A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é caracterizada pelo aumento da resistência vascular pulmonar (RVP). Em decorrência, há elevação da pós-carga imposta ao ventrículo direito (VD) e hipertrofia. Assim, com aumento de consumo de O2 pelo miocárdio, é provável que o estresse oxidativo esteja participando do desenvolvimento e progressão desta doença. Sabe-se que o bloqueio beta-adrenérgico diminui a mortalidade de pacientes com insuficiência cardíaca à esquerda, porém pouquíssimas pesquisas referem sua utilização na insuficiência cardíaca à direita. O bucindolol é um beta-bloqueador que atua nos receptores β1, β2, α1 e com propriedade simpatolítica. O objetivo deste estudo foi testar a hipótese de que o tratamento com bucindolol poderia reduzir a hipertrofia do VD e melhorar a função sistólica e diastólica do miocárdio. Foram utilizados ratos Wistar machos pesando 130±10 gramas divididos em quatro grupos (n=7-10/grupo): monocrotalina sem bucindolol (MCT SEM BCD), monocrotalina bucindolol (MCT+BCD), controle sem bucindolol (CTR SEM BCD) e controle bucindolol (CTR+BCD). A HAP foi induzida por meio de uma dose única de monocrotalina (60 mg/Kg – i.p.). Após duas semanas, os animas foram tratados por sete dias com bucindolol (2 mg/Kg/dia – i.p.) ou veículo. No 22º dia após a administração da monocrotalina, os animais foram anestesiados (i.p.) com quetamina (90 mg/Kg) e xilazina (10 mg/Kg), submetidos à ecocardiografia, cateterismo da artéria femoral, cateterismo do VD e decapitados, com posterior coleta dos tecidos. Os resultados foram avaliados utilizando ANOVA de duas vias (Sigma Plot 12.0) seguida pelo 8 teste de Student-Newman-Keuls, com nível de significância P<0,05. Os resultados serão apresentados na versão completa desta dissertação. / Pulmonary arterial hypertension is a rapidly progressive disease with poor prognosis, characterized by increase in pulmonary vascular resistance. As a result, there is an elevation of afterload imposed to the right ventricle and hypertrophy. Thus, since there is a rise in myocardial oxygen consumption, it is probable that oxidative stress is contributing to the development and progression of this disease. It is known that beta-adrenergic blockade reduces mortality in patients with left ventricular heart failure, but limited studies relate their use in right ventricular heart failure. The bucindolol is a beta-blocker that acts on receptors β1, β2, α1 and presents sympatholytic property. The aim of this study was to test the hypothesis that treatment with bucindolol could reduce right ventricular hypertrophy and improve systolic and diastolic function of the myocardium. Male Wistar rats weighing 130±10 grams were divided into four groups (n=7-10/group): monocrotaline without bucindolol (MCT WITHOUT BCD), monocrotaline bucindolol (MCT+BCD), control without bucindolol (CTR WITHOUT BCD) and control bucindolol (CTR+BCD). Pulmonary arterial hypertension was induced by a single dose of monocrotaline (60 mg/Kg – i.p.). After two weeks, the animals were treated for seven days with bucindolol (2 mg/Kg/day – i.p.) or vehicle. Twenty-two days after administration of monocrotaline, the animals were anesthetized intraperitoneally with ketamine (90 mg/Kg) and xylazine (10 mg/Kg), underwent echocardiography, catheterization of the femoral artery and of the right ventricle, decapitation and subsequent collection of tissues (heart, lungs, liver and tibia). The results were analyzed using two-way ANOVA (Sigma Plot 12.0) followed by 10 Student-Newman-Keuls test, with P<0.05 of significance level. Results will be presented in the full version.

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-29T12:59:34Z No. of bitstreams: 1 cp118956.pdf: 11152798 bytes, checksum: 413c607598471e1abd0db7c49883c8ac (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-29T13:00:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp118956.pdf: 11152798 bytes, checksum: 413c607598471e1abd0db7c49883c8ac (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T13:00:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp118956.pdf: 11152798 bytes, checksum: 413c607598471e1abd0db7c49883c8ac (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o crescente aumento da prevalência mundial de diabetes mellitus, tem-se buscado modelos experimentais para melhor compreensão de sua fisiopatologia e tratamento que atendam de maneira mais adequada à preservação de células beta, proteção de órgãos-alvo e atenuação da aterosclerose. Objetivos: Desenvolver modelo experimental de diabetes mellitus tipo 2 induzido por meio de dieta, e utilizá-lo para examinar os efeitos de um inibidor da enzima conversora de angiotensina (IECA) e de um bloqueador do receptor de angiotensina (BRA) na proteção de órgãos-alvo. Métodos: Coelhos machos Nova Zelândia (n=49) receberam dieta acrescida de banha (10%), sacarose (40%) durante todo o protocolo do estudo além de colesterol (0,5% nos três primeiros meses e 0,1% nos meses subseqüentes). Os animais receberam aleatoriamente: apenas a dieta sem fármacos (G1), olmesartana 5 mg (G2), quinapril 30 mg (G3), ou a combinação de ambos (G4), acrescidos à mesma dieta por seis meses. Foram analisados lípides, frutosamina, glicose e insulina em jejum com cálculo dos índices para resistência à