Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-26T19:16:13Z No. of bitstreams: 1 MariliaMedeirosFernandesDeNegreiros_DISSERT.pdf: 2997173 bytes, checksum: 85466eb8c67b6b55509f4861197c4d35 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T22:23:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MariliaMedeirosFernandesDeNegreiros_DISSERT.pdf: 2997173 bytes, checksum: 85466eb8c67b6b55509f4861197c4d35 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T22:23:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariliaMedeirosFernandesDeNegreiros_DISSERT.pdf: 2997173 bytes, checksum: 85466eb8c67b6b55509f4861197c4d35 (MD5) Previous issue date: 2015-08-07 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / A produ??o de nanoparticulas de prata com extratos naturais tem sido apontada como uma excelente alternativa para potencializar ou fornecer novas aplicabilidades aos extratos. Extratos de polissacar?deos sulfatados de algas (ASP) apresentam propriedades farmacol?gicas, por?m h? poucos relatos da produ??o de nanopart?culas de prata com extratos ricos em polissacar?deos sulfatados (SPN). Assim, neste trabalho sintetizou-se SPN de algas encontradas no Brasil: Spatoglossum schr?ederi, Dictyopteris justii, Sargassum filipendula e Dictyota mertensii. A obten??o dos extratos ricos em polissacar?deos ocorreu por prote?lise seguida por precipita??o com metanol. A s?ntese das diferentes nanopart?culas ocorreu com a adi??o de solu??es de prata 1 mM em solu??es dos diferentes polissacar?deos e mantidos em repouso. Posteriormente as amostras foram centrifugadas e liofilizadas. A forma??o SPN foi confirmada por espectroscopia UV/vis?vel, microscopia eletr?nica de varredura e microscopia de for?a at?mica. O tamanho das SPN foi de 108 ? 2 nm; 82 ? 1nm; 288 ? 52 nm; 104 ? 2 nm para S. schr?ederi; D. justii; S. filipendula; D. mertensii, respectivamente e se manteve est?vel por catorze meses, os potenciais zeta foram negativos e as formas das SPN foram esf?ricas. Os resultados de diversos testes in vitro mostraram que as SPN potencializam as atividades antioxidantes de ASP. As SPN tamb?m foram biocompat?veis com c?lulas normais 3T3 (fibroblastos murinicos). Por outro lado, SPN de S schr?ederi e de D. mertensii tiveram atividade citot?xica (~60%) frente as c?lulas de melanoma mur?nico (B16F10) e acredita-se que a maior atividade citot?xica destas SPN ocorram devido aos seus pequenos tamanhos. SPN tamb?m tiveram grande capacidade antibacteriana. Nanopart?culas de D. justii e S. filipendula tiveram os melhores resultados, sendo necess?rio somente 50 ?g/mL para a morte da bact?ria E. coli e 100 ?g/mL para a morte de S. aureus. Hipotet?za-se que esta atividade ocorra por libera??o de prata pelas SPN. SPN tamb?m foram capazes de induzir a produ??o de ?xido n?trico e citocinas com perfil semelhante a os seus respectivos ASP, com exce??o para SPN de S. schr?ederi. Em geral, os resultados revelaram que a s?ntese de SPN a partir das ASP potencializa efeitos antioxidantes, citot?xico e antibacteriano dos ASP, al?m de apresentar o mesmo efeito imunomodulador de seus respectivos ASP. Os dados obtidos levam a propor que a s?ntese de SPN constituiu-se como um poss?vel mecanismo potencializador de atividades biol?gicas. / The production of silver nanoparticle containing natural extracts has been identified as an excellent alternative to enhance or provide new applicability for these extracts. Sulfated polysaccharides-rich extracts (ASP) from seaweeds showed several pharmacological properties, but there are few reports of the production of silver nanoparticle with sulfated polysaccharides (SPN). Therefore, this paper we synthesized SPN from seaweeds founded in Brazil: Spatoglossum schr?ederi, Dictyopteris justii, Sargassum filipendula e Dictyota mertensii. The obtainment of polysaccharides rich extracts it occurred by proteolysis followed by methanol precipitation. The synthesis of various nanoparticles occurred with the addition of silver solution 1 mM on different polysaccharides solutions and kept at rest. Subsequently the samples were centrifuge and lyophilized. The SPN formation was confirmed by UV/ visible spectroscopy, scanning electron microscopy and atomic force microscopy. The size of SPN was 108 ? 2 nm; 82 ? 1nm; 288 ? 52 nm; 104 ? 2 nm for S. schr?ederi; D. justii; S. filipendula; D. mertensii, respectively. The nanoparticules remained stable for fourteen months, the Zeta potential were negative and forms of SPN were rounded. Data from various antioxidant in vitro tests showed that the SPN were more effective than ASP. The SPN were also biocompatible with the normal cells 3T3 (murine fibroblast). Moreover, SPN of S. schr?ederi and of D. mertensii had cytotoxic activity (~60%) against melanoma cells (B16F10). We believe that the increased of cytotoxic activity of these SPN occur due to their small size. SPN also had great antibacterial capacity. D. justii and S. filipendula nanoparticles had the best results, requiring only 50 mg/mL and 100 mg/mL for induces E. coli and S. aureus death. We hypothesized that this activity occurs by release of SPN?s silver. SPN also increase the nitric oxide and cytokines release from macrophages as similar profile to the respective ASP, except for S. schr?ederi SPN. In general, the results showed that SPN were more effective as antioxidant, antibacterial and cytotoxic agents than their respective ASP, as well as, SPN have shown the same immunomodulation effect of the respective ASP. The results lead to propose that the SPN synthesis constituted as a possible potentiating mechanism of biological activities of ASPs.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-26T19:16:13Z No. of bitstreams: 1 MarinaSampaioDeMenezesCruz_DISSERT.pdf: 1274699 bytes, checksum: f39afb06729aedccb850680b592f9def (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T22:46:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MarinaSampaioDeMenezesCruz_DISSERT.pdf: 1274699 bytes, checksum: f39afb06729aedccb850680b592f9def (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T22:46:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarinaSampaioDeMenezesCruz_DISSERT.pdf: 1274699 bytes, checksum: f39afb06729aedccb850680b592f9def (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Os produtos naturais derivados de plantas servem de mat?ria-prima para a s?ntese de fitoter?picos, sendo amplamente utilizados por v?rias popula??es em todo o mundo. Dentre estes compostos, destacam-se as saponinas e seus metab?litos. Seu intenso uso ? decorrente de suas propriedades bioativas, somado a sua similaridade estrutural a horm?nios. As saponinas derivam-se em sapogeninas, como, por exemplo, a Diosgenina e a Hecogenina. Al?m de serem utilizadas na ind?stria farmac?utica para a produ??o de horm?nios e anti-inflamat?rios esteroidais, estas duas sapogeninas tamb?m s?o empregadas como fitoter?picos, estando presentes tamb?m em vegetais que comp?em a dieta de muitas popula??es. Apesar da vasta utiliza??o destes compostos, existe uma falta de informa??es sobre a toxicidade gen?tica, o que torna o consumo destas sapogeninas um risco para as popula??es. Diante deste contexto, o presente trabalho apresentou como objetivo investigar as potencialidades t?xicas, em