The covid-19 pandemic has hit every part of life hard. From visiting the supermarket to halting world trade. One of the most obvious effects of the pandemic has been the political one. All across the world political parties have been competing for power during these unusual times.  This paper will analyze whether populistic parties around Europe have changed their views on the covid-19 pandemic restrictions. In order to analyze this a comparative idea analysis will be used in order to compare and analyze political parties views on this subject. In order to conduct this analysis the studie compare four different populistic parties around europé. These parties are as followed, AFD and Die Linke in germany, PVV in the Netherlands followed by Syriza in Greece. The study will be using material from the four different parties to conduct the analysis and compare the material. The analysis shows that only one out of four parties has had a change in their views on the pandemic restrictions. This study is an important contribution the field of populism. It will grant a unique opportunity to study such a unique time of our the world that the covid-19 pandemis really is.

The discovery and development of clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins (CRISPR-Cas) systems have revolutionized targeted genomic medicine. In my thesis, we discuss our efforts to improve and optimize various CRISPR-Cas systems for therapeutic genome editing applications. In part one, we propose that aberrant splice site disruption could be a simple and efficient strategy for treating some mutations associated with β-thalassemia. Specifically, we show that disruption of common mutant alleles in the HBB gene by Cas9 and Cas12a results in restoration of normal β-globin splicing, functional expression of HBB, and improved quality of erythroid maturation in edited β-thalassemia patient CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells. In part two, we demonstrate that optimization of the nuclear localization signal (NLS) sequence framework is an effective method to improve the mutagenesis frequencies of Cas12a nuclease. In particular, the 3xNLS-NLP-cMyc-cMyc framework improves genome editing in mammalian and primary cells, relative to previous Cas12a NLS frameworks. We show that our NLS optimization approach can be applied to various Cas12a orthologs resulting in high editing activity without sacrificing the high intrinsic specificity of Cas12a nucleases. Furthermore, we demonstrate that NLS-optimized enAspCas12a can efficiently disrupt the ATF4-binding motif at the +55 enhancer of BCL11A, which may serve as an alternative therapeutic strategy for β-hemoglobinopathies. In part three, we develop and characterize fusion enhanced base editor (feBE) systems, which are fusions of base editors to our Cas9-programmable DNA binding domain (pDBD) and Cas9-Cas9 platforms. We report that our feBEs are more active than previously described base editor platforms at canonical and noncanonical PAMs. Furthermore, we show that feBEs can selectively edit a therapeutically relevant target site, CCR5, with minimal editing at a highly homologous off-target site. Taken together, my thesis research aimed to engineer CRISPR-Cas tools to improve their efficiency and specificity for therapeutic genome editing applications.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第21687号 / 医博第4493号 / 新制||医||1036(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 竹内 理, 教授 清水 章, 教授 遊佐 宏介 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

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Purpose: This study primarily investigates the effects and influence of frustration in children with childhood apraxia of speech (CAS) in the setting of intensive treatment. Additionally, the study examines the interrater reliability of the frustration rating scale used in an intensive CAS treatment study. Methods: Frustration and treatment data obtained from 17 participants (between 4;0-9;11 years) with CAS in an intensive treatment research study were retrospectively used to determine potential relationships related to frustration in treatment (target complexity, temporal conditions, session number, CAS severity). Interrater reliability of the frustration rating scale was assessed with 34 randomly selected treatment session videos scored by a blinded second rater and compared to original scores. Results: Interrater reliability of the scale was poor to fair but had relatively close agreement within one scale point. Frustration levels were observed to decrease over the course of the treatment period but were typically greater in the afternoon sessions compared to morning. Participants in the complex target treatment condition with lower frustration also exhibited better outcomes than those with greater frustration. No other relationships were observed. Conclusions: Due to relatively poor interrater reliability of frustration scoring system used to obtain data used in the current study, results of the study should be interpreted cautiously. There may be a relationship between frustration levels in children with CAS and treatment conditions and outcomes, but other factors may influence both variables and further investigation into frustration is necessary to draw stronger conclusions. / Public Health

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

La dystrophie musculaire de Duchenne est une maladie génétique qui résulte de diverses mutations dans le gène DMD, codant pour la protéine dystrophine. 70% des patients ont une délétion d'exons ou de parties d'exons provoquant un changement dans le cadre de lecture, résultant en l'apparition d'un codon stop et en l'absence de la protéine dystrophine. Plusieurs traitements potentiels ont été explorés dans les dernières années pour cette maladie, dont le système CRISPR-Cas9, un outil génétique permettant d'éliminer un segment d'ADN à l'aide de la protéine nucléase Cas9 et de deux guides d'ARN ciblant des séquences précises d'ADN. Le plus grand défi avec l'utilisation de cette technologie est sa livraison in vivo. Les vésicules extracellulaires sont des particules membranaires lipidiques qui jouent un rôle dans la communication intercellulaire et sont retrouvées dans tous les biofluides chez les mammifères. Elles pourraient donc être une alternative intéressante pour la livraison du système CRISPR-Cas9. J'ai participé à des travaux de purification de vésicules extracellulaires de sérum par chromatographie par exclusion de taille. Ces vésicules extracellulaires ont été chargées avec la protéine Cas9 et des guides ARN, puis, des injections intramusculaires ont été effectuées dans le Tibialis anterior de trois lignées de souris (Ai9, RAG-mdx et mdx/hDMD) pour établir l'efficacité du traitement. Les résultats ont montré que les vésicules extracellulaires chargées avec la Cas9 et des guides d'ARN provoquent une édition de l'ADN efficace dans le Tibialis anterior des trois lignées de souris utilisées et la restauration de l'expression de la protéine dystrophine dans les fibres musculaires du Tibialis anterior des souris RAG-mdx, modèle pour la dystrophie musculaire de Duchenne. Le traitement a ensuite été modifié pour permettre le ciblage des vésicules extracellulaires aux organes affectés par la dystrophie musculaire de Duchenne, soit le cœur et les muscles squelettiques. Des peptides de ciblage ont été sélectionnés dans la littérature et insérés dans la membrane des vésicules extracellulaires marquées de façon fluorescente à l'aide d'un segment lipidique stéaryl. Les résultats de l'expérience effectuée avec les vésicules extracellulaires ciblées n'ont pas été concluants en raison d'un marquage mal adapté des vésicules injectées, mais de futures expériences permettront d'élucider leur efficacité. L'ajustement du traitement pour permettre une injection systémique rejoignant le cœur et les muscles squelettiques est indispensable à l'application de celui-ci à la clinique. / Duchenne muscular dystrophy is a genetic disease that affects one in 3500 boys and results from mutations in the DMD gene, which codes for dystrophin protein. 70% of patients have an exon deletion, which results in a shift in the reading frame, the apparition of a stop codon, and the absence of the dystrophin protein. Many different potential treatments have been explored for Duchenne muscular dystrophy, including the CRISPRCas9 system. This technology allows for the modification of genomic DNA through a Cas9 nuclease and two guide RNAs designed to target a specific DNA sequence. The biggest challenge with using the CRISPR system is delivery. The classic vectors for CRISPR, such as AAV, can cause many adverse effects like immunological responses. Extracellular vesicles are membranous particles that play a role in intercellular communication and are found in all mammalian biofluids. They are thus an interesting alternative for the delivery of the Cas9 protein and its guide RNAs. I have participated in a research project aiming to purify serum extracellular vesicles by size-exclusion chromatography and to load them with Cas9 and two guide RNAs. These extracellular vesicles were then injected intramuscularly into the Tibialis anterior muscles of three mouse strains (Ai9, RAG-mdx and mdx/hDMD) to assess treatment efficiency. The injection of Cas9 and guide RNA-loaded extracellular vesicles produced efficient gene editing as well as dystrophin expression restauration. To modify the treatment for systemic injection, targeting peptides were added to EV membrane through a lipid stearyl segment. This was done to target the extracellular vesicles to Duchenne muscular dystrophy-affected organs: heart and skeletal muscles. Results of the targeted-extracellular vesicle experiment were inconclusive, however, with more experiments, the efficacy of the targeting peptides should be determinable. It is essential to adjust this treatment to allow for targeted systemic delivery for it to be applicable to the clinic.

L'objectif de la présente étude est d'explorer les facteurs reliés à l'utilisation des benzodiazépines dans le traitement de l’insomnie. À partir d’une banque de données recueillies auprès de 345 personnes consultant pour de l’insomnie, trois groupes sont formés: (a) les utilisateurs occasionnels de benzodiazépines (n = 30), (b) les utilisateurs chroniques (n = 31) et(c) les non utilisateurs (n = 40). Ces trois groupes sont comparés sur des variables démographiques, psychologiques, médicales et reliées au sommeil. Les résultats démontrent que les utilisateurs occasionnels et chroniques, comparativement aux non utilisateurs, sont plus âgés, ont une insomnie plus tardive et présentent plus de symptômes de trait d'anxiété. De plus, ces utilisateurs sont principalement des gens mariés. Les utilisateurs chroniques se distinguent des non utilisateurs par la présence de symptômes de dépression et d’anxiété situationnelle plus élevés et par un plus grand nombre de maladies physiques. Aucune différence significative n’est observée entre les utilisateurs occasionnels et chroniques. Enfin, les divers paramètres du sommeil/éveil ne différent pas entre les trois groupes. Ces résultats permettent de conclure que certains facteurs démographiques, psychosociaux et médicaux sont reliés à l'utilisation des benzodiazépines comme hypnotiques chez des personnes consultant pour un problème d’insomnie.

Si les travaux scientifiques consacrés au terrorisme infraétatique se sont multipliés au cours de la dernière décennie dans le sillon des attentats du 11 septembre 2001, il n’en va pas de même en ce qui concerne l’étude du terrorisme d’État, qui reste marginale. Ce mémoire propose une conceptualisation de la violence physique déployée par un État contre des objets tangibles dans les espaces de vie de populations civiles, nommée « violence territoriale matérielle », et son intégration à la théorisation du terrorisme des Critical Terrorism Studies. Appliquant la conceptualisation à l’examen du cas israélo-palestinien, l’analyse empirique se concentre sur les démolitions administratives d’habitations perpétrées par Israël en Cisjordanie et vise à établir si elles sont constitutives d’une forme de terrorisme d’État.