insulina e função de células beta pancreáticas. Foram ainda examinadas as áreas sob as curvas de insulina e glicose, após infusão de glicose intraperitoneal. Angiofluoresceinografias e análises histopatológicas avaliaram lesões em órgãos-alvo. Resultados: Os coelhos ganharam peso, e houve aumento dos níveis de glicose, colesterol total, LDL-C e triglicérides e redução do HDL-C (p <0,05 vs. basal). A frutosamina e o HOMA-IR se elevaram, enquanto houve redução do HOMA-β (p <0,05 vs. basal). Sinais precoces de retinopatia diabética foram observados a partir do terceiro mês, progredindo até o final do experimento (p<0,0005). Lesões ateroscleróticas em aorta, esteatofibrose hepática e infiltrado glomerular de macrófagos constituíram os principais achados histomorfológicos. O bloqueio do sistema renina-angiotensina modificou favoravelmente a glicemia e o HOMA-β (p<0,05) e houve atenuação do número e grau dos microaneurismas pelo tratamento com BRA isoladamente ou combinado com IECA (p<0,05 vs. G1). Conclusões: Nosso modelo reproduziu várias características glucometabólicas do diabetes mellitus tipo 2 humanóide, incluindo déficit de secreção e resistência à insulina. O bloqueio do sistema renina-angiotensina atenuou algumas alterações bioquímicas e as lesões microvasculares em retina. / With the increasing prevalence of diabetes mellitus worldwide, new experimental models are required to better understand the pathophysiology of this disease and to offer therapeutic options that can preserve pancreatic beta-cells, protect target organs and attenuate atherosclerosis. Objective: The aims of this study were to develop an experimental model of type 2 diabetes mellitus induced by diet and assess on this model the effects of an angiotensin-converting enzyme inhibitor (ACEI) and an antagonist of the angiotensin II type1 receptor (AT1R) on target organ protection. Methods: New Zealand male white rabbits (n=49) were fed high-fat/high-sucrose (10/40%) during the study protocol and cholesterol-enriched diet (0.5% in the first three months followed by 0.1% until the end of the study). These animals were randomized to receive: diet alone (G1), olmesartan 5 mg (G2), quinapril 30mg (G3), or combination of both drugs (G4), added to the same diet for six months. Fasting lipids, fructosamine, glucose and insulin, with calculation of insulin resistance and beta-cell function indexes were evaluated. The areas under the curves for glucose and insulin were obtained after intraperitoneal glucose bolus injection. Fluorescein angiography and histopathological analyses were performed to assess target-organs lesions. Results: The animals gained weight, and there were increases in blood glucose, total cholesterol, LDL-C and triglycerides, and decrease in HDL-C (p<0.05 vs. baseline). Fructosamine levels and the homeostasis model assessment of insulin resistance (HOMA-IR) were increased, while there was a reduction in the HOMA-β (p<0.05 vs. baseline). Early clinical features of diabetic retinopathy were seen since the third month, progressing up to the end of the experiment (p<0.0005). Aortic atherosclerosis, hepatic steatofibrosis and glomerular macrophage infiltration were the main histomorphologic findings of this study. The renin-angiotensin system (RAS) blockade favorably modified blood glucose and the HOMA- β (p<0.05) and promoted attenuation of the number and grade of microaneurysms in retina in the group of animals receiving AT1R antagonist or combined therapy with the ACEI (p<0.05 vs. G1). Conclusion: Our model reproduced several glucometabolic characteristics of humanoid type 2 diabetes, including decreased insulin secretion and insulin resistance. The RAS blockade attenuated some biochemical abnormalities and the diabetic retinopathy. / FAPESP: 07/51058-8

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1843957 bytes, checksum: 23eff6067396c6f267138994bec5be02 (MD5) Previous issue date: 2012-02-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The studed Herbal Product is indicated for treatment of intestinal colic and constipation, though there are no scientific data, that prove its efficacy. Thus, this study aimed in preclinical pharmacologic trials to evaluate its laxative and spasmolytic action and elucidate its possible pathway. For this, pharmacological tests were carried out in vivo to evaluate its stimulating effect on the gastrointestinal tract and in vitro assays in order to evaluate its spasmodic activity. The Herbal Product increased small intestinal motility in male mice at doses of 100mg/kg (161.66 ± 14.86%, n=6) and 200mg/kg (151.04 ± 17.17%, n=6) compared to control (100.00 ± 10.49%, n=6). The intestinal transit of animals constipated by loperamide (3mg/kg/day, three days) was reduced to 66.25 ± 7.49% (n=8) compared to the control group (100 ± 5.16%, n=8). In the constipated animals treated with doses of 100 and 200mg/kg (98.42 ± 6.33%, n=7) (99.32 ± 8.47%, n=7) was observed the normalization of the traffic bowel. Similar results were observed for 24 hours in the quantification of rat feces constipated by loperamide (3mg/kg/day, three days). The herbal medicine induced return of quantity of feces normal levels (7.92 ± 1.01g, n=6) in constipated animals (4.01 ± 1.43g, n=6), at dose of 100mg/kg (11.24 ± 2.90g, n=6) and 200mg/kg (8.70 ± 2.01g, n=6). These results demonstrate the stimulating action of this preparation in the intestine of the animals with potential laxative effect. Adding increasing and cumulative (0.01-1000μg/mL) of this product did not significantly alter spontaneous contractions in guinea pig ileum. However, its addition (1-1000μg/mL) caused a relaxation in this organ pre-contracted with 1μM carbachol, Emax= 67.61 ± 6.25%; EC50 269.77μg/mL (215.8 to 337.1), n=6; histamine 1μM (Emax= 58.68 ± 7.17%, EC50= 144.10μg/mL (86.65 to 239.70), n=6, and 40mM KCl (Emax= 50.76 ± 3.79%; EC50= 91.94μg/mL (57.97 to 145.80), n=7, no significant difference in the powers, suggesting an action of this product on a step common to these three agents. The relaxing action of this preparation was attenuated in ileum pre-contracted with 60mM KCl (Emax= 39.28 ± 1.95%, n=7) and the efficacy and potency were also significantly attenuated in the presence of potassium channel blockers, 5mM TEA, Emax= 22.79  2.99%; EC50 93.41μg/mL (54.89 to 159.00), n=5; and 5mM CsCl; Emax= 29.44  6.24%, EC50= 112,60μg/mL (44.09 to 287.80), n=5, suggesting the participation of these channels in relaxation. In contractions induced by 300nM S(-)BayK-8644, Cav channel agonist, the effect induced by phytomedicine, Emax= 39.28 ± 1.95%, EC50= 199.70μg/mL (120.50 to 239.00), n=8, was significantly lower when compared to carbachol, indicating the involvement of Cav in its effect. In preparations pre-incubated with 1μM propranolol (Emax= 34.45 ± 4.97%, n=6), the Emax was attenuated, suggesting also the involvement of β-adrenergic receptors in the effect induced by preparation. Thus, we conclude that the Herbal Product acts stimulating the intestine of rats and mice, especially in constipated animals and has spasmolytic activity in guinea pig ileum probably due to opening of K+ channels, inhibition of Ca2+ channels and activation of β-adrenoceptor. / O Produto Fitoterápico estudado é indicado no tratamento de cólicas intestinais e constipação, entretanto não apresenta dados científicos que comprovem sua eficácia. Assim, este estudo objetivou realizar ensaios farmacológicos pré-clínicos para avaliar sua ação laxante e sua ação espasmolítica, bem como elucidar seu provável mecanismo de ação. Para tal, realizaram-se ensaios farmacológicos in vivo para avaliar seu efeito estimulante sobre o trato gastrointestinal e ensaios in vitro com o intuito de avaliar sua atividade espasmolítica. O Produto Fitoterápico aumentou a motilidade do intestino delgado em camundongos machos, nas doses de 100mg/kg (161,66 ± 14,86%; n=6) e 200mg/kg (151,04 ± 17,17%, n=6) quando comparados ao controle (100,00 ± 10,49%; n=6). O trânsito intestinal de animais constipados por loperamida (3mg/kg/dia, três dias) foi reduzido a 66,25 ± 7,49% (n=8) em comparação ao grupo controle (100 ± 5,16%; n=8). Nos animais constipados e tratados com doses de 100 e 200mg/kg (98,42 ± 6,33%, n=7); (99,32 ± 8,47%; n=7), observou-se a normalização do trânsito intestinal. Resultados semelhantes foram encontrados na quantificação por 24 horas de fezes de ratos constipados por loperamida (3mg/kg/dia, três dias), em que o Produto Fitoterápico induziu o retorno da quantidade de fezes a níveis normais (7,92 ± 1,01g; n=6) de animais constipados (4,01 ± 1,43g; n=6), tanto na dose de 100mg/kg (11,24 ± 2,90g; n=6) como na dose de 200mg/kg (8,70 ± 2,01g; n=6). Estes resultados demonstram a ação estimulante da preparação estudada no intestino destes animais com potencial efeito laxante. A adição crescente e cumulativa (0,01-1000μg/mL) deste produto não alterou significativamente as contrações espontâneas em íleo de cobaia. Entretanto, sua adição (1-1000μg/mL) promoveu relaxamento neste órgão pré-contraído com carbacol 1μM, Emax= 67,61 ± 6,25%; CE50 269,77μg/mL (215,8 337,1); n=6, com histamina 1μM, Emax= 58,68 ± 7,17%; CE50= 144,10 μg/mL (86,65 239,70); n=6, ou com KCl 40mM, Emax= 50,76 ± 3,79%; CE50= 91,94μg/mL (57,97 145,80); n=7, não apresentando diferença estatística nas potências, o que sugere uma ação sobre uma etapa comum a estes três agentes. A ação relaxante desta preparação foi atenuada em íleo pré-contraído com KCl 60mM (Emax= 39,28 ± 1,95%; n=7) e sua eficácia e potência também foram significantemente atenuados na presença de bloqueadores de canais para K+, 5mM TEA, Emax= 22,79  2,99%; CE50 93,41μg/mL (54,89 159,00); n=5, e 5mM CsCl, Emax= 29,44  6,24%; CE50= 112,60μg/mL (44,09 287,80); n=5, sugerindo participação destes canais em seu relaxamento. Em contrações induzidas por 300nM S(-)-BayK 8644, agonista de canais Cav, o efeito induzido pelo Produto Fitoterápico Emax= 39,28 ± 1,95%; CE50= 199,70μg/mL (120,50 239,00); n=8, foi significativamente menor, quando comparado ao carbacol, indicando a participação dos Cav em seu efeito. Em preparações pré-incubadas com 1μM propranolol (Emax= 34,45 ± 4,97%; n=6), o Emax foi atenuado, sugerindo também a participação de receptores β-adrenérgicos no efeito induzido pela preparação. Assim, concluimos que o Produto Fitoterápico age estimulando o intestino de ratos e camundongos, principalmente em animais constipados e apresenta atividade espasmolítica em íleo de cobaia provavelmente pela abertura de canais para K+, inibição de canais para Ca2+ e ativação de β-adrenoceptores.

A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é caracterizada pelo aumento da resistência vascular pulmonar (RVP). Em decorrência, há elevação da pós-carga imposta ao ventrículo direito (VD) e hipertrofia. Assim, com aumento de consumo de O2 pelo miocárdio, é provável que o estresse oxidativo esteja participando do desenvolvimento e progressão desta doença. Sabe-se que o bloqueio beta-adrenérgico diminui a mortalidade de pacientes com insuficiência cardíaca à esquerda, porém pouquíssimas pesquisas referem sua utilização na insuficiência cardíaca à direita. O bucindolol é um beta-bloqueador que atua nos receptores β1, β2, α1 e com propriedade simpatolítica. O objetivo deste estudo foi testar a hipótese de que o tratamento com bucindolol poderia reduzir a hipertrofia do VD e melhorar a função sistólica e diastólica do miocárdio. Foram utilizados ratos Wistar machos pesando 130±10 gramas divididos em quatro grupos (n=7-10/grupo): monocrotalina sem bucindolol (MCT SEM BCD), monocrotalina bucindolol (MCT+BCD), controle sem bucindolol (CTR SEM BCD) e controle bucindolol (CTR+BCD). A HAP foi induzida por meio de uma dose única de monocrotalina (60 mg/Kg – i.p.). Após duas semanas, os animas foram tratados por sete dias com bucindolol (2 mg/Kg/dia – i.p.) ou veículo. No 22º dia após a administração da monocrotalina, os animais foram anestesiados (i.p.) com quetamina (90 mg/Kg) e xilazina (10 mg/Kg), submetidos à ecocardiografia, cateterismo da artéria femoral, cateterismo do VD e decapitados, com posterior coleta dos tecidos. Os resultados foram avaliados utilizando ANOVA de duas vias (Sigma Plot 12.0) seguida pelo 8 teste de Student-Newman-Keuls, com nível de significância P<0,05. Os resultados serão apresentados na versão completa desta dissertação. / Pulmonary arterial hypertension is a rapidly progressive disease with poor prognosis, characterized by increase in pulmonary vascular resistance. As a result, there is an elevation of afterload imposed to the right ventricle and hypertrophy. Thus, since there is a rise in myocardial oxygen consumption, it is probable that oxidative stress is contributing to the development and progression of this disease. It is known that beta-adrenergic blockade reduces mortality in patients with left ventricular heart failure, but limited studies relate their use in right ventricular heart failure. The bucindolol is a beta-blocker that acts on receptors β1, β2, α1 and presents sympatholytic property. The aim of this study was to test the hypothesis that treatment with bucindolol could reduce right ventricular hypertrophy and improve systolic and diastolic function of the myocardium. Male Wistar rats weighing 130±10 grams were divided into four groups (n=7-10/group): monocrotaline without bucindolol (MCT WITHOUT BCD), monocrotaline bucindolol (MCT+BCD), control without bucindolol (CTR WITHOUT BCD) and control bucindolol (CTR+BCD). Pulmonary arterial hypertension was induced by a single dose of monocrotaline (60 mg/Kg – i.p.). After two weeks, the animals were treated for seven days with bucindolol (2 mg/Kg/day – i.p.) or vehicle. Twenty-two days after administration of monocrotaline, the animals were anesthetized intraperitoneally with ketamine (90 mg/Kg) and xylazine (10 mg/Kg), underwent echocardiography, catheterization of the femoral artery and of the right ventricle, decapitation and subsequent collection of tissues (heart, lungs, liver and tibia). The results were analyzed using two-way ANOVA (Sigma Plot 12.0) followed by 10 Student-Newman-Keuls test, with P<0.05 of significance level. Results will be presented in the full version.

A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é caracterizada pelo aumento da resistência vascular pulmonar (RVP). Em decorrência, há elevação da pós-carga imposta ao ventrículo direito (VD) e hipertrofia. Assim, com aumento de consumo de O2 pelo miocárdio, é provável que o estresse oxidativo esteja participando do desenvolvimento e progressão desta doença. Sabe-se que o bloqueio beta-adrenérgico diminui a mortalidade de pacientes com insuficiência cardíaca à esquerda, porém pouquíssimas pesquisas referem sua utilização na insuficiência cardíaca à direita. O bucindolol é um beta-bloqueador que atua nos receptores β1, β2, α1 e com propriedade simpatolítica. O objetivo deste estudo foi testar a hipótese de que o tratamento com bucindolol poderia reduzir a hipertrofia do VD e melhorar a função sistólica e diastólica do miocárdio. Foram utilizados ratos Wistar machos pesando 130±10 gramas divididos em quatro grupos (n=7-10/grupo): monocrotalina sem bucindolol (MCT SEM BCD), monocrotalina bucindolol (MCT+BCD), controle sem bucindolol (CTR SEM BCD) e controle bucindolol (CTR+BCD). A HAP foi induzida por meio de uma dose única de monocrotalina (60 mg/Kg – i.p.). Após duas semanas, os animas foram tratados por sete dias com bucindolol (2 mg/Kg/dia – i.p.) ou veículo. No 22º dia após a administração da monocrotalina, os animais foram anestesiados (i.p.) com quetamina (90 mg/Kg) e xilazina (10 mg/Kg), submetidos à ecocardiografia, cateterismo da artéria femoral, cateterismo do VD e decapitados, com posterior coleta dos tecidos. Os resultados foram avaliados utilizando ANOVA de duas vias (Sigma Plot 12.0) seguida pelo 8 teste de Student-Newman-Keuls, com nível de significância P<0,05. Os resultados serão apresentados na versão completa desta dissertação. / Pulmonary arterial hypertension is a rapidly progressive disease with poor prognosis, characterized by increase in pulmonary vascular resistance. As a result, there is an elevation of afterload imposed to the right ventricle and hypertrophy. Thus, since there is a rise in myocardial oxygen consumption, it is probable that oxidative stress is contributing to the development and progression of this disease. It is known that beta-adrenergic blockade reduces mortality in patients with left ventricular heart failure, but limited studies relate their use in right ventricular heart failure. The bucindolol is a beta-blocker that acts on receptors β1, β2, α1 and presents sympatholytic property. The aim of this study was to test the hypothesis that treatment with bucindolol could reduce right ventricular hypertrophy and improve systolic and diastolic function of the myocardium. Male Wistar rats weighing 130±10 grams were divided into four groups (n=7-10/group): monocrotaline without bucindolol (MCT WITHOUT BCD), monocrotaline bucindolol (MCT+BCD), control without bucindolol (CTR WITHOUT BCD) and control bucindolol (CTR+BCD). Pulmonary arterial hypertension was induced by a single dose of monocrotaline (60 mg/Kg – i.p.). After two weeks, the animals were treated for seven days with bucindolol (2 mg/Kg/day – i.p.) or vehicle. Twenty-two days after administration of monocrotaline, the animals were anesthetized intraperitoneally with ketamine (90 mg/Kg) and xylazine (10 mg/Kg), underwent echocardiography, catheterization of the femoral artery and of the right ventricle, decapitation and subsequent collection of tissues (heart, lungs, liver and tibia). The results were analyzed using two-way ANOVA (Sigma Plot 12.0) followed by 10 Student-Newman-Keuls test, with P<0.05 of significance level. Results will be presented in the full version.

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T00:06:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RamosFilho_AntonioCelsoS._M.pdf: 1693116 bytes, checksum: 4526088a65a406983163ece45558e71c (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A hipertensão renovascular é uma forma secundária da hipertensão arterial, que corresponde de 1-5% dos casos de hipertensão. A associação entre hipertensão arterial e disfunções miccionais foi observada no modelo experimental de ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Até o momento nenhum estudo avaliou as disfunções miccionais em animais hipertensos renovasculares. Dessa forma, neste estudo, caracterizamos a disfunção miccional em ratos hipertensos renovasculares através do modelo de dois rins, um clip (2K-1C). Em ratos Wistar (200-220 g) colocou-se um clip em torno da artéria renal. Depois de oito semanas, os ratos foram utilizados. Realizou-se estudo cistométrico em ratos anestesiados, assim como curvas concentração-resposta para agentes contráteis e relaxantes em detrusor isolado (DSM). Foram também realizados estudos histomorfométricos e da expressão de RNAm dos receptores muscarínicos M3 e M2 em DSM isolado. Os resultados histomorfométricos mostraram aumentos significantes na espessura da parede da bexiga, no volume intravesical, na densidade de musculatura lisa e na densidade de fibras neurais no grupo 2K-1C em comparação ao SHAM. O agonista muscarínico, carbacol, produziu contrações concentração-dependentes do DSM, as quais foram significantemente maiores no grupo 2K-1C. O inibidor da Rho-quinase, Y27-632 (10 µM), reduziu significantemente a contração induzida pelo carbacol nos ratos SHAM e 2K-1C; porém, no grupo 2K-1C, o DSM continuou hiperativo na presença do Y27-632. A estimulação elétrica (1 - 32 Hz) produziu contração freqüência-dependente do DSM as quais foram maiores no grupo 2K-1C. O agonista purinérgico P2X, ?,?-metileno-ATP (1 - 100 µM), o KCl (1 - 300 µM) e o Ca2+ extracelular (0,01-100 µM) produziram contrações concentração-dependente; porém, não observamos diferenças entre o grupo SHAM e 2K-1C. O agonista não seletivo ?-adrenérgico, isoproterenol, o agonista seletivo ?2-adrenérgico, metaproterenol, e o agonista seletivo ?3-adrenérgico, BRL37-344, produziram relaxamentos menores do DSM nos ratos 2K-1C, e também redução nos níveis intracelulares de AMPc nos detrusores. O efeito relaxante ao nitroprussiato de sódio e BAY41-2272 mantiveram-se iguais nos animais SHAM e 2K-1C. A expressão do RNAm do receptor muscarínico M3 (mas não do M2) no DSM foi significantemente maior nos ratos 2K-1C em comparação ao grupo controle. Os tratamentos crônicos com losartan e captopril normalizaram a pressão arterial sistólica dos animais 2K-1C, normalizaram a função miccional, e reduziram a hipercontratilidade do detrusor induzida pela estimulação elétrica e pelo carbacol, assim como restabeleceram o relaxamento induzido pelo isoproterenol ao nível do grupo SHAM. Concluimos que os ratos hipertensos renovasculares apresentam hiperatividade do detrusor, a qual envolve remodelamento tecidual e aumento da contração via receptor muscarínico M3 associado à redução no relaxamento ?-adrenérgico com redução da sinalização intracelular e produção de AMPc. Os tratamentos com losartan e captopril restauram a função miccional dos animais 2K-1C / Abstract: Renovascular hypertension is a secondary form of arterial hypertension, accounting for 1-5% of cases in unselected population. Association between arterial hypertension and urinary bladder dysfunction has been reported in spontaneously hypertensive rats, but no study evaluated the bladder dysfunction in renovascular hypertensive animals. Therefore, in this study, we explored the bladder dysfunction in renovascular hypertensive rats, using the two-kidney one-clip (2K-1C) model. A silver clip was placed around the renal artery of male Wistar Kyoto rats (200-220 g). After eight weeks, rats were used. Cystometric study in anesthetized rats, along with concentration-response curves to both contractile and relaxant agents in isolated detrusor smooth muscle (DSM) were performed. Histomorphometry and mRNA expression of muscarinic M3 and M2 receptors in DSM were also determined. The histomorphometric data showed significant increases in bladder wall thickness, intravesical volume and density of smooth muscle, as well as density of neural fibers in the 2K-1C group compared with SHAM. The muscarinic agonist carbachol produced concentration-dependent DSM contractions, which were markedly greater in 2K-1C rats. The Rho-kinase inhibitor Y27-632 (10 µM) significantly reduced the carbachol-induced contractions in sham and 2K-1C rats, but DSM in 2K-1C rats remained overactive in the presence of Y27632. Electrical-field stimulation (EFS; 1-32 Hz) produced frequency-dependent DSM contractions that were also greater in 2K-1C group. The P2X receptor agonist ?,?-methylene ATP (1-100 µM), KCl (1-300 mM) and extracellular Ca2+ (0.01-100 M) produced concentration-dependent DSM contractions, but no changes among sham and 2K-1C rats were seen. In 2K-1C rats, the non-selective ?-adrenoceptor agonist isoproterenol, the ?2-adrenoceptor agonist metaproterenol and the ?3-adrenoceptor agonist BRL 37-344 produced lower DSM relaxations, as well as decreased cAMP levels. The relaxant responses to sodium nitroprusside and BAY 41-2272 remained unchanged in 2K-1C rats. Expression of mRNA of muscarinic M3 (but not of M2) receptors in DSM was significantly increased in 2K-1C rats. The chronic treatment with losartan and captopril normalized the blood systolic pressure of 2K-1C animals, improved their urinary function by reducing DSM hypercontractility to EFS and carbacol stimulation, and restored the relaxation induced by the ?-adrenergic agonist isoproterenol to the level of SHAM group. In conclusion, renovascular hypertensive rats exhibit overactive DSM that involves tissue remodeling and enhanced muscarinic M3-mediated contractions associated with reduced ?-adrenoceptor-mediated signal transduction. The treatments with losartan and captopril improved urinary function of 2K-1C animals / Mestrado / Mestre em Farmacologia

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Dentre essas situações o exercício físico e estresse mental ganham destaque. Com relação ao exercício físico, verificamos que pacientes com cirrose hepática apresentam resposta pressórica diminuída durante o exercício físico isométrico. Assim, é possível que esses pacientes também apresentem alterações hemodinâmicas frente ao estresse mental. Objetivo: Avaliar parâmetros hemodinâmicos durante o estresse mental em pacientes com cirrose hepática. Métodos: Foram avaliados 19 pacientes com cirrose hepática (13 Child A, 5 Child B e 1 Child C) divididos nos seguintes grupos: Pacientes sem uso de β-bloqueador (Grupo Sem β, n=11) e pacientes com uso de β-bloqueador (Grupo Com β, n=8). Adicionalmente, um grupo composto por 16 pessoas sem cirrose hepática (Grupo Controle), pareado por idade e sexo, foi avaliado. O estresse mental foi induzido pelo Stroop Color Word Conflict Test. Foram mesuradas as variáveis pressão arterial batimento a batimento (Finometer®), frequência cardíaca pelo eletrocardiograma (Biopac) e fluxo sanguíneo do antebraço pela pletismografia de oclusão venosa (Hokanson®) durante 3 minutos basais seguidos de 3 minutos de estresse mental. A condutância vascular periférica foi calculada dividindo o fluxo sanguíneo do antebraço pela pressão arterial média e reportada em unidades. Foi realizado test t para as variáveis em repouso e Anova de dois fatores para a resposta (Δ) ao estresse mental, considerado significativo p≤0,05. Resultados: Em repouso, não foram observadas diferenças entre os grupos Sem β e Controle para pressão arterial sistólica (135±18 vs. 132±13 mmHg p=0,58), pressão arterial diastólica (74±7 vs. 73±8 mmHg p=0,82), frequência cardíaca (64±8 vs. 69±10bpm p=0,16) e condutância vascular do antebraço (2,98±1,08 vs. 2,83±1,05unidades p=0,72), respectivamente. Durante o estresse mental, apesar do aumento significativo em relação ao basal efeito tempo p<0,01 dos grupos Sem β e Controle na pressão arterial sistólica (Δ1ºmin: 3±1 vs. 9±1; Δ2ºmin: 5±3 vs. 12±2; Δ3ºmin: 6±3 vs. 11±2 mmHg, respectivamente efeito interação p=0,09) e na pressão arterial diastólica (Δ1º min: 2±1 vs. 5±1; Δ2ºmin: 3±1 vs. 7±1; Δ3ºmin: 3±1 vs. 6±1 mmHg, respectivamente efeito da interação p=0,06), o grupo Sem β apresentou resposta significativamente deprimida em relação ao Controle efeito do grupo p=0,04 e p=0,03 respectivamente. A frequência cardíaca aumentou significativamente em relação ao basal efeito do tempo p=<0,01 e de forma semelhante entre os grupos Sem β e Controle (Δ1ºmin: 6±2 vs. 12±2; Δ2ºmin: 6±2 vs. 10±2; Δ3ºmin: 6±2 vs. 9±2 bpm, respectivamente efeito interação p=0,09). Por outro lado, apesar do aumento significativo em relação ao basal observado em ambos os grupos efeito do tempo p=<0,01, a resposta da condutância vascular periférica foi significativamente maior no grupo Sem β em relação ao grupo Controle (Δ1ºmin: 1,08±0,33 vs. 1,34±0,33; Δ2ºmin: 1,28±0,33 vs. 0,79±0,27; Δ3ºmin: 1,62±0,34 vs. 0,50±0,28 unidades, respectivamente efeito da interação p=0,01). Com relação ao grupo Com β, em repouso, a frequência cardíaca foi significativamente menor em relação ao grupo Controle (58±9 vs. 69±10bpm p=0,01). Os grupos Com β e Controle foram semelhantes em repouso para os valores de pressão arterial sistólica (132±16 vs. 132±13mmHg p=0,93), pressão arterial diastólica (69±6 vs. 73±8mmHg p=0,13) e condutância vascular periférica (2,38±0,66 vs. 2,83±1,05unidades p=0,21), respectivamente. Durante o estresse mental os grupos Com β e Controle apresentaram aumento significativo em relação ao basal efeito do tempo p<0,01 e de forma semelhante para pressão arterial sistólica (Δ1ºmin: 6±2 vs. 9±1; Δ2ºmin: 11±3 vs. 12±2; Δ3ºmin: 10±3 vs. 11±2 mmHg efeito da interação p=0,66), pressão arterial diastólica (Δ1ºmin: 4±1 vs. 5±1; Δ2ºmin: 6±2 vs. 7±1; Δ3ºmin: 5±2 vs. 6±1 mmHg efeito da interação p=0,93), frequência cardíaca (Δ1ºmin: 9±3 vs. 12±2; Δ2ºmin: 9±3 vs. 10±2; Δ3ºmin: 8±3 vs. 9±2 bpm efeito da interação p=0,55) e condutância vascular periférica (Δ1ºmin: 1,73±0,48 vs. 1,34±0,34; Δ2ºmin: 1,04±0,39 vs. 0,79±0,27; Δ3ºmin: 0,66±0,26 vs. 0,50±0,19 unidades efeito da interação p=0,83). Conclusão: Pacientes com cirrose hepática sem uso de β-bloqueador apresentam resposta deprimida da pressão arterial sistólica e diastólica e vasodilatação exacerbada durante o estresse mental agudo quando comparados aos indivíduos sem cirrose hepática. Além disso, sugere-se que essas respostas inadequadas sejam normalizadas com o uso do β-bloqueador. / Introduction: Patients with hepatic cirrhosis may show hemodynamic alterations at rest, marked by low values of blood pressure. Besides those alterations at rest, these patients also may show alterations in situations that demand a greater exigence from the cardiovascular system. Among those situations, physical exercise and mental stress are prominent. In regard to physical exercise, we noted that patients with hepatic cirrhosis show a low blood pressure response during isometric physical exercise. Thus, these patients are also likely to show hemodynamic alterations due to mental stress. Objective: Evaluate hemodynamic parameters during mental stress in patients with hepatic cirrhosis. Methods: Nineteen patients with hepatic cirrhosis were evaluated (13 Child A, 5 Child B and 1 Child C) distributed in the following groups: Patients without use of beta-blocker (Group Without β Adrenergic Receptor, n=11) and patients with use of β Adrenergic Receptor (Group with β, n=8). In addition, a group integrated by 16 people with no hepatic cirrhosis (Group Control), paired in age and gender, was evaluated. The mental stress was induced by Stroop Color Word Conflict Test. The blood pressure variables were measured beat by beat (Finometer®), the cardiac frequency by electrocardiogram (Biopac) and the blood flow of the forearm by plethysmograph of venous occlusion (Hokanson®) during 3 basal minutes followed by 3 minutes of mental stress. The peripheral vascular conductance was calculated dividing the blood flow of the forearm by the mean blood pressure and reported in unities. A T test was carried out on the at-rest variables and Anova of two factors for the response (Δ) to mental stress, considered significant p≤0,05. Results: At rest, there were not differences observed between the groups without β and Control for systolic blood pressure (135±18 vs. 132±13 mmHg p=0,58), diastolic blood pressure (74 ±7 vs. 73±8 mmHg p=0,82), cardiac frequency (64±8 vs. 69±10bpm p=0,16) and peripheral vascular conductance (2,98±1,08 vs. 2,83±1,05 unities p=0,72), respectively. During mental stress, despite the significant increase in regard to the basal time effect p<0,01 of the two groups Without β and Control in the systolic blood pressure (Δ1ºmin: 3±1 vs. 9±1; Δ2ºmin: 5±3 vs. 12±2; Δ3ºmin: 6±3 vs. 11±2 mmHg, respectively interaction effect p=0,09) and in the diastolic blood pressure (Δ1º min: 2±1 vs. 5±1; Δ2ºmin: 3±1 vs. 7±1; Δ3ºmin: 3±1 vs. 6±1 mmHg, respectively interaction effect p=0,06), the group Without β showed a significantly depressed response compared with the Group Control group effect p=0,04 e p=0,03 respectively. The cardiac frequency significantly increased in regard to the basal time effect p=<0,01 and in the same way among the groups Without β and Group Control (Δ1ºmin: 6±2 vs. 12±2; Δ2ºmin: 6±2 vs. 10±2; Δ3ºmin: 6±2 vs. 9±2 bpm, respectively interaction effect p=0,09). On the other hand, despite the significant increase in regard to the basal time effect p=<0,01 observed in both groups, the response of the peripheral vascular conductance was crucially greater in the group Without β compared with the Group Control (Δ1ºmin: 1,08±0,33 vs. 1,34±0,33; Δ2ºmin: 1,28±0,33 vs. 0,79±0,27; Δ3ºmin: 1,62±0,34 vs. 0,50±0,28 unities, respectively interaction effect p=0,01). In regard to the group With β, at rest, the cardiac frequency was significantly lower compared with the Group Control (58±9 vs. 69±10bpm p=0,01). The groups With β and Control were similar at rest in terms of systolic blood pressure values (132±16 vs. 132±13mmHg p=0,93), diastolic blood pressure (69±6 vs. 73±8mmHg p=0,13) and peripheral vascular conductance (2,38±0,66 vs. 2,83±1,05 unities p=0,21). During mental stress the groups With β and Control showed a significant increase in regard to basal time effect p<0,01 and, likewise, for systolic blood pressure (Δ1ºmin: 6±2 vs. 9±1; Δ2ºmin: 11±3 vs. 12±2; Δ3ºmin: 10±3 vs. 11±2 mmHg interaction effect p=0,66), diastolic blood pressure (Δ1ºmin: 4±1 vs. 5±1; Δ2ºmin: 6±2 vs. 7±1; Δ3ºmin: 5±2 vs. 6±1 mmHg interaction effect p=0,93), cardiac frequency (Δ1ºmin: 9±3 vs. 12±2; Δ2ºmin: 9±3 vs. 10±2; Δ3ºmin: 8±3 vs. 9±2 bpm interaction effect p=0,55), and peripheral vascular conductance (Δ1ºmin: 1,73±0,48 vs. 1,34±0,34; Δ2ºmin: 1,04±0,39 vs. 0,79±0,27; Δ3ºmin: 0,66±0,26 vs. 0,50±0,19 unities interaction effect p=0,83). Conclusion: Patients with hepatic cirrhosis without use of beta-blocker show a depressed response in the systolic and diastolic, as well as in the exacerbated vasodilation during acute mental stress when compared with individuals without hepatic cirrhosis. Besides that, those inadequate responses are suggested to be normalized with the use of beta-blocker.

Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul / Opioids are the most common drugs prescribed worldwide for alleviating moderate to severe pain. However, the use of opioids is associated with the development of tolerance to the analgesic effect and potential adverse effects, such as paradoxical hyperalgesia, withdrawal syndrome and constipation. An important target for morphine-induced analgesia is the blockade of voltage-gated calcium channels (VGCCs). However, the participation of VGCCs in the tolerance and adverse effects caused by morphine is poorly understood. Thus, the present study was conducted in order to evaluate the possible actions of Phα1β, a peptide inhibitor of VGCCs purified from the venom of the Phoneutria nigriventer spider on the antinociceptive and adverse effects produced by single or repeated administration of morphine. It was evaluated the effect of intrathecal injection Phα1β (0.01-30 pmol/site) on mechanical and heat hyperalgesia, tolerance, withdrawal syndrome and constipation induced throught single (10 mg/kg) or repeated (increasing doses, 3 times a day, for 3 consecutive days) subcutaneous treatment of morphine in C57BL/6 mice. We observed that a single administration of morphine was able to reduce heat but not mechanical nociception as well as decrease gastrointestinal transit. The antinociception, but not the constipation, caused by a single injection of morphine was slightly increased by an intrathecal injection of Phα1β. Repeated treatment with morphine caused not only tolerance to its antinociceptive effect but also induced paradoxical heat and mechanical hyperalgesia, withdrawal syndrome and constipation. Phα1β was able to reverse the tolerance, withdrawal syndrome, mechanical and heat hyperalgesia and constipation induced by repeated morphine treatment. Finally, the effects produced by the native form of Phα1β were fully mimicked by a recombinant version of this peptide in naïve mice. Our results suggest that Phα1β is effective in potentiating the analgesia as well as in reducing tolerance and the adverse effects induced by morphine, indicating its potential use as an adjuvant drug in combination with opioids. / Os opióides são os medicamentos mais comuns prescritos em todo o mundo para aliviar as dores moderadas a intensas. No entanto, a utilização de opióides está associada com o desenvolvimento de tolerância ao efeito analgésico e de efeitos adversos, tais como hiperalgesia paradoxal, síndrome de abstinência e constipação. Um alvo importante para a analgesia induzida pela morfina é o bloqueio dos canais de cálcio regulados por voltagem (CCRV). Porém pouco se sabe sobre o papel desses canais na tolerância e nos efeitos adversos produzidos pela morfina. Assim, o presente estudo foi realizado com o intuito de avaliar as possíveis ações da Phα1β, um inibidor peptídico dos CCRVs purificado do veneno da aranha Phoneutria nigriventer, sobre os efeitos antinociceptivos e adversos produzidos pela administração única ou repetida de morfina. Foi avaliado o efeito da administração intratecal da Phα1β (0.01-30 pmol/site) sobre a hiperalgesia térmica e mecânica, tolerância, síndrome de abstinência e constipação induzidos pelo tratamento único (10 mg/kg) ou repetido (doses crescentes, 3 vezes ao dia, durante três dias) de morfina por via subcutânea em camundongos C57BL/6. Observamos que uma única administração de morfina foi capaz de reduzir a nocicepção térmica mas não a mecânica em camundongos, bem como reduzir o trânsito gastrointestinal. A antinocicepção, mas não a constipação, causada por uma única dose de morfina foi levemente aumentada pela administração intratecal da Phα1β. O tratamento repetido com morfina não causou somente tolerância analgésica como também induziu hiperalgesia, síndrome de abstinência e constipação. A Phα1β foi capaz de reverter a tolerância, a síndrome de abstinência, a hiperalgesia mecânica e térmica e a constipação induzidas pelo tratamento repetido de morfina. Finalmente, os efeitos produzidos pela forma nativa Phα1β foram totalmente mimetizados por uma versão recombinante do presente peptídeo. Em conclusão, nossos resultados sugerem que a Phα1β é efetiva em potencializar a analgesia, bem como, reduzir a tolerância e os efeitos adversos induzidos pela morfina. Desta maneira, a Phα1β apresenta um uso potencial como uma droga adjuvante na terapia opióide.

Doctor of Philosophy / Department of Chemistry / Stefan Bossmann / A series of methylene-bridged resorcin[4]arenes featuring electrochemically active and hydrophilic viologene-units chemically attached to their "rim"-regions have been synthesized. Depending on the choices of pendent groups (feet) and the numbers of positive charges on the "rim" (four or eight), moderate to very good solubilities in water were obtained. A fluorescent coumarin tag designed for the purpose of photophysical studies was chemically linked to the feet of some of the synthesized resorcin[4]arenes. These compounds were designed to act as guests in mycobacterial channel proteins (channel blockers). The proven host-guest interaction between resorcin[4]arenes and the mycobacterial porin MspA suggests potential application of my research in TB treatment. Both, hydrophilic nutrients and metabolites have to diffuse through the porin channels of mycobacteria because of the lack of an active transport mechanism. If these channels are successfully blocked, the mycobacteria have either to synthesize new channels, which make their outer membrane more susceptible to conventional antibiotics, or they become dormant. (3,3'-dimethyl)-4,4'-bipyridinium units are very suitable electron relays. They can be reduced stepwise to viologen monoradical cations and then to uncharged viologen diradicals which possess highly negative redox potentials, allowing them to reduce C-Cl bonds. Therefore, the deep cavitand viologen resorcin[4]arenas, are expected to bind and detoxify chlorinated hydrocarbons by reductive dechlorination. In this work, the step wise reduction process of viologen- resorcin[4]arenes and the formation of negative redox potentials of double-reduced viologen resorcin[4]arenes are demonstrated by electrochemistry studies. These results encourage future studies toward an efficient electrocatalytic system for the reductive dehalogenation of organic compounds. Besides highly charged resorcin[4]arene cavitands, the synthesis of a thiol-footed resorcin[4]arene was also attempted. The product was used for gold nanoparticle binding studies. The results of the photochemistry measurements provided a proof-of-concept for using the emission of gold nanoparticles in chemical sensors after covering their surfaces with thiol-footed resorcin[4]arenes. Two heterocylic resorcin[4]arene cavitands were synthesized for DNA-intercalation studies. The results of the photochemical measurements suggested binding between DNA and the heterocyclic resorcin[4]arenes and provided proof-of-principle for potential drug applications of this type of macrocycle.

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