PONTES, Renata Bessa. Envolvimento da endotelina-1, de receptores (TRPV1 E NMDA) e da substância p na neuropatia sensitiva periférica induzida pelo agente antineoplásico oxaliplatina. 2015. 138 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T12:05:39Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_rbpontes.pdf: 1953785 bytes, checksum: 7c89921708b538e38f85458d5b33f44e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T12:21:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_rbpontes.pdf: 1953785 bytes, checksum: 7c89921708b538e38f85458d5b33f44e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T12:21:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_rbpontes.pdf: 1953785 bytes, checksum: 7c89921708b538e38f85458d5b33f44e (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction: The cumulative neurotoxicity is a toxicity that can result from oxaliplatin-based therapy (OXL), which is the 3rd generation platinum agent with broad spectrum of antitumor activity, including colorectal, ovarian and lung cancer. Neurotoxicity associated with OXL generates a dose-limiting toxicity, chronic, peripheral sensory neuropathy (NSP). Objective: To investigate the involvement of endothelin-1, TRPV1 receptors and NMDA and substance P involved in the pathogenesis of peripheral sensory neuropathy induced by oxaliplatin antineoplastic agent. Methods: Male Swiss mice (20g) were pre-treated with antagonists of endothelin-1 receptors (Bosentan 100mg / kg orally; BQ-123 and BQ-788 30μl, intraplantar) and TRPV1 receptor antagonists (capsazepine, 5mg / kg , IP), antagonist of NK-1 receptor for substance P (apreptanto, 1 mg / kg, IP), and a NMDA receptor antagonist (MK-801, 0.5mg / kg, IP) 30 minutes before administration of OXL (1mg / kg, IV) for 4.5 weeks. Parallel nociceptive tests performed to assess the development of peripheral sensory neuropathy. The hyperalgesia assessed by the tail immersion test (ICT) in cold water (10° C) or warm (43° C) and test Von Frey (HPM). Then it was performed spinal segment, and the dorsal root ganglion immunofluorescence and RT-PCR the Ethics Committee approved the study for Animal Research UFC (Protocol 75/12). Results: The results observed when using the antagonists, as a pretreatment to the use of OXL there was attenuation of the induced hyperalgesia (NSP) OXL. Upon administration of selective antagonists of endothelin in the right paw was significant reduction in paw hyperalgesia in the right (treated) compared to the left paw (control). By analyzing the gene expression of cFos, NK-1 and endothelin B receptor, it was observed that there was significant reduction of expression of the markers in pre-treated bosentan group versus OXL group that showed increased expression for these markers. Conclusion: It was concluded in this study that there is evidence of the role of endothelin-1 receptors (TRPV1 and NMDA) and substance SP in the pathogenesis of NSP induced antineoplastic agent OXL. / Introdução: A neurotoxicidade cumulativa é uma toxicidade que pode advir da terapia à base de oxaliplatina (OXL), que é a 3ª geração de agentes platinos com amplo espectro de atividade antitumoral, incluindo câncer colorretal, ovariano e pulmonar. A neurotoxicidade associada à OXL gera uma toxicidade dose-limitante, crônica, a neuropatia sensitiva periférica (NSP). Objetivo: Investigar o envolvimento da endotelina-1, de receptores TRPV1 e NMDA e da substância P envolvidos na patogênese da neuropatia sensitiva periférica induzida pelo agente antineoplásico oxaliplatina. Materiais e métodos: O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal da UFC (protocolo nº 75/12). Camundongos Swiss machos (20g) foram pré-tratados com antagonistas de receptores de endotelina-1 (Bosentana 100mg/kg, VO; BQ-123 e BQ-788 30µl, intraplantar) e antagonistas do receptor TRPV1 (capsazepina, 5mg/kg, IP), antagonista do receptor NK-1 da Substancia P (apreptanto, 1mg/kg, IP) e antagonista de receptores NMDA (MK-801, 0,5mg/kg, IP) 30 minutos antes da administração de OXL (1mg/kg, IV) por 4 semanas e meia. Paralelamente foram realizados testes nociceptivos para avaliar o desenvolvimento da neuropatia sensitiva periférica. A hipernocicepção foi avaliada pelo teste de imersão da cauda (TIC) em água fria (10ºC) ou aquecida (43ºC) e pelo teste Von Frey (HPM). Em seguida, foi realizado imunofluorescência do segmento medular e gânglio da raiz dorsal e RT-PCR. Resultados: Como resultados observou-se que com o pré-tratamento ao uso de OXL que houve atenuação da hiperalgesia da NSP induzida por OXL. Ao realizar a administração de antagonistas seletivos de endotelina-1 intraplantar na pata direita observou-se redução significativa na hiperalgesia na pata direita (tratada) em comparação à pata esquerda (controle). Ao analisar a expressão gênica para cFos, NK-1 e o receptor de endotelina B, observou-se que houve redução significativa da expressão dos marcadores no grupo pré-tratado com Bosentana ao comparar com o grupo OXL, que demonstrou a expressão aumentada para esses marcadores. Conclusão: Conclui-se no presente estudo que há evidências do papel da endotelina-1, de receptores (TRPV1 e NMDA) e da substância P na patogênese da NSP induzida pelo agente antineoplásico OXL

