Orientador: Luiz Augusto Magalhães / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T18:07:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FranjolaTepper_JorgeBlasLadislao_D.pdf: 12637154 bytes, checksum: d0ba29c48d3cfaec02b3d97c3a9ed976 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Fasciola hepatica é um parasito que tem como habitat os duetos biliares de animais herbívoros e onívoros e apresenta um ciclo biológico indireto, tendo como hospedeiro intermediário um molusco pulmonado, cuja espécie, no Chile, é Lymnaea viatrix. Na presente investigação estudou-se a resposta tissular de L. viatrix frente à infecção por Fasciola hepatica. Nesta investigação foram realizadas observações histológicas nas primeiras 72 horas após a infecção. A reação tissular iniciou-se às 48 horas após a infecção. Às 72 horas, observou-se um esporocisto morto decorrente de sua encapsulação. Realizou-se, também, um estudo epidemiológico da fasciolose na Província de Valdivia, Chile, detectando-se uma prevalência de 30,9% de animais infectados entre os comprados e beneficiados pelo matadouro da cidade de Valdivia. Em 1997, os meses que apresentaram maiores taxas de infecção foram março, abril, setembro e outubro. As localidades de Puerto Nuevo, Pichoy, Calle-Calle e Antilhue apresentaram as percentagem mais elevados de fasciolose bovina, apesar do Rio Bueno ter apresentado o maior número de gado bovino parasitado (2297). Entre os bovinos infectados, os novilhos machos apresentaram o maior grau de infecção. A pesquisa incluiu o estudo sobre a presença de L. viatrix na Província de Valdivia. Para tanto, foram visitados 53 campos, sendo que em 28 deles foi obtido terra para a pesquisa do molusco. O resultado desta investigação foi negativo devido ao período de estiagem. Foram encontrados moluscos naturalmente parasitados apenas no campo da Universidade Austral do Chile (3,3%). L. viatrix utilizadas no laboratório foram obtidas em um campo de Isla Teja, pertencente a Universidade Austral do Chile. Observou-se que este molusco tem como habitat o Iodo, no qual se reproduz e se alimenta provavelmente de microalgas, principalmente do gênero Lyngbya. Demostrou-se também que L. viatrix é o hospedeiro intermediário de F. hepatica na região estudada. Os exemplares de L. viatrix coletados no campo e obtidos em laboratório apresentaram-se menores do que os descritos por Paraense, entretanto a próstata destes moluscos era proporcionalmente maior / Abstract: The adult trematode Fasciola hepatica lives in the bile ducts of herbivorous and omnivorous animais realizing an indirect life cycle for its complete development. The intermediate host is a pulmonate snail of the genus Lymnaea. In Chile, Lymnaea viatrix is the main intermediate host. The tissue response and histological modifications of L. viatrix against the infection of Fasciola hepatica miracidia during the first 72 hours of infection were observed in the present investigation. The tissue reaction started 48 hours after infection. A dead sporocyst was observed 72 hours after infection due to its encapsulation. Epidemiological study of fascioliasis was also performed in the Province of Valdivia, Chile, in 1997. The prevalence of 30.9 percent of infected animais was detected among those bought and processed in the slaughter-house of the city of Valdivia. The highest rate of fasciolosis were observed in March, April, September and October. Puerto Nuevo, Pichoy, Calle-Calle and Antilhue showed highest percentages of bovine fascioliasis although Rio Bueno presented the greatest number of infected cattle (2297). Among the cattle, male calves had the highest degree of infection. LField survey of L. viatrix was performed in 53 sites of the Province of Valdivia. From ali the sites visited only in 28 of them, samples of earth were collected for snail search. L. viatrix were not found in any of these sites probably due to the dry survey period. Snails naturally infected with F. hepatica larvae were found in the field of the Austral University of Chile (3.3%). L. viatrix used in the laboratory experiments were obtained from Teja Island, where belongs to the Austral University of Chile. It was determined that this species grows in the mud and probably feeds with micro-algae, especially of the genus Lyngbya. It was also observed that L. viatrix is the intermediate host of F. hepatica in the studied region. The samples of L. viatrix collected in field and obtained in the laboratory were smaller than those described by Paraense. In a personal communication, this author reported that the prostate of these snails were proportionally larger than those described by him / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Orientadores: Clarice Weis Arns, Sandra Cecilia Botelho Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campalans-Barnier_Jacqueline_D.pdf: 1182672 bytes, checksum: 06bfe547650a3661c7baf01f2228c101 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) causa infecção aguda do trato respiratório em bovinos e está amplamente disseminado no mundo inteiro, provocando grandes perdas econômicas aos produtores. O presente projeto visou realizar a caracterização do vírus respiratório sincicial bovino (BRSV), denominado BRSV-25-BR, isolado de bezerro de dois meses de idade, proveniente de rebanho com sintomas de doença respiratória do Estado do Rio Grande do Sul, comparando o mesmo com isolados de BRSV de outros países. O passo inicial foi adaptar os diferentes isolados virais em sistema celular e, para tanto, foram utilizados cultivos de células CER ("Chicken Embryo Related¿). A análise morfológica do isolado brasileiro foi realizada através de microscopia eletrônica por contrastação negativa e o resultado dessa análise indicou que o isolado