Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-12T16:41:28Z No. of bitstreams: 1 marli-melo-da-silva.pdf: 1647102 bytes, checksum: c7302fa37032bf7ffbdd181c59e1eba8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-12T16:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marli-melo-da-silva.pdf: 1647102 bytes, checksum: c7302fa37032bf7ffbdd181c59e1eba8 (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / As vacinas estão entre os produtos biológicos mais seguros, eficazes e com maior relação custo-benefício, pois têm permitido a erradicação de várias doenças imunopreveníveis. Porém, não são absolutamente inócuas e freqüentemente estão associadas a eventos adversos, nem sempre detectados nos estudospré-clínicos e clínicos. Vacinação é uma intervenção médica, da qual se espera um elevado padrão de segurança e efetividade: por serem as vacinas aplicadas em pessoas saudáveis e de forma compulsória, em contraste com outros medicamentos, a aceitação a eventos adversosse torna consideravelmente mais baixa. Com a finalidade de assegurar a qualidade e a segurança de vacinas e soros, em resposta a algumas crises e tragédias ocorridas na saúde pública, tem início no século XX, nos Estados Unidos a regulação de produtos biológicos, sendo, oincidente com o Laboratório Cutter (Cutter Incident), na década de 50, considerado como marco no surgimento da farmacovigilância, exigindo o estabelecimento de sistemas de vigilância de eventos adversos, tanto por parte das agências regulatórias quanto dosetor industrial. Nesse cenário, este trabalho tem por objetivo contribuir com proposta para aperfeiçoar e consolidar o sistema de monitoramento de eventos adversos pós-comercialização de vacinas em Bio-Manguinhos. Para atender os objetivos propostos, foram realizadas consultas a materiais impressos, como livros e relatórios não publicados, e meios eletrônicos para consulta, como por exemplo, aos portais eletrônicos de sistemas regulatórios nacional e internacional; entrevistas com gestores e ex-gestores de Bio-Manguinhos e do Programa Nacional de Imunizações (PNI); e visita a uma empresa farmacêutica privada, visando a obtenção de informações que levassem ao conhecimento e à análise crítica da vigilância pós-comercialização de vacinas. Dentre os resultados, observou-se que, apesar da vigilância pós-comercialização ser, há vários anos, uma exigência regulatória, países desenvolvidos como Estados Unidos, já possuem sistemas operando, enquanto que, países em desenvolvimento, como Brasil, ainda estão implantando seus sistemas. A ANVISA, Autoridade Regulatória Nacional, criada em 1999, ainda, não monitora eventos adversos pós-vacinação, sendo esta atividade realizada, apenas, pelo PNI. No ano de 2000, Bio-Manguinhos, unidade da Fiocruz produtora de vacinas e um dos principais fornecedores de vacinas ao Ministério da Saúde, criou setor para responder aos questionamentos e investigar, em conjunto com o PNI, eventos adversos associados aos seus produtos. Esta atividade, entretanto, vem sendo realizada de forma não sistematizada, sem orientação adequada aos participantes do processo. Estes fatos constituíram-se fundamentais para a elaboração da proposta para a Instituição, apresentada neste trabalho, que poderácontribuir para reduzir a descentralização das informações relacionadas a eventos adversos, aumentar o nível de conhecimento e participação de todos os envolvidos no processo, sobretudo na geração de informações relevantes tanto para a segurança dos produtos comercializados quanto para formulação de respostas para o público, clientes, profissionais de saúde e Autoridade Regulatória Nacional, contribuindo assim para o reconhecimento da importância desta atividade na área de vacinas. / Vaccines are among the safest, effective and largercost-benefit biological products, because they have been allowing eradication of several vaccine preventable diseases. However, vaccines are not quite innocuous and they are frequently associated to adverse events. Pre-clinical and clinical trials do not always detect all possible adverse events and reactions. Vaccination is a medical intervention of high safety and effectiveness patterns expectation, as they are compulsorily applied in healthy people, incontrast with drugs, it makes acceptance considerably lower to the adverse events. Although much has been concerned about adverse reactions since the antiquity, regulation of biological products only had began in the 20 th century in the United States, with the purpose of assuring purity and safety of vaccines and serums, in response to the crises and tragedies occurred in public health. But the incident that happened in the 50s with the Cutter Laboratory – Cutter Incident – can be considered a starting point in Pharmacovigilance. This study aims to analyze the post-marketing surveillance system activities for adverse events and also to contribute for consolidation of these activities in Bio-Manguinhos. In order to assure the quality and safety of vaccines and sera in response to some public health crises and tragedies, in the beginning of 20 th century, the regulation of biological products has been started in the United States being Cutter Incident, in the 50s, the starting point of pharmacovigilance. This has demanded the establishment of adverse events surveillance systems, not only for regulatory agencies but also for industrial sector. In this scenario, this study aims to contribute with proposal to improve and consolidate, in Bio-Manguinhos, the monitoring system of post-marketing vaccines adverse events. In order to meet proposed aims, printed materials like books, unpublished reports, and electronic media like homepages of national and international regulatory systems have been referred to; current and former managers of Bio-Manguinhos and the National Program of Immunization (PNI) havebeen interviewed; and a private pharmaceutical company has been visited in order tocollect information that would lead to knowledge and critical analysis of the post-marketing surveillance. Among the results, it was observed that, although post-marketing surveillancehas been a regulatory requirement for many years, in developed countries like the United States, developing countries like Brazil, their systems are still being implemented. ANVISA, National Regulatory Authority, created in 1999, has not monitored post-vaccination adverseevents yet. This activity has been performed by PNI only. In 2000, Bio-Manguinhos, vaccine manufacturer unit of Fiocruz and one of the main suppliers of the Ministry of Health, created a sector to respond to questions and investigate, with PNI, adverse events related to its products. These facts have been fundamental for elaborating a proposal for the institution, presented in this work, which may contribute to reduce the decentralization of information related to adverse events and increase the level of knowledge and participation of everyone involved in the process, especially in the generation of information that are relevant not only for the safety of products but also for the answers to the public, clients, health workers and the National Regulatory Authority. It may contribute to the recognition of the importance of this activity in the area of vaccines.