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)'' / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O alcoolismo e um problema mundial que resulta em milhoes de mortes. No entanto, somente uma pequena parcela dos usuarios de alcool torna-se dependente desta droga. Os substratos neurais responsaveis por tais diferencas individuais nao sao completamentes conhecidos. Em camundongos Suicos Albinos, existe grande diferenca individual quanto ao desenvolviento da sensibilizacao comportamental ao etanol, fenomeno caracterizado como um progressivo aumento da resposta locomotora durante tratamento com a droga. A variabilidade na resposta comportamental ao tratamento cronico com etanol poderia levar a diferentes neuroadaptacoes na regiao no nucleo accumbens (regiao do sistema de recompensa),principalmente das neurotransmissoes dopaminergica e glutamatergica, o que poderia influenciar a vulnerabilidade a dependencia de alcool. Neste estudo investigamos se camundongos com diferentes niveis de sensibilizacao(sensibilizados e nao-sensibilizados) apresentantavam diferencas farmacologicas bioquimicas e/ou eletrofisiologicas na atividade dos receptores dopaminergico D1 e glutamatergico NMDA na regiao do nucleo accumbens, duas semanas apos o tratamento com etanol. Na primeira etapa, observamos que animais sensibilizados ao etanol, quando comparados aos animais nao-sensibilizados ou controle, apresentaram hiperresponsividade dos receptores D1 no nucleo accumbens que se refletiu em um aumento da fosforilacao em treonina 34 da proteina DARPP-32.Este resultado indica que um aumento da sensibilidade da cascata intracelular associada a ativacao dos receptores D1 representa um componente neurobiologico asssociado ao desenvolvimento da sensibilizacao. esta cascata pode influenciar a atividade dos receptores glutamatergicos NMDA. Desta maneira, nas segunda etapa do estudo verificamos com tecnicas de eletrofisiologia (patch-clamp) e bioquimica (western-blots) que animais sensibilizados ao etanol apresentavam menor atividade e expressao dos receptores NMDA no nucleo accumbens que se traduzia em um deficit na expressao de LTD (depressao de longa duracao). Nao houve diferencas significativas entre animais controle e nao-sensibilizado. Na terceira etapa, investigamos se a variabilidade no desenvolvimento da sensibilizacao ao estanol estaria associada a diferentes niveis de consumo voluntario de etanol. Observamos que animais sensibilizados beberam voluntariamente maiores quantidades de etanol do que animais nao-sensibilizados e controles. E possivel que alteracoes da neurotransmissao dopaminergica e glutamatergica no acccumbens podem refletir no aumento do consumo de etanol em animais sensibiliazados. E importante notar que isso nao esta diretamente relacioando com a exposicao cronica ao etanol uma vez que animais nao- sensibilizados, apear de receberem o mesmo tratamento com etanol, nao apresentaram diferencas dos camundongos controles quanto as neuroadaptacoes e ao consumo de etanol. Compreendendo estas neuroadaptcaoes poderemos, em um futuro proximo, tentar reverte-las e sugerir novos alvos terapeuticos para o trtamento da dependencia e/ou recaida ao uso do alcool / FAPESP: 2008/01819-5 / CAPES/PDEE: BAX: 0321-10-9 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A reducao do tempo de sono e uma das varias consequencias da vida moderna, gerando um estresse significante para o organismo. Numerosos estudos em humanos e animais mostraram que o estresse prejudica a qualidade e quantidade de colageno na pele, promove a invasao bacteriana e retarda o processo de cicatrizacao. Alem disso, diversos fatores como o uso de morfina ou o envelhecimento, apresentam efeitos negativos na cicatrizacao de pele e tambem provocam alteracoes no sono. Nesse sentido, o objetivo do presente estudo foi avaliar o processo de cicatrizacao de pele em camundongos privados de sono paradoxal, em duas situacoes distintas e analisadas separadamente: tratados com morfina ou associado ao fator idade. No experimento I, camundongos adultos hairless machos foram distribuidos nos seguintes grupos: Controle, morfina, privacao de sono, e morfina + privacao de sono. A morfina (10 mg.kg-1, subcutaneo) foi administrada a cada 12 horas durante 9 dias consecutivos. Apos a privacao de sono foram coletadas amostras de pele para processamento e avaliacao imuno-histoquimica de COX-2 e iNOS. No experimento II, foram utilizados camundongos C57BL⁄6J machos jovens (3 meses) e de meia-idade (10 meses). Os animais foram randomizados nos seguintes grupos: controle 3 meses; controle 10 meses; privacao de sono paradoxal 3 meses; privacao de sono paradoxal 10 meses. Apos o termino da privacao, os animais foram submetidos a lesao na regiao dorsal com o auxilio de um punch descartavel de biopsia de pele (6 mm). Os resultados do primeiro estudo sugerem que a morfina proporcionou imunoexpressao de COX-2 e iNOS. Porem, a privacao de sono nao alterou os resultados induzidos pela morfina. Ja em relacao aos resultados obtidos no segundo experimento, pudemos observar que houve um retardo no processo de cicatrizacao nos animais de meia-idade comparado aos jovens, independente da condicao de sono. Entretanto, os animais de meia-idade privados de sono apresentaram piora na cicatrizacao quando comparados aos animais de meia-idade na condicao controle e aos animais jovens privados de sono. Em resumo, o presente projeto permite concluir que os resultados do nosso primeiro estudo sugerem que a morfina e capaz de induzir a imunoexpressao da COX-2 e iNOS na pele de camundongos hairless, e que a falta de sono nao modula este resultado. Nosso segundo experimento mostrou que a privacao de sono pode afetar o processo de cicatrizacao somente quando associado ao fator idade, sugerindo a importancia do sono ao longo da vida para manutencao de uma pele saudavel. Em geral, os experimentos I e II nos permitem sugerir que uso de morfina, a falta de sono e a idade em animais podem modular o processo de cicatrizacao de pele / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A planta Ocimum gratissimum L. e muito utilizada na medicina popular para tratar condicoes dolorosas. Assim, o presente estudo avaliou a atividade antihipernociceptiva do oleo essencial de Ocimum gratissimum (OEOg) e seus principios ativos isolados (eugenol, trans-cariofileno e mirceno) no modelo de dor neuropatica induzida pela injuria por constricao cronica do nervo ciatico. Para todos os experimentos realizados foram utilizados camundongos machos adultos da linhagem C57BL/6J. Testes preliminares, como triagem farmacologica e rota-rod foram feitos para direcionar a pesquisa e determinar os efeitos adversos das substancias testadas. Poucas alteracoes foram observadas nesses testes. Os animais tratados com trans-cariofileno apresentaram poucos indicios de toxicidade,como alteracoes comportamentais, bioquimicas e histopatologicas. Ja o mirceno, quando administrado na dose de 250 e 500 mg/kg, promoveu aumento das enzimas hepaticas aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase, alem de aumento no peso relativo do figado e alteracoes morfologicas hepaticas. Nos testes para averiguar a antinocicepcao aguda e cronica, os camundongos foram tratados por via oral com oleo de milho (grupo controle), 5 mg/kg de morfina (controle positivo dor aguda- ip), 20 mg/kg de pregabalina (controle positivo dor neuropatica u ip), OEOg nas doses de 10, 20 ou 40 mg/kg, eugenol, trans-cariofileno ou mirceno nas doses de 1, 5 ou 10 mg/kg. No teste da placa quente, para avaliar limiar nociceptivo, todos os xenobioticos testados foram eficazes em aumentar significativamente a latencia para os animais lamberem a(s) pata(s), mesmo 4 horas apos a administracao, quando comparados com o grupo controle. No teste da formalina na pata, as substancias utilizadas como tratamento foram efetivas em minimizar a dor dos animais na primeira e segunda fase do teste, mostrando efeito benefico contra a dor neurogenica e inflamatoria. Com relacao aos testes de dor neuropatica, o tratamento com 20 e 40 mg/kg do oleo essencial da planta e as doses 5 e 10 mg/kg dos principios ativos foram capazes de promover antihipernocicepcao, tanto no teste mecanico (von Frey) quanto termico (placa quente). Os experimentos para investigar o possivel mecanismo de acao das drogas testadas indicaram o envolvimento do sistema opioide. Os dados do teste para elucidar o mecanismo de acao do transcariofileno tambem comprovaram a participacao do sistema canabinoide via receptor CB2, uma vez que o efeito foi revertido pelo antagonista CB2 JWH-015. O eugenol apresentou efeito antihipernociceptivo equivalente ao antagonista TRPV1,(SB366791), sugerindo que o efeito antinociceptivo seja tambem devido ao bloqueio de receptores vaniloides. Em sintese, nossos achados corroboram com os relatos da literatura de que o OEOg e seus principios ativos isolados possuem atividade antinociceptiva em modelos de dor aguda e comprovam o efeito antihipernociceptivo nos testes de dor neuropatica. A presenca de atividade biologica da planta justifica ouso popular, o que incentiva a realizacao de outros estudos, principalmente no que diz respeito aos seus constituintes e seus respectivos mecanismos de acao / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivos: A fim de verificar as consequencias comportamentais e neuroquimicas da depressao sobre a aprendizagem associativa ao uso do alcool, este estudo buscou verificar se a privacao de luz altera a preferencia condicionada ao local induzida pelo etanol em camundongos. Atraves de estudos imunohistoquimicos, foi avaliada a expressao de pCREB, pERK, C-fos e Histona 3, visando identificar os mecanismos neuroquimicos associados aos efeitos comportamentais. Considerando a importancia do sistema endocanabinoide no contexto deste estudo, tambem foi avaliada a imunoreatividade de receptores canabinoides tipo 1 (CB1R) e tipo 2 (CB2R). Metodos: Foram utilizados 36 camundongos suicos machos adultos. Foi realizada privacao de luz 24 horas/dia por quatro semanas. Na sequencia os animais foram readaptados a luz por sete dias. Como controle, utilizou-se animais mantidos no bioterio em ciclo claro escuro padrao (grupo Naive). Em seguida, os animais foram submetidos a uma serie de testes comportamentais para avaliar a emocionalidade (campo aberto, labirinto em cruz elevado, nado forcado e consumo de sacarose). Por fim, estes dois grupos foram submetidos ao protocolo de preferencia condicionada ao local induzida por etanol. Apos o teste da preferencia condicionada, os mesmos foram perfundidos e seus cerebros processados para imunohistoquimica. Resultados: A privacao de luz foi capaz de induzir um estado de ansiedade (labirinto em cruz elevado), desamparo (nado forcado) e hiperatividade (campo aberto), mas nao de anedonia (consumo de sacarose). Essas alteracoes sao comumente vistas em diferentes modelos de depressao, mostrando que a privacao de luz e um modelo capaz de induzir um estado semelhante a depressao em animais. Alem disso, a privacao de luz inibiu a aquisicao e/ou expressao da preferencia condicionada ao local induzida por alcool. Estes efeitos comportamentais foram acompanhados por alteracoes neuroquimicas significativas. Conclusao: A privacao de luz mimetizou os aspectos comportamentais observados em outros modelos animais de depressao, fornecendo com isso, evidencias para a consolidacao do seu uso em estudos experimentais relacionados com a depressao. Alem disso, o modelo inibiu a aprendizagem associativa apetitiva induzida pelo etanol. Tais efeitos comportamentais foram acompanhados por alteracoes significativas do ponto de vista neuroquimico, que de certa forma, justificam os resultados comportamentais observados, tais como: alteracao na expressao de c-Fos, pCREB, pERK, H3, CB1R e CB2R / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A dor cronica esta entre os principais sintomas da esclerose multipla. Sao escassas as pesquisas com compostos naturais na busca de tratamentos para os sintomas dessa doenca. As plantas pertencentes ao genero Phyllanthus e os agentes canabinoides tem mostrado efeitos positivos sobre a nocicepcao e a inflamacao. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito antihipernociceptivo de Phyllanthus amarus e do trans-cariofileno no modelo de encefalomielite autoimune experimental (EAE). Inicialmente foi feita a analise fitoquimica do extrato hexanico de Phyllanthus amarus (EHPa) e as principais lignanas encontradas foram filantina, nirantina e 5-demetoxinirantina. Para todos os experimentos realizados foram utilizados camundongos femeas C57BL/6J. Nao foram observadas alteracoes siginificativas nos testes iniciais (triagem farmacologica e rota rod). A nocicepcao foi avaliada pelo teste de placa quente e formalina na pata. Todas as doses de EHPa promoveram efeito antinociceptivo no teste de formalina, em ambas as fases, mas somente a dose de 400 mg/kg aumentou o tempo de permanencia dos camundongos sobre a placa aquecida. Na etapa seguinte, a EAE foi induzida por injecao subcutanea com 200 μg do peptideo de MOG35-55 dissolvida em CFA. Os animais foram avaliados quanto a hipernocicepcao mecanica (von Frey), a coordenacao motora, ao peso e ao desenvolvimento da doenca. Nenhuma das doses de Phyllanthus amarus administradas foi capaz de modificar os parametros analisados. Os mesmos experimentos foram realizados em animais com EAE, mas o tratamento com o transcariofileno nao previniu a reducao do peso, as alteracoes motoras, e nem modificou o desenvolvimento da doenca. No entanto, com relacao a hipernocicepcao, as tres doses foram efetivas em aumentar o limiar de nocicepcao, a partir do 6° dia apos a inducao da doenca. Quando o mecanismo de acao do trans-cariofileno foi avaliado, o efeito agudo da dose de 10 mg/kg foi bloqueado pela naloxona (antagonista opioide) e pelo AM630 (antagonista canabinoide). A resposta de proliferacao e producao de citocina, foi analisada apos sete dias de tratamento. Porem, a dose de 10 mg/kg do trans-cariofileno nao modificou a proliferacao das celulas T CD4+ e nem a producao de IFN-γ. Como conclusao, estes produtos naturais podem atuar de maneira diferente dependo do modelo empregado e metodo de extracao utilizado. Ainda que o extrato da planta nao tenha sido efetivo, o trans-cariofileno foi capaz de reduzir a hipernocicepcao induzida na EAE. Os resultados mostram a relevancia de estudos com produtos naturais para o emprego em neuropatias dolorosas / FAPESP: 09/51882-8 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-13T13:31:26Z No. of bitstreams: 1 Publico - Tese Doutorado Ricardo José Morello.pdf: 2197604 bytes, checksum: 5953c779fa89f086a286a5524abf874c (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-13T13:35:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico - Tese Doutorado Ricardo José Morello.pdf: 2197604 bytes, checksum: 5953c779fa89f086a286a5524abf874c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T13:35:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico - Tese Doutorado Ricardo José Morello.pdf: 2197604 bytes, checksum: 5953c779fa89f086a286a5524abf874c (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: avaliar os efeitos de precondicionamento isquêmico remoto (PCI-R) no modelo de transplante de intestino delgado fetal. Métodos: foram constituídos dois grupos: transplante isogênico (Iso, camundongos C57BL/6, n=24) e transplante alogênico (Alo, camundongos BALB/c, n=24). Em cada grupo, distribuíram-se os animais com e sem PCI-R, que foi realizado por oclusão da artéria femoral esquerda da fêmea prenhe durante 10 minutos, seguida por tempo igual de reperfusão. O imunossupressor utilizado foi Tacrolimo (Fk, 5 mg/kg/dia v.o.). Ao final obteve-se os seguintes subgrupos: Alo-Tx, Alo-Pci, Alo-Fk, Alo-Pci-Fk, Iso-Tx, Iso-Pci, Iso-Fk e Iso-Pci-Fk. O enxerto foi transplantado no espaço entre o músculo reto-abdominal e pré- peritoneal dos receptores a meio centímetro do apêndice xifóide, à esquerda da linha mediana. Após o sétimo dia de seguimento, o enxerto foi removido, fixado e embebido em parafina para avaliação histomorfológica (desenvolvimento e rejeição) e análise imunohistoquímica (anti-PCNA e anti-caspase-3 clivada). Os dados foram analisados usando ANOVA e testes complementares e foi considerado significante quando p <0.05. Resultados: A avaliação do desenvolvimento do enxerto no grupo de Iso mostrou que o PCI-R reduziu o desenvolvimento comparado com Iso-Tx (5,2±0,4 vs 9,0±0,8), o Fk e sua associação com PCI-R aumentaram o desenvolvimento do enxerto comparado com PCI-R (11,2±0,7 e 10,2±0,8, respectivamente). No grupo Alo, o Fk e/ou sua associação com PCI-R aumentaram o desenvolvimento comparado com Alo-Tx e Alo com PCI-R (6,0±0,8, 9,0±1,2, 0,0±0,0, 0,5±0,3, respectivamente). A expressão de PCNA foi maior no grupo ISO em animais tratados com Fk e PCI-R comparados a outros grupos (12,2±0,8 vs Tx: 8,8±0,9, PCI-R: 8,0±0,4 e Fk: 9,0±0,6). No grupo Alo, a expressão de PCNA não diferiu entre grupos. A rejeição do enxerto foi menor nos grupos tratados com PCI-R (-18%), Fk (- 68%) ou ambos (-61%) comparados com Alo-Tx. A expressão de caspase-3 clivada foi menor no grupo Iso em animais tratados com associação de PCI-R e Fk (6,2 ±0,9 vs Tx: 8,6±0,5; PCI-R: 5,8 ±0,9 e Fk: 6,0 ±0,3). Conclusão: O PCIR mostrou efeito benéfico sobre a lesão de isquemia e reperfusão do enxerto intestinal fetal nos transplantes isogênico e alogênico, aumentando o número de células caliciformes e a proliferação celular. No transplante alogênico, aumentou o desenvolvimento do enxerto, diminuiu o grau de rejeição aguda na ausência de imunossupressão, porém não apresentou efeito sinérgico com o imunossupressor. No transplante isogênico houve diminuição do grau de desenvolvimento do enxerto, porém foi efetivo na redução da apoptose. / Purpose: to evaluate the effect of remote ischemic preconditioning (R-IPC) in the fetal small bowel transplantation model. Methods: two groups were constituted: the Isogenic transplant (Iso, C57BL/6 mice, n=24) and the allogeneic transplant (Alo, BALB/c mice, n=24). In each group, the animals were distributed with and without R-IPC, that was accomplished by occlusion of the left femoral artery of the pregnant female during 10 minutes, followed for similar time of reperfusion. The imunossupressor used was Tacrolimo (Fk, 5 mg/kg/day v.o.) It was obtained the following subgrups: Alo-Tx, Alo-IPC, Alo-Fk, Alo- IPC - Fk, Iso-Tx, Iso- IPC, Iso-Fk and Iso- IPC-Fk. The graft was transplanted in the space between the straight-abdominal muscle and preperitoneal of the receivers to half centimeter of the xiphoid appendix, left of the medium line. After seven days follow-up, the graft of small bowel was removed and embedded in paraffin to histomorphological evaluation (the graft development and rejection) and immunohistochemical analysis (anti-PCNA and anti-caspase- 3 cleaved). Data were analyzed using ANOVA and post-hoc tests, and it was considered significant when p<0.05. Results: The graft development evaluation in Iso group showed that R-IPC reduced the development compared with Iso-Tx (5.2±0.4 vs 9.0±0.8) and Fk and its association with R-IPC increased the graft development compared with R-IPC (11.2±0.7 and 10.2±0.8, respectively). In Alo group, Fk and its association with R-IPC increased the development compared with Alo-Tx and Alo with R-IPC (6.0±0.8, 9.0±1.2, 0.0±0.0, 0.5±0.3, respectively). The PCNA expression was increased in Iso group only in animals treated with Fk and R-IPC compared to other groups (12.2±0.8 vs Tx: 8.8±0.9, R-IPC: 8.0±0.4 and FK: 9.0±0.6). In Alo group, PCNA expression did not differ among groups. The graft rejection was lower in groups treated with R-IPC (- 18%), Fk (-68%) or both (-61%) compared with Alo-Tx. The caspase-3 cleaved expression was lower in Iso group in animals treated with association of R-IPC and/or Fk (Tx: 8.6±0.5 vs R-IPC: 5.8 ±0.9; Fk: 6.0 ±0.3; R-IPC-Fk: 6.2 ±0.9). Conclusion: R-IPC showed benefic effect on the ischemy and reperfusion lesion of the fetal intestinal graft in the Isogenic and Allogeneic transplants, increasing the number of goblet cells and the cellular proliferation. In the Allogeneic transplant, it increased the development of the graft, it reduced the degree of acute rejection without Immunosuppression, however it didn't present synergic effect with the imunossupressor. In the Isogenic transplant there was decrease of the degree of development of the graft, however it was effective in the apoptosis reduction.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O labirinto em cruz elevado é o modelo animal de ansiedade mais utilizado atualmente. Infelizmente, ele possui duas críticas importantes: 1) ele não avalia com precisão os efeitos ansiogênicos de psicoestimulantes como a anfetamina e a cocaína e 2) ele é sensível ao fenômeno de tolerância de primeira passagem (OTT). Na presente Tese, nós propomos um novo modelo animal para avaliar os efeitos ansiogênicos de psicoestimulantes. Resumidamente, o modelo é baseado no aumento do efeito estimulante locomotor dessas drogas (avaliado em um campo aberto) induzido por uma dose de uma droga benzodiazepínica que não é capaz de modificar a atividade locomotora de camundongos per se. Assim, o efeito estimulante locomotor tanto da anfetamina como da cocaína foi liberado por doses ansiolíticas (demonstradas pelo teste do labirinto em cruz elevado) de clordiazepóxido ou midazolam. Esse novo modelo não foi vulnerável ao fenômeno de OTT uma vez que foi efetivo também em camundongos previamente habituados ao campo aberto. Finalmente, tal modelo também foi parcialmente efetivo em detectar os efeitos ansiogênicos de drogas ansiogênicas como o pentilenotetrazol. De fato, uma dose de pentilenotetrazol que foi ineficaz em modificar per se a atividade locomotora de camundongos foi efetiva em diminuir o efeito estimulante locomotor da anfetamina (mas não da cocaína). / The elevated plus-maze is the most utilized animal model of anxiety nowadays. Unfortunately, it has two important criticisms: 1) it does not evaluate with accuracy the anxiogenic effects of psychostimulants like amphetamine and cocaine and 2) it is sensitive to the phenomenon of one-trial tolerance (OTT). Here, we propose a new animal model to evaluate the anxiogenic effects of psychostimulants. Shortly, the model is based on the enhancement of the locomotor stimulant effects of such drugs (evaluated in an open-field in mice) by a dose of a benzodiazepinic drug which is not able to modify locomotor activity per se. Thus, the locomotor stimulant effect of both amphetamine or cocaine was released by anxiolytic doses (demonstrated by the elevated plus-maze test) of chlordiazepoxide or midazolam. This new model was not vulnerable to the OTT phenomenon since it was also effective in mice previously habituated to the open-field apparatus. Finally, such model was also partially effective in detecting the anxiogenic effect of anxiogenic drugs such as pentilenotetrazole. Indeed, a dose of pentilenotetrazole, which was ineffective in modifying per se mice´s locomotor activity, was effective in decreasing the locomotor stimulant effect of amphetamine (but not of cocaine) in mice. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-01-01 / Fundamentos: A óxido nítrico sintetase neuronal (NOS1) é importante na regulação do acoplamento excitação-contração e exerce papel anti-oxidante que mantém o equilíbrio entre a produção de NO e superóxido. Neste estudo foi testado o efeito da ausência do funcionamento normal da NOS1 sobre o infarto do miocárdio (IM). Métodos: Infarto do miocárdio foi provocado cirurgicamente em camundongos selvagens (S; C57bl/6) e deficientes de NOS1 (NOS1-/-). A evolução do pós-operatório foi acompanhada para se determinar a sobrevida, as alterações da arquitetura ventricular (ecocardiografia e histologia), da função ventricular (ecocardiografia e por hemodinâmica invasiva), do estresse oxidativo (microtopografia fluorescente oxidativa, atividades da xantina oxidoredutase [XOR] e da NADPH oxidase), da produção de NO, e da expressão protéica e gênica da XOR, das subunidades da NADPH oxidase, e da NOS endotelial (NOS3). Resultados: A mortalidade ao final de 60 dias foi maior no grupo NOS1-/- (risco relativo 2,06; P=0,036). Após o IM, o grupo NOS1-/-apresentou pior função ventricular com menor fração de encurtamento ao eco (19,7 ± 1,5% vs 27,2 ± 1,5% nos S, P<0,05), e pior remodelamento cardíaco com maior diâmetro do VE ao final da diástole (5,5 ± 0,2 vs 4,9 ± 0,1 mm nos S, P<0,05) e da sístole (4,4 ± 0,2 vs 3,6 ± 0,1 mm), e maior hipertrofia cardíaca (diâmetro transverso dos miócitos remanescentes = 14,9 ± 0,5 vs 12,8 ± 0,5 μm nos S, P<0,01), apesar do tamanho do IM ter sido semelhante tanto com 48 horas quanto com quatro semanas de infarto. A produção de superóxido aumentou em ambos os grupos após o IM, mas a produção de NO aumentou significativamente apenas no grupo S. A atividade da NADPH oxidase aumentou transitoriamente após o IM, de forma paralela à expressão de suas subunidades, e em grau semelhante em ambos os grupos Após o IM, a atividade da XOR manteve-se elevada nos animais NOS1-/- durante todo o período estudado, mas apenas agudamente no grupo S. A expressão da XOR aumentou significativamente na fase aguda (três dias após IM) e reduziu para níveis similares ao de animais pseudo-operados quatro semanas após o IM. O aumento na expressão protéica da NOS3 no pós-IM foi maior nos animais NOS1-/- que nos controles. Conclusões: Estes achados indicam que a NOS1 possui efeito protetor após o IM. A deficiência de NOS1 leva a desequilíbrio entre o estresse oxidativo e a produção de NO, o que pode ser o mecanismo dos efeitos adversos da deficiência de NOS1 em estados de injúria miocárdica. / Background: Neuronal nitric oxide synthase (NOS1) plays key cardiac physiologic roles, regulating excitation-contraction coupling and exerting an anti-oxidant effect that maintains tissue nitric oxide (NO)/redox equilibrium. We tested the hypothesis that NOS1 plays a protective effect post-myocardial infarction (MI). Methods: We studied mortality, cardiac remodeling, and upregulation of oxidative stress pathways following MI in NOS1 deficient (NOS1-/-) and wild-type C57BL6 (WT) mice. We constructed survival curves and studied the cardiac remodeling (echocardiography and histology), performance (echocardiography and hemodynamics), oxidative stress (oxidative fluorescence microtopography, xanthine oxidoreductase [XOR] and NADPH oxidase activities), NO production, and XOR, NADPH oxidase subunits and endothelial NOS (NOS3) expression. Results: Compared to WT, NOS1-/- mice had greater mortality (Hazard ratio 2.06, P = 0.036), and worse left ventricular fractional shortening (19.7 ± 1.5 vs 27.2 ± 1.5%, P<0.05), and cardiac remodeling with higher LV diastolic (5.5 ± 0.2 vs. 4.9 ± 0.1 mm, P<0.05) and systolic (4.4 ± 0.2 vs. 3.6 ± 0.1 mm, P<0.05) diameters, and more intense cardiac hypertrophy (residual cellular width = 14.9 ± 0.5 vs. 12.8 ± 0.5 μm, P<0.01) despite similar MI size. Superoxide production increased after MI in both NOS1-/- and WT animals, although NO increased only in WT. NADPH oxidase (P<0.05) activity and expression had similar and transient increases in both groups post MI. NOS1-/- mice had persistent basal and post-MI elevations in XOR activity, while WT mice presented transient increase in XOR activity post-MI. XOR expression increased transiently in both groups post-MI. NOS3 expression was upregulated post-MI in NOS1-/- mice. Conclusions: Together these findings support a protective role for intact NOS1 activity in the heart following MI. NOS1 deficiency contributes to an imbalance between oxidative stress and tissue NO signaling, providing a plausible mechanism for adverse consequences of NOS1 deficiency in states of myocardial injury. / TEDE

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24 / O zolpidem é um derivado imidazopiridínico com crescente utilização terapêutica que se liga ao sítio BZ1 dos receptores GABAA. Essa seletividade deveria conferir ao zolpidem propriedades predominantemente hipnóticas e ausência relativa dos efeitos colaterais que são associados aos benzodiazepínicos clássicos, como por exemplo, efeitos anticonvulsivantes e relaxantes musculares e, de importância, a amnésia. Entretanto, investigações clínicas e em modelos animais têm revelado efeitos amnésticos após a administração aguda de zolpidem. Nesse contexto, considerando a crescente utilização do zolpidem no tratamento da insônia, faz-se necessária a caracterização dos efeitos cognitivos induzidos por essa droga bem como seus efeitos na atividade motora e na emocionalidade. Assim, nossos resultados sugerem que a administração aguda pré-treino de zolpidem promoveu prejuízos de aprendizado na dose de 10 mg/Kg, mas não nas doses de 2 e 5 mg/Kg, e promoveu uma diminuição da atividade exploratória de maneira dependente de dose, sem, no entanto, modificar a ansiedade. No que diz respeito à memória, observamos déficits de retenção nas doses de 5 e 10 mg/Kg. Quando administrado imediatamente após o treino, todos os animais tiveram a memória preservada. Ainda, a administração pré-teste de todas as doses de zolpidem não modificou o desempenho dos animais, demonstrando a ausência de efeitos sobre a evocação. Paralelamente, nossos resultados não sugerem a participação do fenômeno de dependência de estado, uma vez que a administração aguda de zolpidem anteriormente ao treino e ao teste não foi capaz de reverter o prejuízo de memória induzido pela administração pré-treino dessa droga. Com relação à memória não-associativa, observamos que na dose de 10 mg/Kg o zolpidem promove déficits de habituação no modelo de campo aberto, além de diminuir a atividade exploratória, como visto anteriormente. Dessa maneira, demonstramos que apesar de sua seletividade, o zolpidem pode induzir déficits de memória associativa (e também não-associativa) quando administrado anteriormente ao treino da tarefa, interferindo talvez, no início do processo de consolidação. / Zolpidem is an imidazopyridine agent with crescent therapeutic employment which binds selectively to the BZ1 site into the GABAA receptors. This selectivity seems to confer zolpidem its mainly hypnotic properties with relative absence of side effects which are associated to classical benzodiazepines, for example anticonvulsant and miorelexant effects and, importantly, amnesia. Although, clinical studies and in animal models have demonstrated amnestic effects after the acute administration of zolpidem. In this context, considering its crescent employment in the insomnia treatment, it is necessary to characterize the cognitive effects induced by this drug and also its effects on exploratory activity and emotionality. Thus, our results suggest that the pre-training acute administration of zolpidem promoted learning impairments on the dose of 10 mg/Kg, but not on the doses of 2 and 5 mg/Kg, and promoted a decrement on exploratory activity in a dose-dependent manner, but did not modified anxiety. In respect with memory, we observed retention deficits on the doses of 5 and 10 mg/Kg. When administered immediately after training, all animals had their memory preserved. Still, the pre-test administration of all doses of zolpidem did not modify animal’s performance, showing the lack of effects on retrieval. In parallel, our result did not suggest the influence of state-dependency phenomenon once the acute administration of zolpidem before training and testing did not reverse the memory impairment induced by pre-training administration of this drug. In relation to non-associative memory, we observed that 10 mg/Kg zolpidem promoted habituation deficits on the open-field model. Furthermore, it promoted a decrement on exploratory activity, corroborating previous results. In this way, we demonstrated that besides its selectivity, zolpidem can induce associative memory deficits (as non-associative) when administered before the training of the task interfering, maybe, on the consolidation process. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações