Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-10-04T22:23:59Z No. of bitstreams: 1 DalilaNascimentoManso_DISSERT.pdf: 1914411 bytes, checksum: 966fc442e252d656c3946bff697a75f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-10-13T21:33:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DalilaNascimentoManso_DISSERT.pdf: 1914411 bytes, checksum: 966fc442e252d656c3946bff697a75f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-13T21:33:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DalilaNascimentoManso_DISSERT.pdf: 1914411 bytes, checksum: 966fc442e252d656c3946bff697a75f5 (MD5) Previous issue date: 2017-04-19 / A mais recente pandemia do v?rus influenza ocorreu no ano de 2009, causada pela cepa do influenza A (H1N1), e popularmente conhecida como gripe A ou gripe su?na, gerou preocupa??o aos ?rg?os mundiais de sa?de. Com um quadro sintom?tico que inclui febre, tosse, inflama??o na garganta na maioria dos casos, alguns pacientes, principalmente imunossuprimidos que podem apresentar complica??es que evoluem ao ?bito. A transmiss?o do v?rus ocorre atrav?s do contato entre pessoa a pessoa e seu mecanismo de infec??o se d? a partir das duas glicoprote?nas de superf?cie, a hemaglutinina e a neuraminidase. A hemaglutinina atua se ligando aos receptores do ?cido si?lico favorecendo a entrada do v?rus nas c?lulas-alvo e a neuraminidase cliva as c?lulas do receptor de res?duos do ?cido si?lico, onde as novas part?culas virais est?o se ligando. Atrav?s dessa quebra haver? libera??o das novas part?culas virais, que atrav?s da hemaglutinina invadir?o novas c?lulas. Baseado nisso, f?rmacos foram desenvolvidos com intuito de inibir a a??o da neuraminidase, os chamados inibidores da neuraminidase que interferem na libera??o dessas novas part?culas virais evitando a dissemina??o da infec??o no trato respirat?rio. Dentre estes inibidores o oseltamivir ? o f?rmaco de escolha para profilaxia e tratamento da gripe A; por?m, relatos de resist?ncia a esse f?rmaco foram descritos, o que causou preocupa??o nos profissionais da sa?de e governantes. A muta??o mais encontrada ? a HIS275TIR, onde a histidina ? substitu?da por uma tirosina, promovendo uma s?rie de altera??es conformacionais que diminuem a afinidade do f?rmaco pelo v?rus originando a resist?ncia. A partir da obten??o de dados cristalogr?ficos e simula??o computacional, calculamos a energia de intera??o da neuraminidase selvagem e com a presen?a da muta??o HIS275TIR ligadas ao oseltamivir utilizando a Teoria Funcional da Densidade (DFT) e do M?todo de Fracionamento Molecular com Capas Conjugadas (MFCC). Obtivemos 115 res?duos de intera??o para a neuraminidase selvagem (cristal 4B7R) e 109 res?duos de intera??o para o cristal com a neuraminidase mutante (3CL0). Os resultados foram avaliados de acordo com a relev?ncia dos valores energ?ticos para energias repulsivas e energias atrativas. Os c?lculos energ?ticos realizados confirmaram a redu??o da afinidade da cepa contendo a muta??o HIS275TIR e destacaram a import?ncia energ?tica do s?tio ativo da neuraminidase mostrando que os principais res?duos energ?ticos s?o encontrados nele tornando um alvo para obten??o de novos f?rmacos devido a sua conserva??o. As altera??es causadas pela substitui??o do amino?cido histidina por uma tirosina levaram a uma s?rie de mudan?as conformacionais nos amino?cidos vizinhos que provocaram altera??es eletrost?ticas resultando na resist?ncia ao f?rmaco. A partir desse estudo ser? poss?vel conhecer melhor as intera??es moleculares da neuraminidase mutante e posteriormente projetar novos designs de f?rmacos para serem elaborados e se tornarem mais eficientes na intera??o com as cepas mutantes desse v?rus. / The latest influenza pandemic occurred in the year 2009, caused by the strain of influenza A (H1N1), and popularly known as influenza A or swine flu, generated concern to the global health agencies. With a symptomatic picture that includes fever, cough, throat inflammation in most cases, some patients, mainly immunosuppressed, that can to present complications that evolve to death. Transmission of the virus takes place through contact between person to person and its mechanism of infection occurs from the two surface glycoproteins, hemagglutinin and neuraminidase. The hemagglutinin acts by binding to the sialic acid receptors favoring the entry of the virus into the target cells and the neuraminidase cleaves the receptor cells of sialic acid residues, where the new viral particles are binding. Through this breakdown there will be release of the new particles that through hemagglutinin will attack new cells. Based on these, drugs were developed in an attempt to inhibit the action of neuraminidase, so called neuraminidase inhibitors that interfere in the release of these new viral particles avoiding the spread of infection in the respiratory tract. Among the inhibitors, oseltamivir is the drug of choice for prophylaxis and treatment of influenza A, but reports of resistance to this drug have been described, which has caused concern in health professionals and rulers. The HIS275TIR mutation is most commonly found, where histidine is replaced by a tyrosine, promoting a series of conformational changes that decrease the affinity of the drug for the virus causing resistance. Based on crystallographic data and computational simulation, we calculated the interaction energy of the wild neuraminidase and the presence of the HIS275TIR mutation bonded to oseltamivir using the Functional Density Theory (DFT) and the Molecular Fractionation with Conjugated Caps (MFCC). We obtained 115 interaction residues for the wild neuraminidase (4B7R crystal) and 109 interaction residues for the crystal with the mutant neuraminidase (3CL0). The results were evaluated according to the relevance of the energy values for repulsive energies and attractive energies. The energetic calculations confirmed the reduction of the affinity of the strain containing the HIS275TIR mutation and highlighted the energy importance of the active site of the neuraminidase, showing that the main energy residues are found in it becoming a target for obtaining new drugs due to its conservation. The changes caused by the substitution of the amino acid histidine for a tyrosine led to a series of conformational changes in the neighboring amino acids that provoked electrostatic changes resulting in the resistance to the drug. From this study, it will be possible to know better the molecular interactions of the mutant neuraminidase and subsequently to project new drugs designs to be elaborated and become more efficient in the interaction with the mutant strains of this virus.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-10-04T22:24:00Z No. of bitstreams: 1 FellipeAlbanoMeloDoNascimento_DISSERT.pdf: 1534250 bytes, checksum: d0e9e98eece8ff84679b842225e41db5 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-10-13T21:44:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FellipeAlbanoMeloDoNascimento_DISSERT.pdf: 1534250 bytes, checksum: d0e9e98eece8ff84679b842225e41db5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-13T21:44:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FellipeAlbanoMeloDoNascimento_DISSERT.pdf: 1534250 bytes, checksum: d0e9e98eece8ff84679b842225e41db5 (MD5) Previous issue date: 2017-03-06 / A ovitrampa, ou armadilha de oviposi??o, ? uma das ferramentas preconizadas pelo Minist?rio da Sa?de como complemento aos m?todos de vigil?ncia do Aedes aegypti. Essa armadilha visa ? coleta de ovos de A. aegypti E sua efici?ncia pode ser potencializada pelo acr?scimo de infus?es org?nicas. O objetivo do presente estudo foi de padronizar a aplica??o dessa metodologia de monitoramento para o munic?pio de Natal-RN nas a??es de monitoramento do A. aegypti. Para isso foram realizados testes de padroniza??o do raio de instala??o das ovitrampas, onde foram testados os raios de 150 e 300 metros em dois bairros de Natal (Tirol e Quintas). Tamb?m foram realizados testes de atratividade de infus?es de capim, folhas de caju, feno e ?gua (controle) em laborat?rio e campo. Em laborat?rio os testes foram feitos com 100 f?meas de A. aegypti (10 em cada gaiola) com dura??o de 3 dias. No Campo foram utilizadas 36 ovitrampas, distribu?das na UFRN, onde foram monitoradas durante 10 dias havendo a contagem dos ovos e troca das palhetas, diariamente. Como resultado do melhor raio, foi visto que n?o houve diferen?a significativa entre as dist?ncias para nenhum ?ndice pesquisado (IDO, IPO, IMO). Quanto os testes com as infus?es, em laborat?rio a quantidade de ovos na infus?o de caju foi maior do que todos os outros tratamentos, em campo o feno foi o melhor tratamento, mas n?o demonstrou diferen?a estat?stica com a ?gua, somente com as demais, e n?o foi observada diferen?a entre os dias de postura. Diante disso, sugere-se o uso da armadilha a cada 300m contendo apenas ?gua em seu interior. / The ovitrap, or oviposition trap, is one of the tools recommended by the Ministry of Health as a complement to the methods of surveillance of Aedes aegypti. This trap is for the collection of eggs of A. aegypti. The efficiency of this trap can be enhanced by the addition of organic infusions. The objective of the present study was to standardize the application of this monitoring methodology for the city of Natal-RN in the monitoring actions of A. aegypti. For this, tests were performed to standardize the installation radius of the ovitraps, where distances of 150 and 300 meters were tested in two districts of Natal (Tirol and Quintas), these distances were alternated weekly for 2 months (July and August). Infusion attractiveness tests were performed in laboratory and field. The infusions tested were: grass, young leaves of cashew, hay and water, as control. In the laboratory the tests were done with 100 females of A. aegypti (10 in each cage), with duration of 3 days. The field was used 36 ovitraps, distributed in the UFRN, where they were monitored for 10 days, counting the eggs and changing the straws daily. As a result of the best radius, it was seen that there was no significant difference between the distances for any index searched (IDO, IPO, IMO). About the infusion tests, in the laboratory the amount of eggs in the cashew infusion was higher than all other treatments. In the field, the hay was the best treatment, but did not show statistical difference with water, only with the others, and no difference was observed between the days of laying.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Studies in multitrophic systems can serve as tools to investigate the structure and organization of ecological communities. Because it is a biome rich in multitrophic interactions, the Cerrado (tropical savanna) is a good model for the study of insect-plant interactions. Udranomia spitzi (Hesperiidae) is an endemic butterfly from Cerrado. In the immature stage, it shows a pattern of specialized diet on young leaves of Ouratea spectabilis (Ochnaceae). These plants have nectaries on the base of the stipules of the leaves in development, encouraging visitation by ants and promoting interactions between ants and Udranomia larvae. Considered generalist predators, ants may exert strong selective pressure on insect herbivores, affecting the pattern of host plant use and strategies of defense against predators. Therefore, this study aimed to characterize the natural history, life cycle and behavioral ecology of Udranomia spitzi through the defensive mechanisms against ants. The study of this system was conducted in a Cerrado area of Uberlândia, Minas Gerais state, Brazil, from April 2008 to May 2009. To describe the cycle, individuals Udranomia were reared in the laboratory and information about its natural history were derived from field and laboratory observations. Interactions between Udranomia spitzi caterpillar and ants were recorded during provoked encounters to investigate the defense strategies of the butterfly. Experiments involving exclusion of ants were used to elucidate if the presence of ants affects the survival of U. spitzi larva. The results showed that U. spitzi has five instars in their immature stage and presents morphological and behavioural similarities to other members of Hesperiidae. Its larvae are able to build up two types of leaf shelters for most of their ontogeny and only one larva is found in each shelter. The larvae feed and build shelters only on young leaves of O. spectabilis, in proximity to the location of extrafloral nectaries. Thus, the chances the larvae will be found by ants increases. In response, the immatures have different mechanisms of defense against predation, in addition to the shelters. It was observed that when larvae of U. spitzi were attacked, they violently move their body and regurgitate fluids on the ants. These defensive responses were effective only for larger larvae (from 4th instar), compared to smaller (2nd instar). Once located the larvae of 2nd instar had little time to escape from the predator. Experiments involving the exclusion of ants revealed that the presence of ants affects the survival of larval U.spitzi over the time. This study showed the importance of to the developed defense strategies of to the larvae of Lepidoptera, as U. spitzi, that permited them to use a plant often occupied by ants in the Cerrado. / Estudos em sistemas multitróficos podem servir como ferramentas para investigar a estrutura e a organização de comunidades ecológicas. Por se tratar de um bioma rico em interações multitróficas, o Cerrado é um bom modelo para o estudo das interações inseto-planta. Udranomia spitzi (Hesperiidae) é uma borboleta endêmica do cerrado. Em fase de imaturo, a mesma apresenta padrão de dieta especializado em folhas jovens de Ouratea spectabilis (Ochnaceae). Essas plantas possuem nectários extraflorais na base das estípulas de suas folhas em desenvolvimento, estimulando a visitação por formigas e promovendo interações entre formigas e larvas de Udranomia. Consideradas predadoras generalistas, as formigas podem exercer forte pressão seletiva sobre insetos herbívoros, afetando o padrão de utilização de plantas hospedeiras bem como as estratégias de defesa contra predadores. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo caracterizar a história natural, o ciclo de vida e a ecologia comportamental de Udranomia spitzi através dos mecanismos de defesa utilizados frente à pressão exercida por formigas. O estudo desse sistema abrangeu uma área de cerrado em Uberlândia, MG, no período de abril de 2008 à maio de 2009. Para a descrição do ciclo de vida, indivíduos de Udranomia foram criados em laboratório, e informações sobre sua história natural foram decorrentes de observações no campo e laboratório. Interações entre larvas e formigas Camponotus foram registrados durante encontros provocados para investigar quais são as estratégias de defesa da borboleta. Experimentos envolvendo exclusão de formigas foram utilizados para responder se a presença de formigas afeta a sobrevivência larval de U. spitzi. Os resultados mostraram que U. spitzi apresenta cinco ínstares em sua fase de imaturo, característica comum a outros membros de Hesperiidae. Suas larvas são capazes de construir até dois tipos de refúgios foliares durante a maior parte de sua ontogenia e apenas uma larva é encontrada em cada abrigo. As larvas se alimentam e constroem abrigos apenas em folhas jovens de O. spectabilis, próximo à localização dos nectários extraflorais. Assim, aumentam as chances das larvas serem encontradas pelas formigas. Como resposta, os imaturos apresentam diferentes mecanismos de defesa contra a predação, além dos refúgios, podendo se debater e regurgitar sobre as formigas Camponotus. Essas respostas defensivas foram eficientes apenas para larvas maiores (de 4° instar), comparado às menores (2° instar), uma vez que depois de localizadas, as larvas de 2° instar tiveram pouco tempo para escapar do predador. Experimentos envolvendo a exclusão de formigas revelaram que a presença destas afeta negativamente a sobrevivência larval de U.spitzi ao longo do tempo. Este estudo mostrou a importância do desenvolvimento de estratégias de defesa por larvas de lepidópteros, como em U. spitzi, permitindo dessa forma a utilização de plantas frequentemente ocupada por formigas no Cerrado. / Mestre em Ecologia e Conservação de Recursos Naturais

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Tese (Doutorado) / O sistema imune é um importante mecanismo de defesa contra agressões, bem como participa na manutenção do equilíbrio orgânico. As moléculas sinalizadoras do sistema imune além de participarem de sinais que visam eliminar os antígenos, se relacionam com danos teciduais. Desta forma se tornam importantes alvos de estudos. Com o advento de técnicas imunológicas, nano biotecnológicas e ainda a inserção das ciências ômicas tem avançado em passos largos na busca de respostas ao desenvolvimento e interações de doenças, assim como na inserção de novas terapias ou mesmo mecanismos de prevenção. Essa abordagem traz 5 capítulos, todos relacionam o estudo de moléculas sinalizadoras para indução, tratamento ou diagnóstico de doenças. O primeiro capítulo aborda de forma geral todos os temas que foram discutidos ao longo da tese. O segundo capítulo aborda a interação de um beta bloqueador adrenérgico não seletivo com proteínas sinalizadoras da resposta inflamatória na doença periodontal associadas à participação da indução de doenças cardiovasculares. Os resultados demonstram uma diminuição das proteínas associadas com desenvolvimento de doença cardiovasculares após tratamento com antagonista beta adrenérgico não seletivo em baixas concentrações. O terceiro relaciona descritores que possibilitam a indicação de principais proteínas sinalizadores na doença periodontal crônica no idoso. Neste relatamos a falta de associação e/ou abordagens que inclua esta importante população relacionada com diminuição da capacidade responsiva do sistema imune e aumento de índices de doença periodontal. Ainda assim, evidenciamos uma proteína que pode estar relacionada ao processo fisiopatogênico da doença periodontal, incluindo ao idoso, a IL-33; da qual é relacionada com a ativação de osteoclastos independente de RankL. Após certificar do aumento de moléculas sinalizadoras, e evidentemente com o aumento de metabólitos no local que ocorre o processo inflamatório, o estudo foi direcionado para predizer alvos para diagnóstico na doença periodontal crônica do idoso. Esta abordagem do 4º capítulo permitiu a predição de 2 metabólitos fortemente correlacionado na população idosa com doença periodontal crônica. Por fim no quinto capítulo predizemos possíveis sequências com alta associação em se relacionar com o eixo IL-33/ST2, eixo este relacionado com a fisiopatogênese de diversas doenças inflamatórias, mediadas pelo perfil Th2, incluindo a doença periodontal crônica. Nesta abordagem foi possível indicar sequências com alto potencial na monitoração da ativação e/ou repressão de ST2, tanto diretamente pela interação de um pequeno peptídeo no sítio de ligação ST2, como pela interação com a proteína ligante a IL-33. Contudo esta tese permitiu contribuir para uma melhor compressão dos mecanismos fisiopatológicos da doença periodontal crônica experimental, bem como na indicação de um possível marcador biológico ao diagnóstico e tratamento da doença.

Dengue fever is caused by an arbovirus of the Flaviridae family, transmitted from person to another through an intermediate fly vector, Aedes aegypti. It is a tropical and subtropical infectious disease characterized by fever and strong pain in joints, which could also lead to bleeding in its hemorrhagic form. In this investigation, Phage Display technology was used to identify recombinant peptides with affinity to polyclonal antibodies (IgY) raised in immunized chickens with total proteins of the DENV-3 culture. Animal sera was purified in a HiTrap column and concentrated through dialysis. The IgY s were immunoreactive against DENV cultures, but were not type specific. Phage clones were selected from a random peptide library (PhD-7) in four cycles of biopanning against IgY. Selected phages were amplified in deepwell microtiter plates and submitted to ELISA tests. Immunoreactive clones against IgY were sequenced, translated and analysed through bioinformatics. Fourteen distinct clones were selected and aligned against viral proteome sequences and among themselves. Three consensus sequences among phage clones were detected: VLRN, APP and LPP. The peptide search in BLASTp showed similarity to the following viral proteins: polyprotein, envelop, and the nonstructural proteins NS1, NS2a, NS3 and NS5. All of them have matched with DENV-1, -2, -3, and/or -4 sequences, corroborating with the lack of type specificity of the raised IgY. Considering the VLRN motif, the analyses of antigenicity indexes of similar peptides demonstrated that its antigenicity is highly influenced by neighboring residues. Three-dimensional analysis of the DENV-2 capsid protein, with the alignment of the VLRN motif, have identified two target sequences, NRVSTVQQL and EIGRMLNILNRR, that are present in the polyprotein of all four viral types, which may contain the two possible domains VxRN and LRN, respectively. Six selected phages have presented known protein domains, and five of them presented specific phosphorylation and glycosylation sites, similar to known eukaryotic viruses; however, they may not be physiologically active sites in the dengue virus. Finally, the peptides were used to detect human IgG and IgM. ELISA tests were performed in two patients with isolated infections of DENV-1 or DENV-3. The reactivity of the 14 clones was superior to total antigens obtained from cultures, but they were not type specific. / RESUMO - GERAL A dengue é uma doença infecciosa febril aguda, transmitida de uma pessoa doente a uma pessoa sadia pela picada da fêmea contaminada de um mosquito Aedes aegypti. A doença é causada por um arbovírus, membro da família Flaviviridae e do gênero flavivirus. Existem quatro tipos de vírus da dengue: Dengue 1, Dengue 2, Dengue 3 e Dengue 4, e há um grande espectro de manifestações clínicas da doença, sendo as duas principais, a dengue clássica e a dengue hemorrágica. O diagnóstico geralmente é baseado em sintomas, e laboratorialmente é tardio, no entanto vários testes específicos para cada sorotipo. A tecnologia do Phage Display (exposição de biomoléculas em fagos) tem sido amplamente utilizada no mapeamento de epítopos de diversos antígenos, constituintes de vários agentes causadores de doenças. Com o objetivo de selecionar peptídeos recombinantes expressos no capsídeo de bacteriófagos produziu-se soro policlonal em galinhas previamente sensibilizadas com proteínas totais do vírus da dengue tipo 3. Após 4 ciclos de seleção de uma biblioteca de fagos com peptídeos recombinantes lineares de 7 resíduos contra a IgY policlonal, 14 fagos imunorreativos foram selecionados e suas seqüências de ácidos nucléicos foram posteriormente analisadas por bioinformática. Foi possível identificar domínios protéicos comuns entre os peptídeos, sendo que o principal domínio mapeado foi VLRN. Testes subseqüentes se fazem necessários para a melhor caracterização destes peptídeos, incluindo possíveis aplicações diagnósticas e vacinais dos peptídeos selecionados. RESUMO - CAPÍTULO I A dengue é causada por um arbovírus da família Flaviridae, transmitido de uma pessoa à outra através de um hospedeiro intermediário, o mosquito Aedes aegypti. É uma doença infecciosa tropical e subtropical caracterizada por febre e dor intensa nas articulações, além de sangramentos intensos quando na sua forma hemorrágica. Neste trabalho utilizou-se da tecnologia de exposição de peptídeos randômicos em fagos, phage display, no intuito de identificar peptídeos recombinantes com afinidade a anticorpos policlonais (IgY) gerados em galinhas imunizadas com proteínas totais do vírus da dengue tipo 3. As IgYs dos animais foram purificadas em coluna HiTrap e concentradas por diálise. As IgYs foram imunorreativas contra todas as culturas de DENV, mas não foram tipo específico. Os clones foram selecionados de uma biblioteca de fagos randômicos (PhD-7) por quatro ciclos de seleção contra as IgYs. Os fagos selecionados foram amplificados em placas deepwell e submetidos a testes ELISA. Clones imunorreativos contra IgY foram seqüenciados, traduzidos e analisados por bioinformática. Quatorze clones distintos foram selecionados e alinhados contra a seqüência de dados do proteoma viral e entre todos eles. Três seqüências consenso entre os clones foram detectadas: VLRN, APP e LPP. A procura por prováveis seqüências protéicas do vírus da dengue no BLAST mostrou similaridade a diversos sítios protéicos virais: poliproteína, envelope e as proteínas não-estruturais NS1, NS2a, NS3 e NS5. Todas elas se alinharam com as seqüências dos tipos DENV-1, -2, -3, e/ou -4, corroborando com a falta de especificidade das IgYs. Considerando o motivo VLRN, as análises dos índices de antigenicidade dos peptídeos similares demonstraram que estes índices são altamente influenciados pelos resíduos vizinhos. Análise 3-D da proteína do capsídeo viral do tipo DENV-2, com superposição do motivo VLRN, identificou duas seqüências alvos, NRVSTVQQL e EIGRMLNILNRR, que estavam presentes na poliproteína dos quatro tipos virais, os quais podem conter dois prováveis domínios, VxRN e LRN, respectivamente. Domínios de fosforilação e glicosilação, encontrados em vírus eucarióticos, foram similares às seqüências presentes em cinco fagos recombinantes selecionados, o que não implica que estes motivos sejam fisiologicamente ativos no vírus da dengue. Finalmente, os peptídeos foram usados para detectar IgG e IgM humana. Testes ELISA foram realizados em dois pacientes com infecções isoladas de DENV-1 ou DENV-3. A reatividade dos 14 clones foi superior àquela observada para antígenos totais obtidos das culturas, embora não tenha sido específica. / Mestre em Genética e Bioquímica

Human rhinoviruses (HRV) are commonly associated with mild respiratory symptoms of children. However, some studies have detected these viruses in lower respiratory tract illness (LRTI), often in coinfection with other respiratory agents. So, both investigated simultaneous infections of these agents with other respiratory viruses as a possible association with LRTI, in rhinovirus-positive samples of children attended at a public health service in Uberlândia, MG, Brazil. The presence of RNA of these viruses was researched by polymerase chain reaction (PCR), preceded by reverse transcription (RT), in 321 nasopharyngeal aspirates (NPAs) samples from children <5 yo. with acute respiratory disease (ARD), which presented negative or inconclusive results for seven respiratory viruses by immunofluorescence assay. Of these total, 90 specimens with positive results for HRV and presenting LRTI diagnose, were selected to be tested by PCR for presence of respiratory syncytial virus (RSV) types A and B, influenzaviruses (FLU) A and B, human metapneumovirus (hMPV) and parainfluenzaviruses (PIV) 1, 2 and 3. The LRTI were classified into: bronchiolitis, pneumonia and acute bronchitis. Bronchiolitis and pneumonia were considered more severe than acute bronchitis. In 64.4% of samples any other investigated viruses were detected. In the remaining of clinical specimens, a second virus were found, including RSV in 22.2%, followed by hMPV in 6.7%, and PIV in 6.7%. A higher incidence of bronchiolitis was observed in children that had HRV coinfection with hMPV or PIV, compared with those presenting only HRV (p = 0.0364). Younger children were the most frequently identified with dual infection, and also presented higher rates of hospitalization. The relation between HRV coinfection with certain viruses and a higher frequency of bronchiolitis suggests that HRV could cause more severe clinical syndromes, when associated with some other respiratory viral agents. The fact that younger children had been more often coinfected suggests that age has an important role in the simultaneous infection of HRV with other respiratory viruses. / Os rinovírus humanos (HRV) são comumente associados com sintomas respiratórios brandos de crianças. No entanto, alguns estudos têm detectado esses vírus em casos de doenças do trato respiratório inferior (DTRI), muitas vezes em co-infecção com outros agentes virais. Assim, tanto se investigou a infecção simultânea desses agentes com outros vírus respiratórios, como uma possível associação com DTRI, em amostras de crianças positivas para HRV atendidas em Serviços de Saúde Pública de Uberlândia, MG, Brasil. A presença de RNA desses vírus foi pesquisada por reação em cadeia pela polimerase (PCR), precedida por uma transcrição reversa (RT), em 321 amostras de aspirado de nasofaringe (ANFs) de crianças <5 anos de idade, com doença respiratória aguda, que apresentavam resultado negativo ou inconclusivo para sete vírus respiratórios, pela imunofluorescência indireta. Desse total, selecionou-se 90 espécimes que apresentaram resultado positivo para os HRV e diagnóstico de DTRI, e os mesmos foram testados por PCR para a presença de vírus respiratório sincicial (VRS) tipos A e B, influenzavírus (FLU) A e B, metapneumovírus humano (hMPV) e parainfluenzavírus (PIV) 1, 2 e 3. As DTRI foram classificadas em bronquiolite, pneumonia e bronquite aguda, sendo as duas primeiras consideradas síndromes clínicas de maior gravidade em relação a essa última. Em 64,4% das amostras nenhum dos outros vírus investigados foi detectado. No restante dos espécimes clínicos, um segundo vírus foi encontrado, sendo o VRS em 22,2%, os hMPV em 6,7% e os PIV em 6,7%. Uma maior incidência de casos de bronquiolite foi observada em crianças que tinham co-infecção de HRV com hMPV ou com PIV, comparado àquelas que apresentavam somente HRV (p = 0,0364). Crianças mais jovens foram as mais frequentemente identificadas com infecção dupla, e também as que apresentaram maior índice de hospitalização. A relação da coinfecção de HRV com determinados vírus respiratórios e uma maior freqüência de bronquiolite sugere que, os HRV quando associados a outros agentes respiratórios virais podem causar quadros clínicos mais graves. O fato de crianças de tenra idade terem sido mais frequentemente co-infectadas sugere que a idade parece ter um papel importante na infecção simultânea entre os HRV e outros vírus respiratórios. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Despite being extremely abundant and diverse, ground-dwelling spiders are poorly known in Brazil. The present study, conducted between April 2005 and February 2007, investigates the composition, richness and diversity of ground-dwelling spiders, as well as the influence of seasonality on them and the structure of this community. It was carried out at the Panga Ecological Station in the State of Minas Gerais, southeastern Brazil. Three very distinct phytophysiognomies (campo cerrado, cerrado and cerradão) were sampled using pitfall traps during five days every two months. A total of 3,477 spiders of 112 species and 31 families were found. At least eight new species were found and one species, Trocantheria gomezi (Trochanteridae), was recorded for the first time in Brazil. All sites presented unique species compositions, richness and diversity. Increased abundance and richness were observed during the wet season. The peak of individuals was in October and April registered the lowest abundance. Furthermore, the first ecological data for Tenedos perfidus (Zodariidae), an endemic species of this Ecoregion, was presented. Between the eight guilds found, active hunters on the ground were the most abundant in the three habitat types, followed by web-builders and ambushers. The community structure vary between phytophysiognomies and between seasons. Abundance per guild was higher during wet season. The diversity among ground-dwelling spiders in Brazilian Savannas is very heterogeneous and pointed out the importance of conserving different habitat types for the maintenance of their biodiversity. / Embora extremamente abundantes e diversas, as aranhas de solo são praticamente desconhecidas no Brasil. O presente estudo, conduzido entre abril de 2005 e fevereiro de 2007, investigou a composição, riqueza e diversidade de aranhas no solo de uma savana brasileira, avaliando a influência da sazonalidade e a estruturação dessa comunidade em guildas. O estudo foi feito na Estação Ecológica do Panga, em Uberlândia, Minas Gerais. Três fitofisionomias de Cerrado (campo cerrado, cerrado e cerradão) foram amostradas usando armadilhas do tipo pitfall durante cinco dias a cada dois meses. Foram encontradas 3.477 aranhas, de 112 espécies e 31 famílias. No mínimo oito novas espécies foram amostradas e Trocantheria gomezi (Trochanteridae) foi coletada pela primeira vez no Brasil. Os ambientes apresentaram composição única de espécies, riqueza e diversidade. Uma maior abundância foi observada durante a estação chuvosa, com pico de indivíduos em outubro. Foram apresentados os primeiros dados ecológicos para Tenedos perfidus (Zodariidae), uma espécie comum do Cerrado. Das oito guildas encontradas, as aranhas caçadoras ativas de solo foram maioria nos três tipos de habitats. As tecelãs também foram comuns, principalmente no cerrado e cerradão. A estrutura da comunidade com relação às guildas propostas variou dentro de cada tipo de fitofisionomia sazonalmente. O número de indivíduos por guilda foi sempre maior na estação chuvosa em todos os habitats. A araneofauna do Bioma Cerrado se mostrou bastante heterogênea, destacando a importância da conservação de diferentes fitofisionomias para a manutenção de sua biodiversidade. / Doutor em Ecologia e Conservação de Recursos Naturais

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_otavio_martins_cruz.pdf: 364672 bytes, checksum: 4c494367518aef716a4090f1f8e5da0e (MD5) Previous issue date: 2012-10-25 / The spontaneous abortion (SA) is characterized as a loss of fetal product before 20 weeks of gestation and its etiology has not completely understood. Numerous studies have shown that polymorphisms in the gene of the enzyme metilenotetrahydrofolate reductase (MTHFR) are involved in susceptibility to AE. Then, the present study was conducted to evaluate the polymorphisms 677C>T and 1298A>C MTHFR gene and their associations in susceptibility to spontaneous abortion in a sample of women in the South of Brazil in a casecontrol approach. Ninety-eight women with SA (cases) and two hundred and twenty-seven healthy women with no history of miscarriage (controls) were studied. Genotyping of MTHFR677C>T and MTHFR1298A>C polymorphisms were analyzed by allele discrimination with TaqMan® pre-designed probes in Real Time PCR. The results showed that there was not difference in the distribution of allelic and genotypes frequencies of MTHFR677C>T and MTHFR1298A>C SNPs between cases and control group. It was observed an increase in the risk of SA in relation to genotype THFR1298CC when compared to genotype MTHFR1298AA (RR: 1,13 95%CI: 1,04; 1,23; p=0.02). Moreover, the classification of the type of abortion is different between genotypes of MTHFR1298A>C polymorphism (p = 0.03). In the control group, non-electron carriers of 677T allele have a higher number of pregnancies than women 677T (p = 0.04). The results presented in our work suggests that the CC genotype of polymorphism MTHF1298A > C is associated with increased risk of SA. However, the polymorphism MTHFR677C>T is not involved in the occurrence of miscarriage in studied population. / O aborto espontâneo (AE) é caracterizado como a perda do produto fetal antes de 20 semanas de gestação e sua etiologia não é completamnete esclarecida. Inúmeros estudos têm demonstrado que polimorfismos no gene da enzima metilenotetraidrofolato redutase (MTHFR) estão envolvidos na susceptibilidade ao AE. Dessa forma, o presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os polimorfismos 677C>T e 1298A>C do gene da MTHFR e suas associações na susceptibilidade ao aborto espontâneo em uma amostra de mulheres do Sul do Brasil em uma abordagem de caso-controle. Noventa e oito mulheres com AE (casos) e duzentas e vinte sete mulheres saudáveis e sem histórico de aborto espontâneo (controles) foram estudadas. A genotipagem dos polimorfismos MTHFR677C>T e MTHFR1298A>C foi analisada através da técnica de discriminação alélica com uso de sondas pré-desenhadas TaqMan® por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que não houve diferença na distribuição das frequências dos alelos e dos genótipos dos SNPs MTHFR677C>T e MTHFR1298A>C entre os casos e o grupo controle. Foi observado um aumento do risco de AE em relação ao genótipo MTHFR1298CC quando comparado ao genótipo MTHFR1298AA (RR: 1,13 95%IC: 1,04; 1,23; p=0.02). Além disso, a classificação do tipo de aborto é diferente entre os genótipos do polimorfismo MTHFR1298A>C (p = 0,03). No grupo controle, mulheres não-carreadoras do alelo 677T apresentam um maior número de gestações do que mulheres 677T (p = 0,04). Os resultados apresentados neste trabalho sugerem que o genótipo CC do polimorfismo MTHF1298A>C é associado ao aumento do risco do AE, entretanto, em nossa população, o polimorfismo MTHFR677C>T não está envolvido na ocorrência do aborto espontâneo.

The Caatinga biome occurs in nine Brazilian states and covers some 800,000 km2 of the northeast where this dryland vegetation is the dominant habitat. Atlantic Forest habitat may occur within the Caatinga biome, particularly on hilltops and high plains of the semi-arid region over 600 meters high, forming rainforest relicts called Brejos de altitude which serve as refuges for various vertebrate species of amphibians, reptiles, birds and mammals. One such brejo ise found in the northwestern extreme of the state of Sergipe in the Serra da Guia, an upland area that occurs between the municipalities of Poço Redondo (Sergipe) and Pedro Alexander (Bahia). This particular brejo forest fragment is approximately 20 hectares and occurs at an elevation of 750 m. The primary objective of this study is to increase our basic knowledge of the Caatinga avifauna and investigate local variation in the diversity of birds in the Serra da Guia. Surveys were conducted at two different localities, representing the Caatinga and brejo habitats, respectively. Birds were captured using 100-m mist nets and observed at specific locations with binoculars. Data were collected on a monthly basis during three-day periods in each habitat type between October 2008 and September 2009. A total of 587 individuals representing 82 different species were captured in the Caatinga habitat locality. The most abundant species were: Coryphospingus pileatus (92 individuals; 15.6%), Elaenia chilensis (86; 14.6%), Turdus amaurichalinus (24; 4.0%), Hemitriccus margaritaceiventer (21; 3.5%) and Columbina minuta (18; 3.0%). Abundance (392 individuals) and species diversity (65) were lower in the brejo, where the most common species were: Basileuterus flaveolus (64; 16.3%), Turdus rufiventris (40; 10.2%), Turdus amaurichalinus (28; 7.1%), Sitassomus griseicapillus (23; 5.8%) and Elaenia mesoleuca (18; 4.5%). Diversity of the avifauna was significantly higher in the Caatinga locality (Shannon-Wiener H '= 3.62) than in the brejo (H' = 3.41, t = 2.66, df = 140.57; P <0.05). The values of the Jaccard (49%) and Morisita-Horn (31%) indices indicated that the two areas have less than half their respective bird species diversity in common. Of the 98 total species captured, 13 species are endemic to Brazil. While the brejo is a small area, it s characteristic biotic and abiotic conditions and resources are uniquely different from the more extensive Caatinga. These results show that the Serra da Guia brejo is a distinct habitat type that supports a unique community of birds occurring within the larger Caatinga and supports the need to treat this area as a special conservation unit. / O bioma Caatinga abrange nove estados brasileiros ocupando cerca de 800.000 km2 do nordeste onde a vegetação xerófita é dominante. A Floresta Atlântica pode penetrar no bioma Caatinga, no topo de serras e planaltos do semi-árido nordestino sempre acima de 600m de altitude formando relictos de florestas úmidas denominados de Brejos de altitude , constituindo refúgios para várias espécies desde anfíbios, répteis, aves e mamíferos. Na região do Alto Sertão Sergipano, existe uma área estimada em 20 hectares pouco conhecida com características similares a um brejo de altitude. Está localizada na Serra da Guia entre os municípios de Poço Redondo (SE) e Pedro Alexandre (BA) a 750 m de altitude. Com o objetivo de contribuir ao conhecimento da avifauna da Caatinga, comparamos a diversidade regional e local de aves da Serra da Guia. A amostragem das aves foi realizada em dois pontos: Caatinga e brejo de altitude. As aves foram capturadas com redes de neblina (100m). De outubro de 2008 a setembro de 2009 foram feitas mensalmente seis sessões de captura: três na Caatinga, e três no brejo de altitude. Na Caatinga foram capturados 587 indivíduos pertencentes a 82 espécies. As espécies mais abundantes foram: Coryphospingus pileatus (92; 15,6%), Elaenia chilensis (86; 14,6%), Turdus amaurichalinus (24; 4%), Hemitriccus margaritaceiventer (21; 3,5%) e Columbina minuta (18; 3%). Em contrapartida na região de brejo foram capturados 392 indivíduos pertencentes a 65 espécies. As espécies mais abundantes foram: Basileuterus flaveolus (64; 16,3%), Turdus rufiventris (40; 10,2%), Turdus amaurichalinus (28; 7,1%), Sitassomus griseicapillus (23; 5,8%) e Elaenia mesoleuca (18; 4,5%). O valor do índice de diversidade Shannon-Wiener foi significantemente maior na área da Caatinga (H =3,62) do que na área do brejo (H =3,41; t = 2,66; gl = 140,57; P < 0,05). Os valores dos índices de Jaccard (49%) e Morisita-horn (31%) mostraram que as duas áreas compartilham menos da metade das espécies de aves. Das 98 espécies capturadas 13 espécies são endêmicas do Brasil. O brejo representa uma pequena área com condições e recursos diferentes da matriz de Caatinga do entorno. Este estudo conclui que há indicadores suficientes para conservação deste brejo como um habitat peculiar.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-10-21T10:17:57Z No. of bitstreams: 1 fredericopitellasilvia.pdf: 5083140 bytes, checksum: 5be218953d7ca703da3fff1cbecea890 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-25T12:30:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fredericopitellasilvia.pdf: 5083140 bytes, checksum: 5be218953d7ca703da3fff1cbecea890 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-25T12:30:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fredericopitellasilvia.pdf: 5083140 bytes, checksum: 5be218953d7ca703da3fff1cbecea890 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Centella asiatica (L.) Urban é membro da família Umbelliferae que apresenta distribuição pantropical, sendo freqüente nas bordas de florestas e como invasoras de outras plantas cultivadas. C. asiatica contém glicosídeos triterpênicos como o asiaticosídeo e madecassosídeo, e seus derivados ácidos (asiático e madecássico). Essas moléculas têm sido responsáveis pelas diversas atividades de seus extratos, usados para o tratamento de doenças neuropsiquiátricas, asma, lepra, úlceras, eczemas e no tratamento de feridas. Foram preparados os extratos aquoso (EA) e bruto metanólico (EBM); este último foi fracionado. A análise citogenética (mitose) revelou que o número cromossômico foi superior a 48. A triagem fitoquímica revelou a presença de flavonóides, heterosídeos, cumarinas, taninos e saponinas. O asiaticosídeo (ASA) foi quantificado nos extratos por HPLC; os EA, EBM e fração hexânica (FH), apresentaram 84,31%, 70,93% e 57,28% de ASA em suas composições. O doseamento dos constituintes fenólicos revelou 2,86g e 0,60g/100g de extrato para EA e EBM, respectivamente. Os teores de flavonóides para EA e EBM foram 0,361mg e 0,271 mg/ 100g de extrato, respectivamente. Ambos os EA e EBM demonstraram atividade antioxidante frente ao radical DPPH, com CI50 = 31,25 µg/mL e CI50 = 37,16 µg/mL, respectivamente. O EA inibiu de maneira dose-dependente a atividade da iPLA2 e da cPLA2 em amostras cerebelares de ratos. Os extratos não apresentaram potencial leishmanicida e nem antimicrobiano. Também não demonstraram potencial tóxico quando testados pelo modelo de Artemia salina. O EA apresentou atividade citotóxica seletiva para as linhagens MDA-MB 231 (carcinoma de mama humano) e B16F1 (melanoma de camundongo) com CI50 = 648,0 e 698,0 µg/mL, respectivamente. Os cremes contendo EA e EBM apresentaram potencial cicatrizante em modelo de queimaduras. Esses resultados confirmam e ampliam o conhecimento sobre o uso popular de Centella asiatica (L.) Urban, e ratificam a planta como fonte natural de moléculas com potencial farmacológico. / Centella asiatica (L.) Urban is a member of Umbelliferae family that presents pantropical distribution, being frequent around forests and as invaders of grown plants. C. asiatica contains triterpenic glycosides such as asiaticoside and madecassoside, and its acids (asiatic and madecassic). These molecules have been responsibles for several activities of its extracts, used to treat neuropsychiatric disorders, asthma, leprosy, ulcers, eczems and on wound healing. Water (EA) and crude methanolic (EBM) extracts were prepared, and the last was fractionated. The citogenetic assay (mitosis) revealed that the chromossomic number was higher than 48. The phytochemical screening showed the presence of flavonoid, heterosides, cumarins, tanins and saponis. The asiaticoside (ASA) was quantified in the extracts by HPLC; EA, EBM and hexanic fraction (FH) showed 84.31%, 70.93% and 57.28% of ASA in its composition. The determination of phenolic constituents revealed 2.86g and 0.60g/ 100g of extract for EA and EBM, respectively. The level of flavonoids for EA and EBM were 0.361mg and 0.271mg/ 100g of extract, respectively. Both EA and EBM showed antioxidant activity against DPPH radical, with IC50 = 31.25 µg/mL and IC50 = 37.16 µg/mL, respectively. The EA inhibited the activity of iPLA2 and cPLA2 in cerebelar samples in a dose-dependent manner. The extracts did not show neither leishmanicidal nor antimicrobial potencial. None toxicity was detected in the Artemia salina model. The EA presented selective antitumor activity against MDA-MB 231 (human breast cancer) and B16F1 (mouse melanoma) cell lines, with IC50 = 648.0 and 698.0 µg/mL, respectively. Creams containing EA and EBM presented wound healing activity. These results confirm and extend the knowledge about popular usage of Centella asiatica (L.) Urban, and confirms the plant as a natural source of molecules with pharmacological potential.