Orientador: Renata Cristina Batista Fonseca / Resumo: A fragmentação é uma das principais causas da perda de biodiversidade. Conciliar as atividades produtivas e a conservação dos recursos naturais é um dos principais desafios das empresas do setor florestal. Poucos estudos avaliam a composição e estrutura das comunidades em longo prazo, sendo o monitoramento de aves uma ferramenta eficaz para tal finalidade. Este estudo foi conduzido num fragmento de vegetação natural em unidade de manejo florestal no município de Agudos, interior de São Paulo, Brasil. Tem como objetivo verificar se houve alteração na comunidade de aves de um fragmento de no intervalo de 35 anos. Nesse intervalo o fragmento que no estudo inicial era isolado foi conectado a outras áreas de vegetação natural por meio de corredores ecológicos. A captura das aves foi realizada com o auxílio de redes de neblina, dispostas em cinco pontos, com quatro redes por ponto. As amostras foram realizadas por dois dias consecutivos/mês/ponto sendo o estudo inicial, realizado de março de 1982 a janeiro de 1983 e o atual, de novembro de 2017 a dezembro de 2018. No estudo inicial foram capturados 368 indivíduos, distribuídos em 16 famílias e 32 espécies. A diversidade foi de H’ = 2,7. Não houve dominância significativa entre as espécies (J = 0,77). No atual foi constatada diminuição significativa na riqueza e diversidade, sendo capturados 142 indivíduos, de 12 famílias e 18 espécies. A diversidade foi de H’ = 2,2. Não houve dominância significativa entre as espécies (J = 0,78). A... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fragmentation is a major cause of biodiversity loss. Reconciling how productive activities and conservation of natural resources is one of the main challenges for companies in the forest sector. Few studies assess long-term community composition and structure, and bird monitoring is an effective tool for such use. This study was conducted on a fragment of natural vegetation in the forest unit in Agudos, São Paulo State, Brazil. It aims to verify if there was alteration in the bird community of a 35 years interval fragment. In this interval the fragment that in the initial study, was connected to other areas of natural vegetation through ecological corridors. The birds were captured with the aid of five point mist nets with four nets per point. Samples were taken for two consecutives days/month/point with the initial study conducted from March 1982 to January 1983 and the current study from November 2017 to December 2018. No initial study captured 368 individuals, distributed in 16 families and 32 species. The diversity was H '= 2.7. There was no significant dominance between species (J = 0.77). At the moment, there was a significant reduction in richness and diversity, and 142 individuals from 12 families and 18 species were captured. The diversity was H '= 2.2. There was no significant dominance between species (J = 0.78). A collector curve in the current study is not stabilized and an estimated 26 species (Jackknife1). The results show that despite the strategies adopted by... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Ingeniero Civil en Biotecnología / A lo largo del tiempo, los organismos vivos han desarrollado la capacidad de utilizar y acumular metales de transición. Esta capacidad resulta de suma importancia al considerar que estos elementos, entre los cuales se encuentra el cobre, están asociados a distintos procesos y rutas metabólicas. A pesar de esto, pueden llegar a ser tóxicos para la célula sobrepasando ciertas concentraciones. En el presente trabajo se proponen mecanismos cinéticos de los componentes de la homeostasis del cobre en Escherichia coli para estudiar la resistencia de éste elemento en bacterias. Estos mecanismos se relacionan mediante un modelo cuantitativo de flujos a partir de EDOs, donde se identificó y caracterizó cada componente del sistema. La cinética de tres proteínas (CopA, CueO y CusCBA) es estudiada en base a sus actividades reportadas para la obtención de los parámetros cinéticos, los cuales son ajustados por los mecanismos propuestos mediante la técnica de análisis numérico de mínimos cuadrados. Para desarrollar el modelo se realizaron algunos supuestos, como considerar las concentraciones de ATP, H+ y O2 en exceso para las reacciones, y mantener la cantidad de proteínas constante. Como resultado principal, se obtiene que la cantidad de cobre en el citoplasma y periplasma varía entre 2 a 12 átomos (0.003 a 0.02 [uM]) y 55 a 570 átomos (0.09 a 0.95 [uM]) respectivamente; otorgando a este segundo compartimiento 48 veces más capacidad de almacenamiento de cobre libre. Además, las escalas de tiempo de respuesta de las simulaciones, están en el orden de los 30 minutos, acercándose al tiempo de respuesta que se espera para mantener el supuesto de proteínas constante. Por otra parte, el resultado del modelo es más sensible a perturbaciones de los parámetros cinéticos de CueO y del volumen extracelular; mientras que se observan variaciones menores del 1% al perturbar los parámetros del sistema transportador CusCBA-CusF. El modelo se validó mediante ensayos de comparación entre distintos casos de mutaciones de tipo knockdown y los valores de las MICs asociadas a ellos, pudiendo recuperar los valores vinculando las MICs reportadas con las MICs obtenidas mediante una relación. En los casos de silenciamiento genético de CopA, se observa la importancia de insertar un transportador putativo que transporte cobre desde el periplasma hacia el citoplasma. A través del modelo, es posible estudiar el comportamiento de los elementos principales de la homeostasis de cobre en bacteria, validando la metodología utilizada. A partir de esto, se puede tener aproximaciones de la dinámica del sistema de homeostasis de cobre y dada la flexibilidad del modelo, extrapolarlo a otros organismos para evaluar concentraciones críticas de este elemento en distintos casos como polímeros biocidas o enfermedades relacionadas con la absorción del cobre.

Objetivo: Determinar la asociación entre el nivel de conocimiento y actitud sobre accidentes con materiales punzocortantes en los internos de medicina del Hospital Sergio Bernales- Junio del 2016. Materiales y Métodos: Estudio transversal, analítico, relacional y cuantitativo. La muestra total se conformó por 115 internos de medicina, la evaluación se realizó a través de una encuesta que ha sido validada por expertos. El análisis estadístico se realizó mediante el programa SPSS v.22, para el análisis se utilizó la prueba Chi cuadrado para evaluar la asociación, considerando estadísticamente significativo todo valor de p < 0.05, además se analizó el Odds Ratio (OR) correspondiente con sus intervalos de confianza al 95% (IC-95%) para la determinación del riesgo. Resultados: Se evidenció que el 63.48 % presentan un nivel de conocimiento alto, mientras un 36.52 % obtuvo un nivel de conocimiento bajo. En cuanto al área actitudinal un 33,04% del total de la población presento actitudes negativas y un 66,96 % presento actitudes positivas. Los datos se analizaron mediante la prueba de Chi cuadrado estableciendo asociación estadísticamente significativa entre el nivel de conocimiento y la actitud (p < 0.01), además, se evidencio que existe un factor de riesgo asociado (OR: 20.31, IC: 7.52 - 54.86). El 55.65% refiere haber recibido capacitación muy pocas veces sobre el manejo de accidentes punzocortantes. Conclusión: La mayoría de los internos de medicina del Hospital Sergio Bernales tienen un nivel de conocimiento alto (63,48%) y también presentan una actitud positiva (66,96 %), por lo tanto, un mejor nivel de conocimiento se asocia con una buena actitud para afrontar un accidente laboral.

Orientador: Joaquim Gonçalves Machado Neto / Banca: Teresa Cristina Tarlé Pissarra / Banca: Regina Teresa Rosim Monteiro / Banca: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: José Roberto Ferreira / Resumo: Com esse estudo objetivou-se avaliar a qualidade das águas de pesque-pague quanto a presença de agrotóxicos e cafeína, determinar a toxicidade dessas águas para Daphnia magna e Lemna minor e avaliar o risco ambiental dos contaminantes prevalentes para D. magna, L. minor e Oreochromis niloticus. Para tanto, amostras de águas e de sedimentos de fundo dos tanques de peixes dos pesque-pague foram coletadas trimestralmente entre Junho/2014 e Maio/2015. As determinações dos resíduos de agrotóxicos e de cafeína foram realizadas por LC-MS/MS. As maiores contaminações das águas ocorreram, em ordem decrescente, com a cafeína e com os herbicidas tebutiuron, metolacloro, hexazinona, atrazina, ametrina e clomazone. Os fatores que mais influenciaram a contaminação das águas por agrotóxicos foram as características físicas e químicas dos herbicidas, quantidade de área cultivada com cana-de-açúcar no entorno dos pesque-pague e a coincidência ente as maiores precipitações pluviais e as aplicações dos agrotóxicos. Os lançamentos de efluentes de Estações de Tratamento de Esgoto em águas superficiais que margeiam os pesque-pague foi o fator responsável pela contaminação das águas com a cafeína. As águas dos pesque-pague não apresentaram toxicidade para D. magna e L. minor e a baixa concentração de nutrientes nessas águas foi um fator relevante para a inibição de crescimento de L. minor. O tebutiuron é o agrotóxico prevalente nas águas dos pesque-pague e é mais tóxico para os organismos-teste qu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the quality of fee-fishing pounds water about the pesticides and caffeine presence, to determine the water toxicity for Daphnia magna and Lemna minor, and to evaluate the environmental risk of contaminants prevalent for D. magna, L. minor and Oreochromis niloticus. For that, water and bottom sediments samples from the fish tanks of the fee-fishing pounds, were collected quarterly between June/2014 and May/2015. Residues determinations of pesticides and caffeine were performed by LC-MS/MS. The highest water contamination occurred, in descending order, with caffeine and the herbicides tebutiuron, metolachlor, hexazinone, atrazine, ametrine and clomazone. The factors that most influenced the water contamination by pesticides were the physical and chemical characteristics of the herbicides, the amount of area cultivated with sugarcane in the surroundings of the fee-fishing pounds and the coincidence between the greater precipitations and the pesticides applications. The effluent releases of Sewage Treatment Stations in surface water that border the fee-fishing pounds was the responsible factor for the contamination of the water by caffeine. The water of the fee-fishing pounds had no toxicity for D. magna and L. minor and the low concentration of nutrients in the water was a relevant factor for the inhibition of L. minor growth. Tebutiuron is the prevalent agrochemical in fee-fishing pounds water and it is more toxic to test organisms than caffeine. Due to acute toxicity, tebutiuron is classified as a high environmental intoxication risk for L. minor and a acceptable environmental intoxication risk for D. magna and O. niloticus. / Doutor

Determinamos a presença de RNA mensageiro de melanopsina em células embrionárias ZEM-2S por PCR, o que foi confirmado por sequenciamento. Os experimentos de PCR para receptores de melatonina em cDNA de células ZEM-2S sugeriram a presença do subtipo MT2 em células ZEM-2S. Não foram identificadas bandas correspondentes ao peso esperado para MT1 ou Mel 1C. A identidade do receptor MT2 em ZEM-2S foi confirmada por sequenciamento. Determinamos ainda que, em células embrionárias ZEM-2S, os seis genes Cry conhecidos para Danio rerio estão expressos. Quando as células ZEM-2S foram expostas ao regime de claro e escuro (12C:12E), a expressão de melanopsina apresentou dois picos: no início da fase de claro ZT3, e no início da fase de escuro ZT12. Estes picos foram mantidos quando as células foram submetidas a escuro constante e, curiosamente, em todos os ZTs houve aumento significativo de expressão quando comparados aos ZTs equivalentes das células submetidas a ciclo claro:escuro. Melanopsina não apresentou ritmicidade de expressão em células ZEM-2S em nenhuma das condições. No entanto, há uma tendência a ritmicidade em células mantidas em 12C:12E, que desaparece em escuro constante. O pulso de melatonina aparentemente estimulou a expressão na fase de escuro subjetivo, mas sem significância estatística. O RNAm de Clock não exibiu ritmo em células ZEM-2S mantidas em condições de 12C:12E, escuro constante, ou em escuro constante recebendo pulso de melatonina. Há no entanto visível tendência a aumento de expressão na escotofase e durante o escuro subjetivo, a qual é abolida pelo pulso de melatonina. O RNAm de Per 1 e Cry 1b apresentou marcada ritmicidade em células submetidas a fotoperíodo 12C:12E. Vê-se aumento significativo 3 horas antes do início da fase de luz (ZT21), e acentuado declínio na fase de escuro. Em escuro constante, a ritmicidade de Per1 e Cry1b foi grandemente atenuada, mas persistiu. O pulso de melatonina foi ineficaz em recuperar a amplitude da ritmicidade observada em 12C:12E, e ainda mais, aboliu a ritmicidade para ambos os genes. Após um pulso de melatonina, os genes Clock, Per1 e Cry1b de células ZEM- 2S perderam a expressão rítmica que ainda persistia em escuro constante. É provável que melatonina, semelhantemente ao observado em outras preparações, iniba a fosforilação de CREB nas células ZEM-2S, assim reduzindo a ativação dos promotores dos genes do relógio. De qualquer forma, poderíamos interpretar que a melatonina traz os genes de relógio para um mesmo patamar, dessa forma reajustando o ritmo, independente da fase. Nosso estudo traz contribuições importantes para o conhecimento da fisiologia de relógios periféricos e abre novas perspectivas para futuras investigações sobre mecanismos subjacentes a ritmos em células isoladas e sua regulação por hormônios e luz. / The presence of melanopsin mRNA in ZEM-2S embryonic cells was determined through PCR, followed by sequencing. PCR experiments for melatonin receptors with ZEM-2S cell cDNA suggested the presence of the MT2 subtype. Bands corresponding to the expected weight for MT1 or Mel 1C were not identified. The identity of the MT2 receptor in ZEM-2S was confirmed through sequencing. We have also determined that the six Cry genes known in Danio rerio are expressed in ZEM-2S embryonic cells. When ZEM-2S cells were submitted to a light:dark (12L:12D) cycle, melanopsin expression presented two peaks, one at the beginning of the light phase (ZT3), the other at the beginning of the dark phase (ZT12). These peaks of expression remained when the cells were kept under constant darkness, and interestingly, a significant rise in expression was found in all ZTs when compared with the corresponding ZTs of cells kept under the light:dark cycle. Melanopsin did not exhibit a rhythmic expression in ZEM-2S cells in none of the conditions. However, there is a tendency of a rhythm in cells kept under 12L:12D, which disappears under constant darkness. Melatonin pulse seems to stimulate the expression during the subjective dark phase, but without any statistical significance. Clock mRNA did not present a rhythm in ZEM-2S cells kept either under 12L:12D, constant darkness or constant darkness with a melatonin pulse. However, there is a tendency of a rise in expression during the dark phase and during the subjective darkness, which is abolished by the melatonin pulse. Per 1 and Cry 1b mRNAs presented a robust rhythmicity in cells kept under 12L:12D. There is a significant rise three hours before the beginning of the light phase (ZT21), and sharp fall during the dark phase. Under constant darkness, Per1 and Cry1b rhythmicity, although present, was greatly attenuated. Melatonin pulse was not able to recover the amplitude observed under 12L:12D, moreover, it abolished rhythmicity of both genes. After melatonin pulse, Clock, Per1 and Cry1b genes in ZEM-2S cells lost the rhythmic expression, which still persisted under constant darkness. It is possible that 48 melatonin, as observed in other preparations, inhibits the phosphorylation of CREB in ZEM-2S cells, reducing the activation of the Clock genes promoters. Anyway, one could interpret that melatonin brings the Clock genes to the same level, therefore resetting the rhythm, independently of the phase. This study brings important contributions to the understanding of peripheral Clock physiology and opens new perspectives for future investigations of the underlying mechanisms of rhythms in isolated cells and their regulation by hormones and light.

Os micro-organismos endofíticos são aqueles que habitam o interior de um tecido vegetal, intra ou extracelularmente sem causar-lhe nenhum prejuízo. Eles possuem uma relação de simbiose (relação interespecífica de forma mutuamente vantajosa) com a planta e podem, por isto, sintetizar substâncias com alto potencial biotecnológico. Neste trabalho, objetivou-se a avaliação da capacidade dos fungos endofíticos isolados do mangue do litoral sul do estado de São Paulo, em produzirem compostos com atividade biológica: antimicrobiana, antiproliferativa, antioxidante e leishmanicida. Os extratos brutos de doze fungos endofíticos foram avaliados quanto a sua capacidade antimicrobiana contra uma bactéria Gram-positiva, uma bactéria Gram-negativa e uma levedura patogênica pelo método de microdiluição em placa. Três dos doze fungos endofíticos testados, Diaporthe phaseolorum 41.1(1), Diaporthe sp. 54(4) e Gibberella moniliformis 99(3), destacaram-se neste teste (CIM de 62,500 a 125,000µg/mL) e posteriormente, foram realizadas as demais avaliações de atividade biológica com eles. Verificou-se atividade antioxidante pelo método DPPH (1,1-difenil-2-picrilidrazil) abaixo dos valores encontrados para os padrões butil hidroxi tolueno (BHT) (66,310% ±0,019) e ácido ascórbico (96,047% ±0,005) para os extratos dos fungos testados: D. phaseolorum 41.1(1) (8,357% ±0,005), Diaporthe sp. 54(4) (8,747% ±0,018) e G. moniliformis 99(3) (29,640% ±0,011). Somente o extrato bruto do fungo Diaporthe sp. 54(4) apresentou atividade antiproliferativa contra as linhagens de células tumorais testadas. Foram necessários 2,700µg/mL para inibir 50% do crescimento de células de leucemia K562 e 7,200µg/mL para inibir a mesma porcentagem de células tumorais de glioma K51, sendo considerado um extrato com atividade moderada contra estas linhagens tumorais. O extrato do endófito D. phaseolorum 41.1(1) demonstrou melhor atividade leishmanicida, sendo que a concentração de 7,197µg/mL inibe o crescimento de cinquenta porcennto das formas promastigotas de Leishmania amazonensis. Estes resultados destacam a importância do estudo destes micro-organismos do mangue, pois eles podem ser uma fonte de várias substâncias com atividade de interesse farmacológico. / Endophytic microorganisms are those that inhabit the interior of plant tissues, intra-or extracellularly without causing any damages. They have a symbiotic relation with the plant and they can synthesize substances with high biotechnological potential. This study aimed to review the capacity of mangrove endophytic fungi isolated from the southern coast of São Paulo state in producing compounds with biological activity: antimicrobial, antiproliferative and antioxidant. Twelve endophytic fungi extracts were screened for their antimicrobial properties against Gram-positive bacteria, a Gram-negative bacteria and pathogenic yeast by microdilution plate method. Three of them, Diaporthe phaseolorum 41.1 (1), Diaporthe sp. 54 (4) and Gibberella moniliformis 99 (3), stood out in this test (MIC 62.500 to 125.000µg/mL) and then were held other biological activities assays with them. The scavenging capacity (average sequestrant capacity + standard deviation), at 90 ppm was measured by DPPH (1,1-diphenyl-2-picrilidrazyl) method and it was found values ​​found for BHT (butil hydroxi toluen) patterns (66.310% ± 0.019) and ascorbic acid (96.047% ± 0.005) and for the extracts of fungi tested which were below than the patterns: D. phaseolorum 41.1(1) (8.357%± 0.005), Diaporthe sp. 54(4) (8.747%± 0.018) and G.moniliformis 99(3) (29.640% ± 0.011). Only the Diaporthe sp. 54(4) crude extract presented antiproliferative activity against tumor cell lines tested wich 2.7µg/mL of the crude extract were required for 50% growth inhibition of leukemia cells K562 and 7.2µg/mL to inhibit the same percentage of K51 glioma tumor cells, this extract can be considered moderately active against these tumor cell lines. The extract of the endophytic D. phaseolorum 41.1 (1) showed better leishmanicidal activity, whereas the concentration of 7.197µg/mL inhibits 50% of the growth of Leishmania amazonensis promastigote forms.These results highlight the importance of these mangrove microrganisms study and show that they can be a source of various substances with pharmacological interest activity. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A esquistossomose é uma doença parasitária crônica causada por parasitos do gênero Schistosoma e apresenta um significativo impacto social e econômico. Atualmente, o praziquantel (PZQ) é o medicamento utilizado para o tratamento da doença, indicado pela Organização Mundial da Saúde. No entanto, a dependência de um único fármaco é preocupante, pois com reinfecções constantes e repetição de tratamento pode ocorrer a seleção de cepas resistentes. Sendo assim, a busca por novas substâncias com atividade esquistossomicida é essencial. O gênero Senna é alvo de muitos estudos devido ao reconhecimento de sua grande diversidade biológica e propriedades farmacológicas. No presente trabalho foi avaliada a atividade esquistossomicida in vitro do extrato etanólico (EEt), frações do extrato (FAE e FDm), e de alcaloides majoritários obtidos das flores de Senna spectabilis. Dos alcaloides piperidínicos também foi avaliada a atividade cercaricida e seu efeito em interação com PZQ. Os vermes adultos de S. mansoni foram expostos a diferentes concentrações do EEt, FAE e FDm, e mistura de substância cassina/ espectalina para avaliação de viabilidade dos parasitos e cálculo de concentração inibitória de 50%. Foi avaliada a atividade excretora e lesões de tegumento dos vermes adultos de S. mansoni expostos à mistura de alcaloides cassina/espectalina por meio de marcação com sondas fluorescentes. A viabilidade celular foi avaliada utilizando células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC) por ensaio de redução de MTT. O extrato etanólico e a fração acetato de etila de S. spectabilis, em concentrações elevadas provocam diminuição da ovoposição, paralisação de sistema excretor e lesões de tegumento. A fração diclorometano exerce atividade significativa quando comparada ao controle, visto que tal atividade é resultado da maior concentração de alcaloides nesta fração. A mistura (cassina/ espectalina) causou paralisia total dos vermes adultos de S. mansoni além de inibir a atividade excretora e provocar lesões de tegumento consideráveis no parasito na concentração de 50,0 µg/mL. Em relação à atividade cercaricida, os alcaloides supracitados provocaram paralisação e perda de cauda a partir da concentração de 50,0 µg/mL, e exibiram resultados relevantes em sinergismo com PZQ. A mistura de alcaloides também exibiu baixo valor de DL50 34,7 µg/mL; e apresentou potencial citotóxico moderado CC50 132,1 µg/mL. Estes resultados são promissores quanto à atividade esquistossomicida, portanto requerem estudos mais aprofundados. / Schistosomiasis is a chronic parasitic disease caused by parasites of the genus Schistosoma and presents a significant social and economic impact. Currently, praziquantel (PZQ) is the drug used for the treatment of the disease, indicated by the World Health Organization. However, the dependence on a single drug is concerning, since with constant reinfections and retreatment the emergence of resistant strains can occur. Therefore, the search for new compounds with schistosomicidal activity is essential. The genus Senna is the subject of many studies due to the recognition of its great biological diversity and pharmacological properties. In the present study, in vitro schistosomicidal activity was evaluated of the ethanolic extract, fractions from the extract and majoritarian alkaloids obtained from Senna spectabilis flowers. From the last two compounds, the cercaricidal activity and its effect in interaction with PZQ were also evaluated. The adult worms of S. mansoni were exposed to different concentrations of ethanolic extract (EEt), ethyl acetate (FAE) and dichloromethane (FDm) fractions, and mixtures of compounds cassina/espectalina for the assessment of parasites viability and calculation of the inhibitory concentration of 50%. The excretory activity and tegument lesions of adult worms of S. mansoni exposed to the mixture of alkaloids cassina/espectalina were evaluated through staining with fluorescent probes. Cell viability was assessed using human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) by MTT reduction assay. The (EEt) and (FAE) of S. spectabilis, in high concentrations, cause decrease in oviposition, excretory system shutdown and tegument lesions. FDm fraction has significant activity when compared to the control, as this activity is result of higher concentration of alkaloids in this fraction. The mixture (cassina/espectalina) caused complete paralysis of adult worms of S. mansoni, in addition to inhibit the excretory activity and lead to considerable tegument lesions in the concentration of 50.0µg/mL. Regarding cercaricidal activity, the above-mentioned alkaloids caused paralysis and tail loss starting at a concentration of 50.0 µg/mL, and relevant results were obtained in the synergism with PZQ. The alkaloids mixture also showed low DL50 value 34.7µg/mL; and presented potential moderate cytotoxic CC50 132.1µg/mL. These results are promising regarding the schistosomicidal activity, therefore require further study. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

