Submitted by ALINE EVANGELISTA SANTIAGO null (evalineva@hotmail.com) on 2017-12-19T17:39:39Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO PDF (1).pdf: 6165905 bytes, checksum: 0fe2e6627556b7a80341cb2a27e96540 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2017-12-20T13:25:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santiago_ae_me_bot.pdf: 6165905 bytes, checksum: 0fe2e6627556b7a80341cb2a27e96540 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-20T13:25:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santiago_ae_me_bot.pdf: 6165905 bytes, checksum: 0fe2e6627556b7a80341cb2a27e96540 (MD5) Previous issue date: 2017-11-24 / Introdução: A concentração plasmática de citocinas, quimiocinas e micropartículas (MPs) em mulheres com câncer de mama e de ovário é uma forma não invasiva de avaliar a resposta inflamatória/regulatória sistêmica associada a esses tumores e o papel do microambiente formado na resposta pró e antitumoral na paciente. Portanto, o objetivo deste estudo foi comparar o perfil da resposta inflamatória sistêmica do câncer epitelial de ovário (CEO) e do câncer de mama através da medição de citocinas, quimiocinas e MPs, para assim avaliar se existe ou não diferença nesse padrão de resposta inflamatória sistêmica. Métodos: Noventa e quatro mulheres sem evidência de malignidade (n = 30), com câncer de mama (n = 38) ou câncer de ovário epitelial (n = 26) foram avaliadas. Foram coletadas amostras plasmáticas e de tecido tumoral. A avaliação dos marcadores inflamatórios foi realizada pela dosagem de citocinas (IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17A, TNF-α e IFN- ), quimiocinas (CXCL8, CXCL -9, CXCL 10, CCL 2, CCL5) e MPs (neutrófilos, leucócitos, monócitos, eritrócitos, células endoteliais, plaquetas e linfócitos) por citometria de fluxo / Cytometric Bead Array. As diferenças entre os grupos foram avaliadas por Kruskal-Wallis. As diferenças com p<0,05 foram consideradas significantes. Resultados: Os níveis plasmáticos das citocinas pró-inflamatórias IL-6 (p=<0,001), TNF-α (p=0,004) e IL-12 (p=0,0019) foram significativamente maiores em pacientes com câncer de ovário em comparação com as mulheres com câncer de mama e com o grupo controle. Pacientes com câncer de ovário foram também associadas a maiores níveis de IL-10 (p<0,001) e das quimiocinas CXCL-9 (p<0,001) e CXCL-10 (p<0,001) em comparação aos outros grupos. Os níveis de MPs derivados de neutrófilos aumentaram significativamente em amostras plasmáticas de pacientes com CEO em comparação com mulheres com câncer de mama e do grupo controle (p<0,001). Em contraste, as MPs derivadas de células endoteliais foram menores nas pacientes com CEO em comparação com os demais grupos (p=0,0491). Houve um equilíbrio entre citocinas, quimiocinas e MPs nos grupos de câncer de mama e controle. A rede de citocinas e quimiocinas inflamatórias/regulatórias em pacientes com CEO apresentou maior complexidade em relação aos demais grupos e com fortes interações nas redes entre fatores inflamatórios e imunológicos plasmáticos. Esta rede incluiu mais biomarcadores associados com correlações negativas e positivas entre eles. Conclusão: Este estudo é uma pesquisa promissora e original. Os resultados podem refletir as discrepâncias entre a carcinogênese no câncer de ovário e de mama, sugerindo um padrão inflamatório sistêmico maior no CEO. MPs podem servir como uma nova fonte de informação relacionada à doença. / Introduction: The plasma concentration of cytokines, chemokines and microparticles (MPs) in women with breast and ovarian cancer is a noninvasive way of assessing the systemic inflammatory / regulatory response associated with these tumors and the role of the microenvironment formed in the pro and antitumor response in the patient. Therefore, the objective of this study was to compare the profile of the systemic inflammatory response of epithelial ovarian cancer (EOC) and breast cancer by measuring cytokines, chemokines and MPs, in order to evaluate whether or not there is a difference in this pattern of inflammatory response systemic. Methods: Ninety-four women with no evidence of malignancy (n = 30), breast cancer (n = 38) or epithelial ovarian cancer (n = 26) were evaluated. Plasma samples and tumor tissue were collected. The evaluation of inflammatory markers was performed by the measurement of cytokines (IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17A, TNF-α and IFN-), chemokines (CXCL8, CXCL -9, CXCL 10, CCL 2, CCL 5) and MPs (neutrophils, leukocytes, monocytes, erythrocytes, endothelial cells, platelets and lymphocytes) by flow cytometry / Cytometric Bead Array. The differences between the groups were assessed by Kruskal-Wallis. Differences with p <0.05 were considered significant. Results: Plasma levels of the proinflammatory cytokines IL-6 (p = 0.001), TNF-α (p = 0.004) and IL-12 (p = 0.0019) were significantly higher in ovarian cancer patients compared to women with breast cancer and the control group. Patients with ovarian cancer were also associated with higher levels of IL-10 (p <0.001) and CXCL-9 (p <0.001) and CXCL-10 (p <0.001) chemokines compared to the other groups. Levels of MPs derived from neutrophils increased significantly in plasma samples of EOC patients compared to women with breast cancer and the control group (p <0.001). In contrast, MPs derived from endothelial cells were lower in patients with EOC compared to the other groups (p = 0.0491). There was a balance between cytokines, chemokines and MPs in the breast cancer and control groups. The network of inflammatory / regulatory cytokines and chemokines in patients with EOC presented greater complexity in relation to the other groups and with strong interactions in the networks between inflammatory and immunological plasmatic factors. This network included more biomarkers associated with negative and positive correlations between them. Conclusion: This study is a promising and original research. The results may reflect the discrepancies between carcinogenesis in ovarian and breast cancer, suggesting a higher systemic inflammatory pattern in the EOC. MPs can serve as a new source of disease-related information.