estudado, BRSV-25-BR, é um vírion arredondado, pleomórfico, de tamanho aproximado de 100 a 300 nm, com numerosas espículas espalhadas na superfície. Foi realizada uma comparação do genoma dos isolados virais utilizando a técnica de RT-PCR dupla. Foram utilizados os iniciadores B1, B2A, B3 e B4A para a proteína F que resultou na amplificação do fragmento no tamanho esperado, 481 pb. A análise desta seqüência revelou 97% de identidade de nucleotídeos das seqüências da proteína F do isolado BRSV-25-BR com as estirpes de BRSV armazenadas no GeneBank. A RT-PCR dupla utilizando os iniciadores B5A, B6A, B7A e B8 para a proteína G, amplificaram um fragmento do genoma viral do tamanho esperado, 371 pb. A porcentagem de identidade entre a seqüência do BRSV-25-BR e o fragmento equivalente das estirpes armazenadas no GeneBank encontrada foram entre 92 e 95%. A seqüência dos aminoácidos derivados da proteína G do isolado brasileiro comparado com as seqüências dos isolados registrados no GeneBank sugere sua associação ao subgrupo B. A informação obtida nesta pesquisa a partir da seqüência da proteína G permite afirmar que o isolado do Brasil é uma estirpe de BRSV diferente daquelas atualmente circulantes nas demais partes do mundo. Esta informação contribui para uma maior compreensão da epidemiologia e para o desenvolvimento de vacinas adequadas para o nosso meio / Abstract: The bovine respiratory syncytial virus (BRSV) causes acute infection in the respiratory tract of cattle and is wide spread in the world, causing significant economic losses. The objective of this project was to characterize the BRSV, named BRSV-25-BR, isolated from a 2 months calve from Rio Grande do Sul state cattle, which presented respiratory disease symptoms. This sample was compared against BRSV strain isolates from other countries. The initial step was to adapt the viral samples in cellular culture. To achieve this purpose, a CER (Chicken Embryo Related) cell culture was used. The morphologic analysis was done through electronic microscopy using a negative stain. A genomic comparison to the viral isolates was carried out. The outcomes of the analyses indicate that the analyzed sample, named BRSV-25-BR, is an rounded, pleomorphic virion, between 100-300 nm in size and numerous spikes over the surface. The amplification of the expected size fragment, which was 481 pb, was observed through a nested RT-PCR technique, using the B1, B2A, B3 and B4A primers for the F protein. The analyses of this sequence of nucleotides revealed 97% identity between the F protein sequence of the isolated BRSV-25-BR and the strains of BRSV equivalent sequences stored in the GeneBank. The amplification of the viral genome on an expected size fragment (371 pb) was achieved using the nested RT-PCR, in which the B5A, B6A, B7A and B8 primers for the G protein were used. The identity percentage between the BRSV-25-BR sequence and the compensative fragment of the GeneBank stored strains was smaller, ranging between 92% and 95%. A probable association to the B subgroup is suggested from the deduzed amminoacid sequence of the G protein of the Brazilian sample compared to the sample sequences registered in the GeneBank. The information gathered from this research project allows to affirm that the isolated Brazilian sample belongs to a kind of BRSV different from those present in the world and contribute with a values to epidemiologic studies / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Pedro Eduardo de Felicio, Carlos Termignoni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-25T14:10:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rubensam_JaneMaria_D.pdf: 3334187 bytes, checksum: 061c9d779e7f5da6e43706dd56bfc44e (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Este trabalho teve como objetivo estudar a relação da atividade de calpastatina e a força de cisalhamento da carne bovina bem como produzir anticorpo policlonal anti-calpastatina para futuro uso em estudos do potencial da calpastatina como indicador da maciez tendo em vista que esta característica é considerada como a mais importante para a qualidade sensorial da carne bovina. Foram realizados dois experimentos. No primeiro, estudou-se a influência do genótipo B0S indicus na atividade de calpastatina e na textura do músculo longissimus dorsi de novilhos criados no Sul do Brasil e a variabilidade destas características. A atividade de calpastatina foi determinada pelo ensaio de inibição da m-calpaína e a textura através da força de cisalhamento (Warner Bratzler Shear). Amostras de contrafilé (músculo L. dorsi) provenientes de 26 bovinos, sendo 14 Polled Hereford (HH), sete ¾ Hereford 1/4Nelore (3/4H1/4N) e cinco S/8Hereford 3/8Nelore (S/8H3/8N), machos castrados, abatidos aos dois anos de. idade, foram coletadas 24 h após o abate e analisadas quanto à atividade de calpastatina e textura, tanto no 1 ° dia post moriem quanto após um período de maturação de 10 dias a 2° C. A carne de novilhos S/8H3/8N apresentou, no 1° dia, maior (p<O,OS) atividade de calpastatina e força de cisalhamento do que a carne de novilhos HH e 3/4H1/4N. Não foram detectadas diferenças (p>0,05) entre os grupos HH e 3/4H1/4N para as mesmas características. Após 10 dias, houve uma diferença na atividade de calpastatina, porém não significativa (p>O,OS), entre o grupo 5/8H3/8N (1,S7U/g) e os demais (HH=1,23U/g; 3/4H1/4N=1,35U/g), e diferença significativa entre os grupos HH e S/8H3/8N para força de cisalhamento (3,67 e 5,00kg, respectivamente).Neste experimento, concluiu-se que a atividade de calpastatina determinada 24 horas post moriem, pode ser útil para a previsão da textura da carne, maturada ou não. Além disso, a participação do genótipo B.os indicus nos rebanhos bovinos da Região