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Análise estereológica do córtex cerebral e do hipocampo de camundongos sob o uso de esteroides anabalizantesSILVA, Dauanda Kécia 07 November 2014 (has links)
Os esteroides anabólicos androgênicos (EAA) são derivados sintéticos da testosterona. Nas últimas décadas, a importância dada à aparência corporal cresceu drasticamente, assim como o consumo das chamadas "drogas da imagem corporal", onde se incluem os EAA. O objetivo deste estudo foi analisar os efeitos do uso crônico dos EAA, observando sua influência na quantidade de células nervosas, nas áreas límbica, motora e sensitiva do córtex cerebral e nas áreas Ca1, Ca2 e Ca3 do hipocampo de camundongos. Foram utilizados, 32 camundongos machos da linhagem Swiss, divididos em 4 grupos (n=8): G1: Controle, G2: tratado com o anabolizante Durateston® (propionato de testosterona, fempropionato de testosterona, isocaproato de testosterona, decanoato de testosterona), G3: tratado com o anabolizante Deca Durabolin® (decanoato de nandrolona) e G4: tratado com os dois anabolizantes, concomitantemente. Os camundongos foram tratados durante dois (2) meses, com 83,3 mg/Kg/semana de Durateston® e 16,6 mg/Kg/semana de Deca Durabolin® e praticando natação três vezes por semana. Após a eutanásia, os encéfalos foram retirados, lavados e armazenados em formaldeído a 4%. Os fragmentos foram processados seguindo-se a sequência padronizada nos procedimentos histológicos convencionais, coloração pelo violeta cresil e posterior análise das lâminas utilizando a metodologia de contagem aleatória simples. Os resultados mostram uma redução significativa no número de corpos de neurônios nas áreas límbica, sensitiva e motora do córtex cerebral e nas regiões Ca1 e Ca2 do hipocampo. Os resultados sugerem que o uso crônico de EAA pode ser prejudicial ao sistema nervoso, visto que a redução de corpos de neurônios pode trazer prejuízos estruturais e funcionais para o cérebro. / Anabolic androgenic steroids (AAS) are testosterone synthetic derivatives. In recent decades, the importance given to body image has grown dramatically, as well as the consumption of so-called "body image drugs", which include ASS. The aim of this study was to analyze the effects of AAS chronic use in the amount of limbic, motor, sensory and Ca1, Ca2, Ca3 hippocampal areas nerve cells of mice. Were used, 32 male mice divided into 4 groups (n=8): G1: control, G2: treated with anabolic steroid Durateston® (testosterone propionate, testosterone fempropionate, testosterone isocaprionate, testosterone decanoate), G3: treated with steroid anabolic Deca Durabolin® (nandrolone decanoate) and G4: treated with both steroids concomitantly. The mice were treated for two (2) months, receiving 83.3 mg / kg / week of Durateston® and 16.6 mg / kg / week of Deca Durabolin and swimming three times a week. After euthanasia their brains were removed, washed and stored in 4% formaldehyde. The fragments were processed according to standard histological procedures in conventional sequence; cresyl violet staining and subsequent analysis using to simple random count methodology. The results show a significant reduction in number of neuron bodies in limbic, motor and sensory areas of cerebral cortex and the hippocampus Ca1 and Ca2 areas. The results suggest that chronic use of AAS can be harmful to nervous system, since the reduction of neuron bodies can bring structural and functional damage to the brain. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG
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Estabelecimento e desenvolvimento do Lagochilascaris major (LEIPER, 1910) em camundongos e felinos infectados experimentalmente / Establishment and development of Lagochilascaris major (LEIPER, 1910) in experimental infected mice and catsRocha, Arnaldo 08 April 2002 (has links)
Estudou-se a infecção experimental, com L. major, em camundongos e felinos domésticos e a ocorrência desses parasitos em felinos selvagens, mantidos em cativeiro, em Parques e/ou Zoológicos de algumas cidades do Estado de São Paulo. Durante o estudo do desenvolvimento embrionário de L. major foram observadas duas mudas dentro do ovo, sendo a primeira em torno do dia 15º de incubação e a 2a aos 20 dias de incubação. Ovos larvados, com larvas de 3º estagio inicial foram utilizados para a infecção em camundongos. Observou-se a migração, estabelecimento e desenvolvimento das larvas até a formação de cistos parasitários com larva de terceiro estágio final, aos 30 dias e 6 meses de infecção. A infecção dos felinos com cistos parasitários, obtidos de camundongos, permitiu a maturação e reprodução dos nematóides adultos nas fossas das tonsilas palatinas, assim como a determinação do período prépatente da infecção de cerca de 15 dias. Alterações hematológicas, histopatológicas, dosagens de proteínas plasmáticas foram acompanhadas durante as infecções experimentais dos camundongos e felinos. A pesquisa da infecção em felinos selvagens mantidos em Parques e/ou Zoológicos de algumas cidades do Estado de São Paulo, verificada através de exames parasitológicos de fezes e de aplicação de questionário , não detectou a lagochilascaríase. / We studeid the experimental infection, with L. major, in mice and domestic felines, and those parasites's presence in savage felines kept in captivity within Parks or Zoos from some towns and cities of São Paulo. Through the study of L. major's embryonic development, we noticed two ecdyses inside the egg, the first one around the fifteenth day of incubation, and the second one at the twentieth day of incubation. We employed larval eggs, with larvae at the third initial stage, to cause the infection in mice. We observed the larvae's migration, establishment and development till the formation of parasitic cysts with larvae at the third final stage, within thirty days and six months of infection. The infection of felines with parasitic cysts obtained from mice, allowed the maintenance and reproduction of adult nematodes in the dimples of the palatal tonsils, as well as the determination of the fifteen day pre-patent period of the infection. We followed the hematologic and histologic alterations and the plasmatic protein dosage during the experimental infections of mice and felines. The experimental infections of mice and felines the research of the infection in savage felines kept in Parks and/or Zoos from some towns and cities of São Paulo, carried out through parasitic faeces tests and the application of a questionnaire, didn't detect the lagochilascariasis.
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Estudo da atividade anti-inflamatória da antitrombina nativa da serpente Bothrops jararaca. Clonagem da antitrombina. / Study of anti-inflammatory activity of Bothrops jararaca native antithrombin. Antithrombin cloning.Zani, Karen de Morais 17 May 2013 (has links)
A antitrombina de B. jararaca foi isolada por meio de cromatografia de afinidade em coluna HiTrap Heparin HP (GE Healthcare). A análise da interação da antitrombina humana ou de B. jararaca com a heparina em sistema BIAcoreT200 demonstrou que a antitrombina de B. jararaca apresenta maior afinidade pela heparina que a antitrombina humana. Com relação à sua atividade anti-inflamatória, os resultados obtidos evidenciaram o efeito anti-inflamatório do pré e do pós-tratamento com a antitrombina de B. jararaca na resposta inflamatória aguda. A análise proteômica do exsudato inflamatório de camundongos identificou algumas proteínas possivelmente relacionadas ao mecanismo de inibição da antitrombina, como a enzima C3 do sistema complemento, a sorotransferrina, a a1-antitripsina, a apolipoproteína AI, o fibrinogênio, o cininogênio e a albumina. O processo de clonagem permitiu a obtenção da sequência completa da antitrombina de B. jararaca e apesar da longa distância evolutiva entre serpentes e humanos, diversas características da antitrombina encontram-se conservadas. / B. jararaca antithrombin was isolated by affinity chromatography using HiTrap Heparin HP column (GE Healthcare). The interaction analysis of human or B. jararaca antithrombin with heparin using a BIAcoreT200 system (GE Healthcare) demonstrated that the affinity of B. jararaca antithrombin for heparin is higher than human antithrombin. Regarding the anti-inflammatory activity of B. jararaca antithrombin, the results showed the anti-inflammatory effect of pre- and post-treatment with this molecule in acute inflammation. The proteomic analysis of inflammatory exudate of mice identified some proteins possibly related to the mechanism of inhibition of antithrombin, such as C3 complement, serum transferrin, a1-antitrypsin, apolipoprotein AI, fibrinogen, albumin and kininogen. The molecular cloning process allowed the determination of the complete sequence of B. jararaca antithrombin and despite the evolutionary distance between snakes and human, a number of characteristics are preserved in antithrombin molecule.
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Potencial da migalina (Acilpoliamina) como agente imunomodulador das funções de macrófagos murinos. / The potential of Mygalin (Acylpolyamine) as an immunomodulator agent of murine macrophage functions.Nassar, Rafael Salim 01 August 2013 (has links)
As poliaminas são essenciais para o controle dos mecanismos celulares nos seres vivos. A Migalina é uma acilpoliamina isolada de A. gomesiana com atividade microbicida contra E. coli, contudo, seu efeito imunomodulador é desconhecido. Sabendo que os mediadores imunes produzidos por macrófagos são críticos para a regulação da resposta imune, investigamos o efeito in vitro da Migalina sobre estas células. Demonstramos que a Migalina não induziu citotoxicidade, mas ativou iNOS, potencializando a síntese de nitrito. Aumentou a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">a, mas não de IL-12p40. IL-1<font face=\"Symbol\">b não foi detectada. Além disto, Inibiu a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">a e IL-12p40 induzida por LPS e quando associada à Polimixina B não alterou a síntese de TNF-<font face=\"Symbol\">a. Macrófagos deficientes de MyD88 não produziram TNF-<font face=\"Symbol\">a em resposta a Migalina, sugerindo que a sinalização mediada por TLR via MyD88 é requerida para a produção desta citocina. Comprovamos que a Migalina modula a atividade de macrófagos através de mediadores da resposta imune inata e pode ser explorada como estratégia no controle de infecções. / Polyamines are present in most living organisms. Mygalin is an acylpolyamine isolated from A. gomesiana that showed microbicide activity against E. coli, however, its immunomodulator effect has not been explored. Immune mediators produced by macrophages are essential for the regulation of immune responses. Our results showed that murine macrophages stimulated in vitro with Mygalin didnt induce cytotoxicity, but activated iNOS, inducing nitrite synthesis. The production of TNF-<font face=\"Symbol\">a was enhanced, but IL-12p40 was not. The presence of IL-1<font face=\"Symbol\">b was not detected. In higher concentrations, Mygalin inhibited significantly the production of IL-12p40 and TNF-<font face=\"Symbol\">a induced by LPS, and its association with Polymixine B did not altered the production profile of TNF-<font face=\"Symbol\">a. Macrophages deficient in MyD88 molecule activated with Mygalin did not induce the synthesis of TNF-<font face=\"Symbol\">a. Our results showed that Mygalin is capable of modulating the macrophage activity by inducing mediators of innate immune response and can be explored as a strategy in the studies to control pathogen infections.
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Relação entre o tratamento crônico com lítio e papel do sistema colinérgico na neuroinflamação. / Relationship between the chronic treatment with lithium and the role of cholinergic system in neuroinflammation.Schöwe, Natália Mendes 05 November 2013 (has links)
É conhecido que o sistema colinérgico, via receptor nicotínico a7, atua como atenuador do processo inflamatório. O lítio é utilizado no tratamento do transtorno afetivo bipolar e, em microdoses, foi benéfico para o tratamento da doença de Alzheimer. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos do tratamento crônico com microdoses de lítio para a formação de mediadores inflamatórios em cérebros de camundongos jovens, após injeção intraperitoneal de LPS, e se os receptores a7 estavam envolvidos nesse processo. Após sete meses de tratamento, foi observado que o grupo lítio-LPS apresentou formação da memória espacial, diferentemente do grupo água-LPS. Oito dias após a injeção de LPS, os níveis de IL-6, TNF-a, IL-10 e pGSK-3b/GSK-3b estavam iguais em todos os grupos, evidenciando que o processo inflamatório já estava terminado. Além disso, não houve diferença com relação à densidade de CAT e a7. Não foi possível comprovar ou excluir o efeito anti-inflamatório das microdoses de lítio. Portanto, o desenho experimental deverá ser ajustado. / It is known that the cholinergic system, via a7 nicotinic receptors, acts as attenuator of the inflammatory process. Lithium is used in the treatment of bipolar disorder and microdosing was beneficial for the treatment of Alzheimer\'s disease. The aim of this study was to evaluate the effects of chronic treatment with lithium microdoses for the formation of inflammatory mediators in the brain of young mice after intraperitoneal injection of LPS, and if a7 receptors were involved in this process. After seven months of treatment, animals treated with lithium-LPS presented spatial memory, while water-LPS animals did not. Eight days after the induction of acute inflammation levels of IL-6, TNF-a, IL-10 and pGSK-3b/GSK-3b were the same in all groups, indicating that the inflammatory process had been completed. Still, there was no difference with respect to the density of CAT and a7. It was not possible to confirm or exclude the anti-inflammatory effect of microdoses of lithium. So, the experimental design will be adjusted.
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Efeitos da deleção do gene para conexina 32 sobre aspectos pró e anti-inflamatórios no modelo de desmielinização tóxica do brometo de etídio / Effects of deletion of the connexin 32 gene on pro and antiinflammatories effects in the ethidium bromide toxic demyelination modelHosomi, Fernando Yutaka Moniwa 10 May 2010 (has links)
As junções comunicantes são estruturas celulares que permitem o trânsito de moléculas entre as células, desempenhando funções de sinalização e transporte intercelular. São formadas por proteínas denominadas conexinas e representam estruturas-chave no funcionamento de tecidos altamente complexos e integrados, como o sistema nervoso central (SNC). O presente estudo avalia os efeitos da deleção da conexina 32 (Cx32) na inflamação e regeneração/cicatrização do SNC após 1, 3, 7, 10 e 20 dias pós-injeção intracerebral de brometo de etídio em camundongos deletados para Cx32 e camundongos normais. Para tanto, quantificou-se a expressão dos genes para fator de necrose tumoral alfa (TNFα), fator de crescimento transformador beta 1 (TGFβ), metaloproteinase 3 (MMP3), metaloproteinase 9 (MMP9) e inibidor tecidual de metaloproteinases 1 (TIMP1), através de PCR em tempo real. Os resultados indicam variáveis diferenças no padrão de expressão, incluindo variação na expressão de todos os genes pesquisados no período de 3 dias pós-injeção, ápice dos mecanismos de inflamação aguda. Estes resultados sugerem que a conexina 32 pode desempenhar funções importantes na sinalização molecular do processo inflamatório e regenerativo/cicatricial do sistema nervoso central. / Gap junctions are cellular structures that allow transit of molecules between cells, performing intercellular signaling and transportation. They are formed by proteins denominated connexins and represent key structures in highly complex and integrated tissues, such as the central nervous system (CNS). The present study evaluates the effects of connexin 32 (Cx32) deletion upon CNS inflammation and egeneration/cicatrization after 1, 3, 7, 10 and 20 days after intracerebral injection of ethidium bromide in Cx32 Knock Out and normal mice. To accomplish so, Real Time PCR gene expression quantification was performed uppon tumour necrosis factor alpha (TNFα), transforming growth factor beta 1 (TGFβ), metalloproteinase 3 (MMP3), metalloproteinase 9 (MMP9) and tissue inhibitor of metalloproteinases 1(TIMP1) genes. Results indicate variable differences in the expression pattern, including difference in expression of all evaluated genes in the 3 days after injection period, apex of the acute inflammation mechanisms. These results suggest that Cx32 may perform important functions on molecular inflammatory and regenerative/cicatrization signalling in the CNS.
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Geração de blastocisto quimérico pela agregação de trofectoderme com a massa celular interna ou com células iPS /Emanuelli, Isabele Picada. January 2013 (has links)
Orientador: Marcelo Fábio Nogueira / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Marcos Roberto Chiaratti / Banca: Flávio Vieira Meirelles / Banca: Lawrence Charles Smith / Resumo: Na literatura, não há descrição de que células trofectodérmicas sejam adequadas para a agregação (sem utilizar a fusão ou a microinjeção) e forma cão de embrião quimérico. O presente trabalho buscou validar um modelo para gerar blastocistos quiméricos, pela agrega ção de tecido trofectodérmico, primeiramente validando-o em camundongos e posteriormente testando a sua eficácia na espécie bovina. Nesta, duas técnicas para a reconstrução de blastocistos foram investigadas, mediante a agregação de um fragmento de trofectoderme (TE) com a massa celular interna (MCI) ou com células tronco induzidas a pluripotência (iPS). Os embriões foram bissectados com lâmina, assistida por micromanipulador, exceto no Experimento 1 e 2 (embriões bovinos) em que a bissecação utilizou microlâmina, por em controlada manualmente. De acordo com o delineamento de cada experimento, os embriões, os fragmentos embrionários e/ou as células iPS, foram depositados em micropoços preenchidos com meio KSOMaa (camundongo) ou SOF (gado bovino). Após 24 horas, a taxa de agregação (TA) das estruturas nos micropoços foi avaliada morfologicamente, mediante a detecção de uma única e coesa massa celular ou pela re-expansão e reorganização do blastocisto. Na validação em camundongos, foram utilizados dois hemiblastocistos ou MCI e TE derivados de embriões produzidos in vivo das linhagens Swiss Webster e C57BL/6/EGFP. Três experimentos foram conduzidos para caracterizar: 1) a eficácia da agregação de embriões em estágios pós-compactação; 2) o efeito do aumento de fragmentos embrionários e a utilização de um agente aglutinante biológico (fitohemaglutinina) na agregação; e 3) a exequibilidade da reconstrução do blastocisto pela aproximação entre MCI e fragmento de TE. Na segunda parte do trabalho, foram utilizados embriões bovinos produzidos in vitro em 5 experimentos: 1) utilização de fitohemaglutinina ... / Abstract: There is no report in the literature that trophectoderm cells can be used for aggregation (except in combination with fusion or microinjection techniques) and develop aggregates into a chimeric embryo. We aimed to validate a model to generate chimeric blatocysts using the trophectodermic tissue for aggregation in mice and replicate the validated technique in bovine embryos. We tested two methods of reconstruction in order to aggregate a trophectoderm fragment with either the inner cell mass (ICM) or the induced pluripotent stem (iPS) cells. Embryos were bisected by a blade assisted by micromanipulator, except in experiment 1 and 2 (bovine embryos) in which embryos were bisected by a manually controlled microblade. According to each experimental design, embryos, embryonic fragments and/or iPS cells were deposited in microwells lled with KSOMaa (mice) or SOF (bovine cattle). After 24 h the aggregation rate (AR) was assessed morphologically by the detection of a single, cohesive cell mass or by a re-expanded and reorganized blastocyst. In mice we used two demi-blastocysts or ICM and TE derived from in vivo produced Swiss Webster and C57BL/6/EGFP embryos. Three approaches aimed to characterize: 1) the e ectiveness of aggregation in post-compaction embryos; 2) the e ect on aggregation of increasing embryonic fragments and the use of the cell agglutination agent, phytohemagglutinin-L; and 3) the feasibility of reconstructing blastocysts by culturing ICM and TE fragments in close contact. In the bovine experiment we used in vitro produced embryos in 5 approaches to assess: 1) the effect of phytohemagglutinin-L in the aggregation of post-compaction demi-embryos; 2) blastocyst reconstruction using manually sectioned structures (ICM and TE); 3) microinjection of TE fragments into morula; 4) blastocyst reconstruction using structures (ICM and TE) sectioned with micromanipulator; and 5) production of chimeric ... / Doutor
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Influência do hipotireoidismo na progressão do melanoma experimental / Influence of hipothyroidism on experimental melanoma progressionBiondi, Luiz Roberto 03 August 2006 (has links)
Este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos do hipotireoidismo experimental induzido mediante utilização da droga propiltiouracil ou por tireoidectomia actínica, utilizando-se Iodo131, sobre o crescimento tumoral local e potencial metastático do melanoma murino, cepa B16F10 em camundongos C57BL6. O trabalho constituiu-se de dois experimentos distintos: 1. Influência do hipotireoidismo sobre o crescimento local e sobrevida, mediante indução do hipotireoidismo com propiltiouracil (PTU) a 0,05% na água de bebida e inoculação de células B16F10 por via subcutânea. 2. Influência do hipotireoidismo sobre o potencial metastático, onde os animais foram submetidos aos seguintes tratamentos: água (CTRL_M); indução do hipotireoidismo com propiltiouracil a 0,05% na água de bebida (PTU_M); indução do hipotireoidismo com iodo131 (I131_M) e do hipertireoidismo com L-tiroxina a 0,00005% na água de bebida (T4_M) e posterior inoculação de células B16F10, por via intravenosa. No experimento 1, os parâmetros avaliados consistiram na medida do volume tumoral e taxa de sobrevida. Os volumes tumorais variaram de 1,8 mm³ a 10.673,1 mm³. Na média diária dos volumes tumorais, o menor valor foi de 1,6 mm³ enquanto o maior volume obtido foi de 8140,9 mm³. A análise estatística das médias dos volumes, mediante teste de T não pareado, não indicou diferença significativa entre os grupos CTRL_L (controle) e PTU_L (tratado), com p = 0,795 para o teste de T e p = 0,5759 para o teste de F, para um intervalo de confiança de 95%. A média da sobrevida foi de 22 dias para o grupo CTRL_L e 21 dias para o grupo PTU_L. A analise estatística dos dados de sobrevida seguiu o Teste de Mantel-Haensze, não havendo diferença significativa na evolução da sobrevida entre os grupos, com p = 0,752 para um intervalo de confiança de 95%. No experimento 2, o parâmetro avaliado consistiu no número de nódulos metastáticos mediante contagem dos nódulos na superfície dos pulmões dos animais, após eutanásia. A distribuição de nódulos tumorais pulmonares apresentou média de 32 nódulos para o grupo CTRL_M; 91 nódulos para o grupo PTU_M; 23 nódulos para o grupo T4_M e 77 nódulos para o grupo I131_M. Houve diferença estatisticamente significativa (p < 0,01) entre os grupos CTRL_M versus PTU_M e I131_M e entre os grupos T4_M versus PTU_M e I131_M. Não houve diferença significativa (p > 0,05) entre os grupos CTRL_M versus T4_M e entre os grupos PTU_M versus I131_M. Os estudos estatísticos foram realizados mediante Teste de Analise de Variância simples (ANOVA) e aplicação de pós-teste de Dunnett, de múltipla comparação. Concluiu-se que o hipotireoidismo não interferiu no crescimento local da cepa B16F10 do melanoma murino em camundongos C57BL6 e significativamente alterou o comportamento metastático da referida cepa nesta linhagem isogênica, favorecendo a formação de nódulos metastáticos nos animais em que este estado patológico foi induzido, quer pela utilização de droga antitireoidiana PTU, quer pela tireoidectomia actínica com I131, no entanto, a administração de L-tiroxina não acarretou o efeito contrário / The aim of this study was to evaluate the effects of hypothyroidism induced by propylthiouracil or by actinic thyroidectomy, using I131, on focal and methastatic tumor growth of murine melanoma, B16F10, in mice C57BL6. The study was consisted of two different assays: 1. the influence of hypothyroidism on the focal growth and survival rate, by hypothyroidism induction with propylthiouracil (PTU) 0.05% in drinking water and subcutaneous inoculation of B16F10 and 2. the influence of hypothyroidism on the methastatic potential, were the animals underwent the followed treatments: drinking water (CTRL_L), hypothyroidism induction by propylthiouracil on 0.05% in drinking water (PTU_M group), hypothyroidism induction by I131 (I131_M group) and hypothyroidism induction by L-tiroxine on 0.00005% in drinking water (T4_M group). B16F10 cells were intravenously inoculated in all groups. On the first assay, the tumor volume was measured and the survival rate was evaluated. The tumor volumes ranged from 1.8 mm³ to 10673.1 mm³. Regarding the daily mean of tumor volumes, the lowest volume was 1.6 mm³ while the highest one was 8140.9 mm³. A statistical analysis of the tumor volumes was performed using unpaired T test and it showed no significant difference between group CTRL_L (control) and group PTU_L (treated one) (with p=0.795 on T test and p= 0.5759 on F test, using a confidence interval of 95%). The survival rate mean was 22 days on group CTRL_L and 21 days on group PTU_L. The Mantel-Haenszel (logrank) test was used for statistical analysis of these data, and there was no significant difference on the survival rate between groups CTRL_L and PTU_L (with p=0.752 and confidence interval of 95%). On the second assay, the number of methastatic nodules on the lung surface after euthanasia was evaluated. Regarding the lung nodules distribution, 32 nodules were found on group CTRL_M, 91 nodules were found on group CTRL_M, 23 on group T4_M and 77 on group I131_M. There was a statistically significant difference (p<0.01) between groups CTRL_M and PTU_M / I131_M and between groups T4_M and PTU_M / I131_M. No significant difference was observed (p>0.05) between groups CTRL_M and T4_M and between groups PTU_M and I131_M. ANOVA test was used for statistical analysis, followed by multiple comparison Dunnett?s post test. It was concluded that hypothyroidism did not have any influence on the focal growth of the murine melanoma B16F10 in mice C57BL6 and significantly did alter the methastatic behavior of that clone in this isogenic lineage, enhancing the methastatic nodules formation in the animals who were induced to this pathological condition, either by PTU or by actinic thyroidectomy, using I131; however, the administration of L-tiroxine did not show the opposite effect
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Avaliação antifúngica e de citoqueratinas epiteliais após terapia fotodinâmica mediada por Curcumina nanoparticulada em modelo murino de candidose oral /Sakima, Vinicius Tatsuyuji January 2017 (has links)
Orientador: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: Este estudo avaliou os efeitos fotodinâmicos da curcumina (CUR) encapsulada em nanopartículas poliméricas (NP) em um modelo murino com infecção prolongada de candidose bucal. NP de CUR foram sintetizadas utilizando o polímero poli-ácido lático (PLA) e sulfato de dextrana (DEX). Brometo de cetiltrimetil-amônio foi também utilizado para NP catiônicas. Para caracterização dessas formulações, foram determinadas as propriedades fisicoquímicas (tamanho, polidispersão e potencial zeta), testes de eficiência de encapsulamento, espectro de absorção, fotoestabilidade e liberação. Um total de 140 camundongos fêmeas com 6 semanas de vida foram imunossuprimidos e inoculados com uma cepa padrão de Candida albicans (Ca) em uma concentração de 1x107 unidades formadores de colônias por mililitro (UFC/mL) na região dorsal da língua. Para a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), uma das formulações sintetizadas ou CUR livre foi aplicada no dorso lingual dos animais que, após 20 min, foram irradiados com uma fonte de luz LED azul a 37,5 J/cm2 (grupo F+L+). Animais adicionais foram tratados somente com uma das formulações ou CUR livre sem luz (F+L-), Nistatina 1 vez ao dia (NIS1x), Nistatina 4 vezes ao dia (NIS4x) ou não receberam nenhum tratamento (controle). Em todos os grupos, os procedimentos foram realizados em 5 dias consecutivos. Após a última aplicação do tratamento, coletas da língua dos animais foram plaqueadas em meio de cultura específico (CFU/mL). Os animais foram eutanasiados 2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of this study were to synthetize and evaluate the antimicrobial photodynamic effects of curcumin (CUR) encapsulated in polymeric nanoparticles (NP) on a murine model with prolonged infection of oral candidosis. CUR-NP was synthesized using poly-lactic acid (PLA), and dextran sulfate (DEX). Cetyltrimethylammonium bromide was used for cationic NP. To characterize the formulations, the physicochemical properties (size, polydispersity and zeta potential) were determined and tests of encapsulation efficiency, absorption spectrum, photostability (photodegradation of CUR) and release were also performed. The effectiveness of CUR-NPmediated aPDT was evaluated in a murine model of oral candidiasis. Female mice (N = 140) were immunosuppressed and inoculated with C. albicans (Ca) to induce oral candidosis. For aPDT, formulations or free CUR was applied on the dorsum of tongue and, after 20 min, illumination at 37.5 J/cm2 was performed (F+L+ group). Additional animals were treated only with formulations or free CUR without light (F+L-), nystatin once a day (NYS1x), nystatin four times a day (NYS4x) or received no treatment (control). In each group, procedures were performed for 5 consecutive days. After the last treatment application, microbial samples were plated in specific agar media (CFU/mL). The animals were euthanatized 24 hours and 7 days after the treatments for histological evaluation and expression of cytokeratins (CK) 13 and 14 by immunohistochemistry (IHC). Data [log10(CFU/mL)] were analyzed by ANOVA/Welch and Games-Howell (α = 5%). After synthesis CUR-NP had appropriate pharmacotechnical nanometric properties, mean values of size, polydispersity, and zeta potential were 225.38; 0.15 and -30.96 mV; 248.12; 0.21 and +35.84 mV, respectively for anionic and cationic CUR-NP. Encapsulation efficiency of 60.84% and 73.81% ...[Complete abstract electronic access below) / Mestre
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Produção de eritropoietina recombinante humana no leite de camundongas transgênicas / Production of recombinant human erythropoietin in transgenic mice MilkCamilla Mota Mendes 27 February 2009 (has links)
Poteínas recombinantes simples, como a insulina e o hormônio de crescimento humano, podem ser produzidas em microorganismos como bactérias Entretanto, para a produção de proteínas que precisam de modificações pós-traducionais, que não se consegue em microorganismos, torna-se importante o uso de biorreatores com culturas de células eucarióticas. Este sistema de produção é caro e a quantidade de proteína produzida é pequena. Como alternativa surgiu o uso de animais transgênicos para reduzir os custos de produção. A Eritropoietina humana é uma proteina glicosilada e representa um dos maiores gastos para tratamento de doenças humanas. Já foi produzida em camundongos, coelhos e suínos transgênicos, com problemas na glicosilação ou alteração da higidez do animal pela falha da região promotora do vetor de transgene em limitar a expressão para a glâmdula mamária. Este estudo teve como objetivo a produção de (rhEPO) no leite de camundongas transgênicas sob ação de dois diferentes vetores, nunca utilizados na sua produção. Os vetores com os promotores da alfa-lactalbumina e beta-lactoglobulina bovinos tiveram o gene da eritropoietina humana inserido entre as regiões promotora e codificadora do leite, num processo trabalhoso e pouco eficiente. Não foi possível inserir os vetores serão nas células tronco-embrionárias (CTE) de camundongos (USP-1) por eleroporação, mas as condições (390V por 80µs) foram testadas com vetor de fluorescência. Futuramente as CTE transgênicas serão agregadas aos embriões colhidos de camundongas superovuladas e após 24 horas de cultivo in vitro serão transferidos para camundongas pseudo-gestantes. Os animais nascidos (quimeras) serão acasalados e seus descendentes terão o DNA analisado para verificar a presença do gene da eritropoietina humana. Os animais positivos (fundadores) serão acasalados e as fêmeas positivas nascidas serão acompanhadas quanto à produção da eritropoietina humana no leite. Será purificada do leite, quantificada e avaliada quanto a glicosilação por Western Blottin. / Recombinant proteins such as insulin and human growth hormone can be produced by microorganisms. Although, to produce proteins that need pos-traductional modifications that can not be done by microorganisms, and a eucariotic cell bioreactor is needed. This production system is expensive and the amount of protein produced is low. As an alternative, the transgenic animal technology came up to reduce production fees. The human eritropoetin is a glicosilated protein and it is one of the most expensive to human treatment. It was already produced in transgenic mice, rabbit and swine but with glicosilation problems or health alterations by transgene vectors promoter region failure that limits the expression on mammary gland. This study aimed to produce recombinant human erythropoetin (rhEPO) in transgenic mice milk by two different vectors, never had been used to produce it before. Vectors with bovine alpha-lactalbumin and beta-lactoglobulin promoters had the human erythropoetin gene inserted between promoter and milk coding regions by a hard working and low efficiency technique. It was not possible to insert our vectors on mice embryonic stem cells (ESC) (USP-1) by electroporation but its conditions (390V, 80µs) were tested with fluorescent vector. In the future, transgenic ESC will be aggregated into mice embryos and after 24 hours of in vitro culture will be transferred to pseudo-pregnant mices. The new borns (chimera) will be mated and its offspring will have their DNA evaluated to verify the human eritropoetin gene occurrence. The founder animals will be also mated and the positive female borned will be evaluated for human erythrpoetin production on milk. It will be purified, quantified and evaluated for glicosilation by western blottin techinique.
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