A cinomose é uma doença infecciosa de ocorrência mundial que acomete diversas espécies de carnívoros domésticos e selvagens. Devido ao alto nível de mortalidade de pacientes com cinomese, tratamentos alternativos e eficazes tornam-se necessários. A terapia utilizando células-tronco é uma ciência em formação considerada uma alternativa terapêutica promissora no tratamento de diversas patologias degenerativas, hereditárias e inflamatórias. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar e comparar a resposta sistêmica dos animais infectados com o vírus da cinomose canina tratados com terapia medicamentosa convencional (Grupo Suporte - GS) e animais que receberam tratamento convencional associado à terapia celular com células-tronco mesenquimais de epitélio olfatório fetal canino (Grupo suporte + terapia celular- GSTC). O GS foi composto por cinco animais (n=5) e o GSTC composto por três animais (n=3) que foram acompanhados pelo período de quinze dias com avaliação da evolução da patologia de acordo com as principais alterações clínicas e laboratoriais através da análise das alterações hematológicas, avaliação bioquímica e urinária. Os resultados nos mostram que houve uma alta taxa de mortalidade em ambos os grupos (GS=4) e (GSTC=2) devido à gravidade dos sinais clínicos na fase aguda da doença, nos fornecendo dados imprecisos da evolução clínica dos pacientes. Conclui-se que faz necessário, estudos posteriores que selecionem animais na fase crônica da doença, devido à estabilização do quadro clínico e às características celulares das células-tronco, que podem se tornar um potencial método de controle do processo inflamatório sistêmico causado pelo vírus da cinomose, bem como promotor da reparação de células e tecidos lesionados pela injúria viral direta, através da diferenciação e repovoamento de células danificadas, restaurando a integridade e funcionalidade do Sistema Nervoso Central (SNC). / Canine distemper is an infectious disease of world occurrence that affects many species of domestic and wild carnivores. Due to the high level of mortality in patients with cinomese, and effective alternative treatments are necessary. Cellular therapy is a promising therapeutic alternative for the treatment of various degenerative, hereditary and inflammatory diseases. Therefore, this study aimed to evaluate and compare the systemic response of animals infected with canine distemper virus treated using conventional drug therapy (suport group - SG) and with cell therapy with using mesenchymal stem cells from canine fetal olfactory epithelium (Suport group + therapy cell), following the evolution of the pathology according to the main clinical and laboratory findings through the analysis of hematological abnormalities, and urinary biochemical evaluation. The GS was composed of five animals (n = 5) and the GSTC composed of three animals (n = 3) were followed by fifteen days period with evaluation of the evolution of the disease according to the main clinical and laboratory findings by analyzing haematological, biochemical and urinary assessment. The results showed that a high mortality rate (SG=4) e (SG+SC=2) due to the severity of clinical signs in the acute phase of the disease, providing inaccurate data on the clinical evolution of patients. We conclude that is necessary, to select animals that further studies in the chronic phase of the disease, due to the stabilization of the clinical and cellular characteristics of stem cells, which can be a potential method of controlling systemic inflammation caused by the virus distemper, as well as a promoter of cell and tissue repair lesioned by direct viral injury, through differentiation and repopulation of damaged cells, restoring the integrity and functionality of the Central Nervous System (CNS).

O saco vitelino é o único anexo embrionário presente em todas as espécies animais cuja função é manter o desenvolvimento primário do feto até que a placenta assuma esta função. Além disso, ele desempenha funções importantes como: nutrição do embrião, síntese proteica, atividade fagocitária, transferência de materiais e hematopoiese. A utilização de células-tronco embrionárias gera muitas discussões devido às questões éticas associadas à obtenção destas células, além de questões religiosas e também as relações de baixa plasticidade das células-tronco adultas motivam os pesquisadores ao crescente interesse em outras fontes de célulastronco. Com isso, células provenientes de tecidos como as dos anexos embrionários chamam cada vez mais atenção devido à sua facilidade de acesso, crescimento rápido e boa plasticidade. Nosso grupo tem demonstrado que as células do saco vitelino têm boa capacidade de proliferação e são multipotentes. Vários pesquisadores vêm demonstrando que o período no qual as células são obtidas pode ser de fundamental importância para a diferenciação. Sendo assim, neste projeto tivemos como objetivo estabelecer e caracterizar células-tronco de saco vitelino de cães em dois estágios gestacionais, visando analisar de forma comparativa o perfil de expressão de marcadores mesenquimais, hematopoiéticos e pluripotência de forma a entender o comportamento das mesmas. Neste trabalho observamos que as células de saco vitelino obtidas de gestações com 40 e 50 dias aderiram ao plástico, tiveram morfologia fibroblastóide, boa proliferação celular, se diferenciaram em adipócitos, condrócitos e ostéocitos e expressaram alguns marcadores mesenquimais, sugerindo assim ser uma célula-tronco mesenquimal. Além disso, não levaram à formação tumoral quando injetadas em camundongos imunossuprimidos, nudes. / The yolk sac is an embryonic attachment present in all animal species, which function is to keep the primary development of the fetus until the placenta assumes this function. Moreover, it plays important roles as: nutrition of the embryo, protein synthesis, phagocytic activity, transfer of materials and hematopoiesis. The use of embryonic stem cells generates many discussions because of the ethical and religious issues associated with the obtaintion of these cells. Also the relationship of low plasticity of adult stem cells motivates researchers to explore other sources of stem cells. Thus, cells from tissues such as the embryonic anexes call more attention, due to its ease of access, rapid growth and good plasticity. Our group has shown that cells of the yolk sac has good ability to proliferate and are multipotent. Several researchers have shown that the period in which the cells are obtained can be critical for differentiation. Therefore, in this project we aimed to establish and characterize stem cells from dog yolk sac in two stages of pregnancy, in order to analyze comparatively the expression profile of mesenchymal, hematopoietic and plurypotency markers, and study their behavior and plasticity potencial in vitro. In this study we observed that yolk sac cells obtained from pregnancies at 40 and 50 days adhered to plastic, had fibroblast like-morphology, good cell proliferation and differentiated into adipocytes and osteocytes and expressed some mesenchymal markers, therefore suggesting to be a mesenchymal stem cell. Also, they did not lead to tumor formation when injected into immunosuppressed mice, nude.

Nos últimos anos, as células-tronco, devido a sua capacidade de originar diversos tecidos corporais e pelo poder de auto-renovação, impulsionaram os estudos de engenharia tecidual, sobretudo em medicina regenerativa. Nesse aspecto, o tecido adiposo vem se mostrando como fonte ideal para obtenção de tais células, devido à facilidade de captação, à baixa morbidade associada ao procedimento e ao elevado rendimento celular. Com o objetivo de estabelecer um modelo experimental versátil e que satisfizesse várias áreas de interesse, propôs-se o coelho Oryctolagus cuniculus como fonte de tecido adiposo. Esse animal apresenta bolsa adiposa interescapular com peso médio de 17,2g, o que corresponde a cerca de 6,6 g/Kg em machos adultos (peso corporal médio de 2590g). A coleta do material foi por meio de lipoaspiração a seco, com cânula de 3,5mm; levou-se em média, 11 minutos para o procedimento, obtendo-se aproximadamente 10 ml de gordura. Após o processamento pela técnica enzimática, em cada mililitro de gordura encontrou-se em média 1x105 células-tronco. O estudo constatou ainda que, por meio da criopreservação em nitrogênio líquido, as células mantinham suas características citométricas após períodos de congelamento que variaram de uma semana a 13 meses. As células apresentaram características de sua indiferenciação, como a expressão dos marcadores de superfície: CD90, 80,6%; HLA-DR, 2,8% e caspase 3, 10,5%. A análise do ciclo celular com 100% de confluência mostrou que 70,8% das células encontravamse quiescentes; 22,1% apoptóticas. As células com alta capacidade replicativa, que corresponde à fase S do ciclo celular, 1,4% e 0,9% encontravam-se em replicação, mostrando que as células-tronco do tecido adiposo, em cultura, não apresentam uma proliferação descontrolada, tendendo a se estabilizar, principalmente quando atingem confluência máxima em monocamada. Todas essas vantagens fazem com que o modelo proposto possa ser facilmente reprodutível, contribuindo para o estudo das células-tronco do tecido adiposo. / In the latest years, the study on tissue engineering, mainly in the area of regenerative medicine, has advanced because the medical community is highly interested in stem cells. This is due to both the potential of these cells to originate any body tissue and their power of self-renewal. Adipose tissue has been used as an ideal source of such cells, due to the simplicity of their collection, high cellular yield, and low morbidity associated with the procedure. In order to establish a versatile experimental model, which could meet the needs of researchers from various areas, the rabbit Oryctolagus cuniculus was proposed as a source of adipose tissue. This animal has an adipose pad in the interscapular region with an average weight of 17.2g, which corresponds to about 6.6g of fat material per kilogram of an adult male animal (mean body weight = 2.6kg). The material was collected by means of a liposuction procedure. Using a 3.5- mm diameter tube, a volume of nearly 10ml of fat material was obtained in a mean time of 11min. After processing the fat tissue by enzymatic technique, about 1x105 stem cells were found per milliliter of fat material. Using cryopreservation of the cells by freezing them in liquid nitrogen, it was observed that the cytometric characteristics were maintained after a period of time ranging from 1 week to 13 months. The cells presented evident characteristics of undifferentiation, such as expression of the surface markers CD90, HLA-DR, and Caspase-3 (80.6, 2.8, and 10.5 %, respectively). Analysis of the cellular cycle with 100% confluence allowed us to show that 70.8% of the cells were quiescent, 22.1% were apoptotic, 1.4% had high replication capacity (phase S of the cellular cycle) and 0.9% were already in replication (phase G2/M), indicating that stem cells from adipose tissue did not show uncontrolled proliferation, tending to stabilize, mainly when they reach maximal confluence in monolayer. These advantages make this model easily reproducible, facilitating the study of adipose tissue stem cells.

A cartilagem articular é um tecido avascular, com baixa celularidade, composta principalmente de colágeno extracelular e proteoglicanos, com uma capacidade limitada de regeneração. Nos últimos anos, diversas abordagens clínicas e de pesquisa têm sido adotadas para reparar danos na cartilagem articular, como transplante de condrócitos, enxerto de periósteo, células-tronco mesenquimais e tecidos derivados dessas células. O isolamento de células-tronco mesenquimais foi relatado a partir de diferentes tecidos, incluindo medula óssea, tecido adiposo, sangue do cordão umbilical, sangue periférico e saco vitelino em equinos. As células-tronco mesenquimais derivadas de líquido e membrana sinoviais foram obtidas em humanos, cães, suínos e caprinos e são fontes promissoras para regeneração articular, já que são tecido-específicas e de fácil obtenção e cultivo. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e caracterizar a linhagens de células obtidas de membrana e líquido sinoviais equinos. Os fragmentos foram obtidos por meio de artroscopias e cultivados em meios de cultura DMEM-H e MEM para obtenção das linhagens. Para análise da morfologia celular foi realizada a fotodocumentação das garrafas em microscopia invertida. A expressão de marcadores de células-tronco (CD45RO, OCT3/4, NANOG, CD105, CD90, CD34, CD117, CD133, TRA-1-81, VEGF-R1 e Ly6a), marcadores inflamatórios (COX-2, TNF-R1-r, CD11, CD1a e MCP-1) e marcadores envolvidos na checagem e progressão do ciclo celular (Caspase-3 fosforilada, HSP-47, P21, Ki67, Ciclina D1 e P53) mostraram diferencialmente expressos, sugerindo que podemos considerá-las uma possível fonte de células-tronco mesenquimais. Devido ao grande impacto que patologias na articulação têm sobre o desempenho atlético em cavalos, os resultados demonstrados neste trabalho será uma base para conduzir outros experimentos na avaliação das aplicações terapêuticas dessas células. / The articular cartilage is an avascular tissue with low cellularity composed of extracellular collagen and proteoglicans. It has a limited capacity of regeneration. Condrocyte transplantation, mesenchymal stem cells and tissues derived from these cells has been used by several researches to repair damage to the articular cartilage. The isolation of mesenchymal stem cells has been reported from different tissues such as bone marrow, adipose tissue, blood, umbilical cord, and yolk sac. The mesenchymal stem cells from synovial fluid and synovial membrane were obtained from humans, dogs, pigs and goats. These cells are tissue specific and easy to obtain and cultivate. The objective of this research is to obtain and characterize cells from equine synovial fluid and synovial membrane. The samples were obtained by arthroscopy and cultivated in the DMEM-H and MEM media. Cell morphology analyses were made by photodocumentation in inverted microscopy. The expression of stem cell markers (CD45RO, OCT3/4, NANOG, CD105, CD90, CD34, CD117, CD133, TRA-1-81, VEGF-R1 and Ly6a), inflammation markers (COX-2, TNF-R1-r, CD11, CD1a and MCP-1) and markers involved in checking and cell cycle progression (Caspase-3, HSP-47, P21, Ki67, Ciclina D1 and P53) showed differentially expressed. Mesenchymal stem cells from synovial membrane and synovial fluid provide promise for cell-based therapies for articular cartilage repair. These results may lead other experiments to use these cells to new therapeutic applications.

O bussulfano (BU) e a ciclofosfamida (CY) são fármacos utilizados nos regimes de condicionamento pré-transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH). O BU apresenta estreito intervalo terapêutico, alta variabilidade interindividual na farmacocinética e graves reações adversas. O presente estudo avaliou a administração de uma dose teste de BU oral para a individualização do regime de dosagem, definiu o melhor tempo de coletas esparsas para o monitoramento terapêutico do BU e validou um algoritmo baseado em modelo compartimental e farmacocinética populacional em pacientes submetidos ao TCTH. Trinta pacientes portadores de doenças hematológicas tiveram o tratamento com BU individualizado baseado em uma dose teste oral de 0,25 mg/Kg de BU. As doses foram baseadas no clearance aparente calculado na dose teste e as concentrações plasmáticas foram confirmadas após a quinta dose de tratamento. Os coeficientes de variação obtidos entre os valores de clearance avaliados na dose teste e na quinta dose foram <= 30%, exceto para 5 pacientes. Não foram observadas associação entre os parâmetros farmacocinéticos do BU e a evolução clínica dos pacientes. Com a finalidade de estimar os melhores tempos de coletas ideais para aplicação no monitoramento terapêutico do BU, um modelo farmacocinética populacional foi utilizado e um esquema de coletas esparsas com não mais de cinco amostras por paciente (t = 0,5; 2,25; 3; 4 e 5 horas após a dose) demonstrou ser suficiente para a caracterização da farmacocinética do BU. O presente estudo avaliou também a farmacocinética dos enantiômeros da ciclofosfamida (CY) e seus metabólitos (4-hidroxiciclofosfamida e carboxiciclofosfamida), em pacientes submetidos ao TCTH. Foram investigados pacientes portadores de esclerose sistêmica (n=10) e esclerose múltipla (n=10) em regime de condicionamento com 50 mg CY /kg/dia durante 4 dias. Dois ensaios específicos baseados na análise por LC-MS/MS foram desenvolvidos e validados para analisar os enantiômeros da CY e seus metabólito 4- hidroxiciclofosfamida (HCY) e carboxiciclofosfamida (CEPM) em plasma humano. Os parâmetros farmacocinéticos dos enantiômeros da CY e seus metabólitos foram calculados empregando o programa WinNonlin e mostraram acúmulo plasmático dos enantiômeros (S)- (-)-CY (AUC 215, 0 vs 186,2 ?g.h/mL para os paciente EM e 219,1 vs 179,2 ?g.h/mL para os paciente ES) e HCY (1), provavelmente o (R)-(+)-HCY (AUC 5,6 vs 3,7 ?g.h/mL para os paciente EM e 6,3 vs 5,6 ?g.h/mL para os paciente ES) em ambos os grupos de pacientes investigados. A disposição cinética do metabólito CEPM não mostrou enantiosseletividade. A farmacocinética da CY e seus metabólitos HCY e CEPM não diferiu entre os pacientes portadores de EM ou ES. Não foi observado correlação entre o metabolismo da CY e os genótipos avaliados (CYP2B6 e CYP2C9). Não foi possível correlacionar os valores de AUC0-? dos enantiômeros da CY e/ou dos metabólitos HCY e CEPM com a toxicidade ao uso de CY em virtude do pequeno número de pacientes investigados. / Busulfan (BU) and cyclophosphamide (CY) are drugs used during conditioning treatment for hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). BU presents narrow therapeutic window, high interindividual variability in the pharmacokinetics and serious adverse effects. The present study evaluated the administration of a BU test dose for dose individualization, set the best sparse sampling scheme for BU therapeutic monitoring and validated an algorithm based on compartmental and population pharmacokinetics model in HSCT patients. Thirty patients received BU individualized treatment based on an oral test dose of 0.25 mg/kg. Doses were based on apparent clearance calculated with BU test dose. Plasma concentrations were confirmed after the fifth treatment dose. Coefficients of variation obtained between the clearance values evaluated in the test dose and fifth dose were <= 30%, except for 5 patients. No association between BU pharmacokinetic parameters and clinical outcome was observed. To estimate the ideal sampling scheme for BU therapeutic drug monitoring, a population pharmacokinetic model was used. Sparse sampling scheme with no more than five samples per patient (t = 0.5, 2.25, 3, 4 and 5 hours after dosing) was shown to be sufficient to characterize the BU pharmacokinetics. This study also evaluated the pharmacokinetics of the cyclophosphamide enantiomers and its metabolites (4-hydroxycyclophosphamide and carboxicyclophosphamide) in HSCT patients. We investigated patients with systemic sclerosis (SS) (n = 10) and multiple sclerosis (MS) (n = 10) in the conditioning regimen with CY 50 mg/kg/day for 4 days. Two specific tests based on LC-MS/MS analysis were developed and validated to analyze the CY enantiomers and its metabolite 4-hydroxycyclophosphamide (HCY) and carboxicyclophosphamide (CEPM) in human plasma. Pharmacokinetics of CY enantiomers and its metabolites were calculated using WinNonlin software and showed plasma accumulation of (S)-(-)-CY (AUC 215.0 vs 186.2 ?g.h/mL for the MS patient and 219.1 vs. 179.2 ?g.h/mL for the SS patient) and HCY (1), probably the (R)-(+)-HCY (AUC 5.6 vs 3.7 ?g.h /mL for MS patients and 6.3 vs 5.6 ?g.h/ mL for the SS patients) enantiomers in both groups of investigated patients. CEPM kinetics disposition showed lack of enantioselectivity. The pharmacokinetics of CY and its metabolites (HCY and CEPM) did not differ between patients with MS or SS. There was no correlation between the metabolism of CY, CYP2B6 and CYP2C9 genotypes. It was not possible to correlate the AUC0-? of CY enantiomers and/or its metabolites (HCY and CEPM) with CY toxicity due to the small number of patients investigated.

INTRODUÇÃO: O método padrão de reparo de falhas ósseas é o transplante do osso autólogo. No entanto, novas técnicas de bioengenharia de tecido ósseo poderão substituir o método padrão. A construção de uma técnica em bioengenharia de tecido ósseo é feita pela associação entre fatores ou células indutoras de osso e biomateriais carreadores. O objetivo do presente trabalho foi mensurar a neoformação óssea em falha óssea alveolar de modelo animal após o reparo com fontes diferentes de bioengenharia de tecido ósseo e compará-las com o reparo com o osso autólogo transplantado da região craniana. MÉTODOS: Foi criada uma falha óssea na região alveolar de 28 ratos Wistar medindo 5 mm de diâmetro. Quatro modalidades de reparo foram comparadas ao método padrão: No grupo 1 (método padrão), as falhas ósseas foram reparadas com o transplante de osso autólogo da região parietal da calvária; nos grupos 2 e 3, as falhas ósseas foram reparadas com o biomaterial carreador osso bovino mineral sem e com o emprego de células-tronco mesenquimais humanas indiferenciadas, respectivamente; nos grupos 4 e 5, as falhas ósseas foram reparadas com o biomaterial carreador -tricálcio fosfato sem e com o emprego de células-tronco mesenquimais humanas indiferenciadas, respectivamente. A neoformação óssea na falha alveolar foi aferida por meio de imagens de tomografia computadorizada e avaliação histomorfométrica após 8 semanas da cirurgia. A neoformação óssea obtida por meio da avaliação histomorfométrica possibilitou a comparação dos grupos 2, 3, 4 e 5 com o grupo 1. Foi criado um sistema de pontos para determinar a distribuição do osso na falha óssea alveolar por meio das imagens de tomografia computadorizada em cinco animais por grupo, sendo 1 ponto para ossificação parcial, 2 pontos para ossificação total e heterogênea e 3 pontos para ossificação total e homogênea. O índice de significância estatístico p<0,05 foi determinado pelo teste não paramétrico de Mann-Whitney. RESULTADOS: Na avaliação histomorfométrica, o grupo 1 apresentou 60,27% ± 16,13% de osso na falha (n=7). Os grupos 2 e 3 apresentaram respectivamente, 23,02% ± 8,6% (n=3) Resumo (p=0,01) e 38,35% ± 19,59% (n=5) (p=0,06) de osso na falha. Os grupos 4 e 5 apresentaram respectivamente, 51,48% ± 11,7% (n=3) (p=0,30) e 61,8% ± 2,14% (n=6) (p=0,88) de osso na falha. Na avaliação radiológica, os animais dos grupos 1, 2, 3, 4 e 5 apresentaram média de pontos respectivamente igual a 2; 1,4; 1,5; 1,6, 1,8. CONCLUSÕES: O grupo de animais cujas falhas ósseas alveolares foram reparadas com -tricálcio fosfato e células-tronco mesenquimais apresentou a neoformação óssea mais semelhante a do grupo de animais cujas falhas ósseas foram reparadas com osso autólogo / INTRODUCTION: The current criterion standard to repair bone defects is an autogenous bone transfer. However, bone engineering strategies may become the first choice in the future. Bone bioengineering strategies are created through the association of inductive factors, stem cells and biomaterial matrices. The objective of this study was to measure the bone formation in an alveolar osseous defect animal model using different bone tissue engineering strategies and to compare them with the autogenous bone transfer. METHODS: Alveolar circular bone defects measuring 5 mm of diameter were created in 28 Wistar rats. Four alternative modalities were compared to the traditional modality of autogenous bone transfer: In group 1 (traditional modality), defects were repaired with autogenous bone graft from the calvarial region; in groups 2 and 3, defects were repaired using bovine bone mineral free of cells and loaded with undifferentiated mesenchymal stem cells, respectively; in groups 4 and 5, defects were repaired with - tricalcium phosphate free of cells and loaded with mesenchymal stem cells, respectively. Groups 2, 3, 4 and 5 were compared with group 1. Bone formation was evaluated by computed tomography imaging, and by histomorphometry at 8 weeks after surgery. Radiologically, a score system was developed to determine the bone distribution measured by computed tomography imaging in five animals of each group. Statistical significance was determined as p<0.05 by the non-parametric statistical hypothesis test called the Mann-Whitney test. RESULTS: Histomorphometrically, group 1 showed 60.27% ± 16.13% of bone in the defect (n=7). Groups 2 and 3 showed respectively, 23.02% ± 8.6% (n=3) (p=0.01) and 38.35% ± 19.59% (n=5) (p=0.06) of bone in the defect. Groups 4 and 5 showed respectively, 51.48% ± 11.7% (n=3) (p=0.30) and 61.80% ± 2.14% (n=6) (p=0.88) of bone in the defect. Radiologically, groups 1, 2, 3, 4 and 5 scored on average 2, 1.4, 1.5, 1.6, 1.8, respectively. CONCLUSION: The group of animals whose alveolar osseous defects Summary were repaired with -tricalcium phosphate and mesenchymal stem cells showed the most similar bone formation to the group whose alveolar osseous defects were repaired with autogenous bone

Neste trabalho verificou-se o potencial terapêutico de células tronco murinas mesenquimais e embrionárias no tratamento da Distrofia Muscular de Duchenne. A sua capacidade de regenerar o músculo distrófico foi averiguada in vitro e in vivo, no modelo murino mdx. Em cultura, constatou-se que as células tronco mesenquimais de medula óssea (MSC) têm a capacidade de fusão e diferenciação espontânea em fibras musculares, independentemente de estímulo de outros tipos celulares ou de indução in vitro à miogênese. Quando injetadas no músculo afetado, células MSC expressando a proteína GFP só foram detectadas, no máximo, após 3 dias, sugerindo a sua eliminação após este período. Quando injetadas via sistêmica, as células MSC eGFP não foram direcionadas corretamente para o músculo distrófico. Estas células também foram eliminadas em camundongos selvagens da linhagem FVB, sugerindo que a proteína GFP poderia ser a responsável pela sua rejeição. As células tronco embrionárias (ES-linhagem 129) também demonstraram capacidade miogênica in vitro. Quando injetadas no músculo de camundongos mdx imunossuprimidos, provocaram reação inflamatória muito intensa e grande aumento local da massa muscular. Essa nova estrutura, no entanto, não continha células com características de fibras musculares. Nos camundongos injetados sistemicamente, as células ES permaneceram na região de sua introdução na cauda, demonstrando pouca distribuição e disseminação para o músculo lesado. A análise de marcadores polimórficos específicos da linhagem das células ES permitiu a identificação das mesmas na concentração mínima de 30%. Este resultado indica que a hipertrofia observada no músculo do camundongo injetado foi causada, pelo menos, por esta quantidade de células. Estudos adicionais são necessários para aumentar o potencial terapêutico destas células em modelos distróficos murinos. / We investigated therapeutic potential of murine mesenchymal and embryonic stem cells in the treatment of Duchenne Muscular Dystrophy. Their ability to regenerate the dystrophic muscle was studied in vitro and in vivo, in the murine mdx model. In culture, bone marrow mesenchymal stem cells (MSC) showed the capacity to fuse and to spontaneously differentiate into muscle fibers, independently of stimulation by contact with other cell types or exposure to miogenic factors in vitro. When injected into affected muscles, MSC expressing GFP protein were detected after 3 days at most, suggesting their elimination after this period. When injected in the systemic via, MSC eGFP were not properly directed to the dystrophic muscle. These cells were also eliminated in the wild strain FVB mice, suggesting that GFP protein could be responsible for this rejection. The embryonic stem cells (ES-line 129) also showed a good miogenic capacity in vitro. When injected into the muscle of immunosuppressed mdx mice, they caused very intense inflammatory reaction and a significant increase of its leg muscle mass. However, this new tissue did not contain cells with muscle fibers characteristics. In systemically injected mice, the ES cells remained in the region of introduction in the tail, showing poor distribution and dissemination into the injured muscle. Specific ES cell line polymorphic markers analysis identified a concentration of at least 30%. This result indicates that muscle hypertrophy observed in injected mice was caused by at least this amount of cells. Additional studies are necessary to increase the therapeutic potential of these cells in dystrophic murine models.

Biobanco é definido como uma coleção organizada de material biológico humano e informações associadas, coletado e armazenado para fins de pesquisa, conforme regulamento, sob responsabilidade institucional, sem fins comerciais. Abordam ainda a saúde humana de uma maneira multidisciplinar, combinando a biologia e a medicina com tecnologias informativas de bioinformática e computação. Para um bom planejamento de um biobanco, deve-se ter conhecimento dos tipos de bioespécimes que serão armazenados, as condições necessárias de manuseio e armazenamento, bem como o período de permanência e possível aumento da quantidade de amostras. Por isso, este trabalho objetivou a criação de protocolos padrões para a elaboração de um Biobanco. Para isso, foram desenvolvidos protocolos específicos, os quais foram realizados de acordo o Guia de Boas Práticas, considerado o mais atual e de grande impacto, desenvolvido pela ISBER (Sociedade Internacional de Repositórios Biológicos e Ambientais). Também foram utilizadas a Portaria número 2.201, de 14 de setembro de 2011, a Resolução CNS 441 de 2011 e a Resolução RDC Nº 306, de 7 de Dezembro de 2004, todas do Ministério da Saúde. Os protocolos foram divididos em: 1) Informações Pessoais; 2) Bancos de Dados, 3) Coleta Geral de Amostras; 4) Quadro de Funcionários; 5) Instalações; 6) Segurança; 7) Leis e Ética; 8) Descarte de Materiais e 9) Elaboração da documentação para envio ao CONEP. Portanto, espera-se através deste trabalho, trazer as melhores práticas para a implementação e desenvolvimento de biobancos, visando melhorias na pesquisa e na ciência no quesito tecnológico e laboratorial, com base nos regulamentos éticos e legais. / Biobank is defined as an organized collection of human biological material and associated information, collected and stored for research purposes, according to regulation, under institutional responsibility, with no commercial purposes. It also addresses human health in a multidisciplinary way, combining biology and medicine with informative bioinformatics and computing technologies. For a suitable planning it must be aware of the types of biospecimens that will be stored, the appropriate conditions of handling and storage, as well as the period of permanence and possible increase of the quantity of samples. Therefore, this study aimed to the creation of standard protocols for the elaboration of a Biobank. For this, specific protocols have been developed, which were carried out according to the Best Practices Guide, considered the most updated and of great impact, such as the protocol developed by ISBER (International Society of Biological and Environmental Repositories). Also, was used an Administrative Order number 2.201, dated September 14, 2011, Resolution CNS 441 of 2011 and Resolution RDC No. 306, of December 7, 2004, all of the Ministry of Health. The protocols were divided into: 1) Personal Information; 2) Databases, 3) General Collection; 4) Staff Regulations; 5) Installation; 6) Security; 7) Laws and Ethics; 8) Materials Disposal and 9) Preparation of documentation for sending to CONEP. Therefore, it is expected through this work, to bring the best practices for implementation and development of biobanks, aiming for improvements in research and science regarding technological and laboratory aspects, based on ethical and legal regulations.