A pancreatina é um produto biotecnológico que contém um complexo enzimático obtido do pâncreas suíno, constituído principalmente pela amilase, lipase e protease. A literatura ainda apresenta poucos dados relacionados à estabilidade da pancreatina em formulações. Desta forma, foram realizados experimentos relativos à estabilidade usando o medicamento comercial Creon 10.000 e também o padrão de pancreatina puro e suas misturas binárias empregando 6 excipientes na proporção de 1:1 (m/m). Para isso, as amostras foram armazenadas durante 1, 3 e 6 meses em câmara de estabilidade a 40 ± 1°C e 75 ± 5% de umidade relativa e a 40 ± 1ºC na ausência de umidade. Foram realizados ainda testes de estresse em 5 condições (alta temperatura, pH ácido, pH básico, luz ultravioleta e oxidação forçada) para avaliar o efeito destes fatores na atividade das 3 enzimas que compõe o complexo. O resultado da atividade da α-amilase (%) nas amostras secas armazenadas por 1 mês, mostrou que a sacarose e o manitol foram os que apresentaram menor interação com a enzima sendo observado uma atividade de 78,6 ± 0,9 e 68,2 ± 0,6, respectivamente. Já a atividade da protease (%) nas amostras armazenadas nas mesmas condições descritas anteriormente, mostrou que a celulose foi o excipiente de menor interação com a enzima (atividade de 11,0 ± 0,5). Em relação à lipase (%), o estearato de magnésio foi o excipiente de menor interação com esta enzima apresentando uma atividade de 66,0 ± 0,8. Por outro lado, a umidade apresentou-se como um fator de forte influência na perda de atividade da α-amilase e protease, porém a atividade da lipase não foi significativamente afetada (88,8 ± 0,9% na mistura com sacarose). O estudo no biofármaco Creon 10.000, mostrou uma diminuição significativa da atividade da α-amilase (68%), lipase (77%) e protease (58%) nas amostras em pó armazenadas por 3 meses à 40ºC e 0% de umidade relativa. Nos resultados dos testes de estresse foi observado que o pH 9,0 e a luz UV não provocaram alterações significativas na atividade da α-amilase. Por outro lado, a lipase sofreu perdas consideráveis de atividade (inferiores a 32%) em todas as condições avaliadas. Os dados mostraram que características dos excipientes e condições de armazenamento afetam a estabilidade da enzima e, consequentemente, sua atividade. Todas as amostras geradas neste trabalho foram analisadas empregando-se espectrofotometria UV/Vis, que é uma técnica recomendada pelo ICH para avaliação de estabilidade de biofármacos. / Pancreatin is a biotechnological product containing an enzyme complex obtained from porcine pancreas, constituted mainly by amylase, lipase and protease that are used for digestive treatment. In literature, a few data related to pancreatin stability in pharmaceutical formulations is available. Thus, experiments were performed concerning the stability of the commercial product "Creon 10,000”, standard pancreatin and its binary mixtures with 6 excipients in the proportion of 1:1 (w/w). In order to accomplish these goals, the samples were subjected to storage during 1, 3 and 6 months using stability camera under two different conditions: at 40 ± 1°C and 75 ± 5% relative humidity and 40 ± 1°C in absence of moisture. Stress testing on 5 conditions (high temperature, acidic pH, alkaline pH, ultraviolet light and forced oxidation) was also performed. In these cases, the consequences in all three enzymes activity were evaluated. α-Amylase activity in samples stored for 1 month in absence of moisture has showed that saccharose and mannitol are the excipients that interact in lower levels with this enzyme (activity of 78.6 ± 0.9% and 68. 2 ± 0.6%, respectively). The protease activity in same condition described previously, has showed cellulose as the excipient that presents minor interaction with this enzyme (activity of 11.0 ± 0.5% was found). Regarding to lipase activity, the magnesium stearate exhibited inferior interaction with this enzyme, once it preserved 66.0 ± 0.8% of activity level. Humidity showed itself as a strong influencing factor in the reduction of α-amylase and protease activities; however, the lipase activity was not significantly affected (88.8 ± 0.9% in the mixture with saccharose). The enzymatic stability study of the biopharmaceutical Creon 10.000 as powdered samples, after 3 months of storage at 40° and 0% relative humidity showed a significant decrease in activity for α-amylase (68%), lipase (77%) and protease (58%). Through the stress testing, it could be observed that pH 9.0 and UV light did not induce great alterations in the α-amylase activities. On the other hand, the lipase suffered considerable activity decrease under all conditions evaluated (less than 32%). The results reveal that the excipients characteristics as well as the storage conditions affect the enzymes stability and consequently their activities. In these works, all samples generated were analysed employing spectrophotometry UV/Vis, which is recommended by the ICH for stability studies of biopharmaceuticals products.