Sul poderá resultar em carne de pior textura. No segundo experimento, o gene contendo os domínios 2, 3, 4 e a região não traduzida 3' da calpastatina muscular bovina, inserido no vetor pGEX-5X-2, denominado pBSA1 (Killefer & Koohmaraie, 1994), gentilmente cedido pelo Dr. Mohammad Koohmaraie, pesquisador líder do Meat Animal Research Center, Clay Center, Nebraska, EUA, foi utilizado para expressão da calpastatina na forma de GST-calpastatina, em células de Escherichia coli AD202 DH5a. Após purificação em coluna de Glutathione-Sepharose 4B, inoculou-se 100 µg de GSTcalpastatina em coelho, via subcutânea, por 4 vezes, com intervalos de 21 dias. O anticorpo policlonal anti GST -calpastatina, purificado em Proteína G HiTrap, reconheceu calpastatina de extrato muscular bovino aquecido, com 67 kDa, através do método Western Blot. Através do teste ELlSA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) de. competição, o anticorpo policlonal anti GSTcalpastatina, em concentrações de 60 a 230 µg IgG/poço, reconheceu 70 mU da calpastatina muscular presente no extrato aquecido numa concentração dez vezes maior. GST -calpastatina também foi expressada em E. coli XL 1 Blue e, após purificação em cromatografia de afinidade, foi inoculada em coelho para obtenção de anticorpo policlonal. Este anticorpo foi utilizado em teste ELISA de captura de anticorpos para identificação da calpastatina muscular bovina em extrato muscular aquecido. A concentração de anticorpo policlonal anti GST -calpastatina, igual a 45 µg/ml, apresentou resposta proporcional à quantidade de calpastatina no extrato muscular. A produção e purificação de anticorpo policlonal anti GST -calpastatina constituirá um importante passo rumo ao desenvolvimento de testes, para determinação direta da atividade de calpastatina em amostras de músculos bovinos coletados por biópsia / Abstract: The objective of this work was to study the relationship between the longissimus dorsi muscle calpastatin activity and the shear force trom steers of different genotypes as well to produce polyclonal anti-calpastatin antibodies to be used as meat tenderness predictor in further research. Tenderness is considered the most important sensory quality attribute of beef. Two experiments were conducted. In the first, it was studied the Bos indicus genotype influence on calpastatin activity and texture of boneless rib steaks (longissimus dorsi muscle) at 24 hours after slaughter and at the 10th day of aging at 2°C from steers raised in thé South of Brazil. Calpastatin activity was determined by m-calpain inhibition assay anel texture by shear force (Warner-Bratzler). Beef rib samples from 26 steers, being 14 Polled Hereford (HH), seven 3/4 Hereford 1/4 Nelore (3/4H1/4N) and five 5/8 Hereford 3/8 Nelore (5/8H3/8N) were analysed. Rib samples from 5/8H3/8N steers showed higher (p<0.05) calpastatin activity and shear force values than beef trom HH and 3/4H1/4N steers in the 1st day. No differences (p>0.05) were detected in the same traits between groups HH and 3/4H1I4N. After 10 days of aging, there was a difference in calpastatin activity, although non-significant (p>0.05), amongst group 5/8H3/8N (1.57U/g) and others (HH=1.23U/g; 3/4H1/4N=1.35U/g), and a significant difference in shear force between groups HH and 5/8H3/8N (3.67 and 5.00kg, respectively). It was concluded that the calpastatin activity determined 24 hs post mortem can be useful to predict the texture of beef, aged or not. Also, the increasing participation of Bos indicus genotype in the South Region cattle herds, besides the productivity advantages, may result in beef of lower texture quality. In the second experiment, polyclonal antibodies were raised in rabbits from a cloned pBSA1 (vector pGEX-5X-2, Pharmacia) encoding domains 2, 3, 4 and the 3' untranslated region of bovine calpastatin gene, kindly provided by Or. Mohammad Koohmaraie, leader researcher trom Meat Animal Research Center Roman L. Hurska, Clay Center, Nebraska, USA.. The cloned pBSA1 (KILLEFER & KOOHMARAIE, 1994) was used to expression of a GST-calpastatin form in Escherichia coli AD202 and DH5a cells. After purification in Glutathione Sepharose 4B column, aliquot of 100 µg GST-calpastatin was inoculated in rabbit, four times with 21 day intervals. The polyclonal antibodies purified in Protein G HiTrap recognized a 67 kDa protein from prerigor bovine heated muscle homogenates by Western blot method. By ELlSA competition assay, polyclonal anti-GST-calpastatin antibodies within the range of 60 to 230µg IgG/well detected until 70 mU of calpastatin trom bovine prerigor longissimus dorsi muscle homogenate in which original activity was ten times higher. GST -calpastatin was also expressed in E. coli XL 1 Blue that after an affinity purification was used to raise polyclonal antibodies in rabbits. The polyclonal antibodies anti-GST-calpastatin were used to perform an antibodies capture ELlSA test to identify calpastatin from a heated muscle homogenate. A 45 J..lg/ml of antiGST -calpastatin polyclonal antibodies concentration presented a proportional response in relation to the muscle heated homogenate calpastatin concentration. The polyclonal anti-GST -cal pastati n antibodies obtained in this work could be used to develop field tests useful to determine calpastatin activity in bovine muscles collected by biopsy / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-10-31T18:16:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 317209 bytes, checksum: f65a937c86fae98c78b29974509988cb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-31T18:16:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 317209 bytes, checksum: f65a937c86fae98c78b29974509988cb (MD5) Previous issue date: 2016-05-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivou-se