n?vel celular e de DNA, da Diosgenina e da Hecogenina. Ensaios em c?lulas HepG2 para a avalia??o da citotoxicidade, genotoxicidade, e mutagenicidade foram realizados. Considerando os resultados obtidos com a Diosgenina, esta sapogenina revelou efeito citot?xico em concentra??es acima de 30 ?M, assim como induziu significativamente incrementos na frequ?ncia de danos no DNA e de micron?cleos. Por outro lado, a Hecogenina somente se revelou citot?xica acima de 150 ?M, por?m em concentra??es abaixo deste valor, foi capaz de induzir danos ao material gen?tico sem promover um aumento na frequ?ncia de micron?cleos. A an?lise do conjunto destes dados sugere que o consumo de alimentos, fitoter?picos ou de medicamentos que contenham a Diosgenina na sua composi??o apresenta um risco maior de toxicidade, quando comparados com as formula??es a base de Hecogenina, uma vez que a Diosgenina apresenta um potencial mutag?nico demonstrado por meio de um aumento significativo na frequ?ncia de micron?cleos que s?o biomarcadores de instabilidade gen?mica. / Natural products derived from plants are used as raw material for the synthesis of phytotherapeutics, and are widely used by many populations around the world. Among these compounds, there are the saponins and its metabolites. Its intense use is due to its bioactive properties, added to its structural similarity to hormones. Saponins derived in sapogenins, as Diosgenin and Hecogenin. Besides its use by pharmaceutical industries to synthesis of steroidal hormones and anti-inflammatories, these two sapogenins are also used as phytotherapeutics, being also present in vegetables from diets of many populations. Despite the widespread use of these compounds, there are a lack of information about their genetic toxicity, which makes the use of these sapogenins a risk. Given this context, the present work aimed to investigate the toxic potential of Diosgenin and Hecogenin, at cellular and DNA level. Assays with HepG2 cells was performed to evaluate the cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity. Considering the results obtained with Diosgenin, that sapogenin showed cytotoxic effects at concentrations higher than 30 ?M, as well as significantly induced increases in frequency of DNA damage and micronucleus. On the other hand, Hecogenin only revealed cytotoxicity above 150 ?M, however, at concentrations below this value, it was able to induce DNA damage without promote an increase in micronucleus frequency. The analysis of these results together suggests that the consumption of foods, phyotheraputics or medicines containing Diosgenin on its composition, presents a higher risk of toxicity when compared with formulations with Hecogenin, since Diosgenin shows a mutagenic potential demonstrated by a significant increase in micronucleus frequency, which are biomarkers of genome instability.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-08-09T23:35:51Z No. of bitstreams: 1 VirginiaPenellopeMacedoESilva_TESE.pdf: 2028754 bytes, checksum: 8e6e495b2056248d59d55bf24abbf089 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-08-15T22:34:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 VirginiaPenellopeMacedoESilva_TESE.pdf: 2028754 bytes, checksum: 8e6e495b2056248d59d55bf24abbf089 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-15T22:34:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VirginiaPenellopeMacedoESilva_TESE.pdf: 2028754 bytes, checksum: 8e6e495b2056248d59d55bf24abbf089 (MD5) Previous issue date: 2015-04-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Nas Am?ricas, a infec??o por Leishmania tem como principal agente etiol?gico Leishmania infantum. Nos ?ltimos 30 anos o padr?o de distribui??o das leishmanioses tem mudado substancialmente e a doen?a tem apresentado um perfil emergente na periferia dos grandes centros urbanos. A infec??o por Leishmania pode evoluir com um amplo espectro cl?nico desde o acometimento da pele, mucosas e v?sceras. Dos indiv?duos infectados por L. infantum apenas 10% desenvolvem a doen?a, sabe-se que 90% da infec??o humana ? assintom?tica e diversos fatores est?o envolvidos no curso da infec??o. Os principais fatores envolvidos no desenvolvimento da doen?a s?o a resposta imune do hospedeiro, a esp?cie e o conte?do g?nico do parasita. O sequenciamento dos isolados de Leishmania poderia aumentar a compreens?o acerca da sintomatologia dos indiv?duos. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar a diversidade gen?tica de cepas de Leishmania circulantes entre humanos, sintom?ticos e assintom?ticos e c?es de ?reas end?micas do Rio Grande do Norte. A variabilidade gen?tica de um grupo de amostras de humanos e caninos com a doen?a visceral, doen?a cut?nea e infec??o assintom?tica foi avaliado com os marcadores moleculares hsp70 e ITS1. O genoma completo de 20 isolados de Leishmania oriundos de humanos, sintom?ticos e assintom?ticos, e c?es foram sequenciados para avaliar a diversidade dessas amostras. Os fragmentos amplificados de hsp70 e ITS1 das amostras e foram analisados e montadas utilizando o pacote Phred/Phrap. Os dendogramas foram constru?dos aplicando o m?todo neighbor joining com 500 bootstraps, seguido das infer?ncias sobre as rela??es entre as variantes de Leishmania. As sequ?ncias dos 20 isolados brasileiros foram mapeadas com o genoma de refer?ncia Leishmania infantum JPCM5, usando o programa Bowtie2, com identifica??o de 36 contigs. As informa??es dos SNPs v?lidos foram utilizadas na PCA. Os SNPs foram visualizados pelo Geneious 7.1 e IGV. As anota??es do genoma foram ent?o transferidas para seus respectivos cromossomos e visualizadas utilizando o Geneious. As sequ?ncias consenso de todos os cromossomos (com m?nimo de 75% das reads com a mesma base) foram alinhadas usando Mauve. As ?rvores filogen?ticas foram calculadas de acordo com c?lculos de m?xima verossimilhan?a e modelos JTT. Como resultados obtivemos que hsp70 e ITS1 n?o foram capazes de definir variabilidade gen?tica entre os isolados de humanos e c?es; nem para os isolados de cultura e de sangue perif?rico, oriundos de um mesmo paciente.O sequenciamento gen?mico dos 20 isolados brasileiros revelou uma forte rela??o entre as cepas de Leishmania circulantes em no Rio Grande do Norte. Os isolados da Grande Natal de humanos e caninos permaneceram agrupados em todas as an?lises, sugerindo que existe proximidade genot?pica e geogr?fica entre os isolados. As amostras isoladas na d?cada de 1990 apresentaram uma maior diversidade genot?pica quando comparadas as amostras recentemente isoladas. De forma geral, n?o encontramos correla??o entre as formas cl?nicas sintom?ticas e assintom?ticas e o conte?do g?nico dos isolados brasileiros de Leishmania. / Leishmania infantum is the main etiologic agent of visceral leishmaniasis in the New World. The pattern of distribution of leishmaniasis has changed substantially and has presented an emerging profile within the periphery of the Large Urban Centers. Leishmania infection can compromise skin, mucosa and viscera. Only 10% of the individuals infected develop the disease and 90% of human infection is asymptomatic. The main factors involved in the development of the disease are the host immune response, the vector?s species and the parasite?s genetic