Os fungos endofíticos têm despertado o interesse da comunidade científica especialmente pela sua diversidade e seu potencial na produção de metabólitos secundários. Eugenia pyriformis (Cambess), conhecida como Uvaia, é uma espécie frutífera da família Myrtaceae, que demonstra potencial para a produção de compostos bioativos. Este trabalho teve como objetivo isolar a comunidade fúngica endofítica associada a E. pyriformis e avaliar o potencial em produzir metabólitos bioativos com atividade antimicrobiana, antiproliferativa e antiparasitária. Foram isolados aproximadamente 200 fungos no período do Outono, a partir de folhas adultas. Metade dos isolados foram submetidos à fermentação e extração com acetato de etila. Os extratos foram testados em um ensaio de triagem antimicrobiano. Para o teste de difusão em agar os micro-organismos utilizados foram o Staphylococcus aureus ATCC 6538, a Escherichia coli ATCC 25922 e a Candida albicans ATCC 10231. No total, 54 dos 100 fungos endofíticos testados apresentaram atividade antimicrobiana frente a, no mínimo, um micro-organismo. O S. aureus foi inibido por 34 extratos, a C.albicans teve seu crescimento inibido por 12 extratos, já para E.coli 8 extratos demonstraram atividade. Baseado nos resultados da triagem antimicrobiana, foram selecionados os extratos fúngicos F6F3, F12F2 e F15F1, para os ensaios de CIM e CBM frente à Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 25933, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus epidermidis ATCC 22228, Enterobacter cloacae LMI-UNIFAL, Serratia marcescens LMI-UNIFAL, além dos ensaios antiproliferativo e antiparasitário. Os extratos obtiveram bons resultados no teste de CIM e os valores variaram entre 250 e 1000 µg/mL. Os extratos demonstraram capacidade bactericida na concentração de 1000 µg/mL. Os resultados obtidos no ensaio antiproliferativo demonstraram que os três extratos foram inativos frente as linhagem celulares tumorais, sendo que os extratos F6F3 e F15F1 também não foram capazes de inibir o crescimento de promastigotas, e o extrato F12F2 foi fracamente ativo, no ensaio leishmanicida, contrariando as expectativas. Contudo, os resultados encontrados demonstram o grande potencial antimicrobiano dos fungos endofíticos isolados de E. pyriformis e destacam a importância da continuidade dos estudos dos fungos endofíticos, já que destes poderão ser identificados e isolados compostos bioativos e novas substâncias, provavelmente derivados da complexa interação endofítico/hospedeiro, com atividades de interesse farmacológico. / The endophytic fungi have aroused the scientific community interest especially by its diversity and its potential in the production of secondary metabolites. Eugenia pyriformis (Cambess), known as uvaia, is a fruit species of Myrtaceae’s family, demonstrating the potential for the production of bioactive compounds. This dissertation aimed to isolate the endophytic fungal community associated with E. pyriformis and assess the potential to produce bioactive metabolites with antimicrobial activity, antiproliferative and antiparasitic. 200 fungi were isolated in the autumn period, from mature leaves. Half of the isolates were subjected to fermentation and extraction with ethyl acetate. The extracts were tested in an antimicrobial screening assay. For the agar diffusion's test the microorganisms were tested: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922 and Candida albicans ATCC 10231. In total, 54 of 100 endophytic fungi tested showed antimicrobial activity against at least one microorganism. The S. aureus was inhibited by 34 extracts, the C. albicans had their growth inhibited by 12 extracts, and 8 extracts showed activity for E.coli. Based on the antimicrobial test results, the following fungal extracts were selected F6F3, F12F2 and F15F1 to the MIC assays and MBC against of Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 25933, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus epidermidis ATCC 22228, Enterobacter cloacae LMI-UNIFAL, Serratia marcescens LMI-UNIFAL, besides the anti-proliferative and antiparasitic assays. The extracts showed good results in the MIC test and the values varied between 250 and 1000 µg/mL. The extracts showed bactericidal capacity at 1000 µg/mL. The results of the antiproliferative assay showed that the three extracts were inactive front the tumor cell lineage, in addition the F6F3 and F15F1 extracts also were not able to inhibit the growth of promastigotes, and the F12F2 extract was weakly active in leishmanicidal test, contrary to expectations. However, the results demonstrate the great antimicrobial potential of endophytic fungi isolated from E. pyriformis, and highlight the importance to further study of the endophytic fungi, since from them some compounds and new substances may be isolated and identified from it, probably derived from the complex endophytic/host interaction, with pharmacological interest activities. / Programa Institucional de Bolsas de Pós-Graduação - PIB-PÓS