Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-29 / O processo de cicatrização é um fenômeno complexo cujos mecanismos não são totalmente entendidos. Não existem trabalhos que mostram a participação de linfócitos B no reparo tecidual. Entretanto, Almeida et al. (Inter Immunol, 2001) demonstraram que células B-1 proliferam em cultura de células peritoneais aderentes e migram para foco inflamatório não específico diferenciando-se em células semelhantes a fagócitos. Células B-1 diferem de células B convencionais quanto sua localização anatômica, ontogenia, expressão de marcadores de superfície, produção de anticorpos e propriedades de crescimento. Células B-1 estão presentes nas cavidades peritoneais e pleurais, são raras no baço e ausentes nos linfonodos de camundongos adultos. Trabalhos mostraram que células B-1 secretam grandes quantidades de IL-10 e esta citocina tem importante função no processo de cicatrização. Objetivo: Investigar a participação de células B-1 no processo cicatricial do camundongo. Métodos: A migração de células B-1 para o foco da lesão foi avaliada utilizando a técnica de imunofluorescência. A análise por citometria de fluxo foi utilizada para a quantificação de células B-1a e B-1b nas cavidades peritoneais de camundongos BALB/c, BALB/Xid e BALB/Xid transferidos com células B-1. Incisão dorsal foi realizada nos mesmos grupos de animais para comparar o tempo de cicatrização entre os diferentes grupos. A influência de células B-1 na infiltração de neutrófilos e processo de angiogênese foram avaliados pela técnica de imunoistoquímica. Além disso, foi realizada a cinética de inflamação na pata dos camundongos para avaliar o papel de células B-1 na fase inflamatória do reparo tecidual. As mesmas técnicas de incisão dorsal e cinética da inflamação foram realizadas em camundongos Knock-out para IL-10 e Knock-out para IL-10 transferidos com células B-1 para analisar a participação de IL-10 secretada por células B-1 nestes processos. Finalmente, por citometria de fluxo foi avaliada a secreção de fatores de crescimento por células B-1. Resultados: Células B-1 migram para o foco inflamatório do processo de cicatrização, participam deste processo e influenciam a fase inflamatória do reparo tecidual. Além disso, células B- 1 influenciam a infiltração neutrofílica e processo de angiogênese. Ainda, foi mostrado que células B-1 modulam a fase inflamatória do reparo tecidual via IL-10, além de serem células secretoras de FGF, TGF-β e MCP-1. Conclusão: Estes dados comprovam que células B-1 participam da resposta inflamatória e do processo de cicatrização, provavelmente por influenciar na cinética da fase inflamatória via IL-10. / Wound healing is a complex phenomenon whose mechanisms are not fully understood. There are no reports concerning the participation of B lymphocytes in tissue repair. However, Almeida et al (Inter Immunol, 2001) demonstrated that B-1 cells proliferate in stationary culture of adherent peritoneal cells. Further, that B-1 cells migrate to non-specific inflammatory focus and differentiate into a mononuclear phagocyte. B-1 cells differ from conventional B cell by its anatomical location, ontogeny, surface markers expression, production of antibodies and growth properties. B-1 cells are present in the peritoneal and pleural cavities and rare in the spleen and absent in the lymph nodes of adult mice. It has been reported that these cells secret large amounts of IL-10 and this cytokine play a role in the wound healing process. Aim: Investigate the participation of B-1 cells in the wound healing process in mice. Methods: That B-1 cells migrate to the wound was evaluated using immunofluorescence technique. The fluorescence activated cell sorter was used to detect B-1b cells in pleural and peritoneal cavities from BALB/c, BALB/Xid and BALB/Xid adoptively transferred with B-1 cells. The dorsal lesions were made to compare the time of the wound healing process in differs groups. The influence of B-1 cells in the neutrophilic infiltration and the angiogenic process was evaluated by imunohistochemical techniques. Moreover, the kinetics of the inflammation in mice footpads was made to evaluate the role of B-1 cells in the inflammatory phase of tissue repair. The same technique of the dorsal lesion and dorsal lesion footpad were made in IL-10 Knock-out and IL-10 Knock-out adoptively transferred with B-1 cells in order to investigate the participation of IL-10 secreted by B-1 cells in this process. Finally, using fluorescence activated cell sorter secretion of growth factors by B-1 cells was analyzed. Results: B-1 cells migrate to the inflammatory site of the wound healing process. B-1b cells participate in wound healing process and influence the inflammatory phase of this process. Moreover, B-1b cells influence neutrophilic infiltration and the angiogenic process. In addition, B-1 cells modulate the inflammatory phase of tissue repair secreting IL-10, FGF, TGF-β and MCP-1. Conclusion: These data indicate that B-1 cells participate of the inflammatory phase of the wound healing process. Besides, IL-10 secreted by B-1 cells participates of the inflammatory response and confirm that B-1 cells play a role in the wound healing process. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30 / A dependência química pode ser entendida como uma usurpação/subversão patológica dos mecanismos de aprendizado e memória que, sob circunstâncias normais, modulam os comportamentos de sobrevivência relacionados à busca de recompensas e às pistas que as predizem. Nesse aspecto, os processos cognitivos reforçariam o impacto motivacional dos estímulos associados às drogas de abuso. De fato, tem sido sugerido que os mecanismos neuronais que subsidiam os processos de aprendizado e memória são também componentes centrais do circuito clássico de recompensa que medeia a dependência química. Paralelamente, há um número considerável de evidências que sugerem que a evocação de uma informação aprendida pode necessitar que o organismo esteja em um estado similar àquele em que a informação foi inicialmente adquirida. Esse fenômeno, denominado dependência de estado, tem sido demonstrado após a administração de diferentes drogas psicoativas. Dessa forma, tal processo tem sido proposto com um mecanismo potencialmente relacionado aos processos psicofisiológicos e patológicos subjacentes à dependência química. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi verificar a influência da dependência de estado nos efeitos cognitivos promovidos pela administração aguda de etanol, anfetamina, cafeína e midazolam. Nossos resultados sugerem que os déficits cognitivos promovidos por essas drogas de abuso são criticamente dependentes de estado. Corroborando, pois, com a noção de que o fenômeno de dependência de estado possa contribuir para o desenvolvimento da dependência química. / Drug abuse can be understood as a pathological usurpation/subversion of learning and memory mechanisms that, under physiological circumstances, modulate survival behaviors related to reward and reward-related cues. In this way, cognitive processes could reinforce the motivational impact of drug-associated stimuli. In fact, it has been suggested that the neural substrates that underlie learning and memory are central components of the classical network that ensembles drug abuse. In parallel, a great amount of evidence suggests that the retrieval of learned information requires that the animal be in a state similar to that in which the memory for this information was acquired, a phenomenon so-called state-dependency, which has been demonstrated after administration of several psychoactive drugs. In this scenario, state-dependency has been related to psycho-physiological and pathological mechanisms of drug abuse. The present work aimed to verify the role of state-dependency on the cognitive effects induced by the acute administration of ethanol, amphetamine, caffeine and midazolam. Our results suggest that the cognitive impairments induced by these drugs are critically state-dependent thereby strengthening the notion of the participation of this phenomenon on drug abuse. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-10-28 / O sistema renina-angiotensina (SRA) é uma cascata coordenada de proteínas e hormônios peptídicos que desempenha papel fundamental na regulação da pressão arterial. Na via clássica do SRA, a renina age sobre o angiotensinogênio (AGT) para gerar o decapeptídeo angiotensina I (AI), por sua vez rapidamente convertida em angiotensina II (AII) pela enzima conversora de angiotensina I (ECA). A AII possui múltiplas ações renais diretas, incluindo vasoconstricção arterial, estimulação de reabsorção de sódio e inibição da natriurese de pressão, via receptor AT1. A estreita relação do SRA com diversas doenças é cada vez mais evidente e seu papel no diabetes (DM) proeminente. O DM constitui um grupo de doenças metabólicas caracterizadas pela hiperglicemia resultante de alterações na secreção de insulina, em sua ação ou em ambos. Em nosso estudo, buscamos associar a influência do diabetes sobre os componentes do SRA por meio de diferentes tecidos do camundongo non-obese diabetic, um modelo espontâneo de diabetes tipo 1. Verificamos dessa forma o comportamento de tal sistema frente ao diabetes não induzido. De maneira geral, a avaliação histológica não revelou alterações morfológicas renais em nosso modelo, apesar de ter sido possível identificar ligeira excreção urinária de albumina. A avaliação dos parâmetros hemodinâmicos dos grupos NODH e NODN revelou diminuição da pressão arterial média e da freqüência cardíaca nos animais diabéticos. Entretanto, através de imuno-histoquímica, pudemos observar aumento da expressão tubular proximal da ECA. Além disso, encontramos o SRA ativado no grupo diabético, principalmente no rim, um dos maiores alvos de nosso estudo. A dosagem da atividade enzimática da ECA no grupo diabético se mostrou aumentada nos tecidos renal, pulmonar e adrenal, diminuída no tecido pancreático e sem alterações significativas no coração ou no fígado. Apesar das alterações significantes na atividade renal da ECA, os níveis de AII, Ang1-7 e AI não se apresentaram alterados, enquanto a quantificação da BK no rim revelou aumento significativo desse peptídeo nos animais diabéticos. Por fim, também realizamos culturas primárias de células mesangiais e, da mesma forma que no homogenato de rim, lisados de células do grupo NOD H apresentaram aumento na atividade da ECA e diminuição da atividade da NEP. Ao avaliarmos a hidrólise da AII em Ang1-7 no meio de cultura, concluímos que ela estava diminuída no grupo diabético, indicando possível diminuição na atividade da ECA2. Dessa forma, os resultados encontrados neste trabalho confirmam a hipótese de que o SRA está ativado no diabetes e revelam um novo campo de aplicação para o modelo NOD. / The renin angiotensin system (RAS) is a coordinated cascade of proteins and peptide hormones that play a role in regulating blood pressure and fluid balance and electrolytes in mammals. In the classical pathway of RAS, renin, which is secreted by the juxtaglomerular apparatus of the kidney, in response to a wide variety of stimuli, acts on the precursor angiotensinogen (AGT) to generate the decapeptide angiotensin-I (AI). AI has little, if any, action on blood pressure, but is rapidly converted to angiotensin-II (AII) by angiotensinconverting enzyme I (ECA). AII has multiple direct renal actions, including arterial vasoconstriction, stimulation of sodium reabsorption and inhibition of pressure natriuresis via AT1 receptor. The close relationship between RAS and the endocrine system is increasingly enhanced by the prominent role of AII in diabetes. Diabetes mellitus (DM) is a group of metabolic diseases characterized by hyperglycemia resulting from defects in insulin secretion, in its action, or both. In our study, we associate diabetes to RAS using different tissues of non-obese diabetic mouse, a spontaneous model of type 1 diabetes, thus verifying the behavior of such a system in non-induced diabetes. In general, renal morphological changes were not identified in our model by histology, although it was possible to identify mild urinary albumin excretion. The hemodynamic parameters of the groups and NOD H and NODN revealed significant decreases in blood pressure and heart rate of diabetic animals. However, by immunohistochemistry we observed strong tubular expression of ACE. Furthermore, we found that the RAS is activated in the diabetic group, mainly in the kidney, a major target of our study. The measurement of ACE activity proved to be increased in the diabetic kidney tissue, lung and adrenal, reduced in pancreatic tissue and was not significantly altered in heart or liver. Despite significant changes in renal ACE activity, levels of AII, AI and Ang1-7 and had not changed, while the quantification of BK showed significant increase of this peptide in diabetic animals. Finally, we decided to perform primary cell cultures and ss in the kidney homogenate, cell lysates of the NOD H group showed an increase in ACE activity and, moreover, the same material exhibited reduced activity of NEP. By analyzing the hydrolysis of AII into Ang1-7 from the culture medium, we concluded that it was decreased in the diabetic group, indicating a possible decrease on ACE2 activity. Therefore, in general, the results found on this study support the hypothesis that the RAS is activated in diabetes and reveal a new field of application for the NOD model. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-05-31T21:14:12Z No. of bitstreams: 1 Adriana Lima de Oliveira. Microquimerismo fetal em fêmeas de camundongos - CPqGM - Dissertação Mestrado - 2008.pdf: 3543169 bytes, checksum: e3a8306c07bffce080c07532d96950f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-31T21:14:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriana Lima de Oliveira. Microquimerismo fetal em fêmeas de camundongos - CPqGM - Dissertação Mestrado - 2008.pdf: 3543169 bytes, checksum: e3a8306c07bffce080c07532d96950f0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O papel da persistência de células fetais no organismo materno pós-gestação (microquimerismo materno-fetal) é ainda pouco estudado. Para investigar o potencial de reparo tecidual destas células em lesões de coração e músculo esquelético, avaliamos a presença de células fetais nestes órgãos durante a infecção aguda por T. cruzi de fêmeas parturientes que tiveram filhotes GFP+. Fêmeas C57Bl/6 foram infectadas com tripomastigotas da cepa Colombiana de T. cruzi no oitavo dia pós-parto e sacrificadas no 30º dia pós-infecção. A presença de células fetais GFP+ foi avaliada por citometria de fluxo (sete dias pós-parto), por imunofluorescência utilizando anticorpos anti-GFP e por PCR em tempo real usando sondas específicas para o gene GFP de origem fetal. Células fetais GFP+ foram detectadas na circulação de 20% das fêmeas analisadas. Em secções de corações e de músculo esquelético de fêmeas infectadas, detectaram-se células fetais GFP+, algumas das quais expressando miosina, um marcador de células de músculo estriado. No fígado a presença de células GFP+ também foi detectada, porém estas não apresentaram expressão de albumina. Já em secções de coração, músculo esquelético e fígado de fêmeas sadias com fetos fluorescentes não foram encontradas células GFP+. A presença do trasngene gfp de origem fetal, avaliada pela metodologia de PCR em tempo real, é aumentada pela infecção por T. cruzi no coração e músculo esquelético, em comparação com fêmeas parturientes sadias. A presença do transgene gfp de origem fetal é mais elevada no coração do que no músculo esquelético de fêmeas infectadas. Em conclusão, os resultados sugerem que células fetais participam do processo de reparo de lesões do coração e do músculo esquelético, pelo menos no modelo de infecção aguda por T. cruzi. / The role of fetal cells persistence in maternal organism after gestation (fetal-maternal microchimerism) is poorly understood. To investigate the regenerative potential of these cells in heart and muscle lesions, we evaluated the presence of fetal cells in these organs during the acute infection by T. cruzi of parturient female mice which had GFP+ puppies. C57Bl/6 female mice were infected with trypomastigotes of Colombian strain T. cruzi on the 8th day post-partum, and sacrificed on the 30º day post-infection. The presence of GFP+ fetal cells was evaluated by flow cytometry (7 days post-partum) and by immunofluorescence using anti-GFP specific antibodies and by real time PCR using specific probes for GFP gene of fetal origin 30 days post-partum. GFP+ fetal cells were detected in the circulation in 20% of the analyzed females. GFP+ cells were also detected in heart and striated muscle section of T. cruzi-infected mice, some of which expressed myosin, a marker of striated muscle cells. In the liver, GFP+ cells were also found, but none co-expressing albumin. In sections of heart, striated muscle and liver of healthy chimeric females, we did not find GFP+ cells. The presence of gfp transgene of fetal origin, evaluated by real time PCR, was increased by infection with T. cruzi in the heart and skeletal muscle, compared to healthy parturient females. The presence of gfp transgene of fetal origin is higher in the heart than in the striated muscle of infected females. In conclusion, our results suggest that fetal cells participate in the regenerative process in the heart and striated muscle, at least in the model of acute T. cruzi infection.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-01T18:43:17Z No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Imunização de camundongos com fragmentos....pdf: 902012 bytes, checksum: 1ec320ac38a55ad96f41e4c20bcf883d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T18:43:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Imunização de camundongos com fragmentos....pdf: 902012 bytes, checksum: 1ec320ac38a55ad96f41e4c20bcf883d (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Leishmaniose visceral zoonótica (LV) é uma doença que afeta homens e cães e é causada por protozoários das espécies Leishmania infantum e Leishmania chagasi. O cão doméstico é o principal reservatório do agente causal. Uma vacina efetiva contra a LV canina poderá contribuir para o controle da infecção e/ou doença humana e canina. A resposta imune protetora contra a LV canina é do tipo celular (Th1). Em nosso laboratório, dentre um grupo de cinco antígenos recombinantes selecionados de uma biblioteca de cDNA de L. chagasi, usando-se uma mistura de soro de cães naturalmente infectados e que exibiam resposta imune humoral e celular específica, um fragmento da extremidade carboxila de uma cinesina com cauda de 6 histidinas (rLci2B-NH6), para permitir a purificação, foi escolhido para a avaliação do seu potencial como candidato a componente de uma vacina contra LV canina. No presente trabalho foi avaliada a imunização de camundongos BALB/c com rLci2BNH6/ saponina em associação com os plasmídeos pcDNA3.1-scmu-IL-12 e/ou pcDNA3.1- mu-IL-2. Os animais imunizados com rLci2B-NH6/saponina em associação com a IL-12 e/ou IL-2 produziram anticorpos IgG, IgG2a e IgG1 específicos. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ ou IL-5 após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. Esses resultados sugerem que a adição de pcDNA3.1-mu-IL-2 no protocolo de imunização não é capaz de promover uma resposta imune predominantemente Th1. Também foi avaliada a imunização de camundongos com proteína recombinante quimérica (rLci2-NTCT- NH6) formada pelos domínios não repetitivos presentes nas extremidades amina e carboxila codificadas pelo gene da cinesina. Camundongos BALB/c imunizados com rLci2- NT-CT-NH6 ou uma proteína recombinante químerica controle, contendo 5 domínios repetitivos presentes em rLci2B-NH6 entre os domínios não repetitivos de rLci2-NT-CTNH6, apresentaram produção de IgG, IgG2a e IgG1. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ e apenas esplenócitos dos camundongos imunizados com rLci2-NT-5R-CT-NH6 sintetizaram IL-5, após estimulação in vitro com as respectivas proteínas. Contudo, durante a purificação de rLci2-NT-CT-NH6 e rLci2-NT-5R-CT-NH6 ocorreu intensa proteólise que pode ter resultado na destruição de epítopos capazes de induzir resposta Th1. Previamente, em nosso laboratório, foi observada a morte de alguns camundongos injetados com 100 μg saponina/dose, por isso, doses menores de saponina (50 ou 25 μg) foram avaliadas como adjuvante na indução de resposta imune a rLci2B-NH6. Os resultados da mensuração dos anticorpos foram semelhantes nos três grupos. Curiosamente, somente esplenócitos do grupo injetado com 25 μg/dose exibiram proliferação específica. O grupo injetado com 100 μg/dose produziu IFN-γ e IL-5 e o grupo injetado com 50 μg/dose sintetizou IFN-γ, mas não produziu IL-5, após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. / Zoonotic visceral leishmaniasis (VL) is a disease that affects humans and dogs and is caused by protozoan species Leishmania infantum and Leishmania chagasi. There is evidence to suggest that the domestic dog is the main reservoir of the causative agent. An effective vaccine against canine VL may contribute to infection control and/or human and canine disease. The protective immune response against canine VL is cellular (Th1 type). In our laboratory, among a group of five recombinant antigens selected from a cDNA library of L. chagasi, using a mixture of sera from naturally infected dogs that showed humoral and cellular specific responses, one fragment of the carboxyl terminus of a kinesin with a 6 His- Tag (rLci2B-NH6) was chosen to evaluate its potential as a candidate component of a vaccine against canine VL. In the present study, we evaluated the immune response of BALB/c immunized with rLci2B-NH6/saponin in combination with pcDNA3.1-scmu-IL-12 and pcDNA3.1-mu-IL-2. The animals immunized with rLci2B-NH6 associated IL-12 and/or IL-2 produced IgG, IgG2a and IgG1 reactive to rLci2B-NH6. Splenocytes of these animals exhibited proliferation but failed to produce IFN-γ and IL-5 after in vitro stimulation with rLci2B-NH6. These results suggest that adding IL-2 was not enough to induce a predominantly Th1 immune response. We also analyzed the immunization of mice with recombinant chimeric (rLci2-NT-CT-NH6) formed by non-repetitive domains present in the amine and carboxyl ends encoded by the gene for kinesin. BALB/c mice immunized with rLci2-NT-CT-NH6 or a control chimeric recombinant protein containing 5 repeated domains present in rLci2B-NH6 between the domains of non-repetitive rLci2-NT-CT-NH6 showed production of IgG, IgG2a and IgG1. Splenocytes of these animals exhibited proliferation, but failed to produce IFN-γ and only splenocytes from mice immunized with rLci2-NT-5R-CTNH6 synthesized IL-5 after in vitro stimulation with the respective proteins. However, during the purification rLci2-NT-CT-NH6 and rLci2-NT-5R-CT-NH6 occurred intense proteolysis that may have resulted in the destruction of epitopes capable of inducing Th1. Previously, in our laboratory, it was observed the death of some mice injected with 100 μg saponin/dose, therefore, lower doses of saponin (50 or 25 μg) were evaluated as an adjuvant to induce an immune response to rLci2B-NH6. The results of measuring the antibodies were similar in the three groups. Interestingly, only splenocytes from the group injected with 25 μg/dose exhibited specific proliferation. The group injected with 100 μg/dose produced IFN-γ and IL- 5 and the group injected with 50 μg /dose synthesized IFN-γ, but did not produce IL-5 after in vitro stimulation with rLci2B-NH6.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-17T13:31:43Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Fernanda Trindade Madeira Araujo.pdf: 853168 bytes, checksum: c511cd0ade336e4ad59b3e3dd2cf020e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-17T13:31:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Fernanda Trindade Madeira Araujo.pdf: 853168 bytes, checksum: c511cd0ade336e4ad59b3e3dd2cf020e (MD5) / A sensibilidade e a precisão dos resultados em pesquisas dependem do uso de animais padronizados para diversos parâmetros como pré-requisito importante para a reprodutibilidade em experimentação animal. Assim, a determinação destes parâmetros em valores de referência em uma população de espécimes mantidas em cativeiro é uma ferramenta de diagnóstico essencial para estimar suas condições de saúde e diagnosticar doenças mesmo antes do aparecimento dos sintomas. Neste estudo foram estabelecidos valores de referência para parâmetros hematológicos e bioquímicos e avaliado o perfil imunológico de linhagens de camundongos produzidas nos biotérios do Centro de Pesquisas René Rachou / FIOCRUZMinas e Centro de Criação de Animais de Laboratório / FIOCRUZ. Foram utilizados 332 camundongos, com idade entre 6 e 8 semanas, das linhagens Swiss webster, BALB/c, C57BL/6 e Ifn-γ(-/-) knockout. Após a anestesia dos animais foi realizado o procedimento de punção cardíaca para determinação de parâmetros hematológicos (hemoglobina, eritrócitos, hematócrito, volume corpuscular médio, hemoglobina corpuscular média, concentração da hemoglobina corpuscular média, global e diferencial de leucócitos e plaquetas), bioquímicos (uréia, creatinina, aspartato transaminase, alanina transaminase, fosfatase alcalina e proteínas totais) e imunológicos (linfócitos T e subpopulações CD4+ e CD8+ e linfócitos B). A determinação dos parâmetros hematológicos e bioquímicos e a avaliação dos perfis imunológicos foram realizadas por meio do cálculo da mediana, média global e dos valores mínimos e máximos obtidos. Os testes Mann-Whitney e Kruskal-Wallis foram utilizados para comparações entre os grupos e as diferenças foram consideradas estatisticamente significativas para um valor de p<0,05. Os resultados deste trabalho demonstraram existir diferenças estatisticamente significativas no que diz respeito ao sexo, biotério e linhagem na maioria dos parâmetros analisados. Contudo, foi possível perceber uma grande similaridade dos perfis imunológicos, com exceção da comparação feita entre as linhagens. De uma forma geral, os machos apresentaram valores superiores aos das fêmeas em todas as linhagens. Além disso, a linhagem Swiss webster apresentou os maiores valores de referência, evidenciando assim a variabilidade genética destes animais, enquanto que C57BL/6 apresentou as maiores diferenças quando comparada com as outras linhagens. Neste contexto, os resultados obtidos fortalecem a necessidade de estabelecimento de valores de referência para cada biotério instituição, pois está evidenciado que o padrão sanitário dos animais interfere diretamente na caracterização de diferentes parâmetros. Adicionalmente, a caracterização desses parâmetros por sexo, idade e linhagem permite uma correta validação dos experimentos ao mesmo tempo em que auxilia na promoção do sucesso da criação destes animais em cativeiro. / The sensitivity and accuracy of experimental results in research projects involving murine models rely on the use of animals that exhibiting standardized laboratorial parameters as important prerequisites for the data reproducibility in animal experimentation. Thus, the determination of each parameters and its use as reference values in a population of specimens kept in captivity is an essential tool to assess their health status as well as to detect potential diseases even before any symptoms manifest. The current study has established reference values for hematological and biochemical parameters and has still evaluated immunological profile of mice strains produced in the animal houses at Research Center René Rachou /FIOCRUZ-Minas and Breeding Center of Laboratory Animals / FIOCRUZ. We studied 332 mice belong to the Swiss webster, BALB/c, C57BL/6 and Ifn-γ knockout strains, aged from 6 to 8 weeks. After the cardiac puncture of the animals, hematological parameters (hemoglobin, erythrocytes, hematocrit, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, mean corpuscular hemoglobin concentration, platelets, global and differential leukocyte count, biochemical (urea, creatinine, aspartate transaminase, alanine transaminase, alkaline phosphatase and total protein) and immunological (T lymphocyte and subpopulations CD4+ and CD8+ and B lymphocytes) were determined. The assessment of these features were performed by evaluating the median, global mean and minimum and maximum values for each analyte. Comparisons among distinct groups were performed by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney Tests and the values were considered significant when p < 0,05. These significance differences were found according to animal gender, animal house and strain in most parameters. However, regarding the immunological profile, in most cases, it was possible to observe a great similarity between the groups with exception presented when this profile was compared among strains. In general, for all the strains, males showed higher values than females. In addition, the Swiss Webster strain showed a higher range for the reference values, revealing the genetic variability of these animals. The C57BL/6 strain showed the greatest differences when compared with the additional strains. In this context, the results obtained support the need to establish reference values for each animal house /institution, since it has been evidenced that the health standard of the animals directly interferes in the characterization of different parameters. Additionally, the characterization of hematological, biochemical and immunological features by sex, age and strain might allow us to a correct validation of the experiments as well as help us in promoting the successful creation of these animals in captivity.

Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-01-25T16:57:07Z No. of bitstreams: 1 patricia_g_trentin_ioc_bcm_0042_2011.pdf: 14580350 bytes, checksum: aa1cb3789d7f08d73c9bf5522416ee0f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-25T16:57:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 patricia_g_trentin_ioc_bcm_0042_2011.pdf: 14580350 bytes, checksum: aa1cb3789d7f08d73c9bf5522416ee0f (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A silicose, uma doença ocupacional causada pela inalação de partículas de sílica cristalina, é caracterizada por intensa resposta inflamatória seguida de fibrose e formação de granulomas, e até o momento permanece sem tratamento efetivo. O processo inflamatório é regulado fisiologicamente por agentes antiinflamatórios endógenos que são capazes impedir a sua exacerbação. Glicocorticóides endógenos, cuja parte de suas ações antiinflamatórias são mediadas pela proteína anexina-1 (ANX-1), fazem parte desse contexto. No presente estudo, investigamos o papel da proteína ANX-1, e de seu derivado peptídico Ac2-26 (50 - 200 µg), na fase aguda da silicose. O esteróide clássico, dexametasona (25 µg; Dexa), foi utilizado como controle. A instilação intranasal de sílica (10 mg) em camundognos Swiss- Webster desencadeou a ocorrência de aumento no nível basal de resistência e elastância pulmonar, e hiperreatividade das vias aéreas ao agente colinérgico metacolina. Este quadro mostrou-se associado um intenso infiltrado inflamatório e deposição de colágeno, com formação de granulomas. O tratamento com Ac2-26 inibiu acentuadamente o infiltrado leucocitário, a deposição de colágeno e a formação de granulomas nos animais silicóticos, condições que foram apenas parcialmente afetadas pela Dexa. A geração de citocinas (TNFαe TGFβ) e quimiocinas (KC e MCP-1) foi reduzida pelo peptídeo, porém não pela Dexa. O aumento da resistência e da elastância pulmonar, assim como a hiperreatividade à metacolina, foram inibidos tanto pelo peptídeo comopela Dexa. In vitro, os fibroblastos pulmonares estimulados com IL-13 e TGFβtiveram a produção de colágeno e MCP-1 inibida pelo peptídeo Ac 2-26, resposta dependente de sua ação em receptores FPR1 e FPR2. A proliferação celular não foi afetada pelo peptídeo. De forma paralela, vimos que os animais nocautes para a proteína ANX-1 e silicóticos apresentaram intensificação do infiltrado inflamatório, deposição de colágeno e produção de citocinas (KC, MIP-2 e TNFα) no parênquima pulmonar. A deficiência da ANX-1 não alterou a resistência pulmonar de animais silicóticos, porém a elastância mostrou-se exacerbada. Verificamos, ainda, que os animais nocautes para ANX-1 controles mostraram-se mais responsivos à estimulação com metacolina, porém não à serotonina, fenômeno verificado também quando da avaliação da resposta contrátil de anéis de traquéia ex-vivo. Em conjunto, nossos resultados mostram, de forma original, que o peptídeo Ac 2-26 foi capaz de inibir o componente inflamatório e fibrótico da fase aguda da silicose, indicando ser este um composto promissor para utilização no tratamento dedoenças inflamatórias fibróticas como a silicose. Além disso, demonstramos que a ausência da ANX-1 exacerbou a fase aguda da silicose, reforçando achados prévios que apontam para a atividade antiinflamatória desta proteína também ao nível de fisiopatologias pulmonares. / Silicosis is an occupational disease caused by inhalation of crystalline silica particles and is characterized by an intense inflammatory response followed by fibrosis and granuloma formation. There is no effective treatment for silicosis until now. The inflammatory process is physiologically regulated by endogenous antiinflammatory agents that are able to prevent its exacerbation. Endogenous glucocorticoids, which have part of their antiinflammatory actions mediated by the protein annexin-1 (ANX1), are very important in that context. We investigated the role of ANX1, and its derived peptide, Ac2-26 (50 - 200 µg) on the acute silicosis. The classical steroid dexamethasone (25 µg; Dexa) was used as a control. The intranasal instillation of silica (10 mg) in mice induced an increase of the baseline of pulmonary resistance and elastance and airways hyperreactivity to bronchoconstrictor methacholine, associated with an intense inflammation and collagen deposition with granuloma formation. Treatment with Ac2-26 inhibited markedlyleukocyte infiltration, collagen deposition and granuloma in silicotic Swiss-Webstermice, phenomena partially affected by Dexa. The generation of cytokines (TNFαand TGFβ) and chemokines (KC and MCP- 1) was inhibited by Ac2-26 but not by Dexa. Increased lung resistance and elastance as well as airways hyperreactivity tomethacholine were abolished by Dexa and Ac2-26. In vitro, incubation of lung fibroblasts with Ac2-26 inhibited IL-13 and TGFβcollagen and MCP-1 production, a response mediatedby FPR1 and FPR2 receptors. Cell proliferation was not affected by the peptide. In parallel, we found that silicotic ANX1 knockout mice showed more intense inflammatory infiltrate, collagen deposition and mediator production (KC, MIP-2 and TNFα) in the lung parenchyma. ANX1 deficient mice deficient showed exacerbation of elastance, but not of pulmonary resistance. Airways hyperreactivity in silicotic mice was more intense under condition of stimulation with methacholine. Interestingly, we showed that the ANX1 knockout mice were more responsive to methacholine stimulation, but not to serotonin, a phenomenon also observed in the systemof tracheal ring contraction ex- vivo. Taken together, our results show that the Ac2-26 peptide was able to inhibit the inflammatory and fibrotic components of the acute phase of silicosis, indicating that this compound is a promising tool for future use inthe treatment of inflammatory diseases such as silicosis. Furthermore, we demonstrated that the absence of ANX1 exacerbated the acute phase of silicosis, reinforcing previous findings and showing that the antiinflammatory activity of this protein is also extended to the respiratory system. A potential regulatory role of ANX1 of the contractile response of the airways was also proposed.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:34:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 140.pdf: 1388646 bytes, checksum: 577741ef3784956408ba81f9fa41b743 (MD5) Previous issue date: 2006 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Em nosso trabalho, investigamos a resposta inflamatória produzida em camundongos por duas vacinas DTP de diferentes produtores (DTP-1 e DTP-2) em um estudo comparativo com as vacinas DT, DTP Acelular e uma vacina de Referência. Utilizando-se da metodologia da medida do edema de pata em camundongos que constitui-se de um modelo que permite a investigação de reações locais e do estudo das população de leucócitos, que constitui-se de um modelo de investigação da reação sistêmica, procuramos investigar a resposta inflamatória aguda induzida pela vacina DTP. Esta medida do edema foi tomada através de um pletismômetro e a contagem de células foi feita em câmaras de Neubauer. Paralelamente, foram também realizados: um estudo histopatológico, onde analisou-se o envolvimento dos tecidos epitelial e muscular; a dosagem do conteúdo de citocinas próinflamatórias (IL-1β, IL-6 e TNF-α) pelo método de ELISA; a quantificação do conteúdo de LPS através do LAL para todas as vacinas e a quantificação do conteúdo da PT pelo método do efeito clustering em células CHO para as vacinas que contêm o componente pertussis. Observamos que o edema de pata foi mais intenso nas vacinas onde o conteúdo de PT foi maior como na DTP-2 e Referência, não descartando um possível envolvimento do LPS. A vacina de Referência destacou-se pela alta concentração de LPS. Os leucócitos sofreram alterações após o tratamento com as vacinas DTP-1, DTP-2 e Referência, com promoção de acentuada neutrofilia, sendo também observado, em alguns casos discreto aumento dos linfócitos e dos monócitos. A análise histopatológica revelou a formação de intenso exsudato purulento e acúmulo de polimorfonucleares para todas as vacinas. Com relacão a produção de citocinas pró-inflamatórias, foi evidenciada somente a citocina IL-6, citocina característica de processos inflamatórios causados por bactérias. A presença desta interleucina foi detectada somente para as vacinas DTP-1, DTP-2 e Referência. / DTP vaccine has been used for more than 70 years and still represents a majorprophylactic measure in the control of pertussis, tetanus and diphtheria infectionsdespite being associated with severe adverse reactions such as neurologicalderangements, seizures and shock. Sparse information can be obtained regarding thecorrespondence between toxicity test in animal models and the occurrence of adversereactions upon vaccination of humans. The mechanisms implicated in the adversereactions associated with DPT vaccine is still not fully understood, but several evidencepoint to LPS and active residues of pertussis toxin (PT) as the main culprits for local andsystemic complications. In this work we investigated the inflammatory response inducedby two different DTP vaccines (originated from two different producers – DPT-1 andDPT-2) in mice and compared this with DT vaccine, acellular DPT vaccine, and aReference vaccine. We applied the paw edema model using a pletismograph, followedby systemic analysis of the leukogram, analysis of the blood levels of pro-inflammatorycytokines (IL-1 ,IL-6eTNF- ) and histopathological analysis of the paw tissue. LPSand PT contents were determined by the LAL and CHO cells clustering test,respectively. We observed that paw edema was more intense in those vaccines with ahigher content of PT, although the contribution of LPS to the reaction could not be ruledout. A marked neutrophilia and a discrete increase in lymphocyte and monocytenumbers were observed with DPT-1, DPT-2 and the Reference vaccine. Histologicalexaminations revealed an intense exsudative process with neutrophilia and pusformation in all vaccines tested. Cytokine analysis showed that IL-6 was the onlycytokine with increased levels detected after DTP-1, DPT-1 and Reference vaccinechallenge.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luiz_berbert_ioc_mest_2010.pdf: 5652664 bytes, checksum: 7e9002e7c7fc1786ff895512aa437d50 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro,RJ, Brasil / A proteína Príon celular (PrPc) é uma glicoproteína constitutivamente expressa no sistema nervoso, bem como no sistema imune, porém, seu papel fisiológico e em processos infecciosos é pouco compreendido. Dados prévios da literatura sugerem disfunções fisiológicas no sistema imune em modelos murinos transgênicos que superexpressam essa proteína podendo levar os mesmos a um processo de imunodeficiência mediante infecçãos. Para testar essa hipótese, este projeto tem o objetivo de avaliar o impacto da infecção experimental pelo T. cruzi em camundongos que superexpressam (TG20) ou não expressam PrPc (KO), analisando parâmetros de infecção correlacionados com a infiltração linfocitária no tecido cardíaco. Nossos resultados demonstram que a superexpressão de PrPc em camundongos gera inicialmente susceptibilidade do modelo à infecção se comparado ao grupo que não expressa a proteína, conforme observado nas taxas de sobrevida e parasitemia A presença de células T, B, bem como células CD11b+ de infiltrado inflamatório é numericamente maior no grupo TG20, porém, esse evento não parece estar relacionado diretamente com alterações observadas no baço e linfonodos desses animais durane cinética de infecção; em relação à expressão de moléculas de ativação linfócitos nestes modelos, observamos aumento das mesmas nas subpopulações linfocitárias do grupo TG20. Nos timo dos modelos TG20 foram observadas alterações fenotípicas, bem como aumento de espressão de laminina e fibronectina e seus receptores nos timócitos. Os dados deste trabalho demonstram que Prpc tem um grande impacto na fisiologiada infecção pelo T. cruzi no modelo murino que superexpressa essa proteína, correlacionando esse evento a uma imunodeficiência previamente observada no mesmo modelo não infectado / Cellular Príon Protein (PrP c ) is a glycoprotein constitutively expressed in nervous an d immune systems, but its physiological role is not well und erstood. Previous data suggest that murine models which overexpress PrP c show physiological disfunctions that could be related with a possible immunodeficiency, which might lead to poor immune response against infections. To support this hypothesis, this project has the aim to evaluate the impact of experimental T. cruzi infection in mice that overexpress or do not express PrP c , correlating infection parameters to lymphocyte infilt ration on heart tissue. Our results demonstrated that PrP c overexpression in mice leads to animal susceptibility during acute infection when compared to KO group, comp aring survival and parasitemia rates on these groups. Inflammatory infiltrate cells such as T and B lymphocytes, as well as CD11b + cells are present in higher numbers in TG20 model, but it seems to be not correlated with spleen and lymph nodes alteractions duri ng infection kinectics; activation molecules are highly express in TG20 periferical lympho cytes. TG20 mouse thymus showed phenotypic alteractions, as well as higher expressio n of laminin and fibronectin and its receptors in thymocytes, which could be possibily re lated to immature thymocyte exportation and their presence in heart tissue. Those data suggest thar PrP c has an important impact during T. cruzi infection in murine model that overexpress PrP c , correlating these alteractions to previous immunodeficien cy in non infected TG20 murine models

A hiperglicemia é uma característica do diabetes mellitus responsável por complicações micro e macrovasculares, que são a principal causa de morbidade/mortalidade em pacientes diabéticos, representando um problema clínico e econômico. Diante de um quadro de hiperglicemia, o aumento na produção de espécies reativas de oxigênio aumenta a atividade de rotas metabólicas que causam dano vascular. Células-tronco mesenquimais (MSCs) são células multipotentes que têm sido vistas como uma atraente ferramenta para o estudo de terapia celular em diversas doenças como diabetes mellitus tipo 1. Devido à origem perivascular das MSCs, elas podem ser alvos da hiperglicemia, levando a um aumento do estresse oxidativo. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar alterações ultra-estruturais e parâmetros de estresse oxidativo de MSCs derivadas de pâncreas e rim de camundongos NOD diabéticos, NOD não diabéticos, e BALB/c. Nossos resultados mostram um aumento do estresse oxidativo causado pela hiperglicemia em MSCs de camundongos NOD diabéticos. Estas células mostraram uma mudança expressiva na morfologia ultraestrutural das mitocôndrias, aumento na produção de espécies reativas, desequilíbrio da atividade de enzimas antioxidantes e dano oxidativo em proteínas em comparação com os controles não diabéticos, NOD e BALB/c. / Hyperglycemia is a characteristic of diabetes mellitus responsible for micro- and macro- vascular complications which are the main cause of morbidity/mortality in diabetic patients representing a clinical and economic issue. Under hyperglycemic conditions the increase in reactive oxygen species production activates four main pathways that cause vascular damage. Mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotent cells which have been seen as attractive tools in cell therapy for many diseases such as diabetes mellitus type 1. Due to the perivascular origin of MSCs they can be affected by hyperglycemia which increases oxidative stress. Our aim in this study was evaluate and compare ultrastructural changes and oxidative stress parameters on MSCs derived from pancreas and kidney of diabetic NOD mice, nondiabetic NOD mice and BALB/c mice. Our results show an increase of oxidative stress caused by hyperglycemia in MSCs from diabetic NOD mice (NOD+). These NOD+MSCs showed an expressive change in ultrastructural morphology of mitochondria, an increase in reactive species content, imbalance of antioxidant enzymes activity and an oxidative damage in proteins compared to no diabetic controls NODand BALB/c.