Orientador: Eliana Aparecida de Rezende Duek / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbantini_SamuelHilsdorf_M.pdf: 6943017 bytes, checksum: 2a40914a0c808cd4402a491e9b061ac5 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A utilização de polímeros bioreabsorvíveis como suporte para cultura de células tem se destacado como alternativa para tratamento de lesões e perda de tecidos. O objetivo deste trabalho foi obter, caracterizar e avaliar a degradação in vitro de estruturas densas e porosas de poli(L-ácido lático) (PLLA) e poli(D,L-ácido lático-co-ácido glicólico) (PLGA)(50:50), preparadas pelo método da evaporação do solvente. Posteriormente os materiais foram utilizados como suporte para cultura de osteoblastos. Pelos resultados obtidos, as amostras de PLGA apresentaram degradação mais acentuada em relação às de PLLA. A comparação entre as estruturas densas e porosas confIrmam o efeito autocatalítico dos poli(a-hidróxi ácidos), no qual a degradação é mais acentuada nas estruturas densas devido à concentração dos produtos ácidos no interior do material. A morfologia das amostras de PLLA mostraram-se sem alterações em função do tempo de 8 semanas de degradação, sugerindo que podem ser utilizadas como suporte estrutural durante o período estudado. As amostras de PLGA alteraram signifIcativamente sua morfologia interna e de superfície, sendo as estruturas densas e porosas, morfologicamente semelhantes após 8 semanas de degradação in vitro. Os dados da cultura de células osteoblásticas mostrou baixa adesão celular para as amostras de PLLA e alta para as amostras de PLGA. O estudo da morfologia celular sobre a superfície dos materiais mostrou densidade e morfologia superior em membranas densas de PLLA. A seleção dos materiais para a Engenharia de Tecidos é dependente da aplicação, assim, como as estruturas de PLGA degradam rapidamente e permitem a adesão celular, podem ser indicadas para aplicações onde as lesões de tecido ósseo são pequenas, enquanto as estruturas de PLLA poderiam ser indicadas nos casos em que a lesão exigisse um material que degrade em um tempo longo, e servindo como suporte físico para as células e mecânico para o tecido / Abstract: The use of bioresorbable polymers as a support for the culture of cells in polymers has received special attention as an alternative for the treatment of lesions and the loss of tissue. The aim of this work was to obtain, to characterize and to evaluate the degradation in vitro of dense and porous structures of lactic poli(L-acid) (PLLA) and poli(D,L-acid lactic-co-acid glicólico) (PLGA)(50:50), prepared by casting process, for the later use as a support for the osteoblasts culture. The results showed that samples of PLGA presented a more accentuated degradation in relation to the one of PLLA. Comparing dense and porous structures, it was verified the auto catalytic effects of poly(a-hydroxy acids), in which the degradation is more accentuated in the dense structures due to the concentration of the acid products inside the material. The morphology of the samples of PLLA did not show any changes in function of the degradation time of 8 weeks, suggesting that the structures can be used as structural support during the studied period. On the other hand, samples of PLGA changed significantly its internal and surface morphology, being morphologically similar afier 8 weeks of in vitro degradation. Data of osteoblasts culture showed low cellular adhesion for the samples of PLLA and high for the samples of PLGA. The study of the morphology on the surface of the materiaIs showed high density and morphology in PLLA dense membranes. The selection of the materiaIs for the Tissue Engineering is dependent of the application. Due to a faster degradation of the PLGA structures as compared to PLLA, allowing the cellular adhesion, it can be indicated for applications where the lesions of bone tissue is small. While the structures of PLLA could be suitable in the cases where the lesion demanded a material to degrade in a long time serving as physical support for the cells and mechanical support for the tissue / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-23T00:05:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Basso_FernandaGoncalves_D.pdf: 8499661 bytes, checksum: 9dfc3430a1139624dd55e0ba12f9fe40 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Estudos recentes têm demonstrado que a etiopatogenia da osteonecrose induzida por bisfosfonatos parece estar associada, pelo menos em parte, à citotoxicidade destes medicamentos às células ósseas e dos tecidos adjacentes. O tratamento da osteonecrose com antibióticos sistêmicos e tópicos, bem como com o tratamento cirúrgico, têm sido os mais indicados, sendo que alguns trabalhos clínicos apresentaram a laserterapia de baixa intensidade (LBI) como tratamento coadjuvante para esta alteração. Porém, os efeitos da LBI sobre as células envolvidas na etiopatogenia da osteonecrose ainda não foram demonstrados. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito in vitro de um bisfosfonato nitrogenado de alta potência - Ácido Zoledrônico (AZ) - sobre células dos tecidos ósseo, conjuntivo e epitelial, e avaliar o efeito da LBI sobre estas células pré-expostas ao AZ. Foram utilizadas três linhagens celulares humanas: células epiteliais (HaCaT), fibroblastos de gengiva (HGF) e osteoblastos (SaOs-2). As células foram cultivadas em meio de cultura (DMEM) contendo 10% de soro fetal bovino (SFB), por 48 horas. A seguir, este DMEM foi substituído por meio sem SFB por 24 horas, seguido da aplicação de AZ, na concentração de 5 ?M, por 48 horas. Após este período, o DMEM contendo AZ foi aspirado e um novo meio de cultura completo (10% SFB) foi adicionado. As células foram então submetidas à irradiação com LBI, utilizando o protótipo LaserTABLE (InGaAsP - 780 nm +-3 nm, 25 mW), nas doses de 0,5; 1,5; 3; 5 e 7 J/cm2. Foram realizadas 3 irradiações a cada 24 horas. Decorrido 24 horas da última irradiação, procedeu-se a avaliação da viabilidade celular, produção de proteína total, atividade de fosfatase alcalina, formação de nódulos de mineralização, expressão gênica de colágeno tipo I (Col-I), fator de crescimento fibroblástico tipo 2 (FGF2), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e fosfatase alcalina (ALP), além da análise da morfologia celular em MEV. Os dados foram submetidos à avaliação de normalidade, e analisados estatisticamente, utilizando os testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, considerando o nível de significância de 5%. O AZ causou redução significativa da viabilidade celular, produção de proteína total e expressão de Col-I e VEGF para todas as linhagens celulares avaliadas (p<0,05), assim como alterações morfológicas significativas. A expressão e atividade de ALP e a formação de nódulos de mineralização pelos osteoblastos também foi negativamente afetada (p<0,05). A LBI produziu efeitos diversos, de acordo com cada linhagem celular. Considerando as linhagens celulares isoladamente, as melhores doses foram de 5 e 7 J/cm2; 3 J/cm2, e 0,5 J/cm2, para as células epiteliais, fibroblastos e osteoblastos, respectivamente. Associada ao AZ, para as células epiteliais, a dose de 5 J/cm2 promoveu os melhores efeitos, enquanto para os fibroblastos de gengiva e osteoblastos, as melhores doses foram de 3 J/cm2 e 0,5 J/cm2, respectivamente. Estes resultados demonstram que a LBI pode promover estimulação das células da mucosa oral e tecido ósseo tratadas com AZ, assim como das células presentes em áreas adjacentes, o que poderia promover um aumento da capacidade de reparo destes tecidos / Abstract: Recent studies have demonstrated that the etiopathogenesis of bisphosphonates-induced osteonecrosis may be related, at least in part, to the cytotoxicity of these drugs on bone and oral mucosa cells. Systemic and topic antibiotic administration as well as surgical procedures have been used to treat osteonecrosis. Additionally, many clinical studies have proposed low-level laser therapy (LLLT) as an adjuvante treatment for this pathological condition. However, the effects of LLLT on bisphosphonate-treated cells have not been elucidated. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of a potent nitrogen-containing bisphosphonate - Zoledronic Acid (ZA) - on cultured bone, fibroblast and epithelial cells, as well as to assess the effects of LLLT applied on these cells previously exposed to ZA. Three human cell lines were used: epitelial cells (HaCaT), gingival fibroblastos (HGF) and osteoblasts (SaOs-2). Cells were seeded in culture medium (DMEM) containing 10% of fetal bovine sérum (FBS) for 48 hours. After that, the culture medium was replaced by FBS-free DMEM, followed by addition of ZA at 5 ?M, for additional 48 hours. After this period, a new DMEM was added (10% FBS). The cells were subjected to LLLT using a laser diode prototype LaserTABLE (InGaAsP - 780 nm +-3 nm, 25 mW), at 0.5; 1.5; 3; 5 and 7 J/cm2. Cells were irradiated for 3 times, every 24 hours. Twentyfour hours after the last irradiation, cell viability, total protein production, alcaline phophatase activity, mineral nodule formation, gene expression of collagen type I (Col-I), fibroblastic growth factor type 2 (FGF2), vascular endotelial growth factor (VEGF) and alcaline phosphatase (ALP), and also cell morphology (SEM) were evaluated. Data were subjected to normality evaluation and statisticaly analyzed using Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests at 5% of significance level. ZA caused a significant decrease on cell viability, total protein production, gene expression of Col-I and VEGF for all cell lines (p<0.05), as well as intense cell morphological changes. Gene expression and activity and mineral nodule formation by osteoblasts were also negatively affected by ZA (p<0.05). LLLT promoted diverse effects, according to cell type. Considering cell lines in an isolated way, 5 and 7 J/cm2; 3 J/cm2; and 0.5 J/cm2 promoted the best results for epitelial cells, gingival fibroblastos and osteoblasts, respectively. Regarding the LLLT applied to epitelial cells pre-treated with ZA, 5 J/cm2 promoted the most significant effects. For gingival fibroblasts and osteoblasts, the most relevant results were obtained at 3 J/cm2 and 0.5 J/cm2, respectively. These data show that LLLT can promote biostimulation on bone ZA-treated cells as well as on fibroblasts and epithelial adjacent cells, what could improve local tissue repair / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

