Orientador: Maria Jaqueline Mamprim / Banca: Luiz Carlos Vulcano / Banca: Giorgia Bignardi Janetta / Resumo: A perfusão total hepática e suas contribuições relativas, pelo sistema portal e pela artéria hepática, podem estar alteradas por vários processos hepáticos, como doença hepato-celular difusa, neoplasias e shunts intra-hepáticos. O estudo do comportamento do fluxo sangüíneo nos vasos do fígado por meio da ultra-sonografia Doppler, mostrou-se um método de grande auxílio, principalmente na avaliação da hemodinâmica portal. Tal avaliação é feita pela mensuração da área, velocidade média, volume de fluxo sangüíneo e pelo índice de congestão portal. Este estudo teve como objetivos mensurar os diâmetros e as áreas da veia porta, da veia cava caudal e da aorta abdominal, e efetuar a avaliação dopplerfluxométrica da veia porta de cães hígidos divididos em três grupos conforme o peso corporal, (Grupo A: 10kg; Grupo B: de 10,1 a 20,0kg; Grupo C: 20,1kg), e avaliar se estas variáveis são influenciadas pelo peso do animal. Os diâmetros e as áreas da veia porta, da veia cava caudal e aorta abdominal foram significativamente menores para os cães do Grupo A em relação aos demais grupos e, os cães dos Grupos B e C tiveram resultados semelhantes entre si. Na dopplerfluxometria da veia porta, a velocidade média de fluxo foi semelhante para os três grupos avaliados, não variando com o peso do animal. O volume de fluxo e o índice de congestão portal foram respectivamente maior e menor para o Grupo A em relação aos demais, os quais obtiveram resultados semelhantes entre si. / Abstract: Total hepatic perfusion through the portal system and hepatic artery, as well as its respective average contributions, can be affected by several hepatic processes such as diffuse liver disease, neoplasm and intrahepatic shunt. Blood flow exams of liver vessels using Doppler ultrasonography has been a viable non-invasive diagnostic method helpful in portal hemodynamic evaluation. Portal hemodynamics is assessed by measuring the area, mean velocity, flow volume and congestion index of the portal vein. The aims of this study were to measure the diameter and area of portal vein, caudal vena cava and abdominal aorta; to analyze, through Doppler flowmetry, the portal vein of healthy dogs, which were divided into three groups according to body weight (Group A: 10 kg; Group B: 10.1-20.0 kg; Group C: 20.1 kg); and to assess whether these data are influenced by the animal weight. The diameter and area of the evaluated vessels were significantly larger in Group A, relative to the other groups, and similar between Groups B and C. The mean velocity of portal vein flow was similar among groups and did not vary with the animal weight. Group A had greater flow volume and lower congestion index of portal system, relative to the other groups, which had similar results. / Mestre

Orientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Paulo Eduardo Brandão / Banca: Alexandre Secorum Borges / Resumo: A cinomose e a parvovirose canina são duas enfermidades infecto-contagiosas de grande importância para a clínica de pequenos animais onde a PCR vem sendo aplicada com ótimos resultados no diagnóstico. No entanto, para o sucesso da técnica, é necessário que o ácido nucléico esteja o mais puro possível e livre de inibidores das polimerases (Transcriptase reversa e/ou Taq DNA polimerase), desejando-se um método de extração simples e rápido. O teste de coaglutinação utilizando o Staphylococcus aureus (COA) é baseado na propriedade da proteína A de se ligar especificamente à porção Fc da imunoglobulina G de alguns mamíferos e algumas subclasses de IgG de camundongos. Assim, neste trabalho utilizou-se a coglutinação para obtenção de DNA ou RNA livres de inibidores, com capacidade de concentração de partículas virais dispersas nas amostras biológicas e de forma simples, rápida e de baixo custo. Para tanto, 10 amostras de fezes positivas para o vírus da parvovirose canina e 17 amostras de urina positivas para o vírus da cinomose foram submetidas à extração de ácidos nucléicos utilizando o COA e kits comerciais para posteriormente serem analisadas pela PCR em tempo real e PCR convencional respectivamente. As amostras de fezes foram diluídas de 1: 10 a 1: 100 000 e as amostras de urina foram utilizadas puras. A metodologia desenvolvida foi eficiente na extração dos dois tipos de amostra. O método proposto demonstrou ser confiável e de baixo custo para a preparação de DNA e RNA viral para o diagnóstico molecular. / Abstract: PCR presents excellent results for the diagnosis of canine distemper and canine parvoviruses, two important infectious and contagious diseases for small animal internal medicine. However, success of technique depends on nucleic acid samples free of polymerase inhibitors (Reverse Transcriptase and / or Taq DNA polymerase). The coagglutination test using Staphylococcus aureus (COA) is based on the property of specific binding of protein A to the Fc portion of immunoglobulin G of some mammals and some of IgG subclasses of mice. This work was carried out the coagglutination procedure to obtain nucleic acid inhibitors free, with capacity for viral particle concentration dispersed in biological samples, simply, quickly and low cost. For this purpose, 10 canine parvovirus positive stool samples and 17 canine distemper virus positive urine samples were submitted to the preparation of nucleic acids using the COA and commercial kits in order to be analyzed by real-time PCR or conventional PCR respectively. Fecal specimens were diluted from 1: 10 to 1: 100 000 and urine samples were used pure. The developed methodology was efficient in extracting the two types of sample. The method proposed demonstrated to be reliable and cheap to prepare viral DNA or RNA for molecular diagnosis. / Mestre

Orientador: Regina Kiomi Takahira / Banca: Patrícia Mendes Pereira / Banca: Elenice Deffune / Resumo: A expressão de antígenos eritrocitários do sistema ABO em plaquetas humanas pode causar baixo incremento plaquetário pós-transfusional e refratariedade no receptor. Na Medicina Veterinária, o antígeno eritrocitário canino (DEA) 1.1 causa as reações transfusionais hemolíticas mais importantes clinicamente, e se presente nas plaquetas caninas pode estar envolvido em reações imunológicas levando à baixa sobrevida das plaquetas transfundidas ou aloimunização do paciente receptor. O objetivo deste estudo foi investigar a presença do DEA 1.1 em plaquetas de cão. Para tanto, plaquetas de 110 cães DEA 1.1 positivos e 62 cães DEA 1.1 negativos foram incubadas com soro policlonal anti-DEA 1.1, e então com o anticorpo policlonal anti-IgG canina marcado com FITC, e posteriormente avaliadas pelo método de citometria de fluxo. As hemácias de todos os cães foram testadas da mesma forma, a fim de demonstrar a eficácia da técnica de citometria de fluxo para detecção deste antígeno. Além disso, todas as amostras foram tipadas para o DEA 1.1 pelo teste convencional da aglutinação em tubo, para confirmação dos resultados obtidos pela citometria de fluxo em hemácias. Os resultados demonstraram que o DEA 1.1 não está presente nas plaquetas caninas e que parece não haver a necessidade de transfusão de plaquetas compatíveis para este tipo sanguíneo em cães. Foi observado ainda, que a citometria de fluxo é um teste mais sensível e acurado para a tipagem sanguínea do DEA 1.1 do que o teste de aglutinação em tubo. / Abstract: The expression of erythrocyte antigens, from the ABO system, by human platelets can cause post-transfusional low platelet increment and refractoriness on the receptor. In Veterinary Medicine, the dog erythrocyte antigen (DEA) 1.1 causes the most clinically important hemolytic transfusion reactions, and if present on canine platelets may be the cause of immunologic platelet transfusion reactions, leading to short survival of the transfused platelets or alloimmunization of the recipient. The purpose of this study was to investigate the presence of the DEA 1.1 antigen in canine platelets. For that, platelets from 110 DEA 1.1 positive dogs and 62 DEA 1.1 negative dogs were incubated with anti-DEA 1.1 polyclonal sera, and then with anti-canine IgG FITC-labeled polyclonal antibody, to be evaluated by flow cytometry. All canine erythrocytes were tested the same way, to demonstrate the efficacy of the flow cytometric technique to detect this antigen. Moreover, all samples were typed for DEA 1.1 by the gold-standard tube typing test, to confirm the results obtained to the red cells by flow cytometry. The results showed that the DEA 1.1 antigen is not present on canine platelets, and that it seems to not be necessary the transfusion of DEA 1.1 compatible platelets in dogs. Further observation also showed that the flow cytometric test is more sensitive and accurate than the tube typing test for the detection of DEA 1.1 antigen. / Mestre

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luis Ferreira / Banca: Marcia Dalastra Laurenti / Resumo: O presente estudo teve por objetivo correlacionar as alterações laboratoriais, histopatológicas e a presença de linfócitos T CD3+ e linfócitos B CD79+, com a presença de Leishmania sp no tecido renal de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral. Para tanto foi utilizado um grupo (G1) constituído por 24 animais com formas amastigotas de Leishmania sp. no tecido renal, e outro (G2) composto por 43 cães sem evidências imuno-histoquímicas da presença do parasito nos rins. A prevalência de doença renal na população estudada foi de 100% nos animais de G1 e 56,09% de G2. Todos os cães de G1 e 53,6% dos cães de G2 possuíam relação proteína/creatinina urinária (P/C U) maior que 0,5, evidenciando-se uma correlação positiva entre a ocorrência de proteinúria intensa e a presença de Leishmania sp. no tecido renal (p<0,001). Todos os cães de G1 e 88,4% dos cães de G2 apresentavam alterações glomerulares, sendo que a presença do parasito nos rins esteve correlacionada com uma maior prevalência e intensidade das lesões (p<0,001). Imunomarcações para linfócitos T CD3+ foram observadas em 100% dos cães do grupo 1 e 97,7% do grupo 2, havendo uma correlação entre a presença de formas amastigotas no tecido renal e a intensidade do infiltrado inflamatório (p<0,0005). Imunomarcações para linfócitos B CD79+ foram observadas em todos os cães do grupo 1 e em 55,8% do grupo 2 (p < 0,0001). Nos cães com parasitos no tecido renal observou-se uma maior intensidade do infiltrado de linfócitos B (p<0,0001). A presença de Leishmania sp, linfócitos T CD3+ e de linfócitos B CD79+ nos rins de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral confirmam a participação do parasita, da imunidade celular e da imunidade humoral na patogênese da lesão renal / Abstract: The aim of this study was to correlate the laboratory and histopathological changes and the presence of CD3+T and CD79+ B cells with the presence of Leishmania sp in the renal tissue of dogs naturally affected by visceral leishmaniasis. For this purpose two groups were used: G1 with 24 dogs with amastigotes of Leishmania sp. in the renal tissue, and G2 consisting of 43 dogs with no immunohistochemical evidence of the presence of the parasite in the kidneys. The prevalence of renal disease in the population studied was 100% in G1 and 56.1% in G2. All dogs from G1 and 53.6% of the dogs from G2 had urine protein/creatinine ratio (U/PC) > 0.5, demonstrating a positive correlation between the occurrence of severe proteinuria and the presence of Leishmania sp. in renal tissue (p <0.001). All dogs from G1 and 88.4% of the dogs from G2 had glomerular lesions, and the presence of the parasite in the kidney was correlated with a higher prevalence and intensity of the lesions (p <0.001). Immunostaining for CD3+ T cells were observed in 100% of the dogs from G1 and in 97.7% of G2. There was a correlation between the presence of amastigotes in renal tissue and the intensity of the inflammatory infiltrate (p <0.0005). Immunostaining for CD79+ B cells were observed in all dogs from G1 and in 55.8% of the dogs from G2 (p <0.0001). Dogs with parasites in the renal tissue presented a greater intensity of B cells infiltrate (p <0.0001). The presence of Leishmania sp, CD3+ T cells and CD79+ B cells in the kidney of dogs naturally affected by visceral leishmaniasis confirmed the participation of the parasite, cellular immunity and humoral immunity in the pathogenesis of renal injury / Mestre

Orientador: José Joaquim Titton Ranzani / Co-orientador: Adriana Camargo Ferrasi / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Rejane Maria Tommasini Grotto / Resumo: Introdução: A E-caderina é uma proteína transmembranosa, codificada pelo gene CDH1, que desempenha um papel importante na adesão intercelular de tecidos epiteliais. A perda da função ou expressão diminuída de E-caderina pode implicar em metástases e progressão do câncer. Nas neoplasias mamárias, metástases pulmonares ocorrem com maior frequência, porém as metástases oculares, especialmente na coroide, são relativamente comuns, mas pouco diagnosticadas clinicamente. Metodologia: Vinte e oito cadelas de diferentes raças, não-castradas, com idade superior a 5 anos, com diagnóstico de carcinoma mamário ao exame citopatológico, sem metástases pulmonares e/ou oculares, foram submetidas à mastectomia radical e ovariosalpingohisterectomia (OSH), sendo reavaliadas após três e seis meses de pós-operatório. O padrão de expressão relativa do gene CDH1 em tecidos tumorais e normais, foi avaliado pelo sistema TaqMan Universal PCR Master Mix; o padrão de metilação foi realizado utilizando-se a técnica de MSP-PCR; o sequenciamento do DNA, análise das mutações e polimorfismos foram realizados a partir do sangue periférico, utilizando-se a técnica de reação de terminação em cadeia pelo kit BigDye Terminator v.3 Cycle Sequencing. Análises imunohistoquímicas foram realizadas para avaliar a expressão da E-caderina. Resultados: Nenhuma das 28 cadelas estudadas apresentou metástase ocular ou pulmonar com três ou seis meses de pós-operatório. Em 57,1% dos casos uma menor expressão relativa do gene CDH1 foi identificada. Em 100% dos casos verificou-se o status metilado para o gene CDH1, reafirmando a hipótese de que células não-tumorais podem contribuir para estes resultados. Em 46,5% dos casos identificou-se expressão reduzida de E-caderina pela técnica de imunohistoquímica. Foram identificados 3 histotipos tumorais: carcinoma complexo, tubulopapilífero e carcinoma em tumor misto. Em 100% dos casos de carcinoma... / Abstract: Introduction: E-cadherin is a transmembrane protein, encoded by CDH1 gene, that has an important role in intercellular adhesion of epithelial tissues. Loss of function or decreased expression of E-cadherin may lead to cancer progression and metastasis. In mammary epithelial neoplasms, lung metastases occur more frequently, but the ocular metastasis, especially in the choroid, are relatively common but underdiagnosed clinically. Methods: Twenty-eight dogs of different breeds, non-castrated, older than five years, diagnosed with breast cancer by cytopathological examination, without pulmonary and/or ocular metastasis, have undergone to radical mastectomy and ovariosalpingohisterectomy (OSH), and re-evaluated after three and six months postoperatively. The pattern of relative expression of CDH1 gene in normal and tumor tissues was assessed by TaqMan Universal PCR Master Mix system; the pattern of methylation was performed using MSP-PCR; DNA sequencing analysis of mutations and polymorphisms were performed from peripheral blood using the termination chain reaction technique with BigDye Terminator v.3 Cycle Sequencing kit. Immunohistochemical analyzes were performed to evaluate the expression of E-cadherin. Results: None of the 28 dogs studied had ocular or pulmonary metastasis with 3 or 6 months postoperatively. In 57,1% of cases a decreased relative expression of CDH1 gene was identified. In 100% of cases there was methylated status for the CDH1 gene, confirming the hypothesis that non-tumor cells can contribute to these results. In 46,5% of the cases reduced E-cadherin expression by immunohistochemistry was identified. Three tumor histotypes were identified: complex carcinoma, tubulopapillary, and carcinoma in mixed tumor. In 100% of cases of tubulopapillary carcinoma was identified a reduced gene expression of CDH1 by both qPCR and by immunohistochemistry. The sequencing of the gene, 6 animals (21,4%) had silent mutations in exons 3, 7 ... / Mestre

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Hiro Goto / Banca: Carlos Magno F. / Resumo: As leishmanioses são um grupo de doenças parasitárias estendidas a nível mundial e representam uma grande variedade de manifestações clínicas que vão desde leishmaniose visceral que é a forma mais grave da doença e com letalidade próxima aos 100% sem tratamento, e a leishmaniose cutânea que é de evolução usualmente benigna. As diferentes formas clínicas dependem da espécie de Leishmania que produz a doença e da resposta imune que estabelece cada hospedeiro. A lectina ligante de manose (MBL), é uma proteína que potencialmente desempenha um papel na infecção podendo levar a doença, já que ela é capaz de facilitar a infecção, promovendo a fagocitose desses parasitos intracelulares. Mutações no exon 1 e no promotor do gene da MBL humana resultam em níveis séricos baixos da proteína, o que pode proteger contra o desenvolvimento da doença. O presente estudo avaliou o papel da MBL em cães infectados com leishmaniose visceral (LVC), no Brasil, na população de Teresina - PI. (cidade endêmica para leishmaniose visceral). A procura de polimorfismos foi realizada na região promotora do gene que codifica a mbl canina, (mbl A). O DNA usado foi extraído de amostras de medula óssea de cães infectados provenientes da região. Foram encontradas apenas duas mutações do tipo SNPs na região promotora do gene da MBL. Os nossos resultados sugerem que a sequência do promotor de cães com a doença são bastante estáveis podendo ser usados como base numa possível comparação com cães sadios. Essas informações, juntamente com dados dos níveis séricos no plasma sanguíneo podem revelar a correlação entre a Leishmaniose visceral e a MBL / Abstract: Leishmaniasis is a group of parasitic diseases extended worldwide and represent a wide variety of clinical manifestations ranging from visceral leishmaniasis - the most severe form of the disease with mortality close to 100 % without treatment , and cutaneous leishmaniasis which evolution is usually benign . The different clinical forms depend on the kind of Leishmania which produces the disease and the immune response that establishes each host. The mannose binding lectin (MBL) is a protein that plays a potential role on how the infection may lead to disease, because it is capable of facilitating infection by promoting phagocytosis of these intracellular parasites . Mutations in exon 1 and the promoter of the gene for human MBL result in low serum levels of the protein, which can protect against the development of disease. The present study evaluated the role of MBL in dogs infected with visceral leishmaniasis ( VL), in Brazil, in the population of Teresina - PI . (city with visceral leishmaniasis endemic) . It was looked for polymorphisms in the promoter region of the MBL gene encoding the canine (MBL A). The DNA used was extracted from bone marrow samples from dogs infected from that region. We found only two mutations for SNPs in the promoter region of the MBL gene . Our results suggest that the promoter sequence of dogs with the disease are very stable and can be used as the basis of comparison with healthy dogs . This information, together with data of serum blood plasma can reveal the correlation between the Leishmaniasis visceral and MBL / Mestre

Orientador: Alexandre Secorun Borges / Banca: Luiz Antonio de Lima Rezende / Banca: Silvia Mitiko Nishida / Resumo: Potencial evocado auditivo de tronco encefálico (Brainstem Auditory Evoked Potential - BAEP) é teste eletrodiagnóstico que capta e registra as atividades elétricas do sistema auditivo, desde a cóclea até o tronco encefálico. Os objetivos desta dissertação foram: 1) padronizar o BAEP em cães sem raça definida e em cães das raças Dálmata e Boxer; 2) avaliar da influência da idade no BAEP de cães sem raça definida em Boxer; 3) estudar a ocorrência de surdez em cães sem raça definida e em cães das raças Dálmata e Boxer. BAEP foi obtido de 30 Dálmatas, 43 Boxers e 34 cães em raça definida. As médias das latências das ondas obtidas foram semelhantes a outros estudos. Os cães da raça Boxer e os sem raça definida foram divididos em dois grupos de diferentes faixas etárias: de 1 a 8 anos (grupo 1) e acima de 8 anos (grupo 2). As médias das latências das ondas I, III e V foram maiores nos Boxers do grupo 2. Para os cães em raça definida, as latências V, III-V e I-V foram maiores no grupo com idade acima de 8 anos. Surdez foi observada em 20% dos Dálmatas (16,7% unilateral e 3,3% bilateral) e em 6,98% dos Boxers (2,33% unilateral e 4,65% bilateral). Também foi relatado o uso do BAEP para diagnosticar provável surdez em 2 cães sem raça definida. Foi observado que a surdez em Boxers e Dálmatas, provavelmente, está relacionada com a pigmentação do pelame e da íris. Foi possível concluir que o BAEP é um exame útil e seguro para identificação de cães com surdez e que a idade deve ser considerada na interpretação do exame / Abstract: The brain stem auditory-evoked potential (BAEP) is an electrodiagnostic test that detects and records the electrical activity in the auditory system from cochlea to the brainstem. The aims of this study were: 1) obtain normative data of BAEP from mixed breed dogs, Dalmatians, and Boxer dogs; 2) evaluate age influence on BAEP obtained from mixed breed dogs and Boxer dogs; 3) study the occurrence of deafness in mixed breed dogs, Dalmatians and Boxer dogs. BAEP was obtained from 30 Dalmatians, 43 Boxers, and 34 mixed breed dogs. The mean latency of waves were similar to others studies. The Boxer and mixed breed dogs were divided in 2 groups of different ages: 1-8 years (group 1) and more than 8 years (group 2). The mean latency for I, III, and V waves were increased in Boxers of group 2. For the mixed breed dogs, the V, III-V and I-V latencies were increased in the group with more than 8 years old. Deafness was observed in 20% of the Dalmatians (16.7% unilateral, and 3.3% bilateral), and in 6.98% of the Boxers (2.33% unilateral, and 4.65% bilateral). It was also reported the use of BAEP to diagnose bilateral deafness in two mixed breed dogs. It was observed that deafness in Boxers and Dalmatians dogs is probably related to the skin and eye pigmentation. It was concluded that the BAEP is a useful and safe test to identify dogs with deafness, age should be considered when interpreting the test / Mestre

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:54:43Z : No. of bitstreams: 1 000858239.pdf: 1069135 bytes, checksum: cd8c808bc197da8ee3c265e8f3ff186a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A E-caderina é uma proteína transmembranosa, codificada pelo gene CDH1, que desempenha um papel importante na adesão intercelular de tecidos epiteliais. A perda da função ou expressão diminuída de E-caderina pode implicar em metástases e progressão do câncer. Nas neoplasias mamárias, metástases pulmonares ocorrem com maior frequência, porém as metástases oculares, especialmente na coroide, são relativamente comuns, mas pouco diagnosticadas clinicamente. Metodologia: Vinte e oito cadelas de diferentes raças, não-castradas, com idade superior a 5 anos, com diagnóstico de carcinoma mamário ao exame citopatológico, sem metástases pulmonares e/ou oculares, foram submetidas à mastectomia radical e ovariosalpingohisterectomia (OSH), sendo reavaliadas após três e seis meses de pós-operatório. O padrão de expressão relativa do gene CDH1 em tecidos tumorais e normais, foi avaliado pelo sistema TaqMan Universal PCR Master Mix; o padrão de metilação foi realizado utilizando-se a técnica de MSP-PCR; o sequenciamento do DNA, análise das mutações e polimorfismos foram realizados a partir do sangue periférico, utilizando-se a técnica de reação de terminação em cadeia pelo kit BigDye Terminator v.3 Cycle Sequencing. Análises imunohistoquímicas foram realizadas para avaliar a expressão da E-caderina. Resultados: Nenhuma das 28 cadelas estudadas apresentou metástase ocular ou pulmonar com três ou seis meses de pós-operatório. Em 57,1% dos casos uma menor expressão relativa do gene CDH1 foi identificada. Em 100% dos casos verificou-se o status metilado para o gene CDH1, reafirmando a hipótese de que células não-tumorais podem contribuir para estes resultados. Em 46,5% dos casos identificou-se expressão reduzida de E-caderina pela técnica de imunohistoquímica. Foram identificados 3 histotipos tumorais: carcinoma complexo, tubulopapilífero e carcinoma em tumor misto. Em 100% dos casos de carcinoma... / Introduction: E-cadherin is a transmembrane protein, encoded by CDH1 gene, that has an important role in intercellular adhesion of epithelial tissues. Loss of function or decreased expression of E-cadherin may lead to cancer progression and metastasis. In mammary epithelial neoplasms, lung metastases occur more frequently, but the ocular metastasis, especially in the choroid, are relatively common but underdiagnosed clinically. Methods: Twenty-eight dogs of different breeds, non-castrated, older than five years, diagnosed with breast cancer by cytopathological examination, without pulmonary and/or ocular metastasis, have undergone to radical mastectomy and ovariosalpingohisterectomy (OSH), and re-evaluated after three and six months postoperatively. The pattern of relative expression of CDH1 gene in normal and tumor tissues was assessed by TaqMan Universal PCR Master Mix system; the pattern of methylation was performed using MSP-PCR; DNA sequencing analysis of mutations and polymorphisms were performed from peripheral blood using the termination chain reaction technique with BigDye Terminator v.3 Cycle Sequencing kit. Immunohistochemical analyzes were performed to evaluate the expression of E-cadherin. Results: None of the 28 dogs studied had ocular or pulmonary metastasis with 3 or 6 months postoperatively. In 57,1% of cases a decreased relative expression of CDH1 gene was identified. In 100% of cases there was methylated status for the CDH1 gene, confirming the hypothesis that non-tumor cells can contribute to these results. In 46,5% of the cases reduced E-cadherin expression by immunohistochemistry was identified. Three tumor histotypes were identified: complex carcinoma, tubulopapillary, and carcinoma in mixed tumor. In 100% of cases of tubulopapillary carcinoma was identified a reduced gene expression of CDH1 by both qPCR and by immunohistochemistry. The sequencing of the gene, 6 animals (21,4%) had silent mutations in exons 3, 7 ...

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Daniela Gomes da Silva / Resumo: A erliquiose canina é uma das hemoparasitoses mais frequentes entre os cães domésticos e apresenta alta prevalência nas regiões de clima tropical. Apesar das inúmeras investigações e avanços na compreensão da patogênese e diagnóstico da referida doença, pouco se sabe a respeito das alterações glomérulo-tubulares de cães acometidos por erliquiose. No presente estudo objetivou-se associar o perfil eletroforético das proteínas sanguíneas e urinárias com as possíveis alterações glomérulo-tubulares encontradas em cães com erliquiose na fase aguda. O Grupo Controle (GC) foi integrado por 18 cães saudáveis e o Grupo Doente (GD), por 24 animais. Ambos de qualquer gênero, raça e idade. O protocolo experimental incluiu avaliação das condições clínicas de cães sadios e daqueles acometidos pela doença, neste último caso com base nos sinais clínicos e presença de mórula em esfregaços sanguíneos de ponta de orelha. Dos animais controle e daqueles enfermos, foram obtidas amostras de sangue periférico e urina para análises eletroforéticas das proteínas pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram selecionadas 11 frações proteicas no traçado densitométrico dos soros sanguíneos, cujos pesos moleculares variaram entre 23 e 139 kDa (kilodáltons). Os resultados mostraram que algumas proteínas séricas de fase aguda se alteram nos cães com erliquiose na fase aguda. Observou-se diferença significativa entre os grupos estudados na concentração sérica de transferrina, haptoglobina, IgG (cadeia leve) e albumina, sendo que somente esta última apresentou níveis inferiores no Grupo Doente. A análise eletroforética da urina exibiu um número superior de frações proteicas excretadas pelos cães com erliquiose na fase aguda (295), quando comparados àqueles encontrados nos cães do GC (174). Foram encontradas proteínas de alto (>60 kDa) e baixo... / Abstract: Canine ehrlichiosis is one of the most frequent haemoparasitosis between domestic dogs and has high prevalence in tropical regions. Despite the innumerous investigations and progresses in the pathogenesis comprehension and diagnosis of the disease, little is known on the glomerulo-tubular alterations of dogs stricken by ehrlichiosis. The aim of this study was to associate the electrophoretic profile of blood and urinary proteins with the possible glomerulo-tubular alterations found in dogs with acute-phase ehrlichiosis. The Control Group (CG) was formed by 18 healthy dogs and the Sick Group (SG), by 24 animals, both groups with unspecified genders, races and ages. The experimental protocol included assessment of the dogs' clinical conditions, and regarding the sick ones, based on the clinical signs and the presence of morula in the ear-tip blood smears. From the animals of both groups, peripheral blood and urine samples were obtained for protein electrophoretical analysis through the polyacrylamide gel with dodecyl sodium sulfate (SDS-PAGE) electrophoresis technique. Eleven protein fractions were selected in the blood sera densitometry trace, with molecular weights ranging from 23 to 123 kDa (kilodaltons). The results showed that some acute-phase proteins change in dogs with acute-phase ehrlichiosis. Significant difference between the studied groups was observed in serum concentrations of transferrin, haptoglobin, IgG (light chain) and albumin, the latter with lower levels in the Sick Group. The electophoretical analysis of urine showed a larger number of protein fractions excreted by dogs with acute-phase ehrlichiosis (295), when in comparison with the ones in the CG (174). High (>60 kDa) and low (<60 kDa) molecular weight proteins were found in the sick dogs' urine, suggesting that the disease in its acute phase causes lesions in both glomeruli and tubules, respectively / Mestre

Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Coorientador: Suely Mogami Bomfim / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Bárbara Cristina Mazzucatto / Resumo: A avaliação da medula óssea e das células do sangue em cães com leishmaniose visceral (LV) pode proporcionar valiosas informações, tanto quantitativas quanto qualitativas, relativas à hematopoiese. Os objetivos deste estudo foram avaliar a medula óssea de cães com LV, por meio de exame citológico, histopatológico e imuno-histoquímico (IHC), avaliando-se a carga parasitária, a quantidade de linfócitos e macrófagos, além de células expressando MHC de classe II, IFN-, IL-10, TNF-α e TGF-β, bem como sua repercussão nas células do sangue. Para tanto, foram utilizados 60 cães, sendo 54 infectados e seis animais não infectados. Os cães infectados apresentaram anemia normocítica normocrômica, porém sem alterações na linhagem eritroide da medula óssea, além de displasia granulocítica, megacariocítica e granulomas na medula óssea. A linfocitose observada na medula óssea se refletiu no sangue. No exame citológico, observou-se grande infiltração de macrófagos, linfócitos e plasmócitos nos animais infectados. Quanto à IHC, os cães infectados apresentaram grande quantidade de células imunomarcadas para TNF-α, IL-10, IFN-,TGF-β e macrófagos / Abstract: The evaluation of the bone marrow and blood cells in dogs with visceral leishmaniasis (VL) can provide valuable information, both quantitative and qualitative, on the hematopoiesis. The objectives of this study were to evaluate the bone marrow of dogs with VL through cytological, histopathological and immunohistochemical (IHC) examination, evaluating the parasitic load, the amount of lymphocytes and macrophages and by cells expressing MHC class II, IFN-, IL-10, TNF-α and TGF-β, as well as its effect on blood cells. To this end, 60 dogs, 54 infected and six uninfected animals were used. Infected dogs showed normochromic normocytic anemia, but without any changes in the erythroid lineage bone marrow, and dysplasia granulocytic, megakaryocytic and granulomas in the bone marrow. The lymphocytosis in the bone marrow was reflected in the blood. On cytological examination, there was extensive infiltration of macrophages, lymphocytes and plasma cells in infected animals. As for IHC, infected dogs showed large amount of immunostained cells to TGF-β, TNF-α, IL-10, IFN- and macrophages / Doutor