content. The sequencing of Leishmania isolated seeks to increase the understanding of the symptoms of individuals. The aim of this study was to evaluate the genetic diversity of circulating Leishmania strains among humans, and symptomatic and asymptomatic, and dogs from endemic areas of Rio Grande do Norte State and analyze sandflies from endemic areas for cutaneous and visceral disease. The genetic variability was evaluated by the use of markers hsp70 , ITS1 and a whole genome sequencing was also carried out. The amplified hsp70 and ITS1 of samples were analyzed and assembled using a Phred / Phrap package. The dendograms were constructed using the same methodology, but adding 500 bootstraps, followed by inferences on the relationships between Leishmania variants. The sequences of the 20 Brazilian isolates were mapped to the reference genome L. infantum JPCM5, using the Bowtie2 program and the identification of 36 contigs. The information of the valid SNPs were used in the PCA. SNPs were visualized by Geneious 7.1 and IGV. The genome annotations were transferred to their respective chromosomes and displayed on Geneious. The matching sequences of all chromosomes were aligned using Mauve. The phylogenetic trees were calculated according to maximum likelihood and JTT models. Sandflies were analyzed by PCR for the identification of Leishmania infection, a blood meal source and GAPDH sand fly. As a result, hsp70 and ITS1 were not capable of identifying genetic variability among human isolates from symptomatic and asymptomatic, and dogs. The complete sequencing of the 20 Brazilian isolates revealed a strong similarity between the circulating Leishmania strains in Rio Grande do Norte. The isolates collected in the city of Natal from humans and canines remained grouped in all analyzes, suggesting that there is genotypic and geographic proximity among the isolates. The isolated samples in the 1990s had a higher genotypic diversity when compared to freshly isolated samples. All isolates presented 36 chromosomes with variable ploidy among them, no correlation was found between the number of amastina genes copies, gp63, A2 and SSG with such clinic forms. In general, we did not find correlation between symptomatic and asymptomatic clinical forms and the gene content of the Brazilian isolates of Leishmania. 34,28% of the sandflies collected in the upper west region were L. longipalpis and the main sources of blood meal were humans, dogs and chickens.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:36:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PaulaRM_TESE_CAPA_PAG_145.pdf: 2412975 bytes, checksum: 1debc39154a40b289790305c460cc983 (MD5) Previous issue date: 2012-09-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The temporal allocation of the active phase in relation to light and dark cycle (LD) changes during puberty in humans, degus, rats and rhesus. In marmosets, the animal model used in several biomedical researches, there is evidence of a delay at the beginning of the active phase and an increase in total daily activity after onset of puberty. However, as this aspect was evaluated in animals maintained in natural environmental conditions, it was not possible to distinguish between the effects of puberty and of seasonality. Furthermore, as motor activity is the result of different behaviors in this species, it is also important to characterize the diurnal distribution of other behaviors in juvenile stage. With the aim of characterizing the circadian rhythm of motor activity and the diurnal profile of affiliative behavior in marmosets, the motor activity of 5 dyads juveniles between 4 and 12 months of age and their parents was recorded continuously for act?metro. The families were maintained under artificial LD 12:12 h, constant temperature and humidity. The duration of grooming behavior, proximity and social play among juveniles was recorded 2 times a week in sessions of 15 minutes each hour of the active phase. Afetr onset of puberty in juvenile, it was observed that there was no change in the parameters of circadian motor activity rhythm which were common to most animals. Despite the absence of pubertal modulation, it was observed that the circadian activity profiles have stronger synchrony between individuals of the same family than that of different families, which may indicate that the circadian activity rhythm was modulated by the dynamics of social interactions. In relation to age, the total daily activity and the ratio between evening and morning activity (EA/MA) were higher in juveniles than in adults, which may be associated with differences in the circadian timing system between age groups. Furthermore, the onset of the 10 consecutive hours of higher activity (M10) occurred earlier in adult males than in other members of the group, probably as a way to avoid competition for resources in one of the first activities of the day that is foraging. During the juvenile stage, there was an increase in total daily activity that may be associated with increased motor ability of juveniles. In addition to the circadian activity rhythm, the daytime profile of proximity and social play behaviors was similar between the 5th and 12th month of life of juveniles, in which the interval between 7- 10 h in the morning showed the highest values of proximity and lower values of play social. Moreover, the duration of the grooming showed a similar distribution to adults from the 8th month, wherein the higher values occurring at the interval between 11 14 h of day. Considering the results, the parameters of the circadian activity rhythm had a greater influence of social factors than puberty. In relation to age, there were no changes related to the allocation of the active phase in relation to the LD cycle, but total daily activity, the ratio AV/AM and the start of the M10 is possible to observe differences between juveniles and adults / A aloca??o temporal da fase ativa em rela??o ao ciclo claro e escuro (CE) modifica-se durante a puberdade em humanos, degus, ratos e rhesus. Em sagui, modelo animal utilizado em diversas pesquisas biom?dicas, h? evid?ncias de um avan?o no in?cio da fase ativa e um aumento no total di?rio da atividade ap?s a entrada na puberdade. Entretanto, como este aspecto foi avaliado em animais mantidos em condi??es ambientais naturais, n?o foi poss?vel distinguir entre os efeitos da puberdade e da sazonalidade. Al?m disso, como a atividade motora ? resultado dos diversos comportamentos nessa esp?cie, torna-se importante tamb?m caracterizar a distribui??o diurna de outros comportamentos na fase juvenil. Com o objetivo de caracterizar o ritmo circadiano de atividade motora e o perfil circadiano dos comportamentos afiliativos em saguis, a atividade motora de 5 d?ades de juvenis entre o 4? e 12? meses de vida e seus respectivos pais foi registrada continuamente por act?metro. As fam?lias estavam vivendo sob ciclo CE artificial 12:12 h e temperatura e umidade constantes. A dura??o dos comportamentos de cata??o, proximidade e brincadeira social entre os juvenis foi registrada 2 vezes por semana, em sess?es de 15 minutos a cada hora da fase ativa. Ap?s a entrada na puberdade dos juvenis, observou-se que n?o houve modifica??es nos par?metros do ritmo circadiano da atividade motora que fossem comuns a maioria dos animais. Apesar da aus?ncia de modula??o puberal, foi observado que os perfis circadianos da atividade t?m sincronia mais forte entre os indiv?duos de uma mesma fam?lia do que entre fam?lias diferentes, o que pode indicar que o ritmo circadiano de atividade motora foi modulado pela din?mica das intera??es sociais. Em rela??o ?s faixas et?rias, o total di?rio da atividade e a raz?o entre a atividade vespertina e matutina (AV/AM) foram maiores nos juvenis do que nos adultos, o que pode est? associado a diferen?as no sistema de temporiza??o entre as faixas et?rias. Al?m disso, o in?cio das 10 h consecutivas de maior atividade (M10) ocorreu mais cedo nos machos adultos do que nos demais membros do grupo, provavelmente como forma de evitar a competi??o por recursos em uma das primeiras atividades do dia que ? o forrageio. Ao longo da fase juvenil, houve um aumento no total di?rio da atividade que pode estar associado ao aumento da habilidade motora nos juvenis. Al?m do ritmo circadiano de atividade motora, o perfil diurno dos comportamentos de proximidade e brincadeira social foi semelhante entre o 5? e o 12? m?s de vida dos juvenis, nos quais o intervalo entre 7-10 h da manh? apresentou os maiores valores da proximidade e os menores valores da brincadeira social. Por outro lado, a dura??o da cata??o apresentou uma distribui??o semelhante aos adultos a partir do 8? m?s, em que os maiores valores ocorreram no intervalo entre 11-14 h. Tendo em vista os resultados, os par?metros do ritmo circadiano de atividade motora tiveram uma influencia maior dos fatores sociais do que puberais. Em rela??o ? faixa et?ria, n?o houve modifica??es relacionadas ? aloca??o da fase ativa em rela??o ao ciclo CE, mas no total di?rio da atividade, na raz?o AV/AM e no in?cio do M10 ? poss?vel observar diferen?as entre juvenis e adultos

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-02T13:30:50Z No. of bitstreams: 1 EmmanuelDuarteBarbosa_DISSERT.pdf: 9706329 bytes, checksum: cf979f942793c968afbd04719854d7f0 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-02-08T19:26:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EmmanuelDuarteBarbosa_DISSERT.pdf: 9706329 bytes, checksum: cf979f942793c968afbd04719854d7f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T19:26:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EmmanuelDuarteBarbosa_DISSERT.pdf: 9706329 bytes, checksum: cf979f942793c968afbd04719854d7f0 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / A enzima Delta Aminolevul?nico Desidratase (ALAD) ? uma metaloprote?na citos?lica essencial em v?rios processos biol?gicos, uma vez que ? respons?vel pelo segundo passo da cat?lise enzim?tica na forma??o de porfobilinog?nio, um precursor dos tetrapirr?licos (heme, clorofila). Esta enzima ? bastante sens?vel a metais pesados e tem sido classicamente usada como um marcador na intoxica??o por chumbo. Sua inibi??o se d? pela substitui??o desses metais pesados no s?tio de liga??o a metais. Na ALAD humana, o Zinco (Zn2+) ocupa funcionalmente este s?tio sendo essencial para a coordena??o das cadeias de ?cido aminolevul?nico durante a cat?lise enzim?tica. Embora muitos ensaios in vitro, in vivo e in s?lico j? tenham demonstrado a import?ncia do Zn2+ nesse s?tio, n?o se tinha conhecimento de nenhum estudo baseado em abordagem qu?ntica com o intuito de elucidar esta intera??o de forma mais detalhada. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo analisar as muta??es missense que acometem o s?tio de liga??o ao zinco e descrever atrav?s de m?todos qu?nticos a energia de intera??o entre a enzima e o zinco com maior acur?cia utilizando o m?todo do Fracionamento Molecular com Capas Conjugadas (MFCC), quantificando energeticamente os res?duos de amino?cidos posicionados at? uma dist?ncia de 8,5 ? do centroide do ligante. Foi identificado as altera??es bioqu?micas na estrutura monom?rica dos mutantes, as quais resultam na diminui??o da atividade enzim?tica. Foram identificados um total de 30 res?duos com valores energ?ticos variados que interagem com o zinco no bols?o de liga??o. Aqueles que apresentaram valores significativos (de atra??o ou repuls?o) e est?o relacionados funcionalmente ? atividade enzim?tica foram: Lis199, Lis252, Arg 209, Arg 174, Cis122, Cis124 e Cis132; e aqueles que demonstraram relev?ncia para a perman?ncia do ?on no s?tio de liga??o foram: Asp169, Gli130, Gli133, Asp120 e Ser168. A partir disso, p?de-se concluir que al?m dos grupos nucle?filos (grupos tiolatos) dos res?duos Cis122, Cis124 e Cis132, os res?duos Asp169, Asp120 e Ser168 s?o fundamentais na composi??o do bols?o, uma vez que demonstraram grande quantidade de energia de intera??o atrativa com o ?on Zn2+. / The enzyme Delta Aminolevulinic Dehydratase (ALAD) is a cytosolic metalloproteinase essential in several biological processes since it participates in the second step in porphobilinogen formation pathway, a tetrapyrrolic precursor of heme and chlorophyll. This enzyme is very sensitive to heavy metals and has traditionally been used as a biomarker in lead poisoning. Its inhibition occurs when these heavy metals are replaced inside the metal binding site. In human ALAD, Zinc (Zn2+) functionally occupies this site and it is essential for coordination of two chains of aminolevulinic acid for the enzymatic catalysis. Although many in vitro, in vivo and in silico works have already demonstrated the importance of Zn2+ at that site, to the best of our knowledge, there isn?t any studies on literature based on quantum approach in order to elucidate this interactions in more details. Therefore, the aim of the present study was to analyse the missense mutations that affect the zinc binding site and describe through quantum methods the energy interaction between zinc and ALAD with greater accuracy using the method of Molecular fractionation with conjugated caps (MFCC) by quantifying amino acid residues? energy positioned at 8.5 ? of distance with the ligand centroid. It was identified biochemical changes in the monomeric structure of mutants, which result in decreased enzyme activity. It were identified a total of 30 residues with a wide range of energy values. The residues with significant (atractition or repulsion) values and functionally related to enzymatic activity were: Lys199, Lys252, Cys122, Cys124 and Cys132; and those that demonstrated relevance to the ion permanence inside the binding site were: Asp169, Gly130, Gly133, Asp120 and Ser168. Thus, it could be concluded that in addition to the nucleophilic groups (thiolates groups) from Cys122, Cys124 and Cys132, others residues such as Asp169, Asp120 and Ser168 are fundamental in the catalytic pocket composition, since they showed high attractive interaction energy with Zn2+ ion.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-17T19:43:30Z No. of bitstreams: 1 AlminoAfonsoDeOliveiraPaiva_TESE.pdf: 2456253 bytes, checksum: 8fb79cebdf6af9ae6e52d7c2b6873b85 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-02-18T00:27:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AlminoAfonsoDeOliveiraPaiva_TESE.pdf: 2456253 bytes, checksum: 8fb79cebdf6af9ae6e52d7c2b6873b85 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-18T00:27:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlminoAfonsoDeOliveiraPaiva_TESE.pdf: 2456253 bytes, checksum: 8fb79cebdf6af9ae6e52d7c2b6873b85 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Macroalgas marinhas s?o importantes fontes de polissacar?deos neutros e negativos com importante potencial industrial e farmacol?gico. A macroalga marrom Lobophora variegata ? conhecida por apresentar polissacar?deos sulfatados (heterofucanas) e neutros (laminarinas). Neste trabalho, mostra-se a obten??o de 6 fra??es polissacar?dicas (F0.3; F0.5; F0.8; F1; F1.5 e F2). A partir dos dados de caracteriza??o f?sico-qu?mica das fra??es, escolheu-se a F1 para purifica??o de seus componentes polissacar?dicos. An?lises de cromatografia l?quida de exclus?o molecular levaram a observa??o que F1 apresenta polissacar?dicos de baixa (~ 5 kDa) at? alta (> 100 kDa) massa molecular. Estes componentes foram separados de acordo com sua massa molecular, utilizando-se dispositivos de separa??o por tamanho molecular. Com isso, obteve-se subfra??es polissacar?dicas com tamanhos m?dios de 5, 20, 40, 75 e acima 100 kDa, denominadas de F1-5, F1-20, F1-40. F1-75 e F1>100 kDa, respectivamente. Estas subfra??es foram analisadas f?sico-qu?micamente por eletroforese em gel de agarose, cromatografia l?quida de alta efici?ncia, assim como, por an?lises de suas propriedades antioxidantes, imunoestimulantes e citot?xicas/antiproliferativas. Como resultados, detectou-se um teor de a??cares totais acima de 55% em todas as subfra??es, j? prote?nas e compostos fen?licos n?o foram observados. As fra??es F1-5, F1-20 e F1-40 apresentaram somente glucose (glucanas), j? F1-75 e F1>100 apresentam glucose, galactose e fucose (heterofucanas). Todas as subfra??es apresentaram atividade quelante de metais, mas somente F1-75 e F1>100 foram mais efetivas em sequestrar radicais. A produ??o/libera??o de ?xido n?trico (NO) por c?lulas RAW 264.7 ficou aumentada apenas na presen?a F1-5 (10 ?M, p<0,05), F1-75 (10 ?M, p<0,001) e, com destaque, F1>100 (10 ?M, p<0,001) cuja presen?a aumentou em cerca de 12 vezes a quantidade de NO. Entretanto, quando estas c?lulas foram ativadas com LPS, somente F1-20 e F1>100 (10 ?M) (p<0,001) proporcionaram produ??o/libera??o de ON. As demais fra??es n?o interferiram na a??o do LPS. Somente F1-5 e F1>100 estimularam a produ??o/libera??o de citocinas. Somente F1>100 (10 ?M) foi citot?xica para a linhagem 3T3 (fibroblastos) (p<0,01). Nenhuma das subfra??es apresentaram efeito citot?xico para linhagem de c?lulas RAW 264.7 (macr?fagos) ou para linhagem de c?lulas tumorais Hep-G2 (carcinoma hep?tico). J? com a linhagen de c?lulas 786-0 (adenocarcinoma renal) somente a glucana F1-40 n?o apresentou atividade citot?xica (p>0,05). Os maiores valores de citotoxidade foram obtidos com a subfra??o F1-20, no caso contra c?lulas B16F10 (melanoma). Dados de citometria de fluxo indicaram que esta subfra??o promove uma parada das c?lulas na fase G1 do ciclo celular (10 ?M, p<0,01). An?lises de resson?ncia magn?tica nuclear levaram a proposta de que F1-20 ? uma ?-glucana formada por ?-(1?3) glucoses com ramifica??es, compostas por um res?duo de glicose, na posi??o 6. A propor??o ? de nove res?duos de glucose 1?3 ligados para cada ponto de ramifica??o. Os dados apontam F1-20, por ser antioxidante, imunomoduladora e citot?xico, como um composto pluripotente cujo potencial deva ser melhor investigado. / Seaweeds are important sources of neutral and negative polysaccharides with important industrial and pharmacological potential. The brown macroalgae Lobophora variegata is known for presenting sulfated polysaccharides (heterofucans) and neutral (laminarins). In this work, it is shown getting 6 polysaccharide fractions (F0.3, F0.5, F0.8, F1, F1.5 and F2). From the data of physicochemical characterization of fractions, F1 was chosen for next purification steps. Liquid chromatography of molecular exclusion analysis showed that F1 contain polysaccharide from low (~ 5 kDa) to high (> 100 kDa) molecular weight. These components were separated according to their molecular weight using separation by molecular size devices. Thus, it was obtained subfractions with an average polysaccharide size of 5, 20, 40, 75 and above 100 kDa, named F1-5, F1-20, F1-40. F1-75 and F1>100 kDa, respectively. These subfractions were analyzed physico-chemically by agarose gel electrophoresis, high-performance liquid chromatography, as by analysis of their antioxidant, immunomodulatory and cytotoxic/antiproliferative properties. As result, total sugar content in all subfractions was above 55%, since proteins and phenolic compounds were not observed. The fractions F1-5, F1-20 and F1-40 showed only glucose (glucans), as F1-75 and F1> 100 exhibit glucose, galactose and fucose (heterofucans). All subfractions showed chelating activity of metals, but only F1-75 and F1>100 were more effective as radical scavenger. The production/release of nitric oxide (NO) by RAW cells was increased only in the presence F1-5 (10 ?M, p <0.05), F1-75 (10 ?M, p<0.001) and, especially, F1>100 (10 ?M, p <0.001) whose its presence increased about 12 times the amount of NO. However, when these cells were activated with LPS only F1-20 and F1>100 (10 ?M) (p<0.001) yielded production/release of NO. The other fractions did not interfere in the LPS action. Only F1-5 and F1>100 stimulated the production/release of cytokines. Only F1>100 (10 ?M) was cytotoxic to line 3T3 (fibroblast) (p<0.01). None of subfractions showed cytotoxicity effect to cell line RAW 264.7 (macrophages) or tumor cell line Hep-G2 (hepatocellular carcinoma). On the other hand, only F1-40 did not showed cytotoxic activity (p>0.05) against 786-0 renal carcinoma cells. The highest cytotoxicity values were obtained with the subfraction F1-20, in the case against B16F10 cells (melanoma). Flow cytometry data indicate that this subfraction stopped of cells in the G1 phase of the cell cycle (10 ?M, p<0.01). Nuclear magnetic resonance analysis led to the proposal that F1-20 is a ?-glucan formed by ?-(1?3) glucosides with branches, comprising a glucose residue at position 6. The ratio is nine glucose residues 1,3 connected to each branching point. The data point F1-20, being an antioxidant, immunomodulating and cytotoxic as a compound pluripotent whose potential should be further investigated.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-05-31T20:46:06Z No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-06-01T20:53:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T20:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / Introdu??o: Os c?es s?o considerados os principais reservat?rios dom?sticos de Leishmania infantum no Brasil e apresentam um amplo espectro de manifesta??es cl?nicas, variando de perda de peso, anemia grave, hepatoesplenomegalia e les?es d?rmicas disseminadas. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de express?o g?nica em c?lulas do ba?o e do sangue perif?rico de c?es naturalmente infectados por L. infantum e investigar as altera??es histopatol?gicas no ba?o, f?gado, intestino e pele, visando identificar poss?veis vias imunorreguladoras envolvidas na patog?nese da LVC. Metodologia: Vinte e um c?es oriundos do Centro de Controle de Zoonoses de Natal-RN foram estudados e um subgrupo destes animais (n=8) foi utilizado para estudos de express?o g?nica global. A carga de Leishmania nos diversos tecidos, foi estimada por qPCR e cultura para Leishmania foi realizada. O RNA total do ba?o e do sangue perif?rico foi extra?do e as bibliotecas de cDNA foram obtidas e sequenciadas em plataforma Illumina. As sequ?ncias obtidas foram filtradas e alinhadas contra o genoma de Canis familiaris pelo software Bowtie. A express?o g?nica diferencial foi analisada usando o protocolo do Cufflinks, a anota??o funcional e as caracter?sticas moleculares dos genes foram obtidas no banco de dados Gene Ontology e KEGG atrav?s do pacote STRINGdb. Fragmentos de f?gado, duodeno, pele e ba?o foram coletados, processados e corados com hematoxilina/eosina e imunofluoresc?ncia para an?lises histopatol?gicas. Resultados: As cargas parasit?rias estimadas para ba?o e f?gado apresentam correla??o, por?m n?o h? correla??o entre a carga parasit?ria destes tecidos com aquela presente no sangue. Aproximadamente 756 genes se mostraram super expressos no ba?o de animais sintom?ticos, como CTLA4, CCL2 e IL27; al?m destes, cerca de 1.190 genes apresentaram express?o reprimida neste mesmo grupo, como BMP6, C1QB e C1QC. As vias de ativa??o de c?lulas NK, receptores dos tipos Toll-like e NOD-like expressas no ba?o de animais sintom?ticos estavam com express?o elevada, enquanto as vias de s?ntese de ?ncoras de GPI e ativa??o do imunoproteossoma estavam reprimidas. A progress?o da LVC resulta em desorganiza??o da citoarquitetura do ba?o, com perda parcial da delimita??o entre polpa branca e vermelha. ? observado infiltrado inflamat?rio no f?gado, duodeno e pele. Validando o achado do transcriptoma, foi observada por imunofluoresc?ncia a presen?a de CTLA4, CCR7 e NLRP3 no ba?o de animais sintom?ticos. Conclus?es: A desregula??o de mecanismos tipicamente associados ? imunidade inata pode estar diretamente envolvida na patogenia da LVC. Al?m disso, uma alta efici?ncia no processamento e apresenta??o de ant?genos parecem ser respons?veis, pela resist?ncia ao desenvolvimento dos sinais cl?nicos e integridade tissular durante a infec??o por L. infantum em c?es. / Background: Dog is the main domestic reservoir of Leishmania infantum in Brazil. Those animals present a wide spectrum of clinical manifestations, varying from weight loss, anemia to hepatosplenomegaly and skin lesions. The goal of this study was to evaluate the gene expression profile in the spleen and peripheral blood cells from naturally Leishmania-infected dogs and to study the histology of the spleen, liver, gut and skin, in order to determine possible molecular pathways and histopathological process underlying the mechanisms related to disease progression and resistance. Methodology: 21 dogs was studied and a sub group (n=8) was selected for transcriptomic studies. In addition, spleen, liver, gut and blood parasitism were estimated by qPCR and parasite was isolated from the spleen by culture. Total RNA was extracted and cDNA libraries were constructed and sequenced in an Illumina platform. The reads obtained were filtered and aligned against Canis familiaris genome using Bowtie. Differential gene expression was analyzed using the Cufflinks workflow, functional annotation and molecular features for each gene was obtained from Gene Ontology and KEGG database using STRINGdb. A fragment of liver, gut, skin and another spleen fragment were collected, processed and stained by HE and immunofluorescence for histopathological analysis. Results: Parasite load estimated in the spleen and liver were strongly associated, however no correlation was observed between them and circulating parasite estimation. Approximately, 756 genes were upregulated in the spleens of symptomatic dogs, as CTLA4, CCL2 and IL27, furthermore, about 1,190 genes were downregulated in the same group of animals, as BMP6, C1QB and C1QC. We found that NK cells activation, toll-like and NOD-like receptors pathways are highly expressed in the spleen of symptomatic dogs, while GPI-anchors synthesis and immunoproteasome activation related genes are downregulated in these animals. Additionally, we observed that in symptomatic animals, the cytoarchitecture of spleen is altered, with partial loss of the delimitation between white and red pulp. Furthermore, an intense inflammatory infiltrate in the liver, gut and skin of these animals. Confirming the RNA-Seq findings, we observed by immunofluorescence CTLA4, CCR7 and NLRP3 are overexpressed the spleen of symptomatic dogs. Conclusions: These findings suggest that misregulation of innate immunity is involved in CVL and an efficient antigen presentation maybe decisive for resistance to clinical signs development and tissue integrity during L. infantum infection in dogs.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-28T15:29:53Z No. of bitstreams: 1 katiamariadeoliveiraalmeida.pdf: 3093413 bytes, checksum: d923595bf14efb144eaf44c719ed26b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-07-03T14:45:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 katiamariadeoliveiraalmeida.pdf: 3093413 bytes, checksum: d923595bf14efb144eaf44c719ed26b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-03T14:45:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 katiamariadeoliveiraalmeida.pdf: 3093413 bytes, checksum: d923595bf14efb144eaf44c719ed26b8 (MD5) Previous issue date: 2018-04-05 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Xantanas são polissacarídeos ramificados, de alta massa molar (> 106 Da), constituídos de glicose, manose e ácido glucurônico. Elas são obtidas pela fermentação de Xanthomonas campestris, geralmente consideradas seguras e aprovadas para uso em indústrias alimentícias e farmacêuticas, como espessantes. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar, do ponto de vista estrutural, coloidal e reológico; goma xantana biossintetizada a partir de glicose, visando avaliar seu estado de agregação em solução aquosa. A xantana foi produzida em um meio contendo 1,5% de glicose, 0,5% de K2HPO4, 0,2% de NH4Cl, 0,1% de NaCl, 0,01% de MgSO4 e 0,1% de extrato de levedura inoculado com Xanthomonas campestris pv. manihotis e incubadas a 30 oC (72 h), em duplicata, obtendo-se as amostras XantG1 e XantG2. Visto que biopolímeros têm sido amplamente utilizados na indústria farmacêutica, sobretudo, na fabricação de sistemas de liberação controlada de fármacos, este trabalho objetivou também a investigação do complexo formado através da complexação da xantana com o antibiótico catiônico doxiciclina. As xantanas puras foram caracterizadas no estado sólido por espectroscopia na região do infravermelho (FTIR) e análises térmicas (TGA e DTA). Em solução, foram caracterizadas por medidas de condutividade elétrica, espalhamento de luz dinâmico (DLS), potencial zeta (ZP) e reologias estacionária e dinâmico-oscilatória, todas a 25 oC. As interações entre doxiciclina e xantana foram investigadas utilizando-se os mesmos métodos, além da calorimetria isotérmica de titulação (ITC) que foi utilizada para medida dos parâmetros termodinâmicos de complexação. A ação antimicrobiana do complexo Dox/Xant foi avaliada através de estudos biológicos. Os espectros de infravermelho e as análises térmicas foram muito semelhantes para as duas amostras de xantana pura (XantG1 e XantG2), além de muito semelhantes aos encontrados para outras xantanas da literatura, mostrando a reprodutibilidade dos processos de síntese e purificação. Quando em solução aquosa, ambas mostraram estabilidade química por pelo menos 23 dias, já que a condutividade elétrica praticamente não se alterou. As medidas de diâmetro hidrodinâmico, potencial zeta, condutividade elétrica e reologia demonstraram que as xantanas comportam-se como polieletrólitos que sofrem diferentes níveis de agregação em solução, dependendo da concentração. A solução de xantana a 2 g/L mostrou forte pseudoplasticidade decorrente da existência dos emaranhados moleculares, o que justifica seu uso como espessante. Quanto ao complexo doxiciclina/xantana, sua formação foi monitorada por titulações calorimétrica, reológica e por potencial zeta. Os dados de calorimetria isotérmica mostraram que a xantana apresenta dois sítios distintos de interação com a doxiciclina, sendo uma das etapas de complexação exotérmica e a outra endotérmica. Os experimentos de titulação reológica mostraram forte redução da viscosidade durante a titulação, sugerindo que a interação doxiciclina/xantana gera um colapso na estrutura dos polímeros, quebrando os emaranhados. Finalmente, a atividade antimicrobiana dos complexos e dos precursores foi avaliada frente à Staphylococcus aureus 323886023, por determinação da dose letal mediana e curva de morte. Os resultados obtidos demonstraram que a formação dos complexos levou a um aumento da atividade antimicrobiana, através da redução da dose letal mediana e do tempo de inibição. Isto demonstra que a preparação de complexos de xantanas com a doxiciclina pode ser uma alternativa promissora para o desenvolvimento de uma nova formulação para liberação controlada desse fármaco. / Xanthans are branched polysaccharides of high molecular mass (> 106 Da), consisting of glucose, mannose and glucuronic acid. They are usually obtained by the fermentation of Xanthomonas campestris, which has been considered safe and approved for use in the food and pharmaceutical industries, as thickeners. The present work aimed to characterize xanthan gums biosynthesized from glucose from structural, colloidal and rheological point of view, aiming to evaluate its state of aggregation in aqueous solution. They were produced in duplicate using a medium containing 1.5% glucose, 0.5% K2HPO4, 0.2% NH4Cl, 0.1% NaCl, 0.01% MgSO4 and 0.1% yeast extract inoculated with Xanthomonas campestris pv. manihotis and incubated at 30 oC (72 h), in order to obtain the XantG1 and XantG2 samples. Since biopolymers have been widely used in the pharmaceutical industry, especially in the manufacture of controlled drug delivery systems, this work also aimed to investigate the complex formed through the complexation of xanthan and the cationic antibiotic doxycycline. The pure xanthans had their chemical structures characterized in solid state by FTIR and their thermal profile evaluated by TGA/DTA thermal analysis. Moreover, measurements of electrical conductivity, hydrodynamic diameter (by DLS), Zeta potential and stationary and oscillatory dynamic rheologies were used to investigate their aggregations state at different concentrations. Further, the complexes xanthan/doxycycline (Xant/Dox) were characterized in solid state by infrared spectroscopy and thermal analysis (TGA and DTA), while the complexation process was monitored by zeta potential, DLS, viscosimetric and isothermal calorimetry (ITC) titrations. Stationary rheology studies at 25 oC where used to know the flow profile of the so-produced suspensions after titration. Antimicrobial action of the complexes was evaluated through biological studies. The infrared spectra and the thermal analyzes were very similar for the two pure xanthan samples, showing the reproducibility of the synthesis and purification processes, besides being very similar to those found for other xanthanes in the literature. The electrical conductivity data as a function of time showed chemical stability of the compounds for at least 23 days in aqueous solution. The hydrodynamic diameter, zeta potential, electrical conductivity and rheology measurements showed that xanthanes behave as polyelectrolytes that undergo different levels of aggregation in solution depending on the concentration. The solution of xanthan at 2 g / L showed strong pseudoplasticity due to the existence of molecular entanglements, which justifies its use as a thickener. As for the doxycycline/xanthan complex, its formation was monitored by calorimetric, rheological and zeta potential titrations. The data of isothermal calorimetry showed that xanthan presents two distinct sites of interaction with doxycycline, being one of the exothermic and the other endothermic complexation stages. The rheological titration experiments showed strong reduction of viscosity during titration, suggesting that the doxycycline/xanthan interaction causes a collapse in the structure of the polymers, breaking the entanglements. Finally, the antimicrobial activity of the complexes and precursors was evaluated against Staphylococcus aureus 32388602 by lethal dose and death curve assays. The results showed that the formation of the complexes led to an increase in the antimicrobial activity, through the reduction of the lethal dose and the time of inhibition. This demonstrates that the preparation of xanthan complexes with doxycycline may be a promising alternative for the development of a novel formulation for controlled release of that drug.

The discovery of pyrazole derivatives dates back to 1884, when the German chemist Ludwig Knorr attempted to synthesize quinoline derivatives with antipyretic activity and accidentally obtained antipyrine, a pyrazolinone, which has analgesic, antipyretic and antirheumatic activity. Since then, new pyrazole compounds, like phenylbutazone and dipyrone, were discovered. Dipyrone, probably the most widely studied pyrazole derivative, present analgesic, antipyretic and few antiinflammatory activities. The mechanism of action of pyrazole compounds seems to involve the central and peripheral inhibition of cyclooxygenase, a key enzyme in the synthesis of prostaglandin. In this work we studied the antinociceptive and antiinflammatory effects of a novel pyrazole-derived compounds: 4-methyl-5-hydroxy-5-trifloromethyl-4,5-diidro-1H-1-pyrazolcarboxyamide (NF0) and its related compound 3- methyl-5-hydroxy-5-trifloromethyl-4,5-diidro-1H-1-pyrazolcarboxyamide (NF2). The antinociceptive potential was assessed using abdominal writhing, hot plate and formalin tests in adult mice. Antiinflammatory activity was assessed by paw plethysmometry in adult rats using the carrageenin-induced paw edema test. Subcutaneous administration of NF0 (30, 100, 300 and 1000 μmol/kg) decreased time spent licking or biting the injected paw in the neurogenic phase of the formalin test. However, only 300 and 1000 μmol/kg NF0 decreased licking time in the inflammatory phase of the formalin test. On the other hand, subcutaneous administration of NF2 had no effect on licking time during the neurogenic phase, but decreased licking time in inflammatory phase of the formalin test at dose of 1000 μmol/kg. Naloxone (2,75 μmol/kg) pre-administration did not prevent NF0 and NF2-induced antinociception, suggesting that opioid mechanisms may not underlie such effects. NF0 and NF2 were devoid of antiinflammatory activity in the paw edema test in rats, and had no effect on the spontaneous locomotor activity and motor performance of mice in the rotarod test. These results suggest that NF0 induces antinociception in the neurogenic and inflammatory phases of the formalin test, while NF2 causes antinociception only inflammatory phase. Interestingly, the only difference between these compounds is the position of a methyl group in the pyrazole ring. In NF0, the methyl group is placed at position 4 of the pyrazole ring, while NF2 has such a methyl group positioned at the position 3. These results suggest an important structure-activity relationship for the antinociceptive effect these compounds. / Os derivados pirazolínicos foram descobertos por volta de 1884 pelo químico alemão Ludwig Knorr, quando ele tentava sintetizar derivados de quinolina com atividade antipirética e, acidentalmente, obteve a antipirina, uma pirazolona com atividade analgésica, antipirética e anti-reumática. Desde então, novos compostos pirazolínicos como a fenilbutazona e a dipirona foram descobertos. O derivado pirazolínico mais estudado até o momento é a dipirona, que apresenta atividade antipirética, analgésica e pouca atividade antiinflamatória. O mecanismo de ação proposto para os compostos pirazolínicos é a inibição da síntese de prostaglandinas, tanto central quanto perifericamente. Nesse trabalho avaliou-se o potencial antinociceptivo e antiedematogênico de dois derivados pirazolínicos inéditos: 4-metil-5-hidróxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-pirazolcarboxamida (NF0) e seu análogo 3- metil-5-hidróxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-pirazolcarboxamida (NF2). O potencial antinociceptivo foi avaliado nos testes de contorções abdominais induzidas por ácido acético, placa quente, e formalina, em camundongos. A atividade antiedematogênica foi avaliada em ratos, pelo teste de edema de pata induzido por carragenina. Também foi avaliado o efeito dessas drogas sobre a atividade locomotora e exploratória de camundongos. A administração subcutânea do NF0 (30, 100, 300 e 1000 μmol/kg) induziu diminuição do comportamento de lamber a pata na fase neurogênica do teste de formalina, enquanto que somente as duas maiores doses foram capazes de inibir a nocicepção na fase inflamatória desse teste. Por outro lado, o NF2 não apresentou ação na fase neurogênica e foi capaz de inibir o comportamento de lamber a pata, apenas na dose de 1000 μmol/kg, na fase inflamatória. A pré-administração de naloxona (2,75 μmol/kg) não preveniu a antincicepção induzida pelo NF0 e pelo NF2. O NF0 e o NF2 não tiveram efeito antiedematogênico no teste de edema de pata induzido por carragenina, quando administrados numa dose de 200 μmol/kg. Esses compostos, também, não alteraram a atividade motora dos camundongos no teste do cilindro giratório e não modificaram o comportamento dos animais no campo aberto. Esses resultados sugerem que o NF0 induz antinocicepção nas fases neurogênica e inflamatória no teste da formalina, enquanto que o NF2 somente apresenta efeito na fase inflamatória, e que esse efeito não envolve mecanismos opióides. É importante ressaltar que a única diferença estrutural desses compostos reside na posição de um grupamento metila, que no NF0 encontra-se na posição 4 do anel pirazol e no NF2 está na posição 3 do anel, demonstrando uma importante relação estrutura-atividade no efeito antinociceptivo desses compostos.

Methylmalonic acidemia, one of the most frequent organic acidemias, is caused by deficiency of the methylmalonyl CoA mutase, leading to tissue accumulation of Lmethylmalolonic acid (MMA). Affects individuals present lethargy, coma, vomiting, muscular hypotonia, recurrent episodes of metabolic acidosis and progressive encephalopathy. In this context, it has been proposed that MMA inhibits succinate dehydrogenase (SDH) and leads to ATP depletion, lactate accumulation and excitotoxic damage. In the present study we confirmed that MMA competitively inhibits of SDH, and later were investigated the enzymatic medium reduction alters the activity of SDH or its inhibition by MMA. SDH activity was determined in cerebral cortex homogenates, using 2-(p-iodophenyl)-3-(p-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium chloride (INT), as the electorn acceptor. The reduction enzymatic medium was promoted by preincubation with β-NADH (160 μM). The preincubation of β-NADH prevented the inhibition of the activity of SDH induzed by 5mM of the MMA [F(1,5)=9.31; p=0.028]. In addition, was determined of the kinetic parameters (Km and Vmax) and inhition constant (Ki ) of SDH preincubated in the presence and absence of β-NADH. The Km of SDH preincubated with β-NADH (Km=0.216 nmol INT) was different of the Km of SDH preincubated in the absence of the β-NADH (Km=0.272nmol INT) [T(2)=10.375; p=0.009]. The presence of β-NADH in the incubation medium did not alter Vmax= 4.72 ± 0.28.10-8 mol INT/mg protein/min) [T(2)=-1.0; p=0.423]. The Ki of the MMA by SDH activity in presence of the β- NADH (Ki =20.05 mM) is increased that of Ki of the MMA by SDH activity in absence of the β-NADH (Ki =11.60 mM), [T(2)=18.806; p=0.003]. In conclusion, we showed that, in the presence of β-NADH, SDH is less sensitive to the inhibition by MMA. / A acidemia metilmalônica, uma das mais frequentes acidemias orgânicas, é causada pela deficiência da enzima metilmalonil-CoA mutase, ocasionando acumulação tecidual de ácido L-metilmalônico (MMA). Os indivíduos afetados apresentam letargia, coma, vômito, hipotonia muscular, episódios recorrentes de acidose metabólica e encefalopatia progressiva. Em decorrência do acúmulo de MMA ocorre inibição da sucinato desidrogenase (SDH), E.C.5.5.99.2, diminuição da produção de ATP, aumento dos níveis de lactato e dano excitotóxico. No presente estudo confirmamos que o MMA inibe a SDH competitivamente e investigamos se a presença de uma agente redutor no meio enzimático alteraria a atividade da SDH, ou sua inibição por MMA. A atividade da SDH em córtex cerebral de ratos foi determinada usando o 2-(p-iodofenil)-3-(p-nitrofenil)-5-feniltetrazólio (INT), como aceptor de elétrons. A pré-incubação com β-NADH (160 μM) preveniu a inibição da SDH causada por 5 mM de MMA [F(1,5)=9,31; p=0,028]. Posteriormente, foi determinado os parâmetros cinéticos (Km e Vmax) da SDH pré-incubada na presença e ausência de β- NADH. O Km da SDH pré-incubada com β-NADH (Km=0,216 nmol INT) é menor que o Km da SDH pré-incubada na ausência de β-NADH (Km=0,272nmol INT), [T(2)=10,375; p=0,009]. Por outro lado a pré-incubação da enzima com β-NADH não alterou a Vmax (4,72 ± 0,28.10-8 mol INT/mg proteína/min) [T(2)=-1,0; p=0,423]. A constante de inibição (Ki) do MMA para a SDH pré-incubada com β-NADH (Ki=20,05 mM) foi maior que o Ki do MMA para a SDH préincubada sem β-NADH (Ki=11,60 mM) [T(2)=18,806; p=0,003]. Os dados mostram que a presença de β-NADH diminui a sensibilidade da sucinato desidrogenase a inibição por ácido metilmalônico.