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As lesões impalpáveis da mama que muitas das vezes são assintomáticas, podem corresponder à um estágio de progressão de câncer difícil de ser detectado, durante os exames de rotina de palpação da mulher. O único método possível para a descoberta dessas lesões é através dos exames de imagem da mama, de modo geral, através da mamografia, que geralmente ocorre após os 45 anos. Devido a esses fatores, lesões impalpáveis, são frequentemente, descobertas apenas quando o estágio de desenvolvimento da doença já está avançado e as intervenções terapêuticas são menos reparadoras. Com a finalidade de iniciar a caracterização de tumores impalpáveis iniciais, objetivamos analisar o perfil genético (mutação) e epigenético (metilação de região promotora) de regiões do DNA relacionadas ao gene supressor tumoral TP53, provenientes de biópsias de mulheres residentes do Estado do Rio de Janeiro. Neste trabalho, foram investigadas 34 amostras de tecido de tumor de mama, por sequenciamento de DNA, nos exons de 5 a 8 do gene TP53. Nesta região, não foi encontrada nenhuma mutação. Este resultado pode estar relacionado ao tipo inicial de lesão, de acordo com os dados radiológicos das lesões de categorias 3 e 4 da escala BIRADS. Para verificar o estado de metilação da região promotora do gene TP53, analisamos 30 pares de amostras (sangue e tumor) de pacientes com suspeita de câncer de mama, pela técnica MSP-PCR. Nenhuma amostra tumoral apresentou alteração no estado de metilação na região promotora do gene TP53, quando comparada à amostra normal. Um motivo possível para a disparidade de resultados em relação à outros trabalhos pode ter sido a utilização da técnica. A caracterização das lesões impalpáveis apenas foi iniciada neste trabalho, no qual pudemos constatar que a mutação em TP53 pode ser um evento mais tardio. Portanto, a lesão mamária, em suas diferentes formas, continuará a ser o assunto investigado por nosso grupo, ampliando o número de amostras e alcançando melhor conexão da conduta e dos métodos clínicos já existentes, com as novas possibilidades de diagnóstico via marcadores moleculares em tumores e fluidos biológicos / Nonpalpable breast lesions that are often asymptomatic, may correspond to a stage of progression of the cancer that is difficult to be detected during routine screening. The only possible way for their discovery is through breast images preventive examinations, generally mammography, which usually occurs after age 45. Because of these factors, impalpable lesions are often discovered when the developmental stage of the disease is already advanced and therapeutic interventions are less aggressive.This study aimed to characterize impalpable tumors by the analysis of genetic (mutation and instability) and epigenetic (methylation of the promoter region) of DNA regions related to TP53 tumor suppressor gene from impalpable lesions extracted from biopsies of women living in the state of Rio de Janeiro. Were investigated 34 tissue samples from breast cancer by DNA sequencing in exons 5-8 of TP53. In this region, no mutation was found, this result may be related to the initial type of injury according to data of the radiological lesions of categories 3 and 4 of scale BIRADS . In order to check the status of methylation of the promoter region of the TP53 gene, we analyzed 30 pairs from samples (blood and tumor) of patients with suspected breast cancer, by MSPPCR technique. No tumor sample showed a change in the state of methylation in the promoter region of TP53 as compared to the normal sample. One possible reason for the disparity in the results between this study and the other studies may be related with the applied techniques. The characterization of the nonpalpable lesions just started this work in which we could verify that the mutation in TP53 may be a later event. Therefore, the breast lesion, in its different forms, remains the subject investigated by this group. We have been worked for expanding the number of samples, so as to link the new possibilities of molecular diagnostics in clinical practice in tumors and biological fluids

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:02:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 18478610 bytes, checksum: c3ac21418388a129d8403822054a7e3d (MD5) Previous issue date: 2014-07-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The breast cancer continues to be one of the top causes of death of female people in the world, even with the great therapeutic advancements. In Brazil, it has been the biggest cause of death in the female population, mainly in the age group between 40 and 69 years. Beyond the incidence of the infirmity, in the last decades, the characteristics of the treatment are also expressive, what demands, sometimes, a considerable period of hospitalization or forwards and backwards to the hospital, exposes the patient to diverse invasive procedures, which are painful and unpleasant in the physical and emotional ranges. Thus, the objective of this study is to investigate the factors that can promote a resilient behavior in patients with breast cancer, to verify with the patients the forms of confrontation in the face of beliefs, behaviors and affections in relation to the pathology and to the treatment and to analyze the possible relations between religiosity and life sense in the confront of the disease. It is an exploratory and descriptive research with a qualitative and quantitative approach. The instruments used to data collection were: the social demographic and clinic data questioning; the Coping Religioso and Espiritual Abreviada scale - CRE BREVE, the Life Sense Questioning; the Semi-Structured interview based on the modality of thematic oral history and the Field Diary. The sample was composed by 50 patients of two non-governmental organizations placed in the city of João Pessoa-PB, with 46,34 age average. The diagnostic time was between 2 and 6 months (62%) and between 7 and 12 months (38%), and they were having therapeutic treatments: 28% was receiving chemotherapy; 24% hormontherapy; 16% radiotherapy and 4% were realizing the immunotherapy, after to be, or not, submitted to mastectomy. The results pointed as factors of Resilience in the present study: the support from family, friends and the support Group to woman with cancer; the perception that other people need them and the spirituality/religiosity, which are grouped as realization of living values. The patients were able to redefine the moment they were living, transforming the personality characteristics and the world vision, achieving the realization of attitudinal values, finding sense in front of the inevitable suffering. It was evident that the participants used a higher grade of Coping Religioso and Espiritual positive (M= 3,3 DP = 0,6) which contemplates strategies that provide benefic/positive effect to the practitioner, however, they used the Coping Religioso and Espiritual negative in lesser extent (M= 1,7 DP= 0,7). The results also pointed a higher realization of sense (M=6,0 DP=0,8). Indicating that the participants despite living the process or breast cancer, could perceive sense in life. Some correlations between the Coping Religioso and Espiritual and the Life Sense were found: the positive dimension of this scale, which approaches the spiritual seeking care, was correlated positively with the factor sense seeking (r = 0,2; p<_0,05), as well as there was a correlation between the factor age and the positive dimension of CRE: Offer to help others, (r=0,2; p<0,05). It concludes that the spirituality/religiosity in this sample, favored a new perception referent to the breast cancer, beyond well-being and hope, and it contributed to the resignification of the participants life. / O Câncer de mama continua sendo uma das maiores causas de morte de pessoas do sexo feminino no mundo, mesmo com os grandes avanços terapêuticos. No Brasil, ele tem sido maior causa de óbitos na população feminina, principalmente na faixa etária entre 40 e 69 anos. Além da incidência da enfermidade, nas últimas décadas, também são expressivas as características do tratamento o qual demanda, por vezes, um período considerável de hospitalização ou idas e vindas ao hospital, expõe a paciente a diversos procedimentos invasivos, dolorosos e desagradáveis tanto no âmbito físico quanto emocional. Sendo assim, o objetivo deste estudo é investigar os fatores que podem promover o comportamento resiliente em pacientes com câncer de mama, verificar junto às pacientes as formas de enfrentamento diante das crenças, comportamentos e afetos em relação à patologia e ao tratamento e analisar as possíveis relações entre religiosidade e sentido de vida no enfrentamento da doença. Tratase de uma pesquisa exploratória e descritiva com uma abordagem qualitativa e quantitativa. Os instrumentos utilizados para a coleta dos dados foram: o questionário sócio demográfico e de dados clínicos; a escala de Coping Religioso e Espiritual Abreviada - CRE BREVE, o Questionário do Sentido de Vida; a entrevista Semi-Estruturada baseada na modalidade da história oral temática e o Diário de Campo. A amostra foi composta por 50 pacientes de duas organizações não governamentais situadas na cidade de João Pessoa-PB, com média de idade de 46,34 anos. O tempo de diagnóstico esteve entre 2 e 6 meses (62%) e entre 7 e 12 meses (38%) e encontravam-se vivenciando algum tipo de terapêutica: 28 % estavam sob tratamento por quimioterapia; 24 % por hormonioterapia; 16% por radioterapia e 4% realizando a imunoterapia, após terem se submetido, ou não à mastectomia. Os resultados apontaram como fatores de Resiliência no presente estudo: o apoio oriundo da família, dos amigos, do Grupo de apoio à mulher com câncer; a percepção de que outras pessoas precisam delas e a espiritualidade/religiosidade, que estão agrupadas como realização de valores vivenciais. As participantes conseguiram ressignificar o momento que estavam vivendo, transformando características da personalidade e a visão de mundo alcançando, assim, a realização de valores atitudinais, encontrando sentido diante do sofrimento inevitável. Ficou evidente que as participantes utilizaram maior índice de Coping Religioso Espiritual positivo (M= 3,3 DP = 0,6) que abrange estratégias que proporcionam efeito benéfico/positivo ao praticante, contudo, utilizaram o Coping Religioso Espiritual negativo em menor grau (M= 1,7 DP= 0,7). Os resultados também apontaram maior realização de sentido (M=6,0 DP=0,8). Indicando que as participantes embora estivessem vivenciando o processo de câncer de mama, conseguiram perceber sentido na vida. Foram encontradas algumas correlações entre o Coping Religioso Espiritual e o Sentido da Vida: a dimensão positiva desta escala, que aborda a busca de ajuda espiritual, correlacionou-se positivamente com o fator busca de sentido (r = 0,2; p<_0,05), assim como houve correlação entre o fator idade e a dimensão positiva do CRE: Oferta de ajuda ao outro, (r=0,2; p<0,05). Conclui-se que a espiritualidade/religiosidade nesta amostra, favoreceu uma nova percepção referente ao câncer de mama, alem de bem estar e esperança, bem como contribuiu para a ressignificação da vida das participantes.

Orientador: Sonia Marta Moriguchi / Resumo: O câncer de mama é o tipo mais comum entre as mulheres no Brasil e no mundo, com 28% de novos casos a cada ano. O diagnóstico tardio pode identificar carcinoma de mama localmente avançado (CMLA) que necessita tratamento sistêmico quimioterápico pré-operatório que visam reduzir o tamanho do tumor e da carga tumoral. A quimiorresistência pode estar relacionada à expressão de glicoproteína P (GpP), que promove o efluxo celular da droga, diminuindo o tempo de permanência da droga na célula e, consequentemente a apoptose celular. O sestamibi-99mTc utilizado na realização da cintilografia de mamas (CM) é um substrato dessas proteínas, similar às drogas quimioterápicas, sendo o único método de imagem a representar o tempo de permanência dessa droga. O índice preditor da resposta quimioterápica por cintilografia tem sido utilizado para prever o tempo de permanência dessas drogas nessas células. O objetivo desse estudo foi verificar se o índice preditor de resposta quimioterápica neoadjuvante obtido por cintilografia de mamas com sestamibi-99mTc proposto por Alonso e cols. relacionou-se com resposta quimioterápica do estudo anatomopatológico da mama pós-cirurgia (AP), considerado padrão ouro, analisando-se os índices isolados: índice precoce (IP) e índice tardio (IT) e associados (IP+IT). Tratou-se de estudo transversal, observacional e descritivo, com coleta retrospectiva de dados de prontuários de portadores de CMLA atendidas nessa Instituição no período de 2012-2017, que foram subm... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Breast cancer is the most common cancer among women, both in Brazil and globally, with 28% of cases each year being new. Delayed diagnosis can identify locally advanced breast carcinoma (LABC), which requires preoperative systemic chemotherapy that aims to reduce the size and load of the tumor. The chemo-resistance may be related to expression of glycoprotein P (GpP) that promotes cellular efflux of the drug, diminishing not only its time within the cell but consequently cellular apoptosis. Sestamibi99mTc, utilized in performing scintimammography (SMM), is a substrate of these proteins, similar to chemotherapeutic drugs, being the only imaging method to represent the permanence time of this drug. The predictive index of chemotherapeutic response by SMM has been utilized to predict the permanence time of chemotherapeutic drugs into these cells. This study aimed to verify whether the predictive index of neoadjuvant chemotherapeutic response, obtained by SMM with sestamibi99mTc proposed by Alonso and colleagues, is related to the chemotherapeutic response, as shown by postoperative anatomopathological study of the breasts (AP), considered the gold standard, analyzing the isolated indices, early index (EI) and late index (LI), and associated index (EI+LI). This was a transversal, observational and descriptive study, with retrospective data collected from charts of patients who were carriers of LABC attended at this Institution in the period from 2012 to 2017, that were submitted ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eliana Aguiar Petri Nahás / Resumo: Introdução: O câncer de mama é a neoplasia maligna mais frequente em mulheres. A redução da morbimortalidade aumentou a possibilidade de maternidade em mulheres em idade fértil após o tratamento, assim como a preocupação com a preservação da fertilidade diante da toxicidade ovariana relacionada aos tratamentos adjuvantes. A estimulação ovariana com letrozol e gonadotrofinas para a criopreservação de oócitos é procedimento bem estabelecido em pacientes com câncer de mama e desejo reprodutivo futuro. Entretanto, estudo recente comparando pacientes submetidas a preservação oncológica da fertilidade com protocolo utilizando gonadotrofinas e letrozol, com pacientes inférteis submetidas a fertilização in vitro mostrou maior taxa de oócitos imaturos e menor taxa de fertilização entre as pacientes que realizaram criopreservação de oócitos, sugerindo um possível efeito deletério do letrozol sobre a qualidade oocitária. Objetivo: Avaliar a influência do letrozol sobre a qualidade oocitária em pacientes com câncer de mama submetidas a estimulação ovariana para preservação da fertilidade. Métodos: Enstudo clínico de corte transversal realizado em hospital público terciário de São Paulo, por meio de análise de banco de dados e prontuários médicos. Foram avaliados parâmetros morfolóficos de 750 oócitos obtidos de pacientes com câncer de mama submetidas a estimulação ovariana com letrozol e gonadotrofinas para preservação da fertilidade no período de 2015 a 2016. Os dados foram comparados a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Breast cancer is the most common malignant neoplasm in women. Recent advances in early diagnosis and treatment have led to an increase in the survival rate. The reduction of morbidity and mortality increased the possibility of maternity after cancer in women of childbearing age and raised the concern about fertility preservation against gonadotoxic adjuvant treatments. Ovarian stimulation with letrozole and gonadotropins for cryopreservation of oocytes in patients with breast cancer and reproductive desire has been shown to be effective. Although a recent study comparing patients submitted to oncological fertility preservation with protocol using gonadotropins and letrozole to infertile patients submitted to in vitro fertilization performed only with gonadrotopins showed a higher rate of immature oocytes and lower fertilization rate among patients who received letrozole, suggesting a possible deleterious effect of letrozole on oocyte quality. Objective: To evaluate the influence of letrozole on oocyte quality in patients with breast cancer submitted to fertility preservation. Methods: An analytical cross-sectional study performed in a public tertiary hospital in São Paulo through chart analysis and medical records. We evaluated morphological parameters of 750 oocytes obtained from all breast cancer patients submitted to ovarian stimulation with letrozole and gonadotropins for fertility preservation between 2015 and 2016. They were compared to 699 oocytes from wo... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Ludmila Machado Neves Bercaire (ludmila_machadoneves@yahoo.com.br) on 2018-08-06T17:40:21Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Ludmila Bercaire.pdf: 3380553 bytes, checksum: be2ff6e81191ee3fdfbeacb5ed05c530 (MD5) / Approved for entry into archive by Sulamita Selma C Colnago null (sulamita@btu.unesp.br) on 2018-08-08T16:27:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bercaire_lmn_me_bot.pdf: 3380553 bytes, checksum: be2ff6e81191ee3fdfbeacb5ed05c530 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-08T16:27:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bercaire_lmn_me_bot.pdf: 3380553 bytes, checksum: be2ff6e81191ee3fdfbeacb5ed05c530 (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Introdução: O câncer de mama é a neoplasia maligna mais frequente em mulheres. A redução da morbimortalidade aumentou a possibilidade de maternidade em mulheres em idade fértil após o tratamento, assim como a preocupação com a preservação da fertilidade diante da toxicidade ovariana relacionada aos tratamentos adjuvantes. A estimulação ovariana com letrozol e gonadotrofinas para a criopreservação de oócitos é procedimento bem estabelecido em pacientes com câncer de mama e desejo reprodutivo futuro. Entretanto, estudo recente comparando pacientes submetidas a preservação oncológica da fertilidade com protocolo utilizando gonadotrofinas e letrozol, com pacientes inférteis submetidas a fertilização in vitro mostrou maior taxa de oócitos imaturos e menor taxa de fertilização entre as pacientes que realizaram criopreservação de oócitos, sugerindo um possível efeito deletério do letrozol sobre a qualidade oocitária. Objetivo: Avaliar a influência do letrozol sobre a qualidade oocitária em pacientes com câncer de mama submetidas a estimulação ovariana para preservação da fertilidade. Métodos: Enstudo clínico de corte transversal realizado em hospital público terciário de São Paulo, por meio de análise de banco de dados e prontuários médicos. Foram avaliados parâmetros morfolóficos de 750 oócitos obtidos de pacientes com câncer de mama submetidas a estimulação ovariana com letrozol e gonadotrofinas para preservação da fertilidade no período de 2015 a 2016. Os dados foram comparados a 699 oócitos de mulheres sem câncer de mama apresentando infertilidade por fator masculino, submetidas a estimulação ovariana para fertilização in vitro, através de pareamento por idade (grupo controle). A estimulação ovariana em pacientes com câncer de mama foi realizada com letrozol em combinação a gonadotrofinas em protocolo com antagonista do hormônio liberador de gonadotrofofina (GnRH). No grupo controle a estimulação ovariana foi realizada apenas com gonadotrofinas e a supressão hipofisária obtida com antagonista de GnRH. Os oócitos maduros obtidos foram analisados quanto à presença de corpos refráteis, cor e regularidade do ooplasma, grau de granulação central, cor e espessura da zona pelúcida, tamanho do espaço perivitelínico, presença de vacúolos e retração no oócito. Os resultados obtidos foram comparados ao grupo controle por análise estatística pelos testes de Qui-quadrado e Mann-Whitney. Estimou-se o odds ratio (OR) e o intervalo de confiança de 95% (CI) através de regressão logística para observar as possíveis associações entre uso de letrozol e os parâmetros morfológicos oocitários. Resultados: Foram analiados 750 oócitos obtidos de 69 pacientes com câncer de mama e comparados a 699 oócitos obtidos de 92 pacientes do grupo controle. A média de idade no grupo câncer de mama foi de 31,5 ± 4,1 anos e no grupo controle de 33,1 ± 7,1 anos (p=0,210). Foi observada maior incidência de dismorfismos oocitários no grupo câncer de mama que utilizou letrozol comparado ao grupo controle: espaço perivitelínico aumentado (p=0,007), zona pelúcida irregular (p<0,001), corpos refráteis (p<0,001), ooplasma escuro (p<0,001), ooplasma granuloso (p<0,001), ooplasma irregular (p<0,001) e presença de granulação central (p<0,001). Outras alterações morfológicas foram mais frequentes nos oócitos do grupo controle comparado ao grupo câncer de mama com letrozol: grânulos corticais (p<0,001), zona pelúcida de coloração alterada (p<0,001) e alterações de retículo endoplasmático liso (p<0,001). Não houve diferença estatística entre os grupos em relação aos parâmetros: retração (p=0,254) e vacúolos (p=0,974). Conclusão: A avaliação dos parâmetros morfológicos dos oócitos de mulheres com câncer de mama, submetidas a estimulação ovariana com letrozol e gonadotrofinas revelou maior ocorrência de dismorfismos quando comparado a mulheres sem câncer de mama submetidas a estimulação ovariana com gonadotrofinas. A utilização do letrozol mostrou-se como fator de risco para a presença de dismorfismos oocitários que podem ser traduzidos em pior qualidade oocitária. / Introduction: Breast cancer is the most common malignant neoplasm in women. Recent advances in early diagnosis and treatment have led to an increase in the survival rate. The reduction of morbidity and mortality increased the possibility of maternity after cancer in women of childbearing age and raised the concern about fertility preservation against gonadotoxic adjuvant treatments. Ovarian stimulation with letrozole and gonadotropins for cryopreservation of oocytes in patients with breast cancer and reproductive desire has been shown to be effective. Although a recent study comparing patients submitted to oncological fertility preservation with protocol using gonadotropins and letrozole to infertile patients submitted to in vitro fertilization performed only with gonadrotopins showed a higher rate of immature oocytes and lower fertilization rate among patients who received letrozole, suggesting a possible deleterious effect of letrozole on oocyte quality. Objective: To evaluate the influence of letrozole on oocyte quality in patients with breast cancer submitted to fertility preservation. Methods: An analytical cross-sectional study performed in a public tertiary hospital in São Paulo through chart analysis and medical records. We evaluated morphological parameters of 750 oocytes obtained from all breast cancer patients submitted to ovarian stimulation with letrozole and gonadotropins for fertility preservation between 2015 and 2016. They were compared to 699 oocytes from women without cancer submitted to ovarian stimulation for in vitro fertilization due to male factor infertility, matched by age (control group). Ovarian stimulation in patients with breast cancer was performed before chemotherapy with letrozole in combination with 14 gonadotropins in GnRH antagonist protocol. In control group, ovarian stimulation was performed with gonadotropins and pituitary suppression was obtained with GnRH antagonist. Mature oocytes obtained were analyzed for the presence of refractile bodies, color and regularity of the ooplasm, central granulation degree, zona pellucida thickness, the size of the perivitelinic space, presence of vacuoles and oocyte retraction. The obtained results were compared with the corresponding age control group through statistical analysis with Chi-square and Mann-Whitney tests. Analysis consisted to estimate the odds ratio (OR) and 95% confidence interval (CI), considering the group of letrozole to constitute a response compared with control group as reference (OR 1.0) to observe the possible associations between letrozole use (dependent variable) and the morphological oocytes parameters (independent variables). Results: We evaluated 750 oocytes obtained from 69 breast cancer patients and compared with 699 oocytes from 92 control patients. Mean age was 31.5 ± 4.1 years in the study group and 33.1 ± 7.1 years in control group (p=0.210). We observed higher incidence of in oocyte dysmorphisms in the letrozole group compared to the control group: increased perivitelinic space (p = 0.007), irregular zona pellucida (p<0.001), refractile bodies (p<0.001), dark ooplasm (p<0.001), granular ooplasm (p<0.001), irregular ooplasm (p<0.001) and dense central granulation (p<0.001). Other dysmorphisms were higher in the control group: cortical granules (p <0.001), zona pellucida with altered staining (p<0.001) and smooth-surfaced endoplasmic reticulum aggregates (p <0.001). There was no statistical difference between the groups in relation to the parameters: retraction (p=0.254) and vacuoles (p=0.974). 15 Conclusion: The evaluation of morphological parameters of oocytes from breast cancer patients submitted to ovarian stimulation protocol with letrozole and gonadotropins revealed greater occurrence of dysmorphisms when compared to infertile patients submitted to ovarian stimulation protocol with gonadotropins. The use of letrozole seems to be a risk factor for the presence of oocyte dysmorphisms that could be translated into poor oocyte quality.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:59Z : No. of bitstreams: 1 Publico-11912.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Introdução: A endocrinoterapia é uma das principais responsáveis pela redução de mortalidade do câncer de mama. Biomarcadores preditivos de resposta celular precoce vêm sendo estudados com intuito de prever precocemente a hormonioresistência. Freqüentes deleções e mutações têm sido descritas no gene p16 em diversos tipos de tumores, mas pouco se sabe sobre seu papel no câncer de mama e seu comportamento após endocrinoterapia neoadjuvante com tamoxifeno e anastrozol. Objetivos: Estudar a expressão do p16 e dos receptores de estrogênio e progesterona (RE e RP) em pacientes na pós - menopausa com carcinoma de mama RE e/ ou RP (+) após curto período (26 dias) de tratamento com tamoxifeno, anastrozol e placebo. Métodos: Estudo prospectivo randomizado duplo-cego realizado com 58 pacientes dos Hospitais Pérola Byington e São Paulo da UNIFESP (São Paulo - Brasil) com carcinoma ductal infiltrativo de mama, nos estádios II e III, que no período pré-operatório foram subdivididas em três grupos: P (placebo, N=25), T (tamoxifeno 20mg/dia, N=15) e A (anastrozol 1mg/dia, N=18). A biópsia foi realizada no momento do diagnóstico e após a cirurgia definitiva (26º dia) e os tumores foram isolados por micro-arranjos teciduais. O estudo imunoistoquímico foi realizado com anticorpos para p16 (Dako- OA315), RE (Neomarkers-M7047), RP (Dako- M3569). Realizou-se o estudo semiquantitativo utilizando-se os critérios de Allred e o estudo estatístico pelo teste paramétrico de Anova. Resultados: A positividade do p16 variou de 22 para 17%, respectivamente pré e pós tratamento com anastrozol; de 8 para 4% no grupo placebo e não houve variação, com 7% de positividade, no grupo que recebeu tamoxifeno. A comparação entre grupos e tempos não apresentou relação significativa para o p16 (p=0,17). Não foi encontrada correlação entre a positividade do p16 e o status hormonal (RE e RP). Conclusão: Não houve diferença estatística significante entre os três grupos estudados. Futuros estudos com métodos moleculares poderão esclarecer dúvidas suscitadas a respeito do tempo de exposição à droga necessária para interferir nos biomarcadores e proteínas. / Background: Frequent deletions or mutations of the INK4 gene, which encodes the cyclin-dependent kinase 4 inhibitor p16INK4a, have been documented in various human cancers, but little is known about the role of this tumor suppressor gene in primary breast cancer and there is a lack in the literature about its expression behavior in neoadjuvant endocrinetherapy with tamoxifen or anastrozole. Objective: Analysis of p16INK4a expression in patients with invasive ductal carcinomas (IDC) prior to tamoxifen and anastrozole neoadjuvant treatment and possible correlation between predictive and prognostical factors – estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PgR). Methods: We examined p16INK4a mRNA expression and its relationship with short period (26 days) neoadjuvant endocrine therapy with tamoxifen and anastrozole in 58 primary breast cancers with palpable ER-positive IDC. They were double-blind randomized in three neoadjuvant treatment groups for 21 days: Anastrozole 1mg/day (n= 17), Placebo (n=25) and Tamoxifen 20mg/day (n=15). Biomarkers status (ER, PgR and p16) were obtained by comparing single immunohistochemical evaluation of pre and post-surgery samples using Allred’s method. Statistical analyses were performed using the SPSS software for Windows. Results: Variation in p16 was 22% to 17% in anastrozole group, 8% to 4% in placebo group and there was no variation in tamoxifen group, standing in 7%. There was no significant statistical diference in p16INK4a expression among the three groups (p=0.17). Variation in p16 was 12% to 9% (p<0.05) when considering the three groups together. There was a significant decrease of p16 expression in pre and post surgery results. There was no significant statistical correlation between p16 expression and hormonal status (RE and RP). Conclusions: There was no significant statistical diference in p16INK4a expression among the three groups. There was a significant statistical decrease in p16INK4a expression when compared pre and post surgery values. These findings could indicate that expression of p16 and variation in pre and post surgery samples are associated with hormone responsiveness and mechanisms of resistance. There were no significant statistical correlation between p16 expression and hormonal status (RE and RP). Further studies are necessary to understand their functional interrelationships and whether high p16INK4a expression may be associated with a lack of hormone responsiveness in breast cancer. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tumores de mama podem ser categorizados pela expressão de diferentes receptores, como por exemplo o HER-2 (receptor de fator de crescimento epidérmico 2), sendo amplamente estudada a utilização do fármaco inibidor do receptor da tirosina–quinase, ditosilato de lapatinib. Nesse sentido, o trabalho está centrado no desenvolvimento farmacotécnico e caracterização físico-química de nanocápsulas multiparede revestidas com polissorbato 80 e fosfatidilcolina (LIPOID S75®), seguidas de revestimento com quitosana, contendo ditosilato de lapatinib (25μg/mL e 50μg/mL). Estudos físico-químicos da fase orgânica e das nanocápsulas contendo LIPOID S75®, em diferentes concentrações, foram desenvolvidos através de medidas de viscosidade, tensão superficial e analise de calorimetria exploratória diferencial, correlacionando com o tamanho de partícula e interação da fosfatidilcolina no sistema. A partir disso, escolheu-se a maior concentração de LIPOID S75® testada, para desenvolver as nanocápsulas multiparede complexadas com metal e fenilalanina contendo ditosilato de lapatinib (Lap25-P5-Q-Fe-Phe; Lap50-P5-Q-Fe-Phe; Lap25-P5-Q-Zn-Phe; Lap50-P5-Q-Zn-Phe). As formulações contendo fármaco apresentaram distribuição unimodal de partículas na faixa nanométrica, (111 - 172 nm) e baixo índice de polidispersão. A faixa de potencial zeta obtida (+16 - +22 mV) indicou o revestimento da partícula pela quitosana. O ditosilato de lapatinib foi quantificado por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). A fase móvel do método consistiu em acetonitrila:acetato de amônio 0,02M (70:30), vazão de 1,0 mL/min com detecção em 260 nm. As suspensões contendo 25 μg/mL e 50 μg/mL de fármaco apresentaram teor entre 93% e 91%, respectivamente. A eficiência de encapsulação (EE%) foi acima de 90%. O conjunto destes estudos demonstra que nanocápsulas desenvolvidas são potenciais candidatas para ensaios biológicos in vitro. / Breast tumors may be categorized by the expression of different receptors such as HER-2 (growth factor epidermal receptor 2), The use of the inhibitor drug receptor tyrosine-kinase lapatinib ditosylate (Tyverb®, GlaxoSmithKline) has been widely studied. In this sense, the work is focused on pharmaceutics development and physicochemical characterization of multiwall nanocapsules coated with polysorbate 80 and phosphatidylcholine (Lipoid S75®), followed by coating with chitosan containing lapatinib ditosylate (25 μ/mL and 50 μg/mL). Physicochemical studies of the organic phase and nanocapsules containing Lipoid S75® at different concentrations were developed by viscosity, surface tension analysis and differential scanning calorimetry, correlated with the particle size and interaction of phosphatidylcholine in the system From this, we have chosen the highest concentration of lipoid S75® tested to develop complexed nanocapsules multiparede with metal and phenylalanine containing lapatinib ditosylate (Lap25-P5-Phe-Phe-Q; Lap50-P5-Q -Fc-Phe; Lap25-P5-O-Zn-Phe; Lap50-P5-Zn-O-Phe). Formulations containing lapatinib ditosylate showed unimodal distribution of particles in the nanometer range (111-172 nm) and low polydispersity index. The obtained zeta potential range (+16 - +22 mV) indicated by the chitosan particle coating. The lapatinib ditosylate was quantified by high-performance liquid chromatography (HPLC). The mobile phase consisted method in acetonitrile: 0.02M ammonium acetate (70:30), flow 1.0 mLmin-1 with detection at 260 nm. The suspensions containing 25 ugmL-1 and 50 ugmL-1 showed drug content of between 93% and 91%, respectively. The encapsulation efficiency (EE%) was above 90%. Together these studies demonstrate that the nanocapsules are potential candidates for in vitro biological assays.

O câncer de mama é o tipo mais frequente de neoplasia maligna entre as mulheres, com a incidência de mais de um milhão de novos casos no mundo, por ano. O gene TP53 é responsável por regular o destino da célula em resposta a estresses genotóxicos e não genotóxicos. Mutações somáticas neste gene são encontradas em, aproximadamente, 50% dos carcinomas humanos. No câncer de mama, a frequência das mutações no TP53 é em torno de 20 a 50%, sendo a alteração mais encontrada. Estas mutações podem alterar a conformação da proteína, prejudicando sua função de ativadora da transcrição de genes alvo e, pode levar a p53 a apresentar tendência à agregação. Neste trabalho, foi realizado a análise da presença de mutações nos exons 5 a 10 do gene TP53, em biópsias de câncer de mama, de mulheres residentes na cidade do Rio de Janeiro. Após a identificação das amostras com mutação em TP53, algumas foram selecionadas para se verificar o comportamento das diversas mutantes quanto à formação de agregados de p53, em cortes histológicos dos tumores de mama. Foram utilizados os anticorpos A11 e DO1, que reconhecem oligômeros pré-fibrilares e a p53 mutante ou selvagem, respectivamente. Para tanto, foi utilizado o ensaio de co-localização por imunofluorescência, utilizando microscópio confocal para a observação dos resultados. Mutações no gene TP53 foram detectadas em 19% dos casos analisados de câncer de mama sendo 88,2% do tipo &#8213;missense&#8214;. Estas mutações, em tumores do tipo carcinoma ductal infiltrante (CDI), estavam associadas a um estágio mais tardio e agressivo de câncer, representado pelo Grau III de Elston (p< 0,0001). Também foi observada relação positiva dos tumores com mutações e o acúmulo da p53 (p= 0,0184). Além disso, foi observado um padrão diferente das mutantes de p53 quanto à tendência a agregação, sendo as mutantes R273H e P278A as que apresentaram uma maior agregação. Assim, a agregação da p53 mutante observada &#8213;in vivo&#8214; e descrita nesta dissertação, parece depender do tipo de mutação observada nos casos de câncer de mama. / Breast cancer is the most frequent cancer in women, with 1 million of new cases in the world each year. The TP53 gene is responsible for the regulation of the cells fate in response to genotoxic and non-genotoxic stress. Somatic TP53 mutations are found in, approximately, 50% of human cancers. In breast cancer, TP53 mutation is the most frequent genetic alteration, being present in 20 to 50% of cases. These mutations may change the protein conformation, impairing the transcription of target genes, and may lead the mutant p53 to aggregate. In this study, we analyzed the presence of mutations in exons 5-10 of TP53 in breast cancer biopsies of women resident in the metropolitan area of Rio de Janeiro. After the determination of samples with mutation, some of them were selected to investigate the behavior of different mutants in the formation of p53 aggregates in tumors using A11 and DO-1 antibodies, which recognizes pre-fibrillar oligomers and mutant or wild-type p53, respectively. So, we utilized a immunofluorescence co-localization assay using confocal microscope. TP53 mutations were detected in 19% of the breast cancer cases, with 88.2% of missense type. These mutations, in tumors classified as infiltrating ductal carcinoma (CDI), were associated with a later and aggressive stage of cancer, represented by Elstons Grade III (p< 0.0001). A relation was also observed between these mutations and p53 accumulation (p= 0.0184). Furthermore, a different pattern of p53 mutants for the tendency to aggregate was observed and we detected that the mutants R273H and P278A showed a greater aggregation. Thus, the mutant p53 aggregation observed in vivo and described in this study, seems to depend on the type of mutation found in breast cancer cases.

