Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-14T12:52:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) INFLUÊNCIA_DOS_RESÍDUOS PDF.pdf: 1573030 bytes, checksum: 0754d62a9ecc0a122f1f8483b69e96b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T12:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) INFLUÊNCIA_DOS_RESÍDUOS PDF.pdf: 1573030 bytes, checksum: 0754d62a9ecc0a122f1f8483b69e96b6 (MD5) Previous issue date: 2013-12-20 / Cunninghamella echinulata, fungo filamentoso da ordem Mucorales, foi isolado do solo da Caatinga de Pernambuco, Brasil, para avaliação da sua adaptação em meio de cultivo contendo resíduos agroindustriais (milhocina e farinha de banana verde) e para consequente indução da produção de quitosana, carboidratos totais, quitosana e lipídios totais a partir da biomassa produzida. Neste sentido, os estudos iniciais foram realizados para identificar os efeitos provocados pelas interações de diferentes concentrações de farinha de banana verde e milhocina no crescimento radial de C. echinulata de acordo com as concentrações estabelecidas pelo planejamento fatorial do tipo Delineamento Composto Central DCC de 22. A variável resposta do planejamento DCC foi o crescimento radial de C. echinulata. A partir do planejamento foram selecionadas as concentrações ideias para o máximo rendimento em biomassa de C. echinulata a ser submetida à extração de lipídios, carboidratos totais e quitosana. Os resultados demonstraram que no meio de cultivo da condição 3 constituído por 1% de milhocina e 5% de farinha de banana verde acrescidos de 2% de NaCl e pH 5 ocorreu o máximo crescimento radial (7,5cm de diâmetro) de C. echinulata. Além disso, nesta mesma condição do planejamento ocorreu a máxima produção de quitosana (15,4%), carboidratos (27,7%) e lipídeos (49,7%). Portanto, os resultados obtidos neste trabalho indicam o elevado potencial de Cunninghamella echinulata em utilizar a farinha de banana verde e milhocina como nutrientes essenciais para seu metabolismo, reduzindo o custo de produção e contribuindo para produzir compostos limpos. / Cunninghamella echinulata, filamentous fungus of the Mucorales order, was isolated of soil of the Caatinga, Pernambuco-Brazil, to evaluate of the its adaptation in medium o cultive containing agroindustrial waste (corn steep liquor and green banana flour) and to consequent induction of the production of total carbohydrates, chitosan and lipids produced from biomass. In this context, the initial studies were performed to identify the effects caused by interactions of concentration different of green banana flour and corn steep liquor in the radial growth of C. echinulate of according with the concentration established by Central Composite Design (CCD) of 22. The variable response of the design CCD was the radial growth of C. echinulata. From of the composite central design were selected the best concentrations to the maximum yield in biomass of C. echinulata to be submitted the extraction of lipids, total carbohydrates and chitosan. The results showed that in medium of cultive of the condition 3 constituted by 1% of corn steep liquor and green banana flour added of 2% NaCl and pH 5 occurred the maximum radial growth (7,5 cm of diameter) of C. echinulata. Moreover, in this same condition of the CCD occurred the production maximum of chitosan (15.4%), total carbohydrates (27.7%) and lipids (49.7%). Therefore, the results obtained in this study indicate the high potential of C. echinulata in use the green banana flour and corn steep liquor as essential nutrients to your metabolism, reducing the production cost and contributing to produce clean compounds.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-20T18:26:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE _DFBC_.pdf: 1525509 bytes, checksum: 91079bb98aed005cbb284a2ec816c4c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T18:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE _DFBC_.pdf: 1525509 bytes, checksum: 91079bb98aed005cbb284a2ec816c4c1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-02 / Capes / Este trabalho teve o objetivo de avaliar a influência entre macronutrientes energéticos, com o desempenho, metabolismo e fisiologia digestiva de diferentes surubim híbridos (Pseudoplatystoma corruscans x Pseudoplatystoma fasciatum e Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus). Esses surubim híbridos são amplamente cultivados no Brasil, para abate sendo a carne destinada ao mercado interno e externo. No entanto, são poucos os dados na literatura em relação às exigências nutricionais para esses peixes, bem como o efeito da relação entre os macronutrientes com a fisiologia digestiva e metabolismo. Deste modo, o capítulo um avaliou o efeito da manga de uma fonte de carboidrato não amiláceo. Para tal foram fornecidas dietas contendo farinha de manga em substituição ao milho em quatro níveis diferentes (0; 33%; 66% e 100%) para alevinos de Pseudoplatystoma sp. Após o período de 60 dias para a análise de desempenho, foram realizadas as atividades das enzimas digestivas: protease total alcalina, tripsina e amilase. Como indicativos de mudança no metabolismo foram avaliados no plasma: triglicérides, glicose, proteínas totais, colesterol, amino ácidos livres; no fígado: glicogênio e alanina aminotransferase. Foi observado que não houve diferença significativa nos parâmetros de desempenho analisados. Entretanto foram observadas alterações nas atividades das enzimas digestivas e intermediários metabólicos, provavelmente devido à quantidade de fatores antinutricionais encontrados na casca da manga. Estes resultados demonstram que em longo prazo a inclusão de farinha de manga acarretará decréscimo no desempenho dos animais. No capítulo dois foi avaliado o efeito de diferentes valores da relação proteína(P):lipídio(L). Quatro dietas (45P 5L; 42P 9L; 39P 11L; 34P 19L%) foram fornecidas por 60 dias para observar o efeito sobre o desempenho, enzimas digestivas, intermediários metabólicos e parâmetros hematimétricos de alevinos do surubim híbrido Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus. O excesso de lipídio na dieta diminuiu o desempenho o que consequentemente afetou os demais parâmetros avaliados. Valores de proteínas totais e aminoácidos livres no plasma demostraram danos causados pela deficiência de proteína na dieta. Os valores de colesterol, triglicérides e glicose mostraram resposta consequente da baixa ingestão de nutrientes. A lipase foi a enzima digestiva mais influenciada pelos nutrientes dietéticos. Os parâmetros hematimétricos foram afetados pelas dietas e demonstraram que animais que ingeriram maior quantidade de lipídio tiveram adaptação metabólica e fisiológica para suprir a deficiência nutricional. No capítulo três foi avaliado o efeito de diferentes valores da relação proteína(P):carboidrato(C). Quatro dietas (28P 53C; 36P 44C; 40P 39C; 45P 37C%) foram fornecidas por 60 dias para observar o efeito sobre o desempenho, composição corporal, enzimas digestivas e intermediários metabólicos de alevinos do surubim híbrido Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus. O excesso de carboidrato na dieta diminuiu o desempenho, sem afetar demasiadamente os parâmetros fisiológicos e metabólicos avaliados, mostrando grande adaptação do híbrido avaliado. A eficiência energética das dietas avaliadas foi maior no tratamento com menor inclusão de carboidrato e maior inclusão proteica. Valores de atividades enzimáticas específicas foram maiores no tratamento com maior inclusão de proteína. A maior reserva de glicogênio hepático também foi observado no mesmo tratamento citado acima. Como conclusão geral pode-se afirmar que diferentes relações proteína:energia, independente de ser fonte lipídica ou de carboidrato, afeta o desempenho, fisiologia digestiva e metabolismo do surubim híbrido. / This study aimed to evaluate the influence of macronutrients energetic, growth, metabolism and digestive physiology of different surubim hybrids (Pseuduplatystoma corruscans x Pseudoplatystoma fasciatum and Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus). These hybrids are highly raised in Brazil with its main products being sold to domestic and international market. However there is few information on literature published about data on nutrient requirements to this fish, as well as the effects among macronutrients and digestive physiology and metabolism. Thus, chapter one evaluated the effect of mango meal as a non-starch carbohydrate source. In order to accomplish it, diets containing mango meal replacing corn meal in four different levels (0; 33%; 66%; 100%) were given to Pseudoplatystoma sp. juvenile. After 60 days growth analysis were done as well as the digestive enzymes activities: total alkaline protease, trypsin and amylase. As indicative of metabolism changes were evaluated in the blood plasma: triglycerides, glucose, total proteins, cholesterol, free amino acids; in the liver: glycogen and alanine aminotransferase. It was observed no significant difference among growth parameters evaluated. However digestive enzymes activities and intermediary metabolic changes were observed, probably due to anti-nutritional factors found in mango skin. These results shows that, in long term feeding mango meal inclusion can lead to animal growth decrease. In chapter two it was evaluated the effect of different protein(P):lipid(L) ratios. Four diets (45P 5L; 42P 9L; 39P 11L; 34P 19L) were offered for 60 days to observe the effect on growth performance, digestive enzymes activities, intermediary metabolism and hematimetric parameters of hybrid surubim Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus juvenile. Dietary lipid excess decreased growth which consequently affected the others parameters evaluated. Plasma total protein and free amino acids values demonstrated injuries caused by protein deficiency in the diet. Cholesterol, triglycerides and glucose values showed consequent response to low nutrient ingestion. Lipase was the enzyme more influenced by dietary nutrients. Hematimetric parameters were affected by diets and showed that animals that ingested higher lipid amount had metabolic and physiologic adaptation to make up nutritional deficiency. In chapter three it was evaluated the effect of different protein(P):carbohydrate (C)values. Four diets (28C 53C; 36P 44C; 40P 39C; 45P 37C) were offered for 60 days in order to observe the effect on growth, whole body composition, digestive enzymes and intermediary metabolism of hybrid surubim Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus juvenile. Dietary carbohydrate in excess decreased growth without affecting all of others physiological and metabolic parameters evaluated, which shows high adaptation. Feed energetic efficiency evaluated was higher in the treatment with lower carbohydrate inclusion and higher protein inclusion. Specific digestive enzymes activities were higher in the treatment with higher protein inclusion. Higher hepatic glycogen reserve was also observed in the same treatment cited above. As a general conclusion it can be affirmed that different protein:energy ratio, no matter if it is lipidic or carbohydrate source, affects growth, digestive physiology and metabolism of hybrid surubim.

Orientador: Paulo Mazzafera / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T23:52:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Purcino_RubiaPadilha_D.pdf: 1224493 bytes, checksum: 875e464b9ac37fd8cf61d27335a57537 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Xylella fastidiosa (Xf) é uma bactéria fitopatogênica que se desenvolve exclusivamente no xilema de uma grande variedade de plantas cultivadas. Na cultura do citros essa bactéria é conhecida como o agente causal da clorose variega do citros (CVC), doença responsável por prejuízos econômicos consideráveis, desde a década de 80. Embora muitos trabalhos tenham sido realizados com essa bactéria, pouco se conhece sobre o mecanismo de infecção, a composição do meio em que ela se desenvolve, o xilema e o desenvolvimento dos sintomas. Grande parte dos estudos sobre a nutrição da bactéria são realizados in vitro, o que pode não caracterizar a interação entre a bactéria e xilema. Este trabalho é resultado de um subprojeto do genoma funcional, cujo principal objetivo é a caracterização da constituição da seiva do xilema, na tentativa de melhor compreender a nutrição da bactéria e o desenvolvimento da doença. Ao longo da realização dos experimentos e análises dos resultados foram surgindo questões que levaram a necessidade do melhor entendimento do metabolismo do nitrogênio em plantas com CVC. Por isso os resultados gerados foram agrupados em dois capítulos, onde no primeiro são encontrados resultados da caracterização qualitativa e quantitativa das principais substâncias nitrogenadas presentes na seiva do xilema de plantas de citros com CVC, bem como atividade das principais enzimas envolvidas no metabolismo do nitrogênio. A atividade da Redutase do nitrato (RN) nas folhas não sofreu alteração em plantas doentes (PD), porém a atividade da Glutamina Sintetase (GS) foi significativamente maior nos extratos das folhas dessas plantas. Embora a concentração de aminoácidos tenha sido suavemente maior na seiva do xilema de PD, caiu drasticamente no extrato de folhas dessas plantas. O teor de proteínas solúveis também foi menor na seiva do xilema e no extrato de folhas de PD. PD e Planta Sadia (PS) apresentaram o mesmo perfil de aminoácidos em HPLC, contudo em proporções bem diferentes, principalmente dos aminoácidos ASN, GLN e ARG. A poliamina putrescina foi identificada em grande concentração somente em PD. Estes resultados demonstram que PD apresentam alterações no metabolismo de compostos nitrogenados provavelmente em resposta a mudanças na interação dos processos de absorção, assimilação e redistribuirão do nitrogênio. No segundo capítulo são agrupados os dados das análises do metabolismo de açúcares, ácidos orgânicos e investigação das alterações no metabolismo da parede celular. A seiva de PD apresenta menor concentração de glicose, acompanhada de frutose e glicose. Grande quantidade de ácido cítrico também foi determinada nessas plantas. Baseados nesses resultados cultivamos a bactéria em meios com diferentes fontes de carbono e verificamos que o meios que permitiram maior crescimento foram aqueles que a fonte de carbono utilizada foi glicose (I glL), sacarose combinada com citrato nas concentrações de 3g/L de cada fonte de cardono, e citrato na concentração de 3 g/L, o que demonstra que a composição química da seiva do xilema é importante tanto para o processo de agregação como para a formação do biofilme. A infecção com Xi também promoveu modificações nas paredes celulares dos pecíolos. Verificamos por imunocitoquímica em microscópio confocal utilizando os anticorpos 11M 5 e JIM 7, diferenças entre PD e PS nos padrões de esterificação da fração pectina, assim como encontramos no fracionamento da parede celular alterações na composição dos principais carboidratos que constituem a fração hemicelulose / Abstract: Xylellafastidiosa (Xj) is a fastidious bacterium which grows exclusively in the xylem of several plants. In citrus the disease caused by Xf is known as "clorose variegada do citros" (CVC), being responsible for marked loss of productivity since the 80s. Although a meaningful number of reports have been published in the literature about Xf, little is know about the mechanisms controlling infection, the biochemical composition of the xylem fluid where the bacteria develops and how the disease symptoms develop. Most of the studies on the nutritional requirements by the bacteria were carried out with artificial media in vitro, what may not be the exact situation in the xylem. The aim of this thesis was to characterize the xylem sap composition of citrus plants in order to better understand nutritional aspects of the bacteria and this can influence the disease development. During the experiments new questions arose and focus was given to the nitrogen metabolism of citrus plants infected with Cvc. Therefore, the thesis has two chapters. The first chapter contains results on the qualitative and quantitative characterization of the xylem sap of health and diseased plants as well as the activity of enzymes ofthe nitrogen metabolism in plants. The activity ofNitrate reductase (NR) in leaves did not change in diseased plant (PD), however, the activity of Glutamine synthethase (GS) was significantly higher in these leaves. Although amino acids concentration was slightly higher in the sap of diseased plants the leveI dropped drastically in the leaves. The protein contents were lower in the sap and in leaves of diseased plants. Diseased and health plants showed the same amino acid profile in HPLC, but different proportions were observed among amino acids, mainly for the amino acids ASN, GLN and ARG. The polyamine putrescine was found in high concentrations only in diseased plants. These results showed that significant changes take place in the nitrogen metabolism of diseased plants, probably as a response to the alterations in the absorption, assimilation and distribution of nitrogen in the plant. In the second chapter the data on carbohydrates, organic acids and cell wall are presented. The xylem sap of diseased plants showed lower concentration of glucose than health plants. High amounts of citric acid were also found in diseased plants. This information was used to design artificial media to grow the bacteria and study its nutritional need. Best growth was observed with media containing glucose (l g/L), sucrose plus citrate both at 3g/L, and citrate alone at 3 g/L, indicating that the composition of the sap might play a role both in the bacterial agregation as well as in the biofilm formation. Infection with XI also promoted changes in the cell wall of leaf peduncle of infected plants. Immunocytochemical analysis with confocal microscopy, using the antibodies 11M 5 and 11M 7, showed marked differences between diseased and health plants regarding the pectin esterification. Additionally the hemicelullose fraction was also affected. / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Biologia Vegetal

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:42:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:01:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O Brasil é o terceiro maior produtor de massas, com um volume de negócios anual de mais de um milhão de toneladas. Macarrão é uma fonte de energia, baixo custo, fácil de fazer, pode ser consumido em todas as estações, agrada a todos, apresenta variações de forma e cor que torna este produto tão popular. O objetivo do estudo foi o de avaliar a viabilidade de produção de um macarrão enriquecido a partir do bagaço obtido da extração de óleo de linhaça e estudar os efeitos da radiação gama no mesmo. Foram produzidas sete formulações de macarrão, sendo que duas foram irradiadas com 20kGy (20 e 40% de adição de farinha de bagaço de linhaça), duas foram produzidas com farinha do bagaço de linhaça irradiada a 10kGy nas proporções de 20 e 40%, duas não receberam nenhuma dose (nas proporções de 20 e 40%) e uma formulação de controle. As irradiações foram realizadas no irradiador multipropósito de Co60 do Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN/SP. As seguintes análises foram realizadas: determinação da umidade, acidez, pH, extrato etéreo, cinzas, proteína, fibra, textura, aderência e testes de cozimento, no Laboratório de Radiobiologia e Ambiente Centro de Energia Nuclear na Agricultura CENA/USP e na ESALQ em Piracicaba e as análises microbiológicas foram realizadas no Laboratório de Fungos Toxigênicos e Micotoxinas da USP/SP. Os valores da umidade e da acidez obtidos para os diferentes tipos de macarrão mostraram alta eficiência na secagem. As formulações M80:20, M80:20FT e M60:40 apresentaram também uma alta qualidade em relação ao aumento de massa e perda de sólidos solúveis segundo os parâmetros de Hummel. Houve também um aumento na quantidade de fibras ficando valor calórico reduzido. / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:08:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Neste trabalho foi desenvolvida pela primeira vez uma estratégia de purificação com duas etapas, uma cromatografia de troca iônica e uma cromatografia líquida de alta eficiência em fase-reversa (RP-HPLC), para obter um hTSH derivado de CHO (r-hTSH-IPEN), que mostrou-se rápida e prática, permitindo um rendimento de 70% e uma pureza > 99%. Um aumento de ~60% na produtividade de r-hTSH-IPEN foi observado quando condições de cultura celular foram alteradas de 5% de CO2 para ar (0,03% CO2). A qualidade dos produtos obtidos em ambas as condições foi avaliada com relação à estrutura dos N-glicanos, aos isômeros de carga e à atividade biológica em comparação com a única preparação comercial conhecida (Thyrogen®) e com uma preparação de referência de origem hipofisária (p-hTSH) do National Hormone and Pituitary Program (NIDDK, EUA). Os N-glicanos identificados nas preparações recombinantes foram do tipo complexo, apresentando estruturas bi-, tri- e tetra- antenárias, algumas fucosiladas, sendo 86-88% sialiladas com níveis variáveis. As três estruturas mais abundantes foram monosialiladas, representando ~69% de todas as formas identificadas nas três preparações. A principal diferença foi encontrada em termos de antenaridade, com 8-10% mais estruturas bi-antenárias na ausência de CO2 e 7-9% mais estruturas tri-antenárias na presença de CO2. No caso do p-hTSH foram identificadas estruturas do tipo complexo, com alta-manose e híbridas, a maioria delas contendo resíduos terminais de ácido siálico e/ou sulfato. As duas estruturas mais abundantes contem um ou dois resíduos de sulfato, sendo que no primeiro caso ele inesperadamente se liga a uma galactose. A porcentagem de ligação do ácido siálico à galactose nas conformações 2-3 e 2-6 foi de 68 ± 10% e 32 ± 10% respectivamente. Não foram observadas diferenças fundamentais nos isômeros de carga, nas três preparações recombinantes, os perfis da focalização isoelétrica mostrando seis bandas distintas no intervalo de pI de 5,39 a 7,35. Uma distribuição consideravelmente diferente, com várias formas na região ácida, foi observada, no entanto, para duas preparações hipofisárias. Uma bioatividade ligeiramente superior (p <0,02) foi encontrada para o r-hTSH-IPEN obtido na presença de CO2 quando as preparações foram analisadas com boa precisão por um simples bioensaio em dose única; esta atividade, no entanto, não é significativamente diferente da atividade do Thyrogen, as duas preparações sendo 1,6 e 1,8 vezes mais potentes do que a preparação de referência (p-hTSH). Podemos concluir que, pelo menos para o caso dos r-hTSH derivados de CHO, diferentes condições de cultivo não afetam significativamente as estruturas dos N-glicanos, distribuição de isómeros de carga ou atividade biológica. Thyrogen e r-hTSH-IPEN, quando comparados com p-hTSH-NIDDK, apresentaram cerca de 7% de aumento da massa molecular determinada por MALDI-TOF-MS. Esta técnica, que permite uma avaliação exata da massa do heterodímero, apresentou valores de MR de 29611, 29839 e 27829, respectivamente. Diferenças significativas foram encontradas entre o r-hTSH e o p-hTSH pelo que se refere às propriedades hidrofóbicas, avaliadas por RP-HPLC. Também foram observadas diferenças relacionadas à composição de carboidratos, principalmente de ácido siálico e galactose, tendo sido encontrado um menor teor destes resíduos no p-hTSH. / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Orientadores: Adriana Franco Paes Leme, Jaime Aparecido Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T11:01:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moi_GiselePedroso_D.pdf: 2006152 bytes, checksum: 72847b022c4acfc83ace6ff86cc98e37 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A cárie dental é uma doença biofilme-dependente e os carboidratos fermentáveis presentes na dieta são considerados os fatores ambientais chaves envolvidos em sua iniciação e desenvolvimento. Algumas hipóteses baseadas na estrutura, composição e cinética dos íons no biofilme têm sido sugeridas para explicar a maior cariogenicidade do biofilme dental formado na presença de sacarose. Dentre estas, a expressão diferencial de proteínas bacterianas e presença ou ausência de proteínas salivares no biofilme formado na presença e ausência de sacarose tem sido sugerida. A sacarose promove alterações na composição protéica da matriz extracelular (MEC) do biofilme dental e não foram detectadas proteínas ligadoras de cálcio pela eletroforese bidimensional (2-DE) no biofilme formado em sua presença. A ausência destas proteínas na matriz do biofilme poderia ajudar explicar a sua cariogenicidade. Para avaliar se as alterações no perfil de proteínas da MEC são sacarose-dependentes ou ainda, se a presença de seus monossacarídeos poderia interferir similarmente neste perfil, um estudo in situ, boca-dividida foi realizado em duas fases de 14 dias. Este modelo experimental possibilitou que as proteínas salivares e bacterianas estivessem presentes no mesmo ambiente, simulando a condição natural da formação do biofilme dental. Cada fase experimental foi realizada em triplicata pelo mesmo voluntário. Assim, um voluntário utilizou um dispositivo palatino contendo 16 blocos de esmalte, sendo oito de cada lado, para acúmulo de biofilme. Foi gotejada extra-oralmente uma solução da sacarose 20% (0,58 M), água destilada e deionizada (H2Odd) e uma mistura de uma solução de glicose 10,45% (0,29 M) com frutose 10,45% (0,29 M) sobre 8 blocos de esmalte dental 8 vezes/dia. No 14º dia, o biofilme dental foi coletado, as proteínas da MEC do biofilme dental foram extraídas e analisadas por duas abordagens diferentes: (1) 2-DE seguidos pela cromatografia líquida acoplada com a espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS) e (2) a mistura complexa das proteínas extraídas da MEC do biofilme foram analisadas por LC-MS/MS. Entre as proteínas diferencialmente expressas (p<0,05) estavam às proteínas ligadoras de cálcio e as proteínas indutoras de prolactina. Estas proteínas possuem um papel peculiar no potencial cariogênico do biofilme, uma vez que são responsáveis pela manutenção da saturação iônica do biofilme e agregação, respectivamente. Os resultados sugerem que as mudanças do perfil protéico da ECM do biofilme dental não são atribuídas exclusivamente à sacarose, uma vez que seus monossacarídeos são capazes de promover alterações na composição protéica do biofilme, sugerindo que este perfil seja dependente dos carboidratos fermentáveis presentes na dieta. / Abstract: Dental caries is a biofilm-dependent oral disease, and fermentable dietary carbohydrates are the key environmental factors involved with its initiation and development. Some hypotheses based on the structure, composition and ion kinetic aspects of biofilm have been suggested to explain the cariogenicity of biofilm formed in the presence of sucrose. Among them, the differential expression of bacteria proteins and the presence and absence of salivary proteins in biofilm formed in the presence and absence of sucrose has been suggested. Sucrose promotes changes in the extracellular matrix protein (ECM) of dental biofilm composition and the undetectable levels of calcium-binding proteins by two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) in biofilm formed in its presence provide further insight into the unique cariogenic properties of this dietary carbohydrate. To evaluate whether these changes are sucrose-dependent, an in situ and split-mouth study was conducted during 2 phases of 14 days. Under these conditions, salivary and bacterial proteins are in the same environment, which is able to mimic natural condition of biofilm formation. Each experimental phase was performed in three distinct times with the same volunteer. A volunteer wore a palatal appliance containing 16 enamel blocks, being 8 in each side for dental biofilm accumulation. 20% (0.58 M) sucrose solution, distilled and deionized water (H2Odd) and mixture containing 10.45% (0.29 M) glucose and 10.45% (0.29 M) fructose solution were extraorally dripped onto 8 blocks 8 times/day. On the 14th day, dental biofilms were collected, ECM proteins were extracted and analyzed by two different approaches: (1) 2-DE followed by liquid chromatography coupled with mass spectrometry in tandem (LC-MS/MS) and (2) whole extract proteins were also analyzed by LC-MS/MS. Among the differential expressed proteins (p<0.05) were the calcium-binding and prolactin-induced proteins. Particularly, these proteins have a unique role in the cariogenic potential of biofilm considering their properties of keep biofilm saturation and bacterial aggregation, respectively. Data show that protein profile changes in ECM of dental biofilm are not exclusively attributed to sucrose, since its monosaccharides are able to modify biofilm protein composition, suggesting that the biofilm proteomic profile is dietary carbohydrate-dependent. / Doutorado / Cariologia / Doutor em Odontologia

Orientadores: Marcos Silveira Buckeridge, Michel Georges Albert Vincentz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T04:13:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brandao_AlineDias_D.pdf: 19907287 bytes, checksum: dc16cfd53b17ed55d8ab52957dcdadae (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Os jatobás (espécies pertencentes ao gênero Hymenaea, família Leguminosae) apresentam grande plasticidade fisiológica. Diferentes espécies e variedades de jatobás se adaptaram a praticamente todos os biomas tropicais brasileiros, incluindo a Floresta Amazônica, e o complexo de ecossistemas que é formado pela Mata Atlântica, Cerrado e Caatinga. Espécies do gênero possuem como principal reserva de carbono do embrião o xiloglucano, um polissacarídeo similar à celulose, mas solúvel em água devido a ramificações com xilose e galactose. Após a germinação, o xiloglucano dos cotilédones é completamente degradado, produzindo monossacarídeos livres que são rapidamente metabolizados à sacarose. A produção das enzimas de hidrólise do xiloglucano nos cotilédones é controlada pela auxina proveniente da parte aérea da planta, porém, não se sabe exatamente como esse mecanismo é controlado. O objetivo deste trabalho foi isolar cDNAs (DNA complementar) parciais dos genes da bgalactosidase - BGAL e xiloglucano endotransglicosilase ou endo-b-1,4-glucanase ¿ XET, relacionados com a degradação do xiloglucano e duas enzimas envolvidas no metabolismo da sacarose, a invertase neutra/alcalina - IN/IA e a sacarose sintase ¿ SUS, para tentar avaliar possíveis formas de controle da expressão gênica envolvidas nos mecanismos do catabolismo do xiloglucano em cotilédones de plântulas de Hymenaea courbaril. Primeiramente, foram desenhados primers com base em seqüências de espécies da família Leguminosae existentes em banco de dados para os respectivos genes. A partir daí foi possível clonar seqüências parciais de todos os genes. Utilizando a técnica de RT-PCR semi-quantitativa (semi-quantitative reverse transcription-polimerase chain reaction) foram realizadas análises da expressão nos cotilédones, folhas, hipocótilos e raízes no 45º dia após a embebição (quando ocorre a taxa máxima de mobilização do xiloglucano) a cada 6 horas em um período de 24 horas. As plântulas foram analisadas sob as seguintes condições: I) plântulas crescidas em condições naturais; II) excisão da parte aérea; III) aplicação do inibidor do transporte polar de auxina (NPA ¿ ácido naftil ftalâmico); IV) crescimento em luz contínua e V) crescimento em escuro contínuo. Observou-se que existem, basicamente, três formas de controle em resposta a auxina. Nos cotilédones, os genes responsáveis pela degradação do xiloglucano BGAL1 e XTH1, possivelmente são regulados em resposta a auxina endógena e a variação de luz, enquanto que os genes responsáveis pelo metabolismo da sacarose, AlkIN1 e SUS1 possivelmente são regulados pela disponibilidade de carbono. Nas folhas, hipocótilos e raízes o padrão de expressão variou de acordo com a disponibilidade de carbono proveniente da degradação do xiloglucano de reserva nos cotilédones. Os resultados apresentados relatam a primeira descrição do isolamento dos cDNAs, permitiram a caracterização do padrão de expressão de genes chave, envolvidos no estabelecimento de uma espécie arbórea nativa do Brasil e em conjuto com os dados de atividade enzimática possibilitaram observar que a mobilização de reserva no jatobá ocorre a nível transcricional. Através do seqüênciamento, também foi possível observar que a invertase neutra clonada da raiz do jatobá apresentou resíduos de aminoácidos que a caracterizam como invertase alcalina (AlkIN1). Diante do padrão de expressão observado para a ß-galactosidase, XTH, invertase alcalina e sacarose sintase no presente trabalho, é possível sugerir um modelo para o controle da degradação e mobilização do xiloglucano de reserva nos cotilédones sob influência da auxina endógena e da variação de luz, durante o desenvolvimento inicial nas plântulas de Hymenaea courbaril / Abstract: The jatobas (species belonging to the genus Hymenaea, family Leguminosae) display large physiological plasticity and as a consequence they have great adaptive capacity to several habitats. Different species and varieties of jatobas have adapted practically to all Brazilian tropical biomes, including the Amazon Forest and the complex of ecosystems that is formed by the Atlantic Forest, the Savannah and the Caatinga. Species of this genus contain xyloglucan as the main storage of carbon in their seeds. Xyloglucan is a polysaccharide similar to cellulose, but water soluble due to the branching with xylose and galactose. After germination, xyloglucan is completely degraded, producing free monosaccharides that are quickly metabolized to sucrose. The production of xyloglucan hydrolytic enzymes in the cotyledons is known to be controlled by auxin that comes from the shoot. However, it is not known how the mecanism is controlled. The aim of the present work was isolate partial cDNAs of the genes b-galactosidase (BGAL) and xyloglucan endo-transglycosylase or endo-b-1,4-glucanase (XET) xyloglucan degradation genes and two other genes related to sucrose metabolism (neutral/alkaline invertase - NI/AI and sucrose synthase - SUS) in order to try to evaluate possible forms of control of gene expression involved in the catabolism of xyloglucan in cotyledons of Hymenaea courbaril . Primers were designed on the basis of extant sequences obtained from databases for all genes. We guided the search by sequences obtained from species of the Leguminosae. We cloned partial sequences of genes coding BGAL, XTH, NI and SUS. Semi-quantitative RT-PCR (semi-quantitative reverse transcription-polimerase chain reaction) was used to analyze expression at the 45th day after imbibition (when the rate of mobilization is maximal) in cotyledons, leaves, hypocotyls and roots every 6 hours during 24 hours. The experimental treatments were 1) seedlings grown under natural conditions; II) seedlings with top shoot excised; III) seedlings treated with auxin transport inhibitor (NPA ¿ naphtyl phtalamic acid); IV) seedilings grown in continous light and V) seedilings grown in darkness. We observed that there are three mechanisms of response to auxin. In cotyledons the genes related to xyloglucan degradation, BGAL1 and XTH1, showed responses by auxin and light in the plant. The genes related to sucrose metabolism, AlkIN1 and SUS1, have shown responses to carbon flux. In leaves, hypocotyls and roots the gene pattern change according carbon source comes from product of storage xyloglucan degradation in cotyledons. Our results revealed the first description of cDNA isolation and allow characterize pattern of genes involved native Brazilian tree species establishment. Our results and enzymatic data obtained by other researchers suggest a transcriptional control of storage mobilization in jatoba. From the sequencing data, it was also possible to observe that neutral invertase (NI) gene cloned from roots of jatoba contains aminoacid residues that characterise the NI as an alkaline invertase (AlkIN1) instead. Based in degradation and mobilization of xyloglucan storage in cotyledons we propose an expression control model for ß-galactosidase, XTH, alkaline invertase and sucrose synthase in all analyzed tissues during early development in seedilings of Hymenaea courbaril by endogenous auxin influence and light alternance / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:22:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Sonia.pdf: 1055370 bytes, checksum: 3e991b5884a4ccba6d3975a926b8a86a (MD5) Previous issue date: 2011-10-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Although guarana (Paullinia cupana var. Sorbilis (Mart.) Ducke) is a culture of great interest to the Amazon region, its productivity is still low. The availability of plant material that is genetically uniform, precocious and productive is the key for expanding and improving the culture in the region. To achieve this, it is recommended to do vegetative propagation, although some cultivars have rooting problems. This study aimed to evaluate the rooting of guarana from fertilized and unfertilized plants submitted to increasing levels of irradiance, with and without application of IBA. It also aimed to correlate the reserves of the branches and cuttings with rooting characteristics. The design was completely randomized in factorial arrangement of 6x4x2x2. The factors studied were the following: (i) five cultivars and one genotype of guarana, (ii) four levels of irradiance, (iii) with and without fertilization and (iv) application of IBA or not. The experimental unit contained 10 cuttings with four repetitions. The mother plants received or did not received fertilizer in the field for ten years and were subjected to increasing levels of irradiance for 60 days. The cuttings were taken from these plants and remained in the nursery for 120 days for rooting. After this period we evaluated the number of rooted cuttings with calluses and dead, root number, volume, length and dry weight of roots. The carbohydrate content was determined from the branches and rooted cuttings at the time of the dismantling of the research. The rooting of cuttings was higher for the fertilization treatment for BRS-Maues, CMU-CG 381 and BRS 882. The reduction of irradiance on the mother plant favored rooting. The highest percentage of rooting and lower mortality were obtained from cuttings without IBA treatment, independently of cultivar. The cv. BRS-Maués showed the highest rooting potential, while BRS-CG882 had the lowest rooting. BRS-Maués was more efficient in accumulating starch than the BRS- 882 CG and the rooting potential of both cultivars was positively correlated with the starch accumulated in each one. Regarding the total soluble sugars in the branches, there was no correlation for BRS-882 CG. For BRS-Maués the correlation was negative in relation to rooting of these twocultivars. / guaranazeiro (Paullinia cupana var. sorbilis (Mart.) Ducke) é uma cultura de grande interesse para a região Amazônica, mas sua produtividade é ainda baixa. A disponibilidade de material vegetal geneticamente uniforme, precoce e produtivo é fundamental para a expansão e melhoria da cultura na região. Para isso, recomenda-se a propagação vegetativa, no entanto algumas cultivares apresentam problemas de enraizamento. Esse trabalho teve como objetivo avaliar o enraizamento de estacas de guaranazeiro provenientes de plantas adubadas e não adubadas, submetidas à níveis crescentes de irradiância, com e sem aplicação de AIB e, correlacionar as reservas dos ramos e das estacas com as características de enraizamento. O delineamento adotado foi inteiramente casualizado, em arranjo fatorial de 6x4x2x2. Os fatores estudados foram: cinco cultivares e um genótipo de guaranazeiro, quatro níveis de irradiância, presença e ausência de adubação e aplicação ou não de AIB. A unidade experimental continha 10 estacas com 4 repetições. As plantas matrizes receberam ou não adubação, no campo, durante dez anos e foram submetidas a níveis crescentes de irradiância por 60 dias. As estacas foram retiradas dessas plantas e permaneceram em viveiro por 120 dias para enraizamento. Após este período foram avaliados o número de estacas enraizadas, com calos e mortas, número de raiz, volume, comprimento e peso da matéria seca das raízes. Os teores de carboidratos foram determinados nos ramos e nas estacas enraizadas no momento do desmonte da pesquisa. O enraizamento das estacas foi maior no tratamento com adubação para as cultivares BRS-Maués, CMU 381 e BRS-CG 882. A redução da irradiância sobre as plantas matrizes favoreceu o enraizamento. O maior percentual de enraizamento e o menor de mortalidade das estacas foram obtidos no tratamento sem AIB, independente, da cultivar. A cv. BRS-Maués expressou o maior potencial de enraizamento, enquanto BRS-CG882 apresentou o menor enraizamento de estacas. BRS-Maués foi mais eficiente em acumular amido que a BRS-CG 882 e o potencial de enraizamento das duas cultivares apresentou correlação positiva com o teor de amido acumulado em cada uma. Quanto aos açúcares solúveis totais nos ramos, para BRS-CG 882 não houve correlação e para BRS-Maués foi negativa em relação ao enraizamento dessas duas cultivares. Palavras-chave: Propagação vegetativa, estaquia, sombreamento, fitohormônio, carboidratos.

Submitted by Napoleana Barros Martins (napoleana_martins@hotmail.com) on 2016-08-08T14:31:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Fernanda Cardoso de Freitas.pdf: 1555586 bytes, checksum: f8768ffe8e726c40104ded747abbd2fd (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-26T14:13:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Fernanda Cardoso de Freitas.pdf: 1555586 bytes, checksum: f8768ffe8e726c40104ded747abbd2fd (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-26T14:17:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Fernanda Cardoso de Freitas.pdf: 1555586 bytes, checksum: f8768ffe8e726c40104ded747abbd2fd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T14:18:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Fernanda Cardoso de Freitas.pdf: 1555586 bytes, checksum: f8768ffe8e726c40104ded747abbd2fd (MD5) Previous issue date: 2015-11-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Before the plants remain completely submerged, the seasonal flooding occurs gradually in the várzea floodplain forests of the Amazon. The adaptive features developed by the plants to cope with the anaerobic conditions caused by the flooding period may vary according to the species, flooding duration, plant age and water column height. Therefore, we evaluated in Vitex cymosa 1-year follow-up seedlings if there are differences in the early development of morpho-physiological and biochemical features according to the influence of different levels of water column. The seedlings (n=15 per treatment) were submitted to three treatments over 45 days: no flooding (everyday watered), gradual flooding (daily 5 cm water column increase till the total plant submersion at the 10º day) and abrupt flooding (sudden totalsubmersion). After the flooding, the seedlings were monitored within 60 days. Non-destructive parameters were evaluated, which encopassed height and diameter growth, analysis of the chlorophyll a fluorescence, leaf loss and production and destructive parameters which encopassed biomass, relative growth rates, stalk and leaf anatomy, starch content and total soluble sugar amount. Based on morpho-physiological, anatomy and biochemical analysis, the gradual inundation allowed the V. cymosa seedlings to a short acclimatization period to face the total submersion, which was not observed in the abrupt flooding / Nas florestas de várzea da Amazônia a inundação geralmente ocorre de maneira gradativa até que as plantas permaneçam completamente submersas. As adaptações e respostas apresentadas pelas plantas devido à redução de oxigênio no período de inundação podem variar de acordo com a espécie, a idade da planta, a duração da inundação e a coluna de água. Assim, foi avaliado se as primeiras respostas morfofisiológicas e bioquímicas apresentadas por plântulas de Vitex cymosa com um ano de idade seriam diferentes de acordo com o nível da coluna de água imposta. Plântulas de V. cymosa (n = 15 / tratamento) foram submetidas a três tratamentos: sem inundação (rega diária), inundação gradativa (5 cm de água por dia até a total submersão no 10º dia) e inundação abrupta (submersão total súbita das plântulas) por um período de 45 dias. Após a inundação as plântulas foram monitoradas por um período de recuperação de 60 dias. Foram mensurados parâmetros não destrutivos, como crescimento em altura, diâmetro do caule, fluorescência da clorofila a, perda e produção de folhas e parâmetros destrutivos como biomassa, taxa de crescimento relativo, anatomia do caule e raiz, teor de amido e o açúcar solúvel total nas plântulas. Com base na análise conjunta das respostas morfofisiológicas e bioquímicas apresentadas, a inundação gradativa permitiu um curto período de aclimatação para as plântulas de V. cymosa enfrentarem a submersão completa, o que não se observou para a inundação abrupta.

O CO2 supercrítico (CO2-sc) é um bom solvente para substâncias apolares e pouco polares de baixa massa molecular. A fim de tornar este meio um melhor solvente para uma gama maior de substâncias, desenvolvemos 8 novos tensoativos, sendo seis derivados de açúcares (N-metil-D-glucamina, 2-D-Glucosamina e Sorbitano) e três derivados de óleos vegetais (linhaça e palma). Os tensoativos possuem como grupos CO2-fílicos, o acetato (peracetilados) ou o t-butil-glicidil-éter, e como grupo CO2-fóbico o dodecanoato, que pode proporcionar um ambiente \"apolar\" em eventuais agregados formados em CO2-sc. A solubilidade e o comportamento de fase destes novos tensoativos em CO2-sc foram investigados, mostrando-se bastante solúveis e apresentando pontos de névoa comparáveis a outros tensoativos fluorados (mais agressivos, do ponto de vista ambiental). A polaridade que estes tensoativos agregam ao meio foi verificada através de análises de solvatocromismo, utilizando o corante de Reichardt (Betaína-30) e fluorescência de pireno, as quais mostraram resultados bastante promissores, obtendo-se polaridades baixas e médias (similares a álcoois de cadeia média ou solventes clorados). / Supercritical CO2 (sc-CO2) is a good solvent for non-polar or almost non-polar substances with low molecular mass. In order to turn this medium into a better solvent for a wider range of substances, we developed 8 new surfactants, six of them sugar derivatives (N-methyl-D-glucamine, 2-D-Glucosamine and Sorbitan), and three of them vegetable oil derivatives (palm and linseed). The surfactants have either acetate (peracetylated) or t-butyl-glycidyl ether as CO2-philic groups, and as CO2-phobic group, dodecanoate, that can provide an \"apolar\" environment in aggregates that might be formed in sc-CO2. The solubility and phase behavior of these new surfactants in sc-CO2 were investigated, and they showed to be very soluble presenting low cloud pressures comparable to fluorinated surfactants (that are more aggressive from an environmental perspective). The polarity that these new surfactants brought to the medium was verified through the solvatochromic analysis, using the Reichardt\'s dye (Betaine-30) and pyrene fluorescence, which showed promising results, with polarities similar to medium chain alcohols or chlorinated solvents