bioinseticida seja competitivo com os inseticidas químicos é necessário que o custo de sua produção seja diminuído, o que pode ser feito com a utilização de fontes de carbono alternativas, de forma a diminuir o custo do meio de fermentação. Neste trabalho, empregou-se o glicerol proveniente da fabricação do biodiesel de sebo bovino como componente do meio de fermentação para a produção de bioinseticida por Bacillus thuringiensis var. israelensis. Foram avaliados diferentes tratamentos do resíduo contendo glicerol, baseados em acidificação, decantação e aquecimento, para remoção de impurezas. O ajuste do pH até 7 pela adição de ácido fosfórico, seguido de decantação, aquecimento para remoção de metanol e nova decantação, foi a forma de tratamento escolhida, uma vez que proporcionou a maior atividade tóxica do meio fermentado contra larvas de Aedes aegypti. O meio de fermentação foi formulado determinando-se as concentrações de glicerol, extrato de levedura, sulfato de amônio e cloreto de cálcio que proporcionaram a maior atividade larvicida do meio fermentado, de acordo com planejamento fatorial 24. A toxicidade foi avaliada pela CL50 (concentração do complexo esporo-cristal necessária para matar 50% da população de larvas). O melhor valor de CL50 foi obtido com a utilização de glicerol a 10 g/L, extrato de levedura a 12 g/L, cloreto de cálcio a 0,24 g/L e sem adição de sulfato de amônio. A análise estatística dos dados confirmou a significância das variáveis glicerol, extrato de levedura e cloreto de cálcio sobre a atividade larvicida do meio fermentado. Cloreto de cálcio não influenciou significantemente a produção de esporos pela bactéria, e a taxa de esporulação não foi influenciada por cloreto de cálcio e sulfato de amônio nas concentrações estudadas. Para a otimização da produção de endotoxinas pela bactéria, foi realizado um planejamento fatorial 22, variando-se apenas as concentrações de extrato de levedura e de cloreto de cálcio, fixando-se a concentração de glicerol em 10 g/L e excluindo-se o sulfato de amônio do meio de fermentação. O melhor valor de CL50 (0,295 mg/mL) foi obtido no ensaio com 15 g/L de extrato de levedura e 0,4 g/L de cloreto de cálcio. / The use of glycerol derived from biodiesel production as a substrate for the acquisition of biotechnology products is a promising alternative as an adequate disposal mean of this by-product. The bioinsecticide formulated with toxins from Bacillus thuringiensis has been used to control vectors insects of diseases, such as dengue, which affect millions of people around the world. For this bioinsecticide be competitive with chemical insecticides is necessary a lower cost of its production, which can be achieved by the use of alternative carbon sources in order to reduce the fermentation medium cost. In this work, it was used glycerol from beef tallow biodiesel production as a component of the fermentation medium for the production of bioinsecticide by Bacillus thuringiensis var. israelensis. Different treatments of the residue containing glycerol, based on acidification, sedimentation and heating, to remove impurities, were evaluated. The adjustment of pH to 7 by addition of phosphoric acid, followed by decantation, then heating for removal of methanol, and a new decantation, was the treatment selected, since it provided the highest toxic activity of the fermented broth against Aedes aegypti larvae. The fermentation medium was formulated by determining the concentration of glycerol, yeast extract, ammonium sulfate and calcium chloride that provided the greatest larvicidal activity of the fermented broth according to 24 factorial design. The toxicity was measured by the LC50 (concentration of the spore-crystal complex required to kill 50% of the larvae). The best value of LC50 was obtained using glycerol at 10 g/L, yeast extract at 12 g/L, calcium chloride at 0.24 g/L and without addition of ammonium sulfate. Statistical analysis confirmed the significance of the variables glycerol, yeast extract and calcium chloride on the larvicidal activity of fermented broth. Calcium chloride did not influence significantly the production of spores by the bacteria and the sporulation ratio was not affected by calcium chloride and ammonium sulfate at the studied concentrations. For the endotoxins production optimization, a 22 factorial design was carried out, varying only the concentrations of yeast extract and calcium chloride, maintaining the concentration of glycerol at 10 g/L and excluding ammonium sulfate of the fermentation medium. The best value of LC50 (0,295 mg/mL) was obtained in the assay with 15 g/L of yeast extract and 0.4 g/L of calcium chloride.

Neste trabalho foi feito um estudo para obtenção de formulações multiparticuladas, formadas por micropartículas de polímeros naturais, solúveis em água, não tóxicos e biodegradáveis. Os polímeros utilizados foram: Caseína, Hidroxietilcelulose (HEC), Hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), Alginato de sódio e Quitosana. As técnicas utilizadas para obtenção das micropartículas foram o spray drying e a atomização de alginato de sódio em uma solução de CaCl2, para gelificação das gotículas formadas, com uma complexação ou não com quitosana. O estudo de micropartículas secas de alginato de cálcio e alginato de cálcio recoberta com uma membrana de quitosana revelou que diferentes procedimentos e variáveis de processo influenciavam nas características das micropartículas obtidas. O diâmetro médio das micropartículas de alginato e alginato-quitosana variou de 60 a 553 µm. A superfície de micropartículas com quitosana se mostrou mais rugosa, com uma grande quantidade de poros menores que 1 µm. As micropartículas com diâmetro médio de 60 µm apresentaram uma boa esfericidade e uma distribuição de tamanho de partícula uniforme. O teor de cálcio apresentou variações, diminuindo em processos com quitosana. A maioria das micropartículas de alginato e alginato-quitosana eram estáveis em água, mas instáveis em soro fisiológico e tampão fosfato 0,1M. Após a realização do estudo das características destas micropartículas foram incorporados a elas materiais com atividade bioinseticida (Bacillus thuringiensis var. krusfaki (Btk) e de Baculovirus (Bv)). As micropartículas obtidas com alginato de cálcio formaram pós contendo sistemas matriciais capazes de microencapsular e reter microrganismos entomopatogênicos, inclusive após redispersão em água. Os processos de microencapsulação de desenvolvidos e avaliados demonstraram ser adequados para a manutenção da viabilidade de Btk e da integridade dos poliedros de Bv, assim como, a conservação da capacidade bioinseticida destes microrganismos. As micropartículas obtidas com as misturas poliméricas Caseína/HEC e Caseína/HPMC pelo processo de spray drying revelaram-se inadequadas na medida que se dissolviam rapidamente depois de dispersas em água e não poderiam assim proteger o material bioinseticida no meio ambiente. / The aim of this work was to develop powder formulations containing microparticles, to be used as multiparticulate delivery systems. Two different methods were investigated : 1) the preparation of microparticles by spray drying using casein, hydroxyethylcellulose (HEC) and hydroxypropilmetilcellulose (HPMC) and 2) the preparation of calcium alginate and chitosan-alginate microparticles by using an atomizer device. Different experimental procedures to prepare calcium alginate and chitosanalginate microparticles were evaluated and variables beHeved to be important for the membrane formation were examined. The mean particles diarneter ranged from 60 to 553 µm. When a comparison was made between the surface morphology of calcium alginate and alginate-chitosan microparticles, remarkable roughness and more porous structure was observed in the chitosan-alginate microparticles. Some properties of the microparticles depended on the method and the procedure conditions of forming the chitosan-alginate complex. Calcium alginate and chitosan-alginate microparticles containing two different bioinsecticides were also prepared: 1) a spore/δ-endotoxinscomplex of Bacillus thuringiensis var.kurstaki (Btk) and 2) polyhedra of Baculovirus anticarsia (Bv), a viral insecticide. The results shown that the encapsulation of suspensions of Btk containing spore/toxin complex or polyhedra of B. anticarcia in calcium alginate and chitosan-alginate microparticles did not decrease the larvicidal activity of these biopesticides against lepidopterous pests. The formulations developed in this study remained unchanged, did not swell, did not release the spores (Btk) or the polyhedra (Bv), when dispersed in water and could be useful to be applied by aqueous spray as bioinsecticides in agriculture. On the other hand, casein, HEC and HPMC microparticles prepared by spray drying were not suitable to encapsulate bioinsecticides because they dissolved fastly after dispersion in water.

Neste trabalho foi feito um estudo para obtenção de formulações multiparticuladas, formadas por micropartículas de polímeros naturais, solúveis em água, não tóxicos e biodegradáveis. Os polímeros utilizados foram: Caseína, Hidroxietilcelulose (HEC), Hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), Alginato de sódio e Quitosana. As técnicas utilizadas para obtenção das micropartículas foram o spray drying e a atomização de alginato de sódio em uma solução de CaCl2, para gelificação das gotículas formadas, com uma complexação ou não com quitosana. O estudo de micropartículas secas de alginato de cálcio e alginato de cálcio recoberta com uma membrana de quitosana revelou que diferentes procedimentos e variáveis de processo influenciavam nas características das micropartículas obtidas. O diâmetro médio das micropartículas de alginato e alginato-quitosana variou de 60 a 553 µm. A superfície de micropartículas com quitosana se mostrou mais rugosa, com uma grande quantidade de poros menores que 1 µm. As micropartículas com diâmetro médio de 60 µm apresentaram uma boa esfericidade e uma distribuição de tamanho de partícula uniforme. O teor de cálcio apresentou variações, diminuindo em processos com quitosana. A maioria das micropartículas de alginato e alginato-quitosana eram estáveis em água, mas instáveis em soro fisiológico e tampão fosfato 0,1M. Após a realização do estudo das características destas micropartículas foram incorporados a elas materiais com atividade bioinseticida (Bacillus thuringiensis var. krusfaki (Btk) e de Baculovirus (Bv)). As micropartículas obtidas com alginato de cálcio formaram pós contendo sistemas matriciais capazes de microencapsular e reter microrganismos entomopatogênicos, inclusive após redispersão em água. Os processos de microencapsulação de desenvolvidos e avaliados demonstraram ser adequados para a manutenção da viabilidade de Btk e da integridade dos poliedros de Bv, assim como, a conservação da capacidade bioinseticida destes microrganismos. As micropartículas obtidas com as misturas poliméricas Caseína/HEC e Caseína/HPMC pelo processo de spray drying revelaram-se inadequadas na medida que se dissolviam rapidamente depois de dispersas em água e não poderiam assim proteger o material bioinseticida no meio ambiente. / The aim of this work was to develop powder formulations containing microparticles, to be used as multiparticulate delivery systems. Two different methods were investigated : 1) the preparation of microparticles by spray drying using casein, hydroxyethylcellulose (HEC) and hydroxypropilmetilcellulose (HPMC) and 2) the preparation of calcium alginate and chitosan-alginate microparticles by using an atomizer device. Different experimental procedures to prepare calcium alginate and chitosanalginate microparticles were evaluated and variables beHeved to be important for the membrane formation were examined. The mean particles diarneter ranged from 60 to 553 µm. When a comparison was made between the surface morphology of calcium alginate and alginate-chitosan microparticles, remarkable roughness and more porous structure was observed in the chitosan-alginate microparticles. Some properties of the microparticles depended on the method and the procedure conditions of forming the chitosan-alginate complex. Calcium alginate and chitosan-alginate microparticles containing two different bioinsecticides were also prepared: 1) a spore/δ-endotoxinscomplex of Bacillus thuringiensis var.kurstaki (Btk) and 2) polyhedra of Baculovirus anticarsia (Bv), a viral insecticide. The results shown that the encapsulation of suspensions of Btk containing spore/toxin complex or polyhedra of B. anticarcia in calcium alginate and chitosan-alginate microparticles did not decrease the larvicidal activity of these biopesticides against lepidopterous pests. The formulations developed in this study remained unchanged, did not swell, did not release the spores (Btk) or the polyhedra (Bv), when dispersed in water and could be useful to be applied by aqueous spray as bioinsecticides in agriculture. On the other hand, casein, HEC and HPMC microparticles prepared by spray drying were not suitable to encapsulate bioinsecticides because they dissolved fastly after dispersion in water.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaCBC.pdf: 1320381 bytes, checksum: 881b82ecb0df2b87414957a1e02761bb (MD5) Previous issue date: 2008-10-20 / One Kunitz-type trypsin inhibitors (PmTI) was purified from Piptadenia moniliformis seeds, a tree of the sub-family Mimosoideae, by TCA precipitation, affinity chromatography on immobilized trypsin-Sepharose, DEAE cellulose (ion exchange) and Superose 12 (molecular exclusion) column FPLC/AKTA. The inhibitor has Mr of 25 kDa by SDS-PAGE and chromatography molecular exclusion. The N-terminal sequence of this inhibitor showed high homology with other family Kunitz inhibitors. This also stable variations in temperature and pH and showed a small decrease in its activity when incubated with DDT in the concentration of 100mM for 120 minutes. The inhibition of trypsin by PmTI was competitive, with Ki of 1.57 x10-11 M. The activity of trypsin was effectively inhibited by percentage of inhibition of 100%, among enzymes tested, was not detected inhibition for the bromelain, was weak inhibitor of pancreatic elastase (3.17% of inhibition) and inhibited by 76.42% elastase of neutrophils, and inhibited in a moderate, chymotrypsin and papain with percentage of inhibition of 42.96% and 23.10% respectively. In vitro assays against digestive proteinases from Lepidoptera, Diptera and Coleoptera pests were carried out. Several degrees of inhibition were found. For Anthonomus grandis and Ceratitis capitata the inhibition was 89.93% and 70.52%, respectively, and the enzymes of Zabrotes subfasciatus and Callosobruchus maculatus were inhibited by 5.96% and 9.41%, respectively, and the enzymes of Plodia. interpunctella and Castnia licus were inhibited by 59.94% and 23.67, respectively. In vivo assays, was observed reduction in the development of larvae in 4rd instar of C. capitata, when PmTI was added to the artificial diet, getting WD50 and LD50 of 0.30% and 0.33%, respectively. These results suggest that this inhibitor could be a strong candidate to plant management programs cross transgenic / Um inibidor de tripsina da fam?lia Kunitz (PmTI) foi purificado de sementes de Piptadenia moniliformis, uma ?rvore da sub-fam?lia Mimosoideae, atrav?s da precipita??o com ?cido tricloroac?tico (TCA), cromatografia de afinidade com tripsina acoplada em sepharose, coluna DEAE- celulose(troca i?nica) e Superose 12 (exclus?o molecular) em sistema FPLC/AKTA. O inibidor possui massa molecular de 25 kDa como confirmado atrav?s de SDS-PAGE e cromatografia de exclus?o molecular. A seq??ncia do N-terminal deste inibidor mostrou alta homologia com outros inibidores da fam?lia Kunitz. Este tamb?m ? est?vel as varia??es de temperatura e pH, e apresentou um pequeno decr?scimo na sua atividade quando incubado com DTT na concentra??o de 100 mM por 120 minutos. A inibi??o da tripsina foi do tipo competitiva com Ki de 1,57x10-11 mM. A atividade da tripsina foi inibida efetivamente com percentual de inibi??o de 100%, entre as outras enzimas testadas n?o foi detectada inibi??o para a bromela?na, foi fracamente inibidor da elastase pancre?tica (3,17% de inibi??o), inibiu em 76,42% elastase de neutr?filos, inibiu de forma moderada quimotripsina e papa?na com percentual de inibi??o de 42,96% e 23,10%, respectivamente. Ensaios in vitro foram realizados com as proteinases digestivas de Lepid?ptera, Cole?ptera e D?ptera. V?rios graus de inibi??o foram encontrados. Para Anthonomus grandis e Ceratitis capitata a inibi??o foi de 89,93% e 70,52%, respectivamente, e as enzimas de Zabrotes subfasciatus e Callosobruchus maculatus foram inibidas com percentuais de 5,96% e 9,41% respectivamente, e as enzimas de Plodia interpunctella e Castnia licus foram inibidas com percentuais de 59,94% e 23,67%, respectivamente. No ensaio in vivo, foi observada redu??o no desenvolvimento de larvas em 4? ?nstar de C. capitata, quando PmTI foi adicionado ? dieta artificial, obtendo WD50 de 0,30% e LD50 0,33% . Estes resultados sugerem que este inibidor possa ser um forte candidato para programas de melhoramentos de plantas via transgenia

Orientador: Carlos Frederico Wilcken / Banca: Antonipo Batista Filho / Banca: Luis Garrigós Leite / Resumo: Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial de controle de alguns produtos comerciais de fungos entomopatogênicos disponíveis no mercado, bem como o desenvolvimento dos fungos Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae e Lecanicillium longisporum sobre ninfas de Glycaspis brimblecombei (Hemiptera: Psyllidae). Para tanto, foram realizados ensaios em laboratório com pulverização de suspensões fúngicas de 1 x 104, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107 e 1 x 108 conídios/mL dos bioinseticidas Boveril WP, Toyobo e Mycotrol (B. bassiana), Metarril WP e Toyobo (M. anisopliae) e Vertirril WP (L. longisporum) nas ninfas do inseto. Nos bioensaios de semicampo estes produtos foram aplicados na forma pulverizada e polvilhada sobre mudas infestadas por ninfas de G. brimblecombei. As avaliações para o bioensaio de laboratório foram realizadas aos um, três, cinco e sete dias após a pulverização, enquanto no ensaio de semicampo as avaliações foram realizadas apenas sete dias após a aplicação dos produtos. O desenvolvimento dos fungos sobre os insetos foi avaliado mediante a observação dos insetos em microscópio óptico a 0, 24, 48, 72 e 148 horas após a aplicação dos fungos. No bioensaio de laboratório os produtos que apresentaram as maiores mortalidades na maior concentração foram L. longisporum (Vertirril WP), B. bassiana (Mycotrol e Boveril WP) e M. anisopliae (Metarril WP), com mortalidades acima de 70%. As maiores porcentagens de mortalidade confirmada foram observadas para os tratamentos com maior porcentual de mortalidade total, destacando-se o produto Mycotrol que obteve 70% dos indivíduos esporulados nas concentrações de 1 x 106, 1 x 107 e 1 x 108 conídios/mL. Em semicampo os produtos M. anisopliae (Metarril WP) aplicado em pulverização e M. anisopliae e B. bassiana (Toyobo) aplicados em polvilhamento apresentaram eficiência em torno de 70%. Na avaliação do ciclo ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the potential control of some commercial entomopathogenic fungi products available in the market and the development of Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae and Lecanicillium longisporum on nymphs of Glycaspis brimblecombei. The insecticides Boveril WP, Toyobo and Mycotrol (B. bassiana), Metarril and Toyobo WP (M. anisopliae) and Vertirril WP (L. longisporum) were tested in laboratory spraying fungal suspensions with 1 x 104, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107 and 1 x 108 conidia/mL on insect nymphs. In the semi field bioassays, these products were used in dust and sprayed forms on plants infested by nymphs of G. brimblecombei. The evaluations in laboratory bioassay were made at one, tree, five and seven days after spraying, and semi field test the assessments were carried out seven days after products application. The fungi development on insects was evaluated by observing of nymphs in optical microscope at 0, 24, 48, 72 and 148 hours after application. In laboratory bioassay the bioinsecticides had highest mortality in highest concentration were L. longisporum (Vertirril WP), B. bassiana (Mycotrol and Boveril WP) and M. anisopliae (Metarril WP), with mortality rates above 70%. The highest percentages of confirmed mortality were obtained in most effective treatments, especially to Mycotrol which obtained 70% of individuals sporulated at concentrations of 1 x 106, 1 x 107 and 1 x 108 conidia/mL. In semi field bioassay, M. anisopliae (Metarril WP) applied in spraying and M. anisopliae and B. bassiana (Toyobo) applied... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A utilização do glicerol proveniente da fabricação do biodiesel como substrato para a obtenção de produtos biotecnológicos é uma alternativa promissora como forma de disposição adequada deste subproduto. O bioinseticida formulado com toxinas de Bacillus thuringiensis tem sido utilizado para o controle de insetos veiculadores de doenças, como a dengue, que atingem milhões de pessoas em todo o mundo. Para que este bioinseticida seja competitivo com os inseticidas químicos é necessário que o custo de sua produção seja diminuído, o que pode ser feito com a utilização de fontes de carbono alternativas, de forma a diminuir o custo do meio de fermentação. Neste trabalho, empregou-se o glicerol proveniente da fabricação do biodiesel de sebo bovino como componente do meio de fermentação para a produção de bioinseticida por Bacillus thuringiensis var. israelensis. Foram avaliados diferentes tratamentos do resíduo contendo glicerol, baseados em acidificação, decantação e aquecimento, para remoção de impurezas. O ajuste do pH até 7 pela adição de ácido fosfórico, seguido de decantação, aquecimento para remoção de metanol e nova decantação, foi a forma de tratamento escolhida, uma vez que proporcionou a maior atividade tóxica do meio fermentado contra larvas de Aedes aegypti. O meio de fermentação foi formulado determinando-se as concentrações de glicerol, extrato de levedura, sulfato de amônio e cloreto de cálcio que proporcionaram a maior atividade larvicida do meio fermentado, de acordo com planejamento fatorial 24. A toxicidade foi avaliada pela CL50 (concentração do complexo esporo-cristal necessária para matar 50% da população de larvas). O melhor valor de CL50 foi obtido com a utilização de glicerol a 10 g/L, extrato de levedura a 12 g/L, cloreto de cálcio a 0,24 g/L e sem adição de sulfato de amônio. A análise estatística dos dados confirmou a significância das variáveis glicerol, extrato de levedura e cloreto de cálcio sobre a atividade larvicida do meio fermentado. Cloreto de cálcio não influenciou significantemente a produção de esporos pela bactéria, e a taxa de esporulação não foi influenciada por cloreto de cálcio e sulfato de amônio nas concentrações estudadas. Para a otimização da produção de endotoxinas pela bactéria, foi realizado um planejamento fatorial 22, variando-se apenas as concentrações de extrato de levedura e de cloreto de cálcio, fixando-se a concentração de glicerol em 10 g/L e excluindo-se o sulfato de amônio do meio de fermentação. O melhor valor de CL50 (0,295 mg/mL) foi obtido no ensaio com 15 g/L de extrato de levedura e 0,4 g/L de cloreto de cálcio. / The use of glycerol derived from biodiesel production as a substrate for the acquisition of biotechnology products is a promising alternative as an adequate disposal mean of this by-product. The bioinsecticide formulated with toxins from Bacillus thuringiensis has been used to control vectors insects of diseases, such as dengue, which affect millions of people around the world. For this bioinsecticide be competitive with chemical insecticides is necessary a lower cost of its production, which can be achieved by the use of alternative carbon sources in order to reduce the fermentation medium cost. In this work, it was used glycerol from beef tallow biodiesel production as a component of the fermentation medium for the production of bioinsecticide by Bacillus thuringiensis var. israelensis. Different treatments of the residue containing glycerol, based on acidification, sedimentation and heating, to remove impurities, were evaluated. The adjustment of pH to 7 by addition of phosphoric acid, followed by decantation, then heating for removal of methanol, and a new decantation, was the treatment selected, since it provided the highest toxic activity of the fermented broth against Aedes aegypti larvae. The fermentation medium was formulated by determining the concentration of glycerol, yeast extract, ammonium sulfate and calcium chloride that provided the greatest larvicidal activity of the fermented broth according to 24 factorial design. The toxicity was measured by the LC50 (concentration of the spore-crystal complex required to kill 50% of the larvae). The best value of LC50 was obtained using glycerol at 10 g/L, yeast extract at 12 g/L, calcium chloride at 0.24 g/L and without addition of ammonium sulfate. Statistical analysis confirmed the significance of the variables glycerol, yeast extract and calcium chloride on the larvicidal activity of fermented broth. Calcium chloride did not influence significantly the production of spores by the bacteria and the sporulation ratio was not affected by calcium chloride and ammonium sulfate at the studied concentrations. For the endotoxins production optimization, a 22 factorial design was carried out, varying only the concentrations of yeast extract and calcium chloride, maintaining the concentration of glycerol at 10 g/L and excluding ammonium sulfate of the fermentation medium. The best value of LC50 (0,295 mg/mL) was obtained in the assay with 15 g/L of yeast extract and 0.4 g/L of calcium chloride.

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-07-27T12:29:47Z No. of bitstreams: 1 Renato Marcos de Leão.pdf: 1271849 bytes, checksum: a89943d84d38997ef1167837ead53ae6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-27T12:29:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renato Marcos de Leão.pdf: 1271849 bytes, checksum: a89943d84d38997ef1167837ead53ae6 (MD5) Previous issue date: 2018-02-20 / The A. curassavica plant is characterized as a toxic plant for vertebrates, and little is known about its effect on invertebrates, such as insects. Thus, a study was conducted to verify the action of A. curassavica on S. frugiperda. The plants were collected, dried and ground, and the raw ethanolic extract was made from the powder. This was added to the diet offered to caterpillars in two trials, one at concentrations of 1%, 2% and 4%; and another at concentrations of 0.05%, 0.1% and 0.5%. The parameters evaluated were: mortality; food consumption; weight of larvae and pupae; fertility (number of eggs and% of hatching). Two trials (one with second instar caterpillars and one with fifth instar caterpillars) of topical applications of the extract at concentrations of 1%, 2%, 4% and 6% were conducted to verify contact action through mortality after treatment. The experiments were performed with and without a choice, using corn leaf disks immersed in ethanolic extract at concentrations of 1%, 2% and 4%, where food intake (g) and preference index were evaluated. A trial was conducted evaluating total polyphenols and flavonoids in extract A. curassavica in order to verify the presence and measure them. The extract of A. curassavica added to the artificial diet, caused mortality of S. frugiperda in all concentrations, with 1%, 2% and 4% showing 100% mortality, and also 0.5% with 98% mortality. The prolongation of the larval period was evidenced in the treatments 0.1% and 0.5%, in 1.29 and 10.75 days respectively, in relation to the control. There was a reduction of larval weight in treatments 0.05%, 0.5%, 1%, 2% and 4% in 15%, 77%, 17%, 97% and 100%, respectively. On the pupal weight, the weight of the pupae in the treatments was 0.05%, 0.1% and 0.5% in 10%, 22% and 54% respectively; already in the weight of the female pupae, there was reduction with the treatment 0.1% in 9.5%. Food consumption was reduced in treatments 0.5%, 1%, 2% and 4% in 22%, 40%, 47% and 57%, respectively. The excreted faeces weight in the treatments 0.1%, 1%, 2% and 4% was 0.730g, 0.002g, 0g and 0g, respectively. At no concentration interference was observed in the number of postures, number of eggs and percentage of hatching. On topical application in the second instar caterpillars, contact action was verified in all concentrations, standing out the 6% treatment that caused 100% mortality after 72 hours of application. However, in the trial with fifth instar caterpillars, there was no contact action in the treatments used. In the tests with and without chance of choice, there was difference in food consumption in all concentrations, especially the reduction in treatment 4%. All treatments were classified as phagdeterrents, and the 4% treatment was less preferred. It was verified the presence of total polyphenois and flavonoids in the extract, presenting 58.75 ug / ml and 150.1 ug / ml, respectively. The extract of A. curassavica should be tested in the field at the concentration of 0.5%, because in this concentration causes high mortality (98%) with the lowest amount of input. / A planta A. curassavica é caracterizada como planta tóxica para vertebrados, e pouco se sabe sobre seu efeito em invertebrados, como insetos. Dessa forma, foi conduzido um estudo para verificar a ação de A. curassavica sobre S. frugiperda. As plantas foram coletadas, secas e moídas, e a partir do pó foi confeccionado o extrato etanólico bruto. Este foi adicionado à dieta oferecida as lagartas, em dois ensaios, um nas concentrações de 1%, 2% e 4%; e outro nas concentrações de 0,05%, 0,1% e 0,5%. Os parâmetros avaliados foram: mortalidade; consumo alimentar; peso de larvas e pupas; fertilidade (nº de ovos e % de eclosão). Dois ensaios (um com lagartas de segundo instar e outro com lagartas de quinto instar) de aplicações tópicas do extrato nas concentrações de 1%, 2%, 4% e 6%, foram conduzidos para verificar a ação de contato através da mortalidade após o tratamento. Foram realizados testes com e sem chance de escolha, utilizando discos foliares de milho imersos sob extrato etanólico nas concentrações de 1%, 2% e 4%, onde avaliaram-se: consumo alimentar (g) e índice de preferência. Foi conduzido ensaio avaliando polifenóis totais e flavonoides no extrato A. curassavica a fim verificar a presença e mensurá-los. O extrato de A. curassavica adicionado a dieta artificial, provocou mortalidade de S. frugiperda em todas concentrações, destacando-se 1%, 2% e 4% apresentaram 100% de mortalidade, e também 0,5% com 98% de mortalidade. O prolongamento do período larval foi evidenciado nos tratamentos 0,1% e 0,5%, em 1,29 e 10,75 dias respectivamente, em relação a testemunha. Houve redução do peso larval nos tratamentos 0,05%, 0,5%, 1%, 2% e 4% em 15%, 77%, 17%, 97% e 100%, respectivamente. Sobre o peso pupal, houve redução do peso das pupas machos nos tratamentos 0,05%, 0,1% e 0,5% em 10%, 22% e 54% respectivamente; já no peso das pupas femêas, houve redução com o tratamento 0,1% em 9,5%. O consumo alimentar foi reduzido nos tratamentos 0,5%, 1%, 2% e 4% em 22%, 40%, 47% e 57%, respetivamente. O peso das fezes excretadas nos tratamentos 0,1%, 1%, 2% e 4% foi de 0,730g, 0,002g, 0g e 0g, respectivamente. Em nenhuma concentração foi verificada interferência no número de posturas, número de ovos e porcentagem de eclosão. Sobre aplicação tópica nas lagartas de segundo instar, foi verificada ação de contato em todas concentrações, destacando-se o tratamento 6% que provocou 100% de mortalidade após 72 horas da aplicação. Porém, no ensaio com lagartas de quinto instar, não se verificou a ação de contato nos tratamentos utilizados. Nos testes com e sem chance de escolha, houve diferença no consumo alimentar em todas concentrações, destacando-se a redução no tratamento 4%. Todos tratamentos foram classificados como fagodeterrentes, e o tratamento 4% obteve a menor preferência. Foi verificada a presença de pólifenois totais e flavonoides no extrato, apresentando 58,75 ug/ml e 150,1 ug/ml, respectivamente. O extrato de A. curassavica deverá ser experimentado a campo na concentração de 0,5%, pois nessa concentração causa alta mortalidade (98%) com a menor quantidade de insumo.