O transplante autólogo de células-tronco hematopoéticas (TACTH) é efetivo para o tratamento da esclerose sistêmica (ES), com controle do acometimento pulmonar, e melhora da fibrose cutânea, da qualidade de vida e aumento da sobrevida global, quando comparado a pacientes não transplantados. Neste tratamento, utiliza-se ciclofosfamida em altas doses, uma droga imunossupressora associada a cardiotoxicidade, potencialmente fatal. A avaliação de potenciais fatores de risco e monitorização clínica durante o procedimento podem contribuir para identificar precocemente a lesão cardíaca aguda e, assim, melhorar o desfecho clínico do paciente. O objetivo deste estudo foi identificar a ocorrência de disfunções cardíacas e avaliar os fatores de risco clínicos e laboratoriais para o desenvolvimento de toxicidade cardíaca aguda induzida pela ciclofosfamida, em pacientes com ES submetidos ao TACTH. Trata-se de um estudo longitudinal e prospectivo, conduzido no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, em pacientes com ES com idade superior a 18 anos, no período de novembro de 2016 a maio de 2018, aprovado por Comitê de Ética em Pesquisa. Os pacientes foram avaliados quanto aos dados clínicos e laboratoriais, incluindo dosagem de peptídeo natriurético, no período pré, durante e 6 meses após o transplante. Foram incluídas 16 mulheres com ES, das quais uma optou por descontinuar a participação no estudo, tendo seus dados excluídos. Nenhum dos participantes apresentava história de uso de substâncias psicoativas ou diagnóstico de diabetes mellitus. Uma paciente era tabagista passiva e uma era tabagista ativa há 24 anos, abstinente desde há três meses antes do início do transplante. Duas pacientes eram hipertensas, controladas com medicamentos anti-hipertensivos. Durante o transplante, 7 (46,7%) pacientes apresentaram alterações cardíacas associadas à ciclofosfamida. As pacientes apresentaram taquicardia, ganho ponderal, aumento de pressão venosa central e dispneia iniciados em menos de 24 horas e até 4 dias após o término da infusão da dose total de ciclofosfamida (200mg/kg) do transplante. Em três, de cinco pacientes submetidas a ecocardiografia, foram detectadas alterações sugestivas de disfunção cardíaca, corroborando os achados clínicos. Uma paciente evoluiu com choque refratário e posterior óbito por falência múltipla de órgãos. Uma paciente necessitou de pericardiocentese de alívio e, nos demais, o manejo com medicações reverteu as alterações clínicas. A dosagem dos níveis séricos de peptídeo natriurético mostrouse mais elevada (p<0,0005) nos pacientes que apresentaram sinais de toxicidade cardíaca. Concluímos que as avaliações clínicas sistematizadas por equipe de enfermagem permitiram a detecção de disfunções cardíacas pós-infusão de altas doses de ciclofosfamida, quadros retrospectivamente comprovados por elevação dos níveis sérico de peptídeo natriurético. O número reduzido de participantes não permitiu fazer análises estatísticas preditoras de cardiotoxicidade e foi uma limitação do estudo. Futuramente, objetivamos aumentar o número de pacientes do estudo e identificar marcadores preditivos de toxicidade cardíaca antes e durante o transplante / Autologous hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) is effective for the treatment of systemic sclerosis (SSc), with stabilization of pulmonary involvement and improvement of cutaneous fibrosis, quality of life and overall survival, when compared to non-transplanted patients. Transplant includes high dose cyclophosphamide, an immunosuppressive drug associated with potentially fatal cardiotoxicity. The evaluation of potential risk factors and clinical monitoring during the procedure may contribute to early identification of acute cardiac injury and thus improve the patient\'s clinical outcome. The aim of this study was to detect cardiac dysfunctions and to evaluate clinical and laboratory risk factors for the development of acute cardiac toxicity induced by cyclophosphamide in SSc patients submitted to AHSCT. This is a longitudinal and prospective study, conducted in the University Hospital of the Ribeirão Preto Medical School (Brazil), in patients with SSc, older than 18 years of age, from November 2016 to May 2018. The protocol has been approved by the Institutional Research Ethics Committee and all patients signed informed consent. Patients were evaluated for clinical and laboratory data, including natriuretic peptide dosage before, during and at the 6 months post-transplant time point Sixteen women with SSc were included, one of whom chose to discontinue participation in the study, having their data excluded. None of the participants had a history of psychoactive substance abuse or a diagnosis of diabetes mellitus. One patient was a passive smoker and another, an active smoker for 24 years, not smoking in the three months before transplantation. Two patients had their blood