com este trabalho estimar parâmetros genéticos para características de produção de leite (produção de leite em até 305 dias – PL305), peso (peso aos 120 – P120, aos 365 – P365 e aos 550 dias – P550) e reprodutiva (idade ao primeiro parto - IPP) em bovinos da raça Guzerá utilizando modelos multicaracterísticos e comparar metodologias que se baseiam na utilização de dados censurados de idade ao primeiro parto. Os dados foram cedidos pela Associação Brasileira dos Criadores de Zebu (ABCZ) e Embrapa Gado de Leite em parceria com o Centro Brasileiro de Melhoramento do Guzerá (CBMG 2 ). O arquivo de pedigree (120.599 animais) incluiu animais com registros fenotípicos e todos os ancestrais conhecidos. Registros censurados foram definidos como dados de IPP que extrapolaram os limites de 740 e 1860 dias. Os registros de IPP (69.157 informações) foram analisados por meio de sete diferentes metodologias: método linear convencional (LM); de simulação (SM); de penalidade (PM); modelos bicaracterística limiar-linear em que se considerou (TLcens) ou não (TLmiss) informações prévias sobre os registros censurados; e a metodologia de análise de sobrevivência por meio do modelo de riscos proporcionais de Weibull segmentado em que se considerou (PWPHcens) ou não (PWPH) os registros censurados. Para as análises de sobrevivência, os valores para o critério de informação da deviance (DIC) sugerem o uso de 0 e 2 nós na função base para os métodos PWPH e PWPHcens, respectivamente. Os componentes de variância genética aditiva estimados para os métodos LM, PM e TLmiss foram similares. As estimativas de herdabilidade para IPP variaram de 0,19 (TLcens) à 0,28 (SM) e 0,40 (PWPH) e 0,46 (PWPHcens). De forma geral, as correlações entre os valores genéticos obtidos por meio das diferentes metodologias e a porcentagem de touros selecionados em comum variaram de -0,28 (SM x PWPH) à 0,99 (TLmiss x LM), indicando reordenamento moderado entre os animais. As comparações baseadas na metodologia de validação cruzada, indicam a metodologia TLmiss como a melhor opção para predição dos valores genéticos dos animais para a característica IPP na população Guzerá. Para estimação dos parâmetros genéticos utilizando modelos multicaracterísticos, foram considerados os efeitos sistemáticos de sexo e idade ao parto. Os efeitos aleatórios genético aditivo e de grupo de contemporâneo (rebanho, ano e estação de parto) foram considerados. Adicionalmente, os efeitos aleatórios genético aditivo materno e de ambiente permanente materno foram considerados para a característica peso à desmama. As estimativas de herdabilidade foram 0,29 (PL305), 0,42 (P120), 0,49 (P365), 0,56 (P550) e 0,25 (IPP). As correlações genéticas entre as características de peso foram maiores que 0,83 e entre PL305 e as demais foram de 0,25 (PL305 x P205), 0,32 (PL305 x P365) e 0,36 (PL305 x P550). A característica IPP foi negativamente correlacionada com as características de leite e de peso. Os resultados sugerem que a seleção para a produção de leite não compromete a seleção para características de peso e reprodutivas, bem como é passível a inclusão de dados censurados de IPP na avaliação genética por meio do uso de um modelo de limiar-linear em bovinos da raça Guzerá. / We aimed to estimate genetic parameters for 305-d milk yield (MY305), growth (weaning – WW, yearling – YW and long yearling weights - LYW) and reproductive (age at first calving - AFC) traits in Guzerá cattle by using Bayesian multi-trait models and compare methodologies for handling censored data of age at first calving by Bayesian models. Data were provided by Brazilian Association of Zebu Cattle (ABCZ) and Embrapa Dairy Cattle Research Unit in partnership with the Brazilian Center of Guzerá Genetic Improvement (CBMG 2 ). The pedigree file (120,599 animals) included animals with phenotypic records and their known ancestors. Censored records were defined as AFC records out of range of 740 and 1860 days. Data including 69,157 AFC records were analyzed using seven different methods: conventional linear method (LM), simulation method (SM), penalty method (PM), a bitrait threshold-linear model considering (TLcens) or not (TLmiss) any prior information about censored records; and piecewise Weibull proportional hazards methodology considering (PWPHcens) or not (PWPH) censored records. For survival analyses, deviance information criterion (DIC) values suggested 0 and 2 piecewise change points in the baseline function of PWPH and PWPHcens methods, respectively. The additive genetic variance components estimated from LM, PM and TLmiss were similar. Heritability estimates for AFC ranged from 0.19 (TLcens) to 0.28 (SM) in non-survival approaches, and 0.40 and 0.46 to PWPH and PWPHcens methods, respectively. In general, genetic breeding values correlations from different methods and the percentage of selected bulss in common indicated moderate reranking, ranging from -0.28 (SM x PWPH) to 0.99 (TLmiss and LM). Comparisons based on cross-validation analyses, indicated TLmiss as a suitable alternative for predicting breeding values for AFC in this Guzerá population. In second chapter, systematic effects included sex and age at calving. The additive genetic and contemporary group (herd, year and season of birth) were included as random effects. Additionally, maternal genetic and permanent effects were included as random effects for weaning weight trait. Heritability estimates were 0.29 (MY305), 0.42 (WW), 0.49 (YW), 0.56 (LYW) and 0.25 (AFC). Genetic correlations between weight measures were higher than 0.83 and 0.25 (MY305 x WW), 0.32 (MY305 x YW) and 0.36 (MY305 x LYW) for other traits. AFC trait was negatively genetically correlated with milk and weight measures. These results suggest that selection for milk yield do not jeopardize selection for beef and reproductive efficiency and AFC censored data could be included in genetic evaluation considering a threshold-linear model in Guzerá cattle. / Tese enviada por e-mail em 31/10/2018 pela secretaria do curso. Versão impressa não foi enviada.(Não foi encontrada no departamento)

