Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000407116-Texto+Completo-0.pdf: 4086224 bytes, checksum: 0d63db77cbcec70fa4573faaf2637eea (MD5) Previous issue date: 2008 / The stem cells have potential application to tissue regeneration or tissue engineering. Due to ethical and legal aspects alternative sources are being considered. Several researchers concentrate the studies on adult stem cells, mainly those derived of bone marrow stromal cells. Nevertheless, recent data proved that adult stem cells can also be isolated from adipose tissue (PLA) obtained by liposuction. These cells are able to differentiate into a diversity of mesodermal tissue and among them, bone tissue. The osteoinduction process depends on several factors and consists of mesenquimal stem cells differentiating into osteoprogenitor cells. Frequently, the osteoinduction culture media contains recombinant human bone morphogenetic protein (rhBMP-4) or DAG (dexamethasone, ascorbate acid and -glycerophosphate). This study aims to evaluate the adipose tissue derived stem cells adhesion, proliferation, differentiation into osteoblasts in vitro using either (rhBMP-4) or DAG. Adult stem cells derived from adipose tissue were obtained from three human subjects by liposuction realized by Plastic Surgery Service (Hospital São Lucas- PUCRS). After tissue dissociation by collagenase treatment, the cells were quantified, characterized with regard to cell membrane markers, and cultured in media containing rhBMP-4 or DAG, and control (only standard medium). The cultures were evaluated in 7, 14 and 21 days after induction. The expression of alkaline phosphate, osteopontin and osteocalcin were evaluated by PCR standard technique in cultured cells derived from adipose tissue obtained from two subjects. The expression of osteopontin and osteocalcin in one culture was determined by Real Time PCR technique. Moreover, alkaline phosphatase and von Kossa staining was performed to demonstrate the differentiation into mature osteoblasts by matrix mineralization. The average number of adult stem cells derived from adipose tissue was 1. 2x107/mL. The frequency of CD34 and CD117 markers were similar, 0. 73% and 0. 72% respectively. The frequency of CD105 was higher in the three samples. This study showed that the adult stem cells derived from adipose tissue cultivated or not in osteogenic media adheres and proliferates. Also, we demonstrate the presence of mature osteoblasts when cells were cultured in the presence of medium containing rhBMP-4 or DAG by the expression of osteogenic lineage markers such as alkaline phosphatase, osteopontin, and osteocalcin. Cells cultivated in media containing DAG have also shown deposition of bone matrix protein. / A aplicação de diferentes células-tronco na regeneração de tecidos lesionados ou na engenharia de tecidos tem recebido grande atenção. Devido às dificuldades práticas de obtenção de células-tronco embrionárias e considerando os aspectos éticos e legais, inúmeros pesquisadores têm realizado seus estudos com células-tronco adultas, principalmente aquelas derivadas do estroma da medula óssea. No entanto, estudos recentes comprovam que essa população celular também pode ser isolada do tecido adiposo (PLA) obtida através de lipoaspiração. Esse tipo de célula tem a característica de se diferenciar numa variedade de tecidos mesodérmicos, dentre eles o tecido ósseo. O processo de osteoindução é influenciado por vários fatores e consiste na indução de células-tronco mesenquimais indiferenciadas a formarem células osteoprogenitoras. Os fatores osteoindutores utilizados mais freqüentemente são a rhBMP-4 ou DAG (Dexametasona/ácido ascórbico/b-glicerolfosfato). Este estudo teve como objetivo avaliar a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo quando cultivadas em meio indutor específico, contendo rhBMP-4 ou DAG. Células-tronco adultas foram obtidas do tecido adiposo de três pacientes pela técnica de lipossucção, realizada pelo Serviço de Cirurgia Plástica do Hospital São Lucas da PUCRS. Após tratamento com colagenase para dissociação do tecido, as células foram quantificadas, caracterizadas com relação aos marcadores de membrana celular e cultivadas em meio contendo rhBMP-4, DAG ou convencional (controle). As culturas foram avaliadas no 7º, 14º e 21º dia após indução em meio específico.A expressão da fosfatase alcalina, osteopontina e osteocalcina foram avaliadas pela técnica de RT-PCR nas culturas de células derivadas do tecido adiposo de dois pacientes. A expressão das proteínas osteopontina e osteocalcina foi determinada pela técnica do PCR em tempo real em uma cultura de células derivada de um paciente. Igualmente, nesta mesma cultura foram realizada colorações para fosfatase alcalina e von Kossa para demonstrar a diferenciação das células-tronco mesenquimais (MSC) em células osteoblásticas pela detecção da transformação osteoblástica e mineralização da matriz. O número médio de células tronco adultas derivadas de tecido adiposo foi de 1,2 x 107/mL. A média da freqüência de expressão dos marcadores CD34 e CD117 foram semelhantes, 0,73% e 0,72%, respectivamente, embora tenha ocorrido uma grande variação entre as amostras. Para os marcadores CD45 e CD105 a média das freqüências foram de 1,17% e 1,57%, respectivamente. A freqüência do CD105 foi mais elevada nas três amostras. Este estudo mostrou que as células-tronco adultas derivadas de tecido adiposo cultivadas, ou não em meio osteogênico aderem e proliferam em cultura, sofrem osteoindução e expressam proteínas marcadoras da linhagem osteogênica como a fosfatase alcalina, osteocalcina e osteopontina. Células-tronco adultas derivadas de tecido adiposo são capazes de realizar a deposição de matriz mineralizada somente quando cultivadas em meio contendo DAG.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000422850-Texto+Completo-0.pdf: 2953890 bytes, checksum: a9a608f4e09d0de94b994f35e62d2827 (MD5) Previous issue date: 2010 / Introduction: There is growing evidence that stem cell transplantation may be an effective therapy to treat liver disease. With systemic delivery of stem cells, a significant proportion of cells are retained in the lung and spleen. Therefore, ultrasound-guided percutaneous portal vein puncture has been tested as an alternative method in rat models. The objective of the present study was to evaluate the feasibility of percutaneous portal vein puncture and the efficacy of intraportal transplantation of bone marrow mononuclear cells in a rat model of cirrhosis. Method: To carry out the experiment, 24 female Wistar rats with cirrhosis induced by bile duct ligation were used. Fourteen days after ligation, the animals were randomized and then shaved and sedated for the procedure with Doppler ultrasound to facilitate identification of the portal vein. The mononuclear fraction obtained from the bone marrow of male rat donors was infused with a 30-gauge needle through direct abdominal puncture using a transhepatic route running along the liver hilum. On the 28th experimental day, the rats were euthanized. Liver repopulation with stem cells was evaluated through immunohistochemical detection of y chromosomecontaining cells. The number of cells was determined using flow cytometry. Results: The results obtained with ultrasound-guided delivery of stem cells directly into the portal vein show that of 24 animals studied, seven (29. 2%) died in the first 24 h. Significant liver repopulation with donor stem cells was observed in 77. 8% of the rats studied, with an efficacy of 31. 5%. Conclusion: The performance of percutaneous portal vein puncture was simple and enabled visualization of the material inside the portal system during the procedure, although approximately one third of the animals died during the observation period. The delivery of mononuclear stem cells directly to the portal vein of rats with cirrhosis enabled the implantation, fusion and/or phagocytosis of donor cells in the liver of recipients, suggesting therapeutic potential to treat cirrhosis in humans. / Introdução: Evidências crescentes têm demonstrado que o transplante de células-tronco pode tornar-se uma terapia eficaz em hepatopatias. A injeção sistêmica de células-tronco tem demonstrado que um percentual significativo dessas células fica retido no pulmão e no baço. Assim, a punção percutânea da veia porta orientada por ultrassonografia com Doppler colorido, em ratos, para administração de células-tronco apresenta-se como uma alternativa. O objetivo deste estudo foi avaliar a exequibilidade da técnica de punção percutânea da veia porta e a eficácia do transplante intraportal de células mononucleares de medula óssea em ratos com cirrose induzida. Metodologia: Para a execução do experimento, foram selecionados 24 ratos fêmeas da raça Wistar com cirrose induzida através da ligadura do ducto biliar. Quatorze dias após a ligadura, os animais foram preparados com tricotomia abdominal, sedação e orientação do procedimento por ecografia abdominal com Doppler colorido para facilitar a localização da veia porta. A fração mononuclear obtida da medula óssea de ratos machos doadores foi infundida utilizando uma agulha de gauge 30, com punção direta pela parede abdominal por via transhepática até a veia porta, junto do hilo do fígado. No 28º dia do experimento, os ratos foram sacrificados e avaliou-se o repovoamento hepático de células-tronco através da análise imunohistoquímica das células portadoras do cromossoma Y e a quantidade de células através da citometria de fluxo. Resultados: Os resultados obtidos através da infusão de células-tronco diretamente na veia porta, orientada por ultrassonografia com Doppler colorido, evidenciaram que, dos 24 ratos estudados, sete animais (29,2%) morreram nas primeiras 24 horas. Houve um significativo repovoamento hepático com células da medula óssea do doador em 77,8% dos ratos estudados e uma eficácia de 31,5%. Conclusão: A técnica de punção percutânea da veia porta mostrou-se de fácil execução e com visualização do material no interior do sistema portal durante o procedimento, embora aproximadamente 1/3 dos animais tenham morrido no período relacionado ao procedimento. A infusão da fração mononuclear da medula óssea diretamente na veia porta de ratos cirróticos permitiu a nidação, fusão e/ou fagocitose das células do animal doador no fígado do receptor, sugerindo potencial terapêutico no tratamento da cirrose humana.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438174-Texto+Completo-0.pdf: 7206240 bytes, checksum: f165d17261aed0c4f2179085d14a7f93 (MD5) Previous issue date: 2012 / Considering the high incidence of epilepsy (2-3% of world population) and the high rate of resistance to treatment with available antiepileptic drugs (20-30%) it is essential to be considered and made available new therapeutic options. In epilepsy, like other central nervous system disorders, there is loss of neuronal subpopulations, which represents an important consequence in the pathogenesis of the disease. Therapeutic strategies involving the transplantation of stem cells and gene therapy have been studied in experimental models of epilepsy. The genetic model of EL/Suz epilepsy mouse highlights among the experimental models. In this model, seizures originate close to the parietal lobe and spread to other brain regions such as the hippocampus. Some of the behavioral manifestations that they show are the manipulations of seizures associated with handling and vestibular stimulation, and this behavior is exacerbated by the increase with age of the animal. In order to exploit this potential, our study was to evaluate the effect of administration of bone marrow mononuclear cells in the treatment of genetics epilepsy by peripheral injection of these C57BL/6-EGFP cells in EL/Suz mice. The study was distributed in four groups: I) EL+Control (C), II) EL+Saline (S); III) EL+Bone Marrow Mononuclear Cells Inactivated (BMMCI), IV) EL+Bone Marrow Mononuclear Cells (BMMC). The animals were stimulated from birth with direct observation of behavioral manifestations from 30 days of life. Observation and stimulation of the animals were held once a week with the movement up and down the animal and commuting (goaround) in the four directions. To verify the presence of BMMC transplanted in the hippocampus and other brain structures, other agencies use the technique of polymerase chain reaction (PCR). The observation of the pro-and post-transplant groups was used as a parameter to infer that the transplanted mononuclear cells were able to migrate to the nerve tissue and reduce the number of seizures. Counting the number of seizures was evaluated in the pre and post-transplant record electroencephalographic (EEG) in groups EL+Saline and EL+BMMC for intensity control of seizures. Electrophysiological recordings in brain slices were done to evaluate the synaptic response using the paradigm of paired pulse stimulation. Our results show a gradual reduction in seizure frequency over a period of 240 days reaching 50%. To compare our findings to reduce crises we study the brain electrical activity by recording EEG in which we observed a higher intensity of ictal phase in EL+Saline group compared with the group EL+BMMC. We observed that the animals in the EL+Saline showed a significantly higher neuronal excitability compared to the control group and EL+BMMC proving the therapeutic effect of BMC. In the study of stimulus condition we saw that the three groups were facilitated induction of longterm potentiation (LTP) with a greater amplitude of excitatory postsynaptic potential in the group EL+Saline. Based on data obtained in this study, we conclude that the mononuclear bone marrow may have therapeutic effect on epilepsy genetics in the mouse model of EL/Suz. / Considerando-se a elevada incidência da epilepsia (2-3% da população mundial) e o alto índice de refratariedade ao tratamento com fármacos antiepilépticos disponíveis (20-30%) torna-se fundamental que sejam estudadas e disponibilizadas novas alternativas terapêuticas. Na epilepsia, a exemplo de outros distúrbios do sistema nervoso central, há perda de sub-populações neuronais, o que representa uma consequência importante na patogenia da doença. Estratégias terapêuticas envolvendo o transplante de células-tronco e terapia gênica começam a ser estudadas em modelos experimentais de epilepsia. Entre os modelos experimentais destaca-se o modelo de epilepsia genética do camundongo EL/Suz. Neste modelo, as crises se originam próximos ao lobo parietal e se propagam para as outras regiões do cérebro como o hipocampo. Algumas das manifestações comportamentais que os animais apresentam são as manipulações de crises associadas à estimulação vestibular, sendo que este comportamento é exacerbado com o aumento com a idade do animal. Visando explorar este potencial, nosso estudo se propôs a verificar o efeito da administração de células mononucleares da medula óssea no tratamento da epilepsia genética através da injeção periférica destas células (C57BL/6-EGFP) em camundongos EL/Suz. O estudo foi distribuído em 4 grupos: I) EL+Controle (C); II) EL+Salina (S); III) EL+Células-Inativadas (CI); IV) EL+Células Mononucleares (CMMO). Os animais foram estimulados desde o nascimento com observação direta das manifestações comportamentais a partir de 30 dias de vida. A observação e a estimulação dos animais foram realizadas uma vez por semana com o movimento de subida e descida do animal e movimentos pendulares (ir-vir) nas quatro direções. Para verificar a presença de CMMO transplantadas no hipocampo bem como em outras estruturas encefálicas e outros órgãos utilizamos a técnica da polymerase chain reaction (PCR). A observação dos grupos pré e pós-transplante foi usada como parâmetro para que se infira que as células mononucleares transplantadas foram capazes de migrar para o tecido nervoso e diminuir o número de crises convulsivas. A contagem do número de crises foi avaliada no período pré e pós-transplante com registro eletroencefalográfico (EEG) nos grupos EL+Salina e EL+CMMO para controle de intensidade das crises. Os registros eletrofisiológicos in vitro avaliaram a resposta sináptica utilizando o paradigma de estimulação por pulso pareado em fatias de cérebro. Nossos resultados mostram uma redução gradual da frequência de crises num período de 240 dias chegando a 50%. Para comparar nossos achados de redução de crises fizemos estudo da atividade elétrica cerebral através do registro EEG onde observamos nos traçados eletroencefalográficos uma intensidade maior da fase ictal no grupo EL+Salina comparado com o grupo EL+CMMO. Observamos que os animais do grupo EL+Salina apresentaram uma excitabilidade neuronal significamente maior comparado ao grupo controle e o grupo EL+CMMO comprovando o efeito terapêutico das CMMO. No estudo de estímulo condicionante podemos observar que os três grupos apresentaram indução facilitada de potenciação de longa duração (LTP) com uma maior amplitude do potencial póssináptico excitatório no grupo EL+Salina. Com base nos dados obtidos no presente estudo, concluímos que as células mononucleares da medula óssea podem ter efeito terapêutico na epilepsia genética no modelo do camundongo EL/Suz.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418376-Texto+Completo-0.pdf: 1759547 bytes, checksum: abe3efb07dc975e78ecba705690c7f76 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: The only curative treatment currently available for cirrhotic patients is liver transplantation. However, there are limitations with this treatment, making necessary the development of new methods. Acumulating evidence indicates that stem cell transplantation is therapeutically effective in chronic liver diseases. The objective of this study was to evaluate the potential of intraportal transplantation of bone marrow mononuclear cells in an induced cirrhosis model in rats. Methods: Twenty-four female Wistar rats, 14 days after ligation of the common bile duct were randomized to perform a transplantation of 1x107 mononuclear cells from bone marrow obtained from male Wistar rats or saline infusion by the portal route, guided by echography. On the 28th day of the experiment, the rats were sacrificed and serum albumin, bilirubin and aminotransferases were quantified. The area of hepatic fibrosis was determined by picrosirius red staining, and the identification of cells derived from male bone marrow was performed by immunohistochemical staining with anti-Sox 18 antibody. Results: After transplantation, a strong hepatic repopulation with cells from the donor bone marrow was detected in 75% of the treated rats. There was a significant reduction in the area of fibrosis in the cell therapy group (P=0. 036), without alteration in the biochemical parameters. However, when evaluating the group showing incorporation of bone marrow cells, besides a reduction in fibrosis (P=0. 043), there was an increase in serum albumin levels (P=0. 008).Conclusion: Intraportal transplantation of mononuclear bone marrow cells can be an effective treatment for hepatic repopulation, reduction of fibrosis, and increase in serum albumin, making this a potential alternative therapy for human cirrhosis. / Introdução: O único tratamento curativo disponível atualmente para pacientes cirróticos é o transplante hepático. Existem, entretanto, limitações na aplicação desta terapêutica, tornando necessário o desenvolvimento de novos métodos. Evidências crescentes têm demonstrado que o transplante de células-tronco pode tornar-se uma terapia eficaz em hepatopatias crônicas. O objetivo deste estudo é avaliar o potencial do transplante intraportal de células mononucleares de medula óssea em modelo de cirrose induzida em ratos. Metodologia: Vinte e quatro ratos Wistar fêmeas, quatorze dias após a ligadura de ducto biliar comum, foram randomizados para realização de transplante de 1x107 células mononucleares de medula óssea de ratos Wistar machos ou infusão salina através da veia porta, orientada por ecografia. No 28º dia do experimento os ratos foram sacrificados, com quantificação de albumina, bilirrubinas e aminotransferases séricas, além da aferição quantitativa da área de fibrose hepática através do picrossirius e identificação das células derivadas da medula óssea com a realização de imunohistoquímica com Anti-Sox 18. Resultados: Após o transplante verificou-se forte repovoamento hepático com células da medula óssea do doador em 75% dos ratos. Houve redução significativa da área de fibrose no grupo da terapia celular (P=0,036), sem alteração nos parâmetros bioquímicos. Quando, entretanto, avaliaram-se os grupos pela incorporação de células da medula óssea, além da redução da fibrose (P=0,043) houve aumento dos níveis séricos de albumina (P=0,008) no grupo que apresentou repopulação. Conclusão: O transplante intraportal de células mononucleares de medula óssea pode ser uma terapêutica eficaz para repopulação hepática, redução da fibrose e aumento da albumina sérica, podendo torna-se alternativa para o tratamento de cirrose em humanos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000419004-Texto+Completo-0.pdf: 14090173 bytes, checksum: d314da6ac070fb61b8d51b52a825e2a1 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: Operation meets all its goals when, in addition to achieving all the other results, there is good skin cicatrization, especially in terms of plastic surgeries. Studies conducted with fetuses that underwent in utero surgery have shown that, after birth, scars were minimal or imperceptible. There is evidence that fetal cicatrization has less inflammation and reduced accumulation of collagen compared to the adult process. These facts create new possibilities of dealing with skin lesions in adults. Plastic surgeons in particular have focused their attention on skin cicatrization. During surgical procedures, plastic surgeons have employed techniques and therapies or cosmetic measures with the purpose of making scars less perceptible. Patients and Methods: This is a randomized prospective clinical trial. The objective of this study is to assess skin cicatrization after implantation of adult stem cells from the adipose tissue. Eighteen patients of the Plastic Surgery Service of HSL-PUCRS were selected according to inclusion and exclusion criteria. The stem cells were autologous, extracted from the adipose tissue of the infraumbilical region before abdominoplasty. The adult stem cells extracted from the adipose tissue before skin synthesis were infiltrated into the dermis of the surgery wound in the suprapubic region. Postoperative assessment was carried out by three physicians blinded to the sides that received stem cells and by patients’ self-assessment using the scale designed by Draaijers. Photometric assessment was also performed by means of digital photography. Results: Considering a group of 18 operated patients, 17 had excellent or good results (94%) and 1 that had suture dehiscence was considered bad result (5,5%). 5 other patients were excluded, as they left the research (27%), so 12 remained (66. 6%) until the end. No significant statistic difference was found during the comparison of the photometric aspects. When patients’ evaluations were compared, 6 aspects were considered (pain, itching, color, toughness, thickness and irregularity). Taking into consideration all the evaluation events during the observation period, 42 measurement points were obtained. For these points, a significance level of P=0. 12 was achieved, favoring the intervention of stem cells. According to doctors in charge of observing the research, 5 aspects were considered (vascularization, pigmentation, thickness, contracture and elasticity) When the distribution of the evaluations was considered during the observation period, 35 measurement points were obtained. For these points, a significance level of P=0. 003 was achieved, favoring the intervention of stem cells. Considering all the evaluations done by doctors, patients and the photometric evaluation, a significant statistic difference was found favoring the implant with adult stem cells of the adipose tissue, p<0. 001.Conclusion: After the adult stem cells implant derived from the adipose tissue, the results of the skin scar resulting from the abdominoplasty post-operative wound are satisfactory. / Introdução: A cirurgia atingirá todos os seus objetivos se, além dos demais resultados, a cicatriz da pele esteja bem, especialmente nas cirurgias plásticas. Estudos feitos em fetos submetidos a cirurgias in utero mostraram que, depois do nascimento, as cicatrizes eram mínimas ou imperceptíveis. Há evidências de que ocorrem menor inflamação e diminuição do acúmulo de colágeno na cicatrização fetal em comparação com o adulto. Esses fatos instigam as possibilidades de manipular as soluções de continuidade da pele no adulto. Cirurgiões plásticos, em especial, têm direcionado sua atenção para a cicatrização cutânea. Em suas intervenções, usam procedimentos e terapias ou medidas cosméticas para tornar as cicatrizes menos perceptíveis. Pacientes e Métodos: Trata-se de um estudo controlado randomizado com o objetivo de avaliar a cicatrização da pele após implante de células-tronco adultas de tecido adiposo. Foram selecionadas 18 pacientes do Serviço de Cirurgia Plástica do HSL-PUCRS, considerando-se critérios de inclusão e exclusão. As células-tronco utilizadas eram autólogas, extraídas do tecido adiposo da região infraumbilical antes da realização de abdominoplastia nas pacientes selecionadas. As células-tronco adultas extraídas de tecido adiposo antes da síntese da pele foram infiltradas na derme da ferida operatória, na região suprapúbica. A avaliação, no pós-operatório, foi realizada com a escala de Draaijers por três avaliadores médicos cegados e pelas próprias pacientes, por autoavaliação. Foi também, realizada avaliação fotométrica por fotografia digital. Resultados: Das 18 pacientes operadas 17 tiveram resultados excelentes ou bons (94%) e 1 que teve deiscência de sutura foi considerado mau resultado (5,5%). Outras 5 pacientes foram excluídas por abandono no decorrer da pesquisa(27%), restando 12 (66,6%) até o final. Na comparação dos aspectos fotométricos, não foi detectada diferença estatisticamente significativa. Quando comparadas, as avaliações das pacientes, foram considerados 6 aspectos (dor, prurido, cor, rigidez, espessura e irregularidade). Considerando todos os eventos de avaliação ao longo do período de observação, obteve-se 42 pontos de medidas. Nestes, foi atingido um nível de significância de P = 0,12 a favor da intervenção por células-tronco. Na avaliação dos observadores médicos, 5 aspectos foram considerados (vascularização, pigmentação, espessura, contratura e elasticidade). Quando foi considerada a distribuição das avaliações, ao longo do período de observação, obteve-se 35 pontos de medida. Nestes, foi atingido um nível de significância de P = 0,003 a favor da intervenção por células-tronco. Considerando todas as avaliações realizadas por médicos, pelas pacientes e a fotométrica, foi encontrada uma diferença estatisticamente significativa favorável ao implante com células-tronco adultas do tecido adiposo, p<0,001.Conclusão: Os resultados da cicatrização da pele em ferida pós-operatória de abdominoplastia, após implante de células-tronco adultas derivadas de tecido adiposo, mostraram-se satisfatórios.

A Ceratoconjuntivite Seca (KCS Keratoconjunctivitis Sicca) é uma desordem imunomediada e resulta de alterações do componente aquoso do filme lacrimal e da deficiência dos componentes lipídicos e mucoso.Seu diagnóstico é baseado no Teste Lacrimal de Schirmer (TLS) e no Teste de Ruptura do Filme Lacrimal (TRFL) e tem como sinais clínicos: secreção mucopurulenta, hiperemia conjuntival, blefaroespasmos, fotofobia, incômodo, dor, vascularização, opacidade corneana e pigmentação, além de cegueira em casos avançados. O tratamento convencional consiste em aplicações diárias de Ciclosporina 0,2% ou Tacrolimus 0,03% (pomada ou colírio oftálmicos), que apesar de controlar a doença, são custosos, não curativos e exigem alto comprometimento da interação paciente-proprietário. A terapia celular usando células-tronco (CT) traz uma nova esperança para doenças sem tratamento efetivo. Neste trabalho utilizamos CT mesenquimais (CTM) obtidas a partir de membrana amniótica (CTMA) de cães obtidas a partir do descarte destes tecidos em campanhas de castrações em diferentes tempos gestacionais, sem formação tumoral quando submetidas ao teste tumorigênico durante 60 dias. Dois animais com KCS crônica foram tratados com duas injeções de CTMA com intervalo de 30 dias, sendo a primeira de 0,5x106 células e a segunda de 1x106 células em cada glândula. Na segunda semana após a terapia foi observado aumento da TLS sugerindo um benéficio da terapia que foi diminuindo com o passar das semanas. O TRFL oscilou durante os testes e não apresentou diferenças significativas. A terapia celular utilizando CTMA de cães melhorou a condição ocular nos dois casos em momentos e parâmetros variados, com repercussão na melhoria da superfície, mas não houve regressão do quadro clínico. Investigações futuras em estágios menos avançados da doença podem ajudar a elucidar os mecanismos pelos quais esse efeito foi obtido / Keratoconjunctivitis Sicca (KCS) is an immune-mediated disorder and results from changes in the aqueous component of the tear film and also from the impairment of lipid and mucous components. Diagnosis is based on Lacrimal Schirmer Test (LST) and Tear Film Break Test (TFBT) and its clinical signs: purulent discharge, conjunctival hyperemia, blefaroespasmos, photophobia, discomfort, pain, vascularization, corneal opacity and pigmentation, addition of blindness in advanced cases. The standard treatment consists of daily applications of 0.2% cyclosporin or tacrolimus 0.03% (ophthalmic ointment or drops), that in spite of controlling the disease are expensive, require the patient does not curative and and require greater involvement of the patient-owner interaction. Cell therapy using stem cells (SC) brings new hope for diseases without effective treatment. In this work we used CT mesenchymal cells (MSCs) obtained from dogs amniotic membrane (AMSC) in the capanhas of castration at different times gestacionai without tumor formation tumorigenic when subjected to the test during 60 days. Two animals with chronic KCS were treated with two injections of CTMA with 30-day intervals, the first of which 0,5x106 cells and the second of 1x106 cells in each gland. In the second week after therapy was an increase in LST that has been decreasing over the weeks. The BTTF fluctuated during testing and no significant differences. Cell therapy using AMSC dogs improved the eye condition in both cases at times and different parameters, with consequent improvement in ocular surface but there was no regression of the clinical picture. Future research in less advanced stages of the disease may help to elucidate the mechanisms by which this effect was obtained

Submitted by ELIS ANDRADE DE LIMA ZUTIN null (elis.anlima@yahoo.com.br) on 2018-01-22T21:16:39Z No. of bitstreams: 1 TeseFinal com Ficha.pdf: 3376083 bytes, checksum: 192cb0769e66d362e6f58e9e40cac620 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-01-23T20:00:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 zutin_eal_dr_sjc.pdf: 3376083 bytes, checksum: 192cb0769e66d362e6f58e9e40cac620 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-23T20:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 zutin_eal_dr_sjc.pdf: 3376083 bytes, checksum: 192cb0769e66d362e6f58e9e40cac620 (MD5) Previous issue date: 2017-11-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os efeitos de modificações topográficas e químico-estruturais em superfícies de implantes e sua relação com o comportamento celular na interface com o biomaterial, não foram totalmente elucidados. Avaliou-se o efeito de modificações na topografia, composição química e estrutura cristalina de superfícies de titânio comercialmente puro (TiCP) grau IV sobre o potencial osteogênico de células-tronco mesenquimais humanas (CTMh), de células-tronco mesenquimais de camundongo (CTMc) e de células pré-osteoblásticas murinas (MC3T3E1), em diferentes meios de cultivo celular. Amostras de TiCP com superfície lisa e com topografia rugosa em micro e nanoescala foram criadas e caracterizadas por difratometria de raios-X (DFX), goniômetro; microscopia eletrônica de varredura (MEV), perfilômetro óptico (PO) e microscopia de força atômica (MFA). Realizaram-se ensaios osteogênicos de atividade da fosfatase alcalina (ALP); de formação de colônias de osteoblastos (UFC-Ob); de mineralização; de atividade da luciferase (colágeno) e de expressão gênica (qPCR). Para todas as análises estatísticas o nível de significância foi de 5%. Fases cristalinas do TiCP como Ti α, rutilo e anatase, foram identificadas por DFX; o goniômetro comprovou a hidrofilicidade das superfícies; as superfícies rugosas apresentaram valores de rugosidade média (Ra), obtidos por PO maiores do que a superfície lisa (p<0,0001); características micro e nanoestruturais foram comprovadas, medidas e analisadas por MEV e por MFA. A superfície nanotexturizada apresentou maior potencial osteogênico independente do tipo celular e/ou meio de cultivo utilizados nos ensaios de mineralização (p<0,05) e qPCR. Nos ensaios de atividade de ALP em CTMh sob meio osteogênico (p=0,001) e expressão de colágeno em meio regular, também observou-se maior potencial osteogênico da superfície nanotexturizada. A superfície microtexturizada apresentou maior atividade de ALP em CTMh sob meio regular (p=0,006) e em MC3T3E1 sob meio osteogênico 2 (p=0,01); maior produção de colágeno sob meio osteogênico 2 e maior número de UFC-Ob em CTMc em meio regular (p=0,004). Concluiu-se que a diferenciação osteogênica é influenciada tanto pelos efeitos sinérgicos dos tratamentos empregados para a criação de superfícies micro e nanotexturizadas, quanto pelo tipo celular e meios de cultivo utilizados nos testes biológicos. A superfície nanotexturizada apresentou maior potencial de induzir mineralização e expressão de genes osteogênicos in vitro. / The effects of topography and chemical modifications on implants surfaces and its relation with the cellular behavior at the interface with the biomaterial, are not fully elucidated. The effect of changes in the topography, chemical composition and surface crystalline structure of commercially pure titanium (TiCP) grade IV on the osteogenic potential of human mesenchymal stem cells (hMSCs), mouse mesenchymal stem cells (mMSCs) and pre-osteoblastic cells (MC3T3E1), in different cell culture media were evaluated. Smooth surfaces and rough topography in micro and nanoscale were created and characterized by X-ray diffraction (XRD), wettability, scanning electron microscopy (SEM), light interferometry (IFM), atomic force microscopy (AFM). Osteogenic assays of alkaline phosphatase activity (ALP), of osteoblast colonies formation (CFU-Ob); mineralization; luciferase activity (collagen) and gene expression (qPCR) were performed. For all statistical analyzes the level of significance was set to 5%. Crystalline TiCP phases such as Ti α, rutile and anatase were identified by XRD; the goniometer confirmed hydrophilicity of all surfaces; the rough surfaces presented mean of Ra roughness parameter obtained by IFL greater than the smooth surface (p <0.0001); micro and nanofeatures were verified, measured and analyzed by MEV and MFA. Nanotexturized surface presented higher osteogenic potential independent of the cell type or culture media used in the mineralization (p <0,05) and qPCR assays. A greater osteogenic potential of the nanotexturized surface was also observed for ALP activity in hMSCs under osteogenic medium (p=0,001) and expression of collagen in regular medium assays. The microtexturized surface presented higher ALP activity in hMSCs under regular media (p =0.006) and in MC3T3E1 cells under osteogenic media 2 (p=0.01); higher collagen production under osteogenic medium 2 and higher CFU-Ob number in mMSCs in regular media (p=0,004). It was concluded that osteogenic differentiation is influenced both by the synergistic effects of the treatments used to create micro- and nanotexturized surfaces, and by the cell type and culture media used in biological tests. The nanotexturized surface presented greater potential in vitro to induce mineralization and osteogenic genes expression.

Submitted by Carla Barros (carla.barros@udesc.br) on 2017-06-09T23:43:08Z No. of bitstreams: 1 Resumo Alan de Jesus Moraes.pdf: 79129 bytes, checksum: 40e1edbd3d452799fe4674b3816e9f6d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-09T23:43:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Resumo Alan de Jesus Moraes.pdf: 79129 bytes, checksum: 40e1edbd3d452799fe4674b3816e9f6d (MD5) Previous issue date: 2017-03-07 / CAPES / Aim: To analyze the physical and psychological effects of aerobic physical training before autologous hematopoietic stem cell transplantation in patients with hematologic cancer. Method of the theoretical study: systematic review with meta-analysis with articles that evaluated the effects of aerobic physical training (TFA) in oncohaematological patients. Method of the empirical study: controlled clinical trial based on home, with aerobic physical training during the active treatment of patients with haematological malignancies. Sample of 20 patients divided into Group Training (GT) and Control Group (CG). Results of the theoretical study: three studies were eligible for the systematic review, the data were combined in a meta-analysis, which totaled 144 patients in the intervention group and 147 patients in the control group, who showed efficiency of the practice of TFA for quality improvement of life 0.26 (95% CI: 0.03-0.49). Results of the empirical study: Twenty patients were recruited in the study, 10 in each group (GT and CG), with mean ages of 45.70 ± 16.96 years (GT) and 53.60 ± 14.60 years (CG), four (Multiple myeloma, Hodgkin's lymphoma and non-Hodgkin's lymphoma), multiple diagnoses of hematologic cancer. The groups (GT and CG) were considered as homogenous as the initial characteristics (Functionality, depressive symptoms, fatigue and quality of life). The mean time between stem cell collection and transplantation was similar between groups. The WG presented functional capacity increase (mean change = 131,55±125,08) when compared to CG (mean change = 20,70±72,61) and physical activity level (mean change = 1,45±1,50) when compared to CG (Mean change = -0,002±0,16). Reductions in GT symptoms (mean change = 3,80±3,99) when compared to CG (mean change = 0,90±2,77) and fatigue symptoms (mean change = -35,30±23,75) when compared to CG (Mean change = 2,50±9,48). Overall conclusion: the theoretical study showed a positive impact of aerobic physical training on the quality of life of patients with haematological malignancies, and the empirical study demonstrated that there was an increase in functional capacity and level of physical activity and reduced depression and of fatigue in the group that performed the aerobic physical training. / Objetivo geral: Analisar os efeitos físicos e psicológicos do treinamento físico aeróbio antes do transplante autólogo de células-tronco hematopoiéticas em pacientes com câncer hematológico. Método do estudo teórico: revisão sistemática com meta-análise com artigos que avaliaram efeitos do treinamento físico aeróbio (TFA) em pacientes oncohematológicos. Método do estudo empírico: ensaio clínico controlado baseado em casa, com treinamento físico aeróbio durante o tratamento ativo de pacientes com neoplasias hematológicas. Amostra de 20 pacientes divididos em Grupo Treinamento (GT) e Grupo Controle (GC). Resultados do estudo teórico: três estudos foram elegíveis para a revisão sistemática, os dados foram combinados em uma meta-análise, em que totalizaram 144 pacientes no grupo intervenção e 147 pacientes no grupo controle, que mostraram eficiência da prática do TFA para melhora da qualidade de vida 0,26 (IC 95%: 0,03-0,49). Resultados do estudo empírico: Foram 20 pacientes recrutados no estudo, sendo 10 em cada grupo (GT e GC), com idades médias de 45,70±16.96 anos (GT) e 53,60±14,60 anos (GC), quatro mulheres e seis homens (GT) e 6 mulheres e 4 homens (GC), de múltiplos diagnósticos de câncer hematológico (mieloma múltiplo, linfoma de Hodgkin e não-Hodgkin). Considerado os grupos (GT e GC) homogêneos quanto as características iniciais (Funcionalidade, sintomas depressivos, fadiga e qualidade de vida). O período médio entre a coleta de células-tronco e o transplante foi semelhante entre os grupos. O GT apresentou aumento da capacidade funcional (alteração média= 131,55±125,08) quando comparado ao GC (alteração média= 20,70±72,61) e do nível de atividade física (alteração média= 1,45±1,50) quando comparado ao GC (alteração média= -0,002±0,16). Foram observadas reduções nos sintomas de depressão no GT (alteração média= 3,80±3,99) quando comparado ao GC (alteração média= 0,90±2,77) e nos sintomas de fadiga (alteração média= -35,30±23,75) quando comparado ao GC (alteração média= 2,50±9,48). Conclusão geral: o estudo teórico apontou um impacto positivo da prática do treinamento físico aeróbio na qualidade de vida dos pacientes com neoplasia hematológica, e o estudo empírico demonstrou que houve aumento da capacidade funcional e do nível de atividade física e reduziu os escores de depressão e de fadiga no grupo que realizou o treinamento físico aeróbio.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-06-05T21:48:08Z No. of bitstreams: 1 RomuloAugustoDePaivaMacedo_DISSERT.pdf: 1406598 bytes, checksum: 872fd8fc67bafca4beb6d8332bade82f (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-06-11T20:24:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RomuloAugustoDePaivaMacedo_DISSERT.pdf: 1406598 bytes, checksum: 872fd8fc67bafca4beb6d8332bade82f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T20:24:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RomuloAugustoDePaivaMacedo_DISSERT.pdf: 1406598 bytes, checksum: 872fd8fc67bafca4beb6d8332bade82f (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / A fotobiomodulação (PBM) estimula a proliferação de diferentes tipos celulares, incluindo células-tronco. A células-tronco da polpa do dente decíduo esfoliado (SHEDs) apresentam um potencial de diferenciação maior do que as demais célulastronco mesenquimais, sendo o foco de diversas pesquisas na área da engenharia tecidual. Para que as células proliferarem e se diferenciem in vitro é necessário o desenvolvimento de um microambiente favorável, o qual pode ser fornecido por um biomaterial que mimetize a matriz extracelular natural, destacando-se para esta finalidade o ácido poliláctico (PLA) por suas propriedades de biocompatibilidade e biodegradabilidade, além do baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da PBM em diferentes doses na proliferação e viabilidade de SHEDs cultivadas sobre arcabouços bidimensionais de PLA. As SHEDs foram cultivadas sobre os filmes e divididas em três grupos: (C) controle não irradiado; (L1) irradiadas com dose de 1 J/cm2; e (L4) irradiadas com dose de 4 J/cm2. As irradiações foram realizadas com laser diodo InGaAlP, com comprimento de onda de 660 nm e potência de 30 Mw, em dose única. A viabilidade e a proliferação celular foram avaliadas nos intervalos de 24, 48 e 72 horas após a irradiação, através do ensaio do Alamar Blue, enquanto a morfologia e a distribuição das células na superfície dos filmes foram avaliadas por MEV no intervalo de 72 horas. Os dados quantitativos foram submetidos a testes estatísticos não paramétricos. Os dados do ensaio do Alamar Blue mostraram que os grupos L1 e L4 exibiram uma maior proliferação celular em comparação ao grupo C, sendo as diferenças significativas entre L1 e C em 48 e 72 h (p<0,0001) e entre L4 e C em 24 (p<0,01), 48 (p<0,001) e 72 h (p<0,0001). O percentual de redução do Alamar blue mostrou-se significativamente maior em L4 em comparação com L1 em 24 e 72 h (p<0,05). A análise das amostras por MEV mostrou que nos grupos irradiados as células apresentavam uma distribuição mais homogênea ao longo da superfície dos filmes e uma maior densidade celular em comparação com o grupo C, sendo esta diferença ainda mais evidente no grupo L4. Conclui-se que a PBM nos parâmetros estudados, especialmente na dose de 4 J/cm2, estimula a proliferação de SHEDs em contato com filmes de PLA, constituindo assim uma ferramenta metodológica com potencial aplicação nas técnicas de engenharia tecidual / Photobiomodulation (PBM) stimulates the proliferation of different cell types, including stem cells. Stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) present a greater differentiation potential compared to other mesenchymal stem cells, being the focus of several studies in the field of tissue engineering. In order for cells to proliferate and differentiate in vitro it is necessary to develop a favorable microenvironment, which can be provided by a biomaterial that mimics the natural extracellular matrix, with polylactic acid (PLA) being distinguished for this purpose due to its properties of biocompatibility and biodegradability, as well as low cost. The aim of this study was to evaluate the effect of PBM in different doses on the proliferation and viability of SHEDs cultured on two-dimensional PLA scaffolds. SHEDs were cultured on the films and divided into three groups: (C) non-irradiated control; (L1) irradiated with a dose of 1 J/cm2; and (L4) irradiated with a dose of 4 J/cm2. The irradiations were performed with an InGaAlP diode laser, with wavelength of 660 nm and power of 30 Mw, in a single dose. Cell viability and proliferation were evaluated at 24, 48 and 72 h after irradiation by Alamar Blue assay, while cell morphology and distribution on the surface of the films were evaluated by SEM at 72 hours. The quantitative data were submitted to non-parametric statistical tests. Data from Alamar blue assay showed that groups L1 and L4 exhibited greater cell proliferation compared to group C, with significant differences between L1 and C at 48 and 72 h (p<0.0001) and between L4 and C in 24 (p<0.01), 48 (p<0.001) and 72 h (p<0.0001). The percentage of reduction of Alamar blue was significantly higher in L4 compared to L1 at 24 and 72 h (p<0.05). Analysis of the samples by SEM showed that in the irradiated groups the cells had a more homogeneous distribution along the surface of the films and a higher cell density compared to the group C, with this difference being even more evident in the group L4. We conclude that PBM in the studied parameters, especially with the dose of 4 J/cm2, stimulates the proliferation of SHEDs in contact with PLA films, thus constituting a methodological tool with potential application in tissue engineering techniques.

Orientador: Célia Regina Nogueira / Resumo: A regulação da remodelação óssea ocorre por meio de fatores locais e sistêmicos. Entre os fatores locais estão as citocinas: Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANKL), presente nos osteoblastos, e Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B (RANK), presente nos osteoclastos, além de outras citocinas como o Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) que podem agir no processo de deposição e/ou reabsorção óssea in vivo. Entre os fatores sistêmicos que participam da remodelação óssea estão os hormônios estrógeno (E2) e triiodotironina (T3). O objetivo do trabalho foi verificar a ação do E2, infrafisiológico (simulando a menopausa) e T3, suprafisiológico (simulando hipertireoidismo) em osteoblastos humanos derivados de células troncos mesenquimais (CTMs) na síntese proteica de RANKL e TNF-α. Os osteoblastos foram incubados por 72 horas na presença de E2 em dose fisiológica (E2F/10-8M) e infrafisiológica (E2I/10-9M), e T3 em dose fisiológica (T3F/10-9M) e suprafisiológica (T3S/10-8M), e quantificada a matriz mineralizada óssea e a síntese proteica de RANKL e TNF-α por Western Blot. A análise estatística dos dados foi realizada pelo teste de variância ANOVA complementada pelo teste de Tukey, sendo o nível de significância considerado p<0,05. O tratamento de E2 em dose E2F (1,96± 0,48; p<0,05) e E2I (3,18±0,31; p<0,001) elevou a síntese proteica de RANKL comparado ao controle (C) (1,00±0,32), e de TNF-α em dose de E2F (3,61±0,45; p<0,05) e E2I (2,45±0,07; p<0,05) também ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The regulation of bone remodeling is intermediated by local and systemic factors. The cytokines are among the local factors: Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANKL), present in osteoblasts, and Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B (RANK), present in osteoclasts, in addition to other cytokines such as Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) that can act in the process of bone deposition and/or resorption in vivo. Hormones are among the systemic factors involved in bone remodeling, estrogen (E2) and triiodothyronine (T3). The aim of the study was to verify the action of E2, infraphysiological (simulating menopause) and T3, supraphysiological (simulating hyperthyroidism) in human osteoblasts derived from mesenchymal stem cells (CTMs) in the protein synthesis of RANKL and TNF-α. Osteoblasts were incubated during 72 hours in the presence of E2 at physiological dose (E2F/10 -8 M) and infraphysiological (E2I/10 -9 M), and T3 at physiological (T3F/10 -9 M) and supraphysiological (T3S/10-8 M) and quantified the bone mineralized matrix and the protein synthesis of RANKL and TNF-α by Western Blot. Statistical analysis of the data was performed by the ANOVA variance test complemented by the Tukey test, and the significance level was considered p<0.05. The treatment of E2F in E2F dose (1.96 ± 0.48, p<0.05) and E2I (3.18 ± 0.31; p <0.001) increased RANKL protein synthesis compared to control (C) (1.00 ± 0.32), and TNF-α in the dose of E2F (3.61 ± 0.45; p<0.05) and E... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre