Made available in DSpace on 2013-08-07T19:13:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437736-Texto+Completo-0.pdf: 1457817 bytes, checksum: bdde27fe7d092198d722bf49a1924aa8 (MD5) Previous issue date: 2011 / Franciscana (Pontoporia blainvillei) is the only extant representative of the Pontoporiidae family. This species occurs along the Atlantic coast of South America from Itaunas, Espirito Santo in Brazil to Golfo Nuevo, Valdes Peninsula in Argentina. The most important threat to the species is the accidental by-catch that in some places reached the number of 1000 related events per year. In recent years an increasingly number of studies had revealed the existence of considerable genetic variation along the geographical distribution of P. blainvillei. In this study, looking to collaborate towards a better comprehension of such existing structure, we analyzed new molecular data, including the sequencing of mitochondrial DNA control region and 11 microsatellite loci from 253 individuals along the Brazilian, Uruguayan and Argentine coast. For the mitochondrial DNA analysis, we added sequences previously deposited in GenBank, totalizing 512 sequences. Results obtained based on the two molecular markers revealed a clear differentiation of the species in three main groups: (1) Rio de Janeiro / Espirito Santo, (2) Sao Paulo and north of Santa Catarina, and (3) south of Santa Catarina, Rio Grande do Sul, Uruguay and Argentina. The study also shows alarming estimates in reference to the effective size of some populations, mainly from Rio de Janeiro/Espirito Santo which will probably reflect on its conservation status. These results supports the definition of the four management areas (Franciscana Management Area - FMAs) previously suggested by Secchi and associates in 2003, and point out the importance of this definition to the conservation of the genetic diversity of the species. / A toninha, Pontoporia blainvillei é o único representante atual da família de odontocetáceos Pontoporiidae. Esta espécie ocorre ao longo da costa atlântica da América do Sul, entre Itaúnas, Espírito Santo e o Golfo Nuevo, Península Valdés, Argentina. A principal ameaça à espécie são as capturas acidentais em redes de pesca, que em algumas localidades chegaram a atingir o número de 1000 capturas anuais. Nos últimos anos, um número crescente de estudos tem revelado a existência de variações genéticas consideráveis ao longo da distribuição geográfica de P. blainvillei. Visando colaborar para uma melhor compreensão dessa estruturação existente, novas informações moleculares foram analisadas, incluindo o sequenciamento da região controladora do DNA mitocondrial e 11 loci de microssatélites de 253 indivíduos ao longo da costa brasileira, uruguaia e argentina. Para as análises do DNA mitocondrial foram incluidas sequências previamente depositadas no GenBank, totalizando 512 sequências. Os resultados obtidos a partir dos dois marcadores moleculares revelam uma clara diferenciação da espécie em três grupos principais: 1) Rio de Janeiro/Espírito Santo, 2) São Paulo/Paraná e norte de Santa Catarina, e 3) Sul de Santa Catarina, Rio Grande do Sul, Uruguai e Argentina. O estudo também apontou estimativas preocupantes no que se refere ao tamanho efetivo de algumas populações, em especial à do Rio de Janeiro/Espirito Santo e consequentemente ao seu status de conservação. Os resultados corroboram a definição das quatro áreas de manejo (Franciscana Management Areas – FMAs) previamente sugeridas por Secchi e colaboradores em 2003, e ressaltam a importância desta definição para a Conservação da diversidade genética da espécie.

Made available in DSpace on 2014-03-11T02:01:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000454365-Texto+Completo-0.pdf: 3007905 bytes, checksum: b56832ba15c565900ea3873756783426 (MD5) Previous issue date: 2013 / Commercial whaling mainly during the 20th century reduced most populations of humpback whale (Megaptera novaeangliae). Seven breeding stocks (A-G) are recognized by the International Whaling Commission (IWC) in the Southern Hemisphere. Humpback whales from Breeding stock A (BSA) are distributed along the Brazilian coast (mainly between 5° and 23° S), in the Southwestern Atlantic, while the humpbacks from breeding stock G (BSG) occur from Peru (6° S) to Costa Rica (12° N) coast, in the eastern Pacific Ocean. Despite previous studies have provided important information about both South America breeding grounds, the degree of connectivity and differentiation between these populations needs to be better investigated. Therefore, the manuscript 2 of this thesis represents the first analysis of the genetic differentiation and level of gene flow between these populations, using mitochondrial DNA sequences and 16 microsatellite loci. Our results showed a significant differentiation between Breeding Stocks A and G, at both molecular markers (mtDNA and microsatellites), in specially through the Bayesian clustering analysis that identified two populations even without sampling location information. However, the assignment tests have indicated an exchange of individuals between these populations, but with a gene flow low enough to allowing the demographic independence of these two stocks. Our data segregated by gender showed a significant differentiation between females from Brazil and Colombia, and between males from Brazil and Antarctic Peninsula, suggesting higher fidelity of females to the breeding areas and of males to the feeding areas. Nevertheless, recent studies have shown females undertaking long movements between breeding grounds. Thus, a sampling effort mainly on arrival and departure of the whales migrating for these areas is needed for a better understanding of the migratory pattern of the humpbacks of these populations. Although the Brazilian humpback whale population has shown signs of recovery after suffering a reduction estimated to 2% of its historical size in the late 1950s, no genetic study has provided estimates of effective and census size, contemporary and historical, for this population. For a better understanding of the whaling impact on this population, its demographic history was investigated using different molecular markers and methods (manuscripts 1 and 3). In the first manuscript ten microsatellite loci were used to estimate for the first time its contemporary population size. In the manuscript 3 was used for the first time the high throughput sequencing technology to sequence multiple nuclear loci at 24 Brazilian humpback samples. Despite the approximate Bayesian computation analysis has supported a scenario of constant Ne over size changes scenarios during the whaling period; our estimates of contemporary size at different time frames have detected a fluctuation of the population size during this period (~ 2 to 4 generations ago). Moreover, multiple sequence loci data have indicated a most recent bottleneck caused by anthropogenic population depletion over past 200 years. Our estimate of historical abundance (~ 148,000 individuals) indicates that BSA humpback population was much larger than that estimated (24,700 individuals) by whaling catch records. Finally, an extended Bayesian skyline plot of the nuclear loci indicated that the population was declining ever since a size peak around 30,000 years ago, which may be associated with the climate changes caused by glacial/interglacial cycles. These results suggest that Southwestern Atlantic humpback population was higher before the onset of the whaling period, which may explain the discrepancy found between previous genetic and catch record population size estimates at this period. / A caça comercial baleeira durante o século XX reduziu significativamente a maioria das populações de baleias jubarte (Megaptera novaeangliae). Sete estoques reprodutivos (A-G) são reconhecidos pela Comissão Internacional Baleeira (CIB) no Hemisfério Sul. As baleias jubarte do estoque reprodutivo A são distribuídas ao longo da costa brasileira (principalmente entre 5° e 23° S), no Oceano Atlântico Sul Ocidental, enquanto as jubartes do estoque G ocorrem da costa do Peru (6° S) até a Costa Rica (12° N), no Oceano Pacífico Oriental. Apesar de estudos anteriores terem fornecido importantes informações sobre ambos estoques reprodutivos Sul Americanos, o grau de conectividade e de diferenciação entre essas populações precisa ser melhor investigado. Deste modo, o manuscrito 2 desta tese representa a primeira análise de diferenciação genética e nível de fluxo gênico entre essas populações, usando sequências de DNA mitocondrial e 16 locos de microssatélites. Nossos resultados revelaram uma significante diferenciação entre os estoques A e G em ambos marcadores moleculares (DNAmt e microssatélites), especialmente através da análise bayesiana que identificou duas populações mesmo sem informação dos locais de amostragem. No entanto, os testes de assignment indicaram um intercâmbio de indivíduos entre essas populações, mas com um fluxo gênico baixo o suficiente permitindo a independência demográfica desses dois estoques. Nossos dados separados por sexo apresentaram uma diferenciação genética significativa entre as fêmeas do Brasil e da Colômbia, e entre os machos do Brasil e da Península Antártica, sugerindo maior fidelidade das fêmeas às áreas de reprodução e dos machos às áreas de alimentação. Apesar disso, estudos recentes têm demonstrado fêmeas realizando longos movimentos entre áreas de reprodução. Portanto, um esforço de amostragem principalmente na chegada e na saída das baleias migrando para essas áreas de reprodução é necessário para melhor compreender o padrão migratório das jubartes dessas populações. Embora a população de baleias jubarte do Brasil tem demonstrado sinais de recuperação após sofrer uma redução estimada a 2% de seu tamanho histórico até meados de 1950, nenhum estudo genético tem fornecido estimativas de tamanho efetivo e de censo, atual e histórico, para essa população. Para uma melhor compreensão do impacto da caça nessa população, sua história demográfica foi investigada utilizando diferentes marcadores moleculares e diferentes métodos (manuscritos 1 e 3).No primeiro manuscrito dez locos de microssatélites foram usados para estimar pela primeira vez o tamanho atual dessa população. No manuscrito 3 foi usado pela primeira vez a tecnologia de sequenciamento em larga escala para sequenciar múltiplos locos nucleares em 24 amostras de jubartes brasileiras. Apesar da análise de computação Bayesiana aproximada suportar um cenário de população constante sobre os cenários de mudança do tamanho da população durante a caça comercial, nossas estimativas de tamanho atual em diferentes períodos de tempo demonstraram uma flutuação do tamanho da população durante esse período (~ 2 a 4 gerações atrás). Além disso, os dados de múltiplos locos indicaram um declínio de população mais recente causado pela exploração antropogênica nos últimos 200 anos. Nossa estimativa de abundância histórica (~ 148. 000 indivíduos) indica que a população de jubartes do estoque A foi muito maior do que aquele estimado (~ 24. 700 indivíduos) pelos registros da caça. Finalmente, os dados dos locos nucleares também indicaram que a população estava declinando desde seu tamanho máximo atingido a cerca de 30 mil anos atrás, possivelmente relacionada com as mudanças climáticas causadas pelos ciclos de glaciação/interglaciação. Esses resultados sugerem que a população do Oceano Atlântico Sul Ocidental era maior antes do início da caça, o que deve explicar a discrepância encontrada entre as estimativas de tamanho da população, genéticas e baseadas em dados da caça.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1292_1.pdf: 3981453 bytes, checksum: 55f80f8c191565bf6b5669ef77b2cd8b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A preocupação sobre os efeitos das prospecções sísmicas marítimas nos cetáceos ganhou força após a abertura do mercado de exploração e produção de petróleo em 1997. O Governo Federal passou a exigir das empresas de geofísica a realização de monitoramento de mamíferos aquáticos durante as sísmicas marítimas. Mesmo assim, pouco se conhece sobre os efeitos da atividade nos cetáceos no Brasil. Este estudo analisou os monitoramentos de cetáceos ocorridos entre 1999 a 2004 durante as sísmicas marítimas. Estas informações foram associadas aos resultados das observações de cetáceos e com dados dos encalhes de baleias-jubarte no mesmo período. Foi ainda realizado um levantamento do histórico das sísmicas marítimas desde o início da exploração de petróleo no Brasil, bem como sobre as informações científicas dos impactos da atividade nos cetáceos. As sísmicas marítimas, embora estando presentes desde a década de 1950, não constituem uma ameaça recente às espécies de cetáceos. Atualmente a atividade apresenta maior ameaça às espécies oceânicas que às costeiras, pois as sísmicas vêm sendo realizadas cada vez mais em águas profundas. Não foi observada relação significativa entre os encalhes de baleias-jubarte e as sísmicas marítimas. Significativa correlação negativa foi identificada entre as sísmicas marítimas e a diversidade de cetáceos, sugerindo que este grupo pode ser utilizado como indicador biológico do impacto da atividade. Os impactos causados pelas sísmicas marítimas nos cetáceos não são facilmente evidenciáveis, sendo necessárias análises de séries temporais com metodologia de coleta de dados padronizada. Os órgãos reguladores da atividade devem atuar de maneira integrada com as instituições financiadoras para definir programas de monitoramento de longo prazo visando identificar efeitos da atividade em populações de cetáceos ocorrentes no Brasil

Los cachalotes enanos de la familia Kogiidae son un grupo muy poco conocido de mamíferos marinos. El ejemplar MUSM 973 es un nuevo taxón de kógido proveniente del Mioceno tardío de la Formación Pisco, Montemar, Arequipa. Este animal es reconocido como Kogiidae debido a poseer una cuenca supracraneal reducida, ausencia del contacto entre escamoso y lacrimojugal, y la presencia de una cresta sagital. Se realizaron dos análisis filogenéticos principales a fin de contrastar las afinidades filogenéticas de este animal, junto a otros taxones fósiles de physeteroideos. Los resultados del análisis filogenético indican que MUSM 973 se encuentra cercanamente relacionado con Scaphokogia cochlearis, diferenciándose de éste por poseer un rostro más corto, mayor desarrollo de las crestas maxilares, un pterigoides mucho más prominente y el rostro ligeramente afinado anteriormente. La inclusión de MUSM 973 junto a Scaphokogia permite replantear el clado Scaphokogiinae como el grupo de kógidos que incluyen a animales con rostro mediano a largo, canal mesorostral muy desarrollado y cresta sagital desviada hacia el lado izquierdo del cráneo. El desarrollo hipertrofiado del canal mesorostral sugiere que dicha estructura pudo usarse a manera de sensor béntico, evidenciado también en la proyección ventral del rostro. Esta presumible adaptación, junto al desarrollo notorio del órgano espermaceti, pueden haber creado un nuevo nicho ecológico en el cual estos cachalotes prosperaron, antes de la llegada de los delfines. Finalmente, la inclusión de este nuevo taxón junto a Koristocetus pescei, Acrophyseter deinodon y Scaphokogia cochlearis demuestra que la diversificación del grupo fue mucho mayor a lo reportado para el Mioceno tardío. Además, se evidencia que las condiciones existentes en el antiguo mar peruano debieron ser excepcionalmente ricas para poder mantener a esta gran diversidad de animales. / Tesis

Aquatic mammals are sentinels of zoonotic pathogens that may be a threat to species conservation, to humans and domestic animals. Brucella genus is responsible for brucellosis, one of the main widespread zoonosis. In aquatic mammals, Brucella spp. was firstly described in 1994 and currently there are two recognized species infecting that group: B. ceti and B. pinnipedialis. In cetaceans, Brucella spp. has been linked to asymptomatic infection, acute or chronic disease and several pathological processes which may lead to stranding and/or death. In pinnipeds, pathogenicity of Brucella spp. is still unclear. Data about Brucella spp. in aquatic mammals in South Atlantic Ocean particularly in Brazil is limited, with a significant knowledge gap despite the rich diversity of this group. In this research, we investigated exposure to and/or infection by Brucella spp. by serological, molecular, histopathological, immunohistochemical and microbiological methods in samples of aquatic mammals of Brazil kept at the Marine Mammal Tissue Bank, Department of Pathology, School of Veterinary Medicine and Animal Sciences, University of São Paulo, Brazil. Sera from 63 cetaceans [families Iniidae (n=37), Delphinidae and Kogiidae (n=26)], 35 pinnipeds (Southern elephant Seals, Mirounga leonina), and 21 West Indian manatees (Trichechus manatus) were tested via the Rose Bengal Test, a commercial competitive enzyme-linked immunosorbent assay (c-ELISA) and the serum agglutination test (SAT; selected c-ELISA positives) to detect Brucella spp. antibodies. In addition, DNA from selected samples of 124 cetaceans, 4 pinnipeds and 1 manatee were analyzed by conventional PCR and/or real-time PCR (qPCR) targeting the genus Brucella spp. Culture, histopathology and immunohistochemistry (IHC) were performed in samples from exposed or infected individuals (serology and/or conventional PCR/qPCR positives; n=13). Antibodies against Brucella spp. were detected in 3/35 (8.6%) of the M. leonina tested while Iniidae and Kogiidae cetaceans and manatees were negative. Brucella spp. DNA was detected in 4/124 (3.2%) of the cetaceans tested by conventional PCR/qPCR: one Clymene dolphin (Stenella clymene) with acute brucellosis, positive by serology and IHC; and three other individuals without available sera: one asymptomatic Franciscana (Pontoporia blainvillei), positive by qPCR and IHC; one case of chronic brucellosis in a Spinner dolphin (Stenella longirostris) presenting fibrinosuppurative atlanto-occipital osteoarthritis with abscess formation, positive by qPCR and by IHC; one Guiana dolphin (Sotalia guianensis), positive by conventional PCR/qPCR and by IHC and previously diagnosed with cetacean morbillivirus. Despite negative PCR amplification, Brucella-type lesions were found in one S. clymene and one pigmy killer whale (Feresa attenuata), both positive by serology and by IHC. Positive serology and/or IHC suggested exposure and/or Brucella-infection in three short-finned pilot whale (Globicephala macrorhynchus), two melon-headed whale (Peponocephala electra), a bottlenose dolphin (Tursiops truncatus) and a S. clymene. Main part of the Brucella spp. exposed or infected cetaceans came from State of Ceará, Northeastern Brazil. Culture was not successful, hampering strains classification. All the pinnipeds and the manatees tested by PCR were negative. Opportunistic screening of Leptospira spp. exposure via the microscopic agglutination test on all sera samples used for the Brucella spp. screening gave negative results. In conclusion, we found Brucella spp. exposure, asymptomatic infection, as well as cases of acute and chronic brucellosis and coinfection by Brucella spp. and other pathogens. To our knowledge, this research is the first long-term survey of Brucella spp. in aquatic mammals in South America, widening the hosts and the geographic range of this agent and contributing to the understanding of pathological and epidemiological aspects of its infection. Further research is needed to fully characterize the strains involved, evaluate their public health relevance and the possible occurrence and impacts in other species of aquatic mammals in Brazil. / Os mamíferos aquáticos são sentinelas de patógenos zoonoticos, os quais podem representar uma ameaça a sua conservação, aos humanos e aos animais domésticos. O género Brucella é responsável pela brucelose, uma das zoonoses mais comuns. Nos mamíferos aquáticos Brucella spp. foi descrita pela primeira vez em 1994 e atualmente duas espécies são reconhecidas nesse grupo: B. ceti e B. pinnipedialis. Nos cetáceos, Brucella spp. tem sido associada a infecção assintomática, doença aguda ou crônica e diversos processos patológicos que podem levar ao encalhe e/ou morte. Nos pinípedes, a patogenicidade de Brucella spp. ainda não é clara. Dados sobre Brucella spp. em mamíferos aquáticos no Oceano Atlântico Sul, particularmente no Brasil, são limitados com uma significativa lacuna de conhecimento mesmo com a rica diversidade. Nesta pesquisa, investigou-se exposição a e/ou infecção por Brucella spp. com métodos sorológicos, moleculares, histopatológicos, imunohistoquimicos e microbiológicos em amostras de mamíferos aquáticos do Brasil armazenadas no banco de tecidos de mamíferos marinhos, Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo. Soro de 63 cetáceos [famílias Iniidae (n=37), Delphinidae e Kogiidae (n=26)], 35 pinipedes (Elefante-marinho-do-sul, Mirounga leonina) e 21 peixe-bois marinhos (Trichechus manatus) foi testado pelo Rosa de Bengala, um kit comercial de ensaio imunossorvente ligado a enzima de competição (c-ELISA) e a prova de soroaglutinação lenta em tubo (SAT; c-ELISA positivos selecionados) para detecção de anticorpos anti-Brucella spp. Em adição, DNA de amostras selecionadas de 124 cetáceos, 4 pinípedes e 1 peixe-boi marinho foram analisadas pelo PCR convencional e/ou em tempo real (qPCR) tendo como alvo o gênero Brucella spp. Realizou-se cultivo, histopatologia e imunohistoquimica (IHQ) nas amostras dos indivíduos expostos ou infectados (positivos na sorologia e/ou PCR convencional/qPCR; n=13). Anticorpos anti-Brucella spp. foram detectados em 3/35 (8.6%) dos M. leonina testados enquanto cetáceos das famílias Iniidae e Kogiidae e os peixe-bois foram negativos. DNA de Brucella spp. foi detectado em 4/124 (3.2%) dos cetáceos analisados por PCR convencional/qPCR: um golfinho-climene (Stenella clymene) com brucelose aguda, positivo pela sorologia e IHQ; e três indivíduos adicionais sem soro disponível: uma Franciscana (Pontoporia blainvillei), assintomática, positiva pela qPCR e IHQ; um caso de brucelose crônica em um golfinho-rotador (Stenella longirostris), apresentando osteoartrite fibrinosupurativa atlantoccipital com formação de abcesso, positivo pela qPCR e IHQ; um boto-cinza (Sotalia guianensis), positivo pela PCR convencional/qPCR e IHQ e previamente diagnosticado com morbillivirus dos cetáceos. Apesar da PCR negativa, lesões compatíveis com brucelose foram encontradas em um S. clymene e uma orca-pigmeia (Feresa attenuata), ambos positivos pela sorologia e IHQ. Exposição e/ou infecção por Brucella spp. foi confirmada pela sorologia e/ou IHQ positiva em três baleia-piloto-de-aleta-curta (Globicephala macrorhynchus), dois golfinhos cabeça de melão (Peponocephala electra), um golfinho nariz de garrafa (Tursiops truncatus) e um S. clymene. A maior parte dos cetáceos expostos a/ou infectados por Brucella spp. foram provenientes do estado de Ceará, nordeste do Brasil. A cultura não foi bem-sucedida, prejudicando a classificação das cepas envolvidas. Todos os pinípedes e peixe-bois testados foram negativos na PCR. Triagem oportunistico para avaliar exposição a Leptospira spp. por meio do teste de aglutinação microscópica nos soros testados para Brucella spp. foi negativo. Em conclusão, confirmou-se exposição a Brucella spp., infecção assintomática, brucelose aguda e crônica e coinfecção por Brucella spp. e outros agentes patogênicos. Dentro de nosso conhecimento, esta pesquisa constitui o primeiro trabalho de longo prazo sobre Brucella spp. em mamíferos aquáticos na América do Sul, ampliando a sua faixa de hospedeiros e localização geográfica e contribuindo na compreensão dos aspectos patológicos e epidemiológicos de sua infecção. Pesquisas adicionais são necessárias para caracterizar as cepas envolvidas, avaliar a sua relevância na saúde publica, bem como sua possível ocorrência e impactos em outras espécies de mamíferos aquáticos no Brasil.

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Os compostos organoclorados causam grande impacto na natureza devido a três características básicas: persistência ambiental, bioacumulação e alta toxicidade. Os mamíferos marinhos estão entre os organismos mais vulneráveis à toxicidade crônica desses contaminantes porque, além de concentrá-los em grande quantidade, a fêmea transfere parte de sua carga ao filhote durante a gestação e a lactação. Assim, o presente trabalho teve como objetivos otimizar uma metodologia para determinação de organoclorados (pesticidas e PCBs) em matrizes gordurosas e verificar a ocorrência dos mesmos na gordura subcutânea de mamíferos marinhos amostrados na costa de São Paulo (Brasil) e na Ilha Rei George (Antártica). No protocolo metodológico otimizado, a extração foi realizada em extrator Soxhlet (8 h) com uma mistura de n-hexano e diclorometano. A etapa de purificação foi feita através de tratamento ácido e o extrato final analisado em cromatógrafo a gás equipado com detector de captura de elétrons (GC-ECD). A performance do método foi avaliada com material de referência certificado, enquadrando-se dentro de padrões internacionais de controle de qualidade. O limite de detecção do método foi em média 2 ng g-1. As análises apontaram DDTs e PCBs como os grupos que mais causam impacto nos cetáceos da costa de São Paulo. Isso refletiu o histórico de ambos no Brasil, tanto em indústria como em agricultura e saúde pública. Em contrapartida, HCHs e HCB não apresentaram concentrações elevadas, fato que pode ser atribuído à volatilidade dos mesmos em regiões de clima tropical. Da mesma maneira, a-clordano, g-clordano e mirex não foram detectados em níveis significativos. A foca de Weddell (Leptonychotes weddelli), habitante do continente antártico, evidenciou as menores cargas de contaminante entre os animais estudados. As toninhas (Pontoporia blainvillei) e o golfinho-nariz-de-garrafa (Tursiops truncatus) também apresentaram baixos níveis de organoclorados. Os botos-cinza (Sotalia fluviatilis) revelaram concentrações de DDT iguais ou superiores a cetáceos da Índia, país onde esse pesticida ainda não está proibido. Já o golfinho-de-dentes-rugosos (Steno bredanensis) mostrou a maior contaminação entre os animais analisados, comparável a espécies estudadas em águas costeiras de países desenvolvidos (onde os organoclorados foram muito utilizados). / Organochlorine compounds cause strong impact on the nature, as a consequence of three basic characteristics: environmental persistence, bioaccumulation, and high toxicity. The marine mammals are one of the most vulnerable organisms to the chronic toxicity of these contaminants. Besides the high concentration in the body, the female transfers part of her load to the offspring during gestation and lactation. The aim of this study was (1) the optimization of a methodology for determining chlorinated hydrocarbons (pesticides and PCBs) in fatty biological matrices and (2) the analysis of organochlorines in marine mammals blubber sampled along São Paulo coast (Brazil) and King George Island (Antarctica). According to the optimized methodology, the extraction was carried out in Soxhlet apparatus (8 h) with a mixture of n-hexane and dichloromethane. The clean-up was carried out with acid treatment and the resulting extract injected into gas chromatography coupled to electron capture detector (GC-ECD). The method performance was evaluated with certified reference material and fitted for international standards of control quality. The mean method detection limit was 2 ng g-1. DDTs and PCBs were the most concentrated organochlorines in the cetaceans from São Paulo coast. These findings reflected their past usage in Brazil by industry, agriculture, and public health. On the other hand, both HCHs and HCB were not found in high concentration likely due to their volatility in tropical climate areas. Mirex, a-chlordane and g-chlordane were not detected in elevated levels. The Weddell seal (Leptonychotes weddelli), from Antarctic continent, presented the smallest load among the studied animals. As the same way, the franciscanas (Pontoporia blainvillei) and the bottlenose dolphin (Tursiops truncatus) presented low organochlorine levels. The marine tucuxi (Sotalia fluviatilis) showed equal or higher DDT concentration than Indian cetaceans where that pesticide is still in use. The rough-toothed dolphin (Steno bredanensis) revealed the greatest contamination among the analyzed animals, comparable to species studied in the coastal waters of developed countries (where organochlorines were extensively used).

Os linfócitos, principais células do sistema imune, podem ser encontrados em órgãos e tecidos de dois grandes sistemas do corpo: o sistema linfático, composto por uma extensa rede de vasos linfáticos e linfonodos; e o sistema linfoide, mais abrangente e que, além de englobar o sistema linfático, abrange todas as células, tecidos e órgãos do corpo que contêm agregados linfocitários, tais como o timo, baço e linfonodos. Embora esteja amplamente descrito para animais domésticos e alguns animais silvestres, estudos sobre o sistema imune em cetáceos são escassos. A influência negativa de contaminantes no sistema imune em mamíferos aquáticos está em constante discussão. Assim, um conhecimento mais profundo da anatomia deste sistema é essencial para a interpretação clínica e de achados de necropsia, para uma melhor compreensão dos achados patológicos. Portanto, o objetivo deste estudo foi caracterizar morfológica e ultraestruturalmente os órgãos do sistema linfoides de odontocetos de ocorrência no litoral brasileiro. As amostras utilizadas foram procedentes de animais encalhados nas regiões norte e nordeste do Brasil. Os órgãos analisados foram baço, timo e linfonodo, bem como os tecidos linfoides associados à mucosa. Primeiramente as amostras foram localizadas topograficamente e avaliadas macroscopicamente. Posteriormente, as amostras foram fixadas e analisadas por microscopias de luz, eletrônica de varredura e transmissão, imunohistoquímica e histomorfometria. Através das análises realizadas foi possível observar que os órgãos e tecidos linfoides em cetáceos são semelhantes ao observado em mamíferos domésticos, com algumas particularidades. Não existem diferenças morfológicas com relação ao timo entre as espécies estudadas, com exceção da não existência de tecido adiposo substituindo o órgão em animais mais jovens, e a presença de Corpúsculos de Hassal mais evidentes em tamanho neste grupo. Novos grupos de linfonodos foram descritos de acordo com a sua localização, entretanto todos possuiram arquitetura semelhante ao descrito na literatura para mamíferos terrestres. Os linfonodos estavam dispostos de forma solitária ou em grupos e apresentavam formato variado, recobertos por uma cápsula, e o parênquima do órgão dividiu-se em região cortical e medular. Os centros germinativos apresentaram-se mais evidentes e desenvolvidos em animais filhotes e jovens. Os baços e baços acessórios eram morfologicamente semelhantes, caracterizados por numerosos nódulos linfáticos delimitados pela bainha linfoide periarterial e uma rede celular difusa que circundava os nódulos linfáticos, sem diferenciação entre as camadas cortical e medular. Centros germinativos se tornaram mais discretos e reduzidos em número com o aumento da idade. Os baços acessórios estavam firmemente aderidos ao baço e/ou à grande curvatura da primeira cavidade do estômago, sendo mais prevalentes em animais com maior escore corporal e de mergulhos mais profundos, sugerindo uma função de reservatório sanguíneo complementar. Os tecidos linfoides associados à mucosa em cetáceos foram semelhantes aos observados em mamíferos terrestres, com adaptações inerentes ao meio aquático, como a presença de tonsilas orofaríngea e anal, assegurando uma resposta imunológica mais eficiente diante de desafios antigênicos constantes presentes em seu habitat. Sugere-se que este segmento do sistema linfoide é essencial para a proteção do animal diante dos contaminantes presentes em seu habitat. Com base nos achados do presente estudo, será possível uma melhor compreensão do funcionamento e estrutura do sistema imunológico das espécies estudadas, colaborando na elucidação das causas de encalhe destes animais, que poderão funcionar como potenciais indicadores ambientais / Lymphocytes, key cells of the immune system, can be found in organs and tissues of two major systems of the body: the lymphatic system, composed of an extensive network of lymph vessels and lymph nodes; and the lymphoid system, more comprehensive that, in addition to comprise the lymphatic system, includes all cells, tissues and organs containing lymphoid aggregates, such as the thymus and spleen. Although these systems are widely described in domestic animals and some wildlife species, studies about marine mammals are scarce. The negative influence of contaminants in the immune system of aquatic mammals is in constant discussion. The knowledge on the anatomy of these systems is essential for clinical interpretation and necropsy, providing a better understanding of the pathological findings. Therefore, the aim of this study was to characterize the morphology and ultrastructure of lymphoid system of odontocetes occurring in the Brazilian coast. Samples from animals stranded in the northern and northeastern regions of Brazil were collected and organs spleen, thymus and lymph node and mucosa-associated lymphoid tissue were analyzed. First, all samples were evaluated macroscopically and topographically located. Subsequently, they were fixed and analyzed by light microscopy, scanning electron and transmission, immunohistochemistry and histomorphometry. Through these analyzes it was observed that the organs and lymphoid tissues in cetaceans are similar to that observed in domestic mammals, with some peculiarities inherent to their habitat. There were no morphological differences from the thymus in the species studied, except for the absence of adipose tissue replacing the organ in younger animals, and the presence of Hassall corpuscles more prominent in this group. New groups of lymph nodes were described, possessing architecture similar to that described in the literature for terrestrial mammals. Lymph nodes were arranged solitarily or in groups and had varied format, covered by a capsule and the parenchyma of the organ was divided into cortical and medullary region. Their germinal centers had become more evident and developed in puppies and young animals. Spleens and accessory spleens were morphologically similar, characterized by numerous lymph nodules delimited by periarterial lymphoid sheath and a diffuse cellular network in its surrounding area, without differentiation between cortical and medullary layers. Germinal centers became more discrete and reduced in number with increasing age. Accessory spleens were firmly adhered to the spleen and / or the greater curvature of the first stomach and were more prevalent in animals with higher body score and dives deeper, suggesting a role of complement blood reservoir. The mucosa-associated lymphoid tissues in cetaceans were similar to those observed in terrestrial mammals, with inherent aquatic adaptations, such as the presence of oropharyngeal and anal tonsils, ensuring a more efficient immune response in the face of constant antigenic challenges present in their habitat. It is suggested that this segment of the lymphoid system is essential for the protection of the animal before the contaminants in their habitat. Based on these findings, this study will enable a better understanding of the structure and functioning of the immune system of the species studied, collaborating in the elucidation of causes of stranding of these animals, whicih may act as potential environmental indicators

Made available in DSpace on 2016-08-31T13:29:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaPDB_DISSERT.pdf: 5575228 bytes, checksum: a1c79702c349b805acdba52d04a353ce (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Pathological examination of marine mammals carcasses is an important tool to understand the natural morphophysiology as well as the morphological changes associated with some diseases and thus highlight the potential anthropogenic impacts. This work had as aim conduct studies on histopathology of the organs of the dead stranded cetaceans and Sirenia in the Brazilian northeast coast, or that died during the rehabilitation process in Specialized Centers of the Region. For this, samples were taken belonging to the biological collection of Projeto Cetáceos da Costa Branca (PCCB), Associação de Pesquisa e Preservação de Ecossistemas Aquáticos (AQUASIS) and from Centro de Mamíferos Aquáticos (CMA). The tissue samples were submitted to the conventional method of preparing histological slides. Whereas the studied animals belong to different species, age and sex, a general descriptive analysis of the pathological aspects found in each case was carried out. From a total of 237 samples belonging to 66 individuals of the Cetacea order (n = 28) and Sirenia (n = 38), 34,17% (n = 81) exhibited microscopic changes, 54,85% (n = 130) were normal and 10,97% (n = 26) were autolysed. Among the obvious microscopic changes was diagnosed 50% of stomatitis in the oral system (n = 1), the heart showed 6.66% of interstitial fibrosis (n = 2), 10% of haemorrhage (n = 3) and 6.66% myocarditis (n = 2). The lungs showed pulmonary edema in 19% of the analyzes (n = 11), 10% of vascular congestion% (n = 6), 13% of haemorrhage (n = 8), 3% of emphysema (n = 2), 7% full of hemosiderin (n = 4), 3% of interstitial pneumonia (n = 2), 2% of eosinophilic pneumonia (n = 1), 2% of parasitic granuloma (n = 1), 2% of parasitic cyst (n = 1), 2% of traqueíte (n = 1). In the stomach was visualized a hemorrhage (16.66%; n = 1) and in the gut was detected nodular lymphoid hyperplasia (7%; n = 2), enteritis (4%; n = 1), blood vessels congestion (4%; n = 1) and vacuolar degeneration (4%; n = 1). The livers analysis showed 23% of vacuolar degeneration (n = 5), 9% of hepatocellular necrosis (n = 2), 9% moderate deposit of melanin granules (n = 2), 4.54 % of chronic hepatitis (n = 1), 9% of periportal fibrosis (n = 2), 4.54% of abscess (n = 1), 4.54% of congestion (n = 1), 4.54 % of bilestase (n = 1), and 4.54% proliferation of the bile ducts (n = 1). It was possible to observe in the spleen 20% white pulp rarefaction (n = 2), 10% white and red pulp rarefaction (n = 1), and 30% moderate deposition of melanin granules (n = 3). In the pancreas was observed a 50% of centroacinosas cells rarefaction (n = 1). In the kidneys was found 14% of toxix tube nephrosis (n = 4), 7% of multifocal hemorrhaging (n = 2), 14% of vascular congestion (n = 4), 3.44% presence of bacteria (n = 1), 3.44% of proliferative glomerulonephritis (n = 1), 3.44% of micro abscesses (n = 1), 3.44% of severe edema (n = 1), 3.44% of renal cysts (n = 1) and 3.44% of chronic interstitial nephritis (n = 1). In the uteri evaluated were observed 25% of a focal dystrophic calcification (n = 1) and 25% of metritis (n = 1). In the lymph nodes were observed suggestive abnormalities of immunosuppression (25%; n = 1), bleeding (25%; n = 1) and melanose (50%; n = 2). Other findings include rarefaction of the adrenal cells (50%, n = 1), fewer sperm cells into the lumen (14,28%; n = 2) or presence of only spermatogonia in the seminiferous tubules (21,42%; n = 3), and 25% focal hyperplasia of the bladder (n = 1). Despite the changes present in many systems, lung diseases were higher in cetaceans bodies and sirenians stranded on the Brazilian northeast coast / O estudo anatomopatológico das carcaças dos mamíferos marinhos é uma ferramenta importante para conhecer a morfofisiologia natural, bem como as alterações morfológicas associadas com algumas doenças e, desta forma, evidenciar os possíveis impactos antropogênicos. O presente trabalho teve como intuito realizar estudos sobre histopatologia dos órgãos de cetáceos e sirênios. Para isso, foram utilizadas amostras pertencentes ao acervo biológico do Projeto Cetáceos da Costa Branca (PCCB), da Associação de Pesquisa e Preservação de Ecossistemas Aquáticos (AQUASIS) e do Centro de Mamíferos Aquáticos (CMA). Os fragmentos teciduais foram submetidos ao método convencional de preparação de lâminas histológicas. As peças passaram pelos processos de desidratação e diafanização, banho em parafina líquida, inclusão em bloco, e posterior corte em micrótomo rotativo. Os cortes, de quatro a cinco micra de espessura, foram colocados em lâminas lapidadas e submetidos ao método de coloração Hematoxilina-eosina (H.E.), sendo então montados utilizando-se lamínula e resina sintética. Considerando que os animais em estudo pertencem a diferentes espécies, faixas etárias e sexo, foi realizada uma análise descritiva geral dos aspectos patológicos encontrados em cada caso. De um total de 237 amostras pertencentes a 66 indivíduos da ordem Cetacea (n=28) e Sirenia (n=38), 34,17% (n=81) apresentaram alterações microscópicas, 54,85% (n=130) estavam normais e 10,97% (n=26) se encontravam autolisadas. Dentre as alterações microscópicas evidentes foi diagnosticado no sistema bucal 50% de estomatite (n=1), o coração apresentou 6,66% de fibrose intersticial (n=2), 10% de hemorragia (n=3) e 6,66% de miocardite (n=2). Os pulmões mostraram em 19% das análises edema pulmonar (n=11), 10% de congestão vascular (n=6), 13% de hemorragia (n=8), 3% de enfisema (n=2), 7% hemossiderose (n=4), 3% pneumonia intersticial (n=2), 2% de pneumonia eosinofílica (n=1), 2% de granuloma parasitário (n=1), 2% de cisto parasitário (n=1), 2% de traqueíte (n=1). No estômago foi visualizado em um sirênio áreas extensas de hemorragia (16,66%; n=1) e no intestino foi detectado hiperplasia nodular linfóide (7%; n=2), enterite (4%; n=1), congestão dos vasos (4%; n=1) e degeneração vacuolar (4%; n=1). Os fígados analisados mostraram 23% de degeneração vacuolar (n=5), 9% de necrose hepatocelular (n=2), 9% de depósito moderado de grânulos de melanina (n=2), 4,54% de hepatite crônica (n=1), 9% de fibrose periportal (n=2), 4,54% de abscesso (n=1), 4,54% de congestão (n=1), 4,54% de bilestase (n=1), e 4,54% de proliferação dos ductos biliares (n=1). Nos baços foi possível constatar 20% de rarefação de polpa branca (n=2), 10% de rarefação de polpa branca e vermelha (n=1), e 30% de deposição moderada de grânulos de melanina (n=3). No pâncreas foi observado uma rarefação das células centroacinosas em 50% (n=1) das amostras. Nos rins foi encontrado 14% de nefrose tubular tóxica (n=4), 7% de hemorragia multifocal (n=2), 14% de congestão vascular (n=4), 3,44% de presença de bactérias (n=1), 3,44% de glomerulonefrite proliferativa (n=1), 3,44% de microabscessos (n=1), 3,44% de edema severo (n=1), 3,44% de cistos renais (n=1) e 3,44% de nefrite intersticial crônica (n=1). Nos úteros avaliados foi observado 25% de calcificação distrófica focal (n=1) e 25% de metrite (n=1). Nos linfonodos foram observados alterações sugestivas de imunossupressão (25%; n=1), hemorragia (25%; n=1), e melanose (50%; n=2). Outros achados incluíram rarefação das células da adrenal (50%, n=1), poucos espermatozoides no lúmen (14,28%; n=2) ou presença apenas de espermatogônias nos túbulos seminíferos (21,42%; n=3), e 25% de hiperplasia focal da bexiga (n=1). Apesar das alterações presentes em diversos sistemas, as patologias pulmonares foram superiores as demais tanto em órgãos de cetáceos como em sirênios encalhados no litoral do nordeste brasileiro

Conhecer a distribuição geográfica das espécies é primordial para a tomada de ações efetivas de conservação. Modelos de ocupação são ferramentas importantes para estimar a distribuição das espécies, especialmente quando as informações são incompletas, como é o caso de muitas espécies ameaçadas ou em áreas ainda insuficientemente amostradas. O objetivo deste estudo é ampliar e refinar o conhecimento sobre a distribuição geográfica da toninha, Pontoporia blainvillei, um pequeno cetáceo ameaçado de extinção restrito às águas costeiras do Atlântico Sul ocidental, através de modelos de ocupação. Foram realizadas amostragens aéreas com 4 observadores independentes, em 2058 sítios de 4x4km na distribuição da espécie no Brasil. Foram utilizadas cinco covariáveis de detecção (transparência da água, escala Beaufort, reflexo solar, posição dos amostradores e número de amostradores) e três covariáveis de ocupação (batimetria, temperatura média e produtividade primária) com índices de correlação de Pearson menor que 0,7. Todas as covariáveis contínuas foram estandardizadas com média zero e desvio padrão igual a um. Os modelos de ocupação com autocorrealação espacial foram estimados com Inferência Bayesiana utilizando priors ‘vagos’ (média zero e variância 1.0E6). Em apenas 75 sítios foram detectadas toninhas. A probabilidade de detecção média foi de 0.23 (CRI 0.006 a 0.51), onde as covariáveis Beaufort (efeito negativo), reflexo solar (efeito negativo) e transparência da água (efeito positivo) apresentaram efeitos significativos. A média estimada de ocupação foi de 0,066 (CRI 0,01 a 0,31). As covariáveis batimetria e a temperatura média apresentaram efeitos positivos e negativos sobre o processo de ocupação, respectivamente. Espacialmente o modelo prevê três áreas com altas probabilidades de ocupação aparentemente disjuntas: a) costa norte do Rio de Janeiro; b) costas norte de 3 Santa catarina até São Paulo; c) costa do Rio Grande do Sul. Assim, agregamos importantes informações para a conservação da espécie e realização de novos estudos, apontando onde podemos encontrar maiores probabilidade de ocupação na costa do Brasil e covariáveis que determinam a ocupação e a detecção da espécie. / Knowing the geographic distribution of a species is essential for taking effective conservation actions. Occupation Models are important tools for estimating species distribution, especially when information is incomplete, as is the case with many endangered species or in under-sampled areas. The aim of this study is to expand and refine the knowledge about the geographic distribution of the franciscana, Pontoporia blainvillei, a threatened small cetacean restricted to the coastal waters of the western South Atlantic, through Occupation Models. Aerial samplings were carried out with 4 independent observers, in 2058 sites of 4x4km across the distribution of the species in Brazilian waters. Five detection covariates were used (water transparency, Beaufort scale, solar reflectance, observer position and number of observers) and three covariates of occupation (bathymetry, mean temperature and primary productivity) with Pearson correlation indices less than 0.7. All continuous covariates were standardized with mean zero and standard deviation equal to one. Occupancy Models with spatial autocorrection were estimated using Bayesian Inference using 'vague' priors (zero mean and variance 1.0E6). Franciscana was detected only in 75 sites. The average detection probability 4 was 0.23 (CRI 0.006 to 0.51), where Beaufort (negative effect), solar reflex (negative effect) and water transparency (positive effect) covariables had significant effects. The estimated mean occupancy was 0.066 (CRI 0.01 to 0.31). The bathymetry and the mean temperature covariables had positive and negative effects on the occupation process, respectively. Spatially the model predicts three apparently disjunct areas with high probability of occupation: a) north coast of Rio de Janeiro; b) north coasts of Santa Catarina to São Paulo; c) coast of Rio Grande do Sul. Thus, we add important information for the conservation of species and new studies, pointing out where we can find greater likelihood of occupation on the coast of Brazil and covariates that determine the occupation and the detection of the species.