Orientadores: Angela Maria Moraes, Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-02T21:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Galesi_AdrianaLagesLima_M.pdf: 3002198 bytes, checksum: 43f36f277091d77b215ac58948a451ef (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As interleucinas são moléculas da família das citocinas que apresentam atividade modificadora da resposta biológica. Dentre os diferentes tipos de interleucinas já caracterizadas está a interleucina-2 (IL-2), que tem um papel importante na restauração da função imunológica, sendo utilizada no tratamento de alguns tipos de câncer e de doenças infecciosas. Neste trabalho, realizou-se um estudo da composição de um meio de cultura que conduzisse a um aumento da produção de IL-2 por linfoblastos murinos linhagem EL-4. Para isso, foram avaliados os efeitos das concentrações de glutamina e dos indutores de formação de IL-2 forbol-12-miristato-13-acetato (PMA) e concanavalina A (Com A), dos percentuais de Pluronic F68 e soro fetal bovino (SFB) e da concentração de inóculo celular sobre a produção de IL-2 e o crescimento das células EL-4. Para a avaliação dos efeitos destas variáveis utilizou-se a metodologia de planejamento experimental. Os ensaios foram realizados primeiramente de maneira estática, em placas de cultura, e, após a obtenção da formulação do meio de cultura mais adequada, realizaram-se ensaios cinéticos, em maior escala, em frascos do tipo spinner. Nos estudos realizados utilizando-se a metodologia do planejamento experimental, verificou-se que a concentração de IL-2 mostrou uma tendência de aumento com a elevação da concentração de PMA, enquanto a viabilidade celular diminuiu com a presença de soro fetal bovino... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Interleukins are molecules from the group of the cytokines that are capable of changing the biological response. Interleukin-2 is among the different types of already characterized interleukins and has an important role in immunological function restoration, being used in the treatment of some types of cancer and infectious diseases. In this work, a study of the composition of a culture medium was performed, aiming at increasing the productivity of IL-2 by suspended EL-4 cells. For that, the effects of glutamine concentration (carbon and nitrogen source),phorbol-12-myristate-13-acetate and concanavalin A concentrations (IL-2 production stimulants), Pluronic F68 percentage (a cell-protecting additive against shear damage), fetal calf serum percentage, and cell concentration on IL-2 production and cell growth were evaluated, using the experimental design strategy. The experiments were initially performed statically, in cell culture plates, and, after the most adequate culture medium composition was determined, kinetic experiments were carried out in larger scale, in spinner flasks. In the studies employing the experimental design strategy, IL-2 concentration increased with an increment in PMA concentration, and cell viability decreased increasing fetal calf serum percentage. In the experiments in which the effect of concanavalin A in association with PMA over IL-2 production was studied, it was observed that these stimulants did not have synergetic effect and that the induction capacity of Con A was less than that of PMA... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Celso Paulino da Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-24T18:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sell_AnaMaria_D.pdf: 4573369 bytes, checksum: eff56f0e1c1edf4f93c78fc69d3c4acc (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A reparação é caracterizada por diversos eventos celulares e humorais que ocorrem de forma integrada. As lectinas são glicoproteínas com diversas atividades biológicas, tais como a ativação de células inflamatórias e a secreção de citocinas ''I' que ativam fibroblastos, as quais podem influenciar o reparo. Este trabalho teve como objetivo avaliar a influência das lectinas PHA, WGA e jacalina na reparação tecidual. As respostas inflamatórias in vivo e a influência das lectinas sobre a proliferação de fibroblastos in vitro, também foram avaliadas. Para avaliar a reparação, 300 J.1g1mL de cada lectina foram aplicados sobre as feridas provocadas no dorso de ratos Wistar, com punch de biópsia de 8 milímetros. A retração das feridas foi medida diariamente, após a aplicação. Nos dias 3, 7, 11 e 15 foram realizadas as análises histológicas, em cortes corados com hematoxilina eosina e impregnados pela prata. Os efeitos inflamatórios foram avaliados após injeção intradérmica das lectinas. A proliferação de fibroblastos, na presença das lectinas, foi avaliada por técnica colorimétrica. PHA acelerou a reparação. Aumentou o depósito e a maturação das fibras de colágeno e antecipou a reepitelização. As análises histológicas revelaram reação inflamatória, com predominância de células mononucleares. Quando adicionado ao meio de cultura, PHA inibiu a proliferação dos fibroblastos nas concentrações acima de 20 J.1g1mL. WGA retardou a reparação, o que foi evidenciado pelo atraso no desenvolvimento do tecido de granulação e na formação do epitélio. Induziu fraca reação inflamatória no local de aplicação e, acima de 20 J.1g1mL, inibiu a proliferação dos fibroblastos. A jacalina não influenciou o reparo tecidual ou a proliferação dos fibroblastos. Entretanto, induziu reação inflamatória local com predominância de células mononucleares. Possivelmente, a agregação de células inflamatórias pela ação de PHA foi benéfica. Linfócitos e macrófagos ativados secretam citocinas e fatores de crescimento importantes na reparação. Ao interagir com os receptores para a fibronectina e outras proteínas, WGA impediria a interação das células com a matriz, retardando a reparação. Apesar da jacalina exercer ação mitogênica sobre os linfócitos T, estimular a secreção de INFye produzir reação inflamatória local, esta lectina não influenciou a reparação / Abstract: Wound healing is a complex and dynamic process, characterized by the integrated actions of different cells. Lectins are glycoproteins which can present several biological activities. Many of lectin activities may contribute to repair including increased production of cytokines, and activation of inflammatory cells and fibroblasts. The purpose of this work was to evaluate in vivo effects of PHA (Phaseolus vulgaris phytohemaglutinin), WGA (Triticum vulgare lectin) and jacalin (Artocarpus integrifolia lectin) on wound healing in vivo. Male rats were anesthetized and excisions of 8 mm in diameter were performed in their dorsal skin. The lectins (300uglmL) were then placed Qn the wound. Changes in the surface area were recorded everyday as compared to the initial wound size. The rats were then killed at the 3rd, 7th, 11th, or 15th day. The specimens were harvested for histological examination, and stained with hematoxylin-eosin or silver impregnation. The inflammatory reaction was histologically evaluated around the area of lectin injection. The direct fibroblast proliferation induced by theses lectins were analyzed. PHA accelerated tis sue repair and enhanced the rate of wound contraction when applied to wound sites. Furthermore, PHA increased the reepithelization, collagen deposition and also promoted inflammatory reaction. PHA decreased fibroblast proliferation in vitro. WGA delayed wound repair when applied locally on the wound. WGA promoted weak inflammatory reaction and reduced the granulation tissue maturation. Significant decreased fibroblast proliferation were observed. Jacalin did not have a significant effect on repair and fibroblast proliferation. Jacalin promoted inflammatory Feaction when applied locally. PHA may induce wound healing due to the activation of inflammatory cells. Activated leukocytes release growth factors, such as ILs, INFy and F AFs, which have an important role in the repair processo WGA interact with different glycoproteins, such as plasma fibronectin receptor, and modify the cell and extracellular matrix interaction. Although jacalrn induced the proliferation of human lymphocytes and production of lymphokines, itt did not influence the cicatrization processo / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Ciências

Orientador: Regina Maria Puppin-Rontani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T10:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castilho_AlineRogeriaFreirede_D.pdf: 4223932 bytes, checksum: d68ac38e0ad424f4cce1e0e952fd0608 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Procedimentos de remoção parcial de cárie, indicados para os dentes com lesão de cárie profunda, utilizam-se do preceito de retirar a dentina mais amolecida e infectada,deixando-se uma fina camada de dentina afetada por cárie, sobre a câmara pulpar, evitandoseassim, exposição pulpar mecânica. Contudo, algumas bactérias cariogênicas podem permanecer na dentina por indeterminados períodos de tempo, podendo ocasionar progressão da lesão. Assim, estudos conduzidos com o propósito de melhorar a propriedade antibacteriana de materiais restauradores, sem, contudo produzir efeitos citotóxicos em células odontoblastóides e capaz de manter as propriedades básicas do material pode ser uma alternativa no tratamento de lesões de cárie profundas, uma vez que não existe um produto comercialmente disponível que associe todas estas características. No intuito de facilitar a apresentação desta Tese, a mesma foi dividida em dois capítulos, como descrito nas proposições seguintes. Capítulo 1: avaliar in vitro as propriedades biológicas (ação antibacteriana contra Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei e Actinomyces viscosus, e cito toxicidade em células de linhagem odontoblástica MDPC-23)e mecânicas (resistência à compressão e à tração diametral) de um cimento de ionômero de vidro modificado por resina (Fuji Lining LC), contendo digluconato de clorexidina em diferentes concentrações (0,2%, 0,5%, 1,25% e 2,5%) e assim determinar a concentração terapêutica para utilização desta substância em tratamentos restauradores. Capítulo 2:verificar in vitro o comportamento de um cimento de ionômero de vidro modificado por resina (Fuji Lining LC) contendo hiclato de doxiciclina nas concentrações 1,5%, 3% e 4,5%frente a diferentes patógenos cariogênicos (Streptococcus mutans, Lactobacillusacidophilus, Lactobacillus casei e Actinomyces viscosus), células odontoblástóides MDPC-23 e quando submetidos aos ensaios mecânicos de resistência à compressão e à tração diametral. Os resultados observados em ambos os estudos mostraram que a incorporação de antimicrobianos ao cimento de ionômero de vidro, é capaz de melhorar significativamente efeito inibitório do cimento contra microrganismos criogênicos. A adição de dig luconato de clorexidina a 2,5% promoveu ligeira alteração no metabolismo e morfologia das células MDPC-23. O hiclato de doxiciclina, quando incorporado ao ionômero de vidro mesmo em maiores concentrações, não causou efeitos tóxicos em cultura de células odontoblásticas MDPC-23. Além disso, o cimento de ionômero de vidro contendo digluconato declorexidina a 2,5% apresentou resistência à compressão reduzida, sem alteração da propriedade de resistência a tração diametral do cimento. A adição de hiclato de doxiciclina não alterou as propriedades mecânicas do cimento. Assim, a adição de hiclato de doxiciclina e de digluconato de clorexidina nas concentrações estudadas produziu aumento na atividade antimicrobiana sem efeitos citotóxicos e alteração nas propriedades mecânicas da mistura, exceto para o digluconato de clorexidina a 2,5%, que apresentou o menor resistência a compressão e alterações no metabolismo e morfologia de células pulpares. / Abstract: Partial caries removal approaches are indicated to the management of deep caries. It consists of the incomplete removal of softened carious dentine during cavity preparation, leaving a soft dentine layer over the pulp, so that it is not mechanically exposed. However, some viable cariogenic bacteria have been found in the remaining affected dentine, which may promote caries lesion progression. Therefore, studies aimed to improve inhibitory effect of the restorative materials, without cytotoxic effects on odontoblast cells and able to keep properties of material could be an alternative to the treatment of deep caries lesions. Nevertheless, the disposal-marketed products do not associate all those features. In order to facilitate the accomplishment of this Thesis, it was divided into two chapters, as described on the following descriptions. Chapter 1: to evaluate in vitro biological properties (antibacterial effect against Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei and Actinomyces viscosus, and cytotoxicity at odontoblast cell line MDPC-23) and mechanical properties (compressive strength and diametral tensile strength) of a resin-modified glass ionomer cement (Fuji Lining LC) containing different concentrations of chlorhexidine digluconate (0.2%, 0.5%, 1.5% and 2.5%) and, thus to determine the therapeutic concentration of it for using in restorative dental treatment. Chapter 2: to verify in vitro the performance of a resin-modified glass ionomer cement (Fuji Lining LC) containing the antibiotic doxycycline hyclate at 1.5%, 3% and 4.5% against some cariogenic pathogens (Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei and Actinomyces viscosus); to analyze it indirect contact with odontoblast-like MDPC-23 cells; and, to reveal the mechanical properties under compressive strength and diametral tensile strength. Results of both studies proved that the incorporation of antimicrobials at adequate proportions into the glass ionomer cement have the ability to become better inhibitory effects of the cement against cariogenic bacteria. The 2.5% chlorhexidine digluconate added to glass ionomer cement promoted slight alteration on the mebolism and morfology of MDPC-23 cells. The incorporation of doxycycline hyclate to glass ionomer cement, even in the highest concentration, did not cause toxic effects on culture of odontoblast-like MDPC-23 cells. In addition, 2.5% chlorhexidine digluconate-containing glass ionomer cement decreased the compressive strength of cement, although there was no difference to diametral tensile strength. The adding of doxycycline hyclate did not alter mechanical properties of cement. It was concluded that doxycycline hyclate and chlorhexidine digluconate in the studied concentrations produced increased antimicrobial activity without cytotoxic effects and changes in mechanical properties of the mixture, except for the 1.25% chlorhexidine digluconate that presented the lowest compressive strength and alterations on metabolism and morphology of pulp cells. / Doutorado / Odontopediatria / Doutor em Odontologia

Orientador: Maria Beatriz Puzzi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T10:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dinato_MarceloMattose_M.pdf: 4803476 bytes, checksum: eb9d2db304929302cdd47c38064634bb (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Grande parte das úlceras diabéticas em extremidades inferiores tem difícil cicatrização, representando a causa mais comum de amputação não traumática no mundo. Para pacientes sem resposta à terapêutica clássica como desbridamentos, curativos e antibioticoterapia sistêmica, pode ser excelente indicação a terapia celular. O propósito deste estudo foi avaliar a eficácia de implantes autólogos de células da pele (fibroblastos e queratinócitos) cultivadas "in vitro" e aplicadas com cola de fibrina autóloga em úlceras cutâneas crônicas de 5 pacientes diabéticos (4 DM2 e 1 DM1) com diagnóstico variando de 9 a 34 anos. Foram tratadas 6 úlceras de 4,0 a 36.62 cm2 de tamanho com duração de 4 meses a 20 anos, localizadas em membros inferiores, sem resposta a diversos tratamentos convencionais. Observou-se cicatrização completa em 5 úlceras (83,3%) entre 21 e 120 dias, sendo que a média dos Índices de Cicatrização das Úlceras (ICU) foi de 62%, 75%, 78% e 83%, no 30º; 60º; 90º e 120º dias de evolução, respectivamente. Existe uma correlação entre a velocidade de cicatrização, o tamanho da úlcera e o seu tempo de duração. Não ocorreram reações adversas decorrentes do tratamento. Concluiu-se que, a terapia celular (queratinócitos-fibroblastos) associada à cola de fibrina autóloga mostrou-se uma opção terapêutica eficaz, autóloga, de realização ambulatorial minimamente invasiva que acelerou significativamente o processo de cicatrização das úlceras diabéticas crônicas / Abstract: A great part of diabetic ulcers on the lower extremities have difficult healing and represent the most common cause of amputation worldwide. For patients unresponsive to the classical therapy with debridement, dressings and systemic antibiotic therapy, cell therapy may be an excellent indication. The objective of this study was to assess the efficacy of autologous skin cell (fibroblasts and keratinocytes) implants cultivated in vitro and applied with autologous fibrin glue to chronic skin ulcers of 5 diabetic patients (4 DM2 and 1 DM1) who had been diagnosed between 9 and 34 years before. There were 6 ulcers from 4.0 to 36.62 cm2 in size, with onset between 4 months and 20 years before, located on the lower limbs and unresponsive to several conventional treatments. Complete healing was observed in 5 ulcers (83.3%), after 21 to 120 days and the average of ulcer healing indices (UHI) were 62%, 75%, 78% and 83%, on the 30th, 60th, 90th and 120th days, respectively. There is a correlation between healing time, ulcer size and duration. No adverse reactions derived from the treatment