Comissão Nacional de Energia Nuclear / A Organização Mundial de Saúde (OMS) estima para 2030, 27 milhões de casos incidentes de câncer. No Brasil, segundo o Instituto Nacional do Câncer, foram estimados 518.510 casos novos de câncer para os anos de 2012 e 2013. Dessa estimativa, 52.680 correspondem ao câncer de mama (CM), com um risco estimado de 52 novos casos a cada 100.000 mulheres. O câncer de mama é um dos tipos de câncer mais comuns no mundo todo. Hoje se sabe que o tratamento para o CM pode levar ao surgimento de diferentes efeitos adversos tardios, entre eles a osteoporose. Uma das principais causas de surgimento da osteoporose é a menopausa precoce, que ocorre através da diminuição da concentração de estrogênio sérico. Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos na matriz óssea induzidos pela quimioterapia, simulando um tratamento para o CM, em ratas Wistar.Ratas Wistar, com aproximadamente 3 meses de idade, foram divididas em: grupo controle e grupo que recebeu quimioterapia com poliquimioterápico docetaxel + ciclofosfamida (TC). A quimioterapia foi administrada em 4 ciclos, com intervalo de 1 semana entre eles. Os ratos foram submetidos à eutanásia 5 meses após o término do tratamento, para que os efeitos tardios pudessem ser avaliados. Vários estudos foram conduzidos: dosagem sorológica de estradiol, ensaios histológicos através de imunohistoquímica, micro-fluorescência de Raios-X, micro-tomografia computadorizada. Além de microscopia eletrônica de transmissão e varredura.Analisando os resultados obtidos em conjunto, sugere-se que a etapa inicial para o desenvolvimento da osteoporose, causada pelo poliquimioterápico TC, seja a diminuição da função ovariana. Este evento leva à diminuição da concentração de estrogênio sérico, o que causa a atrofia uterina. Concomitante a estes fatos, o TC causa redução na concentração de zinco no tecido ósseo. Estes resultados associados causam um desequilíbrio na relação osteoblastos/osteoclastos no osso. A redução do estrogênio leva à diminuição da apoptose de osteoclastos, enquanto que a redução do zinco inibe a função dos osteoblastos. Este desequilíbrio interfere no turnover do osso, de forma a aumentar a reabsorção óssea. Deste modo, o percentual de osso fica reduzido, as trabéculas tornam-se mais finas e espaçadas. O endpoint deste processo é a osteoporose.A administração dos poliquimioterápicos docetaxel e ciclofosfamida em conjunto leva a diminuição da massa óssea, a adelgaçamento das trabéculas e o aumento do espaço entre elas. Estas observações sugerem que realmente as ratas tratadas com TC apresentam osteoporose. Concluímos que tanto o estrogênio quanto o zinco têm papel fundamental no desenvolvimento desta patologia após quimioterapia com TC. / The World Health Organization (WHO) estimates for 2030, 27 million incident cases of cancer. In Brazil, according to the National Cancer Institute, there were estimated 518,510 new cases of cancer for the years 2012 and 2013. From this estimation, 52,680 will correspond to breast cancer (BC), with an estimated risk of 52 new cases per 100,000 women. BC is one of the most common cancers worldwide. Today it is known that the treatment of the BC may lead to the emergence of different late adverse effects, including osteoporosis. One of the main causes of osteoporosis is the early menopause, which occurs with decreasing the serum estrogen concentration. This study aimed to evaluate the effects on bone matrix induced by chemotherapy , simulating a treatment for BC in Wistar rats .Wistar rats, approximately 3 months old, were divided into a control group and the group receiving polichemotherapy with docetaxel + cyclophosphamide (TC). Chemotherapy was administered in 4 cycles, with an interval of 1 week between them. The rats were euthanized 5 months after the end of treatment, so that the late effects could be evaluated. Several studies were performed: dosage of serum estradiol levels, histological tests by immunohistochemistry, micro X-ray fluorescence, micro-computed tomography and also transmission and scanning electron microscopy.Analyzing the results together, it is suggested that the initial step in the development of osteoporosis caused by multidrug TC is the reduction in the ovarian function. This event leads to decreased serum concentration of estrogen, which causes uterine atrophy. Concomitant to these facts, the TC causes a reduction in the concentration of zinc in the bone tissue. These results associated cause an imbalance in the osteoblast/osteoclast ratio in the bone tissue. The reduction in estrogen leads to decreased apoptosis of osteoclasts, while the reduction of zinc inhibits osteoblast function. This imbalance affects the bone turnover in order to increase bone resorption. Thus, the percentage of bone is reduced, and the trabeculae become thinner and spaced. The endpoint of this process is osteoporosis.The administration of docetaxel and cyclophosphamide together leads to decreased bone mass in the trabecular, thinning and increasing the space between them. These observations suggest that the rats treated with TC developed osteoporosis. We conclude that both the estrogen and the zinc play a fundamental role in the development of this disease after chemotherapy with TC.