pressure controlled with antihypertensive drugs. During transplantation, 7 (46.7%) patients had cardiac changes associated with cyclophosphamide. The patients presented tachycardia, weight gain, increased central venous pressure and dyspnoea initiated in less than 24 hours and up to 4 days after the end of the infusion of the total cyclophosphamide dose (200mg / kg) of the transplant. In three of five patients investigated by echocardiography, alterations suggestive of cardiac dysfunction were detected, corroborating the clinical findings of cardiac dysfunction. One patient evolved with refractory shock and subsequent death due to multiple organ failure. One patient required pericardiocentesis due to cardiac tamponade and, in the others, management with medications reversed the clinical alterations. Serum natriuretic peptide levels were higher (p<0,0005) in the patients with than in the patients without any signs of cardiac toxicity. Clinical evaluations by the nursing staff allowed the detection of cardiac dysfunctions after infusion of high dose cyclophosphamide, retrospectively confirmed by elevation of serum levels of natriuretic peptide. The reduced number of participants did not allow for statistical analyzes to predict cardiotoxicity and was a limitation of the study. In the future, we aim to increase the number of patients in the study and to identify predictive markers of cardiotoxicity before and during transplant procedure

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-15Bitstream added on 2014-08-13T18:00:30Z : No. of bitstreams: 1 000758631_20141230.pdf: 57514 bytes, checksum: 99bd69df8cf22105bae780c96122659b (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:47Z: 000758631_20141230.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:46Z : No. of bitstreams: 1 000758631.pdf: 910156 bytes, checksum: 925087047ed2f39bbadbcd075a976c4a (MD5) / Estudos com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão em crescente avanço, baseando-se em evidências das suas propriedades imunomodulatórias, anti-inflamatórias e de regeneração dos tecidos. Porém, ainda não há consenso sobre qual a melhor fonte de obtenção das CTMs de equinos. O objetivo deste estudo foi avaliar o cultivo, a caracterização imunofenotípica e o potencial de diferenciação de CTMs provenientes da medula óssea (CTM-MO), tecido adiposo (CTM-TA) e cordão umbilical (CTM-CU) de equinos, a fim de se definir qual é a melhor fonte para compor um banco de células visando a terapia alogênica. As CTM-MO, CTM-TA e CTM-CU foram cultivadas in vitro e avaliadas quanto aos marcadores CD105, CD44, CD34, CD90 e MHC-II através da citometria de fluxo, e o MHC-II também pelo método de imunocitoquímica, Adicionalmente, as CTMs foram avaliadas in vitro quanto ao potencial de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica. A coleta e cultivo das CTM-MO, CTM-TA e CTM-CU se mostraram viáveis, e foram capazes de se diferenciar em linhagem osteogênica, adipogênica e condrogênica. As CTMs revelaram elevada expressão dos marcadores CD105, CD44 e CD90 e baixa ou ausência de expressão dos marcadores MHC-II e CD34. O MHC-II não foi expressado pela técnica de imunocitoquímica em nenhuma das CTMs estudadas. A MO, TA e CU são fontes viáveis para obtenção de CTMs de equinos, sendo confirmada as características imunofenotípicas e de multipotencialidade. No entanto, as CTM-MO e CTM-TA apresentaram melhor caracterização imunofenotípica, in vitro, quando comparadas com as CTM-CU / Studies with mesenchymal stem cells (MSCs) are increasing due to their immunomodulatory and anti-inflammatory properties, and tissue regeneration. However, there is still no agreement about the best source of equine MSCs. The aim of this study was to evaluate cell culture, immunophenotypic characterization and potential of differentiation of equine MSCs from bone marrow (BM-MSC), adipose tissue (AT-MSC) and umbilical cord (UC-MSC), in order to define which is the best source for a cell bank aiming allogeneic therapy. The BM-MSC, AT-MSC and UC-MSC were cultured in vitro and assessed for CD105, CD44, CD34, CD90 and MHC-II markers by flow cytometry, and MHC-II also by immunocytochemistry. Additionally, MSCs were evaluated in vitro for osteogenic, adipogenic and chondrogenic potential. The harvest procedure and cell culture of BM-MSC, AT-MSC and UC-MSC were feasible and the MSCs were able to differentiate into osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. MSCs showed high expression for CD105, CD44 and CD90 and low or negative expression for CD34 and MHC-II. The MHC-II was not expressed by immunocytochemistry technique in any of the MSCs studied. The BM, AT and UC are feasible sources for harvesting equine MSCs, and their immunophenotypic and multipotentiality characteristics were confirmed. However, BM-MSC and AT-MSC showed better in vitro immunophenotypic characterization when compared to UC-MSC