Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 450257.pdf: 1851494 bytes, checksum: 45b94fe1b9cb73399670961f3d6d6798 (MD5) Previous issue date: 2013-03-25 / Human tuberculosis (TB), an illness that results from Mycobacterium tuberculosis infection, remains a major health problem worldwide, accounting for an estimated 8.7 million new cases globally in 2011. Problems related to treatment of M. tuberculosis infection are related to its ability to persist latently in host tissues, getting protection against drug treatment and creating a reservoir of disease. Addictionaly, the emergence of multi, extensively and totally drug-resistant strains, TB-HIV co-infection and the complexity of the treatment currently used, underline the need of new antitubercular drugs, with novel mechanisms of action. The enzyme adenylosuccinate lyase (ASL) is involved in both de novo and salvage pathways of purine biosynthesis. Here we describe M. tuberculosis ASL (MtASL) cloning and expression in Escherichia coli. N-terminal amino acid sequencing and electrospray ionization mass spectrometry analyses confirmed the identity of homogeneous MtASL. Size exclusion chromatography showed that the protein is a homotetramer in solution. Steady-state kinetics revealed that MtASL exhibits hyperbolic kinetics and confirmed that the recombinant enzyme indeed catalyses the cleavage of S-AMP in AMP and fumarate. The pH-rate profile showed that MtASL follows an overall acid-basic mechanism of catalysis and these studies, combined with multiple sequence alignment analysis led us to propose what amino acid residues are involved in the MtASL chemical reaction. In addition, product inhibition studies and isothermal titration calorimetry of binding products allowed us to propose the MtASL kinetic mechanism. The results here reported could lead to the identification of nucleoside analogs that potently inhibit M. tuberculosis viability, with minor damages to the human host. / A tuberculose humana (TB) ? uma doen?a infectocontagiosa provocada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis e permanece sendo um importante problema mundial de sa?de. Estima-se que 8,7 milh?es de novos casos tenham ocorrido em 2011. Problemas relacionados ao tratamento da infec??o ocorrem devido ? sua habilidade de persistir de forma latente no hospedeiro criando um reservat?rio da doen?a. Adicionalmente, a emerg?ncia de cepas multi, extensivamente e totalmente resistentes, a coinfec??o TB-HIV e a complexidade do tratamento utilizado atualmente, alertam para a necessidade de novos medicamentos, que possuam novos mecanismos de a??o. A enzima adenilossuccinato liase (ASL) est? envolvida em ambas as vias de bioss?ntese de purinas. Neste trabalho, n?s descrevemos a amplifica??o, clonagem da ASL de M. tuberculosis (MtASL) e express?o em Escherichia coli. O sequenciamento N-terminal juntamente com an?lises por espectrometria de massas confirmaram a identidade da MtASL homog?nea. Foi demonstrado atrav?s de cromatografia de exclus?o por tamanho que a prote?na ? um homotetr?mero em solu??o. Ensaios de cin?tica no estado estacion?rio revelaram que a MtASL exibe um modelo de cin?tica hiperb?lica e que catalisa a clivagem de S-AMP a AMP e fumarato. Estudos de perfil de pH demonstraram que a MtASL realiza um mecanismo catal?tico ?cido-b?sico e, tais estudos, combinados ao alinhamento m?ltiplo de sequ?ncias, permitiram propor os res?duos de amino?cidos envolvidos na rea??o. Adicionalmente, estudos de inibi??o pelos produtos somados a estudos de calorimetria de titula??o isot?rmica da liga??o dos mesmos, permitiram propor o mecanismo cin?tico da MtASL. Os resultados deste trabalho podem auxiliar na posterior identifica??o de an?logos de nucleot?deos que sejam capazes de inibir a viabilidade do M. tuberculosis, com poucos danos ao hospedeiro humano.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 452946.pdf: 4295769 bytes, checksum: 7a8634a037c064cad84539c03a441c4a (MD5) Previous issue date: 2013-11-26 / Human thymidine phosphorylase (hTP) also known as platelet-derived endothelial cell growth factor (PD-ECGF) or gliostatin, has an important role in nucleotide metabolism. hTP is a molecular target for anticancer drug development since it is overexpressed in certain solid tumours, and its catalityc activity has been shown to be essencial to promote angiogenesis. This work describes amplification, cloning, and recombinant expression in E. coli, purification to homogeinity of both precursor and mature protein hTP. Mass spectrometry analysis confirmed the identity of homogeneous hTP and size exclusion chromatography showed that hTP proteins are a dimer in solution. Kinetic studies allowed the determination of apparent and true kinetic constants for forward reaction, and showed that enzymes displayed substrate inhibition for thymidine. Initial velocity and isothermal titration calorimetry (ITC) studies suggested that hTP catalysis follows a rapid-equilibrium random bi-bi kinetic mechanism. Thermodynamics constants and discrimination profile allowed natural enzyme s substrates/products binding patterns identification. Additionally, these studies showed differences in the kinetic constants and the thermodynamic parameters between the precursor and the mature protein and these differences were revealed by structural analysis using molecular modeling. The pH-rate profiles suggested that maximal enzyme activity was achieved at low pH values, and functional groups with a pK values of 5.1 5.2 and 9.0 9.2 are involved in thymidine binding, and groups with pK value of 6.1 6.2 and 7.8 8.6 are involved in phosphate binding. The enzyme characterization provides additional data that may be useful for the rational design of novel inhibitors hTP. Chemical compounds designed and synthesized as potential inhibitors against hTP activity were active in both forms of the enzyme, whereas the compound 5g showed the best inhibitory potential. The compound 5g was characterized as noncompetitive inhibitor towards hTP substrates thymidine and phosphate. The noncompetitive inhibiton mechanism points to the existence of an allosteric binding site at hTP, different from the substrate binding sites. This allosteric site could be considered an important molecular target for the development of potent and selective hTP inhibitors. / A Timidina fosforilase humana (hTP), tamb?m conhecida como PD-ECGF e gliostatina, ? uma enzima importante no metabolismo de nucleot?deos. A hTP ? um alvo molecular para o desenho de inibidores enzim?ticos com poss?vel uso na terapia do c?ncer, visto que essa enzima encontra-se superexpressa em alguns tipos de tumores s?lidos e sua atividade catal?tica ? essencial para promo??o da angiog?nse. Esta tese descreve a amplifica??o, clonagem, express?o heter?loga em E. coli, purifica??o e caracteriza??o bioqu?mica do precursor e da prote?na madura hTP. An?lises de espectrometria de massa confirmaram a identidade das prote?nas recombinantes e ensaios de cromatografia de exclus?o por tamanho revelaram que ambas as enzimas encontram-se como d?meros em solu??o. Estudos cin?ticos permitiram a determina??o das constantes cin?ticas aparentes e verdadeiras para a rea??o direta e mostraram que as enzimas apresentam inibi??o pelo substrato tidimina. Estudos espectofotom?tricos de velocidade inicial e estudos de liga??o por microcalorimetria de titutala??o isot?rmica (ITC) sugerem que a cat?lise enzim?tica segue um mecanismo cin?tico bi-bi aleat?rio de r?pido equil?brio. As constantes termodin?micas e o perfil de discrimina??o termodin?mica permitiram a identifica??o dos modos de intera??o dos substratos/produtos naturais das enzimas com seus s?tios de liga??o. Al?m disto, esses estudos revelaram diferen?as nas constantes cin?ticas e nos par?metros termodin?micos entre o precursor e a prote?na madura e tais diferen?as foram evidenciadas por meio da an?lise estrutural de ambas as enzimas. O perfil de pH mostrou que a atividade enzim?tica m?xima foi obtida em valores de pH baixos, e que grupamentos funcionais com valores de pK de 5,1 5,2 e 9,0 9,2 est?o envolvidos na liga??o ? timidina e grupamentos com valores de pK de 6,1 6,2 e 7,8 8,6 est?o envolvidos na liga??o ao fosfato. Os resultados da caracteriza??o da enzima fornecem dados adicionais que podem ser ?teis para o desenho racional de novos inibidores da hTP. Os compostos qu?micos planejados e sintetizados como poss?veis inibidores da atividade da hTP foram ativos em ambas as formas da enzima, sendo que o composto 5g apresentou o melhor potencial inibit?rio. O composto 5g foi caracterizado como um inibidor n?o competitivo em rela??o aos substratos naturais timidina e fosfato. O mecanismo de inibi??o n?o competitiva sugere a exist?ncia de um sit?o de liga??o alost?rico na hTP, diferente dos s?tios de liga??o aos substratos, podendo ser considerado um alvo molecular importante para a busca de inibidores potentes e seletivos para hTP.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 455917.pdf: 2015931 bytes, checksum: 9c232dbbf603a1ea4db4fc35a200c003 (MD5) Previous issue date: 2013-12-13 / INTRODUCTION: Studies have shown that LAIV is more effective than TIV for prevention of influenza infection in young children, but the underlying mechanisms associated with protection are still not well defined. OBJECTIVES: To assess differences in cellular immunity and gene expression profiles in children after immunization with LAIV or TIV. METHODS: Peripheral blood of previously healthy children was collected pre and postvaccination and analyzed for B cells measurement and antibodies production. Microarray analyses were applied to assess the gene expression profiles. RESULTS: LAIV vaccinees showed number of na?ve, memory and transitional B cells increased on day 1 compared to baseline (p<0.05). TIV vaccinees showed the number of plasmablasts increased on day 7 post-vaccination (p&#8804;0.01). In addition, the titers for the three strains of the vaccine (H1N1, H3N2 and B) were significantly elevated on the TIV group when compared with the LAIV group. Regarding the transcriptional profiles presented, both vaccines induced interferon signaling, but in different time points, TIV 1 day postvaccination and LAIV 7 days post-vaccination, the last only in children younger than 5 years old. CONCLUSIONS: These results indicate that LAIV and TIV induced different immune responses in peripheral blood of vaccinated children and that both vaccines induce interferon signaling post-vaccination. / INTRODU??O: Estudos t?m demonstrado que a vacina contra os v?rus influenza LAIV ? mais eficiente que a formula??o TIV para a preven??o de infec??o em crian?as, por?m os mecanismos envolvidos ainda n?o est?o bem definidos. OBJETIVOS: Acessar as diferen?as na imunidade celular humoral e de express?o de perfis g?nicos em crian?as imunizadas com LAIV ou TIV. M?TODOS: Sangue perif?rico de crian?as previamente h?gidas foi coletado pr? e p?svacina??o e analisado para mensura??o de c?lulas B e para titula??o de anticorpos. An?lise pela t?cnica de microarranjos foi empregada para avalia??o dos perfis de express?o g?nica. RESULTADOS: Vacina??o com LAIV induziu aumento do n?mero absoluto de c?lulas B na?ve, de mem?ria e transicionais no ap?s 30 dias comparado aos valores medidos antes da vacina??o (p<0.05). Vacina??o com TIV, no entanto, induziu aumento de plasmoblastos no dia 7 p?s-vacina??o (p<0.01). Os t?tulos de anticorpos para os tr?s ant?genos da vacina (H1N1, H3N2 e B) encontraram-se significativamente elevados no grupo vacinado com TIV quando comparado ao grupo que recebeu LAIV. Ambos os grupos vacinados induziram sinaliza??o de genes relacionados ao interferon, por?m em diferentes momentos: TIV induziu-os 1 dia p?s-vacina??o, enquanto LAIV 7 dias p?s-vacina??o, especialmente em crian?as com menos de cinco anos de idade. CONCLUS?ES: Esses resultados sugerem que as vacinas LAIV e TIV induzem resposta celular imune diferente em crian?as e que ambas induzem sinaliza??o de interferon p?s-vacina??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 455940.pdf: 8781649 bytes, checksum: 26c5228694b3da7cdad3b29d9669c17a (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / We investigate whether the extinction of inhibitory avoidance (IA) learning can be subjected to endogenous state-dependence with systemic injections of epinephrine (E), and whether endogenous norepinephrine (NE) and the Nucleus Tractus Solitarius NTS &#8594; Hippocampus/Amygdala (HIPP/BLA) pathway participate in this. Thus, rats trained in Inhibitory Avoidance Learning (IA; 0,5 mA/2s) were submitted to session of extinction 24 h apart: the animals were placed to the same apparatus but without the footshock. 24 h after the extinction session, they were tested for the retention of extinction. Results indicate that post-extinction training E (50 or 100 &#956;g/kg) induced a poor retrieval of extinction in the test session of this task unless an additional E injection (50 &#956;g/kg) was given prior to the extinction test. This suggested state-dependence. Muscimol (0,01 &#956;g/side) microinfused into the NTS prior to the extinction test session blocked E-induced state-dependence. Norepinephrine (NE, 1 &#956;g/side) infused bilaterally into NTS restores the extinction impairment caused by post-extinction training i.p. E. In animals that received post-extinction training injections E and 6 min before the extinction test bilateral NTS blockade induced by muscimol plus NE (1 &#956;g/side) into the CA1 region of the dorsal hippocampus or into the basolateral amygdala restored the normal extinction levels that had been impaired by muscimol. These findings suggest that the state-dependence occurs during the extinction of the fear memory and that are a role for the NTS &#8594; HIPP/BLA pathway in the retrieval of extinction. / O desenvolvimento desta disserta??o teve como objetivo investigar se a depend?ncia de estado end?gena ocorre durante a extin??o de mem?ria aversiva atrav?s de inje??es sist?micas de adrenalina, e, havendo esta constata??o, analisar se a noradrenalina e a via do N?cleo do Trato Solit?rio (NTS) &#8594; Hipocampo/Am?gdala Basolateral (HIP/ABL) participam deste processo. Para responder ?s quest?es levantadas nesta disserta??o, ratos Wistar machos foram treinados na tarefa de esquiva inibit?ria (EI; 0,5 mA/2s). Ap?s 24 h os animais foram expostos ao mesmo aparato, na aus?ncia do est?mulo el?trico (sess?o de extin??o). Para reten??o da mem?ria de extin??o (sess?o de teste) os animais foram novamente expostos ? caixa de EI na aus?ncia de est?mulo el?trico, 24 h ap?s a sess?o de extin??o. Foi observado que os animais que receberam a administra??o intraperitoneal (i.p.) de adrenalina (50 ou 100 &#956;g/Kg) imediatamente ap?s a sess?o de extin??o apresentaram um preju?zo na evoca??o da mem?ria de extin??o e este efeito ? revertido pela administra??o i.p. de adrenalina (50 &#956;g/Kg) 6 min antes da sess?o de teste. Isto sugere depend?ncia de estado. A noradrenalina (1 &#956;g/lado) quando infundida intra-NTS antes da sess?o de teste reverte o preju?zo da evoca??o da mem?ria de extin??o causado pela adrenalina i.p. quando administrada ap?s a sess?o de extin??o. E a infus?o intra-NTS de muscimol (0,01 &#956;g/lado) antes da sess?o de teste impede a depend?ncia de estado induzida pela adrenalina. Al?m disso, os animais que receberam adrenalina i.p. ap?s a sess?o de extin??o e, infus?o intra-NTS de muscimol seguido da administra??o de noradrenalina intra-HIP ou intra-ABL antes da sess?o de teste, restauraram a capacidade de evocar a mem?ria de extin??o que havia sido prejudicada pelo muscimol. Os resultados sugerem que a depend?ncia de estado ocorre durante o processo de extin??o da mem?ria de EI e que a noradrenalina e a via NTS &#8594; HIP/ABL desempenham um papel importante na evoca??o da mem?ria de extin??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 455926.pdf: 1580649 bytes, checksum: 43ccab4db0f539ea4361b47f57d0cedd (MD5) Previous issue date: 2014-01-24 / We assessed the effects of pharmacological spinal inhibition of voltage-gated calcium channels (VGCC) in mouse pruritus. The epidural administration of P/Q-type MVIIC or PhTx3.3, L-type verapamil, T-type NNC 55-0396 or R-type SNX-482 VGCC blockers failed to alter the scratching behavior caused by the PAR-2 activator trypsin, injected into the mouse nape skin. Otherwise, trypsin-elicited pruritus was markedly reduced by the spinal administration of preferential N-type VGCC inhibitors MVIIA and Ph&#945;1&#946;. C. magus-obtained toxin MVIIA displayed significant effects when dosed from 1 to 4 h before trypsin, whereas the effects of P. nigriventer-derived Ph&#945;1&#946; remained for up to 12 h. MVIIA or Ph&#945;1&#946; also prevented the itching elicited by intradermal (i.d.) injection of SLIGRL-NH2, compound 48/80 or chloroquine, although they did not affect H2O2-induced itching. Furthermore, the co-administration of MVIIA or Ph&#945;1&#946; markedly inhibited the pruritus caused by the spinal injection of gastrin-releasing peptide (GRP), but not morphine. Notably, spinal MVIIA or Ph&#945;1&#946; greatly prevented chronic pruritus allied to dry skin. However, either toxin failed to alter the edema formation or neutrophil influx caused by trypsin. In addition, epidural MVIIA or Ph&#945;1&#946; did not modify the expression of GRP receptor (GRP-R) in the spinal cord, whilst they brought c-Fos activation to control levels. Finally, the in vitro incubation of MVIIA or Ph&#945;1&#946; prevented the calcium influx evoked by the synthetic PAR-2 agonist AC264613 in spinal cord synaptosomes. Data brings novel evidence on itching transmission mechanisms, pointing out the therapeutic relevance of N-type VGCC inhibitors to control refractory pruritus. / Foram avaliados os efeitos da inibi??o farmacol?gica dos canais de c?lcio voltagem-dependentes (CCVD) no prurido em camundongos. A administra??o intratecal (i.t.) dos bloqueadores CCVD do subtipo P/Q (MVIIA ou PhTx3.3), subtipo L (verapamil), subtipo T (NNC 55-0396) ou do subtipo R (SNX-482) n?o alterou o comportamento de co?ar induzido pela tripsina (agonista do receptor PAR-2), aplicada na regi?o dorsal do pesco?o de camundongos. Entretanto, o comportamento de co?ar induzido pela tripsina foi significativamente diminu?do pela administra??o i.t. dos bloqueadores de CCVD do subtipo N (MVIIA e Ph&#945;1&#946;). A toxina MVIIA, derivada do C. magus, apresentou efeitos significativos quando administrada entre 1 a 4 horas antes da aplica??o de tripsina. Por outro lado, a toxina Ph&#945;1&#946; derivada do veneno da aranha P. nigriventer demonstrou atividade, quando injetada at? 12 h antes da tripsina. O pr?-tratamento com MVIIA ou Ph&#945;1&#946; foi efetivo em inibir o comportamento de co?ar induzido pela aplica??o intrad?rmica (i.d.) de SLIGRL-NH2, composto 48/80 ou cloroquina; entretanto, as toxinas n?o inibiram o comportamento de co?ar induzido pela inje??o i.d. de H2O2. A co-inje??o de MVIIA ou Ph&#945;1&#946; inibiu o comportamento de co?ar induzido pela aplica??o i.t. do pept?deo liberador de gastrina (GRP), mas n?o inibiu o prurido causado pela morfina. Relevantemente, a administra??o i.t. da toxina MVIIA ou Ph&#945;1&#946; inibiu a coceira cr?nica induzida pelo modelo de pele seca em camundongos. A atividade anti-pruritog?nica de ambas as toxinas n?o parece estar relacionada com a modula??o do processo inflamat?rio na pele, uma vez que as toxinas MVIIA ou Ph&#945;1&#946; n?o foram capazes de inibir o edema e a migra??o de neutr?filos induzidos pela aplica??o i.d. de tripsina. A aplica??o i.t. de MVIIA ou Ph&#945;1&#946; n?o modificou a express?o do receptor para o GRP (GRP-R) na medula espinhal. Por outro lado, as duas reduziram a express?o de c-Fos aos n?veis do grupo controle, de acordo com a avalia??o na medula dos camundongos. Finalmente, a incuba??o de MVIIA ou Ph&#945;1&#946; preveniu o influxo de c?lcio estimulado pelo agonista do receptor PAR-2 AC264613 em sinaptossomas de medula de camundongos. Estes resultados trazem uma nova perspectiva acerca dos mecanismos envolvidos na sinaliza??o da coceira, indicando os inibidores de CCVD do subtipo N como poss?veis estrat?gias para o tratamento do prurido, especialmente nas condi??es onde h? aus?ncia de resposta ? terapia atual.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 455935.pdf: 11635887 bytes, checksum: 0a9f28950e212538501de3a72ecfaa0c (MD5) Previous issue date: 2014-01-02 / Aims: The aim of the present study was to evaluate possible preventative effects of glutamine in an animal model of gut ischemia/reperfusion (I/R). Materials and methods: Twenty male Wistar rats were divided into four experimental groups: (1) control group (Control) rats underwent exploratory laparotomy; (2) control + glutamine group (Control-GLU) rats were subjected to laparotomy and treated intraperitoneally with glutamine 24 and 48 h prior to surgery; (3) ischemia/reperfusion group (I/R) rats were subjected to occlusion of the superior mesenteric artery for 30 min followed by 15 min of reperfusion; and (4) ischemia/reperfusion + glutamine group (G+I/R) rats were treated intraperitoneally with glutamine 24 and 48 h before I/R. Local and systemic injuries were determined by evaluating intestinal and lung segments for oxidative stress using lipid peroxidation and the activity of superoxide dismutase (SOD), interleukin-6 (IL-6) and nuclear factor kappa beta (NF-&#954;B) after mesenteric I/R. Results: The animals from the G+I/R group exhibited reduced levels of lipid peroxidation, IL-6 and NF-KB and increased SOD activity when compared with the group of rats submitted to I/R without GLU. The findings were statistically significant (p < 0.05). Conclusions: These results demonstrate that pretreatment with glutamine prevents mucosal injury and improves gut and lung recovery after I/R injury in rats. / Objetivos: O objetivo principal do presente estudo foi avaliar a a??o antioxidante da glutamina no tecido intestinal e pulmonar de ratos submetidos ? isquemia e reperfus?o (I/R) mesent?rica. Os objetivos secund?rios foram: avaliar o estresse oxidativo e atividade inflamat?ria pela an?lise da lipoperoxida??o; avaliar a atividade de uma enzima antioxidante, a super?xido dismutase (SOD); determinar o papel do Fator de Transcri??o Nuclear Kappa B (NF-KB); e da interleucina 6 (IL-6). Material e M?todos: Ratos machos da ra?a Wistar foram mantidos em caixas pl?sticas, em ciclo de 12 horas claro/escuro, com ?gua e ra??o administradas ad libitum. Foram utilizados Vinte ratos divididos, de forma randomizada, em quatro grupos experimentais: (1) grupo controle (Controle) os ratos foram submetidos ? laparotomia exploradora; (2) grupo controle + glutamina (Controle-GLU) os ratos foram submetidos ? laparotomia e tratados, por via intraperitoneal, com glutamina 24h e 48h antes da cirurgia; (3) grupo isquemia/reperfus?o ( I/R ) os ratos foram submetidos a oclus?o da art?ria mesent?rica superior, durante 30 min seguido por 15 min de reperfus?o; e (4) grupo isquemia/reperfus?o + glutamina (G + I/R) - os ratos foram tratados, por via intraperitoneal, com glutamina 24h e 48h antes da I/R. As les?es locais e sist?micas foram determinadas por meio da avalia??o dos segmentos intestinais e pulmonares para o estresse oxidativo, atrav?s da lipoperoxida??o e da atividade da enzima SOD, a interleucina IL-6 e o NF-KB ap?s a I/R mesent?rica. Resultados: A lipoperoxida??o da membrana foi mais expressiva no grupo de animais submetidos ? I/R (p < 0.05). Entretanto, o grupo que recebeu a glutamina 24h e 48h antes do evento I/R, mostrou n?veis de lipoperoxida??o da membrana, de forma similar aos grupos controles (p < 0.05). A atividade da enzima antioxidante SOD estava diminu?da no intestino dos animais submetidos ? I/R, quando comparada a encontrada nos grupos controles sem a I/R (p < 0.05). Por outro lado, o grupo que recebeu a glutamina 24h e 48h antes da I/R, mostrou a atividade da SOD de forma similar a encontrada nos controles (com e sem a glutamina) (p < 0.05). A m?dia da ?rea, dosada atrav?s do m?todo de imunoistoqu?mica, de express?o do NF-KB para os grupos controles, foi similar. O grupo submetido ? I/R mostrou a maior ?rea de concentra??o do NF-KB. O grupo G + I/R foi o que teve a segunda maior ?rea, por?m com valores menores do que os encontrados no grupo do evento I/R (p < 0.05). Para a IL-6, os grupos controles, com e sem a glutamina, mostraram ?reas similares. O grupo da I/R apresentou a maior ?rea de express?o da IL-6, seguido pelo grupo G + I/R; por?m, esta ?rea foi significativamente menor do que a do grupo submetido ? I/R sem a glutamina (p < 0.05). Conclus?es: Estes resultados demonstram que, o pr?-tratamento com glutamina, previne a les?o da mucosa do intestino e dos pulm?es, ap?s I/R mesent?rica em ratos.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 457566.pdf: 828433 bytes, checksum: dfa634f0f7cbe00efd4bdfccad709ee0 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Introduction: A significant increase in the prevalence of asthma and atopy was observed in epidemiological studies conducted in 1980, 1989 and 1998, with school of Porto Alegre. The continuity of this phenomenon in recent decades needed to be evaluated. Objective: Verify the changes in prevalence of symptoms of active and cumulative asthma and atopy in schoolchildren from a region of Porto Alegre. Methodology: In a cross-sectional study in which schoolchildren from 5th to 8th grade (10-18 years), four schools located in the same geographic area were interviewed. The first questionnaire covered symptoms suggestive of asthma (at some point in life or in the last twelve months) and the second was the ACT (test asthma control). In addition, skin tests were performed in 241 schoolchildren. Results: 964 students were interviewed a total of 1195 registered. The age of participants ranged from 10 to 18 years with a mean of 13.3 years. The cumulative prevalence of asthma symptoms was found to be 41,7%, symptoms of active asthma 19,9% and atopy 52,7%. Compared to previous studies, a stabilization in the cumulative prevalence of asthma and atopy occurred while decreased the prevalence of symptoms of active asthma from 22% to 14.9%. (P <0.001) Conclusions: In the last decade the prevalence of symptoms of asthma and atopy cumulative stabilized, with a reduction in the prevalence of symptoms of active asthma in the last year. This finding may help guide the search for environmental factors that are responsible for the manifestation of asthma in genetically susceptible individuals. / Introdu??o: Um importante aumento na preval?ncia de asma e de atopia foi observado nos estudos epidemiol?gicos realizados em 1980, 1989 e 1998, com escolares de Porto Alegre. A continuidade deste fen?meno nas ?ltimas d?cadas precisava ser avaliada. Objetivo: Verificar as modifica??es na preval?ncia de sintomas de asma ativa e cumulativa e de atopia em escolares de uma regi?o de Porto Alegre. Metodologia: Trata-se de um estudo transversal, em que escolares de 5? a 8? s?ries (10 a 18 anos), de quatro escolas situadas em uma mesma ?rea geogr?fica foram entrevistados. O primeiro question?rio utilizado abrangia sintomas sugestivos de asma (em algum momento da vida ou nos ?ltimos doze meses) e o segundo foi o ACT (teste de controle da asma). Al?m disso, foram realizados testes cut?neos em 241 alunos. Resultados: Foram entrevistados 964 escolares de um total de 1195 matriculados. A faixa et?ria dos participantes variou de 10 ? 18 anos com m?dia de 13,3 anos. A preval?ncia de sintomas de asma cumulativa encontrada foi de 41,7%, de sintomas de asma ativa 14,9% e de atopia 52,7%. Em rela??o aos estudos anteriores, ocorreu uma estabiliza??o na preval?ncia de asma cumulativa e de atopia, enquanto diminuiu a preval?ncia de sintomas de asma ativa de 22% para 14,9%. (P<0,001) Conclus?es: Na ?ltima d?cada a preval?ncia de sintomas de asma cumulativa e de atopia estabilizou, havendo uma redu??o na preval?ncia de sintomas de asma ativa no ?ltimo ano. Essa constata??o pode ajudar a orientar a busca de fatores ambientais que sejam respons?veis pela manifesta??o da asma em indiv?duos geneticamente suscet?veis.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460009.pdf: 1311041 bytes, checksum: 53e860f67bf17abcedf2e3a67ffb67af (MD5) Previous issue date: 2014-06-26 / Introduction: Asthma is a chronic disease with high prevalence worldwide, especially in the last two decades. For an effective self-management of the disease, management of disease should be approached in different ways. Asthma education is one of the outcomes that should be applied to self-management in order to increase adherence to treatment, and thus control the disease. Objective: To identify the major studies on asthma education intervention, describing their results to discuss its importance in the treatment and control of disease, and to validate to Portuguese a questionnaire of knowledge of asthma. Methods: Two articles were written: a systematic review to identify the major studies that have applied measures (objective and/or subjective) pre and post intervention for asthma education; and the translation, and cross-cultural and linguistic validation of a questionnaire on knowledge of asthma (NAKQ) for Portuguese - BR. For this article article, we applied the logic search in PubMed, Lilacs, Scopus, ScienceDirect and Cochrane databases. Articles were included after complete description of the applicability of the measures, their answers and conclusions for the outcome in asthma education programs for children and adolescents. For the original study, 2 translations of NAKQ into Portuguese were performed. These two versions were compared for a first draft version. Then, we proceeded to the application of 17 questionnaires to academics and health professionals, for possible adjustments in language translation. Internal validation, reproducibility and concordance analysis was performed. For that, Alpha Cronbach (&#945;C) coefficient, test and retest, and Kappa (K) analysis was applied. Results: Twelve studies were included in the article review. Different authors have presented different educational interventions on asthma. Four of the interventions found were considered the most advisable for presenting satisfactory results in an enhanced understanding of the various aspects of asthma (symptoms, seizures, medication, etc.). Contributing pair disease control and improved quality of life for patients. For translation and validation of the Newcastle Asthma Knowledge Questionnaire (NAKQ), 2 translations into Portuguese NAKQ were performed. After, both translations were compared to that draft a preliminary version. We then removed the application from 17 questionnaires to academics and health professionals for possible adjustments in language translation. Then, the internal validation of reproducibility and compliance were performed. For this, the coefficient &#945;Cronback(&#945;C), test and re- test, and analysis of Kappa (K) were applied . Results: The linguistic / cultural fit fitness needed only the question number 2 knowledge evaluation of the 78 participants was 21 points. The medical group had an average of 22.94 and other health professionals an average of 19.06 points. Regarding the analysis of internal consistency for the total score, the instrument got value &#945;C equal to 68.8 points. However, for the analysis items in &#945;C values were 64.4 and 70.7 for minimum score. Conclusions: Asthma education is essential both for the access of home care as for effective self-control of the disease. Therefore, it is strongly recommended that in order to achieve the goals of the best possible quality of life and self-control of the disease are achieved, the educational process should be individualized, continuous, progressive, dynamic and sequential. NAKQ questionnaire validated for Portuguese was effective for the highest distinction between people who have knowledge about asthma from those with less knowledge / Introdu??o: a asma ? uma doen?a cr?nica com elevada preval?ncia no mundo todo, principalmente nas ?ltimas duas d?cadas. Para que haja uma autogest?o efetiva da doen?a, o manejo deve ser abordado de v?rias formas. A educa??o em asma ? um dos aspectos que deve ser aplicado na autogest?o, objetivando aumentar a ades?o ao tratamento e controle da doen?a. Objetivos: identificar os principais estudos sobre interven??o de educa??o em asma, descrevendo seus resultados para discutir sua import?ncia no tratamento e controle da doen?a, e validar para a l?ngua Portuguesa um question?rio sobre conhecimento de asma. M?todos: foram realizados dois artigos nesta disserta??o: uma revis?o sistem?tica para identificar os principais estudos que aplicaram medidas (objetivas e/ou subjetivas) pr? e p?s-interven??o de educa??o em asma, e a tradu??o e valida??o lingu?stica e transcultural do question?rio sobre conhecimento de asma (NAKQ) para a l?ngua portuguesa-BR. Para o artigo de revis?o, aplicou-se a l?gica de pesquisa nas bases de dados PubMed, Lilacs, Scopus, ScienceDirect e Cochrane. Os artigos foram inclu?dos mediante descri??o completa da aplicabilidade das medidas, suas respostas e conclus?es para o desfecho em programas de educa??o em asma para crian?as e adolescentes. Para a tradu??o e valida??o do question?rio Newcastle Asthma Knowledge Questionnaire (NAKQ), foram realizadas 2 tradu??es do NAKQ para a l?ngua portuguesa. Ap?s, foram comparadas ambas as tradu??es a fim de que se elaborasse uma vers?o preliminar. Procedeu-se ent?o a aplica??o de 17 question?rios a acad?micos e profissionais em sa?de para poss?veis ajustes na tradu??o lingu?stica. Em seguida, foram realizadas as valida??es interna, de reprodutividade e de concord?ncia. Para isto, foram aplicados o coeficiente de Alfa de Cronbach (&#945;C), teste e re-teste, e an?lise de Kappa (K). Resultados: doze pesquisas foram inclu?das nesta revis?o. Os diferentes autores apresentaram diferentes interven??es educativas em asma. Das interven??es encontradas, quatro foram consideradas as mais aconselh?veis por apresentarem resultados satisfat?rios em rela??o ? melhor compreens?o dos diversos aspectos da asma (sintomas, crises, medica??o, etc.) o que contribuiu para o controle da doen?a e a melhora na qualidade de vida dos pacientes. No artigo original, a adequa??o lingu?stica/cultural do NAKQ necessitou adequa??o somente da quest?o n?mero 2. A avalia??o do conhecimento dos 78 participantes foi de 21 pontos. O grupo de m?dicos obteve m?dia de 22,94 e o de outros profissionais da sa?de uma m?dia de 19,06 pontos. Em rela??o ? an?lise de consist?ncia interna para o escore total, o instrumento obteve valor de &#945;C igual a 68,8 pontos. J? para a an?lise por itens, os valores de &#945;C foram de 64,4 para pontua??o m?nima, e 70,7. Conclus?es: a educa??o em asma ? fundamental tanto para a ades?o do cuidado domiciliar quanto para o autocontrole eficaz da doen?a, por essa raz?o recomenda-se fortemente que, a fim de sejam alcan?ados os objetivos de atingir a melhor qualidade poss?vel de vida e o autocontrole da doen?a, o processo educativo que deve ser individualizado, cont?nuo, progressivo, din?mico e sequencial. O question?rio NAKQ, validado em l?ngua Portuguesa, mostrou-se eficaz para a distin??o entre as pessoas que t?m conhecimento mais elevado sobre asma daquelas com conhecimento menos elevado

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:36:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 461548.pdf: 554767 bytes, checksum: a8061ad380e2b55b475c03df57b4c518 (MD5) Previous issue date: 2011-04-14 / Introduction : Obesity is a pandemic disease. Obesity grade II and III often needs invasive treatment such as bariatric surgery. In these patients, comorbidities are frequent, including the nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD), characterized by fatty infiltration of the liver of nonalcoholic etiology in individuals without other chronic liver diseases. Objectives : This study aimed to evaluate the properties of a group of anthropometric and laboratory tests according to the diagnosis of severe liver damage. Patients and Methods : We studied 845 patients with body mass index of 35 or more, with data from liver biopsy. We evaluated the properties (sensitivity, specificity, PPV, NPV, LR + and LR-) of anthropometric and laboratory, compared to the biopsy, for diagnosis of severe liver damage. The variable was dichotomized NAFLD in severe liver damage or not. Results : The prevalence of severe liver damage was 38.1% (95% CI 34.8 to 41.4). The average age of the individuals was 37.2 years and mean weight was 131.0 kg and prevalence of NAFLD was 53.3% higher in men (95% CI 47.0 to 59.7) than in women 32.1% (95% CI 28.3 to 36.9). Conclusions : Among the anthropometric variables studied, the waist / hip ratio (WHR) was the best variable to classify patients with and without severe liver damage, followed by the waist. Transaminases showed better performance than the anthropometric variables, TGP being the best, followed in order by AST and GGT. / Introdu??o : A obesidade ? hoje uma pandemia. A obesidade grau II e III, s?o graus avan?ados de obesidade, que necessitam muitas vezes de tratamento invasivo como a cirurgia bari?trica. Nestes pacientes, ? freq?ente a presen?a de comorbidades, entre elas a Doen?a Hep?tica Gordurosa N?o Alco?lica (DHGNA), caracterizada por infiltra??o gordurosa do f?gado de etiologia n?o alco?lica em indiv?duos sem outras hepatopatias cr?nicas. Objetivos : Este estudo teve como objetivo avaliar as propriedades de um grupo de testes antropom?tricos e laboratoriais em fun??o do diagnostico de dano hep?tico grave. Pacientes e M?todos : Foram estudados 845 pacientes com ?ndice de massa corporal de 35 ou mais, com dados de bi?psia hep?tica. Foram avaliadas as propriedades (sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo, likelihood ratio positivo e likelihood ratio negativo) de vari?veis antropom?tricas e laboratoriais comparadas com a bi?psia, para diagn?stico de dano hep?tico grave. A vari?vel DHGNA foi dicotomizada em dano hep?tico grave ou n?o. Resultados : A preval?ncia de dano hep?tico grave foi de 38,1% (IC95% 34,8 41,4). A m?dia de idade dos indiv?duos avaliados foi de 37,2 anos e a m?dia de peso foi de 131,0 Kg. A preval?ncia de DHGNA foi maior nos homens 53,3% (IC95% 47,0 59,7) do que nas mulheres 32,1% (IC95% 28,3 36,9) Conclus?es : Dentre as vari?veis antropom?tricas estudadas a raz?o cintura quadril (RCQ) foi a melhor vari?vel para classificar os pacientes com e sem dano hep?tico grave, seguida da cintura. As aminotransferase apresentaram melhor desempenho do que as antropom?tricas sendo a melhor a ALT seguida em ordem pela AST e a GGT.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:36:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462236.pdf: 3208111 bytes, checksum: 69484472f85900f66d1630b3139c530d (MD5) Previous issue date: 2014-08-25 / Prostate cancer is the most important urological tumor and the second most common in men. The incidence and mortality of this multifactorial disease are varied and take into account behavioral factors and genetic predisposition. The main predisposing factors are age, race and family history. Among the various histological subtypes, the acinar adenocarcinoma is the most common. The classification of this tumor, from transrectal ultrasonography and biopsy needle, is made for degrees of Gleason score and TNM classification that provides for tumor staging. The prostatic carcinoma has a propensity to metastasize and is regulated by various molecular signaling pathways through genes, proteins, enzymes, receptors and transcription factors. The RCC is the third most common urological tumor. The wide variation in incidence correlates with the geographical area. Risk factors can be various as smoking, genetic diseases and genetic alterations. The vast majority of cases occur in adults and in the renal parenchyma, and comprise five histological subtypes, the clear and sporadic cells being the most common. The histological differentiation is made by Fuhrman grade and staging by TNM classification. As the clinical manifestations are varied, most patients are diagnosed incidentally and by ultrasonography. The enzymes thymidine phosphorylase and uridine phosphorylase 1 and 2 as well as the transcription factors PDEF and ETV4 are reported as components of pathways leading to tumorigenesis and / or metastasis. The objective of this work is to analyze these enzymes and transcription factors and their correlation with clinical and pathological variables in prostate and kidney cancers as well as in bening tissue, by RT-PCR in real time. In prostate cancer, the geometric mean of the relative expression of transcription factors PDEF and ETV were greater in the tumor than in the benign tissues These factors also had a significant correlation between them in tumor tissue and benign tissue. The geometric mean of relative expression of the enzyme thymidine phosphorylase and uridine phosphorylase 1 strongly and significantly correlated between them in benign and in malignant prostate samples. The geometric mean of relative expression of thymidine phosphorylase also correlated moderately and significantly with the ETV4 in benign tissues. The geometric mean of relative expression of uridine phosphorylase in tumor T3 was significantly lower than in T1 and T2 prostate tumors. Kidney carcinoma TNM Classification strongly and significantly correlated with the relative expression of the enzyme thymidine phosphorylase and negatively correlated very strong and significantly with the enzyme uridine phosphorylase. The relative expression of the transcription factor ETV4 correlated negatively and significantly stronger with the TNM classification, and correlated with strength and significance with the relative expression of uridine phosphorylase in tumor tissues of the kidney. / O c?ncer de pr?stata ? o mais importante tumor urol?gico e o segundo mais frequente no homem. As taxas de incid?ncia e de mortalidade desta doen?a multifatorial s?o muito variadas e leva em conta fatores comportamentais e pr?-disposi??o gen?tica. Os principais fatores predisponentes s?o idade avan?ada, ra?a e hist?ria familiar. Dentre os v?rios subtipos histol?gicos, o adenocarcinoma acinar ? o mais frequente. A classifica??o deste tumor, a partir da ultra-sonografia transretal com bi?psia por agulha, ? feita pelos graus de escore de Gleason e pela Classifica??o TNM que fornece o estadiamento do tumor. O carcinoma de pr?stata, al?m de ter grande propens?o em formar met?stases, ? regulado por v?rias vias moleculares de sinaliza??o por meio de genes, prote?nas, enzimas, receptores e fatores de transcri??o. O carcinoma de c?lulas renais ? o terceiro mais comum tumor urol?gico. A grande varia??o na taxa de incid?ncia se correlaciona com a ?rea geogr?fica. Os fatores de risco podem ser v?rios como tabagismo, doen?as gen?ticas e altera??es g?nicas. A grande maioria dos casos ocorre em adultos no par?nquima renal e, al?m de compreender cinco subtipos histol?gicos, o de c?lulas claras e espor?dico ? o mais frequente. A diferencia??o histol?gica ? feita pelo grau de Fuhrman e o estadiamento pela Classifica??o TNM. Como as manifesta??es cl?nicas s?o variadas, a maioria dos pacientes s?o diagnosticados incidentalmente e por ultra-sonografia. As enzimas timidina fosforilase e uridina fosforilase 1 e 2, bem como os fatores de transcri??o PDEF e ETV4, s?o relatados como componentes das vias que levam ? tumorig?nese e/ou a metastiza??o. O objetivo deste trabalho ? analizar estas enzimas e fatores de transcri??o, correlacionando-as com vari?veis cl?nicas e patol?gicas nos tumores de pr?stata e de rim, bem como nos tecidos adjacentes a estes tumores, pela t?cnica de RT-PCR em tempo real. No c?ncer de pr?stata, a m?dia geom?trica da express?o relativa dos fatores de transcri??o PDEF e ETV4 entre os tecidos benignos e tumorais, apresentaram correla??o significativa com uma maior express?o relativa no tumor quando comparado ao seu benigno. Estes fatores tamb?m apresentaram uma correla??o significativa entre eles no tecido tumoral e no tecido benigno. As m?dias geom?tricas da express?o relativa das enzimas timidina fosforilase e uridina fosforilase 1 se correlacionaram fortemente e significativamente entre os tecidos benignos e tumorais da pr?stata. A m?dia geom?trica da express?o relativa da timidina fosforilase tamb?m se correlacionou de forma moderada e significativa com a do ETV4, entre os tecidos benignos. A m?dia geom?trica da express?o relativa da uridina fosforilase nos tumores T3 foi significativamente menor do que nos tumores T1 e T2 da pr?stata. No carcinoma de rim a Classifica??o TNM se correlacionou fortemente e significativamente com a express?o relativa da enzima timidina fosforilase, e se correlacionou de forma negativa, muito forte e significativamente com a enzima uridina fosforilase. A express?o relativa do fator de transcri??o ETV4 se correlacionou de forma negativa, forte e significativamente com a Classifica??o TNM, e se correlacionou de forma forte e significativamente com a express?o relativa de uridina fosforilase nos tecidos tumorais de rim.