Orientador: Hiroshi Aoyama / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T01:38:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Granjeiro_JoseMauro_M.pdf: 8247934 bytes, checksum: 5318589631bcde894c7e375254a1cfda (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: A fosfatase ácida de BPM do rim bovino foi purificada 1.640 vezes até a homogeneidade, com rendimento de 7%, através de um procedimento envolvendo fracionamento com sulfato de amônio, tratamento ácido e cromatografia de trocaiônica em SP-Sephadex com eluição por íon-afinidade. Os critérios de pureza utilizados foram a A.E., PAGE, SDS-PAGE, filtração em gel (Superdex HR 70) e análise da composição de aminoácidos. A enzima purificada (A.E. de 100 µmol min-1 mg-1) é composta por uma cadeia polipeptídica simples e possui Mr de 13,6 e 17,8 kDa, como determinado através da filtração em gel e SDS-PAGE, respectivamente. A composição parcial de aminoácidos (Cys e Trp não foram determinados) foi obtida após a hidrólise ácida da proteína purificada seguida da análise dos resíduos de aminoácidos e evidenciou a existência de, pelo menos, 152 resíduos de aminoácidos. O estudo do efeito do pH na atividade enzimática revelou uma faixa de pH ótimo de 4,5 a 5,5. A enzima apresentou uma atividade máxima a 60°C e, nesta temperatura, maior estabilidade no pH 5,5. A atividade da enzima foi relativamente pouco sensível a diversos compostos, reagentes redutores de tióis e íons metálicos, exceto pela inibição por Zn2+ e Cu2+ e pela ativação por guanosina. O estudo de inibidores demonstrou insensibilidade ao tartarato e fluoreto e inibição por vanadato (Ki, 0,465 µM), piridoxal-5-fosfato (Ki, 2,18 µM), fosfato inorgânico (Ki, 0,769 mM), pCMB e molibdato de amônio. A energia de ativação para a hidrólise do p-NPP, determinada pelo gráfico de Arrhenius, foi de 43,31 kJ.mol-1. A análise da capacidade da enzima catalisar a reação de transfosforilação demonstrou que diversos álcoois atuaram como aceptores de fosfato neste tipo de reação, tendo se destacado o glicerol e o metanol como os melhores aceptores. Dos substratos testados, o p-NPP, ß-Naftil-P, a FMN e a Tyr-P foram os únicos hidrolisados significativamente com KM de 0,14; 0,4; 0,3 e 7,9 mM, respectivamente. A faixa de pH ótimo para a hidrólise da Tyr-P e FMN foi de 5,0 a 5,5 / Abstract: A low molecular weight bovine kidney acid phosphatase was purified 1640 fold to homogeneity, with 7% recovery, by a procedure involving ammonium sulfate fractionation, acid treatment, and SP-Sephadex ion-exchange chromatography with ion-affinity elution. The following homogeneity criteria were used: specific activity, PAGE, SDS-PAGE, gel filtration (Superdex HR 70) and amino acid composition. The purified enzyme (specific activity 100 µmol mL-1mg-1) contained a singIe peptide chain and had a reIative moIecuIar mass of 13.6 and 17.8 kDa as determined by gel filtration chromatography and SDS-PAGE, respectively. The partiaI amino acid composition of this enzyme, after acid hydroIysis, showed at least 152 amino acid residues. The amino acid Cys and Trp were not determined. The p-NPP hydrolysis reaction catalyzed by this enzyme had a broad pH optimum of 4.5-5.5 and maximal activity at 60°C. In this temperature the enzyme was more stable at pH 5.5. Reducing thiol compounds, metal ions and other different compounds did not affect significantly the enzyme activity except for the inhibition by Zn2+ and Cu2+ and activation by guanosine. The enzyme was also inhibited by vanadate (Ki, 0.465 µM), pyridoxal-5-phosphate (Ki, 2.18 µM), inorganic phosphate (Ki, .769 mM), pCMB and ammonium molybdate. Both tartrate and fluoride were very weak inhibitors. An activation energy value of 43.31 kJ.mol-1 was determined from Arrhenius plot for the hydrolysis of p-NPP reaction catalyzed by the enzyme. Both glycerol and methanol increased significantly the acid phosphatase activity, acting as good acceptors in the transphosphoryIation reaction also catalyzed by the enzyme. The apparent KM values obtained, at 37°C and pH 5.0, for the best substrates were 0.14 mM, 0.4 mM, 0.3 mM and 7.9 mM for p-NPP, ß-Naphtyl-P, FMN and Tyr-P, respectively. At the same conditions, a pH optimum value of 5.0-5.5, was obtained for the FMN- and Tyr-P-directed acid phosphatase reaction / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Antonio Carlos Paes / Coorientador: Jane Megid / Banca: Hélio Langoni / Banca: Rogério Giuffrida / Resumo: A brucelose e tuberculose são enfermidades infectocontagiosas de evolução crônica, de caráter zoonótico, que representam grandes prejuízos econômicos à bovinocultura leiteira e saúde pública. Os objetivos deste trabalho foram: estudar a situação epidemiológica destas enfermidades nas propriedades fornecedoras de leite para o Programa Municipal de Botucatu intitulado "Laticínio Escola"; determinar o grau de conhecimento dos pequenos produtores acerca destas doenças por meio de um questionário elaborado para essa finalidade. Ao final do questionário os produtores receberam instruções técnicas sobre os temas abordados e foi realizado um trabalho social de conscientização sobre a importância zoonótica e sanitária. O estudo foi conduzido em 22 pequenas propriedades leiteiras do município de Botucatu-SP, que fornecem leite para creches e escolas municipais. Os testes realizados foram os preconizados pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação de Brucelose e Tuberculose (PNCEBT), que são sorológicos para brucelose e imunoalérgico para tuberculose. Os animais reagentes a ambos os testes foram retirados da propriedade, levados ao Hospital Veterinário da FMVZ/UNESP, campus de Botucatu, para realização de exame necroscópico. O total de animais testados para Tuberculose foi 736, e para Brucelose 512. Encontrou-se pelo menos um bovino positivo para tuberculose em 13,6% (3/22) das propriedades, e para brucelose em 31,8% (7/22). A prevalência das enfermidades observada foi de 0,8% (6/736) e 2,3% (12/512) para tuberculose e brucelose, respectivamente. Os dados deste estudo foram semelhantes aos encontrados em trabalhos regionais da literatura nacional. Portanto, na microrregião de Botucatu-SP, estas enfermidades ainda representam grande relevância socioeconômica, sanitária e de saúde pública / Abstract: Brucellosis and tuberculosis are chronic infectious diseases and considered as zoonosis, which represent large economic losses to dairy cattle and public health. Our objectives were to study the epidemiological situation of these diseases in the properties that supply milk to the Municipal Program of Botucatu entitled "Dairy School"; determine the degree of knowledge of small farmers about these diseases through a questionnaire prepared for this purpose. At the end of the questionnaire the producers received technical instruction on the topics and we performed a social work awareness of zoonotic importance and health. The study was conducted in 22 small dairy farms of Botucatu-SP, which provide milk for kindergartens and public schools. The tests performed were those recommended by the National Program for Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), which are serologic for brucellosis and tuberculosis imunoalergic. Reagents animals to both tests were removed from the property, taken to the Veterinary Hospital of FMVZ/UNESP, Botucatu, to perform necropsies. The total number of animals tested for tuberculosis was 736, and for brucellosis 512. It has been found Brucellosis at least one positive for tuberculosis in 13.6% (3/22) of properties, for brucellosis in 31.8% (7/22). The prevalence of disease observed was 0.8% (6/736) and 2.3% (12/512) for tuberculosis and brucellosis, respectively. Data from this study were similar to those in regional work of the national literature. Therefore, in the micro region of Botucatu, these diseases still represent very important socio-economic, health and public health / Mestre

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação com monensina, em vacas nelore paridas a pasto, em anestro, nas concentrações plasmáticas de AGNE, IGF-1, no diâmetro de maior folículo e na capacidade de resposta desse folículo a um estímulo ovulatório hormonal (GnRH). Nesse estudo foram usadas 302 vacas (123 primíparas e 179 multíparas) que foram divididas em dois tratamentos, proporcionalmente, onde o lote controle recebeu apenas suplementação mineral e o lote tratado recebeu suplementação monensina (110mg/vaca/dia). Os tratamentos se iniciaram 30 dias pré-parto, onde avaliou-se o ECC pré-parto, até 90 dias pós-parto. Todas as vacas, em média aos 54 dias pós-parto, receberam um estímulo hormonal ovulatório (administração de 50 mcg de GnRH), foram avaliadas para o escore de condição corporal (escala de 1 a 5), colhido sangue para análise de IGF-1 e AGNE e foram avaliadas para o do diâmetro folicular através de ultra-sonografia (US). Após 7 dias nova US foi realizada para verificar a taxa de ovulação. As variáveis foram submetidas à análise de variância pelo GLM do SAS. O ECC pós-parto foi maior (p<0,01) em vacas tratadas com monensina (3,11) que vacas controle (3,00); além disso, vacas tratadas não perderam ECC no período periparto enquanto vacas controle perderam 0,19 pontos. Vacas suplementadas com monensina (883,9 mmol/l) tiveram concentração plasmática de AGNE menor (p<0,01) que vacas controle (1013,8 mmol/l), caracterizando, junto com a ECC, menor mobilização de reservas. Já a concentração plasmática de IGF-1 foi maior (p<0,01) nas vacas tratadas (118,5 ng/ml) que vacas controle (85,1 ng/ml). Primíparas (118,0 ng/ml) apresentaram IGF-1 maior (p<0,01) que multíparas (84,8 ng/ml). Vacas tratadas (10,07mm) apresentaram folículo maior que vacas controle (9,58mm) e multíparas (10,35mm) maior que primíparas (9,30mm)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this trial was to evaluate the effects of monensin supplementation in suckled anestrous Nellore cows on IGF-1 and NEFA concentrations, follicular diameter and GnRH ovulatory response. In this trial were used 302 cows (123 primiparous and 179 multiparous) divided in two treatments. The control group received only mineral supplementation and the treated group received monensin supplementation (110 mg/cow/day). The treatments began 30 days prepartum to 90 days postpartum. All cows, at average of 54 days postpartum, received hormonal ovulatory stimulation (50 mcg GnRH), BCS were evaluated (1 to 5 scale), blood samples were collected to IGF-1 and NEFA analysis and follicular diameter was measured by ultrasound (US). Seven days later ovulation rate was evaluated. Cows that received monensin had higher postpartum BCS (3.11) and lost less BCS at peripartum than control cows (3.00). Treated cows had lower (P<0.01) NEFA plasmatic concentration (883.9 mmol/l) than control cows (101.8 mmo/l), which associated with BCS suggests less reserve mobilization. IGF-1 plasmatic concentration was higher in treated cows (11.5 ng/ml) than control cows (85.1 ng/ml). Primiparous (118.0 ng/ml) had higher IGF-1 than multiparous (84.8 ng/ml). Treated cows had higher follicular diameter (10.07mm) than control cows (9,58mm) and multiparous (10.35mm) higher than primiparous (9.30mm). The hormonal ovulatory stimulation (GnRH) response is follicle diameter dependent and treated cows had higher response (35.9%) than control cows (31.5%). Monensin supplementation is a good strategy to improve energy status due to decrease in BCS loss and reduction of NEFA concentration. Monensin supplementation also increased IGF-1 plasmatic concentration, follicular diameter and hormonal (GnRH) ovulatory response. / Mestre

Orientador: Mário De Beni Arrigoni / Coorientador: Danilo Domingues Millen / Banca: Marco Aurílio Factori / Banca: Rodrigo Silva Goulart / Resumo: Objetivou-se com este trabalho avaliar a inclusão de Cloridrato de Zilpaterol (CZ) na ração de bovinos Nelore quanto ao efeito no desempenho produtivo, nas características de carcaça, no comportamento ingestivo e na qualidade de carne de bovinos Nelore confinados. Foram utilizados 72 animais machos, sendo 36 castrados e 36 não castrados, com peso vivo médio inicial de 347,5 kg ± 21.61 kg, e provenientes de recria em sistema de pastejo contínuo. O delineamento experimental foi de blocos casualizados em arranjo fatorial 2 x 2 (sexo e adição de CZ), constituindo os seguintes tratamentos: castrados sem adição de CZ (C) ou com adição de CZ (CZ) e não castrados sem adição de CZ (NC) ou com adição de CZ (NCZ). Cada tratamento foi composto por 6 baias (3 animais/baia), sendo estas consideradas as unidades experimentais para este estudo. A administração de 7,5 mg/kg de MS de CZ ocorreu por 20 dias durante o período final de confinamento, respeitando a carência de três dias antes do abate. Houve efeito significavo (P < 0,01) de CZ para GPD e EA durante o período tratado. Para o mesmo período houve interação (CZ x Sexo) (P < 0,04) com redução de IMAS e IMASPV para os animais CCZ apenas. A administração de CZ durante o período total de confinamento resultou (P < 0,04) em redução na IMASPV e melhora da EA e EB. Houve incremento (P < 0,04) no PCQ, RC, PCF, e AOL para os animais alimentados com CZ. A suplementação com CZ aumentou significativamente (P < 0,05) os pesos da maioria dos cortes carneos da região do quarto traseiro. Não foi observado efeito significativo (P > 0,05) sobre a EGSF, força de cisalhamento e coloração da carne. Para a análise sensorial de carne, bovinos castrados não foram prejudicados quando suplementados com CZ. Assim sendo, a adição de CZ em dietas de terminação para bovinos Nelore castrados e não castrados, proporcionou melhora no desempenho ... / Abstract: This objective was to evaluate the inclusion of Zilpaterol hydrochloride (CZ) ration on performance, carcass characteristics, feeding behavior and meat quality of feedlot Nellore. 72 male animals were used, 36 steers and bulls 36, with average weight of 347.5 kg ± 21.61 kg, and from rearing in continuous grazing. The experimental design was a randomized block in a 2 x 2 factorial arrangement of treatments (sex and ZH), as follows: steers without CZ (CC) or with CZ (CCZ), bulls without CZ (NCC) or with CZ (NCCZ). Each treatment consisted of 6 pens (3 animals/pen), which were considered the experimental units for this study. The CZ was administrated during the last 20 days of feeding (7,5 mg/kg of dry matter), allowing 3 days of withdrawl priot to slaughter. There was CZ main effect (P < 0,01) for average daily gain and feed efficiency during CZ treatment period. Morevoer, it was an interaction (Sex x CZ) (P < 0,04) where both dry matter intake in kilos (DMI) and as percentage of body weight (IMSPV) were reduced for CCZ. The administration of CZ considering the entire trial resulted (P < 0,04) in reduction of IMSPV and improved feed and biological efficiencies. Also, it was observed a CZ main effect (P < 0,04), where animals fed CZ presented heavier hot and cold carcass weight, and larger LM area. The feeding of CZ led to heavier weights for most of the meat cuts analyzed, especially the cuts from the hindquarter. No significant CZ main effect was observed for final 12th back fat thickness, shear force and meat color. For sensory analysis of meat, steers were not harmed when supplemented with CZ. Thus, the addition of CZ in diets for finishing Nellore bulls and steers improves performance and carcass yield without substantially affecting the quality of the final product. / Mestre

Orientador: Gustavo Rezende Siqueira / Banca: Ricardo Andrade Reis / Banca: Ivanna Moraes de Oliveira / Resumo: O objetivo com este trabalho foi avaliar a oferta de forragem em pastos de Brachiaria brizantha cv. marandu na terminação de bovinos Nelore recebendo alta suplementação e sua interação com a taxa de ganho em peso durante a recria. Foram utilizados 64 bovinos Nelore, com média de 386,0±7,9 kg de peso corporal (PC), não castrados, com 18 meses de idade e distribuídos em 16 piquetes (unidades experimentais), recebendo suplementação de alto consumo a 2% em relação ao PC. Os tratamentos consistiram em animais manejados na recria com duas taxas de ganho em peso e recebendo mistura mineral (0,5g/kg de PC), sendo subdivididos aleatoriamente em lotes com baixa e alta oferta de forragem na terminação. Na recria a altura do pasto proporcionaram diferentes taxas de ganhos em peso, sendo 15 cm (0,761 kg/dia) e 35 cm (1,076 kg/dia). As diferentes ofertas na terminação foram obtidas, mantendo a mesma lotação nos piquetes, com diferentes massas iniciais (3370 e 8470 kg MS/ha) proporcionados pelos manejos do pasto de 15 e 35 cm durante a recria. O período experimental foi de 120 dias. Foram realizados abates no início e final do experimento para a avaliação dos componentes corporais. Foi realizada mediada de ganho de peso e avaliação de composição da carcaça e parâmetros ruminais. Na avaliação dos parâmetros ruminais foram utilizados 12 animais fistulados no rúmen com peso médio de 390 Kg. O delineamento adotado foi em blocos completos ao acaso em esquema fatorial (2x2), sendo os dados analisados através da utilização de modelo misto por meio do procedimento MIXED do programa SAS, versão 9.2 (SAS, 2008), significância P<0.10, pelo teste t. A massa de forragem na terminação foi em média 6507 e 2711Kg nos tratamentos alta e baixa oferta respectivamente. Houve diferença significativa (P<0,10) na oferta de forragem de 1,31 e 2,91 na baixa e alta oferta de forragem respectivamente. Os animais que na recria tiveram a menores... / Abstract: The aim of present stud was evaluate the forage allowance in Brachiaria brizantha cv. Marandu pasture at finish of Nellore bulls receiving high supplementation and interaction with rate of weight gain in rearing phase. Were utilized 64 Nellore bulls with initial body weight of 386 ± 7.9kg and 18 month split in sixteen paddocks (experimental unit), supplemented with 2% of BW. The treatments were two rate of gain (0.76 and 1.07 kg/day) during growing phase split in high and low forage allowance. The herbage mass were 3370 to lower and 8470 kg for high forage allowance when started finish phase. The experimental period was 120 days. The carcass compositions were evaluated by reference abatement at initial and final of experiment. Average daily gain (ADG), carcass composition and ruminal parameters were evaluated. Were utilized 12 fistulated animals with 390kg of BW. The experimental design was blocks in factorial (2x2) and the data analyzed by proc MIXED SAS, 9.2 (SAS, 2008) with P<0.10 by t test. The average herbage mass were 6507 and 2711kg to allowance high and lower, respectively, resulting in 1.31 and 2.91 of forage allowance. Animals with lower performance during growing phase and finish at highest forage allowance achieved higher ADG 1.12 kg (P<0.10), no difference was found among other treatments with 0.91 kg/d of ADG. The supplement intake were affected by growing treatments (P<0.10) however, without effect on finish phase. The level of propionate was higher in lower forage allowance whilst acetate was highest in high forage allowance. The hot carcass weight was 270 and 295 kg when started finish phase for low and high performance. The yield gain was highest in animals that showed high performance that animals with lower performance during rearing phase / Mestre

Orientadora: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Felipe Perecin / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Mayra Elena Ortiz D'Avila Assumpção / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Resumo: Na bovinocultura de corte, a alimentação corresponde ao maior custo associado à produção de carne. A avaliação do consumo alimentar residual (CAR) tem sido uma ferramenta importante para direcionar a seleção de bovinos de corte e otimizar economicamente esta atividade. No entanto, alguns estudos mostram uma diminuição da motilidade, do perímetro escrotal, uma menor taxa de prenhez e parto em animais eficientes para CAR. Uma estratégia para solucionar tais problemas é a suplementação ácidos graxos poliinsaturados (AGPs) que não apenas aumentam a densidade energética da dieta, mas também atuam na melhoria do desempenho reprodutivo. No entanto, o ideal é que tais características de seleção para CAR e efeito da suplementação com AGPs sejam passadas à prole, assim o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito paterno da seleção para consumo alimentar residual (CAR) e da suplementação dos touros com AGs para a PIVE, o acúmulo de lipídio embrionário e a expressão de genes. Animais classificados em baixo CAR e alto CAR foram utilizados no experimento. O delineamento experimental obedeceu a um esquema fatorial 2 x 2 (CAR x Suplementação), a análise estatística foi realizada pelo programa JPM (versão 5.0.1, SAS Institute). Após a amostragem, os animais foram separados aleatoriamente em dois grupos: com suplementação de AGs protegido e com suplementação controle (sem AGs protegido). O experimento foi composto por quatro tratamentos, o sêmen dos touros foi congelado (4 tratamentos), sen... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In beef cattle, feed corresponds to the highest cost associated with meat production. The evaluation of the selection for residual feed intake (RFI) has been an important tool to direct the selection of beef cattle and economically optimize this activity. However, some studies show a decrease in motility, scrotal perimeter, a lower pregnancy and calving rate in efficient animals for RFI. One strategy to solve such problems is polyunsaturated fatty acid (PUFA) supplementation that not only increases the energy density of the diet, but also improves reproductive performance. However, the ideal is that these characteristics of selection for RFI and effect of the supplementation with PUFA are passed to offspring, so the aim of this work was to evaluate the paternal effect of selection for residual feed intake and supplementation of bulls with fatty acids for in vitro produced embryos (IVPE), accumulation of embryonic lipid and gene expression. Animals classified under low RFI and high RFI were used in the experiment. The experimental design was based on a 2 x 2 factorial scheme (RFI x Supplementation), the statistical analysis was performed by the JPM program (version 5.0.1, SAS Institute). The animals were randomly divided into two groups: with protected fatty acids supplementation and with control supplementation (without protected fatty acids). The experiment was composed of four treatments, the semen of the bulls was frozen (4 treatments), 6 animals were supplemented with pro... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor