Medicine is constantly developing and in order to (early) diagnose common diseases, such as cancer, Parkinson's or Alzheimer's, a liquid biopsy-based approach is of increasing relevance. Samples are complex body fluids, especially blood, whereby a separation of the cells, particles and molecules of interest is often necessary for a subsequent analysis. Conventional methods such as centrifugation, the gold standard of many sample preparations, are reaching their limits in terms of gentle cell separation, purity and automatability. At the same time, the volumes of biological samples required for analysis are decreasing and point-of-care solutions are becoming increasingly important. New technologies for sample preparation are therefore urgently needed to meet this demand. Surface acoustic wave (SAW)-based microfluidic systems have already shown promising results in the handling of biological samples, but there is still a lack in the ability to transfer laboratory set-ups into a real-world environment. In this work, an industrially feasible manufacturing technology for SAW-based microfluidic chips that can be used for separation of blood plasma was developed. For this purpose, polymeric microchannels were integrated directly on the piezoelectric substrate together with the interdigital transducers required for SAW excitation. This was done reproducibly on the wafer-level with established lithographic methods, but a relatively young material system, i.e. dry film resists, allowing an industrial scale-up of the acoustofluidic chips. Furthermore, the chip layout was designed robustly to ensure a stable and continuous separation process and the “lab-around-the-chip” was further developed into an easy-to-use system. Moreover, blood plasma separation at high flow rates of up to 50 μL/min for a 1:5 diluted sample and a throughput of 888,000 cells/s in the SAW-based microfluidic chip was demonstrated. In comparison to microfluidic alternatives, high cell separation purity was achieved with special focus on the use of analytical methods for the detection of low cell concentrations in blood plasma. Direct comparison to centrifugation further indicated a gentler separation method for the cells and more reproducible results. The SAW-based microfluidic system developed in this work offers great potential for future application in liquid biopsy.

O objetivo deste estudo foi analisar o plasma sanguíneo correspondente ao período de transição, de vacas Holandesas de alta produção e sua relação com o desempenho reprodutivo. Para isso, este plasma foi analisado com emprego do equipamento de espectrômetro de massas híbrido triplo quadrupolo/tempo-de-vôo, para identificação dos Lipídios. As alterações metabólicas e hormonais ocorridas durante esta fase, nas vacas leiteiras, afetam diretamente a saúde e o desempenho produtivo e reprodutivo das mesmas. Nesse período, ocorre o balanço energético negativo, caracterizado pelo aumento da mobilização de reservas energéticas, normalmente do tecido adiposo, para atender às demandas voltadas à produção de leite. Neste projeto, propõe-se o estudo da condição metabólica, principalmente sob um contexto lipidômico, durante o período de transição e início de lactação de vacas leiteiras em dois grupos de produção (Alta: ≥ 45,9 kg leite/dia e Média: 30-45,8kg leite/dia), nos períodos de Inverno e Verão que se tornaram prenhes ou não aos 150 dias de experimento (após 3 IATF), em um contexto multidisciplinar, visando o melhor entendimento, tanto do desempenho produtivo, como do reprodutivo e na elaboração de estratégias de manejo, para aplicação nos rebanhos leiteiros no Brasil. Foram utilizadas 31 vacas da raça Holandesa, multíparas e gestantes, com parto previsto para 21 dias após o início do período de avaliação experimental. Os animais foram avaliados durante o período pré-parto até 150 dias de lactação. Nas amostras foram analisadas variáveis plasmáticas, conhecidamente ligadas às condições metabólicas (energética, proteica e enzímica). Estes valores serão utilizados como guias na utilização da abordagen ômica (lipidômica), com finalidade de identificar biomarcadores lipídicos descritivos do metabolismo destes animais. Todos os dados obtidos foram analisados por métodos estatísticos convencionais e por estatística multivariada, utilizando técnicas como PCA (Principal Component Analisis) e OPLS (Orthogonal Projection on Latent Structures) e ferramentas de bioinformática, a fim de identificar quais metabólitos são mais descritivos do metabolismo destes animais, bem como a interação das diferentes vias metabólicas. Concluí-se que ao final do período de transição, o plasma de vacas pós-parto que contenham maiores quantidades de fosfatifilcolinas, principalmente 36:2 e 36:4, podem obter melhores chances de se tornarem prenhes à 1IATF. Estas fosfatidilcolinas podem ser consideradas como bons biomarcadores lipídicos devido à sua interferência com a maior síntese de lipoproteínas VLDL, evitando assim, a ocorrência de fígado gorduroso, característico desse período. Além disso, estas moléculas podem auxiliar no processo de monitoramento de alguns parâmetros metabólicos alterados, normalmente observados durante o balanço energético negativo / The aim of this study was to analyze the corresponding blood plasma in transitional period of Holstein cows with high production and its relation to the reproductive performance. Therefore, this plasma was analyzed with the use of a triple quadrupole mass spectrometer time-of-flight, for identification of lipids. In dairy cows, the metabolic and hormonal changes during this phase, directly affect the health and productive and reproductive performance. In this period, the negative energy balance is characterized by increased mobilization of energy reserves, usually by fat, due the demands on milk production. In this project, we proposed the study of metabolic condition, especially under a lipidomic context, during the transition period and early lactation dairy cows on two milk productions (High: ≥ 45.9 kg milk/day and Medium: 30 -45,8kg milk/day) during the periods, winter and summer, of cows that became pregnant or not in the 150 days of the experiment (after 3 IATF), in a multidisciplinary context, for get better understand the both productions performances, the reproductive and developing management strategies for application in dairy herds in Brazil. They used 31 Holstein cows, multiparous and pregnants, with calving expected to 21 days after the beginning of the experimental evaluation period. The animals were evaluated during ante partum period to 150 days of lactation. Samples were analyzed by parameters, known to be linked to metabolic conditions (energy, protein and enzyme). These values will be used as guides in a ohmic approach (lipidomics), with the purpose of identifying biomarkers describe lipid metabolism of these animals. All data were analyzed by conventional statistical methods and multivariate statistics, using techniques such as PCA (Principal Component Analysis) and OPLS (Orthogonal Projection on Latent Structures) and bioinformatics tools to identify which metabolites are more descriptive of the metabolism of these animals as well as the interaction of different metabolic pathways. It can be concluded that the end of the transition period, the plasma post-partum cows containing larger amounts of phosphatidylcholines, especially 36:2 and 36:4, may best chance of becoming pregnant in 1IATF. These phosphatidylcholines may be considered a good lipid biomarkers interfering with the highest synthesis of VLDL, thereby avoiding the occurrence of fatty liver characteristic of that period. Therefore, these molecules can be used for monitoring the process of change of some metabolic parameters normally observed during negative energy balance

Circulating RNA was previously demonstrated through the identification of tumour-derived transcripts in the plasma and serum of cancer patients. This finding inspired the detection of cell-free fetal mRNA in maternal plasma which in turn facilitated the development of promising non-invasive prenatal assessment strategies applicable to pregnancies regardless of fetal sex. / Finally, in the last study, I implemented what I have learnt from the analysis of circulating fetal RNA into the development of brain-derived RNA transcripts for detection in the plasma of patients who had sustained brain injuries. A systematic approach based on gene expression microarray analysis was adopted to search for circulating brain-specific mRNA markers. Transcripts showing high expression levels in brain tissues but low expression levels in peripheral blood were identified. However, the detectability of these brain-derived mRNA markers in both peripheral and jugular plasma was found to be low. Instead, concentrations of these mRNA markers were found to be higher in cerebral spinal fluid (CSF) from brain-injured than non-brain-injured patients. / In section IV of this thesis, I reviewed and modified the blood sample processing and plasma RNA extraction protocols that were previously practised, in an attempt to enrich circulating fetal RNA in maternal plasma. Besides mRNA, extraction protocols for microRNAs (miRNAs), a new class of circulating nucleic acid markers, were also evaluated. The modifications in the protocols that I introduced led to significant improvements in RNA yield and enhanced the accuracy and reliability of circulating RNA detection in plasma, especially for those marginally detectable transcripts. / Recently, in addition to maternal plasma, there have been studies by other research groups reporting the presence of placental/fetal mRNA in maternal whole blood. In the first part of this thesis, I studied a list of previously identified placental mRNA transcripts, including chorionic somatomammotropin hormone 1 (CSH1), KiSS-1 metastasis-suppressor (KISS1), placenta-specific 4 (PLAC4) and placenta-specific 1 (PLAC1) in maternal whole blood and determined if this whole blood-based approach offered advantages over maternal plasma analysis. The presence of KISS1, PLAC4 and PLAC1 in non-pregnant and post-partum blood samples as well as the confirmed maternal contribution of PLAC4 mRNA in maternal blood proved that most of the detected 'placental' mRNA molecules in maternal whole blood were of maternal origin. To explore if more pregnancy-associated circulating mRNA markers could be developed for maternal whole blood analysis, candidates were mined after performing gene expression microarray comparison of whole blood samples from pregnant and non-pregnant individuals. The pregnancy-specificity of the identified gene candidates was further investigated. However, their presence in non-pregnant whole blood and lack of clearance after pregnancy indicated that they were not "pregnancy-specific" markers. These data suggested that pregnancy specific transcripts could be more readily identified from maternal plasma than whole blood. / The results presented in this thesis have not only provided a foundation facilitating the precise and accurate detection of fetal-specific RNA markers but have also improved the current understanding of the biology of circulating RNA. / Heung, May Sze. / Advisers: Dennis Lo; Rossa Wk Chiu. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 72-11, Section: B, page: . / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2009. / Includes bibliographical references (leaves 212-239). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [201-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

O objetivo deste estudo foi analisar o plasma sanguíneo correspondente ao período de transição, de vacas Holandesas de alta produção e sua relação com o desempenho reprodutivo. Para isso, este plasma foi analisado com emprego do equipamento de espectrômetro de massas híbrido triplo quadrupolo/tempo-de-vôo, para identificação dos Lipídios. As alterações metabólicas e hormonais ocorridas durante esta fase, nas vacas leiteiras, afetam diretamente a saúde e o desempenho produtivo e reprodutivo das mesmas. Nesse período, ocorre o balanço energético negativo, caracterizado pelo aumento da mobilização de reservas energéticas, normalmente do tecido adiposo, para atender às demandas voltadas à produção de leite. Neste projeto, propõe-se o estudo da condição metabólica, principalmente sob um contexto lipidômico, durante o período de transição e início de lactação de vacas leiteiras em dois grupos de produção (Alta: ≥ 45,9 kg leite/dia e Média: 30-45,8kg leite/dia), nos períodos de Inverno e Verão que se tornaram prenhes ou não aos 150 dias de experimento (após 3 IATF), em um contexto multidisciplinar, visando o melhor entendimento, tanto do desempenho produtivo, como do reprodutivo e na elaboração de estratégias de manejo, para aplicação nos rebanhos leiteiros no Brasil. Foram utilizadas 31 vacas da raça Holandesa, multíparas e gestantes, com parto previsto para 21 dias após o início do período de avaliação experimental. Os animais foram avaliados durante o período pré-parto até 150 dias de lactação. Nas amostras foram analisadas variáveis plasmáticas, conhecidamente ligadas às condições metabólicas (energética, proteica e enzímica). Estes valores serão utilizados como guias na utilização da abordagen ômica (lipidômica), com finalidade de identificar biomarcadores lipídicos descritivos do metabolismo destes animais. Todos os dados obtidos foram analisados por métodos estatísticos convencionais e por estatística multivariada, utilizando técnicas como PCA (Principal Component Analisis) e OPLS (Orthogonal Projection on Latent Structures) e ferramentas de bioinformática, a fim de identificar quais metabólitos são mais descritivos do metabolismo destes animais, bem como a interação das diferentes vias metabólicas. Concluí-se que ao final do período de transição, o plasma de vacas pós-parto que contenham maiores quantidades de fosfatifilcolinas, principalmente 36:2 e 36:4, podem obter melhores chances de se tornarem prenhes à 1IATF. Estas fosfatidilcolinas podem ser consideradas como bons biomarcadores lipídicos devido à sua interferência com a maior síntese de lipoproteínas VLDL, evitando assim, a ocorrência de fígado gorduroso, característico desse período. Além disso, estas moléculas podem auxiliar no processo de monitoramento de alguns parâmetros metabólicos alterados, normalmente observados durante o balanço energético negativo / The aim of this study was to analyze the corresponding blood plasma in transitional period of Holstein cows with high production and its relation to the reproductive performance. Therefore, this plasma was analyzed with the use of a triple quadrupole mass spectrometer time-of-flight, for identification of lipids. In dairy cows, the metabolic and hormonal changes during this phase, directly affect the health and productive and reproductive performance. In this period, the negative energy balance is characterized by increased mobilization of energy reserves, usually by fat, due the demands on milk production. In this project, we proposed the study of metabolic condition, especially under a lipidomic context, during the transition period and early lactation dairy cows on two milk productions (High: ≥ 45.9 kg milk/day and Medium: 30 -45,8kg milk/day) during the periods, winter and summer, of cows that became pregnant or not in the 150 days of the experiment (after 3 IATF), in a multidisciplinary context, for get better understand the both productions performances, the reproductive and developing management strategies for application in dairy herds in Brazil. They used 31 Holstein cows, multiparous and pregnants, with calving expected to 21 days after the beginning of the experimental evaluation period. The animals were evaluated during ante partum period to 150 days of lactation. Samples were analyzed by parameters, known to be linked to metabolic conditions (energy, protein and enzyme). These values will be used as guides in a ohmic approach (lipidomics), with the purpose of identifying biomarkers describe lipid metabolism of these animals. All data were analyzed by conventional statistical methods and multivariate statistics, using techniques such as PCA (Principal Component Analysis) and OPLS (Orthogonal Projection on Latent Structures) and bioinformatics tools to identify which metabolites are more descriptive of the metabolism of these animals as well as the interaction of different metabolic pathways. It can be concluded that the end of the transition period, the plasma post-partum cows containing larger amounts of phosphatidylcholines, especially 36:2 and 36:4, may best chance of becoming pregnant in 1IATF. These phosphatidylcholines may be considered a good lipid biomarkers interfering with the highest synthesis of VLDL, thereby avoiding the occurrence of fatty liver characteristic of that period. Therefore, these molecules can be used for monitoring the process of change of some metabolic parameters normally observed during negative energy balance

A exposição ambiental ao chumbo é uma das questões mais sérias de contaminação de populações do ponto de vista de saúde pública. Mesmo em pequenas quantidades, o chumbo causa mudanças bioquímicas e neurológicas, convulsões e hiperatividade. No Brasil, não existe programa nacional para detecção de crianças contaminadas por este metal, as quais são mais sensíveis aos efeitos deletérios resultantes da exposição crônica a baixas concentrações de chumbo. A maioria dos trabalhos que comprovaram a associação entre exposição ambiental a chumbo no passado e problemas no desenvolvimento neurológico utilizou dentina de dentes decíduos como tecido marcador de exposição. Trabalhos do nosso grupo indicam que o esmalte superficial de dentes decíduos seria um bom marcador cumulativo da exposição passada ao chumbo, sendo que esse tecido apresenta consideráveis vantagens do ponto de vista de acesso e desenvolvimento de testes para monitoramento ambiental. Uma questão importante é verificar se as concentrações de chumbo encontradas no esmalte superficial decíduo variam ao longo do tempo em crianças de baixa exposição. Outra questão importante é verificar se há correlações entre as concentrações de chumbo no esmalte superficial e aquelas dos principais fluidos corporais a partir dos quais o chumbo seria acumulado no esmalte, que são sangue total, plasma e saliva. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar in vivo, por meio de testes em esmalte em dentes decíduos, se o chumbo acumulado nos primeiros micrometros do esmalte aumenta ao longo de três anos e se as concentrações de chumbo encontradas no esmalte apresentam correlação com aquelas encontradas no sangue total, plasma e saliva. A amostra inicial foi constituída por 50 crianças com idade de 2 a 3 anos procedentes de Ribeirão Preto que estavam recebendo atendimento odontológico na Clínica Infantil da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto USP e alunos da Creche Carochinha (USPRibeirão Preto). Obtiveram-se as seguintes amostras: primeira etapa (2009): 01 amostra de sangue total e 01 amostra de esmalte de um incisivo central superior; segunda etapa (2010): 01 amostra de sangue total, 01 amostra de plasma sanguíneo, 01 amostra de saliva e 01 amostra de esmalte do dente contralateral. terceira etapa (2011): 01 amostra de sangue total, 01 amostra de plasma sanguíneo, 01 amostra de saliva e 02 amostras de amostra de esmalte dos incisivos laterais. O fósforo foi determinado colorimetricamente, para calcular a profundidade dos testes de esmalte. As concentrações de chumbo no plasma, saliva e esmalte dental foram determinadas por espectrometria de massas com plasma indutivamente acoplado (ICPMS) e no sangue total, por espectrometria de absorção atômica com forno de grafite. Muitas crianças ou seus responsáveis não permitiram a coleta de sangue em algum dos períodos, e assim ao longo dos 3 anos tivemos participação efetiva de 20 crianças. Em 2009, a concentração de chumbo no sangue total variou de 0,2 μg/dL a 7,48 μg/dL e teve como a mediana 0,26 μg/dL. Apenas uma criança apresentou nível de chumbo no sangue 5 μg/dL. Em 2010, a concentração de chumbo no sangue total variou de 0.2 μg/dL a 3,8 μg/dL e teve como a mediana 0,32 μg/dL. Em 2011, a concentração de chumbo no sangue variou de 1,15 μg/dL a 3,55 μg/dL e teve como mediana 0,95 μg/dL. Os dados de chumbo no sangue não apresentam diferenças estatisticamente significantes entre os grupos ao longo dos anos (p>0.05). Em 2010, valores de chumbo no plasma variaram de 0,29 3,20 μg/L e a mediana foi 0,49. Em 2011, variaram de 0,38 1,60 μg/L com mediana 0,52 μg/L. A concentração de chumbo na saliva em 2010 variou de 0,02 3,00 μg/L, com mediana de 0,34 μg/L. Em 2011, esses valores variaram de 0,02 4,27 μg/L e a mediana foi de 0,19 μg/L. Para as concentrações de chumbo no plasma e na saliva, não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos (Saliva 2010 x Saliva 2011; Plasma 2010 x Plasma 2011) (teste de Mann Whitney; p>0.05). No caso dos dados obtidos no esmalte dentário, os valores de chumbo foram recalculados para uma mesma profundidade, que foi de 3,4 μm. Nenhum dos grupos (Esmalte 2009, Esmalte 2010 e Esmalte 2011) teve distribuição normal, e não houve diferença entre nas concentrações de chumbo encontradas ao longo dos anos, com medianas de 36, 35 e 38 μg/g em 2009, 2010 e 2011, respectivamente (p=0,71, teste de Kruskal-Wallis). A análise de correlação foi feita após a transformação logarítmica (log10) de todos os valores. Mesmo após esta transformação, dois grupos ainda não apresentaram distribuição normal, o grupo Plasma 2011 e Esmalte 2010. As associações que envolviam estes grupos foram testadas utilizando-se a correlação de Spearman, enquanto todas as demais associações foram testadas utilizando-se o teste de correlação de Pearson. As correlações significativas positivas encontradas foram: entre Sangue Total 2009 e Sangue Total 2010 (rP = 0,64; p = 0,002) ; Sangue Total 2010 e Sangue Total 2011 (rP = 0,66; p = 0,002); Esmalte 2011 e Sangue Total 2009 (rP= 0,44; p=0,05) e entre Esmalte 2009 e Esmalte 2010 (rS = 0,45 e p=0,03). Houve uma associação inversa entre a Saliva 2010 e Esmalte 2011 (rP = - 0,55; p=0,013). Conclusão: Os valores de chumbo obtidos em todas as amostras ao longo de 3 anos caracterizam baixa exposição a chumbo no grupo estudado. As concentrações de chumbo no sangue, saliva, plasma e esmalte não variaram ao longo do tempo. Das 28 associações testadas, foram estatisticamente significantes e positivas aquelas entre o Sangue Total 2009 e o Esmalte 2011 e entre o Esmalte 2009 e Esmalte 2010. A associação entre Saliva 2010 e Esmalte 2011 foi inversa. Os resultados sugerem que o esmalte tenha associação com a exposição de chumbo passada, neste estudo caracterizado pelos valores de chumbo no sangue total. Os resultados sugerem que o esmalte possa ser um biomarcador fidedigno para avaliar o grau de exposição a chumbo em populações com baixa exposição a este metal, uma vez que o esmalte superficial de dentes decíduos não incorporou chumbo em quantidades significativas entre 2 e 5 anos de idade em crianças com baixa exposição e baixa atividade de cárie. / Environmental exposure to lead is one of the most serious contamination problems that affect public health. Even in small amounts, lead can cause neurological and biochemical changes, such as mental problems and hyperactivity. In Brazil, there is no program for the detection of children contaminated by this metal. Children are more sensitive to the deleterious effects of chronic lead exposure. Studies that proved association between environmental exposure to lead and neurological developmental problems used dentine of primary teeth as a marker of lead exposure. Studies by our group suggest that superficial enamel of deciduous teeth would be a good cumulative marker of past exposure to lead, and this tissue has considerable advantages regarding access and the perspective of development of tests for environmental monitoring of children. An important question is whether the concentrations of lead found in deciduous enamel surface vary over time in children with low exposure and if there are correlations between the concentrations of lead in the enamel surface and those of the main body fluids from which the lead was accumulated in the enamel, which are whole blood, plasma and saliva. The aims of this study was to investigate in vivo, by testing lead concentration in deciduous enamel of primary teeth, if the lead accumulated in the first micrometers of enamel increases along three years and if the concentrations of lead found in enamel surface were correlated with those found in whole blood, plasma and saliva. The initial sample consisted of 50 children aged 2 to 3 years from Ribeirão Preto, who were receiving dental care at Children\'s Clinic of the Faculty of Dentistry of Ribeirão Preto - USP and students of Nursery Carochinha (USP-Ribeirão Preto). The following samples were obtained: first stage (2009): 01 sample of whole blood and 01 sample of enamel of a central upper incisor, second stage (2010): 01 sample of whole blood, 01 sample of blood plasma, 01 sample of saliva and 01 sample of enamel from the contralateral tooth; third stage (2011): 01 sample of whole blood, 01 sample of blood plasma, 01 sample of saliva and 02 enamel samples of lateral upper incisors. Phosphorus was determined by a colorimetric method, in order to calculate the depth of enamel tests. Lead concentrations in plasma, saliva and enamel were determined by inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS) and whole blood by atomic absorption spectrometer with graphite furnace. Many children or their guardians did not allow the collection of blood in any of the periods, and thus, over the three years, we had the enrollment of only 20 children. In 2009, the concentration of lead in whole blood varied from 0.2 μg / dL to 7.48 μg /dL and the median was 0.26 μg/dL. Only one child had a blood lead level 5 μg/ dL. In 2010, the concentration of lead in whole blood ranged from 0.2 μg/dL to 3.8 μg/dL and the median was 0.32 μg/dL. In 2011, the concentration of lead in blood ranged from 1.15 μg/dL to 3.55 μg/dL and the median was 0.95 μg/dL. The blood lead data do not show statistically significant differences over the years (p> 0.05). In 2010, values of lead in plasma ranged from 0.29 to 3.20 μg/L and the median was 0.49 μg/L. In 2011, lead levels in plasma ranged from 0.38 to 1.60 μg/L with median 0.52 μg/L. The lead concentration in Saliva 2010 ranged from 0.02 to 3.00μ g/L, median 0.34 μg/L. In 2011, these values ranged from 0.02 to 4.27 μg/L and the median was 0.19 μg/L. For lead concentrations in plasma and saliva, there were no statistically significant differences between groups (Saliva 2010 x Saliva 2011; Plasma 2010 x Plasma 2011)(Mann-Whitney test, p> 0.05). To analyze enamel samples, the values of lead were recalculated so they would reflect the lead found in one same depth, which was 3.4 micrometers. None of the groups (enamel from 2009, enamel from 2010 and enamel from 2011) presented normal distribution. There was no statistically significant difference between these three groups (p=0.71, Kruskal-Wallis). A correlation analysis was performed after logarithmic transformation (log10) of all values. Even after this transformation, two groups still did not exhibit normal distribution, which were Plasma 2011 & Enamel 2010. The associations that involved these two groups were tested using the Spearman correlation test, while all other associations were tested using the Pearson correlation test. The significant positive correlations found were: Whole Blood 2009 and Whole Blood 2010 (rP = 0,64; p = 0,002) ; Whole Blood 2010 and Whole Blood 2011 (rP = 0,66; p = 0,002); between Enamel 2011 and Whole Blood 2009 (rP= 0.44, p = 0.05) and between Enamel 2009 and Enamel 2010 (rS= 0.45, p= 0.03). There was an inverse association between Saliva 2010 and Enamel 2011 (rP= - 0,55; p = 0,013). Conclusion: The lead values obtained in all samples over three years characterized low exposure to lead by the group studied. Lead concentrations in blood, saliva, plasma and enamel did not vary over time. Of the 28 associations tested, the ones between Whole Blood 2009 and 2011 and between Enamel 2009 and 2010 were positive and significant. The association between Saliva 2010 and Enamel 2011 was negative and significant. The results suggest that the lead found in the enamel is correlated with past exposure to lead characterized in this study by the yearly whole blood lead data. The results further suggest that the dental enamel can be a reliable marker to assess the degree of exposure to lead of populations, since the primary teeth´s enamel surface did not incorporate lead in substantial quantities between 2 and 5 years in children with low exposure to this metal and low caries activity.

The aim of the diploma thesis was to evaluate the influence of antiparasitic baths on selected biochemical and haematological parameters in the blood samples of fish. According to the results the application schema will be specified or amended such alterations will be substantiated. A test was performed on the fry of carp (naked and scaly form) to evaluate the influence of the peractetic acid with the help of biochemical and haematological parameters and with the histopathological examination. The common carp was exposed to the concetration 1 mg?l-1 and 2 mg?l-1 of PAA. Three days after application was taken the blood samples from fish and the biochemical and haematological parameters were determined. Than was taken a sample of skin with the musculature from fish to be sent for the histopathological examination in University of Veterinary and Pharmaceutical Sciences in Brno. Based on the results the naked form of the carp has been declared to be more sensitive to the application of PAA. All the observed changes in haematological and biochemical parameters were within physiological range, so it can be stated, that the application schema of PAA has not a signifiant negative influence on the health of the tested fish.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Phosphorus (P) is essential for swine and must be supplied in adequate amounts in order to minimize the costs of production and to reduce environmental impact. The standardized digestibility is a good estimate of available P on feedstuffs. To determine the standardized total tract digestibility of P (STTD) it is necessary to know the endogenous losses of P (ELP). The P-free diet is a methodology largely utilized to find ELP. Gelatin (GEL) is the elected protein source to formulate a P-free diet in most trials around the world. In Brazil, however, spray dried plasma (SDP) has been utilized as a protein source in P-free diets. In spite of small content and high digestibility of P present in SDP, its use may lead to incorrect values of ELP and, as a consequence, overestimation of the standardized digestibility coefficients of P in feedstuffs for pigs. However, one of the advantages of SDP use is the small cost in relation to GEL and, for this reason, more studies on the influence of SDP on ELP and P digestibility are justified. Therefore, a trial was carried out to compare the ELP in swine fed diets containing GEL or SDP as a protein source and to determine the STTD in SDP. The study was developed at the Swine Farm of the Federal University of Santa Maria Brazil. A total of 12 castrated pigs with average initial weight of 55 kg were individually allotted to metabolic crates. The trial was developed in two 12-days periods, with 7 days of adaptation and 5 days of total fecal collection. The beginning and the end of the collection were determined according to the marker-to-marker approach, using ferric oxide as an indigestible marker. Pigs were weighed at the start and at the end of adaptation period and at the end of collection. The treatments were four semi-purified diets. One of them had a P-free diet with 30% of GEL as the only protein source. The other three treatments had 10, 20 and 30% inclusion of SDP. A 1:1 Ca to P ratio was used for all diets. Data were subjected to ANOVA and the model included the effects of period, animal and treatments. Then, the results of the three diets with increased levels of SDP were subjected to linear regression analysis. The intercept of the relation of ingested P and absorbed P represented the endogenous losses of P. The slope indicated the STTD of SDP. The ELP means obtained by P-free diet and regression method were compared with the Student t test. The ELP were 128.95 mg/kgDMI and 153 mg/kgDMI (SE = 77.0; P<0.06) using the P-free diet with GEL as the protein source and the regression method, obtained with diets containing increased levels of SDP, respectively. The apparent digestibility of P was 87.9, 94.2 and 92.9% for the treatments containing 10, 20 and 30% inclusion of P, respectively. The estimated STTD obtained with the linear regression was 97.4%. The corrected values of apparent digestibility of P, obtained with the diets containing SDP, using the basal endogenous loss estimated by the P-free diet, were 96.9, 98.8 and 95.9% for 10, 20 and 30% of SDP, respectively. Therefore, it can be concluded that SDP can replace GEL as a source of protein (amino acids) in P-free diets to estimate the endogenous losses of P. In addition, the standardized digestibility of P in SDP estimated with the P-free diet with GEL as the protein source was 97.2% and it was 97.4% obtained by the regression method, utilizing SDP as the source of protein. / O fósforo (P) é essencial aos suínos e precisa ser fornecido em quantidades adequadas para minimizar os custos de produção e reduzir o impacto ambiental. A digestibilidade padronizada é considerada uma boa estimativa do P útil presente nos alimentos destinados aos suínos. Para a determinação da digestibilidade total padronizada de fósforo (DTPP) é necessário conhecer as perdas endógenas de fósforo. Uma das metodologias mais utilizadas para encontrar as perdas endógenas de P é a da dieta isenta de fósforo. O uso da gelatina (GEL) como ingrediente proteico em dieta isenta de P tem sido adotado por pesquisadores. No Brasil, o plasma sanguíneo desidratado (PS) vem sendo utilizado como fonte proteica em dietas isentas de fósforo. Apesar do baixo conteúdo e a alta digestibilidade do P presente no PS, seu emprego pode gerar valores incorretos de perdas endógenas de P e, em decorrência, superestimar os coeficientes de digestibilidade padronizada do P nos alimentos de suínos. Contudo, uma das vantagens da utilização do PS é seu custo inferior em relação a GEL e, por essa razão, estudos mais aprofundados da influência do PS nas perdas endógenas e digestibilidade de P no PS se justificam. Dessa forma, um experimento foi realizado com o objetivo de comparar as perdas endógenas de P em suínos alimentados com dietas contendo GEL ou PS como fonte proteica e também determinar a DTPP no plasma sanguíneo desidratado. O experimento foi realizado no Setor de Suínos da Universidade Federal de Santa Maria RS. Utilizaram-se 12 suínos machos castrados com peso médio inicial de 55kg, alojados individualmente em gaiolas de metabolismo. O experimento foi constituído por dois períodos de 12 dias, sendo que cada período compreendeu sete dias destinados à adaptação e cinco para a coleta total de fezes. O início e o final do período de coleta foram determinados pelo aparecimento de fezes marcadas devido a adição de óxido férrico nas dietas. Os animais foram pesados no início e final da adaptação e ao final do período de coleta. Foram distribuídos em quatro tratamentos constituídos por dietas semipurificadas. Um dos tratamentos foi constituído por dieta isenta de P e teve 30% de incorporação de GEL, sendo esta a única fonte proteica da dieta. Os outros três tratamentos utilizaram uma dieta com teores de 10, 20 e 30% de inclusão de plasma sanguíneo desidratado. A relação entre cálcio e P total das dietas foi de 1:1. Os dados foram submetidos a análise de variância utilizado no modelo o efeito do período, animal e tratamentos. Posteriormente, os resultados das três dietas com níveis crescentes de inclusão de PS foram submetidos à análise de regressão linear, sendo que o intercepto da relação entre fósforo ingerido (PING) e fósforo absorvido (PABS) representou as perdas endógenas de P e o coeficiente angular da reta indicou a DTPP do plasma sanguíneo desidratado. As estimativas de perdas endógenas obtidas pela dieta isenta de P e pelo método da regressão foram comparados pelo teste t de Student. As perdas endógenas de P da dieta isenta de P foram de 128,95mg/kgMSING e 153 mg/kgMSING (EP=77,0; P<0,06) com a dieta isenta de P, tendo a GEL como fonte de proteína, e pelo método de regressão, estimada com dietas contendo níveis crescentes de PS, respectivamente. A digestibilidade aparente do P foi de 87,9, 94,2 e 92,9% para os tratamentos com 10, 20 e 30% de inclusão de fósforo, respectivamente. Já a estimativa da digestibilidade padronizada de P gerada pela técnica da regressão linear simples foi de 97,4%. A correção dos valores de digestibilidade aparente do P, obtidos com as dietas contendo PS, usando a perda endógena basal estimada pelo método da dieta isenta de P, resultou em digestibilidade total padronizada de 96,9, 98,7 e 95,9% para o P para os níveis de inclusão de PS de 10, 20 e 30%, respectivamente. Com isso, pode-se concluir que o plasma sanguíneo desidratado pode substituir a gelatina como fonte de proteína em dietas isentas de fósforo elaboradas para determinar perdas endógenas de fósforo e a digestibilidade padronizada do fósforo no plasma sanguíneo desidratado foi de 97,2%, estimada pela dieta isenta de fósforo, tendo a gelatina como fonte de proteína e 97,4% pelo método da regressão, utilizando plasma sanguíneo desidratado como fonte de proteína.

A exposição ambiental ao chumbo é uma das questões mais sérias de contaminação de populações do ponto de vista de saúde pública. Mesmo em pequenas quantidades, o chumbo causa mudanças bioquímicas e neurológicas, convulsões e hiperatividade. No Brasil, não existe programa nacional para detecção de crianças contaminadas por este metal, as quais são mais sensíveis aos efeitos deletérios resultantes da exposição crônica a baixas concentrações de chumbo. A maioria dos trabalhos que comprovaram a associação entre exposição ambiental a chumbo no passado e problemas no desenvolvimento neurológico utilizou dentina de dentes decíduos como tecido marcador de exposição. Trabalhos do nosso grupo indicam que o esmalte superficial de dentes decíduos seria um bom marcador cumulativo da exposição passada ao chumbo, sendo que esse tecido apresenta consideráveis vantagens do ponto de vista de acesso e desenvolvimento de testes para monitoramento ambiental. Uma questão importante é verificar se as concentrações de chumbo encontradas no esmalte superficial decíduo variam ao longo do tempo em crianças de baixa exposição. Outra questão importante é verificar se há correlações entre as concentrações de chumbo no esmalte superficial e aquelas dos principais fluidos corporais a partir dos quais o chumbo seria acumulado no esmalte, que são sangue total, plasma e saliva. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar in vivo, por meio de testes em esmalte em dentes decíduos, se o chumbo acumulado nos primeiros micrometros do esmalte aumenta ao longo de três anos e se as concentrações de chumbo encontradas no esmalte apresentam correlação com aquelas encontradas no sangue total, plasma e saliva. A amostra inicial foi constituída por 50 crianças com idade de 2 a 3 anos procedentes de Ribeirão Preto que estavam recebendo atendimento odontológico na Clínica Infantil da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto USP e alunos da Creche Carochinha (USPRibeirão Preto). Obtiveram-se as seguintes amostras: primeira etapa (2009): 01 amostra de sangue total e 01 amostra de esmalte de um incisivo central superior; segunda etapa (2010): 01 amostra de sangue total, 01 amostra de plasma sanguíneo, 01 amostra de saliva e 01 amostra de esmalte do dente contralateral. terceira etapa (2011): 01 amostra de sangue total, 01 amostra de plasma sanguíneo, 01 amostra de saliva e 02 amostras de amostra de esmalte dos incisivos laterais. O fósforo foi determinado colorimetricamente, para calcular a profundidade dos testes de esmalte. As concentrações de chumbo no plasma, saliva e esmalte dental foram determinadas por espectrometria de massas com plasma indutivamente acoplado (ICPMS) e no sangue total, por espectrometria de absorção atômica com forno de grafite. Muitas crianças ou seus responsáveis não permitiram a coleta de sangue em algum dos períodos, e assim ao longo dos 3 anos tivemos participação efetiva de 20 crianças. Em 2009, a concentração de chumbo no sangue total variou de 0,2 &mu;g/dL a 7,48 &mu;g/dL e teve como a mediana 0,26 &mu;g/dL. Apenas uma criança apresentou nível de chumbo no sangue 5 &mu;g/dL. Em 2010, a concentração de chumbo no sangue total variou de 0.2 &mu;g/dL a 3,8 &mu;g/dL e teve como a mediana 0,32 &mu;g/dL. Em 2011, a concentração de chumbo no sangue variou de 1,15 &mu;g/dL a 3,55 &mu;g/dL e teve como mediana 0,95 &mu;g/dL. Os dados de chumbo no sangue não apresentam diferenças estatisticamente significantes entre os grupos ao longo dos anos (p>0.05). Em 2010, valores de chumbo no plasma variaram de 0,29 3,20 &mu;g/L e a mediana foi 0,49. Em 2011, variaram de 0,38 1,60 &mu;g/L com mediana 0,52 &mu;g/L. A concentração de chumbo na saliva em 2010 variou de 0,02 3,00 &mu;g/L, com mediana de 0,34 &mu;g/L. Em 2011, esses valores variaram de 0,02 4,27 &mu;g/L e a mediana foi de 0,19 &mu;g/L. Para as concentrações de chumbo no plasma e na saliva, não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos (Saliva 2010 x Saliva 2011; Plasma 2010 x Plasma 2011) (teste de Mann Whitney; p>0.05). No caso dos dados obtidos no esmalte dentário, os valores de chumbo foram recalculados para uma mesma profundidade, que foi de 3,4 &mu;m. Nenhum dos grupos (Esmalte 2009, Esmalte 2010 e Esmalte 2011) teve distribuição normal, e não houve diferença entre nas concentrações de chumbo encontradas ao longo dos anos, com medianas de 36, 35 e 38 &mu;g/g em 2009, 2010 e 2011, respectivamente (p=0,71, teste de Kruskal-Wallis). A análise de correlação foi feita após a transformação logarítmica (log10) de todos os valores. Mesmo após esta transformação, dois grupos ainda não apresentaram distribuição normal, o grupo Plasma 2011 e Esmalte 2010. As associações que envolviam estes grupos foram testadas utilizando-se a correlação de Spearman, enquanto todas as demais associações foram testadas utilizando-se o teste de correlação de Pearson. As correlações significativas positivas encontradas foram: entre Sangue Total 2009 e Sangue Total 2010 (rP = 0,64; p = 0,002) ; Sangue Total 2010 e Sangue Total 2011 (rP = 0,66; p = 0,002); Esmalte 2011 e Sangue Total 2009 (rP= 0,44; p=0,05) e entre Esmalte 2009 e Esmalte 2010 (rS = 0,45 e p=0,03). Houve uma associação inversa entre a Saliva 2010 e Esmalte 2011 (rP = - 0,55; p=0,013). Conclusão: Os valores de chumbo obtidos em todas as amostras ao longo de 3 anos caracterizam baixa exposição a chumbo no grupo estudado. As concentrações de chumbo no sangue, saliva, plasma e esmalte não variaram ao longo do tempo. Das 28 associações testadas, foram estatisticamente significantes e positivas aquelas entre o Sangue Total 2009 e o Esmalte 2011 e entre o Esmalte 2009 e Esmalte 2010. A associação entre Saliva 2010 e Esmalte 2011 foi inversa. Os resultados sugerem que o esmalte tenha associação com a exposição de chumbo passada, neste estudo caracterizado pelos valores de chumbo no sangue total. Os resultados sugerem que o esmalte possa ser um biomarcador fidedigno para avaliar o grau de exposição a chumbo em populações com baixa exposição a este metal, uma vez que o esmalte superficial de dentes decíduos não incorporou chumbo em quantidades significativas entre 2 e 5 anos de idade em crianças com baixa exposição e baixa atividade de cárie. / Environmental exposure to lead is one of the most serious contamination problems that affect public health. Even in small amounts, lead can cause neurological and biochemical changes, such as mental problems and hyperactivity. In Brazil, there is no program for the detection of children contaminated by this metal. Children are more sensitive to the deleterious effects of chronic lead exposure. Studies that proved association between environmental exposure to lead and neurological developmental problems used dentine of primary teeth as a marker of lead exposure. Studies by our group suggest that superficial enamel of deciduous teeth would be a good cumulative marker of past exposure to lead, and this tissue has considerable advantages regarding access and the perspective of development of tests for environmental monitoring of children. An important question is whether the concentrations of lead found in deciduous enamel surface vary over time in children with low exposure and if there are correlations between the concentrations of lead in the enamel surface and those of the main body fluids from which the lead was accumulated in the enamel, which are whole blood, plasma and saliva. The aims of this study was to investigate in vivo, by testing lead concentration in deciduous enamel of primary teeth, if the lead accumulated in the first micrometers of enamel increases along three years and if the concentrations of lead found in enamel surface were correlated with those found in whole blood, plasma and saliva. The initial sample consisted of 50 children aged 2 to 3 years from Ribeirão Preto, who were receiving dental care at Children\'s Clinic of the Faculty of Dentistry of Ribeirão Preto - USP and students of Nursery Carochinha (USP-Ribeirão Preto). The following samples were obtained: first stage (2009): 01 sample of whole blood and 01 sample of enamel of a central upper incisor, second stage (2010): 01 sample of whole blood, 01 sample of blood plasma, 01 sample of saliva and 01 sample of enamel from the contralateral tooth; third stage (2011): 01 sample of whole blood, 01 sample of blood plasma, 01 sample of saliva and 02 enamel samples of lateral upper incisors. Phosphorus was determined by a colorimetric method, in order to calculate the depth of enamel tests. Lead concentrations in plasma, saliva and enamel were determined by inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS) and whole blood by atomic absorption spectrometer with graphite furnace. Many children or their guardians did not allow the collection of blood in any of the periods, and thus, over the three years, we had the enrollment of only 20 children. In 2009, the concentration of lead in whole blood varied from 0.2 &mu;g / dL to 7.48 &mu;g /dL and the median was 0.26 &mu;g/dL. Only one child had a blood lead level 5 &mu;g/ dL. In 2010, the concentration of lead in whole blood ranged from 0.2 &mu;g/dL to 3.8 &mu;g/dL and the median was 0.32 &mu;g/dL. In 2011, the concentration of lead in blood ranged from 1.15 &mu;g/dL to 3.55 &mu;g/dL and the median was 0.95 &mu;g/dL. The blood lead data do not show statistically significant differences over the years (p> 0.05). In 2010, values of lead in plasma ranged from 0.29 to 3.20 &mu;g/L and the median was 0.49 &mu;g/L. In 2011, lead levels in plasma ranged from 0.38 to 1.60 &mu;g/L with median 0.52 &mu;g/L. The lead concentration in Saliva 2010 ranged from 0.02 to 3.00&mu; g/L, median 0.34 &mu;g/L. In 2011, these values ranged from 0.02 to 4.27 &mu;g/L and the median was 0.19 &mu;g/L. For lead concentrations in plasma and saliva, there were no statistically significant differences between groups (Saliva 2010 x Saliva 2011; Plasma 2010 x Plasma 2011)(Mann-Whitney test, p> 0.05). To analyze enamel samples, the values of lead were recalculated so they would reflect the lead found in one same depth, which was 3.4 micrometers. None of the groups (enamel from 2009, enamel from 2010 and enamel from 2011) presented normal distribution. There was no statistically significant difference between these three groups (p=0.71, Kruskal-Wallis). A correlation analysis was performed after logarithmic transformation (log10) of all values. Even after this transformation, two groups still did not exhibit normal distribution, which were Plasma 2011 & Enamel 2010. The associations that involved these two groups were tested using the Spearman correlation test, while all other associations were tested using the Pearson correlation test. The significant positive correlations found were: Whole Blood 2009 and Whole Blood 2010 (rP = 0,64; p = 0,002) ; Whole Blood 2010 and Whole Blood 2011 (rP = 0,66; p = 0,002); between Enamel 2011 and Whole Blood 2009 (rP= 0.44, p = 0.05) and between Enamel 2009 and Enamel 2010 (rS= 0.45, p= 0.03). There was an inverse association between Saliva 2010 and Enamel 2011 (rP= - 0,55; p = 0,013). Conclusion: The lead values obtained in all samples over three years characterized low exposure to lead by the group studied. Lead concentrations in blood, saliva, plasma and enamel did not vary over time. Of the 28 associations tested, the ones between Whole Blood 2009 and 2011 and between Enamel 2009 and 2010 were positive and significant. The association between Saliva 2010 and Enamel 2011 was negative and significant. The results suggest that the lead found in the enamel is correlated with past exposure to lead characterized in this study by the yearly whole blood lead data. The results further suggest that the dental enamel can be a reliable marker to assess the degree of exposure to lead of populations, since the primary teeth´s enamel surface did not incorporate lead in substantial quantities between 2 and 5 years in children with low exposure to this metal and low caries activity.

A presenÃa dos agrotÃxicos à cada vez mais preocupante no Brasil visto que entre 2007 e 2012, o volume de defensivos (considerando apenas o princÃpio ativo) aplicado nas lavouras cresceu 14 %. O uso descontrolado desses compostos tem oferecido riscos a trabalhadores e moradores das regiÃes do agronegÃcio. Uma pesquisa realizada por um grupo da Universidade Federal do CearÃ, mostrou que em 23 amostras de Ãgua da regiÃo do perÃmetro irrigado do baixo Jaguaribe, coletadas em diferentes localidades e analisadas por cromatografia lÃquida, todas apresentaram a presenÃa de algum agrotÃxico, destacando-se o carbaril e o carbofurano como os mais detectados. Um estudo constatou anormalidades cromossÃmicas em cÃlulas da medula Ãssea de indivÃduos expostos a pesticidas na regiÃo, o que reforÃa a necessidade de desenvolvimento de mÃtodos bioanalÃticos capazes de detectar pesticidas em amostras biolÃgicas, para que essa exposiÃÃo possa ser monitorada pelas autoridades competentes. Baseado nisso um mÃtodo foi desenvolvido para anÃlise de carbaril e carbofurano, usando um cromatÃgrafo a gÃs equipado com detector de massas, em que foi monitorado o sinal analÃtico do agrotÃxico e de seus respectivos produtos de degradaÃÃo tÃrmica, degradaÃÃo essa ocorrida injetor do cromatÃgrafo. Um estudo para determinaÃÃo da melhor velocidade linear para o mÃtodo foi realizado com a construÃÃo do diagrama de Van Deemter, sendo determinada como Ãtima, a velocidade de 50,5 cm s-1. O preparo da amostra foi realizado com a precipitaÃÃo das proteÃnas do plasma seguida de microextraÃÃo em fase sÃlida no modo headspace (MEFS-HS) do sobrenadante; para otimizaÃÃo da extraÃÃo foi realizado planejamento fatorial 22 com componente central, em 3 fibras com caracterÃsticas diferentes. A fibra Polidimetilsiloxano/Divinilbenzeno (PDMS/DVB) de 65Âm mostrou uma maior afinidade com os analitos, sendo determinada como condiÃÃes Ãtimas o tempo de 40 min. de extraÃÃo com NaCl 30 % p/v de forÃa iÃnica e 110 ÂC de temperatura; o pH 5,5, agitaÃÃo de 1000 rpm e vial de 40 mL foram mantidos constantes. Foi validado um mÃtodo para determinaÃÃo quantitativa apenas para o carbaril, sendo esse monitorado pelo sinal do 1-naftol. A % de 1-naftol produzido pela degradaÃÃo tÃrmica do carbaril, nas condiÃÃes de MEFS e no CG-EM, foram respectivamente de 8% determinado por RMN e 94 % determinado pelo sinal gerado no detector EM. A seletividade foi avaliada na matriz de plasma sanguÃneo para amostras normais, lipÃmica e hemolisada, sendo o mÃtodo bem seletivo. A faixa linear de trabalho foi de 12 a 180 Âg L-1; utilizando o mÃtodo de superposiÃÃo da matriz com a utilizaÃÃo do pirimicarbe como padrÃo substituto, a linearidade da curva de calibraÃÃo foi determinada pelo valor do coeficiente de correlaÃÃo (R = 0,999), sendo realizado um estudo mais aprofundado da linealidade. Os valores do limite de detecÃÃo e quantificaÃÃo foram de 3,0 e 12,0 Âg L-1, o que demonstra que pequenas concentraÃÃes podem ser analisadas pelo mÃtodo; a precisÃo e exatidÃo intra e inter corrida foram todos dentro do recomendado pela resoluÃÃo da AgÃncia Nacional de VigilÃncia SanitÃria Brasileira n 27/2012, menores que 15 % para concentraÃÃes mÃdias e altas e, menores que 20 % para baixas concentraÃÃes. Amostras de 10 trabalhadores da regiÃo foram analisadas, porÃm nÃo foi detectada presenÃa de carbaril e carbofurano no plasma desses indivÃduos. / The presence of pesticides is increasing concern in Brazil since 2007 to 2012, the volume of pesticides (considering only the active ingredient) applied to the crops grew 14 %. The uncontrolled use of these compounds has offered risks to workers and residents of the areas of agribusiness. A survey conducted by a group of Federal University of CearÃ, showed that in 23 samples of water from the irrigated perimeter region of low Jaguaribe, collected at different locations and analyzed by liquid chromatography, all showed the presence of some pesticides, highlighting the carbaryl and carbofuran as the most detected. One study found chromosomal abnormalities in bone marrow cells of individuals exposed to pesticides in the region, which reinforces the need to develop bioanalytical methods able to detect pesticides in biological samples, for which exposure can be monitored by competent authorities. Based on that a method was developed for analysis of carbaryl and carbofuran, using a gas chromatograph equipped with mass detector, it was monitored the analytical signal of pesticides and their respective products of thermal degradation, degradation that occurred gun chromatograph. A study to determine the appropriate line speed for the method was carried out with the construction of the Van Deemter diagram, being determined as great as the speed of 50.5 cm s-1. Sample preparation was carried out with the precipitation of the plasma proteins microextraction followed by solid phase in the headspace (HS-SPME) of the supernatant; to extract optimization was performed factorial design with central component 22 in three fibers having different characteristics. The Polydimethylsiloxane/Divinylbenzene fiber (PDMS/DVB) of 65 &#956;m showed a higher affinity for analytes and determined as optimum conditions the time of 40 min. extraction with NaCl 30 % w/v of ionic strength and temperature of 110 ÂC; pH 5.5, stirring speed of 1000 rpm and 40 ml vial were kept constant. A method for quantitative determination has been validated only for carbaryl, making monitored by signal 1-naphthol. The % 1-naphthol produced by thermal degradation of carbaryl in the conditions of SPME and GC-MS were respectively determined by NMR 8 % and 94 % as determined by the generated signal detector. The selectivity was evaluated in blood plasma matrix for normal, hemolyzed, and lipemic samples, the highly selective method. The linear response range was 12-180 &#956;g L-1; using the matrix method of superposition using the substitute pattern as pirimicarb, the linearity of calibration curve was determined by the value of the correlation coefficient (R = 0.999), being conducted further study of the linearity. The values of detection and limit of quantification were 3.0 and 12.0 &#956;g L-1, demonstrating that small concentrations can be analyzed by the method; the precision and accuracy intra and inter race were all within the recommended resolution by the National Sanitary Surveillance Agency No. 27/2012, less than 15% for medium to high concentrations and lower than 20 % for low concentrations. Samples of 10 workers in the region were analyzed, but was not detected presence of carbaryl and carbofuran in plasma of these individuals.

The master´s thesis discusses the analysis of the plasma donor market in the Czech Republic with focus on Prague and Central Bohemian Region. The main aim of this thesis is to assess this market, identify behaviour of blood plasma donors and motives leading to regular donations, through research of primary and secondary data. Further the thesis deals with detection the awareness of donating blood plasma among studnets of prague universities and barriers to become a donor. The theoretical part of this thesis defines a donor market with legislation. Application part includes competitor analysis based on secondary data and research of blood plasma donators and Prague students. Thesis concludes with a marketing recommendations for a selected donor centre, which are deducted from the analysis.