occurred. It was concluded that cell therapy (keratinocytes, fibroblasts) associated with autologous fibrin glue proved to be an effective therapeutic option, minimally invasive and performed on an outpatient basis, that has significantly accelerated the healing of chronic diabetic ulcers / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Cecilia Amelia de Carvalho Zavaglia, Eliana Aparecida de Rezende Duek / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-05T03:14:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbantini_SamuelHilsdorf_D.pdf: 12141806 bytes, checksum: 0b989130cb636eca30c7bf3da9bc69f8 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A utilização de polímeros bioreabsorvíveis como suporte para cultura de células tem se destacado como alternativa para tratamento de lesões e perda de tecidos. O objetivo deste trabalho foi obter e caracterizar suportes densos e porosos de poli(E-caprolactona) (PCL) e poli(D,L-ácido lático-co-ácido glicólico) (50/50) (PLGA50), preparados pelo método de fusão com adição e lixiviação de citrato de sódio. As amostras foram avaliadas em estudos de degradação in vitro para o estudo do efeito da retirada do sal, e em meio tampão fosfato (pH 7,4) e alcalino com NaOH (pH 12, 13 e 13,7). Os materiais foram utilizados como suporte para cultura de osteoblastos e o estudo in vivo foi realizado pelo implante em noia de ratos. Os resultados obtidos através de análises morfológicas, térmicas e de propriedades mecânicas, mostram que amostras de PCL são mais estáveis quando comparadas às suas análogas de PLGASO.A cultura de células mostrou um padrão de adesão e proliferação satisfatório, com intensa atividade celular. No estudo in vivo as amostras de PCL mostram uma degradação mais acentuada quando comparada com os resultados obtidos no estudo in vitro. Os resultados mostraram que a técnica utilizada no preparo das amostras é útil na confecção de suportes altamente porosos. Em função do tempo de degradação e das propriedades mecânicas, as amostras de PLGA5O foram os suportes mais indicados para aplicações na engenharia de tecidos ósseos / Abstract: The use of bioresorbable polymers as sca:ffolds for the cells culture has received special attention as an alternative for the treatment of lesions and the loss of tissue. The aim of this work was to obtain and to characterize dense and porous scaffolds of poly(e-caprolactone) (PCL) and poly(D,L-lactic acid-co-glycolic acid) (50/50) (PLGA50), prepared by melting method with addition and leaching of sodium citrate. The samples were evaluated in studies of in vitro degradation, in phosphate bufIer solution (pH 7.4) and alkaline medium ofNaOH (pH 12, 13 and 13.7). Scaffolds samples were used in osteoblast culture and the in vivo study was evaluated by implant in mouse tibia. The results of morphologic, thermal and of mechanical analyses, showed that the PCL samples are stable compared to their similar of PLGA50. The culture of cells showed a satisfactory adhesion and proliferation, with intense cellular activity. In the in vivo study, the samples of PCL showed a higher degradation when it is compared to the results obtained in vitro study. The results showed that the proposed technique allowed the preparation of highly porous scaffoldsa nd in function of time degradation and mechanics properties, the samples of PLGA50 were the most suitable scaffolds for applications in the bone tissue engineering / Doutorado / Materiais e Processos de Fabricação / Doutor em Engenharia Mecânica

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T02:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Denny_Carina_D.pdf: 2044243 bytes, checksum: 37d9912d0a46cbfff8c47cde834817fd (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Modelos de avaliação da citotoxicidade têm proporcionado a obtenção de importantes dados preliminares, ajudando a selecionar extratos de plantas com propriedade antitumoral para estudos futuros. Como parte de um programa de screening de plantas medicinais brasileiras e produtos naturais com propriedades anticâncer, o presente trabalho apresenta a atividade da Virola sebifera (Myristicaceae), uma árvore endêmica do Cerrado brasileiro. O objetivo geral desse trabalho foi avaliar as propriedades in vitro e in vivo de amostras da V. sebifera. além de isolar e identificar seus compostos ativos. O primeiro estudo descreve a atividade antiproliferativa em cultura de células tumorais humanas de duas lignanas e dois policetídeos isolados das folhas da V. sebifera. Assim, reportamos o isolamento e elucidação estrutural de um novo policetídeo 3,5-diidro-2-(l'-oxo-3'-hexadecenil)-2-ciclohexano-l-ona com alta atividade antiproliferativa contra 8 linhagens de células tumorais humanas. No segundo estudo, purificamos a fração ativa (FR4) a partir do extrato bruto diclorometânico, com atividade in vitro (IC50- 5,19-10,57 (xg/mL - ensaio do SRB) pãrã âs mesmas linhagens celulares. Pãrã ãvãliãr ã atividade in vivo da fração ativa utilizamos o ensaio da hollow fiber. Assim, foram estabelecidas as condições de crescimento para as linhagens celulares MCF-7, NCI-ADR e OVCAR03 em fibras (hollow fibers) implantadas no abdômen (i.p.) e no dorso (s.c.) de camundongos imunocompetentes. Os animais foram tratados com FR4 (500mg/kg), doxorubicina (6mg/kg) ou veículo intraperitonealmente. Após 14 dias de tratamento, as fibras foram retiradas, seguindo-se a coloração do MTT para determinação da densidade de células viáveis. A fração FR4 demonstrou efeito significante contra células de mama (MCF-7) e ovário (OVCAR03). A confirmação das propriedades anticâncer in vitro e in vivo da Virola sebifera apresentadas nesse estudo, nos permite avançar em pesquisas futuras, orientando a seleção de outros modelos e estudos de mecanismo de ação / Abstract: Cytotoxicity screening models provide important preliminary data to help select plant extracts with potential antitumor properties for future work. As part of a screen program searching for Brazilian medicinal plants and natural products with anticancer properties, the present investigation reports the anticancer activity the Virola sebifera (Myristicaceae), an endemic tree from the Brazilian Cerrado. The overall aim of this work was the evaluation of in vitro and in vivo properties of samples from V. sebifera, there for the isolation and identification of the active compounds. The first study describes the antiproliferative properties against human cell lines of two lignans and two polyketides isolated from leaves of V. sebifera. Herein we report the isolation and structure elucidation of a novel polyketide 3,5-dihydro-2-(r-oxo-3J-hexadecenyl)-2-cyclohexen-l-one with high antiproliferative activity against 8 human cancer cell lines. In the second study, we purified the active fraction (FR4) from the crude dichloromethanic extract with in vitro activity (IC5ri=5.19 - 10.57 pg/mL - SRB assay) against the same cell lines. In addition, the hollow fiber assay was used to study the effect in vivo of the active fraction (FR4). Using this model, we have established growth conditions for MCF-7, NCI-ADR and OVCAR03 cells implanted at the intraperitoneal (i.p.) and subcutaneous (s.c.) compartments of immunocompetent mice. Then, the animals were treated with FR4 (500 mg/kg). doxorubicin (6mg/kg) or vehicle only intraperitoneally. After 14 days the fibers were retrieved, followed by determination of living cell density by MTT staining. FR4 showed significant effect against breast (MCF-7) and ovarian (OVCAR03) tumor cells. The anticancer properties of Virola sebifera in vitro and in vivo was confirmed in this study. These findings may guide future studies in other models and detailed studies on the mechanisms of action / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador : Maria Lucia Furlan Wada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T07:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosJunior_ArnaldoRodriguesdos_D.pdf: 11814677 bytes, checksum: 2777c85159ecc85a70f9d31eef949284 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Os biornateriais poliméricos são compostos desenvolvidos para serem utilizados como substitutos de tecidos danificados. Urna classe de biomateriais poliméricos utilizados são os bioabsorvíveis, que são compostos que se decompõe tanto in vitro quanto in vivo, e são utilizados em tecidos que necessitam de um suporte temporário até que a recomposição tecidual se concretize. Dentre os vários polímeros bioabsorvíveis, se destacam os dispositivos a base do poli(L-ácido láctico) [PLLA] por apresentar boa biocompatibilidade e os produtos de sua decomposição serem eliminados do corpo por vias metabólicas. Membranas densas de PLLA ou com poros de diferentes diâmetros (> que 451lm, entre 180-2501lm e entre 250-350Ilm) foram avaliadas quanto a adesão, crescimento e diferenciação de células fibroblásticas em cultura. Observamos que as células aderem lentamente às membranas de PLLA. Uma vez aderi das, as células apresentaram variações em seus padrões morfológicos de acordo com as características estruturais do substrato no qual elas cresceram. Em todos os substratos de PLLA estudados, as células não apenas foram capazes de proliferar sobre a superficie dos mesmos como também foram hábeis em produzir uma matriz extracelular rica em colágeno tipo IV e fibronectina. Avaliamos também o comportamento das células fibroblásticas sobre blendas de PLLA com poli(hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) [pHBV] em diferentes proporções (100/0, 60/40, 50/50, 40/60, 0/100). Nas blendas de PLLAlPHBV, também observamos a adesão celular lenta e uma morfologia variável, variando de células arredondadas à completamente achatadas e unidas por prolongamentos, de acordo com as características fisicas e topográficas do substrato. Também observamos que os substratos foram capazes de estimular a proliferação celular e a produção de um matriz extracelular rica em colágeno tipo IV e fibronectina. A análise conjunta dos resultados mostra que os diferentes substratos a base de PLLA estudados não apresentam toxicidade, uma vez que as células são capazes de crescer e proliferar sobre eles. Sobretudo, as células foram capazes de se diferenciarem sobre os diferentes polímeros, uma vez que passam a produzir uma matriz extracelular rica em colágeno IV, comportamento incomum a células fibroblástica / Abstract: Polymeric biomaterials are developed compounds used as substitutes for damaged tissue. A c1ass of biomaterials is the bioabsorbable ones, which are polymers that degrade in vitro as well as in vivo and are used in tissues that need a temporary support until its tissue regeneration happens. Among the several bioabsorbable polymers, the poly (L-acid lactic) [PLLA] based devices are eminent because their decomposition products are eliminated ITom the body by metabolic ways and due to their good biocompatibility. PLLA dense membranes or with different diameter pores (smaller than 45 Ilm, between 180-2501lm and 250-350Ilm) were evaluated by their ability of stimulating adhesion, growth and differentiation of tibroblastic cells in culture. We observed that the cells adhere slowly to the dense and porous PLLA membranes. Once adhered, they presented a differentiated morphological pattern in accordance with the substrate characteristics that they had grown. In ali the PLLA substrates studied, the cells were not on1y capable of proliferating over the substrates but also producing an extracellular matrix, rich in type IV collagen and tibronectin. We also evaluated the tibroblastic cells behavior over the different proportions blends of PLLA with poly(hydroxybutirate-co-hydroxyvalerate) [pHBV] (100/0, 60/40, 50/50, 40/60, 0/100). At the PLLA/PHBV blends, we also noticed a slowly cellular adhesion and a variable morphology according to the physical and surface substrate characteristics. We also observed that the substrate were capable of stimulating cell proliferation and the production of an extracellular matrix rich in type IV collagen and tibronectin. The results analysis show that the different PLLA based substrates studied, do not present toxicity, once the cells could differentiate over the different polymers, which was demonstrated by the production of an extracellular matrix rich in type IV collagen, an uncommon behavior to tibroblastic cells / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T14:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_CamilaMariaLongo_D.pdf: 7157144 bytes, checksum: 5e608dc117fd0920bfcd8bdf16a6ccd0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Gliomas malignos são tumores de Sistema Nervoso Central extremamente freqüentes, correspondendo a 46% dos casos diagnosticados de Neoplasias Cerebrais. Segundo a Organização Mundial de saúde o glioblastoma multiforme representa aproximadamente 3,9% dos óbitos a cada 100.000 habitantes nos Estados Unidos da América e Europa. Este tipo tumoral é extremamente agressivo e os pacientes acometidos apresentam média de vida de apenas um a dois anos após ressecção cirúrgica. Os tratamentos posteriores à retirada da massa tumoral são a quimioterapia e radioterapia. Assim, há um grande interesse na busca por novas estratégias terapêuticas que se mostrem eficazes no tratamento de pacientes acometidos por glioblastomas. Neste sentido, a utilização de linhagens celulares, estabelecidas à partir de tumores brutos extraídos de pacientes, tem-se mostrado uma ferramenta útil tanto ao avanço nos conhecimentos biológicos sobre tumores primários; quanto ao desenvolvimento de novos agentes terapêuticos. Foi estabelecida em nosso laboratório uma nova linhagem derivada de glioma humano, denominada NG97. Estudos preliminares confirmaram a origem astrocitária das células e a preservação de malignização, demonstrada pelo desenvolvimento de massa tumoral a partir do xenotransplante de células cultivadas in vitro em camundongos atímicos. O presente trabalho teve como objetivo ampliar os conhecimentos biológicos acerca desta linhagem tumoral. Assim foram atribuídas as células da linhagem ultraestruturas típicas de células indiferenciadas e tumores astrocíticos. Também, elucidaram-se características mofológicas atribuídas a linhagens tumorais astrocíticas como a expressão de proteínas GFAP, vimentina, integrina a5ß1, fibronectina, laminina e CD44. Combinada a expressão destas moléculas responsáveis pela adesão célula ao substrato, foi demonstrado que as células uma vez desprovidas do contato adesivo desenvolvem uma estrutura tridimensional organotipica. Quanto a expressao de moléculas envolvidas no processo de resposta imune das células in vivo, não foram detectadas nas células NG97: HLA I,HLAII, B7 (CD80), TGF-ß e Fas (CD95). Em cultura, as células NG97 apresentam variadas aberrações numéricas com cariótipo hiperplóide e inumeros cromossomos aneuploides classificados como um de lote cromossomos murinos associados. Este ultimo, pode ser representado por um lote próximo ao triploide murino (neartriploid, i.e.; 30 cromossomos murinos mais ou menos 11 cromossomos murinos). Finalmente demonstrou-se a sensibilidade das células NG97 ao quimioterapico Cisplatina tanto in vitro quanto in vivo. Portanto a caracterização da linhagem NG97 aqui realizada fundamenta a sua utilização como modelo biológico aos mais diversos estudos. / Abstract: Astrocytomas are extremely aggressive malignancies of the Central Nervous System (CNS) and account for 46% of all primary malignant brain tumors. The perspective for patients with malignant gliomas is poor and the average survival expectancy is less than a year. Progression to a worsened prognosis occurs in 85% of the cases due to changes in cell tumor microenvironment and through biological pathways that are still unclear. These neoplasias grow rapidly and contain high cellularity with marked hyperchromatism and pleomorphism. The hystophatological identity of glioblastoma is the prominent vascularity as well as the area of necrosis surrounded by neoplastic pseudopalisading cells, as a result of microenvironment hypoxic conditions. In order to clarify those issues, cultured cell lines are valuable tools to be employed on tumor related assays as long as they are established and well characterized. Our laboratory set up the NG97 cell line derived from a human astrocytoma grade III, which was injected in the athymic nude mice flank and turned to develop and express phenotypic characteristics of an astrocytoma grade IV. This study aimed to expand the biological knowledge about this tumor cell line. In this way, clarified morphological, immunophenotypic, and cytogenetic characteristics as well as confirmed sensitivity to cisplatin chemotherapeutic agent in cells NG97. These features attributed to NG97 cell line are unique qualities that make them an important model for the study of biology and therapeutic